胶回收试剂盒说明书(生工)

SanPrep柱式DNA胶回收试剂盒

产品编号：SK8131/SK8132

包装规格：50次/100次

试剂盒组成

组分 SK8131，50次 SK8132，100次

纯化套件（吸附柱+收集管） 50套 100套

Buffer B2 30 ml 60 ml

Wash Solution 12 ml 24 ml

Elution Buffer 5 ml 10 ml

操作手册1份1份

保存方法及注意事项

本试剂盒在室温（15~25°C）干燥保存，有效期见包装。

Buffer B2中含有刺激性的化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

产品介绍

本试剂盒适用于从TAE和TBE琼脂糖凝胶中回收100 bp~10 kb的DNA片段，回收效率可达80%。该试剂盒采用特殊的吸附膜，能够有选择性地吸附核酸分子，去除其他杂质，得到高质量的DNA回收产物。本试剂盒采用的膜结合液中不含有干扰酶活性的碘化钠，所得到的DNA可直接用于酶切、连接、测序等后续的分子生物学试验。本试剂盒具有以下特点：

1. 适用范围广，回收效率高，对于100 bp~10 kb之间的DNA片段回收效率在80%以上。

2. 操作简单快速，整个回收过程仅须15分钟左右。

3. 洗脱效率高，洗脱体积最小可低至15 μl。

快速操作流程（胶回收）

1. 准备工作。

a. 检查Wash Solution 中是否已经加入乙醇。

b. 检查Buffer B2是否出现沉淀。

c. 将水浴锅调至55°C 。 2. 从琼脂糖凝胶中割下含目标片段的胶块，称重。 3. 加入胶块重量3-6倍的Buffer B2，50°C 水浴5-10分钟溶胶。 4. （选做）对于 < 500 bp 的片段，加入1/3 Buffer B2体积的异丙醇。 5. 将溶胶液移入吸附柱中，8,000 × g 离心30秒。倒掉收集管中液体。 6. 加入500 μl Wash Solution ，9,000 × g 离心30秒，倒掉收集管中液体。 7. 重复步骤6一次。 8. 空吸附柱于9,000 × g 离心1分钟。 9. 将吸附柱放入一个干净的1.5 ml 离心管中，在吸附膜中央加入15-40 μl Elution Buffer ，室温静置1分钟后，离心1分钟。保存管中DNA 溶液。

溶胶

上柱

洗涤 洗脱

试剂准备

1. 自备材料：水浴锅、小型高速离心机（最大离心力≥ 12,000 × g）、1.5 ml离心管、无水乙醇、异丙醇等。

2. 按瓶身标签说明在Wash Solution中加入相应量的无水乙醇（乙醇终浓度为80%），混匀后在瓶身做好标记。密封于室

温保存。

3. Buffer B2在低温下可能产生沉淀，使用前请检查，如有沉淀，请于37°C溶解沉淀，待冷却至室温后使用。

4. 提前将水浴锅调至55°C备用。

标准回收步骤

1. 通过琼脂糖凝胶电泳尽可能将目的DNA片段与其它片段分开，用干净的手术刀片将含目的DNA片段的琼脂糖凝胶块切

下，放入1.5 ml离心管中，称重。

?尽可能多地去掉不含目标DNA的琼脂糖。

?每管琼脂糖凝胶块不要超过400 mg，否则导致溶胶不完全。

?切胶过程尽可能快，减少DNA在紫外线中的暴露时间以降低对DNA的损伤。

2. 根据胶块的重量和浓度，按每100 mg琼脂糖（如胶块不足100 mg则用水补充至100 mg）加300~600 μl的比例加入Buffer

B2。

?凝胶浓度≤ 1%，每100 mg凝胶加入300 μl Buffer B2；

?凝胶浓度 >1%，≤1.5%，每100 mg凝胶加入400 μl Buffer B2；

?凝胶浓度 >1.5%，≤2%，每100 mg凝胶加入500 μl Buffer B2；

?凝胶浓度 >2% ，每100 mg凝胶加入600 μl Buffer B2。

3. 将离心管置于50°C水浴5~10 min，间或混匀，直至胶块完全溶化。

?胶块完全溶化即可，过长时间的处理可能导致DNA损伤。

4. （可选步骤）当目的片段 < 500 bp时，加入所使用的Buffer B2体积1/3的异丙醇，混匀。当目的片段≥500 bp时，此

步骤可以省略，直接进行步骤5。

5. 将溶化好的溶液全部移入吸附柱，8,000 × g离心30 sec。倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。

?如果溶胶液总体积大于750 μl，则每次使用750 μl，多次上柱。

6. 向吸附柱中加入500 μl Wash Solution，9,000 × g离心30 sec。倒掉收集管中的液体，将吸附柱放入同一个收集管中。? Wash

Solution首次使用前请检查是否已加入正确量的无水乙醇。

7. 重复步骤6一次。

8. 将空吸附柱和收集管放入离心机，9,000 × g离心1 min。

?此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。

9. 在吸附膜中央加入15~40 μl Elution Buffer，室温静置1~2 min，9,000 × g离心1 min。将所得到的DNA溶液置于-20°C

保存或用于后续试验。

Buffer为2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，可以用TE或水（pH > 7.0）代替。

? Elution

?将Elution Buffer预热至60°C可以进一步提高得率。

?如果片段> 4 kb，在37~60°C温浴2分钟可以显著提高得率。

?请勿使用小于15 μl的洗脱液进行洗脱。

常见问题解答

1. DNA回收效率较低或者未回收到目的片段

a. 胶块溶解不完全。可适当延长水浴的时间，并增加颠倒混匀的频率辅助溶解。

b. 胶块体积太大，溶胶困难。可先将胶块切碎，溶胶后分多次上柱离心，回收DNA片段。

c. 漂洗液中未加入正确量的无水乙醇。

d. Agarose抑制DNA与吸附材料的结合。应尽量切除不含目的DNA片段的Agarose胶。

e. 提高Buffer B2的相对浓度，增加 DNA与吸附膜的作用时间（静置时间），在一定程度上可以提高回收率。

f. 如果纯化的片段长度大于4 kb或者目的片段含量较少，可以将洗脱液再次加入至吸附柱中进行洗脱，以提高回收效率。

g. 洗脱液加入位置不正确。洗脱液应加在硅胶膜的中心部位，以完全覆盖硅胶膜的表面，达到最大的洗脱效率。

h. 洗脱液不合适。洗脱缓冲液的pH值对洗脱效率有影响，如果使用水进行洗脱，请确保其pH值 > 7.0，pH值过低可能

导致低洗脱效率。

i. 洗脱时间过短。洗脱时放置1分钟可达到较好的洗脱效果。洗脱时将洗脱液预热至60°C后使用，有利于提高洗脱效率。

2. 回收DNA进行后续酶切反应效率低

a. 洗脱产物中含有残留的乙醇。可将离心后的吸附柱开盖室温干燥2-5分钟，有助于残留的酒精挥发完全。

b. 盐份的残留。请确保使用Wash Solution洗涤两次，每次500 μl沿管壁加入，有助于彻底去除管壁上的盐份。

c. 琼脂糖质量差。请选用高质量的琼脂糖。

3. 琼脂糖凝胶胶块不溶

a. 琼脂糖质量差。请选用高质量的琼脂糖。

b. 含目的片段的胶块在空气中放置时间过长，使胶块失水、干燥。建议切胶后立即进行胶回收，或将胶块保存在4°C或-20°C

备用。

c. 配制琼脂糖凝胶的电泳缓冲液浓度过高或陈旧。应重新配制缓冲液。

4. 洗脱液的选择

洗脱液可以根据后续实验的需要来确定。一般情况下，若需要进行测序反应，请用双蒸水洗。