Bio-rad Gene Pulser Xcell电穿孔系统(中文)

Bio-rad Gene Pulser Xcell电穿孔系统

一Gene Pulser Xcell电穿孔系统介绍

电穿孔的过程中可以有2种波型来控制外界电压的变化，Gene Pulser Xcell可以提供2种波型，即指数波和方波。

1.Exponential Decay Wave（指数波）

所谓指数波的方式，就是将已经充电到指定电压的电容进行快速的放电，放电的方式是以指数的形式进行的（如上面的slide显示）。该种方式的电穿孔取决于2个参数，电场强度(kV/cm)和时间常数(ms)。在实验过程中，采用具体的电击杯调整电压即可调整不同的电场强度。此外，电容和电阻的具体值也可以在Gene Pulser Xcell的界面上进行设置。

?电容器充电到预定的电压(V0)放电后，即向样品释放脉冲，细胞表面的电压随时间按指数方式下降的

?电容器的电压值达到峰值释放脉冲后迅速的衰减

?电场强度E (V/cm) 是用来描述电击杯外界电场环境的一个参数（E=V/d ）

?脉冲时间是一般用时间常数来进行衡量(~37% of V0，V0/e)

?脉冲的时间是由电阻和电容的大小所决定的

备注：PC module作用

PC（Parallel Capacitor）模块的本质就是在放电回路中在样品上并联一套电阻。在放电回路中设置PC模块的目的：如果实验样品具有很高的电阻值，那么脉冲就需要维持相当长的时间，这样对细胞是会有损伤的，长时间的电场作用会导致细胞的裂解。并联了PC模块后对样品而言电击是的电压并没有变化，但是PC 模块起到了分流的作用，可以使得脉冲的时间常数大大减小，可有效的维持细胞的活性。并联了PC模块后，时间常数取决于该模块的电阻，电阻越小，那么放电的时间也就越短。

2. Square Wave（方波）

对于某些细胞而言，采用指数波进行实验特别容易导致细胞的死亡。对于这种细胞而言，采用方波的形式来进行电穿孔既可以进行有效的转染，又可以很好的保护细胞，维持细胞的活性。方波的形式通常用以下的参数来进行描述：电压、脉冲时间、脉冲次数和脉冲间的间隔时间。上述所有的参数都可以在Gene Pulser Xcell的操作界面上方便的设置。在实验结束后，Gene Pulser Xcell还可以显示实验中这些参数的具体值。

方波的本质和指数波是一样的，区别在于电压还没有下降为0的时候，电容器的放电已经被截止了。所有的方波都会有电压的细微下降，以其始的电压值的百分比计算。一般下降率不超过5%。

?电容器的指数放电过程中被截止后就会形成方波，其时间常数远大于脉冲时间

?脉冲时间就是细胞被放电的时间

?脉冲是可以被反复释放的，在低压回路最多可以重复10次，在高压回路最多可以重复2次

?脉冲的间隔时间就是指2个脉冲间的时间

?脉冲下降是指终止电压和起始电压值之间的差值

电容器的指数放电过程中被截止后就会形成方波，但是采用不同电压的回路会形成不同的方波脉冲。

采用方波的工作原理是：对电容器进行充电后，释放脉冲到细胞上维持所需的时间，在进行第二次脉冲前需要对电容器进行重新充电。那么脉冲间的间隔就取决于电容器充电需要的时间和具体的电压，也就是说在设置脉冲间的时间时，其值不能小于电容器充电所需的时间。

采用低压回路时，那么就需要采用CE模块，该模块的设置是可调的，所以其脉冲时间和脉冲间的间隔是可调的，比高压电路要灵活、方便很多

高电压回路:

一次充电，一次脉冲。在下一次脉冲前，电容器需要重新充电

最多只能进行2次脉冲，脉冲时间为0.05 – 5msec，脉冲间隔为5-30sec

低电压回路:

该电路是可调的，因此可一次充电，进行多次的脉冲

最多可进行10次脉冲，脉冲时间为0.05-100msec，脉冲间隔为0.1 –10 sec 二使用方法：

系统部件：

主界面

1. Exponential protocol

在该选项下，用户可设置指数波的脉冲条件程序显示：

结果显示：

2. Time constant protocol

时间常数确定的指数波形式，在该选项下，用户可设置具体的时间常数及其他条件来进行指数波的脉冲条件

程序显示：

结果显示：

3. Square wave protocol

在该选项下，用户可设置方波的脉冲条件

程序显示：

结果显示：

4. Pre-set protocols

在该选项下，仪器本身预存了一些经过优化的电穿孔条件，针对的样品包括细菌、真菌及哺乳动物细胞等

5. User protocols：

在该选项下，最多可储存144个用户自己的程序，采用12x12的形式，即12个人，每人可储存12个自己的程序

6. Last pulse：

在该选项下，用户可记录最后一次脉冲的条件，并使用该条件进行电穿孔实验即使关机后，GPX还是可以调出仪器最后一次电穿孔的条件，并利用该程序进行实验。方便实验室最常用程序的使用

7. Optimize：

可用于方便的优化实验条件，可连续的对脉冲条件中的电压某一个参数进行优化该功能可在指数波、方波、特定时间常数的指数波模式下使用

8. Data management

数据管理

?可以调出之前的100个实验程序

?显示每个程序的设置条件和结果

9. Measurements：

仪器的测量功能，用户可预测样品电阻、校正仪器内部电阻等参数?该功能使用户可以在日常的工作中经常对GPX CE模块电路中的电容器进行校正，确保实验的精确，具体的步骤如下：

–断开ShockPod电击槽

–连接CE模块

–按下操作面板上的小数点按键

?在电击前预测样品的电阻

–在实验前，在电击杯里加入样品后放入ShockPod电击槽内，在Resistance Measurement的菜单下按下“回车键”

10. User Preferences：

在该选项下，用户可调节诸如LCD屏幕亮度、时钟等参数

三电弧保护

?在电击杯中出现电阻特别小的区域时，就会形成短路，产生电弧。样品缓冲液中的离子成分就会造成电弧现象

?只要上述电阻突然变小的情况被检测到，那么电流就不会经过样品

?电弧保护就是在存在短路的情况下，使电流不经过样品，确保样品不受强电流的损伤

?如果样品量很少的话，那么产生的热量会使得样品蒸发

?如果由于样品的低电阻而产生电弧，那么GPX会给出提示，并不能提供脉冲

电火花加工

电火花加工 一、概述 二、电火花成形加工 1.电火花加工机床 常见的电火花成形加工机床由机床主体、脉冲电源、伺服系统、工作液循环系统等几个部分组成。 （1）机床主体：包括床身、工作台、立柱、主轴头及润滑系统。用于夹持工具电极及支承工件，保证它们的相对位置，并实现电极在加工过程中的稳定进给运动。 （1） 脉冲电源：把工频的交流电流转换成一定频率的单向脉冲电流。 （2） 伺服进给系统：使主轴作伺服运动。 （3） 工作液循环过滤系统：提供清洁的、有一定压力的工作 2．电火花成形加工的原理 电火花成形加工的基本原理是基于工具和工件（正、负电极）之间脉冲火花放电时的电腐蚀现象来蚀除多余的金属，以达到对零件的尺寸、形状及表面质量预定的加工要求。要达到这一目的，必须创造下列条件： （1）必须使接在不同极性上的工具和工件之间保持一定的距离以形成放电间隙。一般为0.01～0.1mm左右。 （2）脉冲波形是单向的，如图所示。 （3）放电必须在具有一定绝缘性能的液体介质中进行。 （4）有足够的脉冲放电能量，以保证放电部位的金属熔化或气化。 如图，自动进给调节装置能使工件和工具电极保持给定的放电间隙。脉冲电源输出的电压加在液体介质中的工件和工具电极(以下简称电极)上。当电压升高到间隙中介质的击穿电压时，会使介质在绝缘强度最低处被击穿，产生火花放电。瞬间高温使工件和电极表面都被蚀除掉一小块材料，形成小的凹坑。 1

一次脉冲放电之后，两极间的电压急剧下降到接近于零，间隙中的电介质立即恢复到绝缘状态。此后，两极间的电压再次升高，又在另一处绝缘强度最小的地方重复上述放电过程。多次脉冲放电的结果，使整个被加工表面由无数小的放电凹坑构成 极性效应 （1）什么是极性效应？ 在脉冲放电过程中，工件和电极都要受到电腐蚀。但正、负两极的蚀除速度不同，这种两极蚀除速度不同的现象称为极性效应。 （2）为什么会有极性效应？ 产生极性效应的基本原因是由于 电子的质量小，其惯性也小，在电场力作用下容易在短时间内获得较大的运动速度，即使采用较短的脉冲进行加工也能大量、迅速地到达阳极，轰击阳极表面。而正离子由于质量大，惯性也大，在相同时间内所获得的速度远小于电子。 ①当采用短脉冲进行加工时，大部分正离子尚未到达负极表面，脉冲便已结束，所以负极的蚀除量小于正极。这时工件接正极，称为“正极性加工”。 ②当用较长的脉冲加工时，正离子可以有足够的时间加速，获得较大的运动速度，并有足够的时间到达负极表面，加上它的质量大，因而正离子对负极的轰击作用远大于电子对正极的轰击，负极的蚀除量则大于正极。这时工件接负极，称为“负极性加工”。 （3）极性效应在电火花加工过程中的作用 在电火花加工过程中，工件加工得快，电极损耗小是最好的，所以极性效应愈显著愈好， 3．电火花加工的特点及应用 1)电火花加工的特点 (1）优点 2

电火花成形加工工具电极的设计与制造

（1）铸铁电极的电极损耗和加工稳定性均较一般，容易起弧，生产率不及铜电极。但是，它的来源丰富、价格低廉、并且机械加工性能好，因此电极的尺寸精度，几何形状精度及表面粗糙度等都容易保证。因此，铸铁是一种较常用的电极材料，多用于穿孔加工。 （2）钢电极的加工稳定性较差、电极损耗较大、生产率也较低、但是来源丰富、价格便宜、具有良好的机械加工性能。钢电极还有其独特的优点，即把电极和凸模做成一体，实质上就是将凸模加长，加长的部分就用作电极。电火花加工后，把损耗部分切除掉，余下部分可做凸模使用。这种方法使电极的制造工时减少到了最低程度。所以钢为常用的电极材料之一，多用于一般的穿孔加工。 （3）纯铜电极在加工过程中稳定性好、生产率高、但损耗较大、来源少、价格较贵。由于其韧性大，机械加工性能差、磨削加工困难，其加工精度较低。由于磨削困难，使得难以将电极与凸模连接在一起加工，电极与凸模分别制造使凸模与凹模配合间隙不易均匀。对于电火花型腔加工来说，纯铜电极适用对小型腔及高精度型腔的加工。纯铜电极与其他材料电极相比，在电火花加工中能使模具

达到最细表面粗糙度。 （4）黄铜电极在加工过程中稳定性好、生产率高、与纯铜电极相比价格较低、机械加工性能尚好，但其磨削性能不如钢和铸铁。而黄铜电极的损耗最大。因此，黄铜电极一般用在对加工表面粗糙度较低，尺寸、形状精度要求较高及形状复杂的小孔穿孔加工。 （5）石墨电极的电极损耗小、加工稳定性尚好、易于加工、生产率最高、其价格与铜大体相同，但机械强度较差，尖角处易崩裂。石墨是电火花型腔加工的常用电极材料，适用于大、中、小型腔。由于石墨的热胀系数小，所以，最适于大电极的穿孔加工。 （6）铜钨合金和银钨合金的加工稳定性均很好，电极损耗也均很小，它们的电加工性能优越，而机械加工性能尚好，其磨削性比铜好。但其价格较高，比铜的价格高40倍。因此，主要用于模具中高精度的深孔、直壁孔等的穿孔加工和加工面积小且高精度的型腔加工，以及硬质合金模具的加工。而银钨合金的价格更高，约为铜的100倍，所以它的使用受到限制，一般只用于硬质合金模具的加工。 当用同一种电极材料加工不同材料的模具时，加工情况也会有一定的差异，即使同是钢件也会因其成分不同而对加工有所影响，在实际生产中应根据具体情况选用电极材料。 3电极的结构形式 电极的结构形式应根据模具型孔或型腔的尺寸大小，复杂程度及电极的加工工艺性等来确定,常用的电极结构有下列几种形式： （1）整体电极 整体电极就是用一整块电极材料加工出的完整电极，这是型孔或型腔加工中最常用的电极结构形式，图4.2.4所示即为型腔加工用整体电极的结构形式。当电极面积较大时,可在电极上开一些孔，或者挖空以减轻重量。 对于穿孔加工，有时为了提高生产率和加工精度，降低表面粗糙度，可以采用阶梯式整体电极。所谓阶梯式整体电极就是在原有的电极上适当增长，而增长部分

电穿孔系统技术参数

多功能电穿孔系统 1、工作条件： 电源：100 – 120 VAC or 220 – 240 VAC, 50/60 Hz. 功率：最大240W 室温：0 - 35?C, 相对湿度：0 – 95%, (non-condensing) 2、总则用于原核和真核细胞电转化 3、详细技术指标及规格： 3.1 系统配置：带有方波输出功能的主机、原核细胞组件及哺乳动物细胞组件，0.1/0.2/0.4cm电激转 化杯。该细胞转化仪用于原核细胞、真菌以及哺乳动物细胞的电击转化试验，包括外源DNA导入和细胞融合等。 技术要求和参数： *（1）系统输出波形：指数衰减和方波两种输出，适合不同应用需要。 （2）输出电压：10 – 3,000伏，最小调节量1伏。 *（3）电容容量：10 – 500伏：25 – 3275 μF以25 μF 递增，适合哺乳动物细胞需要。 500 – 3000伏：10, 25, 50 μF三种调节，适应原核细胞要求。 （4）电阻（并联）：50 – 1,000 Ω以50 Ω递增，及无限大设置 *（5）样品电阻：在10 – 2,500 V时，最小20 Ω 在2,500 – 3,000 V时，最小600 Ω （6）方波放电时间：10 – 500 V档位: 持续时间0.05 – 10 ms时，以0.05 ms递增， 持续时间10 – 100 ms时，以1 ms 递增，

可设1 – 10 次脉冲重复，0.1 – 10 sec 间隔 500 – 3,000 V档位: 持续时间0.05 – 5 ms时，以0.05 ms递增， 可设1 – 2 次脉冲重复，5 sec 最小间隔 （7）主机： 输出波形：指数衰减和方波两种输出波形 输出电压; 200 – 3,000伏 放电容量：10, 25, 50 μF，三档调节 样品电阻：最小20 Ω，在10 – 2,500 V档位， 最小600 Ω，在2,500 – 3,000 V档位， 方波放电时间：持续时间0.05 – 5 ms时，以0.05 ms递增， 可设1 – 2 次脉冲重复，5 sec 最小间隔 *实验方法预存：24种程序预设，方便用户优化自己的实验条件 用户自定义方法储存：最多144个程序方便用户储存自己的实验方法。 脉冲波形检测：实时监测并显示脉冲波形。 （8）原核细胞系统 *输出波形：指数衰减或方波 输出电压; 200 – 3,000伏 放电容量：10, 25, 50 μF *样品电阻：在10 – 2,500 V ，20 Ω最小 在2,500 – 3,000 V，600 Ω最小 *方波放电时间：持续时间0.05 – 5 ms以0.05 ms递增， 1 – 2 次脉冲，5 sec 最小间隔

ECM830多功能型细胞电穿孔 细胞转基因活体导入系统 简介 ...

ECM830多功能型细胞电穿孔 细胞转基因活体导入系统 简介： ECM830可以满足所有体外和体内电穿孔研究的需要，并可对预处理的动、植物细胞进行融合。该型号具有精细的电压调节，可监控所有参数，可调整脉冲间隙，这些细节是其优异品质的内在保证。特别需要指出的是，配合BTX 提供的专用附件，可以轻松进行诸如活体转基因和导入蛋白，多肽及其他药物的研究和治疗。 应用： ?哺乳动物细胞转染 ?体外／体内／离体／卵内实验 ?核移植 ?植物组织和原生质体的转染 ?细菌和酵母的转化 可靠性： 方形波技术保证了更高的效率和哺乳动物细胞存活率。 通用性： 利用BTX多种专业电极和新型的BTX MOS多孔板电穿孔仪，可以将仪器运用到各种电穿孔领域。 监控仪选配 新的VIP 3000可以允许用户监控和记录下电穿孔过程中的主要电参数。利用选配的通讯模块，就可以把数据下载到电脑上或在打印机上打印出来。 多孔板电穿孔仪 新的MOS-多孔优化系统利用BTX-ECM电源发生器可为研究人员提供先进的多孔技术。 ECM830是为体外和体内电穿孔设计的方形波电穿系统。BTX方形波技术为研究者提供了更高的细胞转染率和存活率。ECM830应用范围广泛，包括了哺乳动物细胞和植物细胞转染，胚胎操作，核转移以及细菌和酵母转化。ECM830的主要特点包括了：5至3000伏的电压范围；精确的电压调进，10微秒至10秒的脉冲范围，可控制的脉冲间隔，电弧淬灭功能（arc Quenching）可显示真实电压及脉冲波长数字显示屏。更为客户提供了两年的质量保证。 ECM830主机可和BTX的各种专业及配件结合使用，使分子或药物的体外／体内导入实验更加得心应手。 技术规格 操作状态：启动后内部自检 界面：数字用户界面 输入：110V／220V通用 充电时间：最大5sec(没有延迟) 电压范围：5－500V电压模式／1V分辨率 505－3000V高电压模式／5V分辨率 波长范围：10μsec─999μsec低电压模式／1μsec分辨率

电火花加工

课程名称：院系： 专业： 班级： 学号： 姓名:

电火花加工 1.概述 电火花加工是一种自激放电，故又称放电加工（EDM）,于20世纪40年代开始研究并逐步应用于生产，是目前机械制造业中应用最广泛的特种加工方法之一，在难切削材料、复杂型面零件等的加工中得到了广泛应用。 2.原理 火花放电的两个电极间在放电前具较高的电压，当两电极接近时，其间介质被击穿后，随即发生火花放电。伴随击穿过程，两电极间的电阻急剧变小，两极之间的电压也随之急剧变低。火花通道必须在维持暂短的时间(通常为后及时熄灭，才可保持火花放电的“冷极”特性(即通道能量转换的热能来不及传至电极纵深)，使通道能量作用于极小范围。通道能量的作用，可使电极局部被腐蚀。利用火花放电时产生的腐蚀现象对材料进行尺寸加工的方法，叫电火花加工。电火花加工是在较低的电压范围内，在液体介质中的火花放电。 3.特点 1.脉冲放电的能量密度高，便于加工用普通的机械加工方法难于加工或无法加工的特殊材料和复杂形状的工件。不受材料硬度影响，不受热处理状况影响。 2.脉冲放电持续时间极短，放电时产生的热量传导扩散范围小，材料受热影响范围小。 3.加工时，工具电极与工件材料不接触，两者之间宏观作用力极小。工具电极材料不需比工件材料硬，因此，工具电极制造容易。 4.可以改革工件结构，简化加工工艺，提高工件使用寿命，降低工人劳动强度。基于.上述特点，电火花加工的主要用途有以下几项: 1)制造冲模、塑料模、锻模和压铸模。 2)加工小孔、畸形孔以及在硬质合金上加工螺纹螺孔。 3)在金属板材上切割出零件。4)加工窄缝。 5)磨削平面和圆面。

细胞电转染系统技术参数

细胞电转染系统招标参数 1．工作条件 1.1.环境温度：10-35℃ 1.2.相对湿度：20-80% 1.3.工作电压：220V 50Hz 2.技术指标 *2. 1 用途：用于基因转染实验，适用于各种贴壁细胞和悬浮细胞、包括难转染的血液系统细胞和干细胞等 2. 2 系统原理：综合应用电穿孔方法及细胞特异性的电极液，通过调整优化电转参数，可直接将多种转染物导入细胞中，可实现瞬转和稳转两种技术方式。 *2.3转染物：质粒DNA、RNA等； 2.4 实验操作：针对各种细胞有优化好的实验条件数据库，无需优化； *2.5 能提供配套的转染试剂耗材； 2.6 耗材一次性无菌设计，细胞不与仪器接触，无需清洗仪器； 2.7 电极材料：使用高分子聚合物电极材料，非金属电极； 2.8 转染体系：可进行100ul体系、20ul体系2种规格转染； 2.9 仪器内置2个100ul电极杯孔位，16个板条孔位； 2.10 操作界面：触摸屏操作； 2.11 仪器升级：可通过USB接口与电脑连接进行软件的升级和数据的传送，软件可免费从网站下载更新； 2.12 有实验数据支持：外源基因可直接入核。转染速度快，最快转染GFP 2小时后即可观察到蛋白的表达情况； 2.13 仪器未来可添加模块以实现贴壁细胞直接转染（如神经元、血管内皮细胞等）； 2.14仪器未来可添加模块以实现高通量转染（96孔转染）； 2.15仪器未来可添加模块以实现大体积转染（1mL和20mL）； 2.16该仪器具有专用配套试剂、耗材； *3. 仪器配置要求 3.1细胞电转染主机：一台（含转染系统核心模块和系统配套X模块） 3.2微生物电转化仪：一台（可用于细菌和酵母菌的电转化） 3.3配套凝胶成像：一台（用于ECL、ECL Plus、Western、Northern、Southern等样品的发光成像和分析，用于电化学发光、生物芯片发光检测、植物活体成像、菌落活体成像等检测，CCD相机冷却温度：≤-65℃提供FLI厂家证明文件，标配F0.80镜头，无需改装校正光圈即可达到F0.8，上下双层样品台设计，可兼容拍摄样品厚度0.01mm - 10cm，可自由选择曝光识别区域，实现精确自动曝光） 3.4 配套试剂：试剂包95个（100μl 体系可做24反应，首批提供60个其他按用户需求

电火花成型加工机床操作规程

行业资料：________ 电火花成型加工机床操作规程 单位：______________________ 部门：______________________ 日期：______年_____月_____日 第1 页共4 页

电火花成型加工机床操作规程 1.开机操作前，要穿好工作服，做好操作准备工作。 2.电火花机床必须在专人指导下进行操作，不允许未经许可自行操作。 3.在放电加工前，应仔细安装好工件，找正工具电极和工件的相对位置。 4.电火花成型机床工作液为易燃煤油，必须配备干粉灭火器，以防运行中发生火灾，并且操作者操作前必须掌握干粉灭火器的使用方法。 5.工作油箱中的工作液面高度必须高出被加工工件50mm以上，以防止工作液着火燃烧。 6.在放电加工过程中，严禁手或身体各部位触摸卡头和电极线。 7.在操作过程中如发生意外，首先要按下操作面板上的红色急停按扭，再拔下插头，检查事故原因，待排除故障后再开机，启动时间间隔不得小于50秒。 8.操作过程中，进行移动操作时要特别小心，必须确认移动行程中没有阻挡物，以防撞坏电极和工件，或造成移动轴伺服过载甚至损坏机床。 9.火花成形机床加工过程中，操作者不能随意离开机床，仔细观察放电状态，以防意外事故的发生。 10.电火花机床操作完毕，要将工作液回放到储液槽中，拔下插头切断电源，清扫机床，收捡工具，打扫场地卫生。 第 2 页共 4 页

电火花成型机安全操作规程 1.操作时不准穿背心、拖鞋及西装短裤，不准穿宽松肥大的衣服，严禁在服用含有酒精类钦料和麻醉剂药物后操机。 2.机床通电后，应观察机床有无异常动作和异常声音等情况，在确保无异常时，可以用手动状态进行主轴伺服控制系统的试验。 3.启动工作液系统将工作液注入槽中，使液面达到距槽顶边50mm 时为止，观察工作液槽是否有渗漏现象，以防工作液渗进导轨及丝杆等重要工作部位。 4.为了安全的原因，开机时严禁将脉冲电源中高压电源连接在电极接板上。 5.严禁操机者站立在工作台面上进行其他工作，机床在工作时，操机人员严禁擅离岗位。 6.应避免工具及其他类硬的物品掉落在工作台面上。 7.应经常性的在机床各润滑加油进行润滑，以确保使用寿命，机床边安放在灭火器等消防器材不得挪作他用。 8.工作完毕，按保养规定需要清理机床，切断电源，关闭风扇及照明灯，经仔细查看后方可离开。 编制：审批： 第 3 页共 4 页

电火花成形加工实训

电火花成形加工实训 实训四电火花工具电极找正 1、实训目的 掌握电火花工具电极的找正方法。 2、实训项目 电火花工具电极的找正。 3、实训器材 NH7135NC数控电火花成形机床、工具电极、精密刀口角尺、百分表。 4、实训内容 (1)、型腔模工艺分析 电火花加工中，工具电极的装夹尤其重要。撞击方法可用钻夹头装夹，也可用专用夹具装夹，还可用瑞典3R夹具装夹。工具电极的找正是要确保工具电极与工件的垂直，找正的方法主要有用精密刀口角尺找正、用百分表找正、用电火花放电找正和用工件模板找正。 (2)、工具电极的装夹 ①、用钻夹头装夹工具电极先用内六角头扳手将装在主轴夹具上的内六角螺钉旋松，然后将装夹工具电极的钻夹头固定在主轴夹具上。主轴夹具的装夹部分为900靠山的结构，可将钻夹头稳固地贴在靠山上，最后再用内六角扳手将主轴夹具上的内六角螺钉旋紧，完成工具电极的装夹(图1)。

②、用专用夹具装夹工具电极还可以采用电火花线切割加工出电极扁夹，作为专用的夹具来装夹工具电极，电极扁夹用于装夹某些尺寸比较小的扁状电极。 ③、用瑞典3R夹具装夹工具电极采用瑞典3R夹具装夹工具电极时，3R夹具与工具电极固定在一起，在数控机床上加工，加工后再一同装夹到主轴上。这样的方法解决了工具电极拆装后的重复定位问题。 图1 用钻夹头装夹工具电极 (3)工具电极的找正 ①、用精密刀口角尺找正工具电极工具电极装夹完毕后，必须对工具电极进行找正，确保电极的轴线与工件保持垂直，图2所示为用精密刀口角尺找正工具电极。 具体校准方法如下： 图2 用精密刀口角尺找正工具电极图3 用百分表找正工具电极 a．按下手控盒上的“Z-”按钮，将工具电极缓缓放下，使工具

1、模具电火花穿孔加工常用的工艺方法有：(

一、不定项选择（每题1.5分，共40题，共60分） 1、模具电火花穿孔加工常用的工艺方法有：（）。 A、直接加工法 B、混合加工法 C、间接加工法 D、单电极平动加工法 2、模具电火花穿孔加工常用的电极结构形式有：（）。 A、整体式 B、多电极式 C、镶拼式 D、组合式 3、下列（）可以选作为超声波加工的的工具材料。 A、低碳钢 B、铸铁 C、紫铜 D、硬质合金 4、下列（）可超声切割加工。 A、陶瓷 B、紫铜 C、玻璃 D、塑料 5、下列（）可制作模具电铸成形的原模（母模）。 A、塑料 B、石膏 C、金属材料 D、环氧树脂 6、电解加工在模具制造中可进行（）加工。 A、型孔 B、型腔 C、电解抛光 D、电解磨削 7. 电火花加工的放电本质大致包括哪（）个阶段 A．极间介质的电离、击穿，形成放电通道 B．电极材料的熔化、气化热膨胀 C．极间介质的消电离 D．电极材料的抛出 8目前在模具型腔电火加工中应用最多的电极材料是（）。 A铜、B钢C石墨D硬质合金 9．以下不能加工非金属脆硬材料的特种加工方法有（）。 A．电火花加工B．超声波加工C．电解磨削加工D．激光加工10．能够在淬硬材料上加工φ3小孔的特种加工方法有（）。 A．电火花加工B．超声波加工C．离子束加工D．激光加工 11. 用电火花进行粗加工，采用（）。 A．宽脉冲、正极性加工 B．宽脉冲、负极性加工 C．窄脉冲、正极性加工 D．窄脉冲、负极性加工 12.超声波加工机床的组成包括（）。 A.超声电源，超声系统及机械系统 B.超声发生器、间隙调节器和机床本体 C.脉冲电源，间隙调节器和机床本体 D.超声发生器、超声系统和加工机床本体 13.与切削加工相比，特种加工的特点是 ( )作为统一的定位精基准。 A、对工具和工件的强度、硬度和刚度均无严格要求 B、工件受力变形和热变形小 C、一般不会产生加工硬化现象 D、材料去除率高 14．以下说法正确的有( )。 A．电火花加工设备可以加工半导体材料 B．超声波加工设备可以加工玻璃材料 C．激光加工主要利用其高温，因此不可加工非金属材料 D．电火花切割加工机床可以在工件上打孔 E．特种加工设备在加工过程中不需要工件作旋转运动 15．用电火花在机床加工一个圆孔，由于电间隙的存在，工具电极应( )被加工孔的尺寸。

细胞的脂质体转染法和电穿孔法

细胞的脂质体转染法和电穿孔转染法 （一）脂质体转染 一、实验试剂及器材 Lipofectamine? 3000 Transfection Reagent，质粒DNA(0.5-5 μg/μL储液)，Opti-MEM?减血清培养基，培养板，酒精灯，离心机，微量移液器，离心管等。 二、实验步骤 1. 接种细胞至70－90%汇合度时转染； 2. 使用Opti-MEM?减血清培养基稀释Lipofectamine? 3000试剂（2管），充分混匀（6孔板Opti-MEM?培养基为125 μL× 2，Lipofectamine? 3000为 3.75和7.5 μL）； 3. 在每管已稀释的Lipofectamine? 3000试剂中加入稀释的DNA（用P3000TM试剂稀释）（1:1比例）； 4. 室温孵育5分钟； 5. 加入DNA－脂质体复合物至细胞中； 6. 37°C(PK-15在39°C下培养)孵育细胞2–4天，然后分析转染细胞。 三、注意事项 1. 在无血清培养基（如Opti-MEM?减血清培养基）中制备DNA－Lipofectamine? 3000脂质体复合物，直接将其加入含细胞培养基的细胞中（在血清／抗生素存在或不存在时均可）； 2. 转染后无需去除转染复合物或者更换／添加培养基；

3. Lipofectamine? 3000试剂用量各有不同，测试推荐的两种浓度的Lipofectamine? 3000试剂，以确定最佳用量，开始新的转染； 4. Lipofectamine? 3000试剂应放在4℃储存（切勿冷冻）。 附上Lipofectamine 3000 REagent Protocol：

Bio-rad Gene Pulser Xcell电穿孔系统(中文)

Bio-rad Gene Pulser Xcell电穿孔系统 一Gene Pulser Xcell电穿孔系统介绍 电穿孔的过程中可以有2种波型来控制外界电压的变化，Gene Pulser Xcell可以提供2种波型，即指数波和方波。 1.Exponential Decay Wave（指数波） 所谓指数波的方式，就是将已经充电到指定电压的电容进行快速的放电，放电的方式是以指数的形式进行的（如上面的slide显示）。该种方式的电穿孔取决于2个参数，电场强度(kV/cm)和时间常数(ms)。在实验过程中，采用具体的电击杯调整电压即可调整不同的电场强度。此外，电容和电阻的具体值也可以在Gene Pulser Xcell的界面上进行设置。

?电容器充电到预定的电压(V0)放电后，即向样品释放脉冲，细胞表面的电压随时间按指数方式下降的 ?电容器的电压值达到峰值释放脉冲后迅速的衰减 ?电场强度E (V/cm) 是用来描述电击杯外界电场环境的一个参数（E=V/d ） ?脉冲时间是一般用时间常数来进行衡量(~37% of V0，V0/e) ?脉冲的时间是由电阻和电容的大小所决定的 备注：PC module作用 PC（Parallel Capacitor）模块的本质就是在放电回路中在样品上并联一套电阻。在放电回路中设置PC模块的目的：如果实验样品具有很高的电阻值，那么脉冲就需要维持相当长的时间，这样对细胞是会有损伤的，长时间的电场作用会导致细胞的裂解。并联了PC模块后对样品而言电击是的电压并没有变化，但是PC 模块起到了分流的作用，可以使得脉冲的时间常数大大减小，可有效的维持细胞的活性。并联了PC模块后，时间常数取决于该模块的电阻，电阻越小，那么放电的时间也就越短。 2. Square Wave（方波） 对于某些细胞而言，采用指数波进行实验特别容易导致细胞的死亡。对于这种细胞而言，采用方波的形式来进行电穿孔既可以进行有效的转染，又可以很好的保护细胞，维持细胞的活性。方波的形式通常用以下的参数来进行描述：电压、脉冲时间、脉冲次数和脉冲间的间隔时间。上述所有的参数都可以在Gene Pulser Xcell的操作界面上方便的设置。在实验结束后，Gene Pulser Xcell还可以显示实验中这些参数的具体值。 方波的本质和指数波是一样的，区别在于电压还没有下降为0的时候，电容器的放电已经被截止了。所有的方波都会有电压的细微下降，以其始的电压值的百分比计算。一般下降率不超过5%。

电火花成型加工实验指导

电火花成型加工实验指导 一、实验目的 1.了解电火花成型机床加工的原理、特点和应用； 2.掌握电火花成型机床加工的编程方法； 3.熟悉电火花成型机床的操作过程； 二、实验设备 电火花成型机床，电火花穿孔机床 三、实验方法原理 电火花成型加工是电火花加工的一种，被加工的工件做为工件电极，紫铜（或其它导电材料如石墨）做为工具电极。脉冲电源发出一连串的脉冲电压，加到工件电极和工具电极上，此时工具电极和工件均被淹没在具有一定绝缘性能的工作液（绝缘介质）中。在轴伺服系统的控制下，当工具电极与工件的距离小到一定程度时，在脉冲电压的作用下，两极间最近点处的工作液（绝缘介质）被击穿，工具电极与工件之间形成瞬时放电通道，产生瞬时高温，使金属局部熔化甚至汽化而被蚀除下来，使局部形成电蚀凹坑。这样以很高的频率连续不断地重复放电，工具电极不断地向工件进给，就可以将工具电极的形状复制到工件上，加工出需要的型面来。 电火花成型加工的特点：由于脉冲放电的能量密度高，使其便于加工用普通的机械加工难于加工或无法加工的特殊材料和复杂形状的零件，并不受材料及热处理状况的影响。电火花加工时，工具电极与工件材料不接触，两者之间宏观作用力极小，工具电极不需要比加工材料硬，即可以柔克刚，故电极制造更容易。 电火花加工需要设置的脉冲电源参数主要包括脉冲宽度t i、脉冲间隔t0 及峰值电流i e。加工工艺参数包括：极性设置，电极抬刀时间，冲油压力等。 四、实验步骤 （1）演示电火花成型加工机床的基本操作； （2）上机操作，了解电火花成型加工机床的组成以及加工零件的过程。 （3）电极的安装和校正； （4）工件的定位和夹紧； （5）编制电火花成型加工程序； （6）改变不同的工艺条件如抬刀时间、冲油压力等对成型加工的影响； （7）了解电火花穿孔加工。

活体电穿孔法介绍 1、什么是活体电穿孔 活体电穿孔法(in vivo ...

活体电穿孔法介绍 1、什么是活体电穿孔 活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115μm ,这种通道能维持几毫秒到几秒,然后自行恢复。在此期间生物大分子如DNA 可通过这种微小的通道进入细胞。近年来活体电穿孔法用于转基因研究的报道不断增多,在基因治疗方面的优势也日趋显著,是一种很好的活体基因导入方法。 活体电穿孔法可用于检测瞬时表达系统中载体的表达状况。大量的研究表明活体电穿孔法在基因治疗方面有非常好的应用前景。因此目前国内外对活体电穿孔法介导外源基因转移的研究越来越多。 2、活体电穿孔的法的特点 活体电穿孔法基因导入和表达效率较高,它的特点主要在以下几个方面: 首先,靶器官的选择面广,理论上任何组织和器官都可以作为活体电穿孔的靶器官。 在用于基因治疗方面，要考虑到靶器官组织生理特性。如果所选择的局部组织细胞不能把所转移基因的表达产物分泌到外周血液循环中,则在某种意义上说已失去了基因导入的价值,这在基因治疗中是关键性的问题。当使用组织特异性表达载体时,研究人员应根据所构建的表达载体来选择基因转移和表达的靶器官组织。例如鱼精蛋白21 启动子可指导外源基因在精母细胞中特异性表达,以小鼠的睾丸作为靶器官将含有鱼精蛋白21启动子的表达载体导入,获得外源基因的表达量远远高于该基因在肝脏和骨骼肌中的表达。 其次,对导入的外源基因片段的大小没有限制,从几KB 或十几KB 的表达载体, 到100～200KB 的Y AC、BAC 基因组,都有成功导入并获得表达的报道。 此外活体电穿孔法操作简单快速,电穿孔的时间只有几秒钟,而且DNA片段不需要特殊的纯化操作。 但电穿孔法也存在一些的缺点:首先,外源基因表达持续的时间很短,虽然外源基因导入后最快可在215 小时有表达,但大多1～2 月后表达量降至很低。外源基因表达的时间主要由于所构建的表达载体和基因导入的靶细胞组织器官不同而存在巨大差异。 由于应用不同的表达载体,Muramatsu 在小鼠肝脏进行电穿孔7天后则检测不到外源基因的表达,而Heller 21 天后还可以检测到外源基因的表达。如果选择代谢和酶活动旺盛的组织器官如肝脏,则表达持续时间会较短,表达时间在 1 个月以内,但以骨骼肌为靶组织,表达可持续15个月。

美国伯乐电转化仪使用说明

Gene pulser xcell TM Electroporation system quick guide 产品名称: Gene Pulser Xcell 电穿孔系统 产品型号: Gene Pulser Xcell 电穿孔系统 产品展商: 众磊（北京）生物科技发展有限公司驻沪办 简单介绍 Gene Pulser Xcell 电穿孔系统 Gene Pulser Xcell 电穿孔系统的详细介绍 【介绍】 电穿孔是功能强大的将核酸、蛋白及其它分子导入多种细胞的高效技术。通过高强度的电场作用，瞬时提高细胞膜的通透性，从而吸收周围介质中的外源分子。这种技术可以将核苷酸、DNA 与RNA、蛋白、糖类、染料及病毒颗粒等导入原核和真核细胞内。电转化相对其它物理和化学转化方法，是一种有价值和有效的替代方法。Gene Pulser Xcell 系统的设计，基于Bio-Rad 15年来在电转化技术上经验积累，它提供指数波和方波波型选择、系统配置选择及友好的用户界面。 主要特点指数波和方波波型确保所有细胞类型（原核及真核）均可获得最佳的电转化效果Bio-Rad 专利的* PulseTrac 电路和电弧保护设计，确保可重复性并保护样品模块化设计可根据研究需要选择系统用户友好的数字化界面，具有直观的编程以控制所有参数，包括附属模块的参数包括人工操作、预设规程、用户规程、一个优化规程及其它先进功能等程序选择 指数波或方波脉冲选择 Gene Pulser Xcell 系统可产生指数波和方波波型，使你选择最适合你细胞的波型与规程。指数波和方波均能有效地用于电转化及电融合。电穿孔波型对不同类型细胞的转化效率有很重要的影响。 左，指数衰变脉冲。当一个充电至电压为V 0 的电容器放电到细胞，加在细胞上的电压随时间以指数方式下降。从起始电压下降到V0 / e 所需的时间称为为时间常数τ, 一种方便的脉冲时间表达方式。 右，方波脉冲。放电到样品后截断电容器脉冲可产生方波脉冲。脉冲时间为细胞被放电的时间。所有方波设备都会产生细微的电压下降。这种电压下降称为脉冲下垂，并以起始电压的百分比计量。 PulseTrac 电路和电弧保护提供可靠的、可重复的和安全的性能Bio-Rad 独创的专利微处理器控制电路能为任何规程提供可重复的结果，无论使用何种介质，它所产生的电压值可在全世界范围内测试。PulseTrac 电路和电弧保护： ●确保电压准确地传送到电击杯 ●把CE 模块中的低压电容器精确度从20% 提升到10% ●便于电容器再校正，以保持精确的脉冲指标，修正电容器随着时间而发生的偏移 ●提供脉冲前样品电阻测量 ●当脉冲或电路中断时，可安全地自动放电降 ●低电弧危险，保护设备及样品 用户友好界面，便于编程和控制 主单元上的图形界面可控制包括任何连接的附属模块在内的所有功能。界面由一个通过功能键和字母数字键盘 操作的屏幕组成。根据屏幕提示进行简便而直观的编程。屏幕用于编程和显示储存与设定的程序、运行参数以及波型。规程包括： ●人工编程以输入或编辑方波或指数衰变脉冲的所有参数 ●辅助编程需要的时间常数 ●预设有适合常用细菌、真菌和哺乳动物细胞株的优化程序

电火花穿孔成型加工

特种加工 电火花穿孔成形加工（苏州科技学院机电系） 班级：机械0811 姓名：* * 学号：0820116***

电火花穿孔成形加工 1、背景 进入20世纪50年代后，随着市场发展和科学实验的需要，很多工业部门，尤其是国防工业部门，要求尖端科学技术产品向高精度、高速度、高温、高压、大功率、小型化等方向发展，它们所需要的材料愈来愈难加工，零件愈来愈复杂，加工精度、表面粗糙度和某些特殊要求也愈来愈高。由于传统的切削加工很难满足这些要求，因此，人们开始探索其它能量的加工方法，如电、化学、光、声等。特种加工也就是在这种情况下产生了。 2、特种加工的涵义 特种加工是区别于传统的切削加工的新型加工方法。它主要不是依靠机械能、切削力进行加工，而是用软的东西（甚至不用刀具）加工硬的工件，可以加工各种难加工材料、复杂表面和某些特殊要求的零件。像电火花加工、电化学加工、激光加工、超声加工、快速成形加工等都属于特种加工方法。 早在20世纪50年代中期，我国就已经研制出电火花穿孔、电火花表面强化等机床。到今天，我国的电火花应用技术已经相当成熟，而且也扩展到了更多的材料加工领域，像电火花穿孔成形加工、电火花切割加工等。 3、电火花加工的原理及特点 电火花加工基于电火花腐蚀原理，是在工具电极与工件电极相互靠近时，极间形成脉冲性火花放电，在电火花通道中产生瞬时高温，使金属局部熔化，甚至气化，从而将金属蚀除下来。 图1 电火花加工原理图 电火花加工过程大致可分为四个阶段： (1) 极间介质的电离、击穿，形成放电通道(如图2(a)所示)； (2) 电极材料的熔化、气化热膨胀(如图2 (b)、(c)所示)； (3) 电极材料的抛出(如图2 (d)所示)；

不可逆电穿孔治疗前列腺癌的研究进展

不可逆电穿孔治疗前列腺癌的研究进展 摘要：前列腺癌是常见的男性恶性肿瘤，其治疗方式有手术、放疗、化疗、内 分泌治疗及局部微创介入治疗等。传统前列腺癌根治术和放疗对癌症的控制效果 较好，但会引起侧支组织损伤且有较强的毒副作用；而局部热消融的精度不高， 易导致消融不完全。不可逆电穿孔作为一项先进的介入技术，具有消融范围精准 和消融效果良好的优点，目前已有多个国家开展相关临床研究。本文就不可逆电 穿孔消融的原理及其在前列腺癌治疗中的主要进展进行综述。 关键词：前列腺癌；不可逆电穿孔；介入治疗 前列腺癌（Prostate Cancer，PCa）是最常见的男性恶性肿瘤之一，其发病率 随着年龄的增长而显著增加。在中国，PCa是继肺癌后，男性死亡率最高的癌症。PCa主要的治疗方法有外科治疗、放射治疗、化学治疗、内分泌治疗及局部微创 介入治疗。前列腺近端有许多重要结构，如直肠、尿道、神经血管束等，PCa根 治术作为常规治疗方法，易对上述结构造成破坏，导致严重的并发症。以能量效 应为基础的微创介入疗法，包括冷冻消融、射频消融和微波消融等，为避免并发症，靠近血管及邻近正常组织器官的肿瘤常常消融不完全。 不可逆电穿孔（Irreversible Electroporation，IRE）是一种新的非能量消融方式，它利用强有力的电脉冲，在细胞膜上产生不可逆的穿孔，使得细胞内外物质自由 流动，从而导致细胞内物质紊乱，进而导致细胞凋亡。与热消融相比，IRE的机 制是不受能量影响的，这使得在热敏感结构附近的肿瘤也可消融完全。优化后的 脉冲参数和电极布置使治疗期间的血管和神经得以保护，利于患者的功能恢复。 这些优点使IRE在临床中得以广泛应用。 1.临床研究 2015年，Ting等[1]第一次对IRE治疗PCa的结果进行研究，他们选取了32 个未经手术治疗的中等风险的PCa患者，使用3-6个电极以5mm以上的安全距 离排列消融肿瘤。随访调查并发症，术后6个月进行MRI检查、术后7个月进行 活检，并将治疗区域内的发现细分为内野、临近区域和外野。结果显示在6个月时，泌尿、肠道及性功能未明显下降。一般身心健康评分在术后6个月时未显著 下降，且在整个随访期间保持稳定。在肿瘤方面的随访活检中，16/21（76%）的 组织学标本上未见明显疾病，8/21（38%）的组织学标本上未见癌症。综上所述，对于中早期PCa患者，局灶性IRE治疗安全可靠、并发症发生率低。 2016年，Kaite等[2]对25名经IRE治疗的PCa患者进行回顾性分析。对患者 随访至少6个月，最终随访时间的中位数为10.9个月。2例发生3级并发症包括 附睾炎和尿路感染。14例发生2级及以下的并发症，主要包括血尿、尿路感染等。25例患者中，4例（16%）在术后6个月的随访活检中发现消融区肿瘤复发。术 前泌尿功能正常的患者，在术后6个月和12个月后分别有出现12%和6%的泌尿 功能异常，术后12个月时只有1名患者出现勃起功能障碍，2个病人（8%）出 现尿失禁。结果证明了IRE治疗局限性PCa是可行和安全的。 2016年，Massimo等[3]报告了一项关于不可逆电穿孔治疗局灶性PCa的前瞻 性研究，主要目的是确定病灶的副作用，次要目标包括确定特定领域的不良反应 概况、早期疾病控制率和三叉神经痛发生率。在研究过程中，16名患者完成了所 有的临床试验和12个月的随访。所有16名男性患者在术后12个月时均无漏尿。

电火花穿孔成型加工

电火花穿孔成型加工 主要用途及适用范围 高速电火花穿孔机采用电极管（黄铜管、紫铜管）作为工具电极利用电火花放电蚀除原理，在电极（空心铜管）与工作之间施加高频脉冲电源形成小脉宽，大峰值电流的放电加工，辅以高压水冷却排渣，使工件的蚀除速度大加快，特别适用于在不锈钢，淬火钢、铜、铝，硬质合金等各种导电材料上加工直径Φ0.2～Φ3.0之间的深小孔,深径比最高可达300:1,可直接在工件的斜面,曲面进入加工, 本机床主要用于电火花线切割加工的穿丝孔、化纤喷丝头、喷丝板的喷丝孔、滤板、筛板的群孔、发动机叶片、缸体的散热孔、液压、气动阀体的油路、气路孔等。也可用于蚀除折断在工件中的钻头,丝锥等,而不损坏原孔成螺纹。 特点： 1.能加工孔径Φ0.2～Φ3.0? mm，最大深径比能达300：1以上； 2.加工速度每分钟可达30～60mm； 3.能加工不锈钢、淬火钢、硬质合金、铜、铝等各种导电材料； 4.能直接从斜面、曲面穿入； 5.具有电极自动修复功能，提高加工孔的精度； 6.带集中润滑系统，以及专业手控装置 7.具有掉电记忆功能 8.数控轴具有反向间隙补偿功能 9.具有数控轴人工清零功能（设定相对零位） 10.X、Y、Z轴采用滚珠丝杠,直线导轨； 11.X、Y、Z轴都采用伺服电机驱动，控制精度0.001mm； 12.具有加工孔位编程功能以及加工参数编程功能 13.可选配C轴（旋转轴）实现四轴数控，为一些特定产品的小孔加工 提供了解决方案；

电火花磨削和镗削加工。磨削各种工件，如小孔、深孔、内圆、外圆、平面等磨削和成型磨削。 图3-11 Dk6825数控旋转电火花机床加工范围 图3-12 电火花镗磨 14.5．加工各种成型刀、样板、工具、量具、螺纹等成型零件。

电穿孔系统

电穿孔系统 BJ5183电转感受态细胞只能用于电击转化，不能用于热激转化。BJ5183为重组腺病毒质粒构建专用菌株，能够表达供pAdEasy骨架质粒和pAdEasy穿梭质粒进行同源重组的所有组分。pUC19质粒检测感受态细胞的转化。 1.电极间距为0.1cm的电转杯（Gene Pulser?/MicroPulser? electroporation cuvettes）插入碎冰中，压实冰面，冰中静置5分钟，使电转杯充分降温。（电转杯重复使用方法：每次用完后，用大量的自来水冲洗干净去掉菌液和DNA，用蒸馏水洗3遍，将其泡在75%乙醇中30分钟，取出杯子，沥干液体，放在超净台中，使乙醇充分挥发，盖上盖子放干燥地方备用）； 2.取-70℃保存的感受态细胞插入冰中，待细胞刚化冻后，加入质粒DNA或连 接产物（洗脱或溶解质粒的溶液中离子不能太高，或用双蒸水稀释，对照pUC19可以用无菌水稀释到10pg/μl），用手指拨打管底轻轻混匀，立即插入冰中，在超净台中用无菌吸头将细胞/DNA混合物快速转移到电击杯中，避免产生气泡，确保细胞沉到杯底，盖上杯盖，空管保留待用。 3.启动电转仪，设置电击参数：2.0kV，200Ω，25μF（BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser）。用纸巾擦掉电转杯外部的水分，将电转杯放入电转槽中进行电击。完成后，将电转杯插入冰中，加入950μl无抗生素的SOC或LB培养基，并将液体转移到原来保留的感受态空管中，37℃，150-250rpm振荡培养1小时。 4.取100-200μl左右的菌液或稀释后的菌液，涂布于含相应抗生素的LB平板上， 倒置放于37℃培养箱培养12-18小时。 注意事项： 1.电转杯必须预冷。感受态细胞应该在冰水浴中化冻，加入DNA后应轻柔 混匀，加入DNA的体积小于细胞体积的1/10。 2.一旦DNA加入到细胞中，电击操作应该立即进行。 3.DNA 应该溶解在水或TE中，连接酶的存在会降低转化效率，必要时需 纯化连接产物。 4.电击时，电转杯中的气泡和含高浓度盐离子的DNA或转化产物会导致电 弧现象的发生。

电穿孔美容仪使用说明

电穿孔美容仪使用说明 卡酷尚电穿孔（EMS）美容仪使用说明： 1.第一次使用，需要充电 将电源插头接插连接充电器插孔内，电源插头另一端接到外接电源上，充电座电源显示灯亮蓝光，表示电源插通。再将主机插通充电座插孔内，充电指示灯将会亮红灯，充电饱和后，充电指示灯会亮绿灯，每次充电时间约为4小时。 2.清洁皮肤后，拍上精华液 3.拿起充电好的主机，按下开关按钮，彩光灯盘的五颗粉光亮，电流强度为默认档1档。 4.根据您的需要调节电流强弱，电流指示档1-4档，对应的电流强度是从低至高，数字越大，电流强度越高。 5.电流强弱选择方式 第1次按开关，电流强弱默认1档； 第2次按开关，电流强弱跳至2档； 第3次按开关，电流强弱跳至3档； 第4次按开关，电流强弱跳至4档； 第5次按开关，机器进入关机状态。 6.操作时由下至上，由内至外，在皮肤上提拉状移动，移动过程中皮肤会微微发热，EMS电流可以刺激肌肉运动，肌肉运动产生热量，温度约为40度左右，需配合美容液一起使用，正常每周两次为宜。 卡酷尚电穿孔美容仪技术参数 卡酷尚电穿孔美容仪注意事项 1.使用前请阅读说明书中《安全注意事项》，然后再正确使用。

2.请按操作顺序使用机器。 3.请不要自行拆机或改造，修理请咨询修理店。 4.请不要用于说明书以外的用途。 5.请不要在日晒下、火盆旁、浴室灯高温高湿的地方使用或放置。 6.不要放在较热的电器旁边，以免发生火灾、触电等事故。 7.充电器不要放在湿的情况下使用，以免短路、触电或起火。 8.请不要让小孩或身体活动不自由的人使用，未成年人使用时需要有成年人陪同指导。 警告： 异常发热时，请立即停止使用，以免引起破损或者着火。 请不要摔掉或撞击主机，以免引起故障。 使用中，要不断补充精华，以免皮肤干燥。 电源线破损时，请不要使用，以免起火。 以下人群请不要使用：心脏病人、发高烧患者、有传染病者、有恶性肿瘤者、有伤口者、急性病患者、高低血压患者、起搏器植入体内者、人工心肺者、正使用医用电器者、皮肤病患者、孕妇哺乳期、过度晒伤的人、特别敏感的人、血管扩张者、正在住院的人