DNA提取和常见问题分析及对策
DNA提取常见问题
问题一：DNA样品不纯，抑制后续酶解和PCR反应。
?重新纯化DNA，过吸附
柱去除蛋白、多糖、
多酚等杂质
?重新沉淀DNA，让酒精
充分挥发
?增加70％乙醇洗涤的
次数（2-3次）
?加入RNase降解RNA
DNA 提取常见问题
问题二：DNA 降解。
1.
材料不新鲜或反复冻融2.
未很好抑制内源核酸酶的活性3.
提取过程操作过于剧烈，DNA 被机械打断4.
外源核酸酶污染5.
反复冻融 1.尽量取新鲜材料，低温保存材料避免反复冻融2.液氮研磨或匀浆组织后，应在解冻前加入裂解缓冲液3.在提取内源核酸酶含量丰富的材料的DNA 时，可增加裂解液中螯合剂的含量，细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔4.所有试剂用无菌水配制，耗材经高温灭菌5.将DNA 分装保存于缓冲液中，避免
反复冻融
生物专心做生物w b b i o o .c o m
DNA测序常见问题及分析
DNA测序过程可能遇到的问题及分析 对于一些生物测序公司（如Invitrogen等），我们的菌液或质粒经过PCR和酶切鉴定都没问题，但几天后的测序结果却无法另人满意。 为什么呢？ PCR产物直接进行测序，在PCR产物长度以后将无反应信号，机器将产生许多N值。这是由于Taq酶能够在PCR反应的末端非特异性地加上一个A碱基，我们所用的T载体克隆PCR产物就是应用该原理，通常PCR产物结束的位点，PCR产物测序一般末端的一个碱基为A（绿峰），也就是双脱氧核甘酸ddNTP终止反应的位置之前的A,A后的信号会迅速减弱。 N值情况一般是由于有未去除的染料单体造成的干扰峰。该干扰峰和正常序列峰重叠在一起，有时机器377以下的测序仪无法正确判断出为何碱基。有时，在序列的起始端的小片段容易丢失，导致起始区信号过低，机器有时也无法正确判读。在序列的3’端易产生N值。一个测序反应一般可以读出900bp以上的碱基（ABI3730可以达到1200bp），但是，只有一般600bp以前的碱基是可靠的，理想条件下，多至700bp的碱基都是可以用的。一般在650bp以后的序列，由于测序毛细管胶的分辩率问题，会有许多碱基分不开，就会产生N值。测序模板本身含杂合序列，该情况主要发生在PCR产物直接测序，由于PCR产物本身有突变或含等位基因，会造成在某些位置上有重叠峰，产生N值。这种情况很容易判断，那就是整个序列信号都非常好，只有在个别位置有明显的重叠峰，视杂合度不同N值也不同。 测序列是从引物3’末端后第一个碱基开始的，所以就看不到引物序列。有两种方法可以得到引物序列。1.对于较短的PCR产物 （<600bp），可以用另一端的引物进行测序，从另一端测序可以一直测通，可以在序列的末端得到该引物的反向互补序列。对于较长的序列，一个测序反应测不通，就只能将PCR产物片段克隆到载体中，用载体上的通用引物(T7/SP6)进行测序。载体上的通用引物与所插入序列间
质粒提取有关问题及注意点
质粒提取常见问题解析 涂布棒在酒精蘸一下，然后烧一下，能不能保证把所用的菌烧死？ 参考见解：涂布棒可以在酒精中保藏，但是酒精不能即时杀菌。蘸了酒精后再烧一小会，烧的是酒精而不是涂布棒。建议涂布棒还是干烧较长时间后，冷却了再涂。同时作多个转化时，应用几个涂布棒免得交叉污染。 原先测序鉴定没有问题的细菌，37℃摇菌后发现质粒大小或序列出现异常? 参考见解：这种情况出现的几率较小，常出现在较大质粒或比较特殊的序列中。解决办法： 1、降低培养温度，在20～25℃下培养，或室温培养可明显减少发生概率。 2、使用一些特殊菌株，如Sure菌株，它缺失了一些重组酶，如rec类等，使得质粒复制更加稳定。 3、质粒抽提有一个酶切不完全的原因就是溶液Ⅱ中的NaOH浓度过高造成的，请大家注意一下！ 【有两种方法可以在提质粒前判断菌生长是否正常： 1、利用你的嗅觉。只要平时做实验仔细点就能闻出大肠杆菌的气味，新鲜的大肠杆菌是略带一点刺鼻的气味，但不至于反感。而在泥水状的菌液中你只要一凑过去就感觉到其臭无比或者没有气味，可以和正常菌液对照。 2、肉眼观察活化菌株。对于生长不正常的菌液进行划板验证或者稀释到浓度足够低涂板，第二天观察单克隆生长情况，LB平板生长的DH5A正常形态在37℃16h后直径在1mm左右，颜色偏白，半透明状，湿润的圆形菌斑，如果观察到生长过快，颜色又是泛黄的话基本上不正常了。】 未提出质粒或质粒得率较低，如何解决？ 参考见解： 1、大肠杆菌老化：涂布平板培养后，重新挑选新菌落进行液体培养。 2、质粒拷贝数低：由于使用低拷贝数载体引起的质粒DNA提取量低，可更换具有相同功能的高拷贝数载体。 3、菌体中无质粒：有些质粒本身不能在某些菌种中稳定存在，经多次转接后有可能造成质粒丢失。例如，柯斯质粒在大肠杆菌中长期保存不稳定，因此不要频繁转接，每次接种时应接种单菌落。另外，检查筛选用抗生素使用浓度是否正确。 4、碱裂解不充分：使用过多菌体培养液，会导致菌体裂解不充分，可减少菌体用量或增加溶液的用量。对低拷贝数质粒，提取时可加大菌体用量并加倍使用溶液，可以有助于增加质粒提取量和提高质粒质量。 5、溶液使用不当：溶液2和3在温度较低时可能出现浑浊，应置于37℃保温片刻直至溶解为清亮的溶液，才能使用。 6、吸附柱过载：不同产品中吸附柱吸附能力不同，如果需要提取的质粒量很大，请分多次提取。若用富集培养基，例如TB或2×YT，菌液体积必须减少；若质粒是非常高的拷贝数或宿主菌具有很高的生长率，则需减少LB培养液体积。 7、质粒未全部溶解(尤其质粒较大时) ：洗脱溶解质粒时，可适当加温或延长溶解时间。 8、乙醇残留：漂洗液洗涤后应离心尽量去除残留液体，再加入洗脱缓冲液。 9、洗脱液加入位置不正确：洗脱液应加在硅胶膜中心部位以确保洗脱液会完全覆盖硅胶膜的表面达到最大洗脱效率。 10、洗脱液不合适：DNA只在低盐溶液中才能被洗脱，如洗脱缓冲液EB(10mM Tris-HCl, 1mM EDTA，pH8.5)或水。洗脱效率还取决于pH值，最大洗脱效率在pH7.0-8.5间。当用水洗脱时确保其pH值在此范围内，如果pH过低可能导致洗脱量低。洗脱时将灭菌蒸馏水或洗脱缓冲液加热至60℃后使用，有利于提高洗脱效率。
关于住房公积金的常见问题及解答
住房公积金常见问题解答 关于公积金提取 1、符合公积金支取的条件和提交资料的要求是什么?有哪些注意事项? 2、如何申请办理公积金支取？ 3、支取公积金是否可以委托他人代办？ 4、房屋贷款提前还清，还清后还能继续支取公积金吗？ 5、公积金支取的网点及办公时间如何？ 关于缴存 6、公积金缴费基数及比例是如何确定的？是否都可以免税？如何看懂工资单上的公积金 税前加项和税后减项？ 7、如果我的工资调整了，公积金缴费基数是否会马上调整？缴纳比例可以随时调整吗？ 8、如何查询公积金余额？遗失或更换对帐簿如何办理？ 关于转移与合并 9、我入职后，原公司的帐户需要转移合并吗？
符合支取条件的有：买房、租房、建造/翻建/大修自住房、出国定居、退休、非广州市户口离职支取。 需要准备的资料(原件及复印件一份) 申请时间 受理地点一次性购一手房 *住房公积金提取申请表*身份证 *如申请人为产权人配偶还须提供结婚证(原件及复印件) *房屋产权人共有人有效身份证明(原件及复印件) *购房合同*房产证*购房发票*需于购房发票发出两年内提出申请 工行、建行、中行、广州银行或公积金中心 一次性购二手房 *购房合同*房产证*契税完税证 *需于契税完税证发出两年内提出申请 工行、建行、中行、广州银行或公积金中心 按揭贷款购房 *住房按揭合同(即：借款合同)*首期发票和购房合同(一手房) 或契税完税证(二手房) *房产证 *于贷款限期内提出申 请工行、建行、中行、广州银行或公积金中心 租房自住 *已备案登记的租赁合同*房租发票 *自签订租赁合同之日起半年内提出申请只能到公积金中心办理 大修自住住房 *房屋安全鉴定机构出具的《房屋安全鉴定书》*房地产权正本 *在批文有效期内提出申请 工行、建行、中行、广州银行或公积金中心
关于质粒抽提的杂菌污染问题解决方案
关于质粒抽提的杂菌污染问题解决方案过 对于从事分子生物学的研究的人来说，质粒抽提几乎是每天都用做的常规技术。我们经常会收到来自用户的各种求助，像质粒提取失败了、不是自已想要的那个质粒及提取得率低等等。 其实提取质粒并不难，基本上按照质粒提取试剂盒的说明书，小心操作，一般不会有问题。但是为什么还会有这些问题存在？因为在实验中我们应该注意一些我们经常忽略的细节。可能实验室的环境的污染，操作时的不注意都会造成我们培养细菌时染杂菌，使得在质粒的提取过程中现象出现异常，导致实验不成功。说到这里，有些人可能会问：那我们染的杂菌是什么菌呢？其实大部分为真菌，也有可能是革兰氏阳性菌如金黄色葡萄球菌等。 为了让大家能能判断出所用的菌体是否染杂菌，继而能从实验现象可以判断出该原因，我们特意在本实验室里做了一个从染杂菌的细菌中提取质粒的对照模拟实验。 实验方案 编号具体方案 号高拷贝质粒的大肠杆菌1 2号号染杂菌的大肠杆菌3 4号全为杂菌（酵母菌）号 5．6号 实验步骤 根据simgen快速质粒DNA小量试剂盒的说明书的操作步骤进行实验。 实验结果 （一）Buffer II裂解不完全
后溶液变粘稠的澄清液体；而部分BufferII2号为正常的大肠杆菌加入如上图所示1、号加入之后溶液呈不粘稠的浑浊、64号变为粘稠的浑浊液体；全为杂菌的5染菌的细菌3、液体。时，其中的碱性溶液能使革兰氏阴性菌的细胞壁破裂以及蛋白质变Buffer II 在加入号正常的革兰氏阴性细2等细胞内容物。对于1、性，从而释放出质粒DNA、基因组DNA等细胞内容物从而溶液变为粘稠的DNAII溶液能将其细胞壁破裂，释放出质粒菌，Buffer 溶液能号，我们可以看到它出现了粘稠的浑浊液体，这是因为Buffer II澄清液体，而3、4的细胞壁却不能破裂，真菌）溶解正常的革兰氏阴性细菌的细胞但部分杂菌（革兰氏阳性菌、5、6号都为杂菌，不能被破裂的杂菌呈现浑浊状。它们的细胞壁较厚，Buffer II溶液只能裂解很小部分的细胞壁使其穿孔而泄露部分核酸（主要是RNA），细胞内的基因组DNA等其他细胞内容物难以释放，所以它呈现了不粘稠的浑浊状。 （二）拷贝数降低或质粒丢 失． 图2
公积金提取常见问题
1、问：职工在哪些情况下可以办理销户提取？ 答：职工在符合（1）离退休、（2）死亡、（3）出境定居、（4）完全丧失劳动能力并与单位解除劳动关系、（5）与单位终止劳动关系后纳入城镇低保范围内这五种情况下，可以办理销户提取，提取额为职工个人账户内本息余额。 2、问：职工在哪些情况下可使用住房公积金？ 答：按《条例》规定，职工因购买、建造、翻建、大修自住住房、偿还购房贷款本息可使用住房公积金。 3、问：职工购买、建造、翻建、大修房屋的，其家庭成员可否提取各自名下的住房公积金？ 答：根据国务院《条例》的有关规定，对购买、建造、翻建、大修的房屋拥有所有权的家庭成员（包括配偶、父母、子女等）可以提取自己的住房公积金账户内的存储余额。对住房不拥有所有权的家庭成员，不能提取自己的住房公积金。 4、问：职工购买、建造、翻建、大修自住住房的限定范围有哪些规定? 答：(1) 购买。是指职工买下的住房,拥有所购住房的所有权。住房可以是商品房、拆迁安置房、政策性住房、和二手房等。 (2) 建造。是指城镇居民经房地产管理部门、城市规划管理部门批准建造住房。 (3) 翻建。是指对住房全部拆除、另行设计、重新建造住房。 (4) 大修。是指需要牵动或拆换住房主体部分结构,但不需要全部拆除住房。装修、装饰、中修、小修等行为都不可以支取住房公积金。 5、问：如何办理住房公积金的使用提取？ 答：凡符合使用住房公积金条件的职工，应首先向所在单位提出申请，单位对职工的购房情况进行初审后，为职工出具加盖了单位印鉴的《成都市职工购建房提取个人住房公积金申请表》（表10），职工持《购建房提取申请表》、身份证明及相关的购房证明资料到中心办理提取审核，经中心审核后，单位开具转账支票到公积金缴存银行办理支付手续。 6、购房提取住房公积金是否有时间限制？ 答：职工购商品房、政策性住房、拆迁安置房都应在合同约定的付款期限内提取住房公积金。 购买二手房需在产权交易过户后，自产权证发证之日起30日内提取住房公积金。 7、问：职工因住房消费原因申请提取公积金，提取额有何限制？ 答：职工购房、建造、翻建、大修自住住房的，提取金额受以下两项限制： （1）提取金额不超过上一年度已结息金额（每年6月30日为结息日）。 （2）不超过当时购房、建造、翻建、大修需支付房款或修建费用。 职工偿还购房贷款本息的，提取金额受以下两项限制：
公文写作常见问题分析
一、标题常见问题分析 公文标题是公文内容的摄要，在发挥公文效能上起着举足轻重的作用。但受诸多因素的影响，公文标题时常出现一些毛病，现归纳为以下八个方面，并作粗浅分析。 （一）要素不全 完整的、规范的公文标题，一般应具备“三要素”，即发文机关名称、事由、文种，以标明由谁发文、为什么发文和用什文种发文。2012年7月1日起施行的《党政机关公文处理工作条例》作出明确规定：“公文标题应当准确简要地概括公文的主要内容（事由）并标明公文种类（文种），一般应当标明发文机关”。当然，特殊情况下，也可省略标题中的一至二个要素，但不可随意省略，要相对规范，否则，将毛病百出。 常见的病例有三种： 一是随意省略事由。如《××县人民政府决定》，由于省略事由，受文者看不出标题所反映的主要内容、事项和基本观点，不利于学习、贯彻、领会、落实文件精神。除一些非重要的、极其简短的通知、通告和特殊机关发出的特定公文外（如中华人民共和国国务院、司法部门发出的国务院“公告”、“主席令”、“布告”等），一般情况下不得省略事由。 二是随意省略发文机关。如：一份没有版头的文件标题《关于加强农村党支部建设的报告》，待上级看完文件后，才从落款处知道文件是哪个机关发出的，既不庄重，也不严肃，更不利于公文运转和办理。具有重大决策和事项的下行文不得省略发文机关；没有版头的下行文、上行文均不得省略发文机关，但有版头（发文机关标识）的，也可不标明发文机关。 三是随意省略文种。使受文者不得要领，失去公文的严肃性。如《××乡人民政府关于召开春耕生产会议的有关事宜》。 （二）乱用文种 主要表现在三个方面：
一是混用文种。如《全国人大常委会党组关于县乡换届选举问题的请示报告》，这里把“请示”、“报告”两个不同的文种混淆在一起使用，不论是已经废止的《国家行政机关公文处理办法》，还是自2012年7月1日起施行的《党政机关公文处理工作条例》，都没有“请示报告”这一文种，明显不妥。从该“请示报告”的内容看，应使用批转式“报告”这一文种。 二是错用文种。有的该用“请示”的，却用了“报告”，而该用“报告”的反而用的是“请示”；有的该用“函”的却用“通知”；有的把没列为文种的公文种类作为文种使用，如“条例”、“规定”、“办法”、“总结”、“计划”等，以上这些，都不可作为文种使用，不可直接行文。《党政机关公文处理工作条例》所确定的公文文种共有15种，决议、决定、命令（令）、公报、公告、通告、意见、通知、通报、报告、请示、批复、议案、函、纪要。除此之外，均不可直接行文，但可作为“印发”、“颁发”或“通知”的“附件”行文。 三是生造文种。如《关于调整工资的补充说明》、《关于机构改革中有关问题的解释》等，这里的“补充说明”、“解释”均不应作为文种使用，以上两个标题可修定为《××（发文机关）关于印发调整工资补充说明的通知》、《××（发文机关）关于印发机构改革中有关问题解释的通知》。还有的把“安排”、“要点”、“细则”这些既不是公文文种又不是应用文体种类的东西常常作为公文文种直接行文，是错误的。 （三）隶属不清 不该用“批转”的，用了“批转”；该用“批转”的却用了“印发”、“转发”，分不清三者之间的隶属关系和词性。如《××县政府办公室关于批转××市长在××会议上讲话的通知》，这里的“批转”使用不当，应该使用“印发”或“转发”。因为“批转”具有“批准转发”之意，是上级对下级报告的认同并转发下去贯彻落实的。下级对上级机关的文件和上级领导同志的讲话、批示等不可使用“批转”，否则将混淆了上下级的隶属关系。 （四）提炼不精。主要表现在标题冗长上。如《×××（发文机关）关于招收退休退职职工子女就业，进行合理安
20个测序常见的问题
20个测序常见的问题 1．为什么需要新鲜的菌液？ 首先，新鲜的菌液易于培养，可以获得更多的DNA，同时最大限度地保证菌种的纯度。2．如何提供菌液？ 如果您提供新鲜菌液，用封口膜封口以免泄漏；也可以将培养好的4～5ml菌液沉淀下来，倒去上清以方便邮寄。同时邮寄时最好用盒子以免邮寄过程中压破。 3．如何制作穿刺菌？ 用灭菌过1.5ml或2ml离心管加入LB琼脂(7g/L)斜面凝固，用接种针挑取分散良好的单菌落穿过琼脂直达管底，不完全盖紧管盖适当温度培养过夜，然后盖紧盖子加封口膜，室温或4度保存。 4．PCR产物直接测序有什么要求？ （1)扩增产物必须特异性扩增，条带单一。如果扩增产物中存在非特异性扩增产物，一般难以得到好的测序结果； (2）必须进行胶回收纯化； (3）DNA纯度在1.6—2.0之间，浓度50ng/ul以上。 5．为什么PCR产物直接测序必须进行Agarose胶纯化？ 如果不进行胶纯化而直接用试剂盒回收，经常会导致测序出现双峰甚至乱峰，这主要是非特异性扩增产物或者原来的PCR引物去除不干净所导致。大多所谓的PCR“纯化试剂盒”实际上只是回收产物而不能起到纯化的作用的。对于非特异性扩增产物肯定无法去除，而且通常他们不能够完全去除所有的PCR引物，这会造成残留的引物在测序反应过程中参与反应而导致乱峰。 6．如何进行PCR产物纯化？ PCR产物首先必须用Agarose胶电泳，将特异扩增的条带切割下，然后纯化。使用凝胶回收试剂盒回收，产物用ddH2O溶解。 7．PCR产物直接测序的好处？ （1) PCR产物直接测序可以反映模板的真实情况； （2) 省去克隆的实验费用和时间； （3) PCR产物测序正确的片段进行下一步克隆实验使结果更有保障； （4) 混合模板进行PCR的产物直接测序可以发现其中的点突变。 8．对用于测序的质粒DNA的要求有哪些？ 对测序模板DNA的一般要求：（1)DNA纯度要求高，1.6—2.0之间，不能有混合模板，也不能含有RNA，染色体DNA，蛋白质等；（2)溶于ddH2O中，溶液不能含杂质，如盐类，或EDTA等螯合剂，将干扰测序反应正常进行。 9．如何鉴定质粒DNA浓度和纯度？ 我们使用水平琼脂糖凝胶电泳，并在胶中加入0.5ug/ml的EB(电泳缓冲液中不必加E，加一个已知浓度的标准样品。电泳结束以后在紫外灯下比较亮度，判断浓度和纯度。此方法可以更直接、准确地判断样品中是否含有染色体DNA、RNA等，也可以鉴别抽提的质粒DNA 的不同构型。 质粒DNA的3种构型是指在抽提质粒DNA过程中，由于各种原因的影响，使得超螺旋的共价闭合环状结构的质粒(SC)的一条链断裂，变成开环状(OC)分子，如果两条链发生断裂，就变成为线状(L)分子。这3种分子有不同的迁移率，通常，超螺旋型(SC)迁移速度最快，其次为线状(L)分子，最慢为开环状(OC)分子。使用紫外分光光度计检测，或者用溴乙锭-标准浓度DNA比较法只能检测抽提到的产物中的浓度，甚至由于抽提的质粒DNA中含有RNA、蛋白质、染色体DNA等因素的干扰，浓度检测的数值也是没有多少意义的。
质粒提取注意事项
1. 质粒制备的基本原理是什么？ 答：做过分子生物学实验的,大多数做抽提过质粒，但不是所有人都知道质粒制备的基本原理。所以有必要做一个说明，能帮助您了解和解决实验过程中遇到的一些问题。制备质粒最常用的方式是碱裂解法。质粒被转化到细菌中，单菌落接种到含有特定抗生素的培养基中，一般培养到细菌生长的平台期离心收集细胞；细菌用悬浮液（Solution I, 内含RNase A）悬浮细胞，用SDS-NaOH (Solution II)裂解。SDS是很强的去污剂，抽提出细胞膜蛋白质和磷脂，释放出细胞内物质，NaOH为强碱，使蛋白质，染色体DNA和质粒DNA变性；细胞裂解彻底后，加入酸性醋酸钾（Solution III）, 中和裂解液，同时SDS-K,变性蛋白质，变性基因组DNA和细胞碎片形成沉淀，通过离心，但是质粒DNA正确复性，仍留在上清溶液中。如何从上清液中回收DNA的方法有很多，有用苯酚/氯仿抽提的，有用乙醇沉淀的，有用核酸吸附吸附的，目的都是试图采用有效，快速的方式纯化质粒DNA。我们提供的试剂盒就是选用特异的核酸吸附材料，优化结合与洗脱条件得到高纯度质粒DNA，纯化的质粒DNA纯度和得率可以满足分子生物学实验的要求。 2. 质粒DNA 制备的关键是什么？ 答：碱裂解法的关键是如何把握SDS-NaOH处理的时间。质粒制备过程中，如果质粒长时间暴露于NaOH, 质粒有可能不可逆变性，使得抽提质粒中有部分是变性质粒。这些变性质粒，不能酶切。所有一般情况下，SDS-KOH处理时间不能超过5分钟，最好在冰里处理，观察到液体变得清就可以加入中和液。 3. 质粒中基因组污染是怎么产生的？ 答：基因组的产生一般是因变性和中和步骤处理不当所致。如果为了提高混合效果，混匀的动作过于剧烈，基因组DNA可能被剪切成小片段，这些小片段在后来中和过程中被复性，保留在溶液中，与质粒一起回收出来了。要降低基因组的污染，记注两点：混合动作要温和，细胞用量要合适。 4. 如何确定质粒小抽细胞的用量？ 答：根据实验目的确定质粒的需求量。对于一般的克隆酶切鉴定，亚克隆、测序分析等常规分析，有几微克的DNA就够了。质粒拷贝数的高低确定接种体积的大小。高拷贝的质粒，接过2-3ml 的细胞就够了，对于中低拷贝的如pBR322,接种5ml也能满足要求。使用过过的细胞，由于细胞裂解难以彻底，时间难以把握，DNA的纯度和得率有时因吸附材料容量的限制，得率并没有显著提高，纯度反而下降。对于细胞数很大的质粒制备，需要按比例提高各溶液的用量，才能保证抽提质粒的纯度和得率。 5. 电泳分析抽提的质粒会看到什么？ 答：如果您制备的质粒很脏，从电泳加样孔起，您会看依次看到微量的基因组DNA, 开环环装质粒（open circular plasmid），超螺旋质粒(Super Coiled), 变性的超螺旋质粒（denatured supercoiled plasmid）, 细菌RNA。判定质粒制备质量高低的标准是观察超螺旋质粒在整个抽提DNA中的百分比。质量高的主要部分为超螺旋质粒，没有变性超螺旋质粒和没有基因
无锡公积金网厅常见问题汇总
网厅常见问题汇总 一、技术问题解答 1.点击登录后，提示：Chrome 未侦到jscaSecurity 元件！您要下载 jscaSecurity 控件并手动安装。点击确定后，页面出现“‘404 NO FOUND”提示。 处理方法：请使用IE浏览器。 2. IE版本要求 处理方法：IE8至11版本。 3. 证书选择时，无证书可选 处理方法：请使用管理员权限打开IE。 4. 如何以管理员身份运行IE 处理方法：右键点击ie图标，在菜单中选择“以管理员身份运行”。
5.问题描述：错误提示：Automation 服务器不能创建对象。 处理方法：安装行助手2.0，加载CA控件（控件需要允许加载6次，直至不再出现加载项）。 6. 注册时提示：签名失败 1168。 处理方法：安装行助手2.0 7. 插了CA证书，登录页面提示正在登录中，超过10分钟无反应。 处理方法：安装行助手2.0，加载CA控件（控件需要允许加载6
次，直至不再出现加载项）。 8. 行助手没有认到CA 处理方法：重新插拔CA 9. 登录公积金时，提示密码错误 处理方法：密码位数小于6位请去银行柜台修改密码 10. 资金类型选择页面，新职工住房补贴为灰色，无法点击登录 处理方法：该单位无补贴账号，不允许对其操作 11. 进入增加缴存，但是点击任何地方，页面都没有反应 处理方法：重置浏览器：internet选项-高级-重置，浏览器关闭兼容模式。 12. 增加缴存职工时，点击“+”时，错误提示：你的浏览器崩
溃了。 处理方法：重置浏览器：Internet选项-高级-重置 13. 手工录入和导入均不行，重置IE设置后也不行 处理方法：请关闭兼容模式 二、业务问题解答 1.公积金登录网址 处理方法：见登录指南，登录指南可向汇缴网点或中心领取。 2. 社保通用的CA证书能用吗 处理方法：不建议用，统一用税务系统的CA证书。 3. 证书即将到期，可以签约网厅吗 处理方法：可以签，证书到期，在江苏CA网站延期就可以了。 4. CA证书延期要付费吗？ 处理方法：具体咨询CA中心：025-96010 5. 新注册的用户，初始密码是多少？ 处理方法：单位用户没有初始密码，请在银行柜台设置。 6. 个人补缴成功后，在哪里查看明细 处理方法：点击“未记账单位汇缴查询” 7. 政策性差额补缴怎么做？ 处理方法：政策性差额补交业务已经归并进“职工补缴”业务，请在“职工补缴”业务模块中完成。 8. 汇补缴书的哪里打印打印？
CHIP SEQ分析常见问题集锦
ChIP-Seq分析常见问题集锦 染色质免疫共沉淀测序（ChIP-Seq）是指对染色质免疫共沉淀（ChIP）获得的DNA片段进行大规模测序，并能把所研究蛋白的DNA结合位点精确定位到基因组上。 Roche GS FLX Titanium、Illumina Solexa GA IIx和AB SOLID4这3种测序技术均可以用于ChIP-seq，其中采用Illumina Solexa GA IIx进行ChIP-Seq已有较多文献报道。 ChIP-Seq技术高质量、高通量、低成本的数据产出，为表观遗传组学研究奠定了技术基础。研究者可以在以下几方面展开研究：（1）判断DNA链的某一特定位置会出现何种组蛋白修饰；（2）检测RNA polymerase II及其它反式因子在基因组上结合位点的精确定位；（3）研究组蛋白共价修饰与基因表达的关系；（4）CTCF转录因子研究。 ChIP-Seq有什么样品要求？ 答：（1）请提供浓度≥10ng/ul、总量≥200ng、OD260/280为1.8~2.2的DNA样品；若单次ChIP后DNA量不够，建议将2~3次ChIP的DNA合并在一起。 （2）请提供DNA打断时检测胶图，要求打断后DNA电泳主带在200-500bp范围内；请对于ChIP 获得DNA设计引物进行QPCR验证和定量，能够提供检测位点的检测报告。附阳性和阴性对照。（3）样品请置于1.5ml管中，管上注明样品名称、浓度以及制备时间，管口使用Parafilm 封口。在运输前将所有样品管固定于50ml带盖离心管中，再将50ml管放在封口袋中。 ChIP-Seq相比ChIP-chip有哪些优势？ 答：第一，ChIP-Seq能实现真正的全基因组分析。目前所能获得的芯片上固定的探针只能代表全基因组部分序列，所获得的杂交信息具有偏向性；第二，对于结合位点分析，ChIP-Seq 通过寻找“峰”，结合分辨率可精确到10~30bp，而芯片上探针由于长度所限，无法精确定位，即使目前最高水平的商业芯片都无法提供可与ChIP-Seq媲美的分辨率；第三是所需样本数量。ChIP-chip需要多达4~5μg的起始样本，在杂交之前需要进行LM-PCR，但可能导致背景增高，竞争性扩增等导致假阳性。而ChIP-Seq仅需要纳克级起始材料，如SOLiD起始材料可低至20ng。两者技术特点如下： 研究方法CHIP-on-chip CHIP-Seq 分辨率30~100bp1bp 覆盖范围受芯片容量限制，只能选择性地扫 描特定区域，无法覆盖全基因组只要测定的序列（Reads）能够定位到基因组上，就能获得全部基因组信息 缺陷探针和非特异性区域杂交测序数据会有一些GC含量偏向 性价比只能研究在基因组上广泛存在的目 的位点（Broading bingding）可以扫描全基因组；可以研究在基因组上存在的稀有目的位点（Sharp bingding） 需要的DNA 量 高低（10~50bp）动态量程弱信号会被遗弃；强信号会饱和没有局限 选择数据产 出量 不可以可以
住房公积金常见问题
住房公积金常见问题 一．申请贷款第一步要到什么地方，准备什么材料？ 答：申请贷款第一步要到您交存住房公积金的管理中心（可以向您单位负责住房公积金的同志了解您住房公积金的交存处），提出您的贷款要求，介绍您的情况，提供一系列证明文件，最终目的是拿到管理中心开具的《调查通知单》。一般来讲，建议您采用以下步骤：1、有了购房意向，到管理中神农百草膏心向贷款经办人员如实介绍您所购房屋情况、本人及配偶的工作情况、希望申请贷款的金额和期限、可以提供什么样的担保。领取借款申请表，由经办人员给您初步建议，告诉您需准备的材料。 2、准备齐全的文字材料，请经办人员审核。文字材料主要指： （1）有效身份证、神农百草膏第二代户口本、结婚证； （2）填写好并由单位盖章的借款申请表； （3）购房合同或意向书 （4）若有保证担保的出具担保方同意担保的担保函； （5）经办人员要求的其它材料。 根据您提供的文字材料，管理中心进行初审，确定贷款额度、期限、利率、担保方式。需要评估的贷款，由指定评估机构进行评估。初审完毕，由管理中心签发《调查通知单》，第一步工作完毕。 二．申请贷款第二步要到什么地方，做什么工作？ 答：您拿到调查通知单后，筋络速通下一步要到《调查通知单》上注明的银行经办机构，由银行经办机构对贷款进行调查，并指导您填写有关的贷款合同。需要盖章的合同（如保证合同、收押合同）到有关部门加盖公章，采用财产抵押担保或购买购房综合险的需办理有关保险手续。银行对贷款调查后将有关材料送管理中心，并告知您等待通知。第二步工作完毕。 三．申请贷款第三步要做什么？ 答：管理中心根据银行的调查意见对所有贷款材料进行审批，审批同意后银行将通知您到银行办理放贷手续。贷款将直接拨付到售房单位帐户。 四．新设立的单位怎样办理住房公积金？ 答：根据《住房公积金管理条例》的规定，新设立的单位应当自设立之日起30日内到住房公积金管理中心办理住房公积金缴存登记，并自登记之日起20内持住房公积金管理中心的审核文件，到受委托银行为本单位职工办理住房公积金帐户设立手续。单位合并、分立、撤消、解散或者破产的，应当自发生上述情况之日起30日内由原单位或者清算组织到住房公积金管理中心办理变更登记或者注销登记，并自办妥变更登记或者注销登记之日起20日内持住房公积金管理中心的审核文件，到受委托银行为本单位职工办理住房公积金帐户转移或者封存手续。 五、什么情况下职工可以提取住房公积金？ 答：职工有下列情形之一的，少林活络膏可以提取职工住房公积金帐户内的存储余额：（一）购买、建造、翻建、大修自住住房的； （二）离休、退休的； （三）完全丧失劳动能力的，并与单位终止劳动关系的； （四）户口迁出所在的市、县或者出境定居的； （五）偿还购房贷款本息的； （六）租房超过家庭工资收入的规定比例的。 依照前款第（二）、（三）、（四）项规定，提取职工住房公积金的，应当同时注销
成都住房公积金管理中心便民服务手册(常见业务问答50例)
成都住房公积金管理中心便民服务手册（常见业务问答50例）供稿：成都住房公积金管理中心更新时间：2013-03-04 00:00:00查看次数：2727 次 一、住房公积金的概念是什么？ 住房公积金是国家机关、国有企业、城镇集体企业、外商投资企业、城镇私营企业及其他城镇企业、事业单位及其职工，按照国务院《住房公积金管理条例》共同缴存的，属于职工个人所有，按照“个人存储、单位资助、统一管理、专项使用”原则进行管理，具有保障性和互助性的一种长期性住房储金。 二、职工缴存住房公积金有什么好处？ 缴存住房公积金有六条好处：一是职工个人和所在单位为职工缴存的住房公积金均归职工个人所有；二是相关规定范围内缴存的住房公积金免征个人所得税；三是符合条件的缴存职工在购买自住住房时可申请住房公积金低息贷款；四是职工可按规定申请提取住房公积金用于购（建）房、偿还住房贷款本息等；五是住房公积金按规定利率计息，利息归职工个人所有；六是职工退休时一次性提取个人住房公积金及利息，相当于积累了一笔可观的养老储金。 三、住房公积金的缴存是否具有强制性？ 国务院《住房公积金管理条例》是1999年4月3日国务院颁布的行政法规，适用于中华人民共和国境内，具有普遍约束力，即强制力。城镇所有单位和其在职职工均应实行，单位须按规定到住房公积金管理中心和受委托银行，为所属在职职工（不包括外方及港、澳、台人员，包括与单位
签订聘用（劳动）合同或虽未签订合同但形成事实劳动关系的职工）办理住房公积金缴存登记和开户手续，足额代扣职工应缴存部分，并把单位应缴和为职工代扣代缴的部分按时足额缴存至受住房公积金管理中心委托的银行。 四、职工如何投诉和举报单位未缴或少缴住房公积金的行为？ （1）职工可以投诉单位不为其建立住房公积金制度或少缴住房公积金的情况。需提供以下书面材料： ①投诉信(在成都住房公积金管理中心网站下载，网址https://www.wendangku.net/doc/062246027.html,）； ②入职时间至离职时间的劳动合同原件及复印件； ③入职时间至离职时间的工资收入证明原件及复印件； ④身份证原件及复印件； ⑤《历年工资明细表》、《住房公积金应缴额统计表》。 注意：若职工发起举报和投诉时已离职，则离职时间为投诉截止时间。 五、住房公积金的月缴存额应当如何计算？ 职工住房公积金月缴存额=职工本人住房公积金月缴存基数×职工个人住房公积金缴存比例+职工本人住房公积金月缴存基数×单位住房公积金缴存比例。 六、如何确定职工住房公积金的缴存基数？ 根据国务院《条例》规定，职工个人住房公积金缴存基数为职工本人上一年度月平均工资，职工工资总额以国家统计局职工工资总额指标解释
广州住房公积金提取要点及常见问题解答
职工有下列情形之一的，可申请提取住房公积金。 1．购买、建造、翻建或大修具有所有权的自住住房的； 办理流程：单位或职工提供要件材料→银行经办网点受理并录入扫描资料→中心审批（不超过3个工作日）→提取转账。 需要提交的资料：职工符合规定提取条件的，应提供《住房公积金提取申请表》一式一份，本人身份证复印件、提取申请人广州市内建设银行、工商银行、中国银行、广州银行、农业银行、光大银行、农商银行、平安银行、中信银行、兴业银行、招商银行其中一家的活期存折或银行储蓄卡复印件、相应证明材料（详见下文）复印件等，证明材料均需提供原件用于核对。销户提取的，如已领取对账簿的职工还需提供对账簿原件。 相应的证明材料应包括： 1．非按揭购买自住住房的： ①购买一手楼的（申请日期不超过自支付最后一笔房款之日起两年），提供经市（或区）房地产交易登记部门监证登记的购房合同（已出房地产权证的，需提供房地产权证）、购房发票。 职工购买广州市行政区域内房屋（本地房产）办理提取的，提取资料原件需经银行网点前台扫描录入系统，成功办理提取的，之后以同一套住房申请提取时（提取信息不发生变更），只需提供身份证原件到银行网点前台办理即可；职工也可通过网上办事大厅（个人版）办理提取申报，审批通过的直接转账，无需到网点前台确认。资料发
生变更的（如购房地址或转账账号等发生变更），需提供变更资料原件及复印件一份到银行网点前台办理变更手续。 ★以非按揭购买自住住房、偿还购房贷款本息、租房自住为提取条件的，每半年可提取一次；自2013年9月26日起，职工每半年提取一次的时间间隔以个人住房公积金账户实行管理，即职工个人住房公积金账户上次提取转账时间与下次提取转账时间间隔必须为180天（含180天）以上。以建造、翻建或大修具有所有权的自住住房为提取条件的，只能提取一次。 在线咨询： 咨询信息 标题：全额付款买房提取公积金 业务咨询类别：提取 提交时间：2014-02-17 内容描述：请问下全额付款买房，个人公积金账户内的金额可以提取吗？怎么提取法？之后是不是半年都可以提取一次？谢谢！ 处理回复 回复时间：2014-02-17 回复内容：您好！ 职工购买自住住房且符合提取规定的，可申请提取本人在广州市缴存的住房公积金。若您是非按揭购买一手楼的，申请日期不超过自支付最后一笔房款之日起两年；若您是非按揭购买二手楼的，自取得契税完税证之日起两年内申请。在上述规定时间内提出申请的，以后每半年提取一次，直至提取额达到房屋的可提取额度。 谢谢您的咨询！ 咨询信息
质粒提取简介问题分析
质粒提取简介及问题分析 一、导论 (一) 质粒提取的原理： 为了方便理解，这里罗列一下碱法质粒抽提用到三种溶液： 溶液I，50 mM葡萄糖，25 mM Tris-HCl，10 mM EDTA，pH 8.0； 溶液II，0.2 N NaOH，1% SDS； 溶液III，3 M 醋酸钾，2 M 醋酸。 让我们先来看看溶液I的作用。任何生物化学反应，首先要控制好溶液的pH，因此用适当浓度的和适当pH值的Tris-HCl溶液，是再自然不过的了。那么50 mM葡萄糖是干什么的呢？加了葡萄糖后最大的好处只是悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部。因此，如果溶液I中缺了葡萄糖其实对质粒的抽提本身而言几乎没有任何影响，所以说溶液I中葡萄糖是可缺的。EDTA是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂，配在分子生物学试剂中的主要作用是：抑制DNase的活性，和抑制微生物生长。在溶液I中加入高达10 mM 的EDTA，就是要把大肠杆菌细胞中的所有二价金属离子都螯合掉。如果不加EDTA，其实也没什么大不了的，只要是在不太长的时间里完成质粒抽提，就不用怕DNA会迅速被降解，因为最终溶解质粒的TE缓冲液中有EDTA。如果手上正好缺了溶液I，可不可以抽质粒呢？只要用等体积的水或LB培养基来悬浮菌体就可以了。有一点不能忘的是，菌体一定要悬浮均匀，不能有结块。 轮到溶液II了。这是用新鲜的0.4 N的NaOH和2%的SDS等体积混合后使用的。要新从浓NaOH 稀释制备0.4N的NaOH，无非是为了保证NaOH没有吸收空气中的CO2而减弱了碱性。很多人不知道其实破细胞的主要是碱，而不是SDS，所以才叫碱法抽提。事实上NaOH是最佳的溶解细胞的试剂，不管是大肠杆菌还是哺乳动物细胞，碰到了碱都会几乎在瞬间就溶解，这是由于细胞膜发生了从bilayer(双层膜)结构向micelle(微囊)结构的相变化所导致。用了不新鲜的0.4 N NaOH，即便是有SDS也无法有效溶解大肠杆菌(不妨可以自己试一下)，自然就难高效率抽提得到质粒。如果只用SDS当然也能抽提得到少量质粒，因为SDS也是碱性的，只是弱了点而已。很多人对NaOH的作用误以为是为了让基因组DNA 变性，以便沉淀，这是由于没有正确理解一些书上的有关DNA变性复性的描述所导致。有人不禁要问，既然是NaOH溶解的细胞，那为什么要加SDS呢?那是为下一步操作做的铺垫。这一步要记住两点：第一，时间不能过长，千万不要这时候去接电话，因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂；第二，必须温柔混合，不然基因组DNA也会断裂。基因组DNA的断裂会带来麻烦。 溶液III加入后就会有大量的沉淀，但大部分人却不明白沉淀的本质。最容易产生的误解是，当SDS 碰到酸性后发生的沉淀。如果这样怀疑，往1%的SDS溶液中加2M醋酸溶液看看就知道不是这么回事了。大量沉淀的出现显然与SDS的加入有关系。如果在溶液II中不加SDS，也会有少量沉淀，但量上要少得多，显然是盐析和酸变性沉淀出来的蛋白质。既然SDS不是遇酸发生的沉淀，那会不会是遇盐发生的沉淀呢？在1%的SDS溶液中慢慢加入5 N的NaCl，会发现SDS在高盐浓度下是会产生沉淀的。因此高浓度的盐导致了SDS的沉淀。但如果你加入的不是NaCl而是KCl，你会发现沉淀的量要多的多。这其实是十二烷基硫酸钠(SDS)遇到钾离子后变成了十二烷基硫酸钾(PDS)，而PDS是水不溶的，因此发生了沉淀。如此看来，溶液III加入后的沉淀实际上是钾离子置换了SDS中的钠离子形成了不溶性的PDS，而高浓度的盐，使得沉淀更完全。大家知道SDS专门喜欢和蛋白质结合，平均两个氨基酸上结合一个SDS分子，钾钠离子置换所产生的大量沉淀自然就将绝大部分蛋白质沉淀了，让人高兴的是大肠杆菌的基因组DNA也一起被共沉淀了。这个过程不难想象，因为基因组DNA太长了，长长的DNA自然容易被PDS给共沉淀了，尽管SDS并不与DNA分子结合。 (二)细菌的收获和裂解。 细菌的收获可通过离心来进行，而细菌的裂解则可以采用多种方法中的任意一种，这些方法包括用非离子型或离子型去污剂、有机溶剂或碱进行处理及用加热处理等。选择哪一种方法取决于3个因素：质粒的大小、小肠杆菌菌株及裂解后用于纯化质粒DNA的技术。尽管针对质粒和宿主的每一种组合分别提出精确的裂解条件不切实际，但仍可据下述一般准则来选择适当方法，以取得满意的结果。 1、大质粒(大于15kb)容易受损，故应采用漫和裂解法从细胞中释放出来。将细菌悬于蔗糖等渗溶液中，然后用溶菌酶和EDTA进生处理，破坏细胞壁和细胞外膜，再加入SDS一类去污剂溶解球形体。这种
住房公积金常见问题
1.什么是住房公积金？ 答：住房公积金是指国家机关、事业单位、企业、民办非企业单位、社会团体及其在职职工逐月缴存的支持职工解决自住住房问题的具有保障性、互助性和强制性的长期住房储金。根据有关规定，住房公积金由在职职工和所在单位缴存，缴存的住房公积金进入职工住房公积金账户，并属于职工个人所有。与储蓄不同，住房公积金不能随便提取，主要用于解决职工住房问题，职工购房、大修、翻建或租房时可以申请住房公积金贷款，或申请提取一定金额的住房公积金。 2. 缴纳住房公积金对职工个人有何益处？ 答：对职工个人而言，缴存住房公积金有以下几项好处： （1）增加职工个人收入。住房公积金由单位和其在职职工共同缴存，所缴住房公积金全归职工个人所有，且住房公积金自存入职工账户之日起按规定计息。 （2）低息贷款。职工购房时使用住房公积金贷款，可享受较商业贷款低的利率。 （3）税收优惠。职工缴存的住房公积金，在税务部门规定限额内的部分免征个人所得税。 （4）住房消费提取。职工可以提取住房公积金用于建房、购房、租房、还贷等住房消费支出； （5）非住房消费提取。职工符合退休、户籍迁出本市、重大疾病等八项情形之一的，可提取住房公积金。 3. 一个人可以有多个住房公积金账户吗？ 答：《住房公积金管理条例》规定，每个职工只能有一个住房公积金账户。 4.什么是住房公积金贷款？ 答：住房公积金贷款是指住房公积金管理中心委托商业银行向符合公积金贷款条件的户籍和非户籍缴存职工发放的用于购买、建造、翻建、大修自住住房的政策性低息贷款。 5.哪些银行可以发放住房公积金贷款？ 答：目前，深圳市住房公积金管理中心已与中国银行股份有限公司深圳市分行、中国农业银行股份有限公司深圳市分行、中国工商银行股份有限公司深圳市分行、中国建设银行股份有限公司深圳市分行、交通银行股份有限公司深圳分行、招商银行股份有限公司深圳分行、平安银行股份有限公司深圳分行（银行排名不分先后）签订了委托贷款合作协议，符合公积金贷款条件的职工，可自行选择其中一家办理公积金贷款相关手续。 6.住房公积金贷款的资金来源是什么？ 答：住房公积金贷款的资金来源于职工提取后的缴存余额，体现了住房公积金制度的互助性。正
DNA测序结果中常见的几个问题
D N A测序结果中常见 的几个问题 公司内部档案编码：[OPPTR-OPPT28-OPPTL98-OPPNN08]
1 、为什么开始一段序列的信号很杂乱，几乎难以辨别 这主要是因为残存的染料单体造成的干扰峰所致，该干扰峰和正常序列峰重叠在一起；另外，测序电泳开始阶段电压有一个稳定期，所以经常有20-50 bp 的紧接着引物的片段读不清楚，有时甚至更长。 2 、为什么在序列的末端容易产生 N 值，峰图较杂 由于测序反应的信号是逐渐减弱的，所以序列末端的信号会很弱，峰图自然就会杂乱，加上测序胶的分辨率问题，如果碱基分不开，就会产生N 值，正常情况下ABI377测序仪能正确读出500个碱基的有效序列。 3 、测序结果怎么找不到我的引物序列 如果找不到测序所用的引物序列。这是正常的，因为引物本身是不被标记的，所以在测序报告中是找不到的；如果找不到克隆片段中的扩增引物，可能是您克隆的酶切位点距离您的测序引物太近，开始一段序列很杂，几乎难以辨别，有可能看不清或看不到扩增引物；另外插入片段的插入方向如果是反的，此时需找引物的互补序列。 4 、测序结果怎么看不到我克隆的酶切位点 可能的原因同上，您克隆的酶切位点距离您的测序引物太近，开始一段序列很杂，几乎难以辨别，有可能看不清或看不到酶切位点。通常我们会尽量选择距离酶切位点远点的引物，当然，若是样品出现意外原因，如空载、载体自连等，克隆的酶切位点也是看不到的。 5 、你测出的结果与我预想的不一致，给我的结果与我需要的序列有差距，这是怎么回事
首先，我们会核实给您的测序结果是否对应您的样品编号，如果对应的是您的样品，由于不知您的实验背景，测得的序列是否与您预想的结果一致我们无法判断，我们能做到的是检查发送给您的测序结果和您提供来的样品是否一致。 6 、序列图为什么会有背景噪音(杂带)是否会影响测序结果 序列图的背景杂带是由荧光染料引起，如果太强会影响测序结果，要看信噪比，我们给的结果信噪比大都在98%以上。 7 、测序结果为什么与标准序列有差别 原因可能有：样品个体之间的差别、测序准确率的问题，自动测序仪分析序列的准确并非100%，建议至少测一次双向，通过双向测序可以最大限度减少测序的错误。当然尽管我们有时做了最大努力，但还是保证不了和文献序列完全一致，但我们测序报告是客户样品序列的真实结果。 8 、 PCR 产物测序与克隆后测序序列为什么有差别 PCR 产物克隆到载体中进行测序，有两个方面可能序列有变化：首先，PCR 扩增过程中可能产生错配。将片段克隆到载体中也有可能发生突变；其次，测序的准确率并非100%。 9 、有杂合位点，但你们的报告上看不到杂合的信号！ 如果在您认为应该出现杂合信号的位置上只出现单一的信号，那么可能是您样品突变的模板与正常的模板的比例没达到可以测出的浓度。测序反应的信号强度直接与模板的量有关，如果突变的模板所占的比例很低，仪器会自动将它作为背景信号了，很难检测出来。只有当测序反应体系中正常的和突变的模板量比较接近时，才能较可靠地检测到突变体