鸡新城疫抗体检测实验报告(一)

鸡新城疫抗体检测实验报告(一)

背景介绍

•鸡新城疫是一种常见的家禽传染病，严重影响鸡类养殖业。

•抗体检测可以有效判断鸡群是否感染鸡新城疫。

实验目的

•确定一种高效准确的鸡新城疫抗体检测方法。

•提供可靠的数据支持，用于预防和控制鸡新城疫的传播。

实验设计

•选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。

•分为实验组和对照组，实验组注射疫苗，对照组不注射。

•定期进行血液检测，测量抗体水平。

实验步骤

1.收集血样。

2.提取血清。

3.使用特定抗体试剂盒进行检测。

4.测量光密度值，判断鸡新城疫抗体水平。

5.记录实验结果。

实验结果

•实验组鸡群的抗体水平明显高于对照组。

•实验组的鸡只无明显临床症状，对疫情具有稳定抵抗力。

•对照组鸡群出现多例感染病例，病死率较高。

结论与建议

•鸡新城疫抗体检测方法可准确判断鸡群感染情况，为预防和控制疫情提供重要依据。

•注射疫苗可以提高鸡只的免疫力，减少感染风险。

•鼓励养殖场加强抗体检测工作，及时发现病例并采取相应措施。

致所有鸡农：鸡新城疫是一项严重威胁家禽行业的疾病。本实验通过抗体检测方法，证明了注射疫苗可以提高鸡群的免疫能力，减少感染的风险。希望您能严格按照抗体检测规程，提高鸡只的免疫力，保障养殖业的稳定发展。

感谢您的关注与支持！

注意：本报告仅为实验结果总结，并非具体实验报告。具体实验细节和数据可根据实际情况进行增删和修改。

实验方法

•选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。

•将实验组的鸡只注射鸡新城疫疫苗。

•对照组的鸡只不注射疫苗。

•按照一定周期，定期采集血液样本。

数据分析

•对实验组和对照组的血液样本进行抗体检测。

•实验组的鸡只抗体水平明显升高，且持续稳定。

•对照组的鸡只抗体水平较低，易受感染。

结果讨论

•实验结果证明，注射鸡新城疫疫苗可以有效提高鸡只的免疫力。

•抗体检测是一种可靠的方法，可以快速判断鸡群的感染情况。

•实验结果也表明，饲养场的防疫管理和养殖环境对感染鸡新城疫的影响较大。

结论

•鸡新城疫抗体检测方法在预防和控制鸡新城疫方面具有重要意义。

•注射鸡新城疫疫苗可以有效提高鸡只的免疫力，降低感染风险。

•饲养场应加强防疫管理，提供良好的养殖环境，以保障鸡只的健康与安全。

建议

•饲养场应建立健全的抗体检测制度，定期进行抗体检测，及时掌握鸡群的免疫状况。

•在疫情高发期，增加抗体检测频次，及时发现感染病例，采取相应措施进行控制与防范。

•定期对鸡新城疫疫苗进行监测，确保疫苗的有效性。

•加强养殖管理、消毒和隔离等防疫措施，提高饲养场的抗病能力。

致所有鸡农：本实验报告通过鸡新城疫抗体检测实验，证明了注射鸡新城疫疫苗对提高鸡只免疫力的重要性。我们建议您加强鸡只的抗体检测工作，提高防疫管理水平，以确保鸡群的健康与安全。感谢您的参与与支持！

注意：本报告为续写部分，具体实验细节和数据可根据实际情况进行增删和修改。

鸡新城疫抗体检测步骤,鸡新城疫的症状表现

鸡新城疫抗体检测步骤，鸡新城疫的症状表现 1、将样本做去皮和去脂处理，并用均质器均质样本，然后称取适量的均质物至离心管内。 2、依次加入蒸馏水、试剂A、衍生化试剂，振荡混匀后孵育半小时。 3、依次加入试剂B、试剂C、提取剂，并振荡混匀。 4、离心5分钟，取上层有机相至离心管内，再用氮气吹干。 5、用净化剂溶解干燥物，加入试剂D，离心2分钟后待检。 一、鸡新城疫抗体检测步骤 1、将鱼虾蟹、畜禽肉、内脏等样本做去皮、去脂肪等处理，再用均质器均质样本，然后称取3±0.05克均质物至15毫升的离心管内。 2、依次加入4毫升蒸馏水、0.5毫升试剂A以及0.6毫升衍生化试剂，并振荡混匀，于65°C水浴中孵育半小时。 3、依次加入1毫升试剂B、0.4毫升试剂C、1瓶4毫升的提取剂，然后振荡混匀。

4、在室温下（20-25°C）以4000r/分钟的速度离心5分钟，取2毫升上层有机相至5毫升的离心管内，在50-60°C水浴中用氮气（或空气吹干仪）吹干。 5、取1毫升净化剂溶解干燥物，再加入0.5毫升试剂D振荡混匀，在室温下（20-25°C）以4000r/分钟的速度离心2分钟，最后待检。 6、若使用全血标本进行检测，标本的移动速度可能较慢，必要时可在加样1分钟后，向加样孔内滴入1滴PBS作辅助液，以促进标本移动。

二、鸡新城疫的症状表现 1、急性型 （1）病鸡呼吸困难，会发出“咕噜”的特殊怪声。 （2）病鸡的嘴、鼻中有大量黏液，产蛋量下降。 （3）病鸡出现下痢，其粪便的颜色为黄白色或绿色，有麻痹和神经症状。

2、最急性型 此类症状大多出现在3-4周龄的小鸡身上，发病时通常不会表现出任何症状，但病发后小鸡会快速死亡。 3、亚急性或慢性型

鸡新城疫抗体检测实验报告(一)

鸡新城疫抗体检测实验报告(一) 背景介绍 •鸡新城疫是一种常见的家禽传染病，严重影响鸡类养殖业。 •抗体检测可以有效判断鸡群是否感染鸡新城疫。 实验目的 •确定一种高效准确的鸡新城疫抗体检测方法。 •提供可靠的数据支持，用于预防和控制鸡新城疫的传播。 实验设计 •选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。 •分为实验组和对照组，实验组注射疫苗，对照组不注射。 •定期进行血液检测，测量抗体水平。 实验步骤 1.收集血样。 2.提取血清。 3.使用特定抗体试剂盒进行检测。 4.测量光密度值，判断鸡新城疫抗体水平。 5.记录实验结果。

实验结果 •实验组鸡群的抗体水平明显高于对照组。 •实验组的鸡只无明显临床症状，对疫情具有稳定抵抗力。 •对照组鸡群出现多例感染病例，病死率较高。 结论与建议 •鸡新城疫抗体检测方法可准确判断鸡群感染情况，为预防和控制疫情提供重要依据。 •注射疫苗可以提高鸡只的免疫力，减少感染风险。 •鼓励养殖场加强抗体检测工作，及时发现病例并采取相应措施。 致所有鸡农：鸡新城疫是一项严重威胁家禽行业的疾病。本实验通过抗体检测方法，证明了注射疫苗可以提高鸡群的免疫能力，减少感染的风险。希望您能严格按照抗体检测规程，提高鸡只的免疫力，保障养殖业的稳定发展。 感谢您的关注与支持！ 注意：本报告仅为实验结果总结，并非具体实验报告。具体实验细节和数据可根据实际情况进行增删和修改。 实验方法 •选取多个饲养场的鸡群作为实验对象。 •将实验组的鸡只注射鸡新城疫疫苗。

•对照组的鸡只不注射疫苗。 •按照一定周期，定期采集血液样本。 数据分析 •对实验组和对照组的血液样本进行抗体检测。 •实验组的鸡只抗体水平明显升高，且持续稳定。 •对照组的鸡只抗体水平较低，易受感染。 结果讨论 •实验结果证明，注射鸡新城疫疫苗可以有效提高鸡只的免疫力。 •抗体检测是一种可靠的方法，可以快速判断鸡群的感染情况。 •实验结果也表明，饲养场的防疫管理和养殖环境对感染鸡新城疫的影响较大。 结论 •鸡新城疫抗体检测方法在预防和控制鸡新城疫方面具有重要意义。 •注射鸡新城疫疫苗可以有效提高鸡只的免疫力，降低感染风险。 •饲养场应加强防疫管理，提供良好的养殖环境，以保障鸡只的健康与安全。

鸡新城疫抗体检测实验报告

鸡新城疫抗体检测实验报告 引言 本实验旨在对鸡新城疫进行抗体检测，以评估鸡群对该病毒的感染情况。通过收集血清样本并使用特定检测方法，我们能够确定鸡群中抗体的存在与水平。这对于制定控制措施、监测疫情以及预防疾病的传播至关重要。 实验设计 1. 样本采集 我们在鸡群中随机选择了100只鸡进行样本采集，确保样本的代表性。采集的方法包括抽取少量鸡脉血或者采集鸡羽毛根部进行检测。 2. 抗体检测方法 我们采用了酶联免疫吸附试验（ELISA）方法进行抗体检测。该方法通过将血清样本与鸡新城疫抗原结合，并使用酶标记的二抗检测抗体与其结合，最后通过底物发色反应来检测抗体的存在。 3. 阳性对照与阴性对照 为了验证实验结果的准确性，我们使用了阳性对照和阴性对照。阳性对照为已知感染鸡新城疫的鸡样本，而阴性对照为未感染的鸡样本。 实验结果 我们对100个样本进行了抗体检测，并将结果进行统计和分析。以下是实验结果的详细报告： 1. 鸡新城疫抗体检测结果 我们将鸡新城疫抗体检测结果分为三类：

•强阳性：抗体水平高于阈值的样本。 •弱阳性：抗体水平介于阈值和阴性之间的样本。 •阴性：抗体水平低于阈值的样本。 2. 统计分析 经过抗体检测，我们得到了以下统计分析结果： •强阳性样本数：25只鸡 •弱阳性样本数：45只鸡 •阴性样本数：30只鸡 3. 结果解读 我们的实验结果表明，在100只鸡样本中，25只鸡的抗体水平高于阈值，可以确认为感染了鸡新城疫。另外，45只鸡的抗体水平介于阈值和阴性之间，可能存在早期感染的迹象。剩余的30只鸡样本抗体水平低于阈值，说明它们未感染鸡新城疫。 结论与讨论 本次实验通过鸡新城疫抗体检测方法对100只鸡样本进行了检测，并得出了实验结果。结果表明鸡新城疫在该鸡群中流行的程度较高，25%的样本具有强阳性抗体水平。 我们认为，对鸡新城疫进行抗体检测有助于早期发现感染情况，及时采取控制措施以避免疫情的进一步传播。此外，对鸡新城疫的抗体检测也可以作为鸡群健康监测的重要指标，帮助决策者制定防控策略和掌握疫情动态。 然而，本次实验存在一定的局限性。首先，样本数量相对较少，可能无法全面反映整个鸡群的感染情况。其次，我们仅采用了ELISA方法进行抗体检测，其他方法可能会得到不同的结果。因此，在今后的研究中，可以进一步扩大样本数量，并比较不同检测方法的准确性。 总体而言，本次实验对鸡新城疫抗体检测进行了全面的描述和分析，为鸡群健康管理提供了重要的参考和依据。鸡新城疫的预防和控制需要全面多方位的努力，希望本次实验结果能为相关工作提供一定的支持和指导。

新城疫抗体水平检测

新城疫的血凝和血凝抑制试验 高若开 一、实验目的 1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法。 2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素，用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断。 二、实验内容 1.血凝试验(HA)检测新城疫抗原 2.血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体 三、实验原理 1.血凝试验（HA ）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA ）,也称直接血凝反应。 2.血凝抑制试验（HI ）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI ）反应，也称血凝抑制反应。 四、实验材料 离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版（5块）、微量移液器（20-100 微升可调）、吸液尖（若干）、 抗体 病毒颗粒 红细胞

洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、ND标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。 五、实验步骤 （一）抗凝剂的配制 将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用。1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液。 （二）10%红细胞悬液的配制 1、用注射器吸取0.5毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞4.5毫升。 2、1500转离心5分钟，吸弃上清液。 3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次，前两次5分钟，后一次10分钟。 4、吸弃上清液，用吸量管吸取红细胞，配制成10%红细胞悬液。 5、2-6摄氏度储存，备用。 （三）血凝试验（HA) 1.在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul生理盐水 2.将系苗用生理盐水5毫升稀释，在第1孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul。 3.每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul 4.轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟 5.结果判定 血凝效价测定 结果判定标准 1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝集； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边缘不整齐而稍向孔底集中，即75％凝集； 3、＋＋：红细胞形成一个环状，四周有凝集块，即50％凝集； 4、＋：红细胞于孔底形成圆团，边缘不够光滑，四周稍有凝集块，即25％凝集； 5、－：红细胞于孔底形成圆团，边缘光滑整齐，即无凝集。 血凝价的判定 以100% 凝集的病毒最大稀释度为该病毒的血凝价，即为一个凝集单位。上表看出，该新城疫病毒液的血凝价为1:32，则l:32为1个血凝单位，1:16、l:8分别为2、4个血凝单位，或将32/4=8，即1:8稀释的病毒液为4个血凝单位。 （四）4个血凝单位抗原的配制 根据判定结果，吸取1毫升已稀释的病原溶液再以8倍稀释，即为4个血凝单位的标准抗原。 （五）血凝抑制试验 1、在血凝板上1－12孔内各加入50ul生理盐水；

实验一_鸡新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗体水平测定法讲解

鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法 1．本次实验的目的和要求 掌握鸡新城疫血凝（HA）和血凝抑制（HI）抗体水平测定法，以便检查疫苗使用效果和制定合理免疫程序。 2．实验内容或原理 某些病毒(如新城疫病毒，禽流感病毒等)能够与动物的红细胞发生凝集，此即为红细胞凝集现象(HA)。这种红细胞凝集现象可于病毒悬液中加入特异免疫血清所抑制，即为红细胞凝集抑制试验(HI)。 3．需用的仪器或试剂等 动物健康成鸡2-5只，被检鸡15-25只。 器材高压灭菌器、滤纸、试管、试管架、离心机、离心管、三棱针、内径2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精灯、石蜡、96孔V型微量凝集试验板、0.025mm微量吸液器、微型振荡器、微量移液器、脱脂棉等。 药剂（1）浓缩抗原；（2）生理盐水或磷酸缓冲盐水（PBS）；（3）Alsever细胞保存液；（4）红细胞悬液；（5）待检血清 4．实验步骤 (1)发现与鉴定病毒：鸡新城疫和禽流感病毒分离后，这些病毒能凝集鸡的红细胞，又能被特异性的已知免疫血清抑制其凝集反应，即可鉴定此病毒。 (2)诊断病毒性疾病：如取同一发病的动物早期和恢复期血清进行红细胞凝集抑制实验，如抗体效价有4倍以上升高，即有诊断意义。 （3）免疫机体抗体效价的测定： 3.鸡新城疫（ND）的HA和HI （1）试验准备 ①抗原：一般以鸡新城疫Ⅱ系或LaUra系冻干苗作为已知抗原，进行试验。 ② 0.7％细胞悬浮液：由鸡翅静脉或心脏采血，放入含有抗凝剂的灭菌试管(按每毫升血加入3.8％灭菌柠檬酸钠0.2毫升做抗凝剂)内，迅速混匀。如当时不用，可直接采血放入红细胞保存液内(保存液2份，血液1份)于4℃冰箱内可保存两周。 红细胞悬液的配制：将血液注入离心管中，经3000转／分钟，离心5-10分钟，用吸管吸去上清液和红细胞上层的白细胞薄膜，将沉淀的红细胞加稀释液(生理盐水)洗涤。再用离心机3000转／分钟离心5-10分钟，弃上清，再加稀释液洗涤，如此反复洗涤三次，将最后一次离心后的红细胞泥，按0.7％的稀释度加入稀释液(0.7毫升红细胞泥加99.3毫升稀释液)。 ③被检血清：将被检鸡群编号登记，用消毒过的干燥注射器采血，注入洁净干燥试管内(微量法可用孔径2-3毫米塑料管由翅静脉采血)，在室温中静置或离心，待血清析出后使用。

鸡新城疫抗体滴度的检测

鸡新城疫抗体滴度的检测 （红血球凝集抑制法） 1 红细胞血凝与血凝抑制的原理 红细胞凝集的实质是红细胞膜上的特异性抗原(凝集原，agglutinogen)和相应抗体(凝集素，agglutinin)发生抗原抗体反应。当病毒的悬液中先加入特异性抗原，且这种抗原的量足以封闭病毒颗粒或其凝集素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或其凝集素直接接触，这是红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制，也称为血凝抑制反应。新城疫病毒属于副黏病毒属，是最主要的红细胞凝集性病毒，具有神经氨酸酶(NA)和血凝素(HA)，可使红细胞凝集。 2 实验材料 鸡新城疫抗原(NDV，南京天邦生物科技有限公司)；生理盐水；肝素钠；96 孔V 型微量血凝板；微量移液枪 3 红细胞凝集 3.1 1%鸡红细胞悬液的制备 取无免疫过的成年公鸡，翅静脉采血10~15 mL，肝素抗凝，2000 r/min 离心10 min，弃上清，注意要将血细胞泥表面的一层薄膜洗净。然后用血细胞泥5~10 倍的PBS洗涤，2000 r/min 离心10 min，弃上清，如此反复洗涤 3 次至上清液透明，弃上清液后得到红细胞泥。再用PBS配成1%鸡红细胞悬液（红细胞泥：PBS=1ml:100ml）。4℃保存，不超过5d。 3.2 红细胞凝集(4 单位抗原的滴定)

在96 孔微量血凝板上，从左到右每空各加50 μL 生理盐水，另加一排作为重复。再向每排的第 1 孔加入50 μL 新城疫抗原，依次向后倍比稀释直至第11 孔，第12 孔作为对照，无抗原液。然后向每孔加入1%鸡红细胞悬液50 μL，将微量板振荡混匀20~30 次（于微型振荡器上震荡1 m in），置于37℃温箱感作30 min 后每5 min 观察一次，待对照孔红细胞已经沉淀时观察结果。 结果观察：将反应板倾斜45 度角，沉于孔底的红细胞沿着倾斜面向下呈线状流动着为沉淀，表明红细胞未被凝集或不完全被病毒凝集；如果红细胞铺平孔底，凝集成均匀薄层，倾斜后红细胞不流动，表明红细胞被病毒所凝集。以100%凝集的抗原最大稀释孔位该抗原的血凝价，即1 个凝集单位；从该孔向前移2 孔的抗原稀释度作为4 单位抗原的稀释度。 抗原应稀释的倍数=血凝滴度÷4 (若血凝价为26，病毒抗原应稀释倍数为24（16），即16ml生理盐水+1ml抗原即为4个单位血凝单位的病毒抗原)。 4 红细胞凝集抑制 在96 孔微量血凝板上，从左到右每孔中各加50 μL 生理盐水，再向每排的第 1 孔加入50 μL 待测血清，依次向后倍比稀释直到第

新城疫抗体水平检测

新城疫的血凝和血凝抑制试验 高若开 一、实验目的 1.掌握血凝和血凝抑制试验的基本原理、操作方法和结果判定方法。 2.分析血凝和血凝抑制试验的影响因素，用以确定最佳免疫时间、判定免疫效果和辅助疾病诊断。 二、实验内容 1.血凝试验(HA)检测新城疫抗原 2.血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体 三、实验原理 1.血凝试验（HA）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝集，这种凝集红细胞的现象称为血凝（HA）,也称直接血凝反应。

2.血凝抑制试验（HI ）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这种抗体的量足以抑制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不能与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝集现象就被抑制，称为红细胞凝集抑制（HI ）反应，也称血凝抑制反应。 四、实验材料 离心机、恒温箱、冰箱、振荡器、96孔血凝版（5块）、微量移液器（20-100微升可调）、吸液尖（若干） 、洗耳球、离心试管、普通试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、抗体 抗原 病 毒 颗 粒 红细胞

ND标准抗原、1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。 五、实验步骤 （一）抗凝剂的配制 将1克柠檬酸钠用25毫升生理盐水稀释备用。1毫升抗凝剂可用于采集9毫升血液。（二）10%红细胞悬液的配制 1、用注射器吸取0.5毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞4.5毫升。 2、1500转离心5分钟，吸弃上清液。 3、用5-10倍生理盐水1500转洗涤3次，前两次5分钟，后一次10分钟。 4、吸弃上清液，用吸量管吸取红细胞，配制成10%红细胞悬液。 5、2-6摄氏度储存，备用。 （三）血凝试验（HA) 1.在血凝板上第一排的1－12孔内各加入50ul生理盐水 2.将系苗用生理盐水5毫升稀释，在第1孔内加入50ul病毒抗原，然后依次倍比稀释至第11孔，最后弃50ul。 3.每孔加入1％鸡红细胞悬液50ul 4.轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30分钟 5.结果判定

新城疫抗体水平检测

新城疫的血凝和血凝克制试验 高若开 一、实验目的 1.掌握血凝和血凝克制试验的基来源理、操作方法和结果判断方法。 2.剖析血凝和血凝克制试验的影响要素，用以确立最正确免疫时间、判断免疫成效和协助疾病诊疗。 二、实验内容 1.血凝试验 (HA) 检测新城疫抗原 2.血凝克制试验 (HI) 检测新城疫抗体 三、实验原理 1.血凝试验（ HA ）原理：某些病毒或病毒的血凝素能选择性地使某种动物的红细胞发生凝聚，这类凝聚红细胞的现象称为血凝（HA ）,也称直接血凝反响。 病 毒 红 颗 细 粒 胞 2.血凝克制试验（ HI ）原理：当在病毒的悬液中加入特异性抗体，且这类抗体的量足以克制病毒颗粒或其血凝素时，则红细胞表面的受体就不可以与病毒颗粒或血凝素直接接触。这时红细胞的凝聚现象就被克制，称为红细胞凝聚克制（HI ）反响，也称血凝克制反响。 抗原抗体 I am late！

四、实验资料 离心计、恒温箱、冰箱、振荡器、 96 孔血凝版（ 5 块）、微量移液器（ 20-100 （若干）、洗耳球、离心试管、一般试管、试管刷、烧杯、吸量管、一次性注射器、微升可调）、吸液尖ND 标准抗原、 1%红细胞悬液、抗凝剂、生理盐水。 五、实验步骤 （一）抗凝剂的配制 将 1 克柠檬酸钠用25 毫升生理盐水稀释备用。 1 毫升抗凝剂可用于收集9 毫升血液。 （二） 10%红细胞悬液的配制 1、用注射器汲取 0.5 毫升抗凝剂无免疫健康青年公鸡的红细胞 4.5 毫升。 2、 1500 转离心 5 分钟，吸弃上清液。 3、用 5-10 倍生理盐水 1500 转清洗 3 次，前两次 5 分钟，后一次10 分钟。 4、吸弃上清液，用吸量管汲取红细胞，配制成10%红细胞悬液。 5、 2-6 摄氏度储藏，备用。 （三）血凝试验（ HA) 1.在血凝板上第一排的1－ 12 孔内各加入 50ul 生理盐水 2.将系苗用生理盐水 5 毫升稀释，在第 1 孔内加入 50ul 病毒抗原，而后挨次倍比稀释至第11 孔，最后弃 50ul。 3.每孔加入1％鸡红细胞悬液 50ul 4.轻轻振荡均匀，后放于室温或37℃中静置30 分钟 5.结果判断 血凝效价测定 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 2×4×8×16×32×64×128× 256× 512× 1024× 2048 ×红细胞 比较 生理50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 盐水 抗原50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃 50 红细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 结果＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋－－－－ ＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋＋ 结果判断标准 1、＋＋＋＋：红细胞呈细沙样均匀铺于孔底，即100％凝聚； 2、＋＋＋：红细胞均匀铺于孔底，当边沿不齐整而稍向孔底集中，即75％凝聚； 3、＋＋：红细胞形成一个环状，周围有凝聚块，即50％凝聚； 4、＋：红细胞于孔底形成圆团，边沿不够圆滑，周围稍有凝聚块，即25％凝聚； 5、－：红细胞于孔底形成圆团，边沿圆滑齐整，即无凝聚。 血凝价的判断 以 100% 凝聚的病毒最大稀释度为该病毒的血凝价，即为一个凝聚单位。上表看出，该新城疫 病毒液的血凝价为 1:32 ，则 l:32 为 1 个血凝单位， 1:16 、l:8 分别为 2 、4 个血凝单位，或将 32/4=8 ，

【畜牧课件】实验六 新城疫的实验室诊断

实验六新城疫的实验室诊断 （一）实验目的 1．掌握鸡新城疫的临诊诊断要点。 2．掌握鸡胚接种、病毒分离方法并用HA、HI试验鉴定其病毒 （二）实验原理 有些病毒，如禽流感病毒、新城疫病毒、Eds76等，能凝集某种动物的红血球，故可以来推测材料中有无该病毒的存在。如有能凝集血球的病毒，其凝集性可为相应的抗体所抑制，这种抑制还有特异性，故病毒的血球凝集抑制试验，可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体，也可用已知血清来鉴定未知病毒。 （三）实验准备 抗凝剂的制备：5%枸椽酸钠+0.9%生理盐水，分装、纱布扎口、灭菌消毒15磅/20min。 1％红细胞悬液制备：采集无禽流感和新城疫等抗体的健康成年公鸡的血液与1／4体积的抗凝剂混合，用PH7.2、0.01mol／LPBS液洗涤3次，每次均以3000rpm离心10min，洗涤后用PBS配成体积分数为1％红细胞悬液，4℃保存备用。 用具：96孔V型微量反应板、微量移液器(配有滴头)、0.9%的生理盐水。 （四）实验步骤 1、鸡新城疫的临诊诊断要点 由新城疫病毒(NDV)引起的临诊症状依宿主和病毒毒力两方面的因素而定。在鸡不同的毒株引起疾病的严重程度不同，有的造成急性死亡，死亡率可高达100％，有的仅表现为亚临床型。、不同的宿主感染同一毒株的后果也不同。例如某些毒株可引起鸡和火鸡发生严重疾病，但它们在鸭和鹅仅引起隐性感染。此外，我国的商业鸡群绝大多数为新城疫(ND)的免疫鸡群，发生ND流行主要是由于各种原因造成群体对ND的免疫保护水平下降或免疫失败所致，在临诊症状上大多不典型。与NDV有关的临诊症状有：呼吸困难、腹泻、产蛋下降或停止、精神抑郁、神经症状和死亡。这些症状在有的病例可全部出现，但大多数病例仅部分出现。对不同的鸡群来说，出现临诊症状的鸡所占的比例及发病鸡的严重程度可能有很大差异。典型ND的特征性病变是全身呈出血性败血变化：腺胃乳头出血或溃疡；肠道，特别是盲肠扁桃体和直肠一泄殖腔粘膜呈条纹状出血，间有纤维素性坏死点；腺胃和肌胃的浆膜以及全身脂肪组织多见针尖样出血点。非典型ND的出血性变化大多不明显，剖检时需仔细辨认，盲肠扁桃体和直肠一泄殖腔粘膜出血变化发生的频率通常较高。这里必须指出，ND的临诊症状，无论是消化道、呼吸道或神经系统，都不是ND所特有的。因此，ND的临诊诊断只能是初步的诊断。ND的确诊还需进一步进行流行病学调查，血清学试验等综合判定。但最后确诊需要对感染鸡进行病原分离、鉴定。 2、鸡新城疫病毒的分离 （1）接种材料：无菌取病死鸡病料（脑、肝、脾、喉气管）1g左右放入研磨器内，加入3-5ml生理盐水，研磨后倒入离心管内，加入新大雾头0.1ml（总浓度800单位/ml）；置水溶箱37℃/30min，离心后取上清，作为接种材料。 （2）鸡胚接种：尿囊腔接种9-11日龄非免胚0.1~0.2ml/胚，醋封后继续卵乳化24/ml，开始照蛋每日两次，连续5日，弃去24h内死胚，收集24~ 120h死胚和剩余活胚置4℃保持，鸡胚液（尿素液和羊水）置好在24h内收集，作HA、HI试验，进行病毒鉴定用。 3、鸡新城疫病毒的鉴定 血凝（HA）试验单位：ml

鸡新城疫免疫血清学监测

鸡新城疫免疫血清学监测 作者：李霞刘金玲 来源：《兽医导刊》 2018年第12期 鸡新城疫（ND）俗称鸡瘟，是由鸡新城疫病毒引起的鸡的一种高度接触性、急性、烈性传 染病。最早发生于印度尼西亚的爪哇和英国的新城（Newcastle）,1927年Doyle 首次分离病原，并将该病命名为新城疫。目前，该病已广泛流行与我国所有养鸡地区，在家禽病毒病中，它的 流行和危害性占首位。鸡患新城疫常呈现败血症经过，主要特征是呼吸困难，下痢，神经机能 紊乱，黏膜和浆膜出血。 鸡新城疫抗体水平较低或未经免疫接种的鸡群，发病率和死亡率可达80% ～ 100%，免疫 鸡群的抗体水平中等时，发病率和死亡率的变化较大，低者只有2% ～ 7%，稍高者可达20% ～40%。在大中型养鸡场，鸡群有一定的抵抗力的情况下，鸡新城疫主要是以一种非典型的形式出现，应引起重视。 本次实验调查采用的是兽医实验室常用的方法，血凝实验(HA) 和血凝抑制实验(HI)，新城疫抗体水平检测使用该方法特异性好，操作方便，可同时进行大量的样品检测，对实验环境要 求不高等特点。 血凝实验(HA) 和血凝抑制实验(HI) 是兽医实验室常用的方法之一，新城疫抗体水平检测 使用该方法特异性好，操作方便，可同时进行大量的样品检测，对实验环境要求不高等特点。 但是，血凝实验（HA）与血凝抑制实验（HI）实验也受很多因素的影响，由于影响因素复杂， 不可能完全排除，但是，本次实验结果数据都是每个样品进行反复多次实验得出的数据。 一、材料和方法 （一）被检血清 从4 个乡镇的养殖户场里或农户家里20 个养鸡场（户）共计140 只鸡进行血液采集，其 中合同肉鸡20 只，规模场蛋鸡20 只，圈养土鸡20 只，林下放养土鸡50 只，农户散养土鸡 30 只。采集后的血液样品静置凝固后自然析出血清，析出血清少的，用离心机进行离心后把血清离心出来。 （二）检测材料 标准抗原(HA 抗原)、1% 鸡红细胞悬液、生理盐水、96 孔V 型板、微量移液器 本次实验方法是使用已知抗原检测未知抗体，通过血凝实验（HA）和血凝抑制实验（HI） 测出被检血清中的抗体滴度。 1. 血凝实验（HA）。先用血凝实验（HA），测出标准抗原的血凝价单位。25μl 生理盐水→标准抗原25 为微升→ 25μl 生理盐水→ 1% RBC 悬液25μl →震荡后在37℃恒温箱静置 30 min 等待结果。 结果显示抗原血凝价为1∶256 2. 配制4 HAU 抗原。通过血凝实验（HA）测定，标准抗原为8 log，那么配制4 HAU 抗 原需要稀释倍数为6 倍。

新城疫抗体检测

新城疫的抗体检测 某些病毒具有凝集某种（些）动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的实验称血球凝集试验，以此来推断被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的血凝可为相应的抗体所抑制，即血球凝集抑制实验（HI），通过血凝与血凝抑制试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。一目的意义 1免疫监测（1）免疫效果评价（2）免疫时机确定 2诊断疾病（根据有无抗体或抗体的高低） 3流行病学调查 二试验仪器与试剂 1试验仪器离心机、离心管两支、50ml量筒一个、V型微量反应板、微量加样器（移液器）、塑料吸头（黄色）若干、1ml吸管1支、胶头滴管两支、微量振荡器、 电热恒温培养箱、托盘天平。 2试验试剂鸡新城疫抗原、流感H5、H9抗原、1%鸡红细胞、生理盐水、3.8%柠檬酸钠抗凝剂、待检血清。 三方法 1病毒的血凝试验 1.1 3.8%柠檬酸钠抗凝剂的配制：用托盘天平称取柠檬酸钠3.8克溶于100ml蒸馏水或纯净水中，摇匀使其充分溶解即可，有条件的可121℃高压蒸汽灭菌20分钟，冷却至室温后置4℃冰箱中保存备用。 1.2 1%鸡红细胞制备过程：事先用5ml（或10ml）的注射器吸入抗凝剂若干（其量为所需血量的1/5）,从健康公鸡（未经新城疫疫苗注射）的心脏或翅下静脉采取2-4毫升血液,以2000转每分钟，离心5分钟，吸去上清液（注意要将血细胞泥表面的一种薄膜吸净）。然后用生理盐水（用量为血细胞泥的5-10倍）洗红细胞，离心5分钟，弃去上清液，如此反复洗3-5次，直至上清液透明清亮为止，最后一次要用生理盐水将血细胞泥稀释成1%浓度，然后置4℃冰箱备用（一般可保存3天）。 1.3 红细胞凝集试验（血凝试验）操作方法（见表1）： （1）取一块洁净的96孔V型微量血凝反应板，用微量移液器从第一列第一孔开始依次加入生理盐水，每孔25微升，直至加到第十五孔（第一列12孔，第二列3孔）。 （2）取新城疫抗原液25微升加入第一孔中，充分混合后吸取25微升加入第二孔中，如此直至第14孔，混合后吸取25微升丢弃，第15孔不加病毒为对照。 （3）更换移液器前端的塑料吸头，每孔加已备的1%鸡红细胞液各25微升（注意从后往前加）。 （4）将反应板置微型震荡器上，振动混合1分钟，取下置37℃恒温箱中作用30分钟后开始观察结果，注意每五分钟观察一次，直至30分钟，判定并记录结果。 判定结果如下： ++++——红细胞全部凝集，均匀分布于孔底。 ++-------红细胞部分凝集，沉积于孔底呈小圆点状。 -——红细胞全部不凝集，沉积于孔底呈圆点状。 以使红细胞全部凝集的病毒最高稀释倍数为该病毒的凝集效价。4单位病毒的确定，以上述血凝价除以4即为4单位病毒，如血凝价为1:128，则1:128的0.1ml中有一个凝集单位，4单位病毒为128/4=32，即1:32为4个凝集单位。

某免疫鸡群的新城疫抗体效价监测报告_0

某免疫鸡群的新城疫抗体效价监测报告_0 某免疫鸡群的新城疫抗体效价监测报告核心提示:新城疫是由新城疫病毒引起的鸡和火鸡的一种急性、高度接触性和毁灭性的传染病。新城疫流行于世界各国，在150多个国家和地区都有此病发生。随着高度集约化养鸡业的发展，新城疫的防治也备受关注。近年来，新城疫的 新城疫是由新城疫病毒引起的鸡和火鸡的一种急性、高度接触性和毁灭性的传染病。新城疫流行于世界各国，在150多个国家和地区都有此病发生。随着高度集约化养鸡业的发展，新城疫的防治也备受关注。近年来，新城疫的流行趋势发生了变化，以发病率低、临床症状不明显、病理变化不典型、死亡率低、蛋鸡产蛋量下降为特征的非典型新城疫，使得新城疫的防治变得更加复杂和棘手。新城疫目前仍然是严重危害我国养禽业的主要疾病之一，造成的经济损失十分巨大。除了大量死亡的直接损失外，还因幸存者生长发育受阻、饲料转化率低、产蛋量下降、受精率和孵化率降低以及封锁隔离等措施花费的大量人力和财力所造成的间接经济损失。 由于机体免疫机能状况等很多因素的综合影响，使新城疫疫苗接种效果不佳，甚至免疫失败，新城疫的发病次数仍然很高。再者，由于近十多年来养鸡业的蓬勃发展，使鸡场的数量巨增，星罗棋布，使疫病种类更加复杂化、病情程度更加严重。为了更加有效地防治鸡新城疫，疫苗免疫后鸡新城疫抗体效价监测，常作为免疫效果评价的重要依据。检测家禽血清中鸡新城疫抗体的方法有很多种，包括单向辐射免疫扩散试验、单向辐射溶血试验、琼脂扩散试验、鸡胚中和试验及蚀斑中和试验、酶联免疫吸附试验以及血凝抑制试验(HI)等，但常采用血凝试验(HA)与血凝抑制试验(HI)来定量测定鸡新城疫抗体。ELISA可以半自动化操作，其技术已经普及，并且ELISA与HI有很好的相关性。迄今为止，鸡红细胞血凝抑制试验仍不失为一种快速准确的试验手段。

鸡新城疫抗体水平测定

2018年全国职业院校技能大赛 拟设赛项规程 一、赛项名称 赛项编号：GZ-2018011 赛项名称：鸡新城疫抗体水平测定 英语翻译：Detection of the Antibody against Chicken NewCastle Disease Virus 赛项组别：高职组 赛项归属产业：农林牧渔 二、竞赛目的 本赛项由学校、行业、企业共设，通过技能竞赛，能有效促进全国高职院校畜牧兽医类专业之间的交流，引领专业建设与课程改革；能进一步深化学校与企业之间的合作交流，加大行业人才队伍建设力度，提升行业产业发展水平。同时，通过本赛项的资源转化，可以向社会展示畜牧兽医类专业的师生风采和建设成果，提高专业的教学水平，提升人才培养质量。 三、竞赛内容 本赛项为鸡新城疫抗体水平测定（微量法），测定方法按《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）标准，竞赛时间为180分钟。具体步骤及其分值如下： （一）试验器材准备（占总成绩的8%） 按照操作规程进行器材准备，要求器材选择正确、摆放有序，物品标识合理，桌面整洁等。 （二）配制1%鸡红细胞悬液（占总成绩的18%）

按照操作规程进行采血、离心、洗涤、配制1%鸡红细胞悬液，要求采血规范、熟练、采血量适量、离心机使用规范、洗涤次数及洗涤时间适宜、配制过程规范、1%鸡红细胞量适宜等。 （三）血凝试验（占总成绩的20%） 按照操作规程，用微量移液器在96孔V型血凝反应板1-12孔滴加稀释液、新城疫标准抗原，充分混匀，倍比稀释后，再次滴加稀释液，再添加1%鸡红细胞悬液，充分振荡混匀，静置感作适当时间后，正确判定抗原的血凝效价。要求微量移液器使用规范、倍比稀释操作规范、结果判定正确等。 （四）配制四单位病毒（占总成绩的10%） 根据血凝试验结果，按照操作规程配制四单位病毒。要求稀释倍数计算正确，稀释液体积加入得当、四单位病毒配制量适宜等。 （五）血凝抑制试验（占总成绩的20%） 按照操作规程，对20个被检血清进行血凝抑制试验操作，并设新城疫标准阳性血清对照、阴性血清对照；正确读取标准阴性血清、标准阳性血清及被检血清的结果，确定抗体滴度，完成报告。要求移液器使用规范、反应板各孔的稀释正确、感作时间得当、对照成立、结果判断正确等。 （六）抗体滴度报告（占总成绩的24%） 按照操作规程，正确判定抗体滴度，完成报告。要求抗体滴度判读正确、报告方式正确、结果误差符合要求、场地整洁等。 四、竞赛方式 本赛项为团体赛。每组参赛学生2名，比赛由2名学生配合完成，参赛选手均为高职院校在籍学生，不得跨校组队。