文档库

最新最全的文档下载
当前位置:文档库 > 荧光定量PCR之绝对定量分析——标准曲线的绘制

荧光定量PCR之绝对定量分析——标准曲线的绘制

荧光定量PCR之绝对定量分析——标准曲线的绘制

1. 绝对定量定义

绝对定量是用已知浓度的标准品绘制标准曲线来推算未知样品的量。

将标准品稀释至不同浓度,作为模板进行PCR反应。以标准品拷贝数的对数值为横坐标,以测得的CT值为纵坐标,绘制标准曲线,对未知样品进行定量时,根据未知样品的CT值,即可在标准曲线中得到样品的拷贝数。

* Log(起始浓度)与循环数呈线性关系,通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,即得到该扩增反应存在的线性关系

* 由样品CT值,就可以计算出样品中所含的模板量

荧光定量PCR之绝对定量分析——标准曲线的绘制

2. 绝对定量标准品

标准品的一些标准

* 必须用与扩增目的基因相同的引物进行扩增,并且扩增效率相同

* 标准品必须是经过准确定量的(我们通常用的是ASP-3700紫外光/可见光微量分光光度计)

* 标准品必须是标准化的(例如,同一化的细胞数)

* 在每组实验时,必须用相同的阈值设定来确定CT值

免费下载Word文档免费下载: 荧光定量PCR之绝对定量分析——标准曲线的绘制

(共5页)