《实验实训指导书》#优选.

实验一药理学实验基本知识和技术

实验目的：1、掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力；

2、更好地掌握药理学基本理论知识；

3、培养科学思维。

实验内容：一、药理实验的基本目的与要求

二、实验动物：

1、动物的选择；

2、动物的标记与捉拿、固定方法；

3、动物的取血方法（尾尖、眼眶静脉丛、摘眼球、断头）；

4、动物的给药方法（灌胃、腹腔、皮下、尾静脉）；

5、动物的麻醉方法；

6、动物的处死方法。

三、实验设计基本原则。

实验步骤：

一、药理学实验的基本目的与要求

药理学实验课在药理学教学中占有非常重要的地位。药理学实验课的目的在于通过实验验证药理学的基本理论，加深理解与掌握药理学的基本知识和规律；也是了解获得药理学知识的科学途径。同时，培养学生独立思考，独立工作，科学思维的能力；培养学生动手操作、分析问题和解决问题的能力；还应培养学生对科学工作的严肃的态度、严格的要求、严密的工作方法及实事求是的工作作风。

为了达到上述目的，要求做到下列事项：

1.实验前：预习实验内容并复习相关理论知识；

2.实验时：

（1）实验分小组进行，实验前分工明确，实验时密切配合；

（2）确定实验仪器、药品、动物与实验指导相符时，将实验器材妥善安排，正确装置、保管；

（3）实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录；

（4）注意爱护动物、节约实验药品；

（5）实验过程中保持实验室肃静、清洁。

3.实验后：

⑴ 各组同学将实验动物处死，实验台擦干净，将实验方盘送回准备室；

⑵ 值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所；

⑶ 整理实验结果，经分析思考作出结论，按要求写出实验报告，按时交给指导老师。

实验报告的书写

1.题目

2.目的

3.原理

4.材料：实验动物，器材，药品

5.方法：用自己的语言简单扼要描述出来；

6.结果：要求真实、清楚；

7.讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因；

8.结论：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。

二、实验动物

1、动物的选择：药理学实验中常用的动物有青蛙、蟾蜍、小鼠、大鼠、豚鼠、家兔、猫、狗、猴等。动物对药物的反应具有种属差异性，可根据实验目的和要求选用不同的实验动物。例如：

（1）小白鼠：适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。也较适用于避孕药实验、抗炎

镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。

（2）大白鼠：比较适用于抗炎药物实验，血压测定、利胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。（3）豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。也常用于离体心脏、心房、肠管实验。又因它对结核敏感，常用于抗结核病药的实验。

（4）家兔：常用于观察研究脑电生理作用，药物对小肠的作用。由于家兔体温变化敏感，也常用于体温实验，用于热原检查。

（5）狗：狗是记录血压，呼吸最常用的大动物。还可利用狗做成胃瘘、肠瘘，以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。

（6）猴是接近于人类的高级动物。神经系统比较发达，常用于观察药物对行为的影响。猕猴的月经周期和人一样，是研究生殖课题的首选动物。另外，新药临床前毒性评价，也需要使用猴。

2、动物的标记与捉拿、固定方法

（1）动物的标记狗、兔等较大的动物可用特制的铝质号码牌固定在颈部或耳上。大鼠、小鼠和家兔多用染色法，一般用1％的苦味酸溶液（黄色）或5％中性红溶液（红色）涂于动物体表不同部位的皮毛处，代表不同号码。编号原则是先左后右，自前到后。

（2）动物捉拿、固定方法

①小白鼠右手抓住其尾部放在鼠笼盖铁纱网上，用左手拇指及食指沿其背部向前抓起颈背部皮肤，并以左手

的小指、无名指固定其尾部，便可将小鼠固定在手上。

②大白鼠用右手提起尾部，放在粗糙面上，左手的拇指和食指捉其头部，其余三指夹住背腹部即可固定。

③豚鼠豚鼠性情温和不咬人，用手握住躯干即可。

④家兔

可用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势。在进行仰位手术操作时，可用绳

带将其四肢仰位捆绑在兔手术台上。头部用兔头固定夹固定。

3、动物的取血方法

（1）小鼠和大鼠

①颈静脉或颈动脉取血：麻醉动物，背部固定，颈部去毛，碘酒消毒，切开皮肤，分离出动脉或静脉，将注射

针平行刺入血管，慢慢回抽针栓即可取血。动脉取血时，亦可将远心端结扎，用动脉夹夹住近心端，在动脉中央剪一

小口，插入聚乙烯管，然后放开动脉夹，血液可自动流出。兔和豚鼠也常用此方法取血，手术操作与大鼠相似。

②尾尖取血：将鼠固定在铁丝笼或特别筒内，使鼠尾露在外面。剪掉鼠尾（小鼠1mmr

2mm大鼠5mmr 10mr），用拇指和食指由尾根向尾尖按捏，血液即从尾尖流出。小鼠每次可采血0.1ml ，大鼠每次

可采血0.5ml 。注意：只剪去尾尖，如剪去过多组织，反而流血少。下次取血时，只需将尾尖血痂剪掉即可。

③眼球取血：左手持鼠，

使眼球突出，并使头向下。右手持弯曲镊，钳夹一侧眼球根部，将眼球摘除。血液即可从断裂的眼眶动物、静脉涌

出，血量约为鼠体重的4%?5%,适用

于一次性取血。

④眼眶后静脉丛取血：固定鼠头部皮肤, 轻轻向后压迫颈部两侧, 使头部静脉回流受阻,

眼球充分外突，用内径1?1.5mm的毛细血管朿9入下眼睑与眼球之间，轻轻向眼底部方向移动,血即可流入玻璃管内,一般两眼可各取一次。

⑤断头取血：用剪子剪断鼠头, 立即将鼠颈部向下, 提起动物, 并对准已准备好的容器,

可接取所需血液。小鼠可取血约1ml，大鼠可取血约8ml。

（2）家兔

①心脏取血：将家兔背位固定，在胸骨左缘3mm第3?4肋间隙，触及心跳最明显部位，

以8 号针头9入，即可有血流入注射器内，亦可抽取，如没9入心脏，一定要将针提到皮

下改变方向,再重新9入。

②耳缘静脉取血：将耳根部压紧，拔去耳缘毛，用酒精涂擦使血管扩张明显，以6?7

号针头,针尖向离心方向9入,缓慢抽取血液。

③股动脉、静脉取血：将家兔麻醉、背位固定，手术分离出股动脉或静脉，插入套管即可根据需要量取血。

4、动物的给药方法

（1）小鼠、大鼠

①灌胃法（i.g.）：以左手固定鼠后, 使其腹部朝上,颈部伸直。右手持配有灌胃针头的注射器,自口角插入口腔,再从舌面沿上腭进入食道。

②腹腔注射（i.p.）：以左手固定鼠, 方法同灌胃, 右手持注射器, 取30 度角将针头从下腹部向头端9入腹腔。进针部位不宜过高,9入不宜太深,以免伤及内脏。

③皮下注射（s.c.）：用左手固定鼠后,右手持注射器于拇指和食指捏起的皮肤处进针即可。

④静脉注射（i.v.）：将鼠置于特制的固定筒内或倒置的大漏斗下,让其尾部露出。用酒

精或二甲苯涂擦尾部，或将鼠尾在50C热水中浸泡半分钟使血管扩张。左手拉尾端，右手

持注射器将针头9入尾静脉,推入药液。

（2）家兔

①灌胃：需两人合作进行。一人取坐位用两腿夹持兔身，左手握家兔双耳，右手抓住两前

肢。另一人将木制开口器横插家兔口内, 压住舌头并固定之。取8号导尿管从开口器中部小孔插入食道。插管时如误入气管会出现动物的挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外端浸入水中,如有气泡吹出,表示插在气管内,此时应拔管重插。当判明导尿管在食道以内后,用注射器接通导尿管将药液推入。

②皮下、腹腔注射：给药方法基本上同小鼠,唯针头可稍大,给药量可稍多。皮下与肌

内为0.5 ?1.0/mg，腹腔为1.0 ?5.0ml/mg。

③静脉注射：将家兔置固定箱内，拨去耳壳外缘的毛，选择一条比较明显的耳缘静脉，用

酒精棉球涂擦皮肤, 使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部, 食指垫在兔耳注射处的下面,右手持注射器,将针头从近耳尖处9入,当确认针头在血管中后,将药液推入。

5、动物的麻醉方法

（1）局部麻醉：常采用2%普鲁卡因做皮下浸润注射,可用于局部手术。

（2）全身麻醉：

①吸入麻醉：可将乙醚蘸在棉球上放入玻璃罩内，利用乙醚挥发的性质，经肺泡吸收，作

用较快,适用于小鼠、大鼠短时间麻醉。

②注射麻醉：常用戌巴比妥钠和乌拉坦。

注意事项：

配制注射用麻醉剂，一般用蒸馏水，也可用生理盐水。

静脉麻醉时，剂量要准确、浓度要适中，注射速度要缓慢，均匀。冬季作实验时，应将药液加温到动物体温水平。

密切观察动物眼睑，角膜及趾反射，避免麻醉过深引起动死亡。一旦麻醉过量，尽早采取人工呼吸等措施。6、动物的处死方法

（1）小鼠和大鼠

常采用颈椎脱臼法，即用左手拇指和食指将其头部紧按在硬的物体上，右手捏住鼠尾，用力向后牵拉，使颈椎脱位，鼠可瞬间死亡。大鼠也常用断头法处死。

（2）家兔

空气栓塞法：用50?100ml注射器，往静脉内迅速注入空气，动物因血管气栓致死。家兔注射空气量为10?

20ml。

三、实验设计基本原则

1、随机原则

使每一实验对象都有同等的机会抽到实验组或对照组中，除处理因素外其他因素尽可能均衡一致，从而抵消非实验因素的影响。

2、对照原则

（1）组间对照：指在实验中设立若干平行组，如空白对照（等量的生理盐水）和标准品对照（等量典型药物）。

实验时注意实验组和对照组例数相等。

（2）自身前后对照：指在同一个体观察给药前后某些指标的变化，或者两种药物一前一

后的交叉比较，这样既可减少个体差异，还节约了动物（尤其是大动物），两种药物交叉比

较时，间隔时间应参考药物的半衰期。

3、重复原则

即实验过程需多次重复进行。它包含二个含义，即重复数和重现性。重复数即动物的个数，统计学上叫“样本数”；重现性即在动物、药品、器材及环境因素等相同条件下，实验结果可靠稳定地重复出来。

实验提示：

学生通过本次实验学习要求熟悉、掌握药理学实验中动物的选择、标记、捉拿、固定以

及常用取血、给药、麻醉、处死的方法。为后续的实验操作打下良好的基础。

实验思考：如何设计实验可以减少实验误差。

实验二不同给药途径对药物作用的影响

实验目的：观察不同给药途径对硫酸镁作用的影响。

实验内容：实验器材、药品和动物的准备

器材：鼠笼、天平、Iml注射器、小鼠灌胃针头。

药品：15%硫酸镁（含水）溶液。动物：小白鼠2只，体重18?22g,雌雄不拘。

实验步骤：取小鼠2只，分别称重并标记。一只小鼠腹腔注射15%硫酸镁溶0.1mI/I0g ; 另一只小鼠用同样剂量的硫酸镁灌胃。分别将小鼠置小笼中，观察其在15分钟内表现

有何区别。

将结果填入下表：不同给药途径对硫酸镁作用的影响

鼠号体重（g）药量（ml/10g）给药途径给药前表现

给药后表现【注意事项】

1、掌握正确的灌胃操作技术，不要误插气管或插破食管，前者可致窒息，后者可出现如同腹腔注射时的吸收症状，重则死亡。

2、注射后作用发生较快，需留心观察。

实验提示：不同给药途径，吸收速度有差别，药物反应程度亦有差别。通过本实验使学生验证理论知识。

实验思考：

给药途径不同时，药物的作用为什么有的会出现质的差异？

实验三药物剂量对药物作用的影响

实验目的：观察不同剂量戊巴比妥钠对小鼠作用的差异。

实验内容：实验器材、药品和动物的准备

器材：鼠笼、粗天平、Iml注射器、小鼠灌胃针头。

药品：0.1%、0.2%、0.4%戊巴比妥钠溶液。

动物：小白鼠3只，体重18?22g,雌雄不拘。

实验步骤：取小鼠3只编号并以苦味酸溶液涂毛作不同记号。分别称其体重及观察小鼠正常活动情况。各鼠经腹腔注射不同浓度的戊巴比妥钠溶液0.2m1/l0 g，分别置于小笼中，密切

注意先后出现的反应。

将实验结果记录于下表：

不同剂量戊巴比妥钠对小鼠作用的差异

鼠号体重（g）剂量（ml/10g）潜伏期给药前表现给药后表现1

2

3

【注意事项】

1、小鼠对戊巴比妥钠可能出现的反应，按由轻到重程度有：活动增加、呼吸抑制、翻正反射减弱、消失、反射亢进、麻醉、死亡等。

2、比较各鼠所出现反应的严重程度和发生快慢。

实验提示：同一药物给药剂量不同，药物反应程度亦有差别。通过本实验使学生验证理论知识和培养学生观察能力。实验思考：

了解药物的剂量和作用的关系对于进行药理试验和临床用药有何重要意义？

实验四苯巴比妥钠的抗惊厥作用

实验目的：学习动物惊厥模型的复制方法；观察大剂量尼可刹米的中毒反应；掌握苯巴比妥

钠的抗惊厥作用。

实验内容：实验器材、药品和动物的准备

器材：鼠笼、粗天平、Iml注射器3支、小鼠灌胃针头、大烧杯。

药品：2.5%尼可刹米，0.5%苯巴比妥钠，生理盐水。

动物：小白鼠4只，体重18?22g,雌雄不拘。

实验步骤：

1.取体重相近的小白鼠4只，称重，编号，随机分组，分为实验组和对照组。

2.实验组小鼠腹腔注射0.5%苯巴比妥钠0.5mg/10g(0.1ml/10g);对照组腹腔注射等体积生理盐水。

3.15min后实验组和对照组分别腹腔注射 2.5%尼可刹米溶液0.2 —0.3ml/10g，连续

观察20min，详细记录两组小鼠的反应情况。

4.观察用药后小鼠的反应：有无兴奋、惊厥(以后脚伸直为惊厥指标)和死亡将实验结果填入下表：

1.注意观察小鼠给药后的反应，如出现竖尾、洗脸、猛烈地奔跑、撞笼、跳跃等反应即为惊厥前兆。

2.腹腔注射部位要准确，否则会影响实验结果。

3.给药后应保持室内安静，避免刺激实验动物。

实验提示：尼可刹米为常用的呼吸中枢兴奋药。主要作用是直接兴奋延脑呼吸中枢，对大脑

皮层、血管运动中枢和脊髓也有兴奋作用。过大剂量可引起惊厥，继而发生中枢抑制而死亡。

苯巴比妥钠是一种普遍性中枢抑制药，具有良好的抗惊厥作用。通过本实验使学生验证理论

知识、培养学生观察和对实验基本机能的掌握程度。

实验思考：

简述苯巴比妥钠的药理作用及临床应用。

实验五镇痛实验

(一)热板法