核酸毛细管电泳的研究_宋大伟

收稿日期:2002-04-20　

作者简介:宋大伟(1966-),女,吉林省四平市人,1987年毕业于吉林师范大学生物系,现为该系讲师.

2002年11月

松辽学刊(自然科学版)№.4第4期Songliao Journal (Natural Science Edition )Nov .

核酸毛细管电泳的研究

宋大伟

(吉林师范大学生物系,吉林四平136000)

摘　要:毛细管电泳以极高的分辨率,作为分子生物学的研究方法被广泛关注.特别是在毛细管中添加凝胶或胶束进行的毛细管电泳,对DN A 快速和高分辨率的分离被应用在人类基因组DN A 的分析中.本文拟就DNA 的测离和人类基因分析的最新方法毛细管电泳进行评述.

关键词:

毛细管电泳;DNA 测序中图分类号:Q 7 文献标识码:A 文章编号:1000-1840-(2002)04-0054-03

十九世纪俄国的物理学家Reuss 发现了电泳现象.从此,这一技术不断地得到应用和发展.近几年毛细管电泳技术作为一种分析手段在生物化学和分子生物学上被广泛注意.被发展和利用的有毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等速电泳、毛细管等电电泳、毛细管亲和电泳和毛细管亲和凝胶电泳等.

毛细管电泳技术以其高的分辨率在核酸分离上得到应用,采用毛细管凝胶电泳对分子量较大核酸也能较好地进行分离.利用离子化胶束的毛细管电泳对双链DNA 片段高速分离也十分有效.这种方法也被应用到人类基因组分析的DNA 高速测序、DNA 多态分析、PCR 分析、DNA 诊断、鉴定等方面上.

1　毛细管处理

毛细管电泳是由毛细管高压装置和检测器组成.毛细管是毛细管电泳的核心,一般是内径50—100μm 、外径150—400μm 的石英管,在它的外侧涂上聚酰亚胺涂层以增加牢固性.进行核酸分离时,采用毛细管凝胶电泳,使用聚丙烯酰胺作填充物;当以离子化胶束作载体时,所使用的毛细管内壁需经过化学修饰。

向毛细管中填加的凝胶主要的是聚丙烯酰胺凝胶.有两种方法:(1)把毛细管的内壁进行前处理,在毛细管内把丙烯酰胺凝胶化,毛细管内壁的硅烷基醇基和凝胶化的聚丙烯酰胺的一部分进行化学修饰的方法.(2)不经前处理直接填胶的方法.这两种方法只是前处理不同,前处时把毛细管用0.1mol ·l -1NaOH 冲洗,并利用带两个官能团的有机试剂:CH 2=C (CH 3)—OCO (CH 3)3—Si (OCH 3)3冲洗后放置数小时,用甲醇以及清水洗内壁.经过前处理的毛细管内部的凝胶稳定,填充一次凝胶可反复使用100次左右,而不经前处理的毛细管内的凝胶不稳定,反复使用不到20次.

利用胶束的毛细管电泳,使用非交联的聚乙烯酰胺对内壁的硅烷基醇进行化学修饰的毛细管,修饰的方式是带有二个官能团的试剂介于非交联的聚乙烯酰胺和硅烷基醇之间进行化学结合.经化学修饰的毛细管的电泳分离能力高.使用这些毛细管分离核酸,缓冲液使用的主要是硼酸—EDTA 溶液(pH =8),如果必要,还加尿素、甲酰胺等变性剂.—

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2　核酸在凝胶和胶束中的迁移

利用毛细管凝胶电泳时,由于核酸分子量大小和凝胶基质孔隙大小的关系,被分离成二个区域,一般称为奥格斯顿区域和雷布德逊区域.

在奥格斯顿区域,核酸近似球状.在雷布德逊区域,核酸和凝胶基质不聚合.在奥格斯顿区域,核酸大小(N)和电泳的迁移度(μ)的关系:lnμ=lnμ0-CN T(μ0为自由溶液中的核酸迁移度,C为比例常数,T为凝胶浓度).当DNA分子量小时,核酸的迁移遵循奥格斯顿模型,可是当DNA分子量大时,核酸的迁移就变成了雷布德逊区域,被表示为μ=a(1/N+bE2)(a、b为常数,E为场强).

利用胶束为载体进行细管电泳,当胶束浓度低时,不发生聚合现象,当胶束浓度高时发生聚合现象.同样,被分类成奥格斯顿区域和雷布德逊区域.

一般说来,毛细管凝胶电泳分离核酸的机制和普通的凝胶电泳相同,但是毛细管凝胶电泳可以加10000～30000V的高压,并能将高压产生的焦耳热很好的释放,从而大大加快分离速度.

3　核酸分离的诸因子

用填充了聚乙烯酰胺凝胶的毛细管分离单链和双链DNA,影响分离的主要因子是凝胶组成、电压、毛细管长度、毛细管温度、缓冲液组成、DNA碱基组成等.这其中,凝胶的浓度和电压是分离的重要因子,在很多的报告中都提出关于各因子选择的范围.

如当电场强度为200～400V/cm,毛细管长约10～100cm,内径50～100um时凝胶的浓度和分离DNA碱基数如附表.并且,毛细管的温度高时,分析的时间短.将l kbp的DNA样品片段和500bp的PCR生成物的单混合物进行分离,分离成75bp到12.216bpDNA片段的混合物只需20分钟.

附表　凝胶浓度对电泳DNA分子量大小的影响浓　度(%)单链DNA(bp)双链DNA(bp)

3.050～1000100～10000

5.020～50050～5000

8.010～30010～1000

象这样,用聚乙烯酰胺的毛细管电泳进行核酸分离是极其有效的.但是现在琼脂糖凝胶电泳和非交联聚乙烯酰胺也被利用.最近,用引进基因的纤维素胶束代替凝胶的毛细管电泳,省略了灌制凝胶.利用0.5%甲基纤维素在电压(20V/cm10kV),毛细管长(50cm),温度(室温),毛细管内壁用非交联聚乙烯酰胺修饰,分离1kbp DNA片段成75bp到10180bp的DNA片段混合物18min即可完成.经常被利用的胶束有甲基纤维素、羟基丙酰纤维素、羟乙基纤维素.

4　人类基因组的毛细管电泳分析

分析约30亿bp的人基因组、毛细管电泳以极快速的DNA测序被广泛利用.在检测上,将DNA 上的四个碱基A、G、C、T用四种不同波长的荧光标记,利用同时检测四种不同颜色的荧光的激光荧光检测法.100分钟可以完全解读100bp的DNA基因信息.测定同样长度的DNA,普通方法需8～10小时.在最近又开发了并列100根毛细管,能同时对100个DNA进行测序的电泳检测系统,超高速地进行DNA测序.

近几年,毛细管电泳在我国也得到了广泛的发展,常理文(1994年)利用毛细管区带电泳对单糖进行了定量分析,宋立国等(1994年)就毛细管区带电泳中蛋白质吸附问题,袁东星等(1994年)就电解液中添加剂问题分别进行了综述.毛细管电泳以其高分辨率和快速分离在核酸和人类基因组测序上得到应用,但就基因诊断、基因鉴定利用的毛细管电泳新的DNA分析方法的开发还期待将来.

参考文献

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[5]Guttman,A,Cohen,A.S.Heiger,D.N.karger,B.L.Anal.Chem,1990,62:137～141.

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On the Research of the Nucleic Acid Capillary Cataphoresis

SONG Da-wei

(Biology Departmen t of Jilin Normal University,Siping136000,China)

A bstract:As a research method of molecular biology,capillary cataphoresis is followde with interest be-cause of its very high resolution esp.added gel ormicelle.The rapid separation w ith high resolution ratio of DNA has been applied in the analysis of the DNA sequence-measure and the human genome.The ar-ticle is to comment the latest method of the capillary cataphoresis,

Key words:capillary;cataphoresis;measure the sequence of DNA

(上接第48页)

On the Teaching Model and Thinking of

Physical Education in Normal College

ZHANG J ian-guang

(Physical Department,Pingdingshan Normal College,Pingdingshan467002,China)

A bstract:This article is a discussion and thinking of the teaching model of the three-fear phy sical educa-tion in no rmal college.This article also introduces some phy sical education teaching model for normal col-lege.

Key words:normal college;physical educational teaching model;thinking

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核酸检测基本 知识

核酸检测基本知识 1.什么是核酸检测 核酸的定义：核酸是由核苷酸或脱氧核苷酸通过3′，5′-磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。 核酸具有非常重要的生物功能，主要是贮存遗传信息 和传递遗传信息。 2.核酸的分类 核酸大分子可分为两类：脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。 3.核酸的组成

DNA和RNA都是由一个一个核苷酸(nucleotide)头尾相连而形成的，由C、H、O、N、P，5种元素组成。DNA是绝大多数生物的遗传物质，RNA是少数不含DNA的病毒（如HIV病毒，流感病毒，SARS病毒等）的遗传物质。RNA平均长度大约为2000个核苷酸，而人的DNA却是很长的，约有3X10^9个核苷酸。 4.核酸的功能 在蛋白质的复制和合成中起着储存和传递遗传信息的 作用。核酸不仅是基本的遗传物质，而且在蛋白质的生物 合成上也占重要位置，因而在生长、遗传、变异等一系列 重大生命现象中起决定性的作用。 DNA与RNA都是核酸，它们在化学组成上有什么区别如 下： DNA与RNA的比较DNA RNA 主要存在部位细胞核细胞质 基本组成单位脱氧核苷酸核糖核苷酸碱基种类A、G、C、T A、G、C、U 五碳糖种类脱氧核糖核糖 核苷酸链两条脱氧核苷酸链一条核糖核苷酸链 5.检测方法 核酸检测方法，主要通过同时进行靶核酸扩增和可检 测信号的生成来检测样品中的靶核酸。可应用于临床微生

物学、血液筛选、遗传病诊断和预防、法医学等领域的核 酸检测。 目前主要使用的方法有以下几种： a.核酸序列依赖性扩增法 NASBA是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异性 核苷酸序列等温扩增RNA的新技术。反应在42℃进行,可在2h内将RNA模板扩增约109倍。NASBA原理是提取病毒RNA,加入AMV逆转录酶、RNA酶H、T7RNA聚合酶和引物进行扩增。 整个反应分非循环相和循环相:在非循环相中,引物I与模板RNA退火后在AMV逆转录酶的作用下合成cDNA,形成RNA:DNA 杂合体,随即RNaseH降解RNA,引物Ⅱ与cDNA退火,在反转录酶作用下合成第2条DNA互补链。双链DNA可在T7RNA聚合酶的作用下,经其启动子序列起动而转录RNA，RNA又可在反转录酶的作用下反转录成DNA，进入循环相,对模板进行大量 扩增。 b.转录介导的扩增技术 TMA技术原理与NASBA基本一致，略有不同之处是TMA利用的是MMLV逆转录酶及T7RNA聚合酶两种酶，MMLV逆转录酶既有逆转录酶的活性又具有RNA酶H活性。反应在41.5℃进行,可在1h内将RNA模板扩增约109倍。 c.连接酶酶促链式反应(LCR) LCR是基于靶分子依赖的寡核苷酸探针相互连接的一种

DNA核酸适配体合作协议书【模板】

DNA核酸适配体合作协议书 甲方：我方 乙方：合作方 本协议甲方和乙方就靶标名称？？？？ DNA核酸适配体的相关合作达成共识，双方本着平等自愿、互惠互利原则，就结成长期合作关系，经友好协商达成以下合作意向。 一、合作总则 为特异性结合靶标名称？的单链DNA核酸适配体更好的进行应用，双方同意建立合作关系，甲方负责提供特异性结合靶标名称？的核酸适配体序列，乙方在此基础上开展应用方面的实验研究。 二、责任和义务 1.甲方责任和义务 1.1甲方承诺提供给乙方的数据以及实验条件真实可靠。提供的数据包含OX40?? 特异 性核酸适配体筛选方法和亲和力测试方法，亲和力数据，核酸适配体序列信息等（附 件一）。 1.2根据乙方的实际情况和要求，乙方在研究过程中，如果遇到了需要甲方提供该适配 体相关信息的地方，甲方应积极配合乙方，共同制定具体实施方案和安排，以促进 项目的顺利进行。 1.3在项目进行过程，未经乙方同意，甲方不得自行公开本合同中乙方基于甲方的核酸 适配体序列取得的研究进展，但不包括双方合作前甲方已得到该核酸适配体的信息。 1.4甲方应当保证其交付给乙方的研究开发成果和样品不侵犯任何第三人的合法权益， 如因甲方提供的研发成果及样品等导致乙方遭受任何索赔、指控时，甲方应承担相 应法律责任并承担乙方由此受到的损失。 1.5甲方不得限制乙方就甲方提供的核酸适配体所获得的研究成果发表研究论文或申 请专利。 2.乙方责任和义务 2.1乙方应尽力推进课题的实施，实验过程中应与甲方及时沟通研究进展。 2.2未经甲方同意，乙方不得公开本合同中甲方使用的实验方法和数据，不得公开甲方 提供的核酸适配体序列。乙方在以甲方提供的核酸适配体为基础，获得的研究成果 发表第一篇论文或申请第一项专利前，应征得甲方许可。

核酸的性质

核酸的性质 核酸的理化性质及研究方法内容十分庞杂，本节只可能对若干比较重要的核酸理化性质和研究方法作概要叙述。 一、一般物理性质 1. 溶解度DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末状固体，它们都微溶于水，其钠盐在水中的溶解度较大。它们可溶于2-甲氧乙醇，但不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般有机溶剂，因此，常用乙醇从溶液中沉淀核酸，当乙醇浓度达50%时，DNA就沉淀出来，当乙醇浓度达75%时RNA也沉淀出来。DNA和RNA在细胞内常与蛋白质结合成核蛋白，两种核蛋白在盐溶液中的溶解度不同，DNA核蛋白难溶于0.14mol/L的NaCl溶液，可溶于高浓度（1~2mol/L）的NaCl溶液，而RNA核蛋白则易溶于0.14mol/L的NaCl溶液，因此常用不同浓度的盐溶液分离两种核蛋白。 2. 分子大小DNA分子极大，分子量在106以上，RNA的分子比DNA分子小得多。核酸分子的大小可用长度、核苷酸对（或碱基对）数目、沉降系数（S）和分子量等来表示。 3. 形状及粘度核酸（特别是线形DNA）分子极为细长，其直径与长度之比可达1：107，因此核酸溶液的粘度很大，即使是很稀的DNA溶液也有很大的粘度。RNA溶液的粘度要小得多。核酸若发生变性或降解，其溶液的粘度降低。 二、核酸的紫外吸收 嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在240~290nm的紫外波段有一强烈的吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性。DNA钠盐的紫外吸收在260nm附近有最大吸收值（图3-25），其吸光率（absorbance）以A260表示，A260是核酸的重要性质，在核酸的研究中很有用处。在230nm处为吸收低谷，RNA钠盐的吸收曲线与DNA无明显区别。不同核苷酸有不同的吸收特性。所以可以用紫外分光光度计加以定量及定性测定。 实验室中最常用的是定量测定小量的DNA或RNA。对待测样品是否纯品可用紫外分光光度计读出260nm与280nm的OD值，因为蛋白质的最大吸收在280nm处，因此从 A260/A280的比值即可判断样品的纯度。纯DNA的A260/A280应为1.8，纯RNA应为2.0。样品中如含有杂蛋白及苯酚，A260/A280比值即明显降低。不纯的样品不能用紫外吸收法作定量测定。对于纯的核酸溶液，测定A260，即可利用核酸的比吸光系数计算溶液中核酸的量，核酸的比吸光系数是指浓度为1μg／mL的核酸水溶液在260nm处的吸光率，天然状态的双链DNA的比吸光系数为0.020，变性DNA和RNA的比吸光系数为0.022。通常以1OD 值相当于50μg／mL双螺旋DNA，或40μg／mL单螺旋DNA（或RNA），或20μg／mL寡核苷酸计算。这个方法既快速，又相当准确，而且不会浪费样品。对于不纯的核酸可以用琼脂糖凝胶电泳分离出区带后，经啡啶溴红染色而粗略地估计其含量。 三、核酸的沉降特性

核酸检测和抗体检测

核酸检测和抗体检测 核酸检测和抗体检测 究竟什么是病毒核酸检测？什么是抗体检测？为什么可以用核酸检测结果作为新型冠状病毒肺炎的确诊依据？我们来了解一下这些问题。 病毒核酸检测是什么？ 病毒核酸检测是常见的病毒感染检查方法，并不局限于新型冠状病毒。在埃博拉、流感、禽流感等多种病毒性疾病诊断中，都会应用到病毒核酸检测技术，区别就在于所检测的病毒特异性基因不一样。 核酸检测是实验室确诊的主要方法。可通过实时荧光PCR检测咽拭子、痰液或血液等标本中2019-nCoV核酸阳性，或通过病毒基因测序，如与已知的2019-nCoV高度同源即为病原学阳性。 它既不需要开刀也不需要打针，采集人体分泌物后，进行留样保存，在实验室条件下，利用PCR技术进行检测，进行临床病原学的确诊。 抗体检测是什么？ 血清抗体检测，简称抗体检测。血清检测大多使用三类方法：间接免疫荧光（IIFT）、间接法 ELISA 和胶体金法。 血清抗体检测冠状病毒感染并不能像病毒核酸检测阳性一样作为病毒感染的“金标准”，因为抗体检测的准确性受制于检测方法、灵敏度、特异性、血样制备等因素。 如何判断有没有新冠病毒？ 最直接的方法就是通过分子生物学技术检测出属于新型冠状病毒的RNA，这就像法医找到嫌疑人的DNA一样，是可以帮助我们找到“幕后凶手”的直接证据。目前检测新型冠状病毒核酸的方法主要包括实时荧光RT-PCR（简称为定量PCR）检测和基因测序，而新型冠状病毒核酸检测试剂盒就基于前者，也是最常用的方法。 核酸检测的流程 新型冠状病毒核酸检测样本一般来自咽拭子。检测时，医生会用一个像棉签一样的拭子去擦拭扁桃体和咽隐窝附近的分泌物，也可以通过鼻腔取鼻咽后部的分泌物，然后放到试管里面，再交给检验部门做相应的病毒核酸的检查。因此，咽拭子采样前应提前漱口。 核酸检测需要经过取样、留样、保存、核酸提取、上机检测五个步骤。

第十五章 核酸的物理化学性质和研究方法答案法答案

第十五章核酸的物理化学性质和研究方法答案 一．选择题 1-7 ③③②④①④ 二．判断题 1-4是否否否 5-9 是是是是是 三．名词解释 cot：是DNA复性的动力学常数，数值上等于单链DNA初始浓度Co和复性完成一1. 1 2 半所需时间的乘积，其大小代表DNA顺序的复杂程度。 2 增色效应：由于DNA变性引起的光吸收增加称增色效应,也就是变性后DNA 溶液的紫外吸收作用增强的效应。 四．问答题 1、RNA比DNA更不稳定，为什么？ RNA的磷酸酯键易被碱水解，因为RNA的核糖上有2 ’-OH,在碱作用下形成磷酸三酯，磷酸三酯极不稳定，随即水解产生核苷2’，3’-环磷酸酯。该环磷酸酯继续水解产生2’-核苷酸和3’-核苷酸。DNA的脱氧核糖没有2 ’-OH，不能形成碱水解的中间产物，故对碱有一定抗性。 2、何谓变性？是否所有能引起蛋白质变性的因素都能引起核酸变性，或者引起核酸变性的因素都能引起蛋白质变性？ 变性作用是指核酸双螺旋结构被破坏，双链解开，从而核酸的天然构象和性质发生改变，但共价键并未断裂。 3、何谓Southern杂交？何谓Northern杂交？它们的原理和用途是什么？ Southern杂交是将凝胶电泳分开的DNA限制片段转移到硝酸纤维膜上进行杂交。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA 指纹分析和PCR产物判断等研究中。 Northern杂交将变性的RNA转移到硝酸纤维膜上，通过分子杂交以检测特异的RNA。原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。 4、琼脂糖凝胶电泳对核酸研究有何用途？ 分离DNA分子大小从上百kb到数百bp, 凝胶电泳后可以用嵌合荧光染料显色，凝胶电泳后核酸样品可用多种方法自凝胶上回收。 5、为制备变性胶，常在琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中添加什么变性剂？它们有何用途。 为制备变性胶，常在琼脂糖凝胶中添加氢氧化甲基汞或甲醛，RNA在变性凝胶中电泳时，相对分子质量的对数才与迁移率成反比。 在聚丙烯酰胺凝胶中添加8mol/L尿素或98%甲酰胺，DNA和RNA的二级结构已被破

核酸的提取经验及原理总结

一、核酸 核苷酸单体聚合而成的生物大分子，是生物细胞最基本和最重要的成分。一般认为，生物进化即始于核酸，因为在所有生命物质中只有核酸能够自我复制。今天已知核酸是生物遗传信息的贮藏所和传递者。一种生物的蓝图就编码在其核酸分子中。核酸是1869年米歇尔(F.Miescher)在脓液的白细胞中发现的。他当时称之为核素。阿尔特曼(R.Altmann)于1889年认识其酸性后，定名为核酸。 二、核酸的分类和功能 核酸分为核糖核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)两大类。这两类核酸有某些共同的结构特点，但生物功能不同。 DNA贮存遗传信息，在细胞分裂过程中复制，使每个子细胞接受与母细胞结构和信息含量相同的DNA；RNA主要在蛋白质合成中起作用，负责将DNA的遗传信息转变成特定蛋白质的氨基酸序列。 核酸的基本结构单元是核苷酸，核苷酸含有含氮碱基、戊糖和磷酸3种组分。碱基与戊糖构成核苷，核苷的磷酸酯为核苷酸。DNA和RNA中的戊糖不同，RNA中的戊糖是D-核糖；DNA不含核糖而含D-2-脱氧核糖(核糖中2位碳原子上的羟基为氢所取代)。核酸就是根据其中戊糖种类来分类的，DNA和RNA的碱基也有所不同。 三、核酸的理化性质 RNA和核苷酸的纯品都呈白色粉末或结晶，DNA则为白色类似石棉样的纤维状物。除肌苷酸、鸟苷酸具有鲜味外，核酸和核苷酸大都呈酸味。DNA、RNA和核苷酸都是极性化合物，一般都溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有机溶剂，它们的钠盐比游离核酸易溶于水，RNA钠盐在水中溶解度可达40g/L，DNA钠盐在水中为10g/L，呈黏性胶体溶液。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定。天然状态的DNA 是以脱氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于细胞核中。要从细胞中提取DNA 时，先把DNP抽提出来，再把P除去，再除去细胞中的糖，RNA 及无机离子等，从中分离DNA 。 四、细胞裂解： （一）裂解原理在核酸提取过程中，细胞裂解是非常重要的。经典的裂解液几乎都含有去污剂(如SDS、Triton X-100、NP-40、Tween 20 等) 和盐(如Tris、EDTA、NaCl 等)。 盐的作用，除了提供一个合适的裂解环境(如Tris)，还包括抑制样品中的核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏(如EDTA)、维持核酸结构的稳定(如NaCl) 等。去污剂则是通过使蛋白质变性，破坏膜结构及解开与核酸相连接的蛋白质，从而实现核酸游离在裂解体系中。裂解体系中还可能加入蛋白酶，利用蛋白酶将蛋白质消化成小的片段，促进核酸与蛋白质的分开，同时，也便于后面的纯化操作以及获得更纯的核酸。也有直接使用高浓度的蛋白质变性剂(如GIT、GuHCl 等) 裂解的，该方法已经成为了RNA 抽提的主流，却不是基因组DNA 抽提的主流。 （二）细胞的裂解方法

核酸检测考核试题和答案大全

A.精密度、准确 2.基因芯片技术的本质是(单项)该题正确答案: A、核酸分子杂交技术 3.新型冠状病毒肺炎患者行有创机械通气时,正确的方法是(。(单项)该题正确答案: D.小潮气量和低吸气压力 4.合成RNA的原料是:(单功该题正确答案: C、NTP 5.个人防护装置是用于防止人员个体受到生物性、化学性或物理性等()伤害的器材和用品。(单项该题正确答案:A危险因子 6.标记的参与杂交反应的已知核酸序列是(单项该题正确答案 探针 7.级A1型和A2型生物安全柜的通风连接是使用:(单项该题正确答案 A套管“或“伞型罩“连接 8.第三代测序技术的特征(单项该题正确答案 E、单分子测序 9.新冠病毒核酸检测实验室中,不属于净化实验室专用门特点的是:(单项该题正确答案D以上均不是 10.以下对应关系正确的是()(单项)该题正确答案: B.敏感性一一真阳性/真阳性+假阴性)*100% 11.目前的DNA自动化测序技术可以一次性读取的序列长度约(单项) 该题正确答案 D、1000bp 关于分子信标技术的描述,不正确的是(单项该题正确答案 E、分子信标设计简单 13.国内的生物安全实验室一定要按照国务院发布的()进行管理。(单项)该题正确答案: A《病原微生物实验室生物安全管理条例》 14.从鼻咽拭子中提取的检测新型冠状病毒的剩余核酸提取物不可用于哪种病原体诊断(单项该题正确答案 D丙型肝炎病毒 15.退火温度是决定PCR反应特异性的关键因素,通常退火温度为()该题正确答案 减5℃ 16.实验室人员培训的主要内容:0(单项该题正确答案E以上都是 17.下列关于 Taq DNA聚合酶的描述,正确的是(单项该题正确答案 E、在引物的3-OH末端加入脱氧单核苷酸,形成3',5磷酸二酯键 18.下列关于恒温金属浴的使用说法错误的是()(单项该题正确答案 D孔位不足时,可将管放入加热孔中进行热裂解,加热时间不变。 9.脱卸三级防护装备的顺序是:0(单项该题正确答案: A.鞋套→护目镜→外层手套→防护服→帽子→内层手套→口罩 20.下列哪项不是临床分子生物学检验分析前质量控制的内容()(单功该题正确答案 E.进行核酸提取的有效性评价 21.在核酸检测体系中加入内质控,其作用不是监控的是(单项) 该题正确答案

基于核酸适配体化学发光检测新技术(精)

基于核酸适配体化学发光检测新技术 核酸适配体是近年来发展起来的一类经体外人工合成筛选出的单链寡核苷酸,能高效、特异性地结合各种生物目标分子,故它的出现为化学生物学界和生物医学界提供了一种新的高效快速识别的研究平台。目前生物分子检测通常采用抗原抗体特异相互作用识别模式,但由于受到抗体易失活、制备时间较长等因素的影响,在一定程度上限制了抗体检测技术的广泛应用。相比之下,核酸适配体自身稳定性好、制备合成相对简单、快速、易获得、易功能化修饰与标记,且在生物传感器设计中应用灵活等优点,近几年在生物分析检测方面备受关注。目前已经成为临床诊断、环境监测、药学研究等许多领域中的研究热点。化学发光(CL)分析法具有不需光源,避免了杂散光的干扰,仪器设备简单、操作简便,具有极高的灵敏度,较宽的检测范围,可实现全自动化等特点,正逐渐成为分析检测中极为有用的工具,随着与众多学科交叉研究和应用领域的扩展,目前已成功地应用在药学、生物学、分子生物学、临床医学和环境学等诸多领域。在本论文中,我们采用化学发光分析法,利用核酸适配体对目标分子的高分辨识别,发展了多种具有创新意义的化学发光适配体生物传感器,也实现了同一份样品中双组分的同时检测。整个论文由以下五部分构成:第一章:绪论本绪论由两节构成,第一节介绍了核酸适配体技术检测生物分子的研究进展,包括了三部分。第一部分中简单介绍了核酸适配体的制备、特点、优势以及在分析领域中的应用;第二部分中介绍了基于核酸适配体识别模式的单组分检测技术的研究进展及其意义,主要内容包括:光检测、电化学检测以及其他检测方法,并列举了近年来分析领域中的部分典型示例;第三部分中介绍了基于核酸适配体识别模式的多组分检测技术的研究进展及其意义,也列举了近年来它们在该分析领域中的部分典型示例。第二节阐述了化学发光多组分酶检测研究进展以及本课题研究的目的、意义、主要研究内容以及创新之处,即核酸适配体在化学发光领域中应用与展望。第二章:基于核酸适配体的化学发光无标记检测腺苷的新技术由于目标分子在适配体上精确的结合位点与构象变化通常并不十分清楚,直接导致合适标记核酸适配体存在一定的难度,因此,适配体的无标记型检测技术已成为近年来的研究热点,尤其在生物检测、环境监控等领域无标记简单快速检测具有非常重要的意义。本章以腺苷为研究对象,采用羧基修饰的磁性微球作为分离载体,基于3,4,5-三甲氧基苯甲酰甲醛(TMPG)与鸟嘌呤(G)碱基之间的瞬时化学发光衍生反应,实现了生物小分子腺苷的无标记检测。本章包括以下两种腺苷检测原理的设计,具体实验步骤如下:(1)活化磁性微球,固定捕获探针序列;(2)方法A:一定量的适配体先与不同量的腺苷特异性结合,随后剩余的自由腺苷适配体与捕获探针序列在磁性微球表面进行杂交反应,从而连接在磁性微球上;方法B:适配体先与捕获探针序列进行杂交反应,随后加入不同量的腺苷,导致部分适配体序列脱离磁性微球表面,与溶液中腺苷形成复合物;(3)磁性分离后,TMPG直接检测结合在磁性微球表面的适配体中G碱基产生的CL信号,进行腺苷间接定量。结果表明:该两种方法均具有准确可靠、重现性和选择性好的特点。第一种方法的最低腺苷检测限为8×10~(-8)M,腺苷浓度在4×10~(-7)-1×10_(-5)M范围内,CL 信号呈线性增加(R~2=0.9852);第二种方法的腺苷浓度在4×10~(- 2)5×10(_5)M范围内,CL信号呈线性增加(R~=0.9764)。综合而言:本章发展的无标记检测生物小分子腺苷的CL新技术,具有简单,快速,灵敏度高等特点,有望在临床诊断、药学研究以及环境监测等领域发挥作用。第三章:基于核酸适配体

核酸化学及研究方法考试复习题

核酸化学及研究方法 名词解释： 正向遗传学：是指通过生物个体或细胞的基因组的自发突变或人工诱变，寻找相关的表型或性状改变，然后从这些特定性状变化的个体或细胞中找到对应的突变基因，并揭示其功能。 核小体组蛋白修饰：核小体组蛋白八聚体中每个组蛋白多肽链的N末端游离在核心之外，常被一些化学基团修饰，组蛋白修饰的种类包括①乙酰化：赖氨酸的乙酰化②甲基化：赖氨酸和精氨酸的甲基化③磷酸化：丝氨酸的磷酸化③磷酸化：丝氨酸的磷酸化 位点特异性重组：（site-specific recombination）是遗传重组的一类。这类重组依赖于小范围同源序列的联会，重组也只发生在同源的短序列的范围之内，需要位点特异性的蛋白质分子参与催化，重组的蛋白不是rec 系统而是int 转座机制：细菌转座子通过“剪切-黏贴”机制进行转录，转座酶两个不同亚基结合在转座子的特定序列上，两个亚基靠在一起形成有活性的二聚体，导致转座子的切除，转座酶-转座子复合物结合到靶DNA上，通过转座酶的催化将转座子整合到新位点上 基因敲除：利用DNA 同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，外源DNA 与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，从而代替受体细胞基因组中的相同/相似的基因序列，整合入受体细胞的基因组中。此法可产生精确的基因突变，从而达到基因敲除的目的。 Sanger双脱氧终止法：核酸模板在核酸聚合酶、引物、四种单脱氧碱基存在条件下复制或转录时，如果在四管反应系统中分别按比例引入四种双脱氧碱基，只要双脱氧碱基掺入链端，该链就停止延长，链端掺入单脱氧碱基的片段可继续延长。如此每管反应体系中便合成以共同引物为5’端，以双脱氧碱基为3’端的一系列长度不等的核酸片段。反应终止后，分四个泳道进行电泳。以分离长短不一的核酸片段（长度相邻者仅差一个碱基），根据片段3’端的双脱氧碱基，便可依次阅读合成片段的碱基排列顺序 荧光实时PCR技术原理：

核酸适配体

SELEX适体选择的过程 RNA或DNA的核酸片段，与蛋白质，多肽或小分子结合，使三维结构互补。蛋白质，多肽或小分子。“适”来自拉丁词Aptus匹配。可应用于各种领域包括传感器探针，用于医疗诊断和环境毒性检测，分子成像，病毒治疗如疫苗和抗病毒药物，靶向药物送的发展与开拓新兴心态注定改变范式病人的护理。这个有前途的适体可在体外用。这个过程被称为“SELEX（系统的演变通过指数enrechiment 配体）”，在体外进化，库的单链DNA或RNA包含40-60基地随机序列区在~ 20基本常数序列引物地区有利于放大产生。SELEX过程继续，直到收敛于一个收集池序列为目标的亲和力和通常得到的周期后8-15选择。由于他们的高亲和力和选择性，适配体已经成功地分离出目标包括范围广泛小分子，肽，蛋白质，甚至整个cells5-8。在这里，在技术回顾系列，我们将在评价的适体技术更集中毒性。特别是，在这个问题上，不同的技术为获得适体，包括“技术”要讨论。传统的适体的选择技术的“技术”采用SELEX最成功的适体代表1 109 1013的分子在1从library9。通常选择过程的开始与低比例的核酸蛋白质为检查是否所有的分子结合的target10。选择第一轮需要长时间的培养时间和不严格的条件，而后来的周期通常需要严格的条件，如改变缓冲液条件下，反应体积和时间的潜伏期。 之间的核苷酸结合后的反应图书馆与靶分子，绑定物种分离通过各种分离技术。然后，该放大的分子被用于下一轮选择过程。目标结合的分离未结合的适配体在筛选的过程是成功的适体的选择是至关重要的一步。适体的选择是通过连续重复丰富目标绑定和未绑定的寡核苷酸去除步骤，其次洗脱，放大，和所选择的寡核苷酸净化。由于蒂尔克和黄金的第一次尝试使用硝酸纤维素过滤方法，其他几个适体被选定，它仍然被认为是一种有效的分离的方法。硝化纤维素过滤器的结合用于广泛调查的平衡结合和蛋白质oligonucleitides络合物的动力学性质由于硝基优先保留蛋白质和蛋白质的DNA或RNA复杂但不是免费的寡核苷酸。完成整个选择的过程，通常需要12个周期，之后选定的分子可以被克隆到一个合适的载体并测序。SELEX方法，而过滤策略已用于隔离适体对各种靶蛋白，这种技术仍然是一个繁琐，耗时的过程。此外，一些DNA核酸适配体已选择使用硝酸纤维素大肠杆菌RecA protein11）。同时，由于分离过滤效率，大量的选择轮是必需的。传统的各种改进技术1990中描述的方法已被报道在近十年来，如毛细管电泳（CE）- SELEX，量身定制的SELEX，切换技术，照片—研究开发新的技术应用简单，容易和廉价的方法，如非SELEX，NP（纳米）- SELEX（例如，磁珠，胶体金粒子），细胞SELEX，溶胶-凝胶技术和微流控技术。在本审查，几个隔离高亲和力的先进的分离方法和特异性核酸适配体的提供。这些新的变异大大缩短时间的选择和改进适体的亲和性和特异性。基于核酸适体的选择neccem；非SELEX毛细管电泳的应用（CE）为SELEX造成了巨大的改进

核酸与蛋白质相互作用研究的新技术与新方法[1]

收稿:2003年4月,收修改稿:2003年7月 　3国家杰出青年科学基金(N o.20025311)、国家自然科学基金重大项目(N o.20299034)资助33通讯联系人　e 2mail :dw pang @https://www.wendangku.net/doc/025594311.html, 核酸与蛋白质相互作用研究的新技术与新方法 3 吕鉴泉 1,2 　庞代文 133 (1.武汉大学化学与分子科学学院　武汉430072;2.湖北师范学院化学系　黄石435002) 摘　要　蛋白质和核酸是组成生命的主要生物大分子,两者的相互作用构成了诸如生长、繁殖、运动、遗 传和代谢等生命现象的基础。因此,研究它们间的相互作用是人们解开生命奥秘的关键所在,在学术及应用上都具有极其重要的意义。探讨蛋白质和核酸相互作用涉及到众多学科的技术与方法,是多学科的前沿交叉领域。总体上该方面工作尚处于起步阶段,深入研究有待于研究手段的进步与创新。本文从研究手段与分析方法上对近年来该领域所采用的技术及其最新进展进行了评述。 关键词　新技术　相互作用　核酸　蛋白质中图分类号:Q51;Q52　文献标识码:A 文章编号:10052281X (2004)0320393207 N e w Techniques and Methodologies for the I nvestigation of the I nteractions of Nucleic Acids with Proteins L üJianquan 1,2 　Pang Daiwen 133 (1.Department of Chemistry ,Wuhan University ,Wuhan 430072,China ;2.Department of Chemistry ,Hubei Normal University ,Huangshi 435002,China ) Abstract Nucleic acids and proteins are m ost im portant biomacrom olecules.G enome regulation is critical step for all organisms.Protein 2DNA interactions play a key role in biological processes.The current technologies and methodolo 2gies for the investigation of the interactions of nucleic acids with proteins are summarized ,and the perspectives on the fu 2ture development are als o proposed. K ey w ords new techniques ;interaction ;nucleic acids ;proteins 生命科学是20世纪最重要的前沿研究领域之 一,其重点在于了解各种生命活性物质的结构、功能 及它们间的相互关系[1] 。蛋白质和核酸是组成生命的主要生物大分子,它们各自具有其结构特征和特定功能。核酸具有传递遗传信息等功能,而蛋白质则贯穿生命的所有生理过程。宏观上,两者的配合与作用构成诸如生长、繁殖、运动、遗传和代谢等生命现象的基础。 目前,DNA 的测序研究已告一段落,DNA 的多级结构、类别和组成及其碱基对的连接次序已弄清,许多DNA 结合蛋白质(含它们的DNA 复合体)的结 构及其基元(m otif )相继被确认[2] 。蛋白质组(蛋白 质的组成、结构和功能)的研究正在蓬勃兴起[3] 。由 于蛋白质种类繁多、结构及其构象(空间结构)十分复杂,蛋白质组的研究尚需要投入大量的人力、财力 和物力[4] 。但基因组和蛋白质组的研究仅仅是揭开生命奥秘的序幕,生命科学的核心工作在于在表征各种生物分子的结构、弄清各类生物分子功能的基础上,通过对它们间相互作用的表述进而掌握物质代谢、信息传递规律并实施调节及调控。许多复杂的课题已经紧迫地摆在科学家面前,蛋白质和核酸的相互作用就是其中的一个重要领域,是今后一段 时间内亟待研究的重大课题[5] 。 对于蛋白质和核酸的相互作用,过去曾用生物 第16卷第3期2004年5月 化　学　进　展 PROG RESS I N CHE MISTRY Vol.16No.3 　May ,2004

植物检疫专业核酸检测方法验证程序

植物检疫专业核酸检测方法验证程序（试行） 第一章总则 1.1 目的 为提高植物检疫专业核酸检测方法的科学性和适用性，规范验证流程，特制定本程序。 1.2 范围 本程序适用于标准制修订过程中核酸检测方法的验证，包括采用现有方法和自主研发的新方法制修订的标准。此外，实验室采用非标准方法及自主研发新方法时,也可参照本程序用以判定其可靠性，不做强制性要求。 若所制定的标准为等同采用国际标准，仅采用第二章中本实验室验证程序即可，但鼓励标准制修订方进行完整的验证流程。若所制定的标准为修改采用国际标准，且修改了关键性技术，则应进行完整的验证流程。 1.3 组织机构 植物检验检疫标准化专业技术委员会（以下简称“委员会”）负责本专业有害生物核酸检测方法验证的组织、审核等管理工作。委员会通过下设秘书处承担具体职责，包括审核验证实验室的资质，指定并组织验证实验室开展验证工作，组织专家进行验证材料的审核及验证数据的统计分析等。 1.4 术语与定义 1.4.1核酸检测方法验证 核酸检测方法验证（以下简称：检测方法验证）是确认某一核酸检测方法

适用于某一检测对象的过程。 1.4.2 本实验室验证 标准制修订实验室在合理的时间间隔内，以方法适用范围内不同样品为对象，对同一方法的验证指标进行确证的过程，初步判断方法可靠性。 1.4.3 独立实验室验证 独立于标准制修订方的实验室验证，判定方法的验证指标能否达到预期用途。 1.5 验证程序 开展验证工作的具体步骤如下，验证程序图见附录A。 1.5.1 本实验室验证 （1）标准制修订方完成方法草案，并设计验证方案。 （2）标准制修订方根据验证方案完成验证，并向秘书处提交验证材料。验证材料应包括标准草案、验证方案和验证报告。 （3）秘书处组织专家审核验证材料的完整性与有效性。 1.5.2 独立实验室验证 （1）标准制修订方的验证材料审核通过后，秘书处组织实验室进行独立实验室验证。 （2）验证实验室完成验证后，直接提交验证实验报告及验证评价报告至秘书处。秘书处组织专家审核独立实验室的验证评价结果。 1.6 验证结果的应用

核酸适配体在治疗肿瘤中的的作用

核酸适配体在治疗肿瘤中的的作用 江西理工大学邹涛 摘要： 核酸适配体是一类能够特异性地和靶物质结合的寡核苷酸序列。它可作用于蛋白质、金属离子、小分子化合物、细胞膜表面受体等靶标。该寡核苷酸序列可以是RNA也可以是DNA，较其他识别分子而言，适配体具有性质稳定、易合成、易标记、分子量较小和目标分子广泛等优势。其结合能力可与抗体相当甚至更强, 并可结合各种药物及载体构建多元复合靶向给药系统用于肿瘤靶向治疗, 在生物医学领域引起了极大的关注.。 关键词：核酸适配体；肿瘤治疗；量子点 1990年，Ellington与Szostak及Tuerk与Gold筛选出了能与T4 DNA聚合酶高亲和力和特异性结合的随机寡核苷酸，并命名为核酸适配体(aptamer,Apt)，该筛选方法被命名为指数富集的配体系统进化技术(SELEX)，原理是首先构建容量巨大的随机寡核苷酸序列库，然后经过多轮结合和洗脱，从中筛选得到能够和靶标物质高亲和力结合的寡核苷酸。核酸适配体是通过折叠形成特定空间结构而与靶标结合，其亲和力可与抗体相当，亲和常数(Kd)可达纳摩尔或皮摩尔水平。近年来，核酸适配体受到科学家的广泛关注，由于其分子量较小、可化学合成、生物相容性好等优点，其在基础、临床、药物开发中的研究不断增多，越来越多的针对生命活动中重要分子的适配体被筛选出来，各种基于核酸适配体的分析方法和技术也有报道，核酸适配体在生物医学、疾病诊疗领域已显示出广阔的应用前景。靶向配体在抗肿瘤药物靶向传递方面有很大的应用潜能，其对靶分子结合的选择性可赋予抗癌药物靶向特异性，同时增加药物在病变组织内的富集。核酸适配体可体外合成且易于修饰，同时因其带负电荷，在体循环中很少参加非特异性相互作用。它们对靶物质可高亲和力并特异性地结合，使其具有高的穿透性。抗肿瘤药物一般都是在细胞内发挥作用，提高药物摄取量是其有效性的关键。纳米粒子能通过细胞内吞途径进入细胞，如果将核酸适配体连接到纳米粒子表面，药物靶向肿瘤细胞后，可介导内吞发生，有利于提高药物摄取量，这种给药方式成为目前研究的热点。以下综述了核酸适配体在肿瘤靶向治疗中的研究进展。 1 肿瘤标志物 肿瘤标志物(Tumor Marker)是反映肿瘤存在的化学类物质。它们或不存在于正常成人组织而仅见于胚胎组织，或在肿瘤组织中的含量大大超过在正常组织里的含量，它们的存在或量变可以提示肿瘤的性质，借以了解肿瘤的组织发生、细胞分化、细胞功能，以帮助肿瘤的诊断、分类、预后判断以及治疗指导。利用它的这一特性，可以筛选出某一肿瘤标志物的特异性适配体，从而靶向肿瘤细胞，达到诊断和治疗的目的。 1.1甲胎蛋白 甲胎蛋白（AFP）是肝细胞癌定性诊断中最重要的血清肿瘤标志物。利用

核酸提取方法

核酸提取方案 一、DNA提取 1．向离心管中加入200μl样品, 200μl消化液，涡旋震荡15秒 2．加入蛋白酶K 10μl混匀（RnaseA根据需要决定是否添加） 3．56℃孵育15分钟，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底 4.加入250 μl无水乙醇，涡旋震荡15秒，室温放置5分钟，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底 5.将步骤4中所得溶液加入到已装入收集管（RNaseFree Tube 2 ml）的吸附柱（RNaseFree Column RS）中，若一次不能加完溶液，可分多次转入，8,000 rpm离心1分钟6．向吸附柱中加入500 μl洗液（使用前检查是否已加入无水乙醇），8,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中 7．向吸附柱中加入500 μl无水乙醇，8,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中 8．12,000 rpm（13,400×g）离心3分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干 9．将吸附柱置于一个新的收集管（RNaseFree Tube 1.5 ml）中，向吸附柱膜的中间部位悬空加入20-150 μl Buffer RE或灭菌水，室温放置2-5分钟，10,000 rpm离心1分钟，收集核酸溶液 二、RNA提取 1．向离心管中加入200μl样品，加入500μl裂解液，充分混匀，静置3～5min（有杂质离心） 2．将吸附柱套入收集管，样品处理液转入吸附柱中(尽量不要吸到颗粒杂质，以免堵塞柱子)，4℃条件下12000rpm，离心1min 3．弃去收集管中液体，加入500μL洗液，4℃条件下12000rpm，离心1min 4．重复步骤3； 5．弃去收集管中液体，瞬离除去残液； 6．将吸附柱转入新的无RNA酶的1.5ml EP管中，向柱中央加入20-30μL洗脱液，室温静置2min溶解RNA, 4℃条件下12000rpm，离心1min,管中液体即为模板RNA

核酸适配体用于肿瘤靶向治疗的研究进展汇总

高级生物化学 论文题：核酸适配体用于肿瘤靶向治疗的研究进展单位：中科院武汉物理与数学研究所 专业：分析化学 学号：XXX 学生姓名：XXX

核酸适配体用于肿瘤靶向治疗的研究进展 （XXX） 摘要 核酸适配体，包括DNA，RNA和多肽核酸适配体，是一类能够特异性地和靶标物质结合的寡核苷酸序列。核酸适配体与靶标具有非常高的亲和力，可以很好的选择性识别目标分子的性能，已经得到了了极大的关注。他们通长被用作生物分子探针、药物释放以及疾病的诊断和治疗（尤其是用于癌症诊断和治疗）。在这篇综述里，我们简要的综述了最近几年DNA和RNA核酸适配体用于肿瘤诊断和治疗的文献。 关键词：核酸适配体、肿瘤诊断、药物释放、纳米粒子、siRNA Abstract Aptamers, including DNA, RNA and peptide aptamers area group of promising recognition units that can specifically bind to target molecules and cells. Due to their excellent specificity and high affinity to targets, aptamers have attracted great attention in various fields in which selective recognition units are required. They have been used in biosensors, drug delivery, disease diagnosis and therapy (especially for cancer). In this review, we are concise and to the point to summarize recent applications of DNA and RNA aptamers in cancer treatment. Keywords: Aptamer, cancer diagnosis, drug delivery, nanoparticles, siRNA 1 引言 1990年，Ellington与Szostak[1]及Tuerk与Gold[2]筛选出了能与T4DNA聚合酶高亲和力和特异性结合的随机寡核苷酸，并命名为核酸适配体(aptamer，Apt)。随技术的发展，核酸适配体逐步扩展到非核酸结合蛋白(如蛋白激酶)、小分子有机物(如ATP、氨基酸等)、细胞膜蛋白、癌胚抗原等[3~5]。 近年来，核酸适配体受到科学家的广泛关注，由于其分子量较小、可化学合成、生物相容性好等优点，其在基础、临床、药物开发中的研究不断增多[6]。核酸适配体目前向配体在抗肿瘤药物靶向传递方面有很大的应用潜能。和抗体、多肽、小分子这些配体相比，核酸适配体可体外合成且易于修饰；同时因其带负电荷，在体循环中很少参加非特异性相互作用。而且由于它们对靶物质可高效的特异性地结合，因此其具有了较高的穿透性。 DNA核酸适配体可以在合适的条件下维持稳定且不被降解[7]。而RNA核酸适配体，易被体内的核酸酶降解，但经化学修饰后，可以延长其在体内的半衰期[8]。抗肿瘤药物一般都是在细胞内发挥作用，提高药物摄取量是其有效性的关键。纳米粒子能通过细胞内吞途径进入细胞，如果将核酸适配体连接到纳米粒子表面，药物靶向肿瘤细胞后，可介导内吞发生，有利于提高药物摄取量，这种给药方式成为目前研究的热点。本文综述了核酸适配体用于的肿瘤靶向治疗的研究进展。 1 核酸适配体与药物共价结合

核酸检验基本技术

第六章 第一节分子生物学基本知识 一、DNA禾口RNA DNA是脱氧核糖核酸的英文缩写。DNA以核苷酸排列顺序形式储存遗传信息。 DNA分子由4种核苷酸组成，由碱基互补维持DNA双螺旋结构。 在动植物、细菌和真菌中都含有DNA,但在病毒中不一定含DNA DNA为长丝状分子相互纠缠，其溶液十分黏稠。 它对紫外线有最强的吸收，通常用260nm波长测DNA溶液浓度，它在近中性环境中带负电荷，DNA变性后0D值会升高。 因DNA不溶于乙醇，常用二倍量乙醇沉淀DNA。 在变性温度时，它的黏性突然降低。淬火是为了保持DNA单恋状态。 DNA变性后溶液慢慢冷却，DNA会自动回复双螺旋结构。 RNA是核糖核酸的英文缩写，在大多数生物类型中，RNA起遗传信息传递 作用并指导合成蛋白质，但在一部分病毒中，RNA也是遗传信息的保存者。 RNA分子中除了含有核糖而不是脱氧核糖外，凡DNA中出现胸腺嘧啶的地方都代之以尿嘧啶。 二、DNA的复制和修复 细胞分裂一次，染色体DNA就合成一次。 DNA分子拆开成两条链，每一条单链按照碱基配对的原则合成另一条新的单链，成为半保留复制。 在合成DNA时限制性核酸内切酶不是合成DNA的必要条件。 DNA多聚酶只能结合在一长段DNA单链的一小段局部双链结构上，才能顺利开始DNA合成。

在DNA合成中单核苷酸分子必须顺序以共价链连接在已形成核酸链3?末端的羟基上。 在合成大声错误时，DNA多聚酶会切除错误核苷酸，在那个位置上重新加一个正确核苷酸。 在人工合成DNA时，至加一种或两种三磷酸单核苷酸，那么和成就会停止在缺失的核苷酸位置上。 在大肠菌DNA损伤修复时填补缺口最重要的酶是DNA聚合酶I,而复制最主要的DNA聚合酶是DNA聚合酶II。 该酶的核心聚合酶中，具有3?-5?外切酶活性。DNA修复过程中尿嘧啶糖基酶系统不包括S I 核酸酶。 逆转录酶的RNAaseH活性是一般DNA聚合酶所不具备的。 三、转录 在生物体内，DNA知道的RNA合成过程称为转录。 它是按照储存在DNA尚的遗传信息合成。 合成RNA时DNA双链也要解旋，解旋部位称启动子。 大肠菌的RNA聚合酶有5个亚基，其°亚基有启动子作用。 四、翻译 再合成各种不同RNA中，tRNA具有搬运氨基酸功能。 构成核糖体骨架的是rRNA而mRNA直接决定蛋白质的结构。 4 种核苷酸排列组成遗传信息,很撑蛋白质时转换成20 种氨基酸的排列顺序,遗传信息的这种转换称为翻译。 3 个核苷酸排列顺序代表一种氨基酸密码，表示蛋白质合成开始的密码有一 种，DNA3个终止密码子分别是UAA、UAG、UGA。 在细菌里，依靠rRNA和mRNA之间一段互补序列能发现蛋白质合成开始的位