几种药用植物内生真菌抗真菌活性的初步研究
几种药用植物内生真菌抗真菌活性的初步研究
#64#微生物学通报 2001年28(6)
参考文献
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几种药用植物内生真菌抗真菌活性的初步研究*
李桂玲王建锋黄耀坚郑忠辉苏文金
(厦门大学生命科学院厦门 361005)**
摘要:从三尖杉,南方红豆杉及香榧中分离出172株内生真菌,对其进行抗菌活性检测,
结果表明共90株内生真菌对一种或多种植物病原真菌,如红色面孢霉(Neurosporasp.),
木霉(Trichodermasp.),镰刀菌(Fusariumsp.)等有抑制作用,来自三尖杉、南方红豆杉
和香榧的抗菌活性菌株比例分别为40%,5412%及5711%。其中平板抑菌圈直径大于
15mm的高抗菌株有35株。按Ainsworth等鉴定系统和方法进行鉴定,具有抗菌活性的内生
真菌主要分布于拟青霉属、镰孢菌属等18个属中。
关键词:内生真菌,抗真菌作用
中图分类号:Q93915 文献标识码:A 文章编号:0253-2654(2001)06-0064-05
STUDYONTHEANTIFUNGALACTIVITIESOFENDOPHYTICFUNGI
ISOLATEDFROMSEVERALPHARMACEUTICALPLANTS
LIGu-iLing WANGJian-Feng HUANGYao-Jian ZHENGZhong-Hui SUWen-Jin
(LifeSciencesInstituteofXiamenUniversity,Xiamen,361005)
Abstract:Onehundredandseventy-twostrainsofendophyticfungiwereisolatedfromTaxusmairei,Cephalotaxus
fortuneiandTorreyagrandiscv.merrillia.Theresultoftheantifungalassayshowsthatni netystrainsofthefungi
haveantagonismagainstoneormorebotanicalpathogenicfungi,suchasNeurosporasp.,Tri chodermasp.,Fusar-i
umsp.etc.Thepercentageofantifungalstrainstotestedstrainsareasfollows:40%Cephal otaxusfortunei,
*教育部高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(No.96038402)
**通讯联系人
收稿日期:2000-11-13,修回日期:2001-01-31
2001年28(6) 微生物学通报
#65#5412%Taxusmairei,5711%Torreyagrandiscv.merrillia.Thirty-fivestrainshavehighantifungalactivities,and
theirinhibitionzonediameterisatleast15mm.Theactiveendophyticfungiwereidentifie das18genera,mostof
whichbelongtoPaecilomycesandFusariumetc.
Keywords:endophyticfungi,antifungalaction
真菌是由不同进化途径的类群组成的,现已发现69,000种,而且每年尚以1000余种的新种递增。保守的估计,全世界真菌的总数可达150万余种[1],故真菌有/生物资源的宝库0之称。真菌和植物的相互关系极其有趣和复杂,它们可以是寄生、共生或互生。其共生关系主要表现在:一方面,植物为内生真菌提供光合产物和矿物质;另一方面内生真菌的代谢
物能刺激植物的生长发育。业已证明,内生真菌能够参与植物活性成分的合成,或者对植物次生代谢产物进行转化。
目前人们所利用的微生物资源仅是自然界存在微生物的一小部分,现存的微生物资源
急需环境的有效保护、大量的分离和培养菌种才能有效地保存和利用。但是环境资源保护并不能使资源优势转化为具有经济效益的天然产品,真菌资源的真正价值在于受到切实重
视和有效的利用。从这个意义上说,内生真菌的研究对于植物-真菌共生生态、天然产物的开发等有着重要的意义。
本文旨在通过对分布于福建省的几种珍稀药用植物的内生真菌抗真菌活性的初步研究,确定抗真菌活性菌株的生态分布及其抗菌特性,从而为植物-真菌生态关系的研究以及植物内生真菌资源的利用提供依据。
1 材料
111 材料及来源
南方红豆杉(Taxusmairei)树皮样品:采自福建省尤溪县汤川和黄林两地及福建省武夷山自然保护区,树径为20~80cm,海拔800~900m。
三尖杉(Cephalotaxusfortunei)树皮样品:采自福建省武夷山自然保护区,树径为
10~50cm,海拔800~900m。
香榧(Torreyagrandiscv.merrillia)树皮样品:采自福建省武夷山自然保护区,树径为30~120cm,海拔900m左右。
112 拮抗测定指示菌
红色面孢霉(Neurosporasp.),葡萄状穗霉(Stachybotryssp.),弯孢霉(Curvular-iasp.),轮枝孢霉(Verticilliumsp.),镰刀菌(Fusariumsp.),木霉(Trichodermasp.)。
2 方法
211内生真菌分离
采用平板倾注法[2,3]。上述南方红豆杉、三尖杉、香榧植物样品(带有少量木质部的树皮)采集后即予处理分离。即用无菌小刀去除外皮层和木质部,取内皮层及韧皮部用70%乙醇消毒3min,无菌水冲洗3min。将大约015g的树皮加2mL的无菌水于研钵中充分研磨后,取011mL的匀浆液于培养皿中,加入10~15mL的含终浓度50mg/L庆
#66#微生物学通报 2001年28(6)大霉素的PDA培养基,25e培养,待菌丝长出后,经过纯化,挑出单菌落于斜面上。212 内生真菌液体培养及发酵液处理
液体培养采用PDA液体培养基,取菌丝块接种,25e,120r/min培养7d。发酵液经冻融,匀浆后,4000r/min离心5min,取上清液,过滤除菌。
213 抑菌实验
采用滤纸片法[4~7]。将斜面培养的指示菌用无菌水洗下其孢子,与适量培养基混匀(孢子终浓度约为106个/mL),倒平板。待培养基凝固后,将无菌滤纸片( =5mm)用样品浸湿,贴放于培养基上,25e培养48h,测量抑菌圈直径。
214菌株鉴定
按Ainsworth等真菌鉴定系统和方法进行鉴定[8,9]。
3 结果及分析
311 植物内生真菌的抗真菌活性
从上述3种植物中共分离得内生真菌172株,其中红豆杉107株,三尖杉30株,香榧35株。内生真菌拮抗实验结果见表1。从表1可以看出,172株供测菌株中,共有90株内生真
菌对一种或多种指示菌有抑制作用(占总分离菌株数的5213%)。3种植物内生真菌的抗菌活性菌株所占比例都超过40%,香榧抗菌活性菌株所占比例最高,达5711%。这表明,植物内生真菌中存在着广泛的抗真菌资源。
表1 内生真菌的抗真菌活性及宿主分布
宿主
植物
红豆杉
三尖杉
香榧
总计供测菌株(株)1073035172抗菌活性菌株数(百分
比)58(5412%)12(40%)20(5711%)90(5213%)抗菌活性菌株的分布(株)A 49 18 15
82B92415C2091140D291535
A:无抗菌活性,B:抑菌圈直径15mm.
从表1还可以看出,3种植物内生真菌活性菌株的分布有较大差别。红豆杉内生真菌抗真菌高活性菌株(抑菌圈直径>15mm)所占比例最高,三尖杉的最低。而香榧内生真菌中,一般活性菌株(抑菌圈直径10~15mm)所占比例最高,低活性菌株(抑菌圈直径
312 香榧内生真菌抑菌活性
香榧内生真菌的抗菌活性主要表现在对葡萄状穗霉的抗性上,35株供测菌株中,共有14株(占40%)对葡萄状穗霉有抗菌活性,对镰刀菌有抗性的菌株也较多,占供测菌株的2816%,但未发现对弯孢霉有抗性的菌株。香榧内生真菌高抗菌株较少,5株抗真菌高活性的菌株主要对轮枝孢霉起抑制作用。高活性菌株多数分布在隔指孢属(Dactylium)中。
313 红豆杉内生真菌抑菌活性
红豆杉内生真菌中,对红色面孢霉有抗菌活性的菌株最多,共有28个菌株(占供测菌株的2614%),而对轮枝孢霉有抗菌活性的菌株最少,仅有4株(约占总供测菌株
2001年28(6) 微生物学通报#67#的318%)。其活性菌株主要分布在拟青霉属(Paecilomyces)及头孢霉属(Cephalospo-rium),高抗菌株也主要为拟青霉属的菌株,且多数可以抑制红色面孢霉的生长。314 三尖杉内生真菌抑菌活性
三尖杉内生真菌中,对红色面孢霉及弯孢霉有抗性的菌株所占比例最高,各占总供测菌株的2313%,未发现对木霉有抗菌作用的菌株。其高活性菌株较少,仅有1株,为一种被孢霉
(Mortierellasp.),该菌株对红色面孢霉及弯孢霉均有较强的抗菌作用。三尖杉内生真菌抗菌活性菌株主要分布在拟青霉属中。
315 植物内生真菌抗菌活性菌株鉴定结果统计
3种植物内生真菌抗菌活性菌株分布在18个属中(见表2),其中以拟青霉属为主,占活性菌株的617%。此外,3种植物内生真菌活性菌株的种属分布具有多样性。红豆杉内生真菌活性菌株分布在16个属中,以拟青霉属、镰孢菌属、头孢霉属及枝孢霉属为主,各占活性菌株的1017%、816%、816%和816%;三尖杉内生真菌活性菌株较少,分布在拟青霉属及被孢霉属等属中;而香榧内生真菌活性菌株分布在5个属中,以枝孢霉属为主。
表2 3种植物内生真菌抗菌活性菌株属的分布(单位:株)
属
拟青霉属(Paecilomyces)
被孢霉属(Mortierella)
头孢霉属(Cephalosporium)
枝孢属(Cladosporium)
镰孢菌属(Fusarium)
阜孢霉属(Papularia)
葡萄孢属(Botrytis)
拟小卵孢属(Ovulariopsis)
地霉属(Geotrichum)
毛霉属(Mucor)红豆杉6355521243三尖杉4100000000香榧0004031100属木霉属(Trichoderma)头珠霉属(Oedocephalum)腐霉属(Pythium)明枝霉属(Hyalodendron)掷孢酵母属(Sporobolomyces)丛梗孢属(Monilia)隔指孢属(Dactylium)链二孢属(Biospora)未知属红豆杉3211110013三尖杉000000007香榧000000119
4 讨论
植物内生真菌指的是生长在植物体的根、茎及叶等组织中的细胞间隙或细胞内,与植物建立无害的共生关系的一类真菌,是植物微生态系统中的天然组成成分。也有人认为内生真菌是指整个生活史或生活史的某个阶段,侵入活体植物组织内,而引起不可见、非炎症感染的真菌[12]。植物内生真菌在进化过程中与宿主建立了和谐的联合关系,其次生代谢产物是十分丰富的,是天然产物的重要来源。我们的工作结果表明,植物内生真菌中广泛分
布着抗菌活性菌株(占供测菌株的40%以上)。内生真菌的拮抗作用、生态分布及属种分布具有多样性。3种植物中内生真菌抗菌活性菌株的种属类型及数目具有较大差异,红豆杉内生真菌的抗菌活性菌株类型较多,三尖杉的较少。同属的内生真菌对不同的植物病原菌拮抗作用及抗菌效果各不相同。不同属种的菌株对同一指示菌的抗菌作用也有较大差别,对红色面孢霉有拮抗作用的菌株种类较多。
植物病原真菌的感染是引起植物病害,造成作物减产的重要原因。目前,对植物病害的防治均采用化学农药杀灭病原菌,而化学农药对人畜的毒副作用和残留问题至
[7,10,11][7,10,11]
#68#微生物学通报 2001年28(6)今仍难以解决。随着越来越多抗药性植物病原菌的出现,寻找其它可替代的、毒副作用小,安全有效的农药来防治植物病害成了农业可持续发展的焦点问题[13]。以上结果表明,高活性菌株在内生真菌中占有一定比例,占总供测菌株的20%以上。而抑菌作用最强的菌株,对木霉的平板抑菌圈直径达46mm。在3种植物的内生真菌中,存在着比较罕见的抗菌活性菌株,如子囊菌及瘤座孢科和暗色孢科的某些种,值得进一步研究。因此,植物内生真菌是重要的抗菌药用资源。开发植物内生真菌,寻找新的抗菌活性物质具有广阔的前景。
致谢本课题承蒙胡志钰老师,程阳健同学的大力支持和帮助,在此表示衷心感谢。
参考文献
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底物的分散和溶解对甾体微生物酶反应的影响*
阳葵李晓静冯霞尹强赵海燕
(天津大学理学院化学系天津 300072)
摘要:甾体的溶解是微生物转化反应的控制步骤。表面活性剂对憎水性物质的增溶作
用是具有憎水内核胶团形成的直接结果。随表面活性剂溶液浓度的增加,胶团数目增加,甾体水溶性增强。复配型分散剂PSE-MGE应用于甾体转化体系,相对于单组分分散剂PSE而言,实现同一程度甾体水溶性增强所需的表面活性剂用量减少,对菌体生长的负面影响较小,有利于转化。超声与分散剂配合使用的效果优于分散剂单独使用的效果,且使用较强的超
声声强(1214W/cm2)和较短的超声时间(5min)时效果最佳。
关键词:甾体化合物,微生物转化,分散剂,超声,溶解
中图分类号:Q93 文献标识码:A 文章编号:0253-2654(2001)06-0068-04
*国家自然科学青年基金资助项目(No.29606008)
天津市自然科学基金资助项目(No.993607111)
收稿日期:2000-11-20,修回日期:2001-03-25
几种药用植物内生真菌抗真菌活性的初步研究
几种药用植物内生真菌抗真菌活性的初步研究 #64#微生物学通报 2001年28(6) 参考文献 [1]MasatoshiGOTO,EijiKUWANO,WerasitKANLAYAKRIT,ShinsakuHAYASHIDA,BiosiBiotechB iochem,1995,59: 16~20. [2]MASTOSHGOTO,TSUYOSHISEMIMARU,KENSUKEFURUKAWA,SHINSAKUHAYASHIDA,APPLENVIRONM I- CROBIOL,1994,60:3926~3930. [3]KeijiKAINUMA,HiroshiISHIGAMI,ShoichiKOBAYASHI,JJpnSoc.Starchsci,1985,31:136 ~141. [4]ShinsakuHAYASHIDA,andPerfectoQ.FLOR,AgricBiolChem,1981,45:2675~2681. [5]Cheor-lHoKim,Suk-TaeKwon,HajimeTaniguchi,Dae- SilLee,BiochimicaetBiophysicaActa,1992,1122:243~ 250. [6]HiroshiMorita,KouheiMizuno,MayumiMatsunage,YusakiFujio,JApplGlycoci,1999,46 :15~21. [7]Jun-ichiABE,SusumuHIZUKURI,JJpnSocStarchSci,1988,35:p.43~47. [8]TomokoTAKAHASHI,KeikoKATO,YoshioIKEGAMI,MasachikaIRIE,JBiochem,1985,98:663-671. [9]KohsaiFukuda,YujiTeramoto,M.Goto,J.Sakamoto,S.Mitsuiki,Hayashida,BiosciBiot echBiochem,1992, 56:556~559.
抗真菌药
抗真菌药 第一节基本概述 一、真菌感染分类：浅部真菌感染、深部真菌感染 1、浅部真菌感染： ①致病菌：各种癣菌引起 ②侵犯组织：皮肤、毛发、指(趾)甲等引起手足癣、体癣、股癣、叠瓦癣、甲癣、头癣、黄癣等。 ③特点：浅部真菌感染发病率高。 2、深部真菌感染： ①致病菌：白色念珠菌、新型隐球菌、粗球孢子菌、荚膜组织胞浆菌等。 ②侵犯组织：内脏器官和深部组织 ③特点：发病率虽低但病情严重，病死率较高 二、抗真菌药物分类： 1、按作用分类： ①抗深部：两性霉素B 、咪唑类、三唑类 ②抗浅表：灰黄霉素、制霉菌素、局部应用的咪唑类 2、按化学结构分类： ①唑类： ●咪唑类——克霉唑、咪康唑、酮康唑 ●三唑类——氟康唑、伊曲康唑 ②多烯类：两性霉素B、制霉菌素 ③嘧啶类：氟胞嘧啶 ④烯丙胺类：特比萘芬 ⑤其它类：灰黄霉素 第二节抗真菌药物 （一）抗生素类抗真菌药： 一、两性霉素B ： 1、机制： ①与真菌细胞膜的麦角固醇选择性结合，在细胞膜上形成孔道，增加细胞膜通透性，导致细胞内许多 小分子物质外漏，造成细胞死亡。 ②细菌的细胞膜不含固醇，故对细菌无作用 ③哺乳动物的红细胞、肾小管上皮细胞的细胞膜含有固醇→溶血、肾脏损害等毒性反应。 本药与真菌细胞膜上的麦角固醇亲和力大于对哺乳动物细胞膜固醇的亲和力，故毒性相对低。 2、药理作用： ①广谱：对多种深部真菌如新型隐球菌、白色念珠菌、粗球孢子菌、荚膜组织胞浆菌、皮炎芽生菌、 孢子丝菌、曲霉茵、毛霉菌具有良好的抗菌作用（几乎对所有真菌均有抗菌活性） ②高浓度有杀菌作用。 3、体内过程： ①口服及肌注均难吸收，静脉滴注 ②不易透过BBB 4、临床应用： ①深部：静脉滴注用于全身或内脏真菌感染 ②真菌性脑膜炎：除静脉滴注外，还需鞘内注射
抗真菌药物研究进展
抗真菌药物研究进展 张庆柱 第一部分概述 一、真菌类型与致病性 真菌（fungus）是一种真核生物, 在自然界分布广泛，对人类致病的真菌分为浅部真菌和深部真菌，因此, 一般将真菌感染（fungal infections）分为浅部真菌感染和深部真菌感染两大类。 1．浅部真菌感染常由各种皮肤癣菌引起，主要侵犯皮肤、毛发、指（趾）甲等，引起手足癣、体癣、股癣、叠瓦癣、甲癣、头癣等。浅部真菌感染发病率高，治疗药物主要为抗浅部真菌感染药和外用（局部应用）抗真菌药。 2．深部真菌感染是由真菌引起的深部组织和内脏器官感染, 如肺、胃肠道、泌尿道等感染, 严重者可引起心内膜炎、脑膜炎和败血症等。深部真菌感染多由白假丝酵母菌（白色念珠菌）、新型隐球菌、粗球孢子菌、荚膜组织胞浆菌和皮炎芽生菌等引起。条件致病性真菌感染多为内源性，如假丝酵母菌病和曲霉病等。 近年来，深部真菌感染的发病率呈持续上升趋势，且病情严重，病死率高。尤其在严重全身性疾病（如糖尿病、恶性肿瘤、获得性免疫缺陷疾病等）时，机体免疫功能明显下降，或长期应用广谱抗生素、免疫抑制剂、肾上腺皮质激素等药物时更易发生。治疗药物主要有两性霉素B、氟胞嘧啶及唑类等抗深部真菌感染药。 二、真菌结构与药物作用机制 真菌的基本结构有细胞壁、细胞膜、细胞核、内质网、线粒体等。根据作用机制抗真菌药物可以分为如下四类。 （一）作用于真菌细胞壁 细胞壁作为真菌与周围环境的分界面，起着保护和定型的作用，其主要成分包括几丁质、β-(1,3)-D-葡聚糖和甘露糖蛋白。抑制细胞壁组分的合成或破坏其结构，可以达到抑制、杀灭真菌的目的。由于哺乳动物无细胞壁，因此真菌细胞壁抑制剂具有选择性，对机体影响较小。根据作用靶位，又可分为：①β-(1,3)-D-葡聚糖合酶抑制剂：脂环肽类是结构上含有环肽和脂溶性侧链的天然抗生素大家族，以棘白霉素类（echinocandins）为代表，可以非竞争性抑制β-(1,3)-D-葡聚糖合成酶, 抑制许多丝状真菌和酵母菌细胞壁的一种基体成分β(1,3)-D-葡聚糖的合成, 从而破坏真菌细胞壁，导致细胞内容物渗漏。②几丁质合酶抑制剂。③甘露糖蛋白抑制剂。 （二）作用于真菌细胞膜 真菌细胞膜与哺乳动物细胞膜比较相似，含有磷脂、鞘脂、固醇和蛋白质。 1．作用于麦角固醇麦角固醇是真菌细胞质膜的重要成分，与哺乳动物细胞的胆固醇类似，能稳定细胞膜结构，减小流动性。细菌的细胞质膜上无类固醇，故作用于麦角固醇的抗真菌药物对细菌无效。 （1）唑类（azoles）：包括咪唑类（imidazoles）和三唑类（triazoles），通过咪唑环上未被取代的氮原子与血红素卟啉基上的Fe络合，抑制14α-去甲基酶（14α-demythyelase，14-DM），造成固醇前体的积累和麦角固醇的耗尽，导致真菌质膜结构和功能的改变。
药用植物内生真菌产次生代谢产物的研究进展
药用植物内生真菌产次生代谢产物的研究进展 徐范范 △ (综述),金 波,丁志山 ※ (审校) (浙江中医药大学,杭州310053) 中图分类号:R732354 文献标识码:A 文章编号:100622084(2010)1722667203 基金项目:浙江省自然科学基金(Y2080580) 摘要:植物内生真菌是一大类未被充分研究过的新的微生物资源,具有潜在的应用前景。随着对药用植物内生真菌研究的深入,从药用植物内生真菌中寻找新的生物活性成分已成为研究热点。总结近年药用植物内生真菌产生的抗肿瘤、抗菌等活性次生代谢产物最新的研究进展,内生真菌活性成分已成为发现新颖结构化合物及新药物的重要资源。 关键词:药用植物;内生真菌;次生代谢产物 Recen t Stud i es on the Secondary M et abolites Produced by M ed i c i n a l Pl an t Endophyti c Fung i XU Fan 2fan,J IN B o,D IN G Zhi 2shan .(Zhejiang Chinese M edical U niversity,Hangzhou 310053,China )Abstract:Plant endophytic fungi are a large class of ne w m icr obial res ources not fully studied,with po 2tential app licati ons .W ith the devel opment of researches in the field of endophytic fungi of medicinal p lants,the research on novel original bi oactive compounds fr om endophytic fungi has become a ne w hots pot .This ar 2ticle revie wed the recent p r ogress on studying anti 2tumor and anti 2bacterial activity of secondary metabolites p r oduced medicinal p lant endophyte .The active ingredient of endophytic fungi has become an i m portant s ource which found the ne w structure of compounds and new drugs .Key words:Medicinal p lants;Endophytic fungi;Secondary metabolites 近年来,从天然产物中筛选生物活性成分成为研究创制新药的有效途径之一。植物历来是筛选天然药物最主要的原料,但药用植物的过度使用,致使许多药用植物濒临灭绝。为解决资源问题,近年来药用植物新资源研究的一个热点集中在药用植物内生菌上。植物内生真菌是指生活史中的某一段生活在健康植物组织内部,并不引起宿主植物出现明显病害症状的一类真菌,它是生活在植物组织内的一类微生物,是植物微生态系统中的天然组成成分。内生真菌长期生活在植物体内的特殊环境中,并与寄主协同进化,根据内共生理论,内生真菌可能产生与宿主相同或相似的具有生物活性的次生代谢产物。研究发现,内生真菌能产生许多活性次级代谢产物,从而能够增强植物的抗逆性,表现在非生物胁迫(如抗高温、抗干旱等)和生物胁迫(如阻抑昆虫和食草动物的采食、抵抗病虫害等)方面,这些活性次级代谢产物具有抗菌、抗肿瘤等生物活性。1993年,美国蒙大拿州立大学的Str obel 小组在短叶红豆杉内生真菌Taxomyces andreanae 中发现紫杉醇[1] ,国内外掀起对药用植物和濒危植物内生真菌的研究热潮。研究热点主要集中在新的抗肿瘤、抗菌等活性化合物的发现,植物内生真菌已成为发现新天然活性物质的重要资源。现对近年来药用植物内生真菌产次生代谢产物的研究进展予以综述。1 具抗肿瘤活性的化合物1.1 产紫杉醇及其衍生物 的化合物 紫杉醇是存在于 各种紫杉属植物树皮和树叶 中的萜类化合物,被当今世界上认为是广谱、活性最强的抗癌药物。1971年美国学者W ani 从短叶红豆杉的树皮中提取出了具有独特的抑制微管解聚和稳定微管作用的紫杉醇,开辟了一个抗 肿瘤药物研制的新时代。2006年,田仁鹏等[2] 从生长在湖北的南方红豆杉树皮中韧皮部分离出一株能产紫杉醇的菌株TPF6,其发酵液中紫杉醇含量为 84.5μg/L 。2008年,孙端方等[3] 从罗汉松中分离到了1株产紫杉醇内生真菌EPTP 21,对Ver o 细胞表现 出明显的致细胞凋亡作用。赵凯等[4] 从东北红豆杉中分离筛选到1株能够产生紫杉醇菌株HD181223,发现其紫杉醇产量为206.34μg/L,而且该菌株的发酵提取纯化产物对He La 细胞具有较强的抑制作用。产生紫杉醇的内生菌具有丰富的物种多样性。这些内生真菌既有新种,如安德紫杉菌;也有新记录种,如树状多节孢菌;更多的则是常见的真菌,如链格孢菌、头孢菌等。当前,对产紫杉醇内生菌的开发 利用研究正在进行之中,已在菌株生产、发酵条件、分子生物学等基础研究方面取得了较大的进步。1.2 产喜树碱及其衍生物的化合物 喜树碱(ca mp t othecine )是拓朴异构酶Ⅰ的专属性抑制剂,在临床上广泛应用于肝癌、胃癌、膀胱癌及白血病等的 治疗。闵长莉等[5]采用组织块法从喜树果实中分离 筛选得到13株纯化的内生菌株,经过摇瓶发酵培养后,采用薄层色谱法与高效液相色谱法对其菌丝体提取物进行分析,发现有1株菌株能够产生102羟基喜树碱,其102羟基喜树碱产量为677μg/L,并将该菌株命名为XK001。随后用同样的方法从树皮中分离纯化得到另一菌株XK002,其102羟基喜树碱产量 为410μg/L [6] 。 1.3 产鬼臼毒素及其衍生物的化合物 鬼臼毒素
分离植物内生真菌操作流程
分离植物内生真菌操作流程 1.材料准备：植物样本、剪刀、镊子、70%乙醇、3%次氯酸钠（本实验用4%84）、 酒精灯、计时器、平板、锥形瓶，无菌水，离心管（带盖，灭菌）、打开无菌操作台灭菌30min。 （1）植物样本的采集：选取生长状态良好，不要有病斑或者枯枝烂叶，每种植物采取三株标本，要带有叶子、叶柄和枝条及其他部位，将样本名字写在 小纸条上放在装标本的袋子里，采下来的标本与写有名字的纸条一同拍照，样本上有脏东西时，请用纸轻轻擦掉，若不清楚植物名字，请将整棵植物 拍照留用于鉴定，并做好相关记录。 （2）制作PDA固体培养基，在无菌操作台中倒平板，每瓶250ml的培养基大概倒15个板，待其凝固后用于接种。 2.清洗：认真用清水将标本洗净，洗去标本表面的灰尘，去除枯叶，备用。 3.取样： （1）在叶片的左上、右上、左下，右下和正中五个部位进行取样，剪取5mm*5mm的叶片，如果是叶柄或枝干，则剪取5~10mm，若是比较 粗的枝干或圆圆的果实之类的，总之比较大的，则将它切开，再剪取 样本，样本不要剪的太大或太小。 （2）每种植物的叶子，叶柄，枝干等其他部位，每种部位接种两块板，大板每个要接种五个样本即左上、右上、左下，右下和正中，小板每个 接种四个样本即左上、右上、左下，右下，计算好所要剪的样本数， 尽量多剪几个，以免后面的表面灭菌中冲洗时被冲掉。 （3）若植物标本有剩余，且是没有洗过的，重新装好，放到冰箱里，备用，洗过的扔掉。 （4）每种植物标本所剪的样本放在一个50ml的离心管中，放在试管架上，并且每个离心管上要标好所对应的植物标本。 4.表面灭菌：在无菌操作台中进行 （1）先向各离心管内倒入适量（10~20ml）70%乙醇，拧紧盖子，用计时器开始计时1min,每10秒钟晃动离心管几次，使其充分灭菌。 （2）1min后，拧松盖子，将乙醇倒入事先准备的锥形瓶中，注意不要将管
抗真菌药物的研究进展_刘正印
文章编号:1001-8689(2006)02-0069-03 抗真菌药物的研究进展Advances in antifungal agents 刘正印 王爱霞 Liu Zheng -y in and Wang Ai-x ia (中国医学科学院北京协和医院, 北京100730) (P eking U nio n M edical Co llege Ho spit al,Chinese A cademy of M edical Sciences, Beijing 100730) 摘要: 近20多年来,随着大量广谱抗生素的应用、骨髓和脏器的移植、皮质激素及免疫抑制剂的应用、艾滋病发病率的增加、各种导管的介入和真菌检测技术的提高,念珠菌血症和系统性曲霉感染逐渐增多。北京协和医院报道在四个不同年代败血症血培养的结果显示,1994～1995年真菌发生率为8.1%;2000年为6.7%。20年149例真菌感染的分析显示,真菌感染呈逐年上升的趋势。临床上已有耐氟康唑的念珠菌和耐两性霉素B 的曲霉存在。因此需要新的抗真菌药物。目前即将推出和已上市的新药有:多烯类的制霉菌素脂质体、两性霉素B 脂质体剂型A mBisome 、两性霉素B 脂质体复合物A belect 、两性霉素B 胶样分散体Amphot ec 、伊曲康唑口服液和注射剂、伏立康唑注射剂和口服片剂以及卡泊芬净注射剂。各种新药均有其特点与不良反应,但总的是新药的开发和临床应用,将会对侵性真菌感染提供有力的治疗措施,真菌感染的治疗前景将会有进一步的改观。 关键词: 抗真菌药; 多烯类; 三唑类; 棘白菌素类中图分类号:R978.5 文献标识码:A 第十届全国抗生素学术会议大会报告。 作者简介:刘正印,男,生于1966年,硕士,副主任医师。 在过去的二十年里,随着大量广谱抗生素的应用、骨髓器官移植的开展、糖皮质激素及免疫抑制剂的应用,导管介入治疗,特别是艾滋病的流行,念珠菌血症和系统性曲霉病等系统性真菌感染逐渐增多。资料显示,上述人群中深部真菌感染发生率约为11%～40%,病死率为40%[1～3] 。北京协和医院四个不同年代败血症培养的结果显示,1994～1995年真菌败血症的发生率高达8.1%[4];2000年真菌败血症的发生率达6.7%。20年149例真菌感染的分析显示,真菌感染呈逐年上升趋势[5]。去氧胆酸两性霉素B(AMB)作为治疗系统性真菌感染的广谱抗真菌药已成为治疗真菌感染的金标准,但由于不良反应限制了其广泛应用。临床上已经发现有耐氟康唑的念珠菌和耐两性霉素B 的曲霉存在,因此近年来一些新的抗真菌药物包括三唑类、棘白菌素类以及毒性较小的两性霉素B 衍生制剂不断出现,应用于临床取得显著疗效[6] 。 治疗系统性真菌感染的药物现共有多烯类(两性霉素B 及其衍生物)、三唑类(如氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑等)、嘧啶类(如氟胞嘧啶)、棘白菌素类(如卡泊芬净)、复方磺胺甲口恶唑等。第一个治疗系统性真菌感染的抗真菌药物制霉菌素由于毒性大而逐渐被停用;1959年两性霉素B 产生,在20世纪70年代早期和80年代分别研究出氟胞嘧啶和酮康唑,随着氟胞嘧啶的 临床应用很快出现对氟胞嘧啶耐药现象,而酮康唑的毒性也使其临床应用受到很大的限制。20世纪90年代三唑类如氟康唑、伊曲康唑由于疗效确定且不良反应较少,迅速广泛用于临床治疗系统性真菌感染。自1990年至今的14年中,先后上市并应用于临床的药物有氟康唑、伊曲康唑、两性霉素B 的不同剂型[包括两性霉素B 脂质体(L -AM B )、两性霉素B 胶体分散体(ABCD)、两性霉素B 脂质复合物(ABLC)],卡泊芬净(caspo fungin)及伏立康唑等。不久还有其它更多的药物将应用于临床如普沙康唑(po saco nazo le)、拉夫康唑(r av uconazole )、制霉菌素脂质体(lipo som al nystatin ,nystatin LF,商品名:Nyotran)以及micafung in (FK-463)这些药物不但毒副作用少,而且在某种程度上比两性霉素B 效果还好[6]。1 多烯类药物 (1)制霉菌素脂质体 制霉菌素属多烯类抗真菌药,具有广谱抗真菌作用,对新型隐球菌、念珠菌属、曲霉等均有良好作用,经皮肤黏膜用药不吸收,口服几乎全部自粪便排出对深部真菌感染无治疗作用,注射用药肾毒性大。临床上仅限于局部治疗口咽部、胃肠道及阴道真菌感染。Aronex 公司将游离制霉菌素包裹在多层脂质中,研制出注射用制霉菌素脂质体(lipo som alny statin ,Ny s- ? 69?中国抗生素杂志2006年2月第31卷第2期
常见抗真菌药物比较
常见抗真菌药物比较 申 克 孢 子 丝 菌 ± + - - + 8
1、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、棘白菌素、多烯类抗菌谱摘自于第39版桑福德抗微生物治疗指南，咪康唑、丙烯胺类抗菌谱搞自于产品说明书； 2、-无活性；±可能有活性；+有活性，三线治疗（至少临床有效）；++有活性，二线用药（临床作用稍差）；+++有活性，一线用药（临床常常有效）； 3、棘白菌素类、伏立康唑、多烯类尿中浓度很低； 表2，真菌药物不良反应比较 8
抗真菌药物严重不良反应汇总（不良反应分系统排序） 胃肠道反应： 特比奈芬>咪康唑>两性霉素B >两性霉素B脂质体>伊曲康唑>伏立康唑、氟康唑>米卡芬净、卡泊芬净肝功能不良反应： 两性霉素B >两性霉素B脂质体>卡泊芬净、米卡芬净>伊曲康唑>伏立康唑>氟康唑 米卡芬净说明书中黑框警告：有严重肝损害的报道，有导致肝脏肿瘤的潜在风险。 肾功能不良反应： 两性霉素B >两性霉素B脂质体>伊曲康唑>伏立康唑>氟康唑>卡泊芬净、米卡芬净 8
表3，真菌药代动力学比较 8
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备注：该表格数据来源于各产品说明书 与细菌感染性比较，侵袭性真菌感染发病隐匿、不易诊断，抗真菌治疗目标性差，合理使用抗真菌药物已经成为临床严峻的挑战。临床医师需要加强对侵袭性真菌感染的关注，掌握不同类别抗真菌药物特点，合理使用。 临床可供使用的治疗侵袭性真菌感染的药物有如下几类，各自特点不同，需要注意选择。 两性霉素B及其脂类制剂 两性霉素B是最早应用于临床的治疗侵袭性新型真菌感染药物，其普通制剂为去氧胆酸盐，不良反应明显。近年来开发的两性霉素B脂制剂安全性明显提高，成为临床重要的侵袭性真菌感染治疗药物。这些制剂包括两性霉素B脂质复合体、两性霉素B胶质分散体、两性霉素B脂质体。 该类制剂特点为：①药物易分布于网状内皮组织，肝、脾和肺组织中，减少肾组织浓度，低血钾少见，肾毒性均低于普通制剂。②临床可应用较高剂量，一般3~6mg/(kg.d)，滴速相对快。③长程用于艾滋病病人，对曲霉菌、隐球菌、念珠菌的耐受性好。④脂类制剂的剂量为常规制剂的3～5倍时,治疗念珠菌菌血症和隐球菌脑膜炎的疗效与常规制剂相仿。 三唑类抗真菌药物 8
抗真菌药伊曲康唑的临床药理学研究进展
综述 Revie w 抗真菌药伊曲康唑的临床药理学研究进展 Advance i n search for cli n i ca l pharmacology on an ti fuga l drug of itraconazole 收稿日期:2008-06-05修回日期:2008-10-25 作者简介:陈江飞(1979-),男,主管药师,主 要从事临床药学工作 通讯作者:陈江飞 Tel:(0574)87085157E 2mail:chenjiangfei@1631com 陈江飞1,苗彩云2,朱素燕1 ,胡毅坚 1 (11宁波市第一医院药剂科,浙江宁波 315010;21宁波市妇女儿童医院药剂科,浙江 宁波 315012) CHE N J iang 2fei 1 ,M I A O Cai 2yun 2 ,ZHU Su 2yan 1 ,HU Yi 2jian 1 (11D epart m en t of Pha r m acy,N ingbo N o 11Hospita l,N ingbo 315010,Zhe 2jiang P rovince,China;21D epart m ent of Phar m acy, N ingbo W o m en and Children p s Hospital,N ingbo 315012,Zhejiang P rovince,China ) 摘要: 伊曲康唑为三唑类抗真菌药物,对浅表真菌、深部真菌感染均有显著疗效,毒副作用小,临床应用广泛。本文对其在人体内的吸收、分布、代谢、排泄特征及临床研究作一综述。 关键词:伊曲康唑;抗真菌药;药代动力学 中图分类号:R96911;R97815 文献标识码:A 文章编号:1001-6821(2009)02-0153-05 Abstract: Itraconaz ole,as one of the triz ole antifugal drug,is notably effective on superficial and deep fungal infecti on,and widely used f or br oad 2s pectru m antibacterial with little side effect 1This article revie ws the phar macokinetic characters and clinical research of itraconaz ole 1Key words:itraconaz ole;antifugal drug;phar macokinetics 伊曲康唑(itraconaz ole )为三唑类广谱抗真菌药,由美国强生公司研制,分子式为C 35H 38Cl 2N 8O 4,不溶于水,分子结构中有3个手性中心,是由4种异构体按1∶1∶1∶1组成的消旋体混合物。目前临床所用的伊曲康唑剂型有胶囊剂、口服液和注射液,后2种剂型以羟丙基2β2环糊精为增溶剂,包裹亲脂性的伊曲康唑制成。1992年9月,伊曲康唑胶囊获F DA 批准,在美国上市;次年在我国上市;口服液、注射液分别于1997年和1999年,在美国上市;并于2003-2004年,进入中国,在中国上市。10多年来,已经广泛用于治疗多种真菌感染性疾病。伊曲康唑作用机制与酮康唑类似,通过干扰真菌细胞膜的重要成分麦角甾醇的合成而发挥抗真菌作用,可用于浅表真菌感染及深部真菌引起的系统感染,包括皮肤癣菌、念珠菌、曲霉菌、组织胞浆菌、着色真菌、芽生菌、球孢子菌等,由于其良好的疗效和低毒性,在临床上发挥重要作用。1 药代动力学111 吸收 伊曲康唑胶囊在健康志愿者口服达峰时间(T max )为2～5h,绝对生物利用度约为55%,具有剂量依赖的非线性饱和药代动力学行为, 见下表[1] 。伊曲康唑有弱碱性(pKa =317),仅在低pH 条件下解离溶解,因此必需在胃酸中溶解和吸收,在禁食状态或胃酸减少病人 中,吸收降低 [2] 。H 2受体拮抗剂雷尼替丁,可抑制胃酸分泌,使pH 升高,导致伊曲康唑生物利用度降低约50%;而与酸性饮料(如可乐)同服,可提高生物利用度[3] ;质子泵抑制剂奥美拉唑分别降低伊 曲康唑药时曲线下面积(AUC )和达峰浓度(C max )64%、66%[4] 。伊曲康唑为不溶于水的亲脂性药物,其溶解度是吸收的限速步骤,食物
药用植物内生真菌及活性物质多样性研究进展_孙剑秋
西北植物学报,2006,26(7):1505-1519 Acta Bot.Boreal.-Occident.Sin. 文章编号:1000-4025(2006)07-1505-15＊ 药用植物内生真菌及活性物质多样性研究进展 孙剑秋1,2,3,郭良栋2＊,臧 威1,3,迟德富1 (1东北林业大学林学院,哈尔滨150040;2中国科学院微生物研究所真菌地衣系统学重点实验室,北京100080;3齐齐哈尔大 学生命科学与工程学院,齐齐哈尔161006) 摘 要:药用植物具有丰富的物种多样性,是人类生存与发展的重要自然资源。内生真菌广泛存在于健康植物组 织内部,是植物微生态系统的重要组成部分,各种药用植物中蕴藏着非常丰富的内生真菌。通过与药用植物的“协 同进化”,某些内生真菌具有了产生与宿主植物相同或相似的生物活性物质的能力。内生真菌产生的各种活性物 质,在生物制药、农业生产、工业发酵等方面都表现出美好的应用前景,受到世界各国专家的广泛关注。利用内生 真菌发酵实现生物活性物质的工业化生产,可以提高产量、降低产品成本,满足人们日益增长的需求;同时有利于 珍稀、濒危药用植物资源的保护,对减少野生药用植物多样性的破坏具有重要意义。本文从药用植物内生真菌物 种多样性与产生生物活性物质多样性等方面总结近年最新的研究进展,提出了内生真菌及活性物质研究的未来发 展方向。 关键词:药用植物;内生真菌;生物活性物质;协同进化 中图分类号:Q949.95文献标识码:A Research Advances in the Diversities of Endophytic Fungi in Medicinal Plants and Their Bioactive Ingredients SUN Jian-qiu1,2,3,G UO Liang-dong2＊,ZANG Wei1,3,C HI De-fu1 (1College of Forestry,Northeast Fores try University,H arbin150040;2S ystematic M ycology and Lichenology Laboratory,In sti- tute of M icrobiology,Chinese Academy of S ciences,Beijing100080;3College of Life Science and Engineering,Qiqih ar University, Qiqih ar161006) A bstract:Medicinal plants,w hich are of rich species diversity,a re im po rtant na tural reso urces for human e xistence and develo pment.Endo phy tic fungi,w idely existing inside the tissues of healthy plants,are im-po rtant com po nents o f plant micro-ecosy stems and various medicinal plants are rich in endo phytic fungi. Co-evolving w ith medicinal plants,some endophy tic fung i have developed the abilities to produce same o r similar bioactive substances as or to w hat their host plants produce.V ario us bioactive substances that endo-phytic fung i have show ed a bright prospect in biological pharmaceutical pro duction,agricultural produc-tion,industrial fermentatio n thereby attracting ex tensive interest from ex perts of various countries in the w orld.The industrial productio ns of bioactive substances that m ake use o f endophy tic fungi are capable of increasing their yields and low ering their pro ductive co sts and thus conducive to satisfying people's ever-in-creasing dem ands.In the meantime,it is co nducive to the co nserv ation of precious and endangerd medicinal plants and of g reat impo rtance in avoiding the damage to the diversity of w ild m edicinal plants.The paper summa rizes la test research advances in terms of the diversity of endophy tic fungi and their bioactive sub-＊收稿日期:2006-03-28;修改稿收到日期:2006-05-19 基金项目:国家自然科学基金(30370006,30230020) 作者简介:孙剑秋(1969-),男(汉族),黑龙江德都人,博士,副教授,硕士研究生导师,主要从事微生物学方面的科研与教学工作。 ＊通讯联系人。Correspondence to:GUO Liang-dong.E-m ail:gu old@https://www.wendangku.net/doc/0610238505.html,
有关抗真菌药物药效学研究与评价的一些认识
发布日期20051114 栏目化药药物评价>>非临床安全性和有效性评价 标题有关抗真菌药物药效学研究与评价的一些认识 作者李瑾翡 部门 正文内容 审评三部李瑾翡 摘要：本文介绍了抗真菌药物研发的过程和趋势，提出了对抗真菌新药适应症定位的看法，总结了抗真菌药物临床前药效学研究与评价的要点。 关键词：抗真菌药物、药效学 近20年来，随着免疫缺陷患者增多、器官移植和介入性诊断与治疗的广泛开展、以及抗菌药物和化疗药物的广泛使用，真菌感染的发生率正逐年上升，特别是深部真 菌感染率急剧增加，对抗真菌药物的需求越来越高。 抗真菌药物的发展大致可分为以下几个阶段：20世纪30年代末，从微生物发酵代谢产物中分离得到灰黄霉素，第一个被发现并被用于临床；1944年报道了唑类化 合物的抗真菌作用；1960年两性霉素B被用于临床；1981年酮康唑口服制剂在美国 上市，第一个烯丙胺类药物萘替芬进入临床试验；1990-1992年氟康唑和伊曲康唑开
始在美国使用；1993年-1995年报道了第2代三唑类抗真菌药；1995-1996年上市了第2个烯丙胺类药物特比萘芬，以及两性霉素B脂质体制剂。 抗真菌药物的作用机制可分为3种：一是作用于真菌细胞膜中甾醇合成的抗真菌药物，包括酮康唑等唑类药物、多烯类抗生素两性霉素等，以及烯丙胺类药物特比萘芬等；二是作用于真菌细胞壁合成的抗真菌药物，如棘白菌素类药物，以及抑制几丁质合成的日光霉素和多氧霉素等；三是作用于核酸合成的抗真菌药物，如5-氟胞嘧啶等。 随着临床上抗真菌药物的大量使用，真菌的耐药性也迅速发展，逐步成为深部真菌感染治疗上一个日益严峻的问题，加快开发新的抗真菌药物以对付日益增多的耐药真菌，是目前迫切需要解决的现实问题。在新药研发时，可考虑研制针对新的作用靶点的抗真菌药物，如近来国外正在研制的一些作用于真菌细胞壁的药物（如棘球白素类），通过在细胞膜外发挥作用，药物流出泵对其耐药性影响不大，有利于解决耐药问题。而在药物剂型的选择上，因目前临床上仍较缺乏可供选择的高效、低毒的抗深部真菌感染药物，如果新型抗真菌药物研发中，临床前试验可证实其具有广谱、高效、低毒等优点，则应首先考虑开发系统给药剂型，并首选用于深部真菌感染的治疗。 审评中发现，一些申请人将新研制的抗真菌药首先定位于局部外用制剂，并拟用于皮肤浅部真菌感染，从真菌耐药性和临床需求的角度考虑，此种情况在立题上存在一定的不合理性。对于深部感染真菌有效的药物，建议首选开发全身给药剂型，以避免由于耐药性的产生而导致开发用于深部真菌感染药物的难度增加，或由于交叉耐药造成现有抗深部感染药物的有效性下降。 为了进一步提高抗真菌药物综合评价的质量和效率，结合抗真菌新药药理毒理审
药用植物内生真菌研究现状及其应用前景
药用植物内生真菌研究现状及其应用前景 发表时间：2018-11-07T14:26:43.093Z 来源：《中国误诊学杂志》2018年第26期作者：代娇朱卫波代雨通讯作者 [导读] 简要综述了近年来在内生真菌的分离鉴定、发酵、次生代谢产物、与宿主的关系等方面的研究进展。 曲靖医学高等专科学校云南曲靖 655000 摘要：随着对药用植物内生真菌研究的深入，从药用植物内生真菌中寻找新的生物活性成分已成为研究热点。内生真菌对药用植物的生长及活性成分的形成都有影响，内生真菌活性成分已成为发现新颖结构化合物及新药物的潜在资源。简要综述了近年来在内生真菌的分离鉴定、发酵、次生代谢产物、与宿主的关系等方面的研究进展。 关键词：内生真菌；分离鉴定；发酵；代谢产物；药用价值 1 药用植物内生真菌研究现状 内生真菌（endophytic fungi）是指生活在健康植物的各种组织和器官内部的真菌，被感染的植物不表现明显的外在病症，可通过组织学方法、从严格表面消毒的植物组织中分离的方法，以及从植物组织内直接扩增微生物 DNA 的方法来证明其内生性。内生真菌不但可以自身合成药物活性成分，还具有促进宿主植物合成活性成分的能力[1]。药用植物内生真菌代谢产物的多样性和新颖性，将为利用其进行工业发酵，生产新型活性化合物开辟新的途径。 2 药用植物内生真菌的多样性 内生真菌的分离培养是菌株鉴定及其活性物质研究的基础。由于环境的改变，内生真菌的生长及次生代谢产物的数量、种类等都会受到影响[2]。通过形态学观察和繁琐的生理生化实验，以及分子生物学鉴定方法进行分类鉴定。 3 内生真菌的次生代谢产物及生物活性 3.1抗肿瘤活性物质 某些抗肿瘤药用植物中部分内生真菌能够产生与宿主相同或相似的生理活性成分，已有不少学者从具有抗肿瘤作用的药用植物中寻找能产生抗肿瘤成分的内生真菌，并从中发现了一些具有潜在应用前景的抗肿瘤化合物。1993 年 Stierle 等[11]首次从短叶红豆杉（Taxus brevifolio）的韧皮部分离到一株能产紫杉醇的内生真菌，随后许多学者从不同种红豆杉中也分离得到产紫杉醇的内生真菌。除紫杉醇外，人们还研究了可以产其他抗肿瘤活性物质的内生真菌，陆续从长春花（Catharanthus roseus）、桃儿七（Sinopodophyllum hexandrum Ying）、美登木（Maytenus hookeri）等药用植物中分离出了能产生抗肿瘤活性物质的内生真菌菌株。这为药用植物内真菌发酵生产抗肿瘤药物奠定了基础。 3.2抗生素类活性物质 药用植物内生真菌可产多种抗生素，能抑制病原体、细菌、真菌、病毒等。李雅等发现，杜仲内生真菌对植物病原真菌有抑制作用。Castillo 等从蛇藤（Kennedia nigriscans）中分离到一株能抑制多种致病霉菌的内生真菌。Thongchai 等从 Zingiber officinale Rosc 中分离到的内生真菌能够产生明显的抑菌活性，并得到了具有该抑菌活性的单体化合物[3]。 3.3其他活性物质 研究发现内生真菌还能产生其他活性物质，如降血糖活性物质、免疫抑制剂、抗氧化剂等。Salituro 等从非洲热带雨林植物的内生真菌 Pseudomassaria sp.中分离到一种非肽类代谢物，可使人的胰岛素受体酪氨酸 β- 亚基磷酸化，并使胰岛素受体的作用底物也磷酸化，从而激活蛋白激酶 B，具有模拟胰岛素的作用，能明显降低血糖浓度。周生亮发现4株薯蓣（Dioscorea zingiberensis）菌丝和发酵液具有不同的抗氧化活性。 4 内生真菌与宿主的相关性 4.1药用植物内生真菌与宿主的相互关系 内生真菌长期生活在植物体内的特殊环境中，植物以其内生真菌的组织、细胞及其代谢产物为内环境；而内生真菌则以宿主植物的组织、细胞及其代谢产物为外环境，吸收宿主植物的营养，并得到保护。内生真菌能够参与植物活性成分的合成，或通过诱导物胁迫宿主植物产生丰富的次生代谢产物，是天然活性产物的重要来源。内生真菌在体外培养时可产生植物生长激素，内生真菌可促进宿主植物对氮、磷等营养元素的吸收，内生真菌也可通过与病原菌竞争营养和空间或直接产生拮抗物质而抑制病原菌，从而促进植物生长。此外，内生真菌还能增强宿主植物的抗逆性[4]。 4.2内生真菌产生与宿主相同或相似成分机制的探索 药用植物内生真菌是一个多样性十分丰富的生物类群，其产生的次级代谢产物也十分丰富，很多实例证明内生真菌能够产生与宿主相同或相似的代谢产物。目前，解释内生真菌能产生与宿主相同或相似成分机制的理论主要有二：一是生物间的“基因水平传递”，即认为具有相同次级代谢产物生物合成的途径，是获得了相关基因的直接传递；另一个是“内共生理论”，认为在共生体生物相互作用过程中，一旦在其次级代谢中出现了有用生化的途径，它就能被其他生物所利用，表现出相互作用和“协同进化”。 5 内生真菌在药用植物发育中的应用 一些内生真菌与植物的生长、发育、抗病性有关，深入研究可能对药用植物的人工种植有重要作用。由于内生真菌对植物的促进生长作用，可将相应内生真菌接种于生长缓慢、自然繁殖困难、濒危的药用植物中，促进其生长，提高药用植物产量。开唇兰小菇、石斛小菇、兰小菇等 3 种小菇属植物的内生真菌对兰科濒危药用植物铁皮石斛、金线莲的生长具有促进作用，对铁皮石斛和金线莲的成功栽培具有实际应用价值。一些珍稀名贵中药的形成也与其体内的内生真菌有关。沉香、降香等名贵药材的形成也与内生真菌有关。由此可见，将植物内生真菌接种于与微生物关系密切的中药，可以提高中药有效成分含量和产量，克服传统中药有效成分含量低的问题和资源不足的限制。 6 内生真菌研究开发新药的前景与展望 近年来化学合成药物所带来的毒副作用使人们望而却步，人类对天然药物的需求愈来愈大。目前超过40%的临床药物是天然产物或是
中草药抗真菌的研究进展
中草药抗真菌的研究进展Prepared on 21 November 2021
中草药抗真菌的研究进展摘要近年来,由于许多因素的影响,诸如广谱抗生素、糖皮质类固醇、免疫抑制剂、抗肿瘤药的大量应用,以及艾滋病患者的剧增等,使真菌病的发病率日益增大,其中深部真菌感染的发病率增加了40倍。寻找广谱、高效、低毒的抗真菌药物已成为国内外研究的热点。从20世纪20年代开始,我国研究者从中药中寻找抗真菌药物,进行了化学及药理研究,至今已发现300余种中药具有抗真菌活性。研究范围从单味中药发展到复方,研究和探索抗真菌中药的有效成分及作用机理等,为发现和研制抗真菌药物提供有利的线索和理论依据。目前中药抗真菌有效成分的提取主要有水煎剂,乙醇、乙醚、稀醋酸等的浸出制剂。另外研究中药对病原菌的体外抑菌活性试验方法很多,一般采用的方法有管碟法、固体培养基法、纸片抑菌法、平皿稀释法以及平板打孔扩散法等,它们通常只用于对中药的抑菌活性作定性研究;定量分析常用二倍稀释法。本文就近年中药抗真菌的研究综述如下。 关键字中草药抗真菌研究 1、不同形式中草药抗真菌作用的研究 1.1单味中草药的抗真菌作用 近百年来,人们已发现300余种中药具有抗真菌活性。王理达等采用显微镜直接计数法和MTT法测定了黄柏等13种生药醇提物的抗真菌作用,发现黄柏、丁香、乌梅等有强烈抑制真菌活性。宫毓静等采用体外半固体药基法对164种中药乙醇提取物进行筛选,发现牡丹皮、土槿皮等22种中药对一种或几种真菌有较强抑制作用。纪丽莲[证明野菊花、艾叶等8种菊科中草药有抗霉菌活性。王昊、付爱
华[5～6]发现茵陈、黄精、白头翁等中药对浅部皮肤癣菌有抑制作用。尹秀芝报道苍术浸出液致真菌细胞壁及细胞内部结构破坏。屠鹏飞测定龙血竭对多种真菌的MIC在18.8～750μg/ml,其作用靶位是真菌的细胞壁。刘小琴等发现紫苏提取液对白色念珠菌等有较好的抑制作用。侯幼红等[10]发现飞龙掌血等药性苦寒的中药表现出类似几丁质酶和刀豆蛋白A的作用,可以抑制白色念珠菌的体外粘附作用.何进测定了大蒜油的抗真菌活性(MIC为6.25～50μg/ml),认为其作用机理为延长真菌生长的迟缓期。付爱华等发现东北刺人参挥发油、藿香精油等有很强的抗真菌活性,对常见皮肤癣菌及烟曲霉等18种深部致病真菌有抑制作用。杜青云报道姜黄挥发油对动物皮肤藓菌感染模型的有效率达87.5%。夏忠弟、方芳等]采用同位素标记和电镜证实山苍籽油乳剂干扰白色念珠菌蛋白质和细胞壁的合成。 1.2中草药复方的抗真菌作用 中草药抗真菌的机理复杂，有些方剂中的单味药并无明显的抗真菌活性，但复方却呈现一定疗效。邱莹等在对中药祛屑洗药抗马拉色菌体外药敏试验研究中发现，中药复方制剂(桑白皮、鱼腥草、川椒、皂角、硼砂、红花及其混合液体)的MIC值最低为312．5ms／L，而其他单味中药制剂的MIC值除鱼腥草外均在 600ms／L以上。纳猛等用藿香、香薷、茵陈、土槿皮和石榴皮5味中药组成复方洗剂，该复方水煎剂稀释到40％(v／v)，10％(v／v)和5％(v／v)时能够完全杀灭不同的表皮真菌。隋芝芹等取足癣患者损伤处皮屑培养，加入苦甘洗剂(由苦参、当归各30g，白藓皮、枯矾各20g，甘草40g组成)，絮状表皮癣菌菌落明显减少或不出现。郭建辉Ⅲ1发现癣净散(地肤子、土荆皮、白藓皮、苦参、金银花、夏枯草、丁香)对红色毛癣菌、絮状表皮癣菌、石膏样小孢子菌具有较强的