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转化生长因子-β1诱导的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶依赖的人胃癌细胞凋亡途径

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转化生长因子一131诱导的半胱氨酰天冬

氨酸特异性蛋白酶依赖的人胃癌细胞

凋亡途径

解刚强刘德纯陈登庭邓淼汪建光刘起鹏

【摘要】目的探讨转化生长冈子一131(TGF一61)诱导胃癌细胞的凋亡作用及机制二方法利

用TGF一61诱导胃癌细胞SGC7901凋亡,小干扰RNA(siRNA)封闭半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)一8的表达,Westernblot检测诱导及封闭前后各Caspases表达随时间的变化,流式细胞术分析细胞的凋亡率?结果TGF一131作t}}j后,各组细胞的凋亡率明显增加,0、24、48h凋亡率分别为1.13%、14.88%、37.32%;Caspase一812h后激活,Caspase一924h后激活;白RNA干扰(RNAi)后Caspase一8表达明显下降,24h后Caspase一8表达量为对照组的11.2%,48~72h未测到表达,96h后

Caspase一8表达重新出现,为对照组的9.2%。结论TGF—Bl通过Caspase途径诱导胃癌细胞发生凋产,由Caspase一8开始启动;抑制Caspase一8表达可以在一定程度上阻断TGF一131/Caspases信号的转导,进而抑制细胞凋亡

【关键词】胃肿瘤;转化生长因子一131;半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶;细胞凋亡

Theeffectsoftransforminggrowthfactor-阻inducedapoptosisofhumangastriccarcinomacellsre‘latedtoCaspasesxlEGang—qiang.LIUDe—ehlln,CHENDeng-ring,DENGMiao,WANGJian—

guang,LIUQi—peng.DepartmentQ厂generalsurgeo,theFirstAffiliatedHo@italofUniversityofHenallSci—ellceandTechnolog)‘,Luoyang471003,Chill“

Correspondingauthor:LIUDe—chun.Email:hopebetter@i63.corn

【Abstract】objectiveToinvestigatetheeffectsottransforminggrowthfactor一61(TGF一131)in—ducedapoptosis.MethodsApoptosisproportionofhumangastricSGC7901careinonlacellsinducedbyTGF一131wastestedbyflowcytometry,blockingCaspase一8byRNAinterterence(RNAi),theexpressionofCaspase一8wasanalyzedbyWesternblotting.ResultsTheapoptosisrateofSGC790lcellsobviouslyincreasedwiththetreatmentofTGF—B1,anactivefragmentotcaspase一8startedtooecur12hafterTGF—pltreatment,whereasthecaspase一9activefragmentoccurrefl24hafterTGF—Bltreatment.AfterRNAia—gainstCaspase一8,theexpressionofCaspase一8wasdecreased,11.2%ofeontrolgroupat24h,and

thencannot1)edetectedat48h,72h.re—emergenceat96h,9.2%ofcontr01group.ConclusionTGF一131inducedtheapoptosisofSGC7901cellsviaCaspasespathway,easpase一8maybethefirstcaspaseactiva—ted;Suppressionofcaspase一8byRNAicaneffectivelyblocktheTGF一131/Caspasessignalpathway,andsubsequentlyinhibitstheapoptosisofSGC7901cells.

【Keywords】Gastriccarcinoma;Transforminggrowthfactor一131;Caspase;Apoptosis

转化生长因子一p(TGF—p)是一个多功能的细胞

因子超家族,有多种生物学活性,对细胞的增殖、分化、

凋亡等过程起重要的调节作用¨J。其中TGF.131是人

体内的主要形式,其诱导的凋亡机制在人体各种组织

细胞中起到选择性消除受损和异常细胞的作用。2。。

研究结果表明TGF.131不仅能抑制胃癌细胞的生长,

而且能诱导胃癌细胞凋亡。3圳。其诱导凋亡通过受体

和线粒体2种途径,而半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白

酶(Caspases)是凋亡下游的重要应答因子,我们通过

观察TGF一131诱导胃癌细胞凋亡及小干扰RNA

DOI:10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2012.08.047

作者单位:471003洛阳,河南科技大学第一附属医院普外科

通信作者:刘德纯,Email:hopebetter@163.coin

?1553??实验研究?

(siRNA)干扰Caspase一8对凋亡率的影响,探讨TGF一131

对胃癌细胞的凋亡机制。

材料与方法

1.材料:胃癌细胞SGC7901购自中国科学院典型

培养物保藏委员会细胞库,脂质体Lipofectin和RPMI

1640培养基购自美国LifeTechnologies公司,小牛血清

购自杭州四季青生物_丁程材料有限公司,Caspase一3、

Caspase一6、Caspase一7、Caspase一8和Caspase一9抗体购自

美围SantaCruz公司,二喹啉甲酸(BCA)试剂盒为美

国Pierce公司产品,TGF—B1购白Sigma公司:

2.细胞培养:胃癌细胞SGC7901接种于含10%小

牛血清的RPMI1640培养液(含青霉素10U/ml和链万方数据