tiangen 粪便基因组DNA提取试剂盒-101125

产品简介：

本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的抑制剂吸附片InhibitEX配合专项开发的缓冲液系统提取粪便样本的基因组DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。独特的吸附片可以简单快速的吸附样品中的杂质。提取的基因组DNA片段大，纯度高，质量稳定可靠。

使用本试剂盒回收的DNA可直接用于PCR等其它分子生物学下游实验。

产品特点：

适用范围广：适用于不同来源的固态或液态粪便样本。

简单快速：一小时内即可获得超纯的基因组DNA。

高纯度：高效的吸附片与离心柱法纯化相结合，提取的DNA纯度很高，可直接用于下游实验。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。2．若缓冲液ASL或GB中有沉淀，可在56℃水浴中重新溶解，并摇匀后使用。3．所有的离心步骤均为使用台式离心机，室温下离心。操作步骤：

使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1. 称取粪便样本180-220mg至2ml离心管中，并将管子置于冰上。

注意：如果是液态样本则转移200μl至离心管中。

2. 向样本中加入1.4ml缓冲液GSL，间歇振荡1分钟至样本混匀。

3. 70℃孵育5分钟。

注意：对于较难破壁的革兰氏阳性菌，可将温度提高至95℃以促进裂解。

4. 涡旋15秒。13000rpm离心1分钟。转移上清液1.2ml至新的2ml离心管。

5. 加入一个抑制剂吸附片InhibitEX，振荡至吸附片彻底打开重悬。室温孵育1

分钟，使吸附片能充分作用。

6. 13000rpm离心3分钟。

7. 将上一步所得上清液转移至新的1.5ml离心管，重复步骤6。

8. 转移所得上清液200μl至新的1.5ml离心管，加入15μl蛋白酶K。

9. 加入200μl缓冲液GB，涡旋15秒。

10. 70℃孵育10分钟。

注意:简短离心以收集管壁及管盖上的液滴。

11. 加入200μl无水乙醇，涡旋混匀。

注意:简短离心以收集管壁及管盖上的液滴。

12. 将上一步所得溶液加入到一个吸附柱CR2中（吸附柱放入收集管中），

12000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CR2放入收集管中。

13. 向吸附柱CR2中加入500 μl缓冲液GD（使用前请先检查是否已加入无水乙

醇），12,000 rpm (~13,400×g ) 离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CR2放入收集管中。

14. 向吸附柱CR2中加入700 μl漂洗液PW（使用前请先检查是否已加入无水乙

醇），12,000 rpm (~13,400×g ) 离心30秒，倒掉废液，吸附柱CR2放入收集管中。

技术支持：010-********/2665 https://www.wendangku.net/doc/035347516.html,订货电话：010-******** https://www.wendangku.net/doc/035347516.html,

15. 向吸附柱CR2中加入500 μl 漂洗液PW，12,000 rpm (~13,400×g ) 离心30

秒，倒掉废液，将吸附柱CR2放入收集管中。

16. 将吸附柱CR2放回收集管中，12,000 rpm(~13,400×g)离心2分钟，倒掉废

液。将吸附柱CR2置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。

注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。

9. 将吸附柱CR2转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50 μl

洗脱缓冲液TB，室温放置2-5分钟，12,000 rpm (~13,400×g ) 离心2分钟，将溶液收集到离心管中。

注意：为增加基因组DNA的得率，可将离心得到的溶液再加入吸附柱CR2中，室温放置2分钟，12,000 rpm(~13,400×g )离心2分钟。洗脱液的pH 值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0会降低洗脱效率；

且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。

DNA浓度及纯度检测

得到的基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。回收得到的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

DNA应在OD260处有显著吸收峰，OD260值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA、40 μg/ml单链DNA。

OD260/OD280比值应为1.7–1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。

TIANamp Stool DNA Kit

粪便基因组DNA提取试剂盒

DP328（离心柱型）

试剂盒内容：

缓冲液GSL 80ml

缓冲液GB 15ml

缓冲液GD 13ml

漂洗液PW 15ml

洗脱缓冲液TB 15ml

蛋白酶K 1ml

InhibitEX吸附片50个

吸附柱CR2 50个

收集管（2 ml）50个

说明书1份

储存条件：

该试剂盒置于室温（15–25℃）干燥条件下可保存12个月；更长时间的保存可

置于2–8℃。

TIANGEN BIOTECH (BEIJING) CO., LTD.

Order: 010-********

Technical: 010-********/2665

Toll-free: 800-990-6057

本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。

版本号: DP101125