蒽酮比色法快速测定葡萄糖、果糖、蔗糖及可溶性总糖含量
一、分析原理
蒽酮试剂与碳水化合物生成一种蓝绿色物质,是糖类特有的反应。不经分离而进行系统测定葡萄糖、果糖、蔗糖和可溶性总糖含量基于以下三点:
1、室温下葡萄糖与蒽酮试剂不显色,此温度下果糖显色5分钟的吸收值与果糖在100℃下显色5分钟的吸收值几乎相等。
2、稀碱与糖溶液共热时,可以破坏葡萄糖、果糖而蔗糖不被破坏。
3、在浓硫酸的脱水作用下,蒽酮与糖类(包括多糖在内)作用。
二、仪器设备
分析天平(万分之一)、分光光度计、水浴锅炉、离心机、试管
三、试剂
1、蒽酮试剂:0.4g蒽酮溶于100ml 88%的硫酸中(约84份体积97%的浓硫酸与16份体积水混合,密封在磨口瓶中)。溶解后置水中冷却备用。此液当天配制。
2、2N KOH溶液 3N HCL溶液 3N NaOH溶液
3、标准糖储备液:精确称取250mg干燥的分析纯的糖(葡萄糖、果糖、蔗糖),分别移至250ml容量瓶中,溶剂可用蒸馏水。
4、标准糖工作液:用移液管吸取10ml标准糖储备液于100ml容量瓶中,用蒸馏水定容。
5、蒽酮-醋酸乙酯:1g蒽酮溶解于50ml醋酸乙酯中,可微加热(该试剂只可用一天,若储于棕色瓶中,暗中可保存数星期)
四、测定步骤
1、工作曲线绘制:用2ml移液管按表取标准糖工作液(葡萄糖不多于160μg,果糖不多于80μg,蔗糖不多于100μg)于干洁的试管中,用蒸馏水分别调整体积为2.00ml。各管中分别加入蒽酮试剂6.00ml。摇匀并立即置于沸水浴中加热5分钟,取出立即在冷水中迅速冷却并不断摇动。用2.00ml蒸馏水重复上述操作,作为空白。在分光光度计上以640nm波长测消光度,以消光度为纵坐标,以糖含量为横坐标,绘制标准工作曲线。
馏水补充至2ml,加0.5ml蒽酮-醋酸乙酯试剂,加5ml浓硫酸,摇匀,立即放入沸水浴中保温1分钟,取出冷却后在620nm下比色,做标准曲线。
3 、样品中糖的提取:谷物或植株烘干、粉碎。精确称取烘干样品(谷物0.2g,植株0.1g)放入研钵中,先加3ml蒸馏水研磨均匀,转移到离心管中,再用2ml 蒸馏水润洗研钵,全部转移到离心管中。离心5分钟,3000转/分。离心液倒入干净试管中,再向盛有沉淀的离心管加5ml蒸馏水并搅拌沉淀物,离心(重复两次),合并离心液于50ml容量瓶中,蒸馏水定容。
4、可溶性糖的测定:取试管,加0.5ml提取液,加1.5ml蒸馏水,加0.5ml蒽酮-醋酸乙酯试剂,加5ml浓硫酸,混匀,立即放入沸水浴中保温1分钟,取出
置试管架上冷却,倒入比色杯,在620nm下比色读取光密度,查曲线得可溶性糖浓度。
可溶性糖(%)=(测定液浓度/1000*提取液总量(ml))/组织干重(mg)
测定液浓度为=查出的糖浓度*稀释倍数
5、蔗糖测定:精确吸取提取液10ml于试管中,加入2N KOH 2ml置沸水中煮沸10分钟,取出迅速冷却至室温(放在冷水中冷却),倒入50ml容量瓶中,用蒸馏水润洗试管3次,最后用蒸馏水定容。精确吸取稀释液2ml至一个干净试管中,加蒽酮试剂6ml,摇匀,立即置沸水浴中加热5分钟,取出立即在冷水中迅速冷却并不断摇动。在640nm下读取消光值。查标准曲线得到蔗糖量。
蔗糖量(%)=S*50*50*100/2*10*W*106=S/80W
式中:S—待测样品的蔗糖量
W—样品重
2—用于测定样品稀释液的体积(ml)
50—用于分析样品稀释液总体积(ml)
10—用于KOH水解的样品液体积(ml)
106—换算克到微克
100—百分含量
6、葡萄糖、果糖的测定:取提取液10ml加水至50ml,往两支试管中分别加入2ml样品稀释液,其中一支加蒽酮试剂6ml,摇匀,在沸水浴中煮沸5分钟,取出立即浸入自来水中,冷却至室温,在640nm下测定光密度E
100
,另一支试管加
蒽酮试剂6ml,在常温下显色5分钟,测E
常温,由E
常温
查果糖工作曲线的样品液
果糖为F微克,按下式计算果糖含量:
果糖(%)=(F-S/2*0.95)*50*50*100/2*10*W*106=(F-S/2*0.95)* /80 W
由E
100-E
常温
查葡萄糖工作曲线的样品液中葡萄糖量为G微克,按下式计算:葡萄
糖(%)=(G-S/2*0.95)*/80W
注:此两公式疑不对。
注:做蔗糖时,一定要用干的试管,试管里面带水时,加入蒽酮试剂,加热完之后,里面是浑浊的溶液,测定时不准。
总糖的含量的测定(蒽酮法) 一、实验目的 掌握蒽酮比色法测定糖的原理与方法。 二、实验原理 蒽酮比色法是一个快速而简便的测定糖方法。蒽酮可以和游离的己糖或多糖中的己糖基、戊醛糖及己糖醛酸起反应,反应后溶液呈蓝绿色,在620 nm 处有最大吸收。蒽酮可与其他一些糖类发生反应,但显现的颜色不同。当样品中存有含有较多色氨酸的蛋白质时,反应不稳定,呈红色。对于以上特定的糖类反应较稳定。 三、实验器材 1.吸管 2.试管 3.分光光度计 4.水浴锅 5.电炉 6.电子分析天平 四、实验试剂 1.蒽酮试剂:取2 g蒽酮溶于1000 ml体积分数为80 %的硫酸中,当时配制使用。 2.标准葡萄糖溶液(0.1 mg/ml):100 mg葡萄糖溶于蒸馏水并稀释至1000 ml(可滴加几滴甲苯作防腐剂)。 3. 6 mol/l HCl溶液。
4.10 % NaOH溶液:称取10 g NaOH固体,溶于蒸馏水并稀释至100 ml。 五、实验操作 1.制作标准曲线 取干净试管7支,按下表进行操作。 表蒽酮比色法测定糖含量的标准曲线制作 2.样品的处理(见实验四) 取上述实验四的水解液,冷却后用10 % NaOH溶液中和至pH呈中性,然后用蒸馏水定容至100 ml,过滤,取滤液10 ml,用蒸馏水定容于100 ml成稀释1000倍的总糖水解液,用于糖含量的测定。 测定时取1 ml总糖水解液测定还原糖的含量(同标准曲线)。
样品中糖含量的计算: w —糖的质量分数(%); C —从标准曲线上查出的糖质量浓度(mg/ml); V —样品稀释后的体积(ml ); m —样品的质量(mg )。 w= CV m ×100%
引言 可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖,是植物品质的重要构成性状之一,尤其是以果实为目的产品的植物,可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。对于鲜食品种,一般来讲,高糖中酸,风味浓,品质优;低糖中酸,风味淡,品质差。因此,可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中,是人体热量的最最主要来源,具有较高的营养价值。本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法,及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。
1 蒽酮比色法 1.1 原理 糖在硫酸作用下生成糠醛,糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物,颜色的深浅与糖含量有关。在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化,故必须在反应后立即在同一时间内比色。 1.2 仪器与材料 1.2.1实验仪器 分光光度计,电炉,铝锅,电子天平,20ml刻度试管,刻度吸管5ml 1支、1ml 2支,漏斗。1.2.2实验试剂 (1)蒽酮乙酸乙酯试剂:取分析纯蒽酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中,在黑暗中可保存数星期,如有结晶析出,可微热溶解。 (2)浓硫酸(比重1.84)。 1.2.3实验材料 植物叶片。 1.3 实验方法 1.3.1标准曲线的制作 取20ml刻度试管11支,从0~10分别编号,按表24-1加入溶液和水。 表1 各试管加溶液和水的量 管号 0 1、2 3、4 5、6 7、8 9、10 100μg/ml蔗糖液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 (ml) 水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖量(μg) 0 20 40 60 80 100 然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液,摇匀,再从管液正面快速加入5ml浓硫酸,摇匀。比色液总体积为8ml,在恒温下放置30min,显色。然后以空白为参比,在485nm 波长下比色测定,以糖含量为横坐标,光密为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程。按表1加入标准的蔗糖溶液,然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸,充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,逐管均准确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白作参比,在630nm波长下测其光密度,以光密度为纵坐标,以糖含量为横坐标,绘制标准曲线,并求出标准线性方程。 1.3.2可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片,擦净表面污物,剪碎混匀,称取0.10~0.30g,共3份,或干材料。
实验十三 葡萄糖含量的测定——碘量法 一、实验目的 1、 学会间接碘量法测定葡萄糖含量的方法原理,进一步掌握返滴定法技能。 2、 进一步熟悉酸滴定管的操作,掌握有色溶液滴定时体积的正确读法。 二、实验原理 I 2与NaOH 作用可生成次碘酸钠(NaIO),次碘酸钠可将葡萄糖(C 6H 12O 6)分子中的醛基定量地氧化为羧基。未与葡萄糖作用的次碘酸钠在碱性溶液中歧化生成NaI 和NaIO 3,当酸化时NaIO 3又恢复成I 2析出,用Na 2S 2O 3标准溶液滴定析出的I 2,从而可计算出葡萄糖的含量。涉及到的反应如下: 1、I 2与NaOH 作用: I 2+2NaOH=NaIO+NaI+H 2O 2、C 6H 12O 6和NaIO 定量作用: C 6H 12O 6+ NaIO=C 6H 12O 7+NaI 3、总反应式: I 2+C 6H 12O 6+2NaOH=C 6H 12O 7+2NaI+H 2O 4、C 6H 12O 6作用完后,过量的NaIO 发生歧化反应: 3NaIO=NaIO 3+2NaI 5、在酸性条件下NaIO 3和NaI 作用: NaIO 3+5NaI+6HCl=3I 2+6NaCl+3H 2O 6、析出过量的碘用Na 2S 2O 3标准溶液滴定: I 2+2Na 2S 2O 3=Na 2S 4O 6+2NaI 实验还涉及到Na 2S 2O 3和 I 2溶液的标定 1、Na 2S 2O 3的标定 Cr 2O 72-+6I -+14H +=2Cr 3++3I 2+7H 2O I 2+2S 2O 32-=S 4O 62-+2I - Cr 2O 72-~3I 2~6S 2O 32- 32232272232200.256)(6O S Na O S Na O Cr K O S Na V c V cV c ??=?= 2、碘的标定 I 2+2S 2O 32-=S 4O 62-+2I - V V c 322322O S Na O S Na c 2/1= 3、葡萄糖注射液中葡萄糖的含量 计算式:%100506126?=L g O H C W 标示量葡萄糖含量 三、实验仪器及材料 1、 仪器 称量瓶、电子台秤、分析天平、容量瓶(250ml )、移液管(25ml )、量筒(10ml )、锥形瓶(25ml ,3个)、酸式滴定管(50ml )、烧杯(50ml )、玻璃棒、碘量瓶 2、 药品 K 2Cr 2O 7(S )、盐酸(6mol/L )、KI 溶液(100g/L)、淀粉(5g/L)、Na 2S 2O 3溶液(0.1mol/L )、I 2溶液(0.05mol/L )、NaOH 溶液(1mol/L )、葡萄糖注射液(5%) 四、 实验步骤 1、 0.1mol/L Na 2S 2O 3标准溶液的标定 ()()()()())(100000.25100021101612632232222-??????????-?L g O H C M O S Na v O S Na c I v I c 葡萄糖含量=
[1] 姚立虎,徐茜. 蒽酮比色法测食品总糖含量的简化研究[J]. 食品工业992,03:40-42. 1. 2 试剂 0. 1 mg / mL, 1 葡萄糖标准溶液:准确称取10mg 葡萄糖标准品溶于少量蒸馏水中,溶解后转移至容量瓶中,用蒸馏水定容至100 mL. 蒽酮硫酸溶液:准确称取蕙酮50 mg 于100mL 二烧杯中,加入蒸馏水25 mL, ,缓慢加入98% 质量分数)浓硫酸75 mL, ,边加边搅(于冰水浴中完成),直至蕙酮溶解,冷却至室温后使用(临用新配)。 浓盐酸、浓硫酸、NaOH ,以上试剂均为分析纯,实验用水为蒸馏水。 1. 3 方法 1. 3. 1 显色剂(蒽酮硫醇溶液)用量选择。向试管中加入0. 1 mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL, ,并加入蒸馏水至1m L, ,分别加入不同量的显色剂显色测定,以0. 1 mL, 蒸馏水为空 白对照。 1.3.2 显色时间选择。向10 mL 二试管中加入0. 1mg / mL 葡萄糖标液0. 1 mL 二并加入蒸馏水至1mL, ,在冰水浴中缓慢加入9 mL 显色剂摇匀,改变沸水浴时问,冷却至室温后测体系吸光度。 1.3.3 葡萄搪标准曲线的绘制。改变0. 1 mgmL 葡萄糖标准液和蒸馏水的用量,再分别加入9mL 显色剂,进行显色测定。 1.3.4 正交试验确定提取条件。采用正交试验,考查 4 个影响因素(料液比、盐酸浓度、提取时间、水解时问)对实验的影响,因素水平见表 1.
1.3.5 水溶性总搪的提取。取0. 5 g 棉花纤维于150 mL 圆底烧瓶中,加入30 mL, 蒸馏水,在沸水浴中加热60 mLn, 滤出提取液20 mL 于50 mL 烧瓶中,加 5 mol / L 盐酸 5 mL 继续在沸水浴中加热30 mLn ,冷却后,滴加一滴酚酞,用 5 mol / L, 1 的氧氧化钠中和至中性。 1. 3. 6 水溶性总搪的测定。取提取液 1 mL 于10mL 试管中,在冰水浴中缓慢加入9 mL, 蕙酮硫酸溶液摇匀,在沸水浴中加热9 mLn ,冷却后放置30min 测定吸光度。从标准曲线上查得对应的浓度并计算总糖含量。 2 结果与分析 2. 1 吸收曲线 用紫外刊一见分光光度计在500 ~700 nm 波长范围内进行光谱扫描,结果发现在625 nm 处有最大吸收,故本实验采用625 nm 为测定波长。 2. 2 显色剂用量 由图 1 可以看出,当显色剂用量为9 ml 二时吸光度最大,故实验采用显色剂用量为9 m l。
Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法) 一、目的 掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。 二、原理 糖类(包括单糖、双糖、寡糖)在浓硫酸存在下,脱水生成糠醛或羟甲基糠醛,然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合,生成蓝绿色的糠醛衍生物,颜色深浅与糖浓度成正相关。其反应式如下: 显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例,利用硫酸与水发生水合作用释放的热能,使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。 蒽酮法具有很高灵敏度,适用于糖的微量测定,且试剂简单,操作简便,因而得到普遍应用。 三、材料、仪器设备及试剂 1.材料:烘干材料粉末(过筛100目)或剪碎混匀鲜样品。 2.仪器设备: 分光光度计;电子分析天平;水浴锅;100ml容量瓶;试管;漏斗;剪刀;移液管;洗耳球等。 3.试剂及配制: 蒽酮试剂:称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。该试剂不能久贮,宜用前配制。 100μg·ml-1 蔗糖标准母液:准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后,洗入 100ml容量瓶中定容至刻度。 四、实验步骤 1.蔗糖标准曲线制作 1.1取6支试管,编号,按下表配制每管含量为0~100μg蔗糖标准液 加入表中试剂后,向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,并立即摇动使混合均匀,置试管架上室温下显色,冷却后倒入比色杯,以0号管作空白对照,在620nm波长处,以多点校准总量法,制作标准曲线。 2.样品提取 称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中,加入蒸馏水10ml,置于沸水浴中提取20min,冷却后过滤入100ml容量瓶中,以热水冲洗残渣2~3次,一并滤入容量瓶中,待冷至室温,定容至刻度,即为样品待测液。 3.糖含量测定 吸取待测液0.2ml(含糖量30~80μg),加入试管中,再加蒸馏水2.3ml,摇匀。随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀,置于试管架上显色,冷却至室温后,以空白管作对照,在620nm波长处,按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。 五、结果计算
葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定 摘要 运用氧化还原滴定的原理设计葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定方案并具体实施。从而进一步掌握Na 2S 2O 3及I 2标准溶液的配制和标定方法,巩固氧化还原滴定的操作技能。学会间接碘量法测定葡萄糖含量的方法和原理,进一步掌握返滴定法技能。其中,葡萄糖分子中含有醛基,能被IO -定量地氧化为羧基。故可将一定量过量的I 2在碱性条件下加入葡萄糖溶液中,使醛基完全转化为羧基。再将其酸化,用Na 2S 2O 3标准溶液滴定析出的I 2。所用指示剂为淀粉。根据所加I 2标准溶液的量及滴定所耗Na 2S 2O 3标准溶液的量结合反应式中各物质之间的计量关系,便可计算葡萄糖的含量。该方法简便易行且准确度高,基本符合实验要求。 关键词 葡萄糖注射液 间接碘量法 返滴定法 1引言 葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定目前有以下几种方法 方案一:旋光测定法 根据葡萄糖分子结构中的五个碳都是手性碳原子,具有旋光性,可采用旋光法测定含量。取出旋光计的测定管,先用蒸馏水为空白对仪器进行校正。用供试液体(5%葡萄糖注射液)冲洗数次,缓缓注入供试液体适量(注意勿使发生气泡)。置于旋光计内,读取旋光度,连续测定3次,取平均值。 方案二:间接碘量法。 碘与NaOH 作用能生成NaIO ,而C 6H 12O 6能定量地被NaIO 氧化。在酸性条件下,未与C 6H 12O 6作用的NaIO 可转变为I 2析出,只要用标准Na 2S 2O 3溶液滴定析出的I 2,便可计算C 6H 12O 6的含量。 本实验采用第二种方案进行葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定。 2实验原理 在碱性溶液中,碘与氢氧化钠作用可生成次碘酸钠(NaIO),葡萄糖能定量的被次碘酸钠氧化成葡萄糖酸(C 6H 12O 7)。过量的NaIO 可以转化为NaIO 3和NaI 。在酸性条件下,NaIO 3和NaI 作用析出I 2,然后用Na 2S 2O 3标准溶液滴定析出的I 2,便可计算出葡萄糖的含量。其反应如下: 1、I 2与NaOH 作用: I 2+2NaOH=NaIO+NaI+H 2O 2、C 6H 12O 6和NaIO 定量作用: C 6H 12O 6+ NaIO=C 6H 12O 7+NaI 3、总反应式: I 2+C 6H 12O 6+2NaOH=C 6H 12O 7+2NaI+H 2O
实验方案 一、实验目的 通过实验,掌握测定萝卜品质的方法 (一)萝卜外部形态的测定 1、实验材料 取鲜样3个∕小区 直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸 2、实验方法 .用自来水将各组萝卜洗净后,再用蒸馏水洗涤,擦干表面水分.每个小区取3个重复,用电子天平称量每株的鲜重,用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长,取平均值作为指标值 实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定(蒽酮法) 一、实验目的 了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理;掌握分光光度计的使用二、实验原理 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件,不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定,可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。 蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法,在强酸性条件下,蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸(还原性和非还原性)作用生成蓝绿色的糖醛衍生物,其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应,但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸的蛋白质时,反应不稳定,呈现红色。上述特定的糖类物质,反应较稳定。该法特点:灵敏度高,测定量少,快速方便。 三、材料、仪器及试剂
1.材料:植物种子、白菜叶、柑桔 2.仪器:分光光度计;恒温水箱;20ml具塞刻度试管(3支)漏斗;100ml容量瓶;刻度试管;试管架;剪刀;研钵 3.试剂 (1)200μg/ml标准葡萄糖:AR级葡萄糖100mg,蒸馏水溶解,定容至500ml。 (2)蒽酮试剂:1g蒽酮,用乙酸乙酯溶解,定容至50ml,棕色瓶避光处贮藏; (3)浓硫酸 四、实验方法 1.葡萄糖标准曲线的制作 取6支20ml具寒试管,编号,按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂,再缓慢地加入5ml 浓H2SO4,摇匀后,打开试管塞,置沸水浴中煮沸10分钟,取出冷却至室温,在620nm波长下比色,测各管溶液的光密度值(OD),以标 2. 称取1克白菜叶,剪碎,置于研钵中,加入少量蒸馏水,研磨成匀浆,然后转入20ml刻度试管中,用10ml蒸馏水分次洗涤研钵,洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟,冷却后过滤,滤液收集于100ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀备用。 3.糖含量测定 用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中,加1ml水和0.5ml蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H2SO4(注意:浓硫酸遇水会产生大量的热!),盖上试管塞后,轻轻摇匀,再置沸水浴中10分钟(比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合,并一同于沸水浴保温10分钟)。冷却至室温后,在波长620nm下比色,记录光密度值。查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量(μg)。 五、结果计算 样品含糖量(g/100g鲜重)=查表所得糖含量(μg)×稀释倍数×100/样品重(g)×106 六、注意事项
DNS法测定发酵液中葡萄糖浓度 一、实验原理 在碱性条件下,葡萄糖与DNS(3,5-二硝基水杨酸)试剂反应,葡萄糖被氧化成糖酸及其他产物,DNS被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内,葡萄糖的量与棕红色物质颜色的深浅相关,利用分光光度计,在550nm波长下测定吸光度值,查标准曲线并计算便可求出样品中葡萄糖的含量。 二、材料与试剂 1.仪器:50ml容量瓶,1000ml容量瓶,500ml烧杯,小烧杯,试管(带刻度25ml更好)10根,棕色瓶 2.试剂: 1)葡萄糖 2)2mol/LNaOH溶液 3)酒石酸钾钠(C4H4O6KNa﹒4H2O,Mr=282.22) 4)结晶酚(C6H5OH,Mr=94.11) 5)无水亚硫酸钠(Na2SO4,Mr=126.04) 6)蒸馏水 7)DNS 8)DNS试剂配制:准确称取DNS 6.3g于500ml烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,加入2mol/LNaOH溶液262ml,再加到500ml含有酒石酸钾钠185g的热水溶液中,再加结晶酚5g和无水亚硫酸钠5g,搅拌溶解,冷却后移入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至,充分混匀。贮于棕色瓶中,室温放置一周后使用。 9)葡萄糖标准溶液配制:取适量葡萄糖装入称量瓶,再85°C烘箱烘至恒重,放入干燥器冷却。精确称取干燥后的葡萄糖0.5g加蒸馏水溶解,至50ml容量瓶定容,制成10g/L的葡萄糖溶液。分别取蒸馏水稀释成葡萄糖标准液,浓度为 0.2g/L,0.4g/L,0.6g/L,0.8g/L,1.0g/L,1.2g/L,1.4g/L,1.6g/L,1.8g/L,2.0g/L。 三、实验步骤 1.标准曲线制作 分别取标准液1.0ml于25ml刻度试管中,按下表加入试剂,沸水中显色5min。用 冷水冷却到室温后,加水至25ml,摇匀,再550nm处用分光光度计测定上述各溶 液的A550值。以葡萄糖浓度为纵坐标,A550值为横坐标,作出标准曲线并回归出标
总糖和还原糖测定方法较多,如3,5—二硝基水杨酸法、碱性铜试剂法、蒽酮比色法、斐林氏法等。这里只介绍斐林氏法。 一、目的 学习掌握生产实践中常用的快速定糖方法。 二、原理 还原糖在碱性溶液中能将Ag+,Hg+,Cu2+,Fe(CN)3-等金属离子还原,而糖本身则氧化成各种羟酸,利用这一特性可以对还原糖进行定量测定。本实验采用斐林试剂热滴定法,氧化剂是斐林试剂,它是由甲乙两种溶液组成,甲液中含有硫酸铜、次甲基蓝;乙液中含有氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾(黄血盐)。当甲乙两液混合时,硫酸铜和氢氧化钠作用形成氢氧化铜沉淀,由于溶液中存在酒石酸钾钠,它和氢氧化铜形成了可溶性络合物。 酒石酸络铜(Ⅱ)钾钠盐在与还原糖共热时,二价铜离子即被还原成一价的氧化亚铜红色沉淀。 此氧化亚铜与试剂中亚铁氰化钾反应生成可溶性的亚铁氰酸络铜(Ⅰ)钾盐。 Cu2O + K4Fe(CN)6 + 3 H2O →K2Cu2Fe(CN)6 + 2 KOH + 2 H2O 亚铁氰化钾亚铁氰酸络铜(Ⅰ)钾盐 斐林试剂中二价铜的还原力比次甲基蓝强,因此所滴入的标准葡萄糖溶液首先使二价铜还原,只有当二价铜被还原完毕后,才能使次甲基蓝(甲烯蓝)还原为无色,测定中以此作为滴定终点。 在测定时先做一对照管(不加样品),用标准葡萄糖滴定求知一定体积斐林试剂中二价铜和次甲基蓝的量,即测定对照管消耗的标准葡萄糖量(A)。再做样品管,样品中还原糖消耗斐林试剂中一部分二价铜,剩余的量再用标准葡萄糖来滴定,即样品消耗的标准葡萄糖量(B)。将(A)减去(B)就可求得样品中还原糖量。 三、器材及试剂: 1.器材: ①山芋粉②广范试纸pH1~12。 ③吸管5毫升(×4),10毫升(×2)④容量瓶100毫升(×3)
啤酒中糖含量的测定 蒽酮比色法测总糖 一.实验原理 糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后,与蒽酮(C14H10O)脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸收,在150 μg/ml范围内,其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度,糖含量在30 μg左右就能进行测定,所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下,采用这一方法比较合适。 二.仪器与药品 1.仪器:电热恒温水浴锅,分光光度计,电子天平,容量瓶,刻度吸管等 2.试剂: (1)葡萄糖标准液(l00 μg/ml):精确称取100mg干燥葡萄糖,先用蒸馏水定容至100ml,再取出10ml定容至100ml; (2)浓硫酸; (3)蒽酮试剂:0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H2SO4中。当日配制使用; (4)啤酒(不用处理)。 三.实验步骤 1.葡萄糖标准曲线的制作 取7支大试管,按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液: 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液(ml)0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水(ml) 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量(μg)0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加盖,以防蒸发。自水浴重新煮沸起,准确煮沸l0 min取出,用冰浴冷却至室温,在620 nm波长下以第一管为空白,迅速测其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量(μg)为横坐标,以吸光值为纵坐标,作出标准曲线。 2.稀释:吸取啤酒1-2 m1稀释至500ml(先吸取2ml啤酒定容至100ml,再吸取10ml 已稀释的啤酒将其定容至50ml)
植物组织可溶性糖及淀粉测定(蒽酮法) 一、材料、仪器设备及试剂 1.材料 新鲜或烘干的植物叶片 2.仪器设备 分光光度计、水浴锅、刻度试管、刻度吸管。 3.试剂 蒽酮乙酸乙酯试剂:取分析纯蒽酮1g,溶于50ml乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中,在黑暗中可保存数周,如有结晶析出,可微热溶解; 9.2mol/L HCIO 浓硫酸(相对密度1.84); l%蔗糖标准液:将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重,精确称取1.000g。加少量水溶解移入100ml容量瓶中,加入0.5ml浓硫酸,用蒸馏水定容至刻度; 100μg蔗糖标准液:精确吸取1%蔗糖标准液1ml加入100ml容量瓶中,加水定容。 淀粉标准溶液:准确称取100mg纯淀粉,放入100ml容量瓶中,加60-70ml热蒸馏水,放入沸水浴中煮沸,冷却后加蒸馏水稀释至刻度,则每ml含淀粉1mg,吸取此液5.0ml,加蒸馏水稀释至50ml,却为每ml含淀粉100g 的标准液。 二、实验步骤 1.标准曲线的制作 取20ml刻度试管11支,从0~10分别编号,按表加人溶液和水,然后按顺序向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸,充分振荡,,立即将试管放入沸水浴中,逐管准确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白为对照,在630nm波长下测其吸光度。比色液总体积为8ml.以糖含量为横坐标;光密度为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程。 表 试剂 管号 01,23,45,67,89,10 100μg·L-1蔗糖液/ml00.20.40.60.8 1.0 水/ ml 2.0 1.812.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖量/μg020********* 2.可溶性糖的提取新鲜植物叶片或干材料,擦净表面污物,剪碎混匀,称取0.10~0.30g ,共3份,分别放入3支刻度试管中,加人5-10ml蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取30min(提取2次),提取液过滤入25ml容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至20ml。 3.显色测定:吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中,加蒸馏水1.5ml,然后向试管内加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸,充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,准 确保温1min,取出后自然冷却至室温,以空白为对照,在630nm波长下测其吸光度。 可溶%)=(C*V/a*n)/(W*106) 式中C:标准方程求得糖量(g) a:吸取样品液体积(ml); V:提取液量hal); n:稀释倍数;
实验一、果蔬样品中葡萄糖含量的测定(碘量法) 一、目的要求 1、复习碘量法的原理及操作。 2、掌握还原糖的测定方法。 3、学习样品的前处理方法。 二、原理 果蔬中的葡萄糖可用水提取,除去干扰物质后,其中的葡萄糖可用碘量法测定。 碘与NaOH 作用能生成NaIO (次碘酸钠),而C 6H 12O 6(葡萄糖)能定量地被NaIO 氧化。在酸性条件下,未与C 6H 12O 6作用的NaIO 可转变成I 2析出,析出的I 2可用Na 2S 2O 3标准溶液滴定。反应示意如下: 46应用2: 碘量法测定葡萄糖含量 (返滴定法) 基本单元:1/2(葡萄糖) 三、试剂 I 2标准溶液(0.05 mol ·L -1) Na 2S 2O 3标准溶液(0.1 mol ·L -1) NaOH 溶液(2 mol ·L -1); HCl 溶液(6 mol ·L -1);淀粉指示剂(w 为0.01)。 四、实验步骤 1、样品准备 水果样品去皮、去核后搅碎、匀浆;称量适量的匀浆于250 mL 容量瓶中定容。于40~50 ℃ 的水浴中提取30 min 后用干滤纸抽滤,弃去前面的少量滤液,保留后面的滤液。 2、葡萄糖含量的测定 用移液管吸取25 mL 滤液置于碘量瓶中,准确加入25 mL I 2 标准溶液。一边摇动,一边慢慢滴加2 mol /L NaOH 溶液,直至溶液呈淡黄色(加碱速度不能过快,否则过量NaIO 来不及氧化C 6H 12O 6而歧化为不与葡萄糖反应的NaIO 3和NaI ,使测定结果偏低)。将碘量瓶加塞于暗处放置10~15 min 后,加2 mL 6 mol ·L -1 HCl 溶液酸化,立即用Na 2S 2O 3标准溶液滴定至溶液呈淡黄色,加入1 mL 淀粉指示剂,继续滴定到蓝色消失。记录读数。再重复测定二次。计算样品中葡萄糖的质量分数。
实验二十一可溶性总糖的测定(蒽酮比色法) 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理强酸可使糖类脱水生成糠醛,生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色,该物质在620 nm 处有最大吸收. 在10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度,糖含量在30ug 左右就能进行测定,所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下,采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 1 . 仪器 (1)分光光度计 (2 )电子顶载天平 (3 )三角瓶:50m1 X 1 (4 )大试管:9 支 (5)试管架,试管夹 (6 )漏斗,漏斗架 (7 )容量瓶:50rnl X 2 (8 )刻度吸管:1m1X3 ,2m1X1 ,5mlX1 (9 )水浴锅 2 . 试剂 (1)葡萄糖标准液:l00ug/ml (2 )浓硫酸 (3)蒽酮试剂:0.2g 蒽酮溶于100 ml 浓H2SO4 中当日配制使用。 3 . 材料小麦分蘖节。 四、操作步骤 1. 葡萄糖标准曲线的制作
取7支大试管,按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液: 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加盖玻璃球,以防蒸发。自水浴重新煮沸起,准确煮沸lOmin 取出,用流水冷却,室温放置10min ,在620 nm波长下比色。以标准葡萄糖含量(ug)作横坐标,以吸光值作纵坐标,作岀标准曲线。 2. 植物样品中可溶性糖的提取 将小麦分蘖节剪碎至2mm以下,准确称取lg,放入50m1三角瓶中,加沸水25m1,在水浴中加盖煮沸10min,冷却后过滤,滤液收集在50m1容量瓶中,定容至刻度。吸取提取液2m1,置另一50m1容量瓶 中,以蒸馏水稀释定容,摇匀测定。 3 .测定 吸取lml已稀释的提取液于大试管中,加入 4.0ml蒽酮试剂,以下操作同标准曲线制作。比色波长 620nm,记录吸光度,在标准曲线上查出葡萄糖的含量(ug )。 查表所得糖含量(ug )乂稀释倍数 五、结果处理 查表所得糖含量Cug)乂稀释倍数心 植物样品含糖壘(%)=: 样品重(町xm% X10° 六、注意事项 1 .该显色反应非常灵敏,溶液中切勿混入纸屑及尘埃。 2 . H 2 SO 4 要用高纯度的。 3. 不同糖类与蒽酮的显色有差异,稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。 七、思考题 1.用水提取的糖类有哪些? 2 . 制作标准曲线时应注意哪些问题?
葡萄检测方法汇总 与葡萄糖检测相关的国家地方标准汇总: GB/T 30390-2013 油料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的测定高效液相色谱法 DB41/T 321-2003 食品添加剂.?葡萄糖含量测定方法 NY/T 2279-2012 食用菌中岩藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露醇、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、核糖的测定离子色谱法 GB/T 淀粉水解产品还原力和葡萄糖当量测定 GB/T 20379-2006 淀粉衍生物葡萄糖浆、果糖浆和氢化葡萄糖浆成分的测定 GB/T 16285-2008 食品中葡萄糖的测定酶-比色法和酶-电极法 CNS 2874-N5083 葡萄糖浆及干葡萄糖浆 GB/蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定方法液相色谱示差折光检测法 GB/T22221-2008食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定高效液相色谱法 YC/T252-2008烟用料液?葡萄糖、果糖、蔗糖的测定?离子色谱法 国家地方标准检测方法汇总表
葡萄糖的应用范围 葡萄糖作为人体的基本元素和最基本的医药原料,其作用和用途十分广泛。尤其是随着广大人民生活水平的提高,葡萄糖作为蔗糖的替代用糖应用于食品行业,为葡萄糖的应用开拓了更广阔的领域。 (一)发酵工业 微生物的生长需要合适的碳氮比,葡萄糖作为微生物的碳源,是发酵培养基的主料,如抗生素、味精、维生素、氨基酸、有机酸、酶制剂等都需大量使用葡萄糖,同时也可用作微生物发酵多聚糖和有机溶剂的原料。 1.抗生素发酵 葡萄糖是医药工业的重要原料,尤其是抗生素发酵必不可少的原料,抗生素中最主要的品种是青、链霉素,而这两种抗生素发酵都是以葡萄糖或者高DE值的淀粉水解液(即葡萄糖液)为碳底物。链霉素发酵以结晶葡萄糖为主,也可用高DE值的淀粉水解液(即葡萄糖液);其他如利福平也以葡萄糖或者高DE值的淀粉水解液(即葡萄糖液)为主要碳源;沽霉素、红霉索、麦迪霉
实验植物组织中可溶性糖含量的测定蒽酮比色 法 标准化管理部编码-[99968T-6889628-J68568-1689N]
实验七植物体内可溶性糖含量的测定(蒽酮法) 一、实验目的 了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理;掌握分光光度计的使用 二、实验原理 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一,也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件,不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定,可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。 蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法,在强酸性条件下,蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸(还原性和非还原性)作用生成蓝绿色的糖醛衍生物,其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应,但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸的蛋白质时,反应不稳定,呈现红色。上述特定的糖类物质,反应较稳定。该法特点:灵敏度高,测定量少,快速方便。 三、材料、仪器及试剂 1.材料:植物种子、白菜叶、柑桔 2.仪器:分光光度计;恒温水箱;20ml具塞刻度试管(3支)漏斗;100ml容量瓶;刻度试管;试管架;剪刀;研钵 3.试剂 (1)200μg/ml标准葡萄糖:AR级葡萄糖100mg,蒸馏水溶解,定容至500ml。 (2)蒽酮试剂:1g蒽酮,用乙酸乙酯溶解,定容至50ml,棕色瓶避光处贮藏; (3)浓硫酸 四、实验方法 1.葡萄糖标准曲线的制作 取6支20ml具寒试管,编号,按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。 在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂,再缓慢地加入5ml浓H 2SO 4 ,摇匀后,打开试管塞,置 沸水浴中煮沸10分钟,取出冷却至室温,在620nm波长下比色,测各管溶液的光密度值(OD 2.样品中可溶性糖的提取 称取1克白菜叶,剪碎,置于研钵中,加入少量蒸馏水,研磨成匀浆,然后转入 20ml刻度试管中,用10ml蒸馏水分次洗涤研钵,洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟,冷却后过滤,滤液收集于100ml容量瓶中,用蒸馏水定容至刻度,摇匀备用。 3.糖含量测定
实验二总糖含量的测定 一、目的: 1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。 二、原理: 糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后,与蒽酮 (C 14H 10 O)脱水缩合,形成糠醛的衍生物,呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸 收,在150 μg/ml范围内,其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度,糖含量在30 μg左右就能进行测定,所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下,采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 1.仪器:电热恒温水浴锅,分光光度计,电子天平,容量瓶,刻度吸管等 2.试剂: (1)葡萄糖标准液:l00 μg/ml (2)浓硫酸 (3)蒽酮试剂:0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H 2SO 4 中。当日配制使用。 3.材料:淀粉 四、操作步骤 1.葡萄糖标准曲线的制作 取7支试管,按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液: 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液(ml)0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水(ml) 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量(μg)0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1,迅速浸于冰水浴中冷却,各管加完后一起浸于沸水浴中,管口加盖,以防蒸发。自水浴重新煮沸起,准确煮沸l0 min 取出,用冰浴冷却至室温,在620 nm波长下以第一管为空白,迅速测其余各管 吸光值。以标准葡萄糖含量(μg)为横坐标,以吸光值为纵坐标,作出标准曲线。
2.植物样品中总糖的提取: 精确称取0.5g,置于50 ml三角瓶中,加水15 m1,盐酸10ml,沸水浴20min,定容至100ml,得提取液。取10ml滤液定容至100ml 3.测定 吸取1 ml已稀释的提取液于试管中,加入4.O ml蒽酮试剂,平行三份;空 平均值在标白管以等量蒸馏水取代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A 620 准曲线上查出葡萄糖的含量(μg)。 五、结果处理 C ×V总× D 样品含糖量(%)= ─────────────×100 W ×V测×106 其中:C——在标准曲线上查出的糖含量(μg), V总——提取液总体积(ml), V测——测定时取用体积(ml), D——稀释倍数, W——样品重量(g), 106——样品重量单位由g换算成μg的倍数 六、注意事项: 该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物,不但可测定戊糖与已糖,且可测所有寡糖类和多糖类,包括淀粉、纤维素等(因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应),所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量,实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下,用蒽酮法可以一次测出总量,省去许多麻烦,因此,有特殊的应用价值,但在测定水溶性碳水化合物时,则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中,否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外,不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同,果糖显色最深,葡萄糖次之,半乳糖、甘露糖较浅,五碳糖显色更浅,故测定糖的混合物时,常因不同糖类的比例不同造成误差,但测定单一糖类时则可避免此种误差。 七、思考题: 1.在从山芋粉中提取总糖时,加入盐酸的目的是什么? 2.简述蒽酮比色法测定植物组织中总糖含量的原理。
葡萄糖注射液的含量测定 一、目的要求 ? 1.掌握旋光法测定葡萄糖注射液含量的原理、方法及计算。 ? 2.学会使用自动旋光仪。 二、仪器与试剂 ? 仪器 自动旋光仪,旋光管,移液管(50ml ),容量瓶(100ml)。 ? 试剂 葡萄糖注射液(含量在16%以上), 氨试液(取浓氨溶液400ml ,加水使成1000ml )。 三、方法原理 ? 葡萄糖分子结构中有多个不对称碳原子,具有旋光性,为右旋体。一定条件下的旋光度是旋光性物质的特性常数,测定葡萄糖的比旋度,可以鉴别药物,也可以反映药物的纯杂程度。 ? 旋光度(α)与溶液的浓度(c )和偏振光透过溶液的厚度(L )成正比。当偏振光通过厚1dm 且每1ml 中含有旋光性物质1g 的溶液,使用光线波长为钠光D 线(589.3nm ),测定温度为t ℃时,测得的旋光度称为该物质的比旋度,以[α]Dt=α/Lc 。 ? 2.0852的由来:+52.75为无水葡萄糖的比旋度,按下式计算无水葡萄糖的浓度: ? 无水葡萄糖浓度(c )=100 α /[α]D20l ? 如果换算成一水葡萄糖浓度(c ˊ)时,则应为: ? c ˊ = c × = α× × =α×2.0852 ? 所以,测定葡萄糖溶液的旋光度可以求得其含量。 四、旋光仪的工作原理 1.光源 2.小孔光栏 3.物镜 4.滤光片 5.偏振镜 6.磁旋线圈 7.样品室8.偏振镜9.光电倍增管10.前置放大器 11.自动高压12.选频放大器13.功率放大器 14.伺服电机15.蜗轮蜗杆16.计数器 ? 使用方法 (1)将仪器电源插头插入220V 交流电源,并将接地脚可靠接地。 (2)打开电源开关,这时钠光灯应启亮,需经5min 钠光灯预热,使之发光稳定。 (3)打开电源开关(若光源开关打开后,钠光灯熄灭,则再将光源开关上下重复打开1到2次,使钠光灯在直流下点亮,为正常)。 (4)打开测量开关,这时数码管应有数字显示。 (5)将装有蒸馏水或其他空白溶剂的试管放入样品室,盖上箱盖,待示数稳定后,按清零按钮。试管中若有气泡,应先让气泡浮在凸颈处。通光面两端的雾状水滴,应用软布揩干。试管螺帽不宜旋得过紧,以免产生应为,影响读数。试管安放时应注意标记的位置和方向。 (6)取出试管,将待测样品注入试管,按相同的位置和方向放入样品室内,盖好箱盖。仪器数显窗将显示出该样品的旋光度。 (7)逐次按下复测按钮,重复读几次数,取平均值作为样品的测定结果。 (8)如样品超过测量范围,仪器在±45 处来回振荡。此时,取出试管,打开箱盖按箱内回零按钮,仪器即自动)(16.180)(17.198无水葡萄糖的分子量一水葡萄糖的分子量175.52100 16.18017.198
蒽酮比色法快速测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量 蒽酮试剂与碳水化合物生成一种蓝绿色物质,是糖类特有的反应。不经分离而进行系统测定葡萄糖、果糖、蔗糖及淀粉含量基于以下三点:第一在室温下葡萄糖与蒽酮试剂不显色,此温度下果糖显色5min的吸收值与果糖在100℃显色5min吸收值几乎相等。第二稀碱与糖溶液共热时,可破坏葡萄糖、果糖,而蔗糖不被破坏。第三淀粉经酸水解后与蒽酮试剂显色。 (二)试剂 (1)蒽酮试剂:称0.4g蒽酮溶于100ml88%硫酸中(约84份体积97%浓硫酸与16份体积水混合,密封在磨口瓶中)。溶解后置水中冷却备用。此液当天配制。 (2)2mol/L氢氧化钾溶液。 (3)3mol/L盐酸溶液 (5)标准糖贮备液:精确称取250mg干燥的分析纯的糖(葡萄糖、果糖、蔗糖),分另移至250ml 容量瓶中,配成1mg/ml浓度溶液。溶剂用蒸馏水和75%乙醇均可。 (6)标准糖工作液:用移液管吸取10ml标准糖贮备液于100ml容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度、摇匀。此液含糖为100μg/ml。 (三)测定步骤 1.工作曲线绘制用2ml吸量管按表取标准糖工作液(葡萄糖不多于160μg,果糖不多于80μg,蔗糖不多于100μg)于干洁的试管(16×180mm)中,用蒸馏水分别调整其体积为 2.0ml。从滴定管中加入蒽酮试剂6.0ml。摇匀并立即置于沸水浴中加热5min,取出立即在冷水中迅速冷却(不断摇动)。用 2.0ml蒸馏水重复上述操作,作为空白溶液。在分光光度计中,以640nm
2.样品中糖的提取谷物或植株体烘干、粉碎。精确称取烘干样品(谷物0.2g、植株体0.1g 左右)放入研钵中,加加5ml蒸馏水磨至均匀,以5ml蒸馏水将均匀物全部移入离心管中,离心(3000r/min)5min。离心液倒入干净试管中。再向盛有沉淀的离心管加5ml蒸馏水并搅拌沉淀物,离心(重复二次),合并离心液于50ml容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度。此液用干葡萄糖、果糖及蔗糖的测定(A液)。 以10ml3mol/L盐酸将离心管中沉淀物全部转移到容量瓶中,盖上玻塞,放在沸水浴中煮沸40~45min,取出冷却至室温,加3mol/L氢氧化钠溶液10ml中和其酸性,以蒸馏水定容至50ml,从中取2ml溶液,加蒸馏水至50ml,混匀。此液用用淀粉的测定(B液)。 3.蔗糖的测定精确吸取样品液(A)10ml,加入2mol/L氢氧化钾溶液2ml,置沸水浴中煮沸10min。取出迅速冷至室温,加蒸馏水稀释至50ml,摇匀。精确吸取稀释液2ml至一干净试管中,按标准曲线绘制步骤加蒽酮试剂显色测定,得光密度值E蔗。 4.蔗糖的结果计算 从蔗糖工作曲线求得蔗糖量为S(μg),按下式计算样品中蔗糖百分含量。 式中: S──待测样品液中蔗糖量(μg) W──样品称重(g) V1──用于测定的样品稀释液的体积(ml) V2──用于分析的样品稀释液总体积(ml) V3──样品液总体积(ml) V4──用于氢氧化钾水解的样品液体积(ml) 5.葡萄糖、果糖的测定取样品液(A)10ml加蒸馏水至50ml,往两支干净试管中分别加入2ml 样品稀释液其中一支加蒽酮试剂6ml,摇匀,在沸水浴中煮沸5分钟,取出立即浸入自来水冷却至室温,在640nm下测定光密度E100。另一支试管,加蒽酮试剂6ml,摇匀,在常温下显色5min,同上述操作测定光密度E常温。由E常温查果糖工作曲线求得样品液果糖量为F(μg),按下式计算样品中果糖、葡萄糖含量。 6.果糖、葡萄糖的结果计算 由E100-E常温查葡萄糖工作曲线求得样品液中葡萄糖量为G(μg),按下式算葡萄糖百分含量。