细胞常见问题
1.血清中可能出现的沉淀物是什么？
基于多年的实验研究，用于细胞培养的胎牛血清以及其它血清中可能会存在以下种类的沉淀物：：（1）纤维蛋白，它是经常出现的较大的沉淀物，可以达到1-2mm，可以用肉眼观察到。因为血清都是在低温下进行收集和快速处理的，一些纤维蛋白原（可溶性的形成絮状纤维蛋白的前体）在处理过程中仍然处于溶解状态，当经过最后的过滤分装后，就会在瓶中凝结出现纤维蛋白沉淀。（2）磷酸钙，它也是常见的一种沉淀物，通常会使血清出现浑浊，并且在37℃培养的时候会增加。这种沉淀物在倒置显微镜下观察像小黑点，这些小黑点由于布朗运动看上去可以活动，因此经常被误认为是微生物污染。（3）胆固醇、脂肪酸酯以及一些蛋白质。他们也是血清中出现沉淀物的常见原因。
2.血清中的沉淀物对细胞培养有什么影响？
（1）细胞生长，我们的试验以及经验表明沉淀物不会影响细胞培养，我们的客户以及其它血清生产商也证明了这一点。（2）过滤，如果血清中出现大量的沉淀物，血清将很难过滤。一般说来，因为在血清生产时最后已经经过100nm或者40nm的过滤处理，并且经过了严格的无菌检测，因此不推荐再过滤用于细胞培养的血清。在实验室中没有必要再过滤处理血清，在大规模的细胞培养中往往将血清直接加到培养基中一起过滤。（3）污染，磷酸钙往往被误认为微生物污染而引起争端。研究者可能会在血清中观察到一些絮状的沉淀，因此就会比较警觉的去做无菌试验，将血清放在培养箱中培养几天，结果可能会观察到更多的絮状沉淀，因此就断定血清被污染了。并且当研究者将血清样品放在倒置显微镜下观察时往往可以看到一些可以运动的小黑点，因此就更加确认是血清被污染了。于是，研究者就会花费更多的时间和精力来和生产商确认，但最终确定血清没有被污染而只是沉淀。为了避免这些问题的发生，我们建议不要直接将血清放在培养箱中培养观察是否有菌，而是将血清加到琼脂板上进行培养以观察是否有细菌生长。另外，也可以进行革兰氏染色，在油镜下观察，以确认是否有污染。
3.如何避免血清中沉淀物的出现？
首先要注意正确的血清解冻步骤，而且溶解过程中一定要每隔一段时间均匀而缓慢的摇动血清。我们已经发现在下列情况下沉淀物可能增加，使用中应该尽量避免：（1）热灭活血清；（2）在37℃下培养血清；（3）反复冻融；（4）γ射线照射；（5）长期储存在2-8℃；（6）在室温下放置时间过长
4.如何去除血清中的沉淀？
如想去除这些絮状沉淀物，可以将血清分装到无菌离心管中，以400g离心，上清液即可直接加入到培养基内一起过滤。注意：不要以过滤的方式去除这些絮状沉淀物，因为这可能阻塞滤膜。
5.冷冻管应如何解冻？
取出冷冻管后，须立即放入37°C水槽中快速解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化，并注意水面不可超过冷冻管盖沿，否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时，必须注意安全，预防冷冻管之爆裂。
6.细胞冷冻管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？
除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。
7.一般客户拿到细胞后，应该注意什么？
客户收到细胞先不开盖，放在培养箱静置若干小时后（看细胞密度而定）在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议受收细胞时的培养基拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，显微镜下拍细胞100X，200X各一张），排除细胞本身污染的情况；收到细胞未开封，出现污染状况我们负责免费发送一株细胞。
收到细胞时如无异常情况，请在显微镜下观察细胞密度，如为贴壁细胞，未超过80%汇合度时，将培养瓶中培养液吸出，留下10ml培养液继续培养；超过80%汇合度时，请按细胞培养条件传代培养。如为悬浮细胞，吸出培养液、1000转/分钟离心2分钟，吸出上清，管底细胞用新鲜培养基悬浮细胞后移回培养瓶。细胞消化液建议使用PBS配制，慎用Hanks液配制。
8.怎么样确定细胞的质量保障问题，能否开证明？能开什么样的证明？如果细胞出现问题，客户投诉，要求再发一株细胞，价格怎么算？
收到细胞48小时内，细胞出现活力状态问题（细胞活力状态用台盼蓝染色法鉴定细胞活力），我们受理投诉；超过48小时不超过一星期，我们收取第一次细胞全款的5折后，重新发放细胞；若实在分不清是哪方的原因，我们收取第一次细胞全款的3折，重发细胞
9.快递细胞多久能到，是寄冻存的细胞还是复苏好的细胞？
我们采用快递发货，一般外地2--3天，寄细胞前请确认当地温度，如果气温低于4度的，则采用邮寄冻存细胞。
10.细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？
（1）客户造成细胞污染，不重发；
（2）客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；
（3）非推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；
（4）细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；
（5）细胞培养时经其它处理的，不重发；
（6）细胞收到2天内，未告知，不重发；
（7）视具体情况而定。
11.如何用台盼兰计数活细胞？
用无血清培养基把细胞悬液稀释到200～2000个/毫升，在0.1毫升的细胞悬液中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞
12.可否使用与原先培养条件不同之培养基？
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基，若骤然使用和原先提供之培养条件不同之培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。
我们的细胞株所使用的培养液都是Gibco公司干粉配制的，均不含HEPES，所以我们建议您准备同样条件的培养液用于细胞培养。Hyclone的培养液请慎用，尤其是Hyclone液体原装培养液。
13.可否使用与原先培养条件不同之血清种类？
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
14.何谓FBS,FCS,CS,HS?
FBS(fetalbovineserum)和FCS(fetalcalfserum)是相同的意思，两者都是指胎牛血清，FCS乃错误的使用字眼，请不要再使用。CS(calfserum)则是指小牛血清。HS(horseserum)则是指马血清。
15.L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中不稳定吗？
L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解，但是确切的降解率一直没有最终定论。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性
16.培养细胞时应使用5%或10%CO2？或根本没有影响？
一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作为pH的缓冲系统，而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3含量为每公升3.7g时，细胞培养时应使用10%CO2；当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时，则应使用5CO2培养细胞。
17.何时须更换培养基？
视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上之更换时间，按时更换培养基即可。
18.培养基中是否须添加抗生素？
除于特殊筛选系统中外，一般正常培养状态下，培养基中不应添加任何抗生素。
19.附着性细胞继代时所使用之trypsin-EDTA浓度？应如何处理？
一般使用之trypsin-EDTA浓度为0.05%trypsin-0.53mMEDTA.4Na。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于–20°C，避免反复冷冻解冻造成trypsin之活性降低，并可减少污染之机会。
20.悬浮性细胞应如何继代处理？
一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。
21.欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？
欲回收动物细胞，其离心速率一般为300xg(约1000rpm)，5-10分钟，过高之转速，将造成细胞死亡。
22.细胞之接种密度为何？
依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细胞无法生长之一重要原因。
23.细胞冷冻培养基之成份为何？
动物细胞冷冻保存时最常使用的冷冻培养基是含5-10%DMSO(dimethylsulfoxide)和90-95%原来细胞生长
用之新鲜培养基均匀混合之。注意：由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。
24.DMSO之等级和无菌过滤之方式为何？
冷冻保存使用之DMSO等级，必须为Tissueculturegrade之DMSO(如SigmaD2650)，其本身即为无菌状况，第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4°C，避免反复冷冻解冻造成DMSO之裂解而释出有害物质，并可减少污染之机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO之Nylon材质滤膜。
25.冷冻保存细胞之方法？
冷冻保存方法一:冷冻管置于4°C30-0分钟→(-20°C30分钟*)→-80°C16~18小时(或隔夜)→液氮槽vaporphase长期储存。冷冻保存方法二:冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3°C至–80°C以下，再放入液氮槽vaporphase长期储存。*-20°C不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80°C冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
26.细胞欲冷冻保存时，细胞冷冻管内应有多少细胞浓度？
冷冻管内细胞数目一般为1x106cells/mlvial，融合瘤细胞则以5x106cells/mlvial为宜。
27.应如何避免细胞污染？
细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染原因为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染之血清和污染之细胞等。严格之无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好之细胞来源和培养基配制是减低污染之最好方法。
28.如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？
直接灭菌后丢弃之。
29.支原体(mycoplasma)污染的细胞，是否能以肉眼观察出异状？
不能。除极有经验之专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨之。
30.支原体污染会对细胞培养有何影响？
支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数，代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。
31.侦测出细胞株有支原体污染时，该如何处理？
直接灭菌后丢弃，以避免污染其它细胞株。
32.CO2培养箱之水盘如何保持清洁？
定期(至少每两周一次)以无菌蒸馏水或无菌去离子水更换之。
33.为何培养基保存于4°C冰箱中，颜色会偏暗红色，且pH值会越来越偏碱性？
培养基保存于4°C冰箱中，培养基内之CO2会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为phenolred)的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱之结果，将造成细胞生长停滞或死亡。若培养基偏碱时，可以通入无菌过滤之CO2，以调整pH值。
34.各种细胞培养用的dish，flask是否均相同？
不同厂牌的dish或flask，其所coating的polymer不同，制造程序亦不同，虽对大部分细胞没有太大之影响，惟少数细胞则可能因使用厂牌不同之dish或flask而有显著之生长差异。
35.购买之细胞冷冻管经解冻后，为何会发生细胞数目太少之情形？
研究人员在冷冻细胞之培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤，以及细胞流失。建,议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基即可。
36.购买之细胞死亡或细胞存活率不佳可能原因？
研究人员在细胞培养时出现存活率不佳，常见原因可归纳为：培养基使用错误或培养基品质不佳。血清使用错误或血清的品质不佳。解冻过程错误。冷冻细胞解冻后，加以洗涤细胞和离心。悬浮细胞误认为死细胞。培养温度使用错误。细胞置于–80°C太久。
37.收到之冷冻管瓶身破裂，瓶盖有裂纹，或瓶盖脱落之原因？
冷冻管瓶盖裂纹，或瓶身破裂，可能是因为操作者夹取冷冻管时用力不当，造成冷冻管裂损，建议使用止血钳小心夹取。另冷冻管瓶盖松动或松脱，乃因热胀冷缩之物理现象，冷冻管有可能因此而造成细胞污染，故冷冻管于放入和取出液氮桶时，均应立刻将冷冻管再一次扭紧。
38.Hoechst33258与Hoechst33342都能染核，二者区别是什么？
Hoechst33342，也称bisBenzimide H33342或HOE33342。分子式为C27H28N6O·3HCl·3H2O，分子量为615.99。Hoechst33258，也称bisBenzimide H33258或HOE33258。分子式为C25H24N6O·3HCl，分子量为533.88。两种染料都是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料，对细胞的毒性较低。但是hoechst33342对细胞的毒性作用更小一些，33258穿透能力较33342弱，染活细胞时容易被"泵出"，也就是拒染。所以一般来说hoechst33258用于细胞固定后再染色，而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色。
肿瘤细胞培养方法和培养基
肝癌细胞培养 一、培养基 1、RPMI-1640+10%胎牛血清培养基 2、DMEM+15%胎牛血清培养基 成分表
二、实验前准备工作: 操作者的皮肤、培养瓶的盖和外壁常用酒精消毒。用紫外线消毒实验室空气、工作台面和一些不能使用其他方法消毒的培养器皿。进无菌室前或做完实验后，均应开灯照射30min进行消毒。紫外线照射60min可以消灭空气中大部分细菌。 1、玻璃器皿的清洗灭菌（5％盐酸溶液、重鉻酸钾120ml、硫酸200ml、蒸馏水200ml）：（1）浸泡:新使用或重复使用的玻璃器皿须经5％盐酸溶液或自来水浸泡过夜或煮沸30min，水洗。以去除新购进玻璃器皿所带有灰尘、铅、砷等物质，并消除其弱碱性。 （2）刷洗:浸泡后用软毛刷和优质的洗洁精进行刷洗。刷洗后经行烘干。 （3）酸浸:刷洗后的玻璃制品酸浸前须适当晾干或烘干，以免造成酸浸液稀释，影响效果。将玻璃制品完全浸泡入清洁液中24h。清洁液具有极强酸蚀作用，操作过程需戴防护用具。（4）冲洗、烘干备用:浸酸后的玻璃器皿先用自来水充分冲洗，吸管需冲洗10min，器皿需每瓶灌满自来水、倒掉反复10次以上，不留任何酸浸液残迹，然后用蒸馏水漂洗2～3次，将清洗好的玻璃器皿放入烘干箱中，烘干后的玻璃器皿要求干净透明，无油烟，不能残留任何有害物质及化学药品等。 （5）包装灭菌:器材经清洗烤干或晾干后，先应严格包装，然后再行消毒灭菌处理，以防止消毒灭菌后再次遭受污染。包装材料常用包装纸、牛皮纸、硫酸纸、棉布、铝饭盒、玻璃或金属制吸管筒、纸绳等。
2、橡胶制品清洗消毒： 0.5mol/L NaOH煮沸15分钟，流水冲洗，0.5mol/L HCl煮沸15分钟，流水冲洗，自来水煮沸2次，蒸馏水煮沸20分钟，50℃烤干备用 3、塑料制品的清洗消毒（瓶盖、离心管）： 使用器皿后立即用清水清洗，浸于自来水过夜，用纱布或棉签和50℃清洗液刷洗，流水冲洗，晾干，浸于清洁液15分钟，流水冲洗（15－20遍）,蒸馏水浸洗三次，双蒸水泡24小时，晾干备用。 三、细胞复苏： 冻存细胞保存管保存在液氮中（-196℃），取出保存管后必须快速冷冻，以避免冰晶重新结晶而对细胞造成伤害，致使细胞死亡。在冻存细胞的保存管中含有对细胞有毒害的成分DMSO,故在解冻应马上将其去除。在冷冻活化前应在无菌台上将细胞培养液配好，然后将保存管从液氮中取出，放于37℃的温水中快速使细胞解冻。解冻后悬液快速移入培养液中混匀，离心去掉上清液，再加入细胞培养液。 实验人员穿上无菌实验室操作服用酒精喷于手上消毒，然后就位用酒精棉球擦拭实验台（1）取一15ml离心管用滴管在其内滴加5--9ml培养液（取8ml）。 （2）从液氮罐中取出冻存管，并迅速放入37℃水浴，不时摇动，使其急速融化，30～60s 内完成。 （3）冻存管用70％酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液转移入上述离心管中（用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来）。 （4）低速离心(1000r／min) 5min，去上清后再用8ml培养液再清洗离心一次。 （5）离心后倒掉上清液，在离心管中滴加3ml培养液（RPMI-1640），混匀（可用滴管轻柔吹打）。 （6）将离心管中的混合液转移到培养瓶中，并在培养瓶中滴加15滴10%小牛血清，盖上瓶盖，标好细胞种类和日期、培养人姓名等，将培养瓶平放，置于37°C培养箱中培养。2-3天换一次培养基。 四、细胞传代： 当观察到培养瓶中细胞铺满度为90%时（细胞生长处于对数期时），解冻复活成功后的细胞要进行分离培养，否则细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞生长。细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶中培养的过程称之为传代培养。传代细胞细胞株的最大利处在于提供了大量持久的实验材料，便于实验。 （1）试验台的消毒工作准备好，弃去旧培养液，用PBS液（不含钙，镁离子）洗1-2次，以免剩余培养液影响胰蛋白酶活性。（细胞贴壁生长）。 （2）向瓶内加入1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mEDTA），置于37℃孵箱或室温（25℃温度）下进行消化，1--3min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行观察，当发现胞质回缩、细胞间隙增大后，应立即中止消化（将培养瓶翻转过来，以保证细胞没有脱壁）。 备注：若细胞没有脱壁，生长良好，则直接倒掉消化液，加培养液8ml，离心收集细胞；若发现很多细胞已解离已脱壁（即解离过度），则直接加培养液进行离心收集细胞。 （4）倒出消化液，向瓶内用滴管加入培养液少量（约2ml），轻轻转动培养瓶，把残留胰蛋白液消化液冲掉，然后再加3ml培养液+15滴小牛血清。 （5）使用吸管，吸取瓶内培养液，按顺序反复轻轻吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损伤细胞。 （6）将准备好的细胞悬液转入离心管中，离心(1000r／min) 5min。 （7）将离心后离心管中液体倒掉，在离心管中加入3ml培养液，并反复吹打细胞，制成细胞悬液。
阅读的常见问题
阅读的常见问题 1、文章开头一段的某一句话在文章中的作用，中间某段或句的作用，最后一段某句的作用。 对于这种题型我们可以从两个方面来回答：对于第一段的问题，从结构上来说，是落笔 点题，点明文章的中心，开门见山，总领全文，或起到引起下文 ．．．．的作用；从内容上来说，是为下文作铺垫和衬托，为后面某某内容的描写打下伏笔。中间某段的问题，在结构上是起到 承上启下、过渡 ．．．．．．，让人回味无穷，．．．．．．．的作用。最后一段或某句的作用是总结全文 ．．．．，点明文章主旨 并与题目相照应。 2、文章表达了作者什么样的思想感情？ 这需要根据文章的具体内容来回答，常见的有歌颂、赞美、热爱、喜爱、感动、高兴、渴望、震撼、眷念、惆怅、淡淡的忧愁、惋惜、思念（怀念）故乡和亲人、或者是厌倦、憎恶、痛苦、惭愧、内疚、痛恨、伤心、悲痛、遗憾等。一般作者的情感可以从文章的字里行间可以看出来的，有的也许写得比较含蓄，有的是直抒胸臆。 3、概括文章主旨。 对于这种题目，在回答之前一定要把全文仔细看几遍，然后可以用这样的关键词来进行回答：“通过…… 故事，歌颂（赞美）了……表达了作者……的思想感情，揭示了……的深刻道理。”我们也可以从文中去找，在文章的每一段特别是第一段或最后一段的第一句或最后一句，文章中富有哲理性的句子往往是作者所要表达的主题。 （看开头段和结尾段，或开头结尾相结合） 4、文中划线句子运用了什么表达方式？有什么作用？ 看到这种类型的题目，我们首先要看一看这一句用了那种表达方式，叙述、描写、说明、议论、抒情，特别是描写中又分为人物描写、景物描写和带综合性的场面描写。而人物描 写还可细分为语言描写、动作描写、心理描写、肖像描写和细节描写，描写的作用是使文章 ．．． 生动、形象、感人 ．．．．．．．。如果文中有一些．．．．．．．．。抒情的运用，能增强文章的感染力，突出文章的中心 神话故事、民间传说以及自然界当中的神奇景象的描述，它的作用是增加了所写内容的神秘色彩,引起读者的兴趣。 5、文中某句运用了什么修辞手法？有什么作用？
原代细胞培养和传代培养的方法及其注意事项
初代培养 原理 将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。 仪器、材料及试剂 仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃） 材料：动物组织块 试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒 初代消化培养法 1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2. 布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 4. 剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。 5. 消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。 6. 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速 （500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。 7. 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。 8. 培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。 初代组织块培养法 1. 剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液，用眼科剪反复剪切1mm3块为止。 2. 摆布：用弯头吸管吸取若干小块，置于培养瓶中，用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部，小块相互距离以0.5cm为宜，每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。 3. 轻轻翻转培养瓶，另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5℃温箱培养2小时左右（勿超过4小时），使小块微干涸。 4. 培养：从微箱中取出培养瓶，开塞，46度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。
肿瘤细胞培养(完整版)
第6章肿瘤细胞的培养 肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药的敏感性、肿瘤细胞和癌分子生物学特性的重要手段。癌细胞是比较容易培养的细胞，当前所建立的细胞系中癌细胞是最多的。应用体外细胞培养技术进行肿瘤研究具有许多优点： (1)可免受机体内环境因素的影响，避免了个体差异性，便于探索各种物理、化和生物 因素对肿瘤细胞生命活动的影响。 (2)既便于从细胞水平上研究肿瘤细胞的结构与功能，又便于从基因及分子水平上研究 癌变的发生机理； (3)可长期传代、保存，便于观察肿瘤细胞生物学特性和遗传行为的改变。 (4)可用于快速筛选抗癌药物和研究耐药机理。 (5)研究周期短，比较经济。 但是它也有缺点，如长期培养可使细胞生物学特性发生改变；体外实验所得的结果不能完全代表体内的情况，应与体内试验结合研究更为合理等。 一、肿瘤细胞培养的生物学特性 1、形态和性状 形态不规则，细胞界限清晰，伸展较差，核膜、核仁轮廓明显，核仁多、核浆丰富。折光性强，电镜观察细胞表面微绒毛多而细密，与肿瘤细胞具不定向运动和铺着不依赖性有关。 2、生物特性 癌细胞在无血清或低血清(2%～5%)时仍能生长，营养要求不高，因能自分泌促增殖因子，在软琼脂培养时单个细胞能形成集落，生长方向性消失，再加上失去了接触抑制，癌细胞数量增多时可呈多层重叠生长，细胞饱和密度大，有丰富的三极有丝分裂，分裂指数高，细胞倍增周期短。 3、永生性 永生性也称不死性，在体外培养中表现为可无限制传代而不凋亡(Apoptosis)，体外培养的肿瘤细胞系(株)都表现有这种特性。但体外培养的永生性和体内肿瘤的恶性(包括侵润性)是两种性状，受不同基因调控的，因恶性肿瘤多数在体外培养时并不那么容易获得成功，生长增殖能力并不旺盛，有时只能传若干代，说明体外培养的永生性可在体外培养后获得的。另外，体外培养的许多细胞系，如NIH3T3、Rat-1 10T1/2等均具有永生性而无恶性。但两者有相关性，永生性可能是细胞恶性变的某一阶段。 4、侵润性 侵润性是肿瘤细胞扩张性增殖行为，体外培养的肿瘤细胞仍保持有这种特性，当与正常组织混合培养时，能侵润入其他正常组织中，甚至能穿透人工隔膜。 5、异质性 所有肿瘤细胞都是由增殖能力、遗传性、起源、周期状态等性状不同的细胞组成，属于异质性，其中有的衰老、退化，有的处于周期阻滞状态，只有那些处于活跃增殖的肿瘤干细胞才是支持肿瘤生长的成分，肿瘤干细胞易于生长增殖，分离培养干细胞的方法称干细胞培养(有干细胞系和数个亚系组成)。
临床研究中的常见问题
课题负责人主要临床研究者地职责 准备研究方案 确定和需要记录问题地设计 提出统计分析要求 定期访问个参加试验地分中心，监督研究进展 对研究过程中遇到地问题作出决断 对治疗过程中出现地严重不良反应作出评估和处理 负责撰写研究总结 统计专业人员地职责 完成研究方案中地统计设计：试验地类型；对象例数计算；随机化方法 参与准备研究方案 负责参与设计和问题表、准备填写说明，参与讨论判断数据有效性地说明和定义撰写统计分析计划 写出统计分析报告 参与撰写临床总结和论文（数据部分为主） 三、程序分析员地职责 参与地设计 设计数据管理计算机系统 编制以及与数据管理、数据检查有关地计算机程序 根据统计人员要求编制数据分析地计算机程序 试验结束后将上述管理系统整理归档 四、数据管理助理地职责 负责与各分中心地联系 参与设计 数据地收集和目视检查 设计并填写对象登记表 准备数据批供录入人员输入计算机 准备研究进展报告 数据检查和清理 为研究人员会议准备材料 五、数据录码员地职责 将上地数据输入计算机 核对数据输入无误：第二次输入 及时将输入过程中发现地问题通报数据管理助理和程序分析员 六、临床试验中地质量管理环节 中央实验室 数据地获取和报告 [远程]数据输入() 病例记录表系统 临床数据管理 不良事件报告 临床供给系统 统计分析系统 七、病例记录表（）地组成
封页 主要研究人员对数据认可签字表 筛选表 接纳表 随访表：每次随访一次 伴随用药记录 不良事件记录表 终止表 研究后表（安全性评价） 临床研究中地常见问题 临床研究资料保存不完整 原始资料不原始或没有原始数据（如何保存） 没有监查和稽查记录 不能严格执行，或者没有 不能严格执行知情同意 药品管理不规范 不采用中心实验室（中心实验室质控达不到要求） 资料保存（一） 每一项临床试验都要有完整地记录，并按一定顺序排列.其中包括： 新药临床研究批件； 药检验报告（试验药物和对照药物）；注意：临床研究用药应是在符合要求地条件下生产，应由申办方提供有关证明资料个人收集整理，勿做商业用途 临床研究合同 伦理批件 资料保存（二） 研究者手册 研究者分工表 试验方案（应有研究者和申办方签字确认，版本号）； 受试者知情同意书（一份应交给受试者自己保留）；注意：在今后地临床研究中，最好建立一有受试者签名地领走知情同意书副本地记录.资料个人收集整理，勿做商业用途 病例观察表（包括有不良事件记录、合用药记录等）； 总结报告 原始数据 没有原始数据 原始数据丢失 修改在原始数据上找不到依据 接受检查时“补充”原始数据 监查和稽查 无稽查 有监查无记录 有记录不保存 从别处抄来地 对没有系统培训
回转窑运行常见问题及解决方案
回转窑运行常见问题及解决方案 回转窑的处理能力异常丰富，这一特点已将其推向越来越多的应用领域。虽然回转窑是可靠的机器，但它们可能会遇到问题，尤其是在设计，监控或维护不当的情况下。 知道为什么会发生此类问题，以及如何识别和解决这些问题对于最大限度地提高回转窑的使用寿命至关重要。尽管问题通常是特定于手头操作的独特参数，但这里重点介绍了回转窑操作员面临的一些最常见挑战，以及其原因，如何发现它们以及解决问题的潜在途径。这些问题中的许多问题也可以通过过程或设备审核来确定。 环（渣）形成 窑炉中的炉渣或坝环形成是指在窑炉内部周围形成的堆积物，其作用是防止材料通过或受到显着抑制。 在窑炉中形成物料环具有多种含义，包括影响停留时间和引起产品质量问题，在进料端密封件中积聚物料，降低产量以及促进窑炉中的物料备份等问题。它还会大大降低吞吐量。此外，如果环（或环的一部分）断裂，则有可能完全堵塞窑炉出口，从而导致更严重的问题。 形成环经常需要经常停机以清除材料，废品以及对后处理的更高需求。简而言之，它降低了整个过程的效率。 是什么原因导致窑炉成环？ 成环非常普遍，大约占85％的商业窑炉中。通常是结渣温度变化的结果。 结渣温度是材料融合在一起并使其固化的温度。如果允许进料成分发生变化以降低排渣温度，则会形成环。 同样，如果窑温度没有正确测量和控制，则温度可能会超过结渣的温度，从而导致成环。 成环的迹象 窑中形成环的潜在迹象包括从窑中排出的物料显着减少或完全停止。 您如何解决成环问题？
炉渣环可以手动移除，也可以通过提高系统的工作温度使其溶解。如果采用温度调节方法，一旦环破裂，温度可再次降低至可能形成炉渣的温度以下。 为了防止将来产生额外的结渣，应检查燃烧室热电偶和监控系统，以确保它们正常运行以进行足够的温度监控。进料的规格也应与原始工艺参数进行比较，以确保不对原料的变化负责。 在某些情况下，也可以通过提高窑的转速来消除炉渣的形成，从而使物料更快地通过窑。 黏着 由于多种原因，物料在窑中的粘连是一个问题。与成环一样，它限制了物料通过窑的流动，最终破坏了装载量和生产能力。它也有可能破裂并阻塞窑出料，并对耐火材料造成损害。 在间接窑炉中，当物料粘附到窑炉内部时，会形成热量必须通过的附加屏障，从而进一步降低了传热效率。 是什么原因导致窑炉卡死？ 不幸的是，粘连可能是由几乎无数个问题引起的，因此很难找出问题的根源。它通常特定于材料独特的化学成分和物理特性与热量相互作用的方式。当物料通过窑炉引起的化学或物理变化时，物料也可能变得更粘。 由于这些原因，回转窑测试是工艺开发的关键部分。测试有助于在生产之前识别此类问题，从而使窑炉能够针对材料特性进行设计。 与成环一样，粘连问题通常通过减少从窑中出来的物料来表明。 您如何解决卡在窑中的问题？ 虽然粘贴是有问题的，但是有几种方法可以解决。最常见的方法包括： 提高窑速 根据物料的特性，提高窑速会降低物料的粘附机会，因为它与壳体的接触时间更少。窑温升高 某些材料可能仅在给定的温度和湿度范围内粘住。这样，通过提高窑炉温度，材料的粘性可能降低，或者水分含量降低到足以移出其可能粘附的范围之外。
肿瘤干细胞培养技术
肿瘤干细胞培养技术 随着干细胞生物学以及肿瘤学研究的不断深入，肿瘤干细胞已成为当前肿瘤研究的热点。肿瘤干细胞的体外培养在肿瘤干细胞研究领域具有不可替代的重要地位，通过分离、纯化及培养肿瘤干细胞可以对其生物学特性如异质性、肿瘤的演化、转移和抗药性等进行研究，为肿瘤的早期诊断与治疗提供了新的思路和策略。 肿瘤干细胞的体外培养多采用无血清培养基(serum free medium, SFM)，根据不同的细胞类型加入适当的细胞因子联合培养以防止其分化。肿瘤细胞系或者是临床肿瘤组织联合采用机械和胶原酶消化肿瘤组织得到单细胞悬液，经过流式细胞仪或者免疫磁珠分选的方法得到肿瘤干细胞使用无血清培养基在37℃，5％CO2饱和湿度的条件下进行体外培养，但值得注意的是临床肿瘤组织的获取应该越新鲜越好，最好是在外科手术后1小时内进行处理否则将影响肿瘤干细胞细胞的活性，不利于体外培养。 无血清培养基有很多种，针对不同的细胞类型有专门的无血清营养液出售。无血清培养基具有以下的优点：各批产品之间成分相对明确、质量相对一致；便于控制培养的生理环境；特殊细胞类型的优化配方有利于提高细胞的稳定性，使不同类型的细胞能在最有利于各自生长的环境中持续传代培养；依据不同类型的细胞、甚至不同的细胞系(株)都可能有各自的无血清培养基。总的来说可以分为基础营养基及附加成分两大部分[1]。基础培养基一般采用人工合成的培养基主要有DMEM、DMEM/F12、UltraCULTURETM、神经干细胞专用无血清培养基、黑色素瘤专用培养基等其中以DMEM/F12(1:1，Invitrogen)最为常用。附加成分是指在基础培养基中加入各种不同细胞生长所需的营养成分，包括①营养因子：胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸钠、牛血清白蛋白、B27、L－谷氨酰胺；②细胞因子：白血病抑制因子、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、神经生长因子、血小板衍化生长因子等。使用无血清培养基培养的细胞经胰酶消化传代后不使用血清终止胰酶的作用，可使用0.1％－0.5%大豆胰酶抑制剂(soybean trypsin inhibitor)。 一、肿瘤干细胞培养中几种常见的细胞因子 (一)白血病抑制因子LIF(leukemin inhibitory factor,LIF) 是白介素6(IL-6)细胞因子家族中的一员，是典型的多功能生长因子，具有多种生物学功能：对细胞生长、增殖与分化有着广泛的作用，抑制分化促进干细胞增殖。胚胎干细胞的体外培养需要添加LIF以抑制其分化，维持其多能性。LIF可抑制成纤维细胞生长因子(Fibroblast Growth Factor ,FGF)、β转移生长因子(β-transforming Growth
关键词标引常见问题探讨
关键词标引常见问题探讨 通过对关键词标引现状及其常见问题的分析，提出优化词表，重视关键词检索、加强人员培训和制定关键词标引的质控体系。以提高关键词标引质量。 关键词标引已成为现代文献数据加工的重要环节，其原因在于关键词在统一同类文献、涵盖不同专业文献，有利于文献查找方面发挥着不可替代的作用。正因为如此，如何改进和提高关键词标引的质量，吸引了大量研究人员进行探讨并深入挖掘关键词在文献数据库构建中的巨大潜力。本文对关键词标引的现状、常见问题进行分析，并对如何提高关键词标引的质量提出一些建议，供研究者参考。 关键词标引的现状 关键词标引是构建文献数据库的基础。关键词标引的好坏，直接影响文献数据库的质量。正确理解关键词的概念以及关键词标引的要求、作用和意义，对于把握关键词标引有着至关重要的作用。
1、关键词的概念 《科学技术报告，学位论文和学术论文的编写格式》(GB7713-87)对关键词的定义如下：“关键词是为了文献标引工作从报告、论文中选取出来用以表示全文主题内容信息款目的单词或术语。”学术界对关键词的定义更为具体，如有的学者认为“所谓关键词，是指那些出现在文献的标题(篇名、章节名)、摘要和正文中，对表征文献主题内容具有实质意义的词语，亦即对揭示和描述主题内容来说是重要的、带有关键性的、可作为检索入口的词或短语，是一种近似于自由词的自然语言。”(《医学论文关键词的标引》，陈晶等著)但是，我国尚无国家标准直接将关键词定性为“近似于自由词的自然语言”，为非受控词汇。在实际应用中，关键词标引时受较少控制，可以比较自由地标引，但也不是绝对的自由，其遵循的原则应选择表述文献主题的具有实质意义的词或短语。由于关键词标引是依据被标引文献原文选取关键词，选取的关键词具有一定的专指性，具备及时反映新学科、新理论、新技术、新材料等概念的优点，但不足之处在于查全率不高。 2、关键词标引的要求、作用及意义 一般情况下，标引的关键词必须是表达某个主题概念的具有专业用语性质的词或词组。这个词或词组应该是名词或
现代文阅读常见的八个逻辑问题
现代文阅读常见的逻辑问题”和“实用类文本阅读的备考复习”“现代文阅读”常见的八个逻辑问题 逻辑是人的一种抽象思维，概念、判断、推理是形式逻辑的三大基本要素。概念的两个方面是外延和内涵，外延是指概念包含事物的范围大小，内涵是指概念的含义、性质；判断从质上分为肯定判断和否定判断，从量上分为全称判断、特称判断和单称判断；推理是思维的最高形式。概念构成判断，判断构成推理，从总体上说人的思维就是由这三大要素决定的。当然，思维过程中还同时要求满足同一律、矛盾律、排中律这三条规律（充足理由律）。可以说形式逻辑是一切学科的基础。 一个人要会正确地思维，第一步就是要弄清脑子里的各种概念。因为逻辑思维是理性思维的基本形式，概念清晰是逻辑推理的基本要素，概念模糊就不可能产生抽象的逻辑思维。你要正确思考，就必须遵循一套规则，这就是形式逻辑。你要正确表达，也必须遵循一套规则，这就是语法。 “论说类文本”选的都是社科论文，论文就是科学研究的成果，是作者逻辑思维的体现。我们常说某某文章逻辑性强，就是说作者善于推理，能够得出正确的结论。说某某文章缺乏逻辑，就是说他的推理不正确，杂乱无章。语文学习似乎给人一种错觉，偏重感性思维，形象思维，所以逻辑思维能力的训练总是受到冷落，问题关键在于我们最缺少的恰恰是逻辑思维，而不是形象思维之类。我们老师、学生思考问题常常是一种感觉式的思维方法，
事实上，在语文教学和复习备考中老师和学生出现概念模糊、不证而论、偷换概念、转移命题、类比失当、强加因果等等逻辑错误的情况很普遍。而且，高考命题恰恰是从逻辑的角度入手的，要求考生解决的正是逻辑方面的错误。所以，我也就从这方面谈谈自己的一些看法和做法。 一、转移命题 《诗经》原来是诗，不是“经”，这是咱们今天很明确的。但在封建社会里，诗三百篇却被尊为“经”，统治阶级拿它来做教化的工具。 从西周初期到春秋中叶，诗三百篇是一种配乐演唱的乐歌。这些乐歌一方面用于祭祀、宴会和各种典礼，当作仪式的一部分或娱乐宾主的节目。另一方面则用于政治、外交及其他社会生活，当作表情达意的工具，其作用和平常的语言差不多，当然它更加曲折动人。例如…… （2011课标卷“现代文阅读”第1题） 1.下列关于原文第一、二两段的表述，不正确的一项是（A） A.《诗经》中的作品原来是普通的诗歌，并没有深刻的含意，但是封建统治阶级却把它尊为经典，用它来做封建教化的工具。 【解析】原文“其作用和平常的语言差不多，当然它更加曲折动人”，“差不多”说明还是有区别，只是区别细微而已。其命题形式为：《诗经》绝大部分篇目的作用和平常的语言差不
细胞培养常见问题的原因及其解决的办法
细胞培养常见问题的原因及其解决的办法： 问题1培养液pH值变化太快 可能原因 (1)CO2张力不对 (2)培养瓶盖拧得太紧 (3)NaHCO3缓冲系统缓冲力不足 (4)培养液中盐浓度不正确 (5)细菌、酵母或真菌污染 建议解决方法 (1)按培养液中NaHCO3浓度增加或减少培养箱内CO2浓度，2.0g/L到3.7g/L浓度NaHCO3对应CO2浓度为5%到10%。 (2)松开瓶盖1/4圈。 (3)改用不依赖CO2培养液。加HEPES缓冲液至10到25mM终浓度。 (4)在CO2培养环境中改用基于Earle′s盐配制的培养液，在大气培养环境中培养改用Hanks盐配制的培养液。 (5)丢弃培养物，或用抗生素除菌。 问题2：培养液出现沉淀，但pH值不变 可能原因 (1)洗涤剂清洗后残留有磷酸盐，将培养基成分沉淀下来 (2)冰冻保存培养液 建议解决方法 (1)用去离子水反复冲洗玻璃器皿，然后灭菌。 (2)将培养液加热到37℃，摇动使其溶解如沉淀仍然存在，丢弃培养液。 问题3：培养液出现沉淀，同时pH发生变化 可能原因 细菌或真菌污染 建议解决方法
丢弃培养物，或用抗生素除菌。 问题4：培养细胞不贴壁 可能原因 (1)胰蛋白酶消化过度 (2)支原体污染 (3)培养瓶瓶底不干净 (4)培养液pH值过碱(NaHCO3分解) (5)消化液或培养液配制错误、过期储存、储存不 细胞老化(如传代前细胞已汇合导致失去贴附性) (7)接种细胞起始浓度太低或太高 建议解决方法 (1)缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。 (2)分离培养物，检测支原体。清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。 (3)注意刷洗，或换用一次性塑料培养瓶 (4)使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2(将培养液敞口放入培养箱也可) (5)重新配置消化液或培养液 启用新的保种细胞 (7)调节最佳接种细胞浓度 问题5：悬浮细胞成簇 可能原因 (1)培养液中含钙、镁离子 (2)支原体污染 (3)蛋白酶过度消化使得细胞裂解释 (4)DNA污染 建议解决方法 (1)用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻轻吹吸细胞获得单细胞悬液。 (2)分离培养物，检测支原体。如发现支原体污染，丢弃培养物。
锅炉运行常见问题解答
锅炉运行常见问题解答问：燃烧不稳时投油，负压变正即退出油枪，能避免大正压冲击吗？为什么？ 答：不能；因为炉膛负压变正即说明部分熄灭的煤粉被点燃，点燃 部分熄灭煤粉产生的冲击力不会因停运油枪而降低，退油枪的后果 是有可能再次发生灭火。问：投汽压自动压力高，给粉机低转速停留，氧量高应避免灭火发生？ 答：应先投油稳燃，然后解除汽压自动，根据情况提高运行给粉机 转速并停运1～2台给粉机，必要时减少送风量，使氧量和汽压迅速 恢复正常。最下排给粉机转速≮800转/分。问：运行中短时处理给 煤机故障，制粉系统应采取哪些防止锅炉灭火的措施？ 答：关小排粉机入口档板，控制排粉机电流低于运行电流1~1。5A，全开在循环门，控制磨出口温度在80度左右运行，如燃烧难以稳定 时可请示司炉停止该制粉系统运行。问：灭火后投投油点火前为何 应减少送风，关闭小二次风？ 答：灭火后炉膛温度低，过大的下二次风和过大的送风将使油枪的 根部风过大，难以点燃油嘴，或使油的着火点后移，吹灭着火的油嘴，影响重新点火恢复。 问：锅炉灭火后，何时通知减负荷？减负荷幅度和速度应如何控 制？
答：灭火后当汽压开始下降时应立即通知减负荷。减负荷的速度和 幅度不应使锅炉超压开排汽，应根据汽压和汽温下降幅度和灭火后 点火恢复时间决定减负荷值。根据经验，一般220T/H炉正常灭火减 负荷至20MW，400T/H炉正常灭火减负荷至40MW；问：低负荷运行时为何应在不影响安全的前提下维持稍低的氧量运行？ 答：低负荷运行时炉膛温度相对较低，煤粉气流的着火困难，燃烧 稳定性相对较差，维持高氧量运行会进一步降低炉膛温度，降低炉 膛内煤粉燃烧浓度，燃烧的抗干扰能力降低，导致灭火的发生。 问：锅炉为何要设置防爆门？ 答：发生炉膛爆炸时自动开启泄压，减轻爆炸对锅炉的冲击破坏力，避免炉膛水冷壁，炉墙和烟道的损坏。 问：运行中为何要开启粉仓吸潮管？ 答：排除粉仓和输粉机内的潮气，防止粉仓内的煤粉受潮结块，影 响其流动性，并因潮气的排出使粉仓内的温度维持在合适值，防止 煤粉的自燃爆炸。 问：停止进水时为何要开启省煤器再循环门？ 答：锅炉停止进水时省煤器如仍受热，水通过循环管在省煤器，汽 鼓之间形成循环，以保护省煤器的安全； 问：过热器热水浸泡反冲洗的作用？
研发人员常见问题之剖析与探讨
研发人员常见问题之剖析与探讨 吴英秦 清云科技大学电机系 摘要 本文是作者在2006年3月份在外公开演讲时与学员互动后的心得感想并针对学员的问题作进一步的剖析与探讨。文中有学员问题的汇整、平衡计分卡的四大构面、工程师成长的选择、产品开发流程的掌握、时间管理的第二象限典范、创新之路及系统思考等的介绍。 关键词：研发管理、创新、创新管理、时间管理、第二象限典范、系统思考、IPO模式 前言 2006年3月初，我应邀在青岛及台北两地讲授有关研发管理与创新的课题[1][2][3]。课堂里与学员的互动中，颇有一些感想。当时有许多学员提出一些问题，但限于时间无法给予立即而完整的回答。因此想藉着撰写本文时，针对某些问题作进一步的分析与探讨。有些问题牵涉的范围太大，又限于篇幅，将另外撰文介绍我的看法。 为了增加读者的真实感，我把学员的问题忠实的呈现，从问题中，读者可以发现学员的职务、经验及目前所负的责任均有所不同，但是希望解决问题及提升公司的竞争力的用心却是一致的。事实上，我们从问题的整理当中，发觉学员们关注的主题围绕在企业转型与创新、个人生涯的发展与训练、研发管理技巧、研发绩效的考核与激励、台湾企业的作法及与研发主管的沟通方式及其领导的风格等。坦白的说，光看题目已经就可以体会或领略到平日本身可以改善的部份。如果能借着问题的反应的现实，大家彼此多作一些反省，本文的价值不言而喻。 以下是学员们的问题： 1.策略转换风险大小如何准确的预测？策略转换时应注意什么？ 2.如何在产品研发过程中将经验传承与创新有效的结合起来？ 3.研发战略对公司发展战略的贡献体现在哪些方面？ 4.对于传统产业的技术创新难度较大，尤其是原始的创新有哪些方面可进行突破？ 5.传统行业的研发，创造利润非常困难，如何建立和市场接轨的管理体制？ 6.如果人们比较接受传统口味的产品，新产品开发的出路何在？ 7.什么方法更适合探索传统产业的创新？ 8.研发和创新是否不应只局限于开发新产品及设立技术中心，是否也应包括营销、服 务、企业文化等？。 9.如果领导对研发和创新的理解与认识不够（认为只是专业工程师及技术人员的事 情），如何去作工作？. 10.如何解决创新与企业标准化规范化之间的矛盾？
【备考2019】高考英语阅读理解题常见问题与解决方法(4页)
阅读理解题常见问题与解决方法 阅读理解题型是高考英语试卷中的重中之重，分值最高；在时间和速度上也最难操作，从某种程度说，它决定高考的成功与否。高考阅读理解要求考生在35分钟左右的时间内，完成对四到五篇短文的理解。这几篇短文涵盖了记叙文、说明文、议论文和报刊、广告、书信应用文等多种体裁，涉及人物、故事、社会、文化、政治、经济、科普、新闻和广告等多种题材。 纵观近五年的高考试题，我们也能看得出，阅读理解选材特点是：鲜明的时代感、丰富多样的题材、灵活多样的形式和浓厚的原汁原味性，体现了现代英语的特点，加大了内容的复杂程度和长难句子，反映了现代科学及现实生活中的新发展、新变化。如果没有良好的阅读素养和英语语感，读起来晦涩难懂、不知所云。它考查的不仅是考生对整篇文章的把握能力，还考查了他们快速捕捉信息、准确理解特定细节，以及复杂句子的能力；考生不仅要理解文章的表层意思，更重要的是要通过文章的表层去合理推断、挖掘文章的隐含意义、延伸意义。这是对考生能力、智力、心理的一个综合检验。 阅读理解的常见题型为：主旨大意题、分析推理题、细节理解题、猜测词义题；其中以细节判断试题为主，并加大深层次理解试题和篇章结构试题的考查力度。 近几年阅读理解的题型特点： 1．词汇量不断攀升 近几年高考阅读理解部分的阅读量一直保持增长的趋势，阅读量的增加意味着对阅读速度的要求在提高，因此我们要提醒和培养考生提高阅读速度。 2．更加注重综合理解能力的考查 阅读理解能力测试的主要设题方式有：(1)理解所读材料的主旨和大意；(2)理解文中用以说明主旨和大意的事实和细节；(3)根据上下文推断词、短语或句子的含义；(4)根据文章的叙述，作出简单的推断判断；(5)理解文章的基本篇章结构；(6)理解作者的意图、观点和态度。 笔者根据高考阅卷和其他阅卷老师的谈话，总结出考生在做阅读理解题时经常出现以下问题： 问题一：缺乏领悟文章主旨大意的能力 问题二：缺乏猜测生词的能力 问题三：缺乏把握文章细节的能力 问题四：缺乏推理判断的能力 问题一：缺乏领悟文章主旨大意的能力 【问题描述与分析】 有一类阅读理解题，要求考生为短文找出最佳标题(title)或中心思想(main idea)等，这是考查领悟文章主旨大意的能力。此题型要求考生在理解全文后归纳短文大意，概括中心思想，或选择短文的标题，这些都暗含在文章中。要充分注意文章的首尾句、段。不少文章一开头便展示出文章的梗概，尤其是新闻类的，第一段常是故事的梗概，这一段往往表达文章的中心思想。文章的段落则经常由开头的一句作主题句，来概括该段的中心思想。但不少文章或段落中，中心思想贯穿在整个文章中。必须具备一定的归纳和概括能力，才能选对答案。因此，此类题有些属于浅层次理解上的档次，而很多考生缺乏领悟文章主旨大意的能力，常常
细胞原代培养细胞生物学实验报告
细胞生物学实验报告 细胞原代培养 姓名： 学号： 班级： 专业： 同组成员： 一、实验原理
细胞培养是生物学和医学研究中最常用的手段之一，可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养。由于培养的细胞刚刚从活体组织分离出来，故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段。同时也为以后传代培养创造条件。 原代培养的方法： 1、组织块法在平皿中用弯头剪把组织尽量剪碎，每个组织块小于1mm3大小。用Hanks 液洗涤2—3次，自然沉淀。用吸管吸去上清液。将组织块贴于培养瓶进行培养。 2、酶消化法将1mm3大小的组织块放入1个三角瓶内加入10—30ml的%的胰蛋白酶。370C磁棒搅拌消化20－30分钟。然后终止消化。用几层无菌纱布过滤。取过滤液，离心800rpm 5—10分钟收集细胞。弃上清，加入带有双抗的培养基，放入培养瓶培养。 取材注意事项： 取材要注意新鲜和保鲜。取材应严格无菌。取材和原代细胞制作时，要用锋利的器械，如手术刀或剃须刀片切碎组织，尽可能减少对细胞的机械损伤。要仔细去除所取材料上的血液（血块）、脂肪、坏死组织及结缔组织，切碎组织时应避免组织干燥，可在含少量培养液的器皿中进行。取材应注意组织类型、分化程度、年龄等，一般来讲，胚胎组织较成熟个体组织容易培养，分化低的较分化高的组织容易生长，肿瘤组织较正常组织容易培养。 二、实验目的 1、理解细胞原代培养原理 2、熟悉细胞原代培养方法与过程 3、了解细胞原代培养的应用 4、独立进行细胞原代培养操作 三、实验材料 手术小直剪刀、眼科直镊子、眼科弯镊子、玻璃平皿、培养瓶、试管、移液管、巴斯德吸管、废液缸、75%酒精棉球、酒精灯。 动物：9-12日龄的鸡胚蛋 四、实验步骤
供热运行常见问题及解决办法
供热运行常见问题及处理方法 一、常见的暖气不热问题 1、测温差：若上供下回系统，每层暖气片的进出口温差不应该超过2.5度 （可用红外测温仪测温），若超过这个值，一般可以判断该立管回路存在循环流量偏小，有垂直失调现象； 2、将该处暖气片卸下，游任上连接两个皮管至窗外，打开进口阀门，冲洗 进水管线，若压力充足（水量大），表示进水管线没有问题，则关闭金水阀门；若压力不足，查找上游管线内部是否有堵塞； 3、打开下游阀门，进行反冲，方法同上； 4、将拆下的暖气片内积存的污物冲洗干净 5、连接好暖气片，若温差恢复正常，则该暖气不热问题解决； 6、若还不能解决，检查该立管的阀门的开度是否正确 7、必要时对上游管道开天窗检查，一般里面会有废塑料、保温泡沫材料等堆 积，清除之； 8、若整栋楼不热，检查供回水压差应大于0.03MPa；否则为热网水力失调 所致，应对热网进行调节，或在适当的位置安装小型循环水泵解决 9、应清除除污器内的脏东西。 二、供暖初期容易出现的问题 1、管道内积存空气排除不干净，容易造成气堵，导致热水系统循环不畅，也 可以采取加大循环压头的方法，将空气携带到安装有自动排空或者集气罐的部位将空气排出。一般供暖初期，随着供水温度的提高，管道内析出的空气会增多，供暖初期应采用较大的循环流量以便于析出溶解气体； 2.管道内的杂质也可以通过加大循环流量的方法将其携带到除污器定期排
出。 3.若供暖初期循环量偏小，可能会出现垂直失调现象，部分立管温差过大， 虽然整个系统干管温差比较正常，但是楼宇部分立管暖气不热现象很难消除。同时由于循环不畅，很容易让赃物沉积在管道，导致管道堵塞，采用拆除暖气片清污的方法冲洗沉积物。 4.最好在系统回水干管自动排气装置和高效节能的除污器； 5、运行15天到20天，应打开全程水处理器或低点排污器检查，是否有污 物锈泥沉积，若有应及时冲洗干净。 三、循环量偏小引起的暖气不热现象及处理方法： 常见现象： 楼宇内有的单元组暖气正常，供回水温差正常，但是，部分末端立管进 出口温差过大，大于25度，底层楼用户暖气基本没有温度或者接近室 温，既可以判断该立管循环量偏小，时间久了可能会造成管道堵塞。 处理方法： 1、若该现象普遍存在，则为送入该小区的总循环量偏小，需要采取措 施加大循环量。 2、若只是个别楼宇存在，则需要对楼宇内暖气过热热的立管阀门进行 调节，限制流量，尽量是个立管流量分配均衡 3、若末端不热，可考虑在合适位置增加小型循环水泵解决。 四、住宅小区大面积暖气不热 常见现象： 住宅小区大面积暖气不热；整个小区所有楼或大多数楼的散热器不热， 室温普遍达不到要求。 形成原因：
肿瘤学研究常用实验技术及方法
精心整理 肿瘤学研究常用实验技术及方法复习题 1.表观遗传的科学内涵 三个特点？ a)基因功能完全、稳定地丧失，有遗传性； b)细胞外环境长期作用的结果，有可逆性； c)分析方法灵敏，可检出少数细胞的变化 2. DHPLC 3. i. ii. 梯度中 iii. SDS- iv. 1.丙烯酰胺有神经毒性，可经皮肤、呼吸道等吸收，故操作时一定要注意防护。 2.制备聚丙烯酰胺凝胶时，小心防止凝胶渗漏。 3.蛋白加样量要合适，加样量太小，条带不清晰，加样量太大，则泳道超载，条带过宽而重 叠，甚至覆盖至相邻泳道。 4.对多种蛋白质而言，电流大则电泳条带清晰，但电流过大，玻璃板会因受热而破裂，故适 合的电流为玻璃板微热。 5.胶转膜后应在膜上标记好正反面及电泳方向。 6.电转移时应注意勿将滤膜和胶的位置放反，而且滤纸、滤膜和胶应等大，以免短路。
4.组织培养/基因的克隆、转化与表达 i.请列举至少3种流式细胞仪的用途? 1.定量检测细胞膜、细胞质和细胞核中的各种细胞成分 2.研究细胞的各种功能状态(细胞增殖，细胞凋亡、细胞分化、酶活性、细胞膜通透性、 氧化还原状态、吞噬性等)。 3.定量检测血清中的各种可溶性生物分子成分 临床中应用：1.白血病和淋巴瘤的免疫分型 1. 2. 3.细胞 磷酸酶（phosphatase） 激酶（Kinase） 连接酶（Ligase） 5.生物质谱简介 生物质谱在蛋白组学中的应用？ 1.ProteinsMWmeasurements； 2.ProteinIdentification；(ID) 3.Peptideandproteinprofiling； 4.ImagingMS； 5.ProteinPTMs；5.ProteinQuantification 6.《常用电泳技术基本原理及应用》课程复习题
研究性学习常见问题及解决方案
研究性学习课堂常见问题及解决方案 一、情境 我们在是常课堂教学中存在着较强的学科化倾向，就情境创设部分不能有效的进行多学科共同创设情境引入的有机整合。新课程改革要求每一位教师均具备研究性学习课程的教学能力，我们在参与研究性学习教学活动中经常会犯学科本位的错误。情境导放高置的不同，势必就会导致课堂教学结果的不同。例如，同样是环保问题，在语文老师的指导下可能就会演化成环保知识累积方面的研究，在科学老师的指导下就有可能成为环保结果的探究，这样就不可能引起所有学生的学习兴趣，这样就不能体现教育要面向全体学生的发展主针。同样，如果我们从学生的兴趣出发，体现研究环保意识的初衷，那么非科学专业教师指导的研究性学习课程难道就不会有科学上的错误吗，这样势必影响学生的研究成果，使很多好的研究性学习问题只能流于形式。 学科本位问题的根源在于教师的知识具有局限性，解决这一问题的关键在于“解放”学生之前，一定要“解放”教师。只有提高教师水平，强化教师的“导师”意识，才可以顺利推进研究性学习进程。这一点是研究性学习课程实施的先决条件。也正是因为研究性学习的内容具有广泛性，课题涉及到课内外、校内外。而教师所掌握的知识又是有限的，这就需要教师根据学生的课题去补充自己的知识，尝试科学的研究手段，亲身体验课题研究，使自己也成为研究性学习的参与者和实践者。有了一定的知识储备，加之科学的研究方法，相信教师就不再是“教”师，而会成为“导”师，也就真正避免了“可怕”的学科本位 二、任务 研究性学性的主要任务就是选题，课题是高度结构化的，是围绕一个基本问题派生出若干带有研究性的小问题的，但我们平时在选题上常常存在以下问题：1．不懂得问题选择的相关原则，选择了不该选择的研究问题。如对选择的问题不感兴趣；选题的范围过于广泛；选择的问题没有价值，无学习意义、生活意义或社会意义，不能解决任何社会生活问题或自然问题；选择的问题没有任何创新性，没有新的研究视角；不具备可行性和科学性，选择的问题与自己的所学学科无关，缺乏理论和相关知识的支撑，没有考虑到学习时间、学习作用、学习能力等诸因素；实践性不足；不能够运用多种研究方法进行研究。2．研究方向过于广泛，研究问题太大、太抽象，使学生不能准确表达自己的想法，不能将课本中