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薄层扫描法测定延寿片中齐墩果酸含量


薄层扫描法测定延寿片中齐墩果酸含量
更新日期:2010-07-07 点击: 杨安东 徐学民

提要 采用双波长薄层扫描法测定延寿片中齐墩果酸的含量。方法简便易行,平均回收率98.77%, RSD=1.84%。
关键词 薄层扫描法; 齐墩果酸; 延寿片

TLC Densitometric Determination of Oleanolic Acid in Yanshou Tabellae

Yang Andong, Xu Xuemin
Sichuan Institute of Chinese Materia Medica, Chengdu 610041

Abstract A method for the determination of Oleanolic acid in Yanshou Tabellae by TLC-densitometry is reported. The method is simple and rapid. The average recovery rate is 98.77%, RSD=1.48%.
Key words TLC-densitometry; Oleanolic acid; Yanshou tabellae

延寿片是由女贞子、制首乌等5味常用中药组成,具有补肾助阳、填精补髓、益气固本之功效。为了控制其质量、保证疗效,本文采用双波长薄层扫描方法,测定了延寿片中齐墩果酸的含量。

1 仪器与药品
CS-930薄层扫描仪(日本岛津),PBQ-I型薄层自铺板器(重庆南岸新力电器厂制造);齐墩果酸对照品(购自中国药品生物制品检定所);硅胶G(薄层层析用,青岛海洋化工厂出品);其它化学试剂均为分析纯。

2 对照品溶液及供试品溶液的制备
2.1 对照品贮备液的配制:精密称干燥至恒重的齐墩果酸(对照品)30 mg,置25 ml量瓶中,加氯仿溶解并稀释至刻度,摇匀,即得对照品贮备液。
2.2 供试品液的制备:取延寿片20片,除去糖衣,准确称重,研细,精密称出3.0 g,置250 ml圆底烧瓶中,依次加水30 ml,浓盐酸8 ml,氯仿50 ml。于水浴上加热回流水解5 h,冷却,分出氯仿液,酸水液再加氯仿30 ml,加热回流30 min冷却,分出氯仿液,合并氯仿液,回收溶剂,残余物转至25 ml容量瓶中,用氯仿溶解,稀释至刻度。

3 实验条件
3.1 薄层条件
薄层板:硅胶G,以0.5%CMC-Na为粘合剂,湿法铺板,板厚0.5 mm,110℃活化30 min;
展开剂:苯-醋酸乙酯(7∶3),展距15 cm;
显色:10%浓硫酸乙醇溶液为显色剂,110℃加热5~7 min显色。齐墩果酸斑点呈红色, Rf值为0.65,且能与熊果酸( Rf值0.55)等其它组分很地好分离。
3.2 仪器条件:薄层板显色后,在400~750 nm范围内对齐墩果酸斑点进行扫描,在530 nm处有最大吸收,700 nm有最小吸收。故确定 λs530 nm、 λr700 nm,反射锯齿法扫描, SX=3,狭缝1.2 mm×1.2 mm.

4 线性关系
精密吸取对照品贮备液1、2、3、4、5 ml各置5 ml量瓶中,以氯仿稀释至刻度,得浓度为0.256 μg/μl、0.512 μg/μl、0.768 μg/μl、1.024 μg/μl、1.280 μg/μl的对照品溶液,用定量毛细管分别精密吸取4 μl点于同一薄层板上,展开后挥干溶剂、显色,按上述仪器条件扫描,

测定吸收度积分值 A,结果见表1。

表1 对照品吸收度积分值的测定

C(μg) 1.024 2.048 3.072 4.096 5.120
A 40246.79 67454.02 95451.26 123248.50 146045.74



点样量( Y在1.024~5.120 μg间与吸收度积分值( X)呈良好的线性关系,回归方程为:Y=3.825×10-5X-0.542,γ=0.9993。由于标准曲线未通过原点,宜按外标两点法计算含量。
5 精密度考察:
5.1 仪器精密度:薄层板上精密点样(对照品溶液,浓度为1.280 μg/μl)4 μl,展开后挥干溶剂,显色、对同一块薄层板上齐墩果酸斑点重复测定6次。结果见表2。

表2 仪器精密度试验

NO 1 2 3 4 5 6
A 143124.34 148964.72 144219.58 143853.14 144729.62 148234.68



由表2可见 X=145521.01, RSD=1.69%,仪器精密度好。
5.2 板上精密度:在同一薄层板上精密点样(对照品溶液)4 μl,共6点,展开,晾干,显色,测定。结果见表3。
表3 板上精密度试验

NO 1 2 3 4 5 6
A 146905.01 143820.87 148227.33 148374.16 145876.82 150547.63



由表3可见, =147291.97, RSD=1.57%,板上精密度好。
6 方法的重现性及稳定性考察
6.1 重现性试验:在6块薄层板上分别精密点样(对照品溶液)4 μl,展开、挥干溶剂后显色,测定,结果见表4。

表4 重现性试验结果

NO 1 2 3 4 5 6
A 146394.61 147272.79 144930.84 146980.36 146101.76 145369.74



由表4可知:=146175.0, RSD=0.62%,方法的重现性很好。
6.2 稳定性考察:精密吸取浓度0.256 μg/μl,0.512 μg/μl,1.024 μg/μl的对照品溶液各4 μl,点于同一薄层板上,展开后挥去溶剂,显色、间隔30 min测定1次,结果见表5。
表5 显色后稳定性试验结果

浓度
(μg/μl) A RSD(%)
0 min 30 min 60 min 90 min 120 min
0.256 39963.82 40448.35 40045.56 39524.22 39445.17 1.03
0.512 67656.38 67927.00 67315.67 67450.31 66585.60 0.75
1.014 122755.48 122878.26 122386.77 122631.50 120792.06 0.70



由表5可以看出,斑点显色后在2 h内是稳定的。
7 加样回收率试验
准确称取已知含量的延寿片细粉1.0 g,共4份,其中1份作空白,另3份分别加对照品10、15、20 mg,按供试品溶液制备方法制备样品液。精密吸取样品液和浓度为0.256 μg/μl、1.28 μg/μl的对照品液各4 μl,点于同一薄层板上,展开,挥干溶剂,显色,测定齐墩果酸斑点的吸收度积分值,并计算其含量、加样回收率及其RSD。结果见表6。

表6 加样回收率试验结果

编号 供试品中齐墩
果酸量(μg) 供试品中加入齐
墩果酸量(μg) 测得齐墩果
酸量(μg) 加样回
收率(%)
1 1.664 1.588 3.2121 97.49
2 1.664 2.4042 4.0763 100.34
3 1.664 3.1836 4.7943 98.32



由表6可知,加样回收率(平均值)=98.77%, RSD=1.48%
8

 样品分析
精密吸取浓度为0.256 μg/μl、1.28 μg/μl的对照品溶液和供试品溶液各4 μl,点于同一薄层板上,展层及显色后在2 h内测定吸收度积分值,按外标两点法计算含量,结果见表7。


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