人白细胞介素33基因的克隆表达及其生物学活性的研究
２．３重组ｈＩＬ－３３的表达与鉴定表达载体在表达
菌中以３７℃，１
ｍｍｏｌ／Ｌ
ＩｇｒＧ，诱导表达４小时表达
量达最大．经考马斯亮蓝Ｒ．２５０染色，在２０ｋＤ处观察到有明显的特异蛋白带，空载体转化菌及诱导前的重组大肠埃稀菌在此区间未出现相同蛋白带，Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹证实表达产物与抗人ＩＬ－３３单克隆
ｎ
ｒ］
门Ｉｌ
生垦鱼蕉堂苤壶！塑至箜箜鲞
Ｃｏｎｎ＇ｏｌ
ＨＢｃＡｇ
ＩＬ－３３ＨＢｃ．Ａｇ＋ＩＬ－３３
ｌＬ４’．．ｎ．
ｒ］
ＣｏｎｔｒｏｌｔｌＢｃＡｇ
ＩＬ－３３ＨＢｃＡｇ＋
ｌＩ，５
几＿３３
图３
ｈｌＬ－３３对外周血单个核细胞表达ｍ４和ＩＬ－５的促进
作用
№．３Ｔｈｅ
ｐｒｏｍｏｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｏｆＭＬ－３３０１１
ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＩＬ－
４ａｎｄ
ＩＬ５ｉＩｌＰＢＭ℃
抗体有特异性结合，见图２。２．４重组蛋白的纯化复性目的蛋白经Ｎｉ２＋一ＮＴＡ
树脂层析柱纯化及稀释复性后进行ＳＤＳ—ＰＡＧＥ，结果
纯度达到９５％以上（图２）。
２．５
ｈｌＬ－３３的生物学活性为了检测ｈｌＬ－３３的生物
图ｌ
ＩＬ－３３ｃＤＮＡ
ＰＣ＇Ｒ扩增结果和ＰＱＥ／ｌＬ－３３双酶切鉴定
学活性，分别应用ＥｕｓＡ检测其对ＰＢＭｃ培养上清嬉里
中的ＩＬ４和ＩＬ－５的影响，获得的ｈｌＬ－３３明显促进飚．１Ａｇａｒ喊ｇｅｌ
ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｏｆＲＴ－ＰＣＲｐｒｏｄｕｃｔｏｆｔｈｅ
ＰＢＭＣ表达ＩＬ４及ＩＬ－５，浓度达到（１０６±２．６）ｐｇ／ｍｌ１Ｌ－３３ａｎｄ
ＰＱＥ／ⅡＪ－３３ｄｉｇｅｓｔｅｄｗｉｔｈＢａｍＨＩａｎｄＰｓｔＩ
和（１２２０±１０．４）ｐｇ／ｍｌ，而未刺激对照组的浓度只有Ｎｏｔｅ：１．ＰＣＲ
ｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２０００）；２．ＰＣＲ
ｐｒｏｄｕｃｔ
ｏｆｔｈｅＩＬ－３３
ｅＤＮＡ；３．ＰＱＥ／（３２．２±２．３）ｐｇ／ｍｌ和（６７．３±２．５）ｐｇ／ｍｌ，提示获得
ＩＬ－３３
ｐｌａｓｍｉｄ
ｄｉｇｅｓｔｅｄｗｉｔｈ
ＢａｍＨ
Ｉ
ａｎｄ
Ｐｓｔ
Ｉ；４?ＰＱＥ３０ｐｌａｍａｉｄｄｉ一
的ｈｌＬ－３３具有生物学活性（图３）。
ｇｅｓｔｅｄｗｉｔｈＰｓｔＩ．
３讨论
作为最近新发现的ＩＬｌ家族成员之一，ＩＬ－３３基因位于人类染色体的９ｐ２４．１，而ＩＬ－１家族的其他成员（ＩＬ－１８除外）都定位在第二染色体上…１３｜。众所周知，ＩＬ厂１家族的成员可以改变宿主对炎症、感染或免疫激发的应答反应。这个家族中４个最为有名的成员为ＩＬ－ｌａ／ｐ、ＩＬ－１Ｒａ、ＩＬ－１８。ＩＬ－Ｉａ／１３和ＩＬ广１８是高表达的炎症细胞因子，它们表达的失控可以导致严重的病理改变Ｌ４’６ｊ。ＩＬ－３３是最新发现的ＩＬ广ｌ家族的成员，它是一种具有多向性效应的促炎症因子，在炎
图２重组质粒工程菌表达ＩＬ－３３产物的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及
症反应中起着非常关键性的作用，是一种非常强的ＷｅｓＣｍｍ
ｂｌｏｔ
Ｔｈ２细胞诱导剂。它的分子量约１８０１３０，具有Ⅱ，１ｒａｇ．２
ＩＬ－３３ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄｂａｃｔｅｒｉａｂｙＳＤＳ－ＰＡＧＥ
家族的典型８三叶形特征，在结构上更接近ＩＬ－１８。
（１５％ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌＪ
ａｎｄｓｔａｉｎｅｄｗｉｔｈ
Ｃ０咖网ｅ
由于人的成纤维细胞经过ＩＬ－１刺激后，ＩＬ－３３ｂｌｕｅ
ｒｎＲＮＡ丰度较高，因此，本研究应用ＩＬ－１刺激２９３细Ｎｏｔｅ：山１?Ｂ１“８Ｐ１ｕｓ２
Ｐｒｅ－Ｓｔａｉｎｅｄ
ｓｔａｎｄａｒｄ（１８８，９８，６２?４９?３８，２８，１７，
胞，成功的从中扩增出ｈｌＬ－３３成熟肽ｃＤＮＡ，将ＩＬ－３３
１４：６’３’｝‰２?Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ’罟甜８芝掣ｆｏｒ
４
ｈ；山。
目的基因插入原核表达载体ＰＱＥ．３０中。由于３．ｈ咖ｅｅＩ沁ｂａｃｔｅｒｉａｉｎｄｕｃｅｄｆｏｒ３ｈ；Ｌａｎｅ４．Ｅ嘶ｎｅｅ咄ｂａｃｔｅｒｉａｉｎ一一…一一一７＇‘…………。
…。
ｄ。ｃｅｄｆｏｒ２ｈ；‰。５．Ｅ晒。。ｒｉｎｇｂａｃ洒。‘刊ｆｏｒｌｈ；Ｌａｎｅ
ＰＱＥ３０是高效的原核融合表达载体，融合部分只有６．Ｓｏｌｕｂｌ。ｂａｃｔｅｒｉａｌ
ｐｒｏｔｅｉｎ：１２ｍｅ７，ＢＩ。。Ｐｌｕｓ２
Ｐｒｅ－Ｓｔａｉｎｅｄｓｌａ／ｌｄａＩｄ；
６×Ｈｉｓ标签，一般不对目的蛋白的结构和功能产生
ｌａｎｅ８．Ｐｕｒｉｆｉｅｄ
ｈｌＬ－３３；Ｌａｎｅ９．Ｉｍｍｕｎｏｂｌｏｔｏｆ
ｈｌＬ－３３．
（下转第１７０页）
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人白细胞介素33基因的克隆表达及其生物学活性的研究
作者：姜艳芳， 王朝霞， 辛桂杰， 李玉斌， 牛俊奇， JIANG Yan-Fang， WANG Zhao-Xia，XIN Gui-Jie， LI Yu-Bin， NIU Jun-Qi
作者单位：姜艳芳,王朝霞,辛桂杰,牛俊奇,JIANG Yan-Fang,WANG Zhao-Xia,XIN Gui-Jie,NIU Jun-Qi(吉林大学第一医院肝病科,长春,130021)， 李玉斌,LI Yu-Bin(Division of
Immunology,Infection and Inflammation,Level 4/Room 21,Glasgow Biomedical
Research Centre,University of Glasgow,British)
刊名：
中国免疫学杂志
英文刊名：CHINESE JOURNAL OF IMMUNOLOGY
年，卷(期)：2009,25(2)
参考文献(6条)
1.Mattew J S;Damo Xu;Roman K Regulation of ST2L expression on T helper (Th) type 2 cells[外文期刊] 2001(10)
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2008(31)
4.Suzukawa M;Iikura M;Koketsu R An IL-1 cytokine member,IL-33,induces human basophil activation via its ST2 receptor 2008(09)
5.Sambrook J;Russell D W Molecular cloning:a laboratory manual 2001
6.Brint E K;Xu D;Liu H ST2 is an inhibitor of interleukin 1 receptor and Toll-like receptor 4 signaling and maintains endotoxin tolerance[外文期刊] 2004(04)
本文链接：https://www.wendangku.net/doc/003454689.html,/Periodical_zgmyxzz200902017.aspx