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斑点杂交

斑点杂交

一、基本原理

具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下(适宜的温度及离子强度等)可按碱基互补原则形成双链,此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。

二、器材

杂交炉,PCR 仪,Bio-Rad 紫外分光光度仪,镊子等。

三、试剂

1.尼龙膜,带阳性电荷,Roche公司产品。

2.Herring sperm DNA

3. 甲酰胺

4. Denhardt

5. Blocking reagent

6.Anti-Digoxigenin-AP, Fab fragments (from sheep): Roche公司产品

NBT/BCIP

7.Buffer 1:50mM Tris-HCl(pH7.5)、150mM NaCl。

8. Buffer 2:90%Buffer 1、10% 封闭液。

9. Buffer 3:100mM Tris-HCl(pH9.5)、100mM NaCl、50 mM MgCl。

10. 显色液:25μl NBT(100mg/ml)、19μl BCIP(50mg/ml),加5ml Buffer 3。

11. 终止液:10mM Tris-HCl(pH8.0)、1mM EDTA。

12.杂交buffer: 50%甲酰胺、5×SSC、5×Denhardt溶液、25μg/ml经变性并断

裂成片段的鲑精DNA。The hybridization buffer can be stored frozen at -20℃.

13. 10% SDS (w/v)

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