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酶作业答案

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名词解释

1、同工酶是指催化相同的化学反应,而酶蛋白的分子结构理化性质乃至免疫学性质不同的一组酶。

2、酶原:有些酶在细胞内合成或初分泌时只是酶的无活性前体,此前体物质称为酶原。

3、别构效应:当底物或底物以外的物质和别构酶分子上的相应部位非共价地结合后,通过酶分子构象的变化影响酶的催化活性,这种效应成为别构效应

4、酶的活性中心:酶的活性中心是指酶分子中直接和底物结合,并和酶催化作用直接有关的部位。

5、酶的抑制剂:能使酶的必需基团或酶活性部位中的基团的化学性质改变而降低酶的催化活性甚至使酶的催化活性完全丧失的物质。

6、酶的专一性酶对其所催化的底物具有较严格的选择性,即一种酶仅作用于一种或一类化合物,或一定的化学键,催化一定的化学反应并产生一定的产物,酶的这种特性称为酶的特异性。根据酶对其底物结构选择的严格程度不同,酶的特异性可大致分为三种类型,即绝对特异性,相对特异性和立体异构特异性。

7.核酶:有催化作用的RNA。

8、竞争性抑制作用:有的抑制剂与酶的底物结构相似,可与底物竞争跟酶结合,这种抑制称为竞争性抑制作用。

问答题

1、酶的活性中心特点:

(1)活性部位在酶分子的总体积中只占相当小的部分;

(2)酶的活性部位是一个三维实体;

(3)酶的活性部位与底物诱导契合;

(4)酶的活性部位是位于酶分子表面的一个裂缝内;

(5)底物通过次级键较弱的力结合到酶上;

(6)酶活性部位具有柔性或可运动性

2、简述酶具有高效催化的因素

答案要点:

(1)、邻近定向效应:指底物和酶活性部位的邻近,使底物反应浓度有效提高,使分子间反应成为分子内反应。

(2)、张力和形变:底物结合诱导酶分子结构变化,而变化的酶分子又使底物分子的敏感键产生张力甚至形变,促进酶-底物中间产物进入过渡肽。

(3)、酸碱催化: 酶活性部位上的某些基团可以作为良好的质子供体或受体对底物进行酸碱催化, 达到降低反应活化能的目的。

(4)、共价催化:酶和底物形成不稳定的共价中间物,从而促进产物形成。

3、举例说明竞争性抑制的特点和实际意义。

解答要点:有些抑制剂与底物竞争与酶结合,妨碍酶与底物结合,减少酶的作用机会,这种现象成为竞争性抑制. 竞争性抑制的一个特点是当底物浓度很高时,抑制作用可以被解除. 酶的竞争性可逆抑制剂的酶动力学特征是Vmax不变,Km增加.研究酶的竞争性抑制作用在医学,工农业生产上以及基础理论研究上都有一定的意义.

4、很多酶的活性中心均有组氨酸残基参与,请解释原因。

答题要点:

酶蛋白分子中组氨酸的侧链咪唑基pK值为6.0~7.0,在生理条件下,一半解离,一半不解离,因此既可以作为质子供体(不解离部分),又可以作为质子受体(解离部分),既是酸,又是碱,可以作为广义酸碱共同催化反应,因此常参与构成酶的活性中心。

5、简述竞争性抑制剂与非竞争性抑制剂的区别

竞争性抑制剂抑制剂结构与底物相似,共同竞争酶的活性中心,抑制作用大小与抑制剂和底物的相对浓度有关。Km值增大,Vm不变。

非竞争性抑制剂非抑制剂结构与底物不相似或完全不同,它只与活性中心外的必需基团结合,形成EI和EIS,使E和ES都下降。该抑制作用的强弱只与抑制剂浓度有关,Km值不变,Vm下降。

论述题

1.论述Km值和Vmax的意义。

答案要点:Km值的意义:⑴Km是反应速度等于1/2Vmax的[s],单位是mmol/L。

⑵当中间解离成E和S的速度》分解成E和P的速度时,Km值可近似于ES的解离常数Ks。此时可表示酶和底物亲和力。Km值越小,酶和底物亲和力越大;Km值越大,酶和底物亲和力越小。Km值是酶的特征性常数之一,只与酶的结构、酶所催化的底物及反应温度、pH、离子强度有关,与酶的浓度无关。

Vmax的意义:Vmax是酶完全被底物饱和时的反应速度,如果酶的总浓度已知,便可根据Vmax计算酶的转换数=[E]/ Vmax,其意义是:当酶被底物充分饱和时,单位时间内每个酶分子催化底物转换成产物的分子数。

2、论述影响酶促反应速度的主要因素及机理。

答案要点:

温度、pH、底物浓度、酶浓度、激活剂、抑制剂等。这些因素的影响机理如下: 温度:高温变性、低温抑制、最适温度;最适pH,过酸过碱使酶变性失活;底物浓度与酶促反应速度成米氏方程关系;酶浓度与酶促反应速度成正比;抑制剂可抑制酶促反应速度,分为不可逆抑制和可逆抑制;激活剂可激活酶活性等。

4、试比较不同酶的专一性并解析之。

答案要点:A、酶的各种专一性

B、举例说明酶的专一性

C、关于酶专一性的假说

3、可逆性抑制作用有哪些类型?试比较它们的特点。

答案要点:

可逆性抑制作用包括竞争性抑制、非竞争性抑制和反竞争性抑制,抑制剂以非共价键与酶结合,使酶活性降低,用简单透析,过滤方法可将抑制剂除去。

⑴竞争性抑制:抑制剂的结构与底物结构相似,共同竞争同一酶的活性中心,抑制程度强弱取决于抑制剂浓度和底物浓度的相对比例。动力学参数Km值增加,Vmax不变。

⑵非竞争性抑制:抑制剂与酶活性外的必需基团结合,不影响酶与底物的结合,酶与底物的结合也不影响与抑制剂的结合。抑制程度的大小决定与抑制剂的浓度。动力学参数Km值不变,Vmax降低。

⑶反竞争性抑制:抑制剂仅与酶和底物形成的中间产物(ES)结合,生成三者复合物,不能解离出产物,增加[S]反而抑制作用越强。动力学参数Km值减小,Vmax降低。

4、酶作为生物催化剂与一般化学催化剂比较有何共性及其个性?

答题要点:

1、共性:用量少而催化效率高;仅能改变化学反应的速度,不改变化学反应

的平衡点,酶本身在化学反应前后也不改变;可降低化学反应的活化能。

2、个性:酶作为生物催化剂的特点是催化效率更高,具有高度的专一性,容易失活,活力受条件的调节控制,活力与辅助因子有关。

5、举例说明酶的催化特异性。

答案要点:

A结构专一性琥珀酸脱氢酶、脲酶等

B 立体专一性胰蛋白酶和琥珀酸脱氢酶

乳酸脱氢酶制备

乳酸脱氢酶制备 原理: 乳酸脱氢酶(LDH)(EC1.1.1.27)存在于具糖无氧代谢途径的细胞中,为水溶性酶,催化如下反应: L(+)—乳酸+NAD+ →丙酮酸 + NADH +H+ 乳酸脱氢酶最早从牛心中分离并获结晶。制备的方法为捣碎心肌组织用水抽提,磷酸钙胶吸附,硫酸铵分级盐析及有机溶剂沉淀,最后结晶出乳酸脱氢酶。 乳酸脱氢酶活力检测原理是在pH10.0的条件下,LDH催化NAD±还原生成NADH。NADH在340nm有最大吸收,摩尔消光系数为6.2×103,NADH的分子量为663.44。 LDH活力单位定义为:25℃、每分钟催化生成1微摩尔NADH的酶量为1个活力单位。用紫外分光光度计测定酶反应进程的OD340的增量,可求出制备样品中的LDH活力。 试剂: (1)CaCl2?6H2O (2)Na3PO4 (3)冰乙酸 (4)0.2mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2) (5)0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.2) (6)0.3饱和度的硫酸铵溶液(19.5g/100ml) (7)丙酮

(8)硫酸铵粉末 (9)0.5mol/L DL-乳酸钠。 (10)2mmol/L NAD+溶液:称取133mg NAD+,溶于5ml蒸馏水中,加入约0.15ml 1mol/L NaOH 调pH为6.0,定容10ml,冰箱贮存。(11) 0.1mol/L pH10.0甘氨酸-氢氧化钠缓冲液 A液0.2mol/L甘氨酸溶液:称取15.01g甘氨酸用蒸馏水溶解,定容1L。 B液0.2mol/L NaOH溶液:称取8gNaOH用蒸馏水溶解,定容1L。 取100mlA液与64.0mlB液混合,蒸馏水定容200ml。 操作: 一、磷酸钙胶制备 (1)称取19.8g CaCl2?6H2O,溶于150ml蒸馏水中,用自来水稀释成1600ml。 (2)称取22.8g Na3PO4?12H2O溶于150ml蒸馏水中。 (3)将两溶液混合,用冰乙酸调pH至7.4,室温下放置,使磷酸钙胶沉淀。 (4)吸去上清液,4000r/min离心3min,收集胶体备用。 二、 LDH制备 1、LDH水提取 (1)取100g新鲜或短期冰冻保存的牛心,去除脂肪、血管,称重,切成小块,低温下绞碎。 (2)加入400ml冰冷的蒸馏水,冰浴中搅拌,提取20min。

血清乳酸脱氢酶同工酶测定

血清乳酸脱氢酶同工酶测定 (醋酸纤维素薄膜电泳法) [原理] 先将血清在醋酸纤维素薄膜进行电泳使乳酸脱氢酶的同工酶分离,然后在薄膜上进行酶反应,显色试剂中包括有底物(乳酸)、NAD+、吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)和碘硝基四唑蓝(INT),NAD+和PMS起递氢作用,INT最后接受氢被还原生成紫色的甲臜类化合物。其反应如下: LD 乳酸+NAD+丙酮酸+NADH2 NADH2+PMS NAD++PMSH2 PMSH2 +INT PMS+INTH2 [试剂] 1.PH8.6巴比妥缓冲液(离子强度0.05):称取巴比妥钠10.3g,巴比妥1.84g,溶于热的蒸馏水中,冷后加蒸馏水至1L。 2.0.1mol/LpH7.5磷酸缓冲液:称取磷酸二氢钾2.16g,磷酸氢二钠 (Na2 HPO4.2H2O)30.13g, 溶于蒸馏水中,并稀释至1L。 3.0.5mol/L乳酸钠溶液:吸取60%DL—乳酸钠溶液9.25ml,加蒸馏水至100ml。 4.显色试剂:临用前配制下列试剂: (1)1mg/ml吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)水溶液; (2)辅酶Ⅰ(NAD+)10mg,溶于pH7.5磷酸缓冲液1ml; (3)碘硝基四唑蓝[氯化2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基四唑](INT)12mg,溶于pH7.5磷酸缓冲液3ml中; (4)0.5 mol/L乳酸钠溶液1ml。 其中(2)、(3)、(4)混合后为甲液,(1)为乙液;用时以甲液∶乙液=20∶1混合。应用前,将上述溶液充分混和;但PMS水溶液加入量为0.2ml,且应待其他三种溶液混和后再加。 4.洗脱液:正丙醇9份与二甲亚砜1份混匀即可。

纤维素酶的作用机理及进展的研究

纤维素酶的作用机理及进展的研究 摘要:纤维素酶广泛存在于自然界的生物体中,本文论述了纤维素酶的性质,重点介绍了纤维素酶的作用机理、应用及其研究进展,并对其研究前景做了展望。关键词:纤维素酶;纤维素;作用机理; 0引言 纤维素酶在饲料、酒精、纺织和食品等领域具有巨大的市场潜力,已被国内外业内人士看好,将是继糖化酶、淀粉酶和蛋白酶之后的第四大工业酶种,甚至在中国完全有可能成为第一大酶种,因此纤维素酶是酶制剂工业中的一个新的增长点。 纤维素占植物干重的35%-50%[1],是世界上分布最广、含量最丰富的碳水化合物。对人类而言,它又是自然界中最大的可再生物质。纤维素的利用和转化对于解决目前世界能源危机、粮食短缺、环境污染等问题具有十分重要的意义[2]。 1 纤维素酶的性质 纤维素酶是一种重要的酶产品,是一种复合酶,主要由外切β-葡聚糖酶、内切β-葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶等组成,还有很高活力的木聚糖酶活力。纤维素酶是四级结构,,产生纤维素酶的菌种容易退化,导致产酶能力降低。由于纤维素酶难以提纯,实际应用时一般还含有半纤维素酶和其他相关的酶,如淀粉酶(amylase)、蛋白酶(Protease)等。 纤维素酶的断键机制与溶菌酶一样,遵循双置换机制。纤维素与酶相互作用中,是酶被底物分子所吸附,然后进行酶解催化,酶的活性较低,仅为淀粉酶的1/100[3] 纤维素酶对底物分子的分解,必须先发生吸附作用。纤维素酶的吸附不仅与自身性质有关,也与底物密切相关,但纤维素酶的吸附机制总体并未弄清,仍需进一步研究[4]。 2 纤维素酶的作用原理 (1)、纤维素酶在提高纤维素、半纤维素分解的同时,可促进植物细胞壁的溶解使更多的植物细胞内溶物溶解出来并能将不易消化的大分子多糖、蛋白质和脂类降解成小分子物质有利于动物胃肠道的消化吸收。 (2)、纤维素酶制剂可激活内源酶的分泌,补充内源酶的不足,并对内源酶进行调整,保证动物正常的消化吸收功能,起到防病,促生长的作用。 (3)、消除抗营养因子,促进生物健康生长。半纤维素和果胶部分溶于水后会产生粘性溶液,增加消化物的粘度,对内源酶造成障碍,而添加纤维素酶可降低粘度,增加内源酶的扩散,提高酶与养分接触面积,促进饲料的良好消化。 (4)、纤维素酶制剂本身是一种由蛋白酶、淀粉酶、果胶酶和纤维素酶等组成的多酶复合物,在这种多酶复合体系中一种酶的产物可以成为另一种酶的底物,从而使消化道内的消化作用得以顺利进行。也就是说纤维素酶除直接降解纤维素,促进其分解为易被动物所消化吸收的低分子化合物外,还和其他酶共同作用提高奶牛对饲料营养物质的分解和消化。

龚洪海医生讲解脑血栓常见的治疗方法

脑血栓常见的治疗方法有哪些 北京联科医院是首都首家、唯一的“以中西医结合为特色的现代化创新型研究重点专科医院”,是参照国家三级专科医院标准建立的一所规模宏大、专科齐全、技术精良、设备尖端、环境幽雅、服务一流的全新医学中心,参照国际医疗卫生机构认证联合委员会制定的JCI标准设立,集医疗、教学、科研、预防、保健、康复为一体,在国内外有较大的优势、特色和影响,医院收治来自全国各地及海外的患者。接下来由专家为我们介绍一下脑血栓常见的治疗方法有哪些。 脑血栓是脑内动脉硬结化导致的,正常在血压偏低的情况形成血栓导致各种疾病,常见的病发年龄为中老年人,通常男性患者较多。该病给患者的身心健康造成了很大的危害,因此患者在确诊后还需及早治疗。 脑血栓的常见治疗方法具体如下: 1、抗凝疗法 适应于存在高凝状态的病人,目的是为防止血栓扩延加重病情。用抗凝疗法前,通常应该行脑CT检企,证明为缺血性病变。有出血倾向者,如活动性溃疡病、严重肝肾疾病及感染性血管检塞忌用。每日应测出凝血时间、凝血酶原时问及活动度。常用肝素、香豆素类。肝素12500-25000单位,溶于5%葡萄糖液500-l000毫升,缓慢静滴,通常每分钟15—20滴。24—36小时达应起的作用后,视病情掌握使用。香豆素类同时口服,第1日200—300毫克,以后每日维持50-100毫克,治疗天数依病情而定。 近几年有人以血液稀释疗法(即放出适量静脉血)治疗脑血栓形成,有—定效果。根据病人体重、血压、红细胞压积,确定释出血量,一般在200-400毫升,输入706代血浆或低分子右旋糖酐500毫升。 2、浴血栓疗法 常用链激酶、尿激酶溶解血栓。用国产尿激酶2万单位加入10%葡萄糖液500毫升中静滴,每分钟50滴,每日1次,l0天为l疗程。 曾有人采用尿激酶颈动脉给药治疗脑梗塞,有一定疗效。—般在发病后24小时之内应用。取尿激酶2万单位加人生理盐水l00毫升中,颈动脉加压滴人,每分钟5-20滴,1-3次治疗即可。 还有用蝮蛇抗栓酶颈动脉内给药的方法,也取得了较好效果。 溶栓疗法,无论是静脉给药还是动脉给药,都需要严格掌握适应证和用药时机。一般认为,溶栓药物应早期使用(脑血栓发病l天内,血栓富含水分,易溶解),见效快、疗程短。溶栓和抗凝疗法一样,要密切注意出血倾向,需在医院经医生掌握使用。 3、外科手术治疗 选择适应证较严格。其适应证如下:颈内动脉外段血栓形成,管腔完全闭塞或狭窄程度超过50%以上者,作血栓摘除以及动脉内膜切除术。如果双侧颈内动脉颅外段都有血栓形成,可选择狭窄严重的一侧,先作血栓摘除术,使血流量增加。颈内动脉血栓形成尚未建立良好的侧校循环者,可作颖浅动脉和大脑中动脉分支吻合术。大网膜移植术和脑一颞肌瓣覆盖术治疗脑梗塞,通过临床观察,带血管蒂大网膜颅内移植。较游离的网膜移植和颞肌瓣脑表面

乳酸脱氢酶LDH法操作说明

LDH法细胞毒性检测: 原理:乳酸脱氢酶在胞浆内含量丰富,正常时不能通过细胞膜,当细胞受损或死亡时可释放到细胞外,所以细胞死亡数目与细胞培养上清中LDH活性成正比,用比色法测定实验孔LDH 活性,并与靶细胞对照孔进行比较,可计算效应细胞对靶细胞的杀伤百分率 LDH(乳酸脱氢酶)是一种极为稳定的细胞质酶,存在于正常细胞的胞质中,一旦细胞膜受损,LDH 即被释放到细胞外;LDH催化乳酸形成丙酮酸盐,和INT(四唑盐类)反应转化成红色甲臢化合物,可通过酶标仪进行检测。颜色形成的量与裂解细胞的数目成正比。应用一个96-孔平板读数计收集可见光波长的吸收值数据。这个分析可用于测量在细胞介导的细胞毒性分析中细胞膜的完整性,这种情况下目标细胞被效应细胞裂解,可判断细胞受损的程度。 乳酸脱氢酶(LDH)在胞质内含量非常丰富,细胞处于正常状态下其不能通过细胞膜,但当细胞受到损伤或死亡时便可释放到细胞外,此时细胞培养液中LDH 的活性与细胞的死亡数目呈正比,通过用比色法测定并与靶细胞对照孔的LDH 活性进行比较,可计算出效应细胞对靶细胞的杀伤百分数。该实验方法操作简便、快速,可应用于CTL 和NK 细胞活性测定及药物、化学物质或放射所引起的细胞毒性,目前已有LDH 法测定CTL 活性的试剂盒。 同时设4个对照:靶细胞最大释放组、体积校正对照组、背景对照组和自然释放组 按5∶1、10∶1、20∶1(效应细胞∶靶细胞) 细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大等因素会造成细胞自然释放乳酸脱氢酶

操作流程: 设立效应细胞孔(不同浓度的效应细胞设立效应细胞自发释放组):50μl效应细胞+50μl培养基 实验组:靶细胞不变,改变效应细胞:50μl效应细胞+50μl靶细胞 设立靶细胞自发释放组:50μl靶细胞+50μl培养基 设立靶细胞最大释放组:50μl靶细胞+50μl培养基+10μl裂解液(10×) 设立体积校正对照组:100μl培养基+10μl裂解液(10×) 设立背景对照组:100μl培养基 250g离心4分钟 37℃孵育4小时 离心前45分钟添加裂解液(10×)至靶细胞最大释放组 250g离心4分钟 取上清50μl转移至另一孔板 (可选)于独立的孔中加50μl LDH阳性对照(1:5000) 于每孔中添加50μl再次稀释的底物混合物 室温避光孵育30分钟 添加50μl终止溶液 490nm测吸收值 1.靶细胞接种数目的优化 1.1.设立检测板 1.1.1.准备靶细胞:调整细胞浓度0, 5,000, 10,000, 20,000/100μl,使用与细胞毒分析相同的培养 基及孔板终体积。例如,若以50μl/孔的靶细胞及50μl/孔的效应细胞接种,则以100μl/孔梯

LDH同工酶

LDH同工酶 定义1:具有相同底物,但电泳迁移率不同的酶。可来简介 用电泳方法将LDH同工酶分离,分析其酶谱,发现脊椎动物各组织中有五条酶带。每条酶带的酶蛋白都是由四条肽链组成的四聚体,LDH有两类肽链,A(M)或B(H),各有不同同工酶 的免疫性质,按排列组合可形成符合于电泳酶带数的五种同工酶。LDH1及LDH5分别由纯粹的4条B链(B4)和4条A链(A4)形成,称为纯聚体;而LDH2、LDH3和LDH4都是由两类肽链杂交而成的,分别可写成AB3、A2B2、A3B,称为杂交体。 编辑本段分类 基因性同工酶或原级同工酶 由不同基因产生的肽链而衍生的同工酶。这里所指的不同基因可以在不同染色体或在同一染色体的不同位点上,例如LDH中A、B两条肽链的基因分别在第11及第12对染色体上,唾液淀粉酶和胰淀粉酶的基因在第1对染色体的不同位点上。这类同工酶因分子结构差异较大,彼此间无交叉免疫。但同工酶的不同基因也可以是同源染色体的等位基因,这种成对的等位基因上两个基因结构不同的情况,在遗传学上称为杂合子。杂合子在同一个体中可合成同一种酶的两种不同

肽链,或亚基,这两种亚基尚可杂交,形成同工酶。在生物群体的不同个体中,有时同一基因位点上的一个(对杂合子来说)或一对(对纯合子来说)基因也可发生遗传变异,从而产生变异的酶,出现群体中的遗传多态。不同个体中这些遗传变异的酶也属于基因性同工酶。其在免疫学上常有交叉反应。由同一基因转录出前体核糖核酸(前体RNA),经过不同的加工剪接过程而生成多种不同的mRNA,再转译出多种肽链,从而组成同工酶。这类同工酶因发现较晚,在国际上尚无统一命名,彼此间也有交叉免疫。 次生同工酶或转译后同工酶 由同一基因、同一mRNA转译生成原始的酶蛋白,再经过不同的化学修同工酶试剂 饰,如酰胺基水解、磷酸化、肽链断裂、糖链上的糖基增减等形成不同结构的酶蛋白,它们的免疫性往往相同。国际生化协会命名委员会(CBN)建议只将原级同工酶列为同工酶,而将次生同工酶称为共合酶,但不少生化学家还是把上述各类酶的不同结构形式都包括在广义的同工酶概念中。 编辑本段功能 在动、植物中,一种酶的同工酶在各组织、器官中的分布和含量不同,形成各组织特异的同工酶谱,叫做组织的多态性,体现各组织的特异功能。大多数基因性同工酶由于对底物亲和力不同和受不同因素的调节,常表现不同的生理功能,例如动物肝脏的碱性磷酸酯酶和肝脏的排泄功能有关,而肠粘膜的碱性磷酸酯酶却参与脂肪和钙、磷

糖化酶的研究进展

糖化酶的研究进展 摘要:糖化酶是世界上生产量最大应用范围最广的酶类,介绍了糖化酶的结构组成、特性、生产、提取、活力检测以及提高酶活力的研究。 关键词: 糖化酶; 特性; 活力 一、糖化酶的简介 糖化酶是应用历史悠久的酶类,1 500年前,我国已用糖化曲酿酒。本世纪2O年代,法国人卡尔美脱才在越南研究我国小曲,并用于酒精生产。50年代投入工业化生产后,到现在除酒精行业,糖化酶已广泛应用于酿酒、葡萄糖、果葡糖浆、抗菌素、乳酸、有机酸、味精、棉纺厂等各方面,是世界上生产量最大应用范围最广的酶类。 糖化酶是葡萄糖淀粉酶的简称[Glucoamylase,(EC.3.2.1.3.)](缩写GA或G), 糖化酶是一种习惯上的名称,学名为α-1,4-葡萄糖水解酶 (α-1,4-Glucanglucohydrolace). 糖化酶是由曲霉优良菌种(Aspergilusniger)经深层发酵提炼而成。(深层发酵是利用深层培养基的厌氧环境来培养厌氧细菌,但不能培养严格厌氧细菌,多用于兼性厌氧菌和微耗氧菌的培养) 重要糖化酶生产菌有:雪白根霉,德氏根霉,河内根霉,爪哇根霉,台湾根霉,臭曲霉,黑曲霉等。 糖化酶是具有外切酶活性的胞外酶。其主要作用是从淀粉、糊精、糖原等碳链上的非还原性末端依次水解a一1,4糖苷键,切下一个个葡萄糖单元,并像B一淀粉酶一样,使水解下来的葡萄糖发生构型变化,形成B—D一葡萄糖。对于支链淀粉,当遇到分支点时,它也可以水解a一1,6糖苷键,由此将支链淀粉全部水解成葡萄糖。糖化酶也能微弱水解a一1,3连接的碳链,但水解a一1.4糖苷键的速度最快,它一般都能将淀粉百分之百地水解生成葡萄糖。 二、糖化酶的结构组成及分类 糖化酶在微生物中的分布很广,在工业中应用的糖化酶主要是从黑曲霉、米曲霉、根霉等丝状真菌和酵母中获得,从细菌中也分离到热稳定的糖化酶,人的唾液、动物的胰腺中也含有糖化酶。不同来源的淀粉糖化酶其结构和功能有一定的差异,对生淀粉的水解作用的活力也不同,真菌产生的葡萄糖淀粉酶对生淀粉具有较好的分解作用。

抗凝血酶III(AT III)活性测定

出凝血6.1抗凝血酶III(AT III)活性测定(第四版) 出凝血6.2 原理: 抗凝血酶III能和凝血酶形成复合物,使之丧失转化纤维蛋白原为纤维蛋白的酶活性。在血浆中加入过量的凝血酶后,凝血酶与血浆中的AT III形成1︰1复合物,剩余的凝血酶作用于显色剂,裂解出显色基团,其显色程度与血浆中的AT III活性呈负相关。 出凝血6.3标本处理: 患者处于休息状态下,采空腹静脉血(急诊病人除外)。采血者应技术熟练,“一针见血”,以防止组织损伤,使外源性凝血因子进入标本。最好不与其它实验一起采集而使血液停留在针管的时间延长。采完血后,将血液沿管壁缓缓注入试管,避免产生气泡;然后迅速将血液和抗凝剂轻轻颠倒混匀,避免用力震荡。 全血要在1小时内分离血浆。分离乏血小板血浆时,要在室温下3000rpm离心10分钟,室温下可存放4小时。全部试验不能在4小时内完成,应将乏血小板血浆分装在0.5~1.0ml的小试管中快速冷冻,储存于-20℃冰箱中。冷冻过的标本不能再次冷冻,否则结果会不准确。冷冻血浆融化时,应将盛冷冻血浆的容器置于37℃水浴中,并轻轻摇动,使其迅速融化。 出凝血6.4 试剂:试剂购于天津威士达公司 AT III试剂盒:试剂盒代号OWWR 15。试剂包括6×15ml凝血酶试剂;6×3ml底物试剂;1×100ml缓冲液。凝血酶试剂每瓶用15ml 缓冲液复溶,室温平衡30分钟。底物试剂每瓶用3ml蒸馏水复溶,

室温平衡30分钟。 出凝血6.5仪器:使用Sysmex公司的CA-7000型全自动血液凝固仪。出凝血6.6 操作:按仪器操作步骤执行标准操作。 出凝血6.6.1开机:按下机器侧面的POWER 按钮。开机后机器进行自检,当屏幕上边显示“Ready:”时可以进行试验。 出凝血6.6.2检查消耗品: 1、准备反应杯:打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量,不足时,需及时添加。(一次性最多可放1000 个杯子) 2、准备试剂:按照仪器对试剂的要求,把试剂准备好,放到仪器内相应位置,注意查看试剂的量和有效期。如还不熟悉试剂位置时,可在主屏幕上选Reagent Setting,按屏幕显示放置试剂。 3、查看仪器的洗液瓶和废液瓶 出凝血6.6.3准备标本:将样本放入样本架,再将样本架放到仪器进样器上。 出凝血6.6.4输入检测项目:主菜单上按下Work List 键,进入工作菜单,输入AT-III项目。 出凝血6.6.5输入样本号:按屏幕下菜单的ID No.键,按顺序输入样本的序号。 出凝血 6.6.6开始检测:录入完所有测试信息,按下屏幕右上角START 键,开始检测。 出凝血6.7质量控制:使用德灵公司的leve11质控品做质量控制。每批质控品的值不超过2SD。(详见出凝血1质量控制)

乳酸脱氢酶教案资料

乳酸脱氢酶

乳酸脱氢酶 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内,其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是能催化丙酮酸生成乳酸的酶,几乎存在于所有组织中。同工酶有六种种形式,即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、LDH-4(HM3)、LDH-5(M4)及LDH-C4,可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性,所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2,〉LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2,利用此指标可以观察诊断心肌疾病。 基本信息 英文名称: LDH(lactate dehydrogenase) 序列信息:1 gsgcnldsar frylmg 长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)} 正常范围:血清135.0~215.0U/L; 脑脊液含量为血清的1/10。 乳酸脱氢酶A 简介 乳酸脱氢酶(LDH)分子量为130~140KDa,由两种亚单位组成:H(表示heart)和M(表示muscle)。它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶,即:LDH1(H4)、LDH2(H3M1)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4)。 LDH催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应,在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应,而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化(为逆反应)。LDH 是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。 由于LDH几乎存在于所有体细胞中,而且在人体组织中的活性普遍很高,所以血清中LDH的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。在AMI时升高迟、达峰晚,故对早期诊断价值不大。由于半寿期长(10~163小时),多用于回顾性诊断,如对入院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测。 LDH在组织中的分布特点是心、肾以LDH1为主,LDH2次之;肺以LDH3.LDH4为主;骨骼肌以LDH5为主;肝以LDH5为主,LDH4次之。血清中LDH含量的顺序是LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5. 正常参考值 人组织中的乳酸脱氢酶(LDH)用电泳法可以分离出5种同工酶区带,根据其电泳迁移率的快慢,依次命名为LDH1,LDH2,LDH3,LDH4,LDH5。不同组织的乳酸脱氢酶同工酶分布不同,存在明显的组织特异性,人心肌、肾和红细胞中以LDH1和LDH2最多,骨骼肌和肝中以LDH4和LDH5最多,而肺、脾、胰、甲状腺、肾上腺和淋巴结等组织中以LDH3最多。后来从睾丸和精子中发现了LDHx,其电泳迁移率介于LDH4和LDH5之间。LDH是由H(心肌型)和M(骨骼肌型)两类亚基组成,分别形成LDH1(H4)、LDH2(H3M)、LDH3(H2M2)、LDH4(HM3)、LDH5(M4)。 正常参考值 (1)琼脂糖电泳法: LDH1(28.4±5.3)%; LDH2(41.0±5.0)%;

乳酸脱氢酶同工酶

乳酸脱氢酶同工酶 乳酸脱氧酶有5种同工酶形式,即LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5,可用电泳法进行分离。人体心肌、肾、红细胞以LDH1和LDH2为最多。肝和横纹肌则以LDH4和LDH5为主。脾、胰、甲状腺、肾上腺中LDH3较多。乳酸脱氢酶同工酶是观察心肌疾病、肝胆疾病等的指标之一。 一、正常值 琼脂糖电泳法:LDH2>LDH1>LDH3>LDH4>LDH5 二、临床意义 (1)、乳酸脱氢酶同工酶结果要与临床症状结合才能做出准确判断。 (2)、LDH1和LDH2升高,且LDH1/LDH2>1见于:急性心肌梗死、溶血性贫血、急性镰刀型红细胞贫血、巨幼红细胞贫血等恶性贫血。急性肾皮质坏死及各种血管内外溶血症(若无LDH1升高,可排除溶血性贫血)。 (3)、LDH5升高:骨骼肌炎症、损伤及退化、肝损伤(肝硬变、肝炎、肝过度充血)、癌。 (4)、单纯LDH1升高:细菌性细胞瘤(如,畸胎瘤、睾丸细胞瘤及卵巢坏死性细胞瘤)。 (5)、总LDH升高而同工酶谱正常见于:心脏病、肝病、骨骼肌病、瘤及其他功能性失调症。对部分癌症患者LDH值越高,预后越不良。

(6)、LDH2、LDH3及LDH4均升高:大量血小板破坏(如:肺栓塞、大量输血等)、淋巴系统疾病(如:传染性单核细胞增多症、淋巴瘤及淋巴性白血病等)。 三、注意事项 (1)、溶血可使LDH1/LDH2失去意义。 (2)、LDH同工酶分布有组织差异性。 ①LDH1:心肌(占酶总量50%以上)>肾>胰腺>膈肌>红细胞。 ②LDH5:肝(占酶总量50%以上)>皮肤>骨髓>关节滑液>白细胞>血小板>胆汁。 ③LDH3:肺>脾>脑>肠>淋巴液>内分泌腺。 ④LDHX(或LD-C2)由成熟睾丸合成,为精子独有,据认为LDHX很可能是乙醇脱氢酶。 ⑤LDH的H亚基突变频度比M亚基高,黑人比白人高且有家族性。H1和M1与H、M性质不同,故电泳谱上可出现复带。

聚合酶链式反应

聚合酶链式反应 聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点,是能将微量的DNA大幅增加。 PCR(聚合酶链式反应)是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链,低温(经常是60°C左右)时引物与单链按碱基互补配对的原则结合,再调温度至DNA聚合酶最适反应温度(72°C左右),DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。基于聚合酶制造的PCR仪实际就是一个温控设备,能在变性温度,复性温度,延伸温度之间很好地进行控制。 PCR原理 DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现,DNA在高温时也可以发生变性解链,当温度降低后又可以复性成为双链。因此,通过温度变化控制DNA的变性和复性,加入设计引物,DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。 但是,DNA聚合酶在高温时会失活,因此,每次循环都得加入新的DNA聚合酶 耐热DNA聚合酶--Taq酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,不需要每个循环加酶 PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。 PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:

①模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备; ②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合; ③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶(如TaqDNA聚合酶)的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基互补配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链,重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 反应准备 其中dNTP、引物、模板DNA、Taq DNA聚合酶以及Mg2+的加量(或浓度)可根据实验调整。 PCR反应五要素: 引物(PCR引物为DNA片段,细胞内DNA复制的引物为一段RNA链)、酶、dNTP、模板和缓冲液(其中需要Mg2+)。 PCR所用的酶主要有两种来源:Taq和Pfu,分别来自两种不同的噬热菌。其中Taq扩增效率高但易发生错配。Pfu扩增效率弱但有纠错功能。 模板即扩增用的DNA,可以是任何来源,但有两个原则,第一纯度必须较高,第二浓度不能太高以免抑制

乳酸脱氢酶

乳酸脱氢酶 科技名词定义 中文名称:乳酸脱氢酶 英文名称:lactate dehydrogenase;LDH 定义:广泛存在的催化乳酸和丙酮酸相互转换的酶。L-乳酸脱氢酶(编号:EC 作用于L-乳酸; D-乳酸脱氢酶(编号:EC 作用于D-乳酸,两者均以NAD+为氢受体。在厌氧酵解时,催化丙酮酸接受由3-磷酸甘油醛脱氢酶形成的NADH的氢,形成乳酸。 应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科);酶(二级学科) 本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 求助编辑百科名片 催化机理 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内,其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶,几乎存在于所有组织中。同功酶有五种形式,即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、LDH-4(HM3)及LDH-5(M4),可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性,所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2,〉LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2,利用此指标可以观察诊断心肌疾病。 目录 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 血清乳酸脱氢酶(LDH)同工酶测定及意义 乳酸脱氢酶高的原因 乳酸脱氢酶偏低的原因 乳酸脱氢酶(LDH)实验 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介

编辑本段基本信息 英文名称:LDH(lactate dehydrogenase) 序列信息:1 gsgcnldsar frylmg 长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)} 正常范围:血清~L; 尿560~2050U/L; 脑脊液含量为血清的1/10。 编辑本段乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 乳酸脱氢酶[1](LD)分子量为135~140KD,由两种亚单位组成:H(表示heart)和M(表示muscle)。它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶,即:LD1(H4)、LD2(H3M1)、LD3(H2M2)、LD4(HM3)、LD5(M4)。 LD催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应,在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应,而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化(为逆反应)。LD是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。 由于LD几乎存在于所有体细胞中,而且在人体组织中的活性普遍很高,所以血清中LD的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。在AMI时升高迟、达峰晚,故对早期诊断价值不大。由于半寿期长(10~163小时),多用于回顾性诊断,如对人院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测医学教育`网搜集整理。 LD在组织中的分布特点是心、肾以LD1为主,LD2次之;肺以LD3.LD4为主;骨骼肌以LD5为主;肝以LD5为主,LD4次之。血清中LD含量的顺序是LD2>LD1>LD3>LD4>LD5.

聚合酶链式反应

实验9 聚合酶链式反应(PCR)技术 【实验目的】 掌握PCR反应的原理及操作技术。 【实验原理】 PCR 技术实际上是在模板DNA、引物和4 种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于耐高温DNA 聚合酶的体外酶促合成反应。PCR 技术的特异性取决于引物和模板DNA 结合的特异性。反应分为三步:1 热变性:在高温条件下,DNA 双链解离形成单链DNA;2 退火:当温度突然降低时引物与其互补的模板在局部形成杂交链;3 延伸:在DNA 聚合酶、dNTPs 和Mg2+存在的条件下,聚合酶催化以引物为起始点的DNA 链延伸反应。以上三步为一个循环,每一循环的产物可以作为下一个循环的模板,几十个循环之后,介于两个引物之间的特异性DNA 片段得到了大量复制,数量可达到10 6~7个拷贝。 【器材与试剂】 1.器材 DNA 扩增仪(PCR 仪)、台式离心机、微量取液器、硅烷化的PCR 小管、琼脂糖凝胶电泳系统 2.材料 模板DNA,单、双链DNA均可作为PCR的样品。 3.试剂 (1) 10×PCR 缓冲液 (2) MgCl2 15mmol/L (3) dNTP 混合物:每种2.5mmol/L (4) Taq DNA 聚合酶:5U/μl (5) 引物1和引物2:2 μmol/L (6) 琼脂糖凝胶电泳试剂 【操作步骤】 1. 在0.2ml Eppendorf 管内依次混匀下列试剂,配制20μl 反应体系。

ddH2O 7.8 μl 10×PCR 缓冲液 2 μl MgCl2(15mmol/L) 2 μl dNTP(2.5mmol/L) 2 μl 引物1 (2μmol/L) 2 μl 引物2 (2μmol/L) 2 μl 模板DNA 2 μl Taq DNA 聚合酶(5U/μL)0.2 μl 总体积20 μl 2.按下述循环程序进行扩增 程序阶段程序名称温度时间循环数 1 预变性94℃ 3 min 1 变性94℃30 sec 2 退火52℃30 sec 30 延伸72℃30 sec 3 保温4℃∞ 1 3.扩增结束后,取10μl 扩增产物进行电泳检测。 【要点提示】 1.在90~95℃下可使整个基因组的DNA变性为单链。一般94~95℃下30~60sec。时间过长使TaqDNA聚合酶失活。 2.退火温度一般在45~55℃。退火温度低,PCR特异性差;退火温度高,PCR特异性高,但扩增产量低。。 3.延伸温度一般在70~75℃。此温度下TaqDNA聚合酶活性最高。一般扩增产物长度小于1 kb,延伸时间30 sec即可。当扩增产物长度大于1 kb时,可适当延长延伸时间。

乳酸脱氢酶同工酶

乳酸脱氢酶同工酶 【临床意义】 (1)心肌细胞LDH活性远高于血清数百倍,尤以LDH1和LDH2含量最高。急性心肌梗塞时,血清LDH1和LDH2显著升高,约95%的病例的血清LDH1和LDH2比值大于1,且LDH1升高早于LDH总活性升高。病毒性和风湿性心肌炎及克山病,出现心肌损害时,病人的血清LDH同工酶的改变与心肌梗塞相似。LDH1/LDH2比值>1还见于溶血性贫血、恶性贫血、镰形细胞性贫血、肾脏损伤、肾皮质梗塞、心肌损伤性疾病、瓣膜病等。 (2)脑干含LDH1较高。颇脑损伤仅累及大脑半球时,只有血清同工酶谱的绝对值增高,而不影响同工酶的相互比值,如果累及脑干时,病人血清LDH1的含量也增高。 (3)急性心肌梗塞发病后12~24小时,血清LDH1也已升高。若同时测定LDH 总活性,可发现LDH1/总LDH的比值升高。早期血清中LDH1和LDH2活性均升高,但LDH1增高更早,更明显,导致LDH1/LDH2的比值升高。对急性心肌梗塞诊断的阳性率和可靠性优于单纯测定LDH1或CK-MB。 (4)胚胎细胞瘤病人的血清LDH1活性升高。 (5)急性肝炎,肝细胞损伤或坏死后,向血流释入大量的LDH4和LDH5,致使血中LDH5/LDH4比值升高,故LDH5/LDH4>1可做为肝细胞损伤的指标。急性肝炎以LDH5明显升高,LDH4不增,LDH5/LDH4>1为特征;若血清LDH5持续升高或下降后再度升高,则可认为是慢性肝炎;肝昏迷病人的血清LDH5.LDH4活性极高时,常示预后不良;原发性肝癌以血清LDH4>LDH5较为常见。 (6)肾皮质以LDH1和LDH2含量较高,肾髓质以LDH4和LDH5活性较强。患急性肾小管坏死(ATN)、慢性肾盂肾炎、慢性肾小球肾炎以及肾移植排异时,血清LDH5均可增高。 (7)肺含LDH3较多,肺部疾患时血清LDH3常可升高。肺梗塞时LDH3和LDH4相等,LDH1明显下降;肺脓肿病人的血清LDH3.LDH4常与LDH5同时升高。煤矿、钨矿矽肺病人的血清LDH1.LDH2下降,LDH4.LDH5升高。 (8)血清LDH总活性升高而同工酶谱正常(LDH1/LDH2<1)的病例,临床出现率依次为;心肺疾病、恶性肿瘤、骨折、中枢神经系统疾患、炎症、肝硬化、传染性单核细胞增多症、甲状腺功能减退、尿毒症、组织坏死、病毒血症、肠梗阻等。 (9)肌营养不良病人肌肉中LDH1.LDH2明显增高,LDH5显著下降;而血清则相反,LDH1.LDH2明显减少,LDH4.LDH5显著,表明血清LDH同工酶主要来自肌肉组织。 (10)恶性病变时LDH3常增高。

(完整版)年产5000吨糖化酶发酵车间设计

南阳理工学院 本科生毕业设计 学院(系):生物与化学工程学院 专业:生物工程 学生: ******* 指导教师:李慧星 完成日期 2010 年 5 月

南阳理工学院本科生毕业设计 年产5000吨糖化酶发酵车间设计 The design of annual output of 5000 tons of glucoamylase fermentation factory workshop 总计:毕业设计(论文)28页 表格: 5 个 插图: 1 幅

南阳理工学院本科毕业设计 年产5000吨糖化酶发酵车间设计 The design of annual output of 5000 tons of glucoamylase fermentation factory workshop 学院(系):生物与化学工程学院 专业:生物工程 学生姓名:郭留洋 学号:***** 指导教师:****** 评阅教师: 完成日期:2010年5月 南阳理工学院 Nanyang Institute of Technology

年产5000吨糖化酶发酵车间的工艺设计 生物工程专业郭留洋 【摘要】糖化酶是工业生产的主要酶制剂之一,广泛用于酿酒、葡萄糖、果葡糖浆、抗菌素、乳酸、有机酸、味精、棉纺厂等各方面。本设计以玉米淀粉为主要原料,利用黑曲霉,采用机械搅拌通风罐进行发酵生产,完成生产5000吨糖化酶发酵车间工艺设计,通过工艺流程设计、工艺衡算、设备选型和车间布置设计,设计出生产5000吨糖化酶发酵车间采用3个75m3发酵罐和3个6m3种子罐等,并依据生物工程工厂车间布置原则,对发酵罐车间进行合理布置,绘制了工艺流程图和车间布置图,工艺设计的结果为糖化酶的生产提供一定参考。 【关键字】糖化酶工厂设计深层发酵黑曲霉

乳酸脱氢酶

乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase ,LDH)是存在于细胞浆内的一种酶,乳酸脱氢酶在生命体中糖代谢中扮演重要角色。 在我们培养的细胞中乳酸脱氢酶分别存在于以下三个地方: 1、存在于活细胞内。若你培养的是贴壁细胞(viable adherent cells),那么贴在壁上的就是活细胞,此时的乳酸脱氢酶就存在于细胞内,所以测得贴壁细胞中的乳酸脱氢酶(LDH)活力就代表培养细胞中活细胞的量,我们称之为LDHV。 2、存在于漂浮于培养液中的凋亡小体(Apoptotic bodies)。由于凋亡小体有细胞膜,因此凋亡小体中的乳酸脱氢酶也没有释放到胞外。此时测得凋亡小体中的乳酸脱氢酶(LDH)活力就代表培养细胞中凋亡细胞(apoptotic cell)的量,我们称之为LDHa。 3、存在于培养液中。坏死的细胞(Necrosis)胞膜破裂乳酸脱氢酶释放,分布于培养液中, 此时测得培养液乳酸脱氢酶(LDH)活力就代表培养细胞中坏死细胞(necrotic cell)的量,我们称之为LDHn。 那么我们就可以计算细胞中凋亡或坏死的比率来衡量细胞损伤的程度。 凋亡% = LDHa/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100 坏死% = LDHn/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100 死亡% = (LDHa +LDHn)/(LDHa+LDHn+LDHv) × 100 其中(LDHa+LDHn+LDHv)代表细胞总LHD。 因为即使我们每次埋板的细胞数相同,但是由于细胞生长受多方面影响,所得的细胞数量也不一样,所以每次测得胞内和胞外乳酸脱氢酶的量都会不一样,所以不能单纯通过测上清中LDH的量或测细胞总LHD来评估细胞受损的程度,而通过上清LDH/总LDH的比率来评估细胞受损程度是比较符合实际。 另附简要操作:吸取细胞培养瓶中液体置离心管中离心,离心后沉淀于管底的是凋亡小体,上清液中的就是坏死细胞的LDH,将凋亡小体和贴附于培养瓶壁上的细胞破膜即可测定凋亡小体和活细胞的LDH.

糖化酶研究进展及其在食品工业中的应用

ResearchDevelopmentandApplicationinFoodIndustry ofGlucoamylase ZHONGHao1,TANXing-he1,XIONGXing-yao2,SUXiao-jun2,HUYa-ping1 (1.CollegeofFoodScienceandTechnology,HunanAgriculturalUniversity,Changsha410128,China;2.CollegeofHorticultureandLandscape,HunanAgriculturalUniversity,Changsha410128,China) 热点论坛 摘要:介绍了糖化酶产生菌株的分布、结构与多型性、作用机制、基因和固定化研究与处理及其 在食品生产中的应用现状,并对其未来发展趋势进行了展望。关键词:糖化酶;性质;基因;固定化;应用 Abstract:Glucoamylaseisanimportantindustrialenzyme.Theproducestrainsdistribution,structurepolytypism,enzymemechanism,gene,immobilizationresearchandapplicationactualityinfoodindustry,andthedevelopmentprospectonglucoamylasewassummariedinthispaper. Keywords:glucoamylase;property;gene;immobilization;application 中图分类号:TS201.2+5文献标识码:A文章编号:1009-6221(2008)03-0001-04 基金项目:湖南省科技厅科技计划重点项目(2006NK2006)作者简介:钟 浩(1983—),男,汉族,湖南人,硕士,主要 从事生物能源开发利用研究工作. 糖化酶,全名葡萄糖淀粉酶(GlucoamylaseEC. 3.2.1.3.),又称为淀粉α-1,4葡萄糖苷酶、γ-淀粉 酶。因为在发酵行业中主要用作将淀粉转化为葡萄糖,所以习惯上被称为糖化酶,是一种单链的酸性糖苷水解酶,具有外切酶活性。我国古代利用酒曲酿酒就是用的糖化酶的原理。糖化酶是淀粉糖化发酵生产酒精、葡萄糖浆的主要酶类。特别是利用酿酒酵母进行淀粉原料发酵时,淀粉液化后的糖化作用是必不可少的工序,因为大多数酿酒酵母只能利用可发酵的糖。 现在糖化酶不仅用于酒类和酒精生产及制取葡萄糖浆,还广泛地用于抗生素、氨基酸、有机酸 的生产。糖化酶是我国产量最大、应用范围最广的酶制剂。 1产糖化酶菌株分布 糖化酶广泛地存在于微生物中。已报道的产 糖化酶菌株中真菌有23个属35个种,它们分别是:雪白根霉(Rhizopustonginensis)、德氏根霉(R.delemar)、 河内根霉(R.tonkenisis)、爪哇根霉(R.ja-vanic)、台湾根霉(R.formosaensis)、臭曲霉(A.spe. rgfllusfoetJdus)、 黑曲霉(A.niger)、海枣曲霉(A.pheni-cis)、 宇佐美曲霉(A.usamii)、红曲霉(Monascussp)、扣囊拟内孢霉或肋状拟内孢霉(Endomycopsisfibu-liger)、 泡盛曲霉(A.awamori)等。某些细菌中也可以分离到热稳定的糖化酶, 如S.diastaticus、 糖化酶研究进展及其在食品工业中 的应用 钟浩1,谭兴和1,熊兴耀2,苏小军2,胡亚平1 (1.湖南农业大学食品科技学院,长沙410128;2.湖南农业大学园林园艺学院,长沙410128) 1

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