铁皮石斛组织培养繁殖技术研究
铁皮石斛组织培养繁殖技术研究
作者：郑慧俊， 张明丽， 邹春晶， 龚仲幸， Zheng Huijun， Zhang Mingli， Zou Chunjing， Gong Zhongxing
作者单位：杭州职业技术学院,杭州,310018
刊名：
农业工程
英文刊名：AGRICULTURAL ENGINEERING
年，卷(期)：2012,2(11)
本文链接：https://www.wendangku.net/doc/019824100.html,/Periodical_nygch201211019.aspx
铁皮石斛组织培养
铁皮石斛组织培养研究进展组织培养 摘要：近年来，对铁皮石斛的需求日趋增加，而野生资源难以满足市场需求，组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况，并展望了发展前景。 铁皮石斛为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。《神农本草经》列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。 1 种子萌发 1.1 胚龄 不同种龄的种子萌发率不一样。叶秀嶙等取铁皮石斛2~ 6 个月种龄的种子进行组织培养发现，种龄愈长，萌发率愈高。2 个月种龄的种子接入改良N6培养基中，萌发率仅为6 % ; 3 个月种龄的种子接入改良叹培养基中，培养2 周后开始萌发，萌发率为87 % ; 4 一6 个月种龄的种子接入培养基中，只要培养一周即可萌发，萌发率为95 ％。曾宋君等将铁皮石斛种子接入改良N6培养基中进行组织培养，亦得到相似的结论，幼胚胚龄在60d 以下时，萌发率极低，随着胚龄的增长，其萌发期逐渐缩短，萌发率逐渐升高，成苗率也逐渐
升高，但到达一定的胚龄后，差异并不明显。 1.2 基本培养基 铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。罗吉凤等比较了MS 、l / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。 1.3 激素 在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA 对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L 为最佳。 1.4 天然添加物 在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不
铁皮石斛组织培养研究进展组织培养.
铁皮石斛组织培养研究进展 1、1 种子萌发1.2 基本培养基 铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。曾宋君等田将铁皮石斛种子在SH 、改良N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良N6或自制PT 培养基。罗吉凤等比较了*** / 2MS 、1 / 2 N6和White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到95 % ，但1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。 1.3 激素 在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以0.5mg/L为最佳。 1.4 天然添加物
在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。 1.5 炭源 在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2 ％蔗糖。曾宋君等在改良N6＋NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素 2 原球茎增殖 2.1 基本培养基 铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。张治国等研究了6 种不同培养基对铁皮石斛原球茎增殖的影响，结果表明，l /2 MS 是原球茎增殖的适宜培养基。 2.2 激素 适宜的NAA 、KT 、6 一BA 浓度对原球茎的增殖起促进作用。唐桂香等以1 / 2 MS 为基本培养基，发现BA 1.0mg/L和NAAO.lmg/L有利于原球茎诱导增殖。蒋林等叫研究表明，l / 2Ms + NAA1.0mg/L+ KTO.2mg/L比较适合嗓球茎的增殖。蒋波等以1 / 2MS 为基本培养基.添加BA 2.0mg/L + NAA0.5mg/L或6 一BA3.0mg/L + NAAO.5 mg/L的激素，原球茎
铁皮石斛组培技术
铁皮石斛的组织培养研究 专业班级： 姓名： 学号： 课程：植物组织培养
目录 摘要 (3) Abstract (4) 前言 (5) 1.培养基 (6) 1.1配方 (6) 1.2配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例） (6) 1.3灭菌 (8) 2.转接 (9) 2.1转接前准备 (9) 2.2转接 (9) 2.3培养 (9) 3.炼苗 (10) 3.1炼苗目的 (10) 3.2炼苗方法 (10) 4.移栽 (11) 4.1基质选择 (11) 4.2移栽技术要求 (11) 5.结论与分析 (12) 参考文献 (13)
摘要 铁皮石斛(Dendrobium officinale)是兰科(Orchidaceae)石斛属(DendrobiumSw．)多年生草本植物。铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛是传统名贵中药材，有生津益胃、清热养阴和清咽利嗓等功效，主要药用成分石斛多糖是一种免疫调节剂。铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低。为了保护和有效利用铁皮石斛，通过组织培养技术大量快速繁殖铁皮石斛组培苗显得尤为重要。 关键词：铁皮石斛组织培养移栽培养基转接快速繁殖
Abstract Dendrobium orchid Dendrobium is a perennial herb. It is the ultimate in DendrobiumSw,named for its ferric green epidermis.As a rare traditional Chinese herbal medicine,it contributes to dry dampness and strengthen the spleen,clear away lung-heat ,nourish yin ，clear away heat ,and so on.The main medicinal components of Dendrobium polysaccharide is a kind of immune modulators.When mature,its capsule cracks,in which seeds are in small particle size and have a low rate of natural reproduction.In order to protect and utilize the Dendrobium orchid Dendrobium ,it is particularly important to establish a rapid propagation by the tissue culture technique . key words:Dendrobium orchid Dendrobium tissue culture culture medium adapter rapid propagation
铁皮石斛的组织培养
由于石斛自然繁殖力极弱，生长缓慢，加之人们掠夺性采挖，资源已严重枯竭。而石斛栽培一直未解决其存活率低、进入盛产期年限长等问题，故石斛药源一直处于紧张状态。因此，组织培养、遗传转化、菌根技术、悬浮培养等生物技术在石斛的应用意义重大，甚为迫切。石斛的组织培养，可用种子、根、茎尖、茎节及叶等为外植体，但以种子进行组培快繁的为多。原球茎的增殖分化是石斛试管苗繁殖的关键，因此，研究原球茎增殖分化的适宜培养条件非常重要。特别是应用组织培养技术快速大量繁殖石斛试管苗，是解决其种苗与发展生产的有效途径。 铁皮石斛的组织培养 铁皮石斛，又名铁皮兰、节草、耳环石斛等。野生铁皮石斛为国家珍稀濒危保护植物（三级）。由于其生长环境要求特殊，野生资源已濒临灭绝。现云南晨安生物科技开发有限公司对铁皮石斛的组培快繁已获成功，月出苗量50万瓶以上，为铁皮石斛工厂化育苗和大面积栽培闯出了一条新路。 1 胚培养（种子培养）：取人工授粉的铁皮石斛果实，用75％的乙醇表面消毒，30s后再用0.1％升汞溶液消毒8min，无菌水冲洗4~5次。在无菌操作下，把果实切成0.1mm见方的小块，接种到培养基上，每瓶3~5块。研究结果表明，N6培养基对种子萌发和生长最好，蔗糖浓度2％最佳，NAA浓度0.2~0.5mg/L最适合胚的萌发和生长；种子培养中加入椰乳对胚萌发和萌发后的初期生长起促进作用；而香蕉汁对继代培养中石斛的生根和壮苗起促进作用，生根和壮苗培养中不加入NAA，只用N6+10％香蕉汁，苗长得更粗壮。培养温度25~28℃，光照强度1600~2000lx，每日10~12h。种子萌发后，转管3~4次，当幼苗长出4~5片真叶并具有3~4条1~2cm长的根时，可将试管苗进行炼苗后移栽。 在实验中尚发现，石斛原球茎的增殖与胚龄相关，不同胚龄培养，其萌发率不同：胚龄45
铁皮石斛组培方案
铁皮石斛组织培养方案报告 一、实验目的 了解铁皮石斛培养的方法和步骤，熟练掌握外植体的取材、消毒、接种、初代培养的操作过程。 二、实验器材 超净工作台、高压灭菌锅、电磁炉、长镊子、培养皿、酒精灯、接种工具、烧杯、玻璃棒、移液管、培养箱、剪刀、培养瓶等。 三、实验步骤 配方： 根据不同阶段，培养基配方有所差异。如表1 表1 各种培养基配方 配制（以1000ml幼株的生根壮苗培养基为例） 10%香蕉（w/w）+MS +3%蔗糖（w/w）+0.8%琼脂（w/w）+2.0mg/L NAA 1）量取800ml蒸馏水于洁净的大烧杯中，加热至沸腾； 2）准确称量100g香蕉果肉，切成碎片状，并倒入上述烧杯中，加热煮沸5min，其间搅拌使之充分溶解； 3）按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ顺序，量取MS各种母液于盛
有50ml蒸馏水的烧杯，混合均匀； 4）将2）和3）的溶液混合，然后加入30g蔗糖，并移取2ml NAA（0.1mg/ml），混合均匀； 5）加热至沸腾，加入8g琼脂并煮沸5min，其间不断搅拌使之充分溶解； 6）冷却至50±5℃时，调pH至5.4—5.6。分装于培养瓶内，33.3ml/瓶。 注意事项： ①溶解香蕉的蒸馏水尽可能多，以确保香蕉各种成分完全溶解； ②各种母液混合时，要按照大量、微量、Fe2+盐、有机Ⅰ、有机Ⅱ的顺序； ③煮沸时，小心溶液溢出； ④分装时不要污染培养瓶瓶口。 灭菌： 1）检查灭菌锅的水位、电源、排气阀、排气管、安全阀以及压力表，确保灭菌锅各指标和功能的正常，以防事故发生； 2）把带灭菌的培养基装入锅内，盖上锅盖，对称而均匀地扭紧螺丝； 3）打开电源和排气阀，调节电压至220V； 4）待排气阀排除水蒸气30s—1min后，关闭排气阀； 5）当温度上升到121℃后，调节电压至135V，保持20min； 6）关闭电源，使之自动降温至0℃。10min后，打开排气阀和锅盖； 7）5—10min后，取出培养基放于试验台上冷却，待用。
组织培养
在铁皮石斛组织培养研究进展组织培养 摘要： 近年来，对铁皮石斛的需求日趋增加，而野生资源难以满足市场需求，组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况，并展望了发展前景。铁皮石斛为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。神农本草经》《列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。 为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。 1 种子萌发 1.1 胚龄不同种龄的种子萌发率不一样。叶秀嶙等取铁皮石斛 2~ 6 个月种龄的种子进行组织培养发现，种龄愈长，萌发率愈高。2 个月种龄的种子接入改良 N6 培养基中，萌发率仅为 6 % ; 3 个月种龄的种子接入改良叹培养基中，培养 2 周后开始萌发，萌发率为 87 % ; 4 一 6 个月种龄的种子接入培养基中，只要培养一周即可萌发，萌发率为 95 ％。曾宋君等将铁皮石斛种子接入改良 N6 培养基中进行组织培养，亦得到相似的结论，幼胚胚龄在 60d 以下时，萌发率极低，随着胚龄的增长，其萌发期逐渐缩短，萌发率逐渐升高，成苗率也逐渐升高，但到达一定的胚龄后，差异并不明显。 1.2 基本培养基铁皮石斛种子在 N6，改良 N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、 KundsonC , 1 / 2N6，White 等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、 MS 等 14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以 N6 最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。曾宋君等田将铁皮石斛种子在 SH 、改良 N6、MS 、KS 、VW 、KundsonC 培养基中培养，得出最适培养基为改良 N6 或自制 PT 培养基。罗吉凤等比较了 MS 、l / 2MS 、 1 / 2 N6 和 White 培养基对铁皮石斛种子萌发的影响，30d 种子发芽率均达到 95 % ，但 1 / 2MS 培养基上所萌发的原球茎较大。 1.3 激素在培养基中添加一定浓度的 NAA 可促进种子的萌发，浓度以 0.2 一 0.5mg/L 最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。2 , 4-D 对胚的萌发起抑制作用。6 一 BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA 对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过 1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。ABA 有抑制种子萌发和抑制植物生长的作用，但张铭等发现 ABA 能显著提高铁皮石斛原球茎的质量，浓度以 0.5mg/L 为最佳。 1.4 天然添加物在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发，但张玲等认为香蕉提取物和椰乳对种子萌发和正常发育有不利影响，干扰其正常发育过程。 1.5 炭源在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人 2 ％蔗糖。曾宋君等在改良 N6＋NAA 0.2mg/L 的最适培养基上，发现以白糖、片糖为炭源时，胚萌发和成苗的效果比蔗糖好，这可能是白糖、片糖中含有适合胚萌发和成苗的矿质元素 2 原球茎增殖 2.1 基本培养基铁皮石斛原球茎增殖可以 1/2 MS，MS 等作为基本培养基。张治国等研究了 6 种不同培养基对铁皮石斛原球茎增殖的影响，结果表明， /2 l MS 是原球茎增殖的适宜培养基。 2.2 激素适宜的 NAA 、KT 、6 一 BA 浓度对原球茎的增殖起促进作用。唐桂香等以 1 / 2 MS 为基本培养基，发现 BA 1.0mg/L 和NAAO.lmg/L 有利于原球茎诱导增殖。蒋林等叫研究表明，l / 2Ms + NAA1.0mg/L+ KTO.2mg/L 比较适合嗓球茎的增殖。蒋波等以 1 / 2MS 为基本培养基.添加 BA 2.0mg/L + NAA0.5mg/L 或 6 一 BA3.0mg/L + NAAO.5 mg/L 的激素，原球茎的增殖系数较大。陈兆贵等认为原球茎增殖以 MS + NAA1.0mg/L + 6 一 BA1.0mg/L + KT1.0mg/L 为最佳，35d 增殖倍数达到 5 倍。
铁皮石斛组织培养
铁皮石斛组织培养研究进展组织培养摘要：近年来，对铁皮石斛的需求日趋增加，而野生资源难以满足市场需求，组织培养技术使大规模人工栽培成为可能。从种子萌发、原球茎分化、生根与壮苗、原球茎增殖等方面阐述了近年来关于铁皮石斛组织培养技术的研究概况，并展望了发展前景。 铁皮石斛为兰科石斛属植物，是传统名贵中药材。《神农本草经》列为上品，具有益胃生津、滋阴清热、止咳润肺的功效。现代药理研究表明，石斛还具有抗肿瘤、抗衰老、增强人体免疫力和扩张血管的作用。由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种。为了满足市场的需求，国内许多科研人员进行了铁皮石斛组织培养技术的研究。 1 种子萌发 1.1 胚龄:不同种龄的种子萌发率不一样。叶秀嶙等取铁皮石斛2~ 6 个月种龄的种子进行组织培养发现，种龄愈长，萌发率愈高。2 个月种龄的种子接入改良N6培养基中，萌发率仅为6 % ; 3 个月种龄的种子接入改良叹培养基中，培养2 周后开始萌发，萌发率为87 % ; 4 一6 个月种龄的种子接入培养基中，只要培养一周即可萌发，萌发率为9 5 ％。 1.2 基本培养基:铁皮石斛种子在N6，改良N6，MS , 1 / 2 MS , SH 、KS 、VW 、KundsonC , 1 / 2N6，White等培养基上均可萌发。赵天榜等比较风、MS 等14 种培养基对铁皮石斛种胚成苗率的影响，除残外，所有的基本培养基均优于其减半培养基，其中以N6最好，SH 、Kn 、MS 次之，l /2MS 、1 / 2 Vw 最差。 1.3 激素:在培养基中添加一定浓度的NAA 可促进种子的萌发，浓度以0.2 一0.5mg/L最适合胚的萌发和生长，过高起抑制作用。2 , 4-D对胚的萌发起抑制作用。6 一BA 对胚萌发后的生长起抑制作用。KT 、IAA对胚萌发和成苗的影响不大，当浓度超过1mg/L 时，对胚萌发和成苗起抑制作用。 1.4 天然添加物:在培养基中添加适量的马铃薯汁、香蕉汁、椰乳可促进铁皮石斛种胚的萌发， 1.5 炭源:在组培过程中适当添加活性炭，可以吸附代谢过程中产生的废弃物，防止组织褐变，并刺激胚胎的发生与生根，可加人2 ％蔗糖。 2 原球茎增殖 2.1 基本培养基:铁皮石斛原球茎增殖可以1/2 MS，MS等作为基本培养基。 2.2 激素:适宜的NAA 、KT 、6 一BA 浓度对原球茎的增殖起促
石斛组织培养研究进展
石斛组织培养研究进展 张明1,夏鸿西2,朱利泉2,张玉进2 (1.重庆市中药研究院,重庆400065; 2.西南农业大学,重庆400716) [摘要]目的:综述国内外对石斛组织培养进行的深入研究。方法:系统查阅国内外近10年来的有关文献20余篇。结果与结论:介绍了石斛组培的多种方法,对培养基、激素及多种条件对组培的影响作了论述,并提出了存在的问题及对策。 石斛属Dendrobium为兰科第2大属,多年生草本植物,全球计有1 500种。多生于树皮或岩石上,开花多,结果少,每果可含100万粒种子。种子细如粉尘[1],每粒重约0.3～0.4μg。种胚不超过球形阶段,即存在后熟现象。由于缺乏胚乳组织,需与真菌共生(symbiotical)才能萌发,自然条件下发芽率一般不及5%。石斛为合轴生长(sympodial),分株是其繁殖的主要方式,对生长条件的要求较为苛刻。石斛属植物中有不少是名贵中药,在《本草纲目》中石斛被列为上品。我国76种石斛属植物中有近40种作药用[2],著名的有 D.nobile(金钗石斛)、D.candium(铁皮石斛)、D.huosanness(霍山石斛)等。具有强阴益精、补肾益力、轻生延年等作用,其应用范围正迅速扩大。石斛属植物约有四分之一可供观赏[3],称为石斛兰 D.orchids,以花艳丽而著称,近年作为观赏植物发展迅速,已形成独立产业。集药用和观赏于一体的价值,加之过度的采伐利用和繁殖率低,造成了石斛供需之间的紧张状况,
我国已将其列为濒于绝灭的受保护的中药品种之一。自1960年法国人Gmorel利用石斛基尖组织培养无病毒植株的无性繁殖技术创立以来,石斛组织培养逐步走向深入化。近年来,石斛组织培养的最佳条件,包括光照、温度、pH以及如何选用外植体,选用激素等取得长足进展,并利用组培技术研究种子萌发过程中的生理生化变化等,还获得了转基因石斛植株。我国石斛组织培养研究起步较晚,直到1984年,徐云鹏等才首次报道获得霍山石斛试管苗[4]。此后又利用铁皮石斛、束花石斛、兜唇石斛的茎尖、叶尖或种胚获得了再生植株。 1石斛组织培养再生植株的获得 组织培养获得石斛再生植物株的途径有器官发生型和原球茎发生型两种。器官发生型通过外植体组织培养,使预先存在的分生组织形成芽(如腋芽)或不定分生组织(如子叶、茎段、愈伤组织等)形成不定芽。此途径又可分为3种类型:无菌短枝型(又称节培法),芽增殖型,器官发生型;原球茎发生途径通过石斛适宜外植体诱导产生胚性愈伤组织并增殖,随后形成类胚组织原球茎进而发育成完整的再生植株。通常由种子离体培养产生的胚性组织称原球茎(protocorm),而上外植体叶尖、基尖等诱导形成的胚性组织称为拟原球茎(protocorm like bodies)即PLBs。原球茎或拟原球茎转入不含任何激素或生长素的培养基(如MS)便可再生出完整小植株。 1.1原球茎发生 影响原球茎发生的主要有外植体的大小、来源、生理状态、培养基类型、激素浓度,种类、处理时间及一些其它因素。
铁皮石斛种子的组织培养
铁皮石斛种子的组织培养 考虑了好久，在网上买了一粒种子，不是不舍得，就是不知道是不是真的铁皮石斛，终于下手了，管他呢，至少是石斛吧，O(∩_∩)O~ 种子是买回来了，又犯懒了，本人最大的毛病就是思想很勤快，要是干实事，很懒，我是没见过我这么懒的人。懒也得做啊，种子再开口了怎么办？狠狠心开始干! 准备：首先是配制培养基，查了下资料，种子的无菌萌发培养基为1/2ms培养基，蔗糖20g，我稍微做了下调整，培养基1/2ms，蔗糖由20g变成25，琼脂为5g。 无菌萌发培养基：1/2ms培养基+蔗糖25g+琼脂5g（灭完菌接种的时候才发现，有点硬了！） 首先，我没有蒸馏水，用的就是大桶水，（态度不严谨啊O(∩_∩)O哈哈~)把琼脂5g，1/2ms培养基 2.14g，蔗糖25g一股脑的倒入800ml的冷水里 （注：个人认为，琼脂在开水的时候倒入容易结块，不容易溶解，当然用温水是好的，但何必呢，所以先倒入冷水，然后再加热，大家以为对不对啊）， 轻轻的搅拌，让培养基和蔗糖完全溶解，然后定容，注意，定容的时候要定容到1100ml，因为我们在加热的时候还有高压灭菌的时候，会有大量的水蒸气出现，多出的100ml是减少这部分的损失。
然后测量一下ph值，大概在3.4（当时记录了，但后来不知道弄哪里去了，也可能是4.2），先不管他，加热溶解！把烧杯放到液化气灶上开最小火，把烧杯放上，然后开始加热边搅 拌............................ 好漫长啊！ 大概10分钟的样子，终于好了，拿下来，开始测量ph值，然后慢慢的一滴一滴的加入氢氧化钠溶液边搅拌边测量，5.8！
铁皮石斛 组织培养 栽培 试验 实验
铁皮石斛茎段组织培养与栽培 摘要: 为试验铁皮石斛茎段组织培养与栽培，以铁皮石斛茎段为外植体，结合铁皮石斛的生物学特性，综述铁皮石斛组织培养与栽培的过程技术。观察研究基本培养基、天然附加物和植物生长调节剂对铁皮石斛生长的影响。验证和探究铁皮石斛茎段组织培养技术并对铁皮石斛的组织培养与栽培管理技术进行了思考与展望。 关键词: 铁皮石斛; 组织培养; 茎段; 移栽; 驯化 0.引言 铁皮石斛( Dendrobium officinale Kimura et Migo) 是兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium Sw．)多年生草本植物，又名黑节草，俗称铁皮枫斗，分布于云南、安徽、贵州、浙江、江西、广东和广西等地，是我国传统名贵珍稀中药材，其有效成分主要为石斛多糖、石斛碱、氨基酸等，其中石斛多糖的含量高达21.7%，能显著提高机体免疫功能，具有养胃出津、补肾益力、滋阴清热、耐缺氧、抗疲劳、抗肿瘤等功效。现代药理学研究发现，石斛还具有抗衰老和扩张血管的作用。 铁皮石斛喜荫凉、湿润的环境，常附在高海拔悬崖峭壁或林内树干和岩石缝隙中。由于其药用价值高、生长条件特殊和分布受局限，且经长期人为采挖，野生资源濒临灭绝。铁皮石斛是2005版《中华人民共和国药典》收载的3种石斛属植物之一，为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛蒴果成熟时易开裂，且种子粒径小，自然繁殖率低，是一种珍稀的药用植物和和名贵的室内观赏植物.。
铁皮石斛自然繁殖力极低, 常规繁殖又较困难, 且多年来对铁皮石斛的采集量远大于其生长量, 野生铁皮石斛自然繁殖已濒临绝迹。由于药用价值高，人为的过度开采与生态破坏，野生铁皮石斛已濒临灭绝，1987年国务院将其列为国家重点保护植物。 1 材料与方法 1. 1 试验材料 野生云南铁皮石斛，取材于浙江农林大学组培实验室，取其茎段作为外植体进行组织培养。 1. 2 试验方法 1. 2. 1 外植体消毒 取铁皮石斛的茎，去除多余叶片后用解剖刀将茎切成含 3 ～ 4 个节点的茎段，保留节点。依次用中性洗涤剂清洗，自来水冲洗20min，用70% 的乙醇浸泡10 ～60 s，再转入0. 1% 的氯化汞中，灭菌 5 ～11 min 后倒去氯化汞溶液，用无菌水反复漂洗材料3-5 次。用无菌纸吸去茎段上多余水分，将其切成1 ～2 cm 带一个芽点的茎段，接种到培养瓶中培养。 1. 2. 2 培养基制备 铁皮石斛培养基均添加3% 蔗糖，0. 7% 琼脂，pH 值为5. 8。按不同目的在基本培养基中加入6-BA、NAA、IBA，每个培养瓶分装50 m 培养基，密封。经过121 ℃高温灭菌25 min。不定芽的诱导培养基是在基本培养基MS 中加入细胞分裂素和生长素，采用不用浓度水平的NAA 和6-BA。组培苗的壮苗与生根，将生长状态稳
铁皮石斛组织培养
小苗可以用苔藓或水苔!中苗就要树皮石子加苔藓!大苗可用石子树皮等!至于用来 培养组织苗的培养基属难告知 恩，这个我知道，我就想出了MS培养基，没有其他适合的了吗？培养基也属于商业秘密啊？ 很多好一些的营养基都是商业密秘!我会去给你找个适合石斛的营养基.只能给你个普通的!希望你喜欢 石斛较常见的培养基配方,花宝三克,百分之十到百分之二十的萍果汁一千毫升,蔗糖浓度百分之三点五.琼脂十五克.蒸溜水一千克氢离子浓度调节到一万纳摩/升(PH5.0) 常规铁皮石斛开花后采用人工方法授粉，将其种子接种在１／２ＭＳ液体培养基中非共生萌发培养时，再转入含有０．０１％Ｏｒｙｚａｌｉｎ＋０．０１％秋水仙碱的１／２ＭＳ液体培养基中进行诱变处理，然后转入１／２ＭＳ固体培养基上，光照；取新生长的根尖固定，用压片法制备染色体标本，卡宝品红染色液染色，染色体数目为２ｎ＝７６的幼苗为四倍体铁皮石斛，按通常方法进行栽培管理。 现在大部分采用松树皮发孝后来种的！ 铁皮石斛组织培养的培养基用到的主要基本培养基是MS培养基，也不只是这一种，其它的WV、winte等都可以用，但是一般多用MS培养基，也可以用1/2MS培养基，大量元素减半，其它元素不变。 除此之外，还有加一些生长素（如IAA、IBA、NAA等），细胞分裂素（如6-BA等）。但是不同的培养时期也不同的激素配合。如诱导愈伤组织时，要两种激素的配合。增殖传代时也要两种激素的配合，但生长素为主；分化时以分裂素为主，壮苗和生根以生长素不主。一般用量都是0.1-10mg/L这个范围里。 此外，还有的加了什么香蕉素，椰看你是用什么外植体，或是想诱导什么先了， 一般如果是茎段的话，用一般的MS+0.3mg/L NAA+5mg/L 6-BA做诱导培养基就好，但是如果你要用根茎做外植体诱导原球茎的话，最号用1/2MS加上水解乳蛋白和激动素和6-BA 就好,量看你外植体了，不同的类型不同 乳等。 一般NAA：6-BA是10：1，即2：0.2mg/L （一）繁殖技术 石斛的繁殖方法分为有性繁殖和无性繁殖两大类，目前生产上主要采用无性繁殖方法。 1、有性繁殖即种子繁殖。石斛种子极小，每个蒴果约有20000粒，呈黄色粉末状，通常不发芽， 只在养分充足、湿度适宜、光照适中的条件下才能萌发生长，一般需在组培室进行培养。不过，尽管石斛繁殖系数极高，但其有性繁殖的成功率极低。 2、无性繁殖 （1）分株繁殖：在春季或秋季进行，以3月底或4月初石斛发芽前为好。选择长势良好、无病虫害、
铁皮石斛高效栽培技术及综合利用(省)形考二-0003
形考二-0003 试卷总分：100 判断题(共10题,共40分) 开始说明： 结束说明： 1.(4分) 在铁皮石斛种子培养中，1/2MS培养基用于种子萌发、原球茎分化和试管苗生根，MS用于 原球茎增殖和壮苗的培养。 √ × 2.(4分) 铁皮石斛在整个花期内进行人工杂交授粉结果，开花后两周内座果率可达100%。 √ × 3.(4分) 铁皮石斛北种南引，导致不适应引入地的生态和栽培条件，冬季不能正常越冬而死亡。
√ × 4.(4分) 铁皮石斛原球茎继代培养条件为：16 小时光照，光照强度1500～2500勒克斯，温度为26～28℃；8 h暗培养，温度为20～22℃。 √ × 5.(4分) 现有铁皮石斛品种均为野生种质人工驯化而成，选育方法相对传统，选育程序有待完善。 直至20世纪80年，我国几乎没有科技人员从事药用植物育种。 √ × 6.(4分) 铁皮石斛用茎段、根尖均可成功诱导出愈伤组织、原球茎或直接转化成芽获得再生植株。 √ × 7.(4分) 2010年版《中国药典》规定铁皮石斛多糖含量不得低于10.0％ √
× 8.(4分) 常见的铁皮石斛快繁初代培养：选择饱满无破损的铁皮石斛种子，经消毒后，接种到培养 基上培养就可。 √ × 9.(4分) 国际上，药用植物育种起步也很晚，1969年在德国召开了第一次药用和芳香植物育种研 究国际会议。 √ × 10.(4分) 铁皮石斛良种选育时，用于原生态栽培，必须具有很好的环境适应能力，如抗低温与高温、 干旱与水湿、病害与虫害能力等特点。 √ × 单选题(共5题,共30分) 开始说明： 结束说明： 11.(6分)