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pET-30b(+)大肠杆菌表达载体说明

pET-30b(+)

编号载体名称

北京华越洋生物VECT5330 pET--‐30b(+)

pET30b载体基本信息

别名: pET30b, p et 30b

质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达

表达水平: 高

克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶

载体大小: 5421 b p

5' 测序引物: T7

5' 测序引物序列: 5'--‐TAATACGACTCACTATAGGG--‐3' 载体标签: N--‐His, N--‐S, N--‐Thrombin, N--‐EK, C--‐His 载体抗性: Kanamycin

备注: N t erm t hrombin c leavage s ite; N t erm e nterokinase c leavage s ite; a,b,c v ary b y M CS

稳定性: 瞬时表达 Transient

组成型: 组成型 Constitutive

病毒/非病毒: 非病毒

pET30b载体质粒图谱和多克隆位点信息

pET30b载体简介

The pET--‐30a--‐c(+) vectors carry an N--‐terminal His? Tag?/ thrombin/ S? Tag?/ enterokinase configuration plus an optional C--‐terminal His? Tag sequence. Unique sites are shown on the circle map. Note that the sequence is numbered by the pBR322 convention, so the T7 expression region is reversed on the circular map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions c ontaining s ingle--‐stranded D NA t hat c orresponds t o t he c oding s trand. T herefore, single--‐stranded s equencing s hould b e p erformed u sing t he T7 t erminator p rimer (Cat. N o. 69337--‐3).

pET30b载体序列

ORIGIN

1 ATCCGGATAT AGTTCCTCCT TTCAGCAAAA AACCCCTCAA GACCCGTTTA GAGGCCCCAA 61 GGGGTTATGC TAGTTATTGC TCAGCGGTGG CAGCAGCCAA CTCAGCTTCC TTTCGGGCTT 121 TGTTAGCAGC CGGATCTCAG TGGTGGTGGT GGTGGTGCTC GAGTGCGGCC GCAAGCTTGT 181 CGACGGAGCT CGAATTCGGA TCCGATATCG CCATGGCCTT GTCGTCGTCG TCGGTACCCA 241 GATCTGGGCT GTCCATGTGC TGGCGTTCGA ATTTAGCAGC AGCGGTTTCT TTCATACCAG 301 AACCGCGTGG CACCAGACCA GAAGAATGAT GATGATGATG GTGCATATGT ATATCTCCTT 361 CTTAAAGTTA AACAAAATTA TTTCTAGAGG GGAATTGTTA TCCGCTCACA ATTCCCCTAT 421 AGTGAGTCGT ATTAATTTCG CGGGATCGAG ATCGATCTCG ATCCTCTACG CCGGACGCAT 481 CGTGGCCGGC ATCACCGGCG CCACAGGTGC GGTTGCTGGC GCCTATATCG CCGACATCAC 541 CGATGGGGAA GATCGGGCTC GCCACTTCGG GCTCATGAGC GCTTGTTTCG GCGTGGGTAT 601 GGTGGCAGGC CCCGTGGCCG GGGGACTGTT GGGCGCCATC TCCTTGCATG CACCATTCCT 661 TGCGGCGGCG GTGCTCAACG GCCTCAACCT ACTACTGGGC TGCTTCCTAA TGCAGGAGTC 721 GCATAAGGGA GAGCGTCGAG ATCCCGGACA CCATCGAATG GCGCAAAACC TTTCGCGGTA 781 TGGCATGATA GCGCCCGGAA GAGAGTCAAT TCAGGGTGGT GAATGTGAAA CCAGTAACGT 841 TATACGATGT CGCAGAGTAT GCCGGTGTCT CTTATCAGAC CGTTTCCCGC GTGGTGAACC 901 AGGCCAGCCA CGTTTCTGCG AAAACGCGGG AAAAAGTGGA AGCGGCGATG GCGGAGCTGA 961 ATTACATTCC CAACCGCGTG GCACAACAAC TGGCGGGCAA ACAGTCGTTG CTGATTGGCG 1021 TTGCCACCTC CAGTCTGGCC CTGCACGCGC CGTCGCAAAT TGTCGCGGCG ATTAAATCTC 1081 GCGCCGATCA ACTGGGTGCC AGCGTGGTGG TGTCGATGGT AGAACGAAGC GGCGTCGAAG 1141 CCTGTAAAGC GGCGGTGCAC AATCTTCTCG CGCAACGCGT CAGTGGGCTG ATCATTAACT 1201 ATCCGCTGGA TGACCAGGAT GCCATTGCTG TGGAAGCTGC CTGCACTAAT GTTCCGGCGT 1261 TATTTCTTGA TGTCTCTGAC CAGACACCCA TCAACAGTAT TATTTTCTCC CATGAAGACG 1321 GTACGCGACT GGGCGTGGAG CATCTGGTCG CATTGGGTCA CCAGCAAATC GCGCTGTTAG 1381 CGGGCCCATT AAGTTCTGTC TCGGCGCGTC TGCGTCTGGC TGGCTGGCAT AAATATCTCA 1441 CTCGCAATCA AATTCAGCCG ATAGCGGAAC GGGAAGGCGA CTGGAGTGCC ATGTCCGGTT 1501 TTCAACAAAC CATGCAAATG CTGAATGAGG GCATCGTTCC CACTGCGATG CTGGTTGCCA 1561 ACGATCAGAT GGCGCTGGGC GCAATGCGCG CCATTACCGA GTCCGGGCTG CGCGTTGGTG 1621 CGGACATCTC GGTAGTGGGA TACGACGATA CCGAAGACAG CTCATGTTAT ATCCCGCCGT 1681 TAACCACCAT CAAACAGGAT TTTCGCCTGC TGGGGCAAAC CAGCGTGGAC CGCTTGCTGC 1741 AACTCTCTCA GGGCCAGGCG GTGAAGGGCA ATCAGCTGTT GCCCGTCTCA CTGGTGAAAA 1801 GAAAAACCAC CCTGGCGCCC AATACGCAAA CCGCCTCTCC CCGCGCGTTG GCCGATTCAT

1861 TAATGCAGCT GGCACGACAG GTTTCCCGAC TGGAAAGCGG GCAGTGAGCG CAACGCAATT 1921 AATGTAAGTT AGCTCACTCA TTAGGCACCG GGATCTCGAC CGATGCCCTT GAGAGCCTTC 1981 AACCCAGTCA GCTCCTTCCG GTGGGCGCGG GGCATGACTA TCGTCGCCGC ACTTATGACT 2041 GTCTTCTTTA TCATGCAACT CGTAGGACAG GTGCCGGCAG CGCTCTGGGT CATTTTCGGC 2101 GAGGACCGCT TTCGCTGGAG CGCGACGATG ATCGGCCTGT CGCTTGCGGT ATTCGGAATC 2161 TTGCACGCCC TCGCTCAAGC CTTCGTCACT GGTCCCGCCA CCAAACGTTT CGGCGAGAAG 2221 CAGGCCATTA TCGCCGGCAT GGCGGCCCCA CGGGTGCGCA TGATCGTGCT CCTGTCGTTG 2281 AGGACCCGGC TAGGCTGGCG GGGTTGCCTT ACTGGTTAGC AGAATGAATC ACCGATACGC 2341 GAGCGAACGT GAAGCGACTG CTGCTGCAAA ACGTCTGCGA CCTGAGCAAC AACATGAATG 2401 GTCTTCGGTT TCCGTGTTTC GTAAAGTCTG GAAACGCGGA AGTCAGCGCC CTGCACCATT 2461 ATGTTCCGGA TCTGCATCGC AGGATGCTGC TGGCTACCCT GTGGAACACC TACATCTGTA 2521 TTAACGAAGC GCTGGCATTG ACCCTGAGTG ATTTTTCTCT GGTCCCGCCG CATCCATACC 2581 GCCAGTTGTT TACCCTCACA ACGTTCCAGT AACCGGGCAT GTTCATCATC AGTAACCCGT 2641 ATCGTGAGCA TCCTCTCTCG TTTCATCGGT ATCATTACCC CCATGAACAG AAATCCCCCT 2701 TACACGGAGG CATCAGTGAC CAAACAGGAA AAAACCGCCC TTAACATGGC CCGCTTTATC 2761 AGAAGCCAGA CATTAACGCT TCTGGAGAAA CTCAACGAGC TGGACGCGGA TGAACAGGCA 2821 GACATCTGTG AATCGCTTCA CGACCACGCT GATGAGCTTT ACCGCAGCTG CCTCGCGCGT 2881 TTCGGTGATG ACGGTGAAAA CCTCTGACAC ATGCAGCTCC CGGAGACGGT CACAGCTTGT 2941 CTGTAAGCGG ATGCCGGGAG CAGACAAGCC CGTCAGGGCG CGTCAGCGGG TGTTGGCGGG 3001 TGTCGGGGCG CAGCCATGAC CCAGTCACGT AGCGATAGCG GAGTGTATAC TGGCTTAACT 3061 ATGCGGCATC AGAGCAGATT GTACTGAGAG TGCACCATAT ATGCGGTGTG AAATACCGCA 3121 CAGATGCGTA AGGAGAAAAT ACCGCATCAG GCGCTCTTCC GCTTCCTCGC TCACTGACTC 3181 GCTGCGCTCG GTCGTTCGGC TGCGGCGAGC GGTATCAGCT CACTCAAAGG CGGTAATACG 3241 GTTATCCACA GAATCAGGGG ATAACGCAGG AAAGAACATG TGAGCAAAAG GCCAGCAAAA 3301 GGCCAGGAAC CGTAAAAAGG CCGCGTTGCT GGCGTTTTTC CATAGGCTCC GCCCCCCTGA 3361 CGAGCATCAC AAAAATCGAC GCTCAAGTCA GAGGTGGCGA AACCCGACAG GACTATAAAG 3421 ATACCAGGCG TTTCCCCCTG GAAGCTCCCT CGTGCGCTCT CCTGTTCCGA CCCTGCCGCT 3481 TACCGGATAC CTGTCCGCCT TTCTCCCTTC GGGAAGCGTG GCGCTTTCTC ATAGCTCACG 3541 CTGTAGGTAT CTCAGTTCGG TGTAGGTCGT TCGCTCCAAG CTGGGCTGTG TGCACGAACC 3601 CCCCGTTCAG CCCGACCGCT GCGCCTTATC CGGTAACTAT CGTCTTGAGT CCAACCCGGT 3661 AAGACACGAC TTATCGCCAC TGGCAGCAGC CACTGGTAAC AGGATTAGCA GAGCGAGGTA 3721 TGTAGGCGGT GCTACAGAGT TCTTGAAGTG GTGGCCTAAC TACGGCTACA CTAGAAGGAC 3781 AGTATTTGGT ATCTGCGCTC TGCTGAAGCC AGTTACCTTC GGAAAAAGAG TTGGTAGCTC 3841 TTGATCCGGC AAACAAACCA CCGCTGGTAG CGGTGGTTTT TTTGTTTGCA AGCAGCAGAT 3901 TACGCGCAGA AAAAAAGGAT CTCAAGAAGA TCCTTTGATC TTTTCTACGG GGTCTGACGC 3961 TCAGTGGAAC GAAAACTCAC GTTAAGGGAT TTTGGTCATG AACAATAAAA CTGTCTGCTT 4021 ACATAAACAG TAATACAAGG GGTGTTATGA GCCATATTCA ACGGGAAACG TCTTGCTCTA 4081 GGCCGCGATT AAATTCCAAC ATGGATGCTG ATTTATATGG GTATAAATGG GCTCGCGATA 4141 ATGTCGGGCA ATCAGGTGCG ACAATCTATC GATTGTATGG GAAGCCCGAT GCGCCAGAGT 4201 TGTTTCTGAA ACATGGCAAA GGTAGCGTTG CCAATGATGT TACAGATGAG ATGGTCAGAC 4261 TAAACTGGCT GACGGAATTT ATGCCTCTTC CGACCATCAA GCATTTTATC CGTACTCCTG 4321 ATGATGCATG GTTACTCACC ACTGCGATCC CCGGGAAAAC AGCATTCCAG GTATTAGAAG 4381 AATATCCTGA TTCAGGTGAA AATATTGTTG ATGCGCTGGC AGTGTTCCTG CGCCGGTTGC 4441 ATTCGATTCC TGTTTGTAAT TGTCCTTTTA ACAGCGATCG CGTATTTCGT CTCGCTCAGG

4501 CGCAATCACG AATGAATAAC GGTTTGGTTG ATGCGAGTGA TTTTGATGAC GAGCGTAATG 4561 GCTGGCCTGT TGAACAAGTC TGGAAAGAAA TGCATAAACT TTTGCCATTC TCACCGGATT 4621 CAGTCGTCAC TCATGGTGAT TTCTCACTTG ATAACCTTAT TTTTGACGAG GGGAAATTAA 4681 TAGGTTGTAT TGATGTTGGA CGAGTCGGAA TCGCAGACCG ATACCAGGAT CTTGCCATCC 4741 TATGGAACTG CCTCGGTGAG TTTTCTCCTT CATTACAGAA ACGGCTTTTT CAAAAATATG 4801 GTATTGATAA TCCTGATATG AATAAATTGC AGTTTCATTT GATGCTCGAT GAGTTTTTCT 4861 AAGAATTAAT TCATGAGCGG ATACATATTT GAATGTATTT AGAAAAATAA ACAAATAGGG 4921 GTTCCGCGCA CATTTCCCCG AAAAGTGCCA CCTGAAATTG TAAACGTTAA TATTTTGTTA 4981 AAATTCGCGT TAAATTTTTG TTAAATCAGC TCATTTTTTA ACCAATAGGC CGAAATCGGC 5041 AAAATCCCTT ATAAATCAAA AGAATAGACC GAGATAGGGT TGAGTGTTGT TCCAGTTTGG 5101 AACAAGAGTC CACTATTAAA GAACGTGGAC TCCAACGTCA AAGGGCGAAA AACCGTCTAT 5161 CAGGGCGATG GCCCACTACG TGAACCATCA CCCTAATCAA GTTTTTTGGG GTCGAGGTGC 5221 CGTAAAGCAC TAAATCGGAA CCCTAAAGGG AGCCCCCGAT TTAGAGCTTG ACGGGGAAAG 5281 CCGGCGAACG TGGCGAGAAA GGAAGGGAAG AAAGCGAAAG GAGCGGGCGC TAGGGCGCTG 5341 GCAAGTGTAG CGGTCACGCT GCGCGTAACC ACCACACCCG CCGCGCTTAA TGCGCCGCTA 5401 CAGGGCGCGT CCCATTCGCC A

其他大肠杆菌表达载体：

pBV221 ptdTomato pET-52b(+) pAmCyan

pDsRed-Express2 pBV220 pCold-GST pColdS-SUMO

pCold TF pCold IV pCold III pCold II

pCold I pE-SUMO pCold-ProS2 pBAD102/D-TOPO

pBAD202/D-TOPO pACYC184 pBAD/Thio-TOPO pBad/Myc-His C

pBad/Myc-His B pBad/Myc-His A pBad/His C pBad/His B

pBad/His A pBAD-TOPO pET-23b(+) pET-23a(+)

pET-23c(+) pET-23(+) pET-12b(+) pET-12c(+)

pET-12a(+) pET-11b(+) pET-11a(+) pET-11c(+)

pBad24 pQE-82L pQE-81L pQE-80L

pQE-32 pQE-9 pQE-16 pQE-31

pQE-60 pQE-70 pQE-40 pET-51b(+)

pET-50b(+) pET-49b(+) pET-48b(+) pET-47b(+)

pET-26b(+) pET-32a(+) pET-21b(+) pET-22b(+)

pET-14b pET-16b pET-15b pET-19b

pET-20b(+) pET-21d(+) pET-21c(+) pET-21b(+)

pET-21a(+) pET-24a(+) pET-24d(+) pET-25b(+)

pET-27b(+) pET-28a(+) pET-30a(+) pET-42a(+)

pET-43.1c(+) pET-43.1b(+) pET-43.1a(+) pET-44a(+)

pET-44c(+) pET-46 EK/LIC pET-37b(+) pTrcHis2 C

pTrcHis2 B pTrcHis2 A pET303/CT-His pET302/NT-His pRSET-CFP pRSET-EmGFP pRSET-BFP pGFPuv

pET300/NT-DEST pET301/CT-DEST pGEM-T pBad43

pGEX-4T-3 pGEX-5X-2 pBlueScript SK(+) pG-Tf2

pG-KJE8 pGro7 pET-SUMO pSE380

pET-17b pET102/D-TOPO pCDFDuet-1 pMAL-p5x

pTf16 pET-28c(+) pBluescript II SK(+) pET-30b(+) pSUMO pProEX HTc pProEX HTb pProEX HTa pKD3 pKD13 pKD46 pTYB1

pTYB2 pTWIN2 pBluescript II KS(-) pTYB12

pMAL-p5e pACYCDuet-1 pEGM-11ZF(+) pEGM-7ZF(+) PinPoint Xa-3 PinPoint Xa-2 PinPoint Xa-1 pSP73

pSP64 pTWIN1 pTYB11 pTXB1

pET-5b(+) pBad/gIII C pBad/gIII B pBad/gIII A pET-5a(+) pMal-p4X pMal-p2G pkk223-3

pkk232-8 pCYB1 pEZZ18 pBAD18

pMAL-c5x pMal-p2E pMal-p2X pET-44 EK/LIC pET-43.1 EK/LIC pET-41 EK/LIC pMal-c4X pTrcHis B

pET-31b(+) pET-3b(+) pET-41a(+) pGEX-3X

pGEX-4T-2 pETDuet-1 pGEX-4T-1 pTrc99a

pET-28b(+) pET-His pALEX a,b,c pACYC177

pBR322 pKD4 pKD20 pMXB10

pEcoli-6xHN-GFPuv pKJE7 pRSET B pGEX-KG

pGEX-2T pRSFDuet-1 pCOLADuet-1 pTrcHis C pTrcHis A pET-41b(+) pET-42b(+) pET-3a(+) pGEX-6P-3 pGEX-6P-2 pGEX-6P-1 pGEX-5X-3 pGEX-5X-1 pGEX-2TK pRSET A pMal-c2G

pMal-c2E pMal-c2X pRSET C pQE-30

pET-45b(+) pET-44b(+) pET-42c(+) pET-41c(+) pET-40b(+) pET-33b(+) pET-39b(+) pET-32 EK/LIC pET-32 Xa/LIC pET-32c(+) pET-32b(+) pET-30 Xa/LIC pET-30 EK/LIC pET-30c(+) pET-29c(+) pET-29b(+) pET-29a(+) pET-24c(+) pET-24b(+) pET-24(+)

pET-23d(+) pET-11d(+) pBad33

pET-32b(+)大肠杆菌表达载体说明

pET-32b(+) 编号载体名称北京华越洋生物VECT5030 pET--‐32b(+) pET32b载体基本信息别名: pET32b, p et 32b 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达表达水平: 高克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 5899bp 5' 测序引物: T7或者Trx--‐F 5' 测序引物序列: T7: 5'--‐TAATACGACTCACTATAGGG--‐3'; Trx--‐F: 5' T TCCTCGACGCTAACCTG 3' 载体标签: thioredoxin (N端); H is (中间和C端) 载体抗性: Ampicillin 备注: Production of soluble, active target proteins; N--‐term thrombin cleavage s ite; Nterm e nterokinase c leavage s ite; a,b,c v ary b y M CS 稳定性: 瞬时表达 Transient 组成型: 组成型 Constitutive 病毒/非病毒: 非病毒 pET32b载体质粒图谱和多克隆位点信息

pET32b载体简介 The pET--‐32a--‐c series is designed for cloning and high--‐level expression of peptide sequences fused with the 109aa Trx?Tag? thioredoxin protein (1). Cloning sites are available for producing fusion proteins also containing cleavable His?Tag? and S?Tag? sequences for detection and purification. Unique sites are shown on the circle map. Note that t he s equence i s n umbered b y t he p BR322 c onvention, s o t he T7 e xpression r egion i s reversed on the circle map. The cloning/expression region of the coding strand transcribed by T7 RNA polymerase is shown below. The f1 origin is oriented so that infection with helper phage will produce virions containing single--‐stranded DNA that corresponds to the coding strand. Therefore, single--‐stranded sequencing should be performed u sing t he T7 t erminator p rimer . pET32b载体序列 ORIGIN 1 ATCCGGATAT AGTTCCTCCT TTCAGCAAAA AACCCCTCAA GACCCGTTTA GAGGCCCCAA 61 GGGGTTATGC TAGTTATTGC TCAGCGGTGG CAGCAGCCAA CTCAGCTTCC TTTCGGGCTT 121 TGTTAGCAGC CGGATCTCAG TGGTGGTGGT GGTGGTGCTC GAGTGCGGCC GCAAGCTTGT 181 CGACGGAGCT CGAATTCGGA TCCGATATCG CCATGGCCTT GTCGTCGTCG TCGGTACCCA 241 GATCTGGGCT GTCCATGTGC TGGCGTTCGA ATTTAGCAGC AGCGGTTTCT TTCATACCAG 301 AACCGCGTGG CACCAGACCA GAAGAATGAT GATGATGATG GTGCATATGG CCAGAACCAG 361 AACCGGCCAG GTTAGCGTCG AGGAACTCTT TCAACTGACC TTTAGACAGT GCACCCACTT 421 TGGTTGCCGC CACTTCACCG TTTTTGAACA GCAGCAGAGT CGGGATACCA CGGATGCCAT 481 ATTTCGGCGC AGTGCCAGGG TTTTGATCGA TGTTCAGTTT TGCAACGGTC AGTTTGCCCT 541 GATATTCGTC AGCGATTTCA TCCAGAATCG GGGCGATCAT TTTGCACGGA CCGCACCACT 601 CTGCCCAGAA ATCGACGAGG ATCGCCCCGT CCGCTTTGAG TACATCCGTG TCAAAACTGT 661 CGTCAGTCAG GTGAATAATT TTATCGCTCA TATGTATATC TCCTTCTTAA AGTTAAACAA 721 AATTATTTCT AGAGGGGAAT TGTTATCCGC TCACAATTCC CCTATAGTGA GTCGTATTAA 781 TTTCGCGGGA TCGAGATCGA TCTCGATCCT CTACGCCGGA CGCATCGTGG CCGGCATCAC 841 CGGCGCCACA GGTGCGGTTG CTGGCGCCTA TATCGCCGAC ATCACCGATG GGGAAGATCG 901 GGCTCGCCAC TTCGGGCTCA TGAGCGCTTG TTTCGGCGTG GGTATGGTGG CAGGCCCCGT 961 GGCCGGGGGA CTGTTGGGCG CCATCTCCTT GCATGCACCA TTCCTTGCGG CGGCGGTGCT 1021 CAACGGCCTC AACCTACTAC TGGGCTGCTT CCTAATGCAG GAGTCGCATA AGGGAGAGCG 1081 TCGAGATCCC GGACACCATC GAATGGCGCA AAACCTTTCG CGGTATGGCA TGATAGCGCC 1141 CGGAAGAGAG TCAATTCAGG GTGGTGAATG TGAAACCAGT AACGTTATAC GATGTCGCAG 1201 AGTATGCCGG TGTCTCTTAT CAGACCGTTT CCCGCGTGGT GAACCAGGCC AGCCACGTTT 1261 CTGCGAAAAC GCGGGAAAAA GTGGAAGCGG CGATGGCGGA GCTGAATTAC ATTCCCAACC 1321 GCGTGGCACA ACAACTGGCG GGCAAACAGT CGTTGCTGAT TGGCGTTGCC ACCTCCAGTC 1381 TGGCCCTGCA CGCGCCGTCG CAAATTGTCG CGGCGATTAA ATCTCGCGCC GATCAACTGG 1441 GTGCCAGCGT GGTGGTGTCG ATGGTAGAAC GAAGCGGCGT CGAAGCCTGT AAAGCGGCGG 1501 TGCACAATCT TCTCGCGCAA CGCGTCAGTG GGCTGATCAT TAACTATCCG CTGGATGACC 1561 AGGATGCCAT TGCTGTGGAA GCTGCCTGCA CTAATGTTCC GGCGTTATTT CTTGATGTCT 1621 CTGACCAGAC ACCCATCAAC AGTATTATTT TCTCCCATGA AGACGGTACG CGACTGGGCG 1681 TGGAGCATCT GGTCGCATTG GGTCACCAGC AAATCGCGCT GTTAGCGGGC CCATTAAGTT 1741 CTGTCTCGGC GCGTCTGCGT CTGGCTGGCT GGCATAAATA TCTCACTCGC AATCAAATTC

大肠杆菌基因型及遗传符号说明系列一DXY

大肠杆菌基因型及遗传符号说明系列一点击次数：982 作者：佚名发表于：2009-09-27 00:00转载请注明来自丁香园来源：丁香园实验室的一般大肠杆菌拥有4288条基因，每条基因的长度约为950bp,基因间的平均间隔为118bp （基因Ⅷ）。E.coli基因组中还包含有许多插入序列，如λ-噬菌体片段和一些其他特殊组份的片段，这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的，由此表明了基因组具有它的可塑造性。利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造，使其中的某些基因发生突变或缺失，从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化，这种能观察到的特征叫做大肠杆菌的表现型（Phenotype），把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基因型（Genotype）。具有不同基因型的菌株表现出不同的特性。分子克隆中常用的大肠杆菌及其遗传标记按Demerec等1966年提出的命名原则，采用的菌株所有的基因都假定处于野生型状态，除非在基因型上另外注明。大肠杆菌基因型的表示方法（Demerec, et, al. 1966）：一、一般规则： 1、根据基因产物或其作用产物的英文名称的第一个字母缩写成3个小写斜体字母来表示。例如：D NA Adenine Methylase→dam。 2、不同的基因座，其中任何一个突变所产生的表型变化可能相同，其表示方法是在3个小写斜体字母后加上一个斜体大写字母来表示区别。例如：Recombination→recA、recB、recC。 3、突变位点应通过在突变基因符号后加不同数字表示。如supE44（sup基因座E的44位突变）。

如果不知道几个等位基因中哪一/几个发生了功能性突变，则用连字符“ -”代替大写字母，如trp-31。 4、细菌的基因型中应该包含关于其携带的质粒或附加体的的信息。这些符号包括菌株携带的质粒或附加体、质粒或附加体上的突变基因座和突变位点。其基因符号应与基因座的表示符号明显区别，符号的第一个字母大写、不斜体并位于括号内；质粒或附加体上的突变基因座和突变位点的基因符号的表示方法与染色体上突变基因座、突变位点的符号相同。 5、对于携带附加体的菌株的完整基因型描述应包括附加体的状态（游离或整合）。以F因子为例，F-:F因子缺失；F+:自主性F因子，不携带任何遗传可识别染色体片段；F':携带有遗传可识别细菌染色体片段的自主性F因子；Hfr:整合到染色体上的F因子（high frequency of recombination）。当这些质粒或噬菌体片段变异或缺失时，用（）“或”/“等以区别。例如：/F' [traD3 6、proAB、lac I q、lacZ. M 15] 6、某个基因或某个领域缺失时，在其基因型前面加上“ ”表示。例如：lac-proAB基因缺失时它的基因型表示为（lac-proAB）。 7、由于某种基因的变异导致大肠杆菌可以明显观察到特征变化，有时也用其表现型代替基因型进行表示。例如：某些抗药性的获得或丧失，用如下方式表示：Streptomycin抗性→Str +或Str r，Ampicilli n敏感性→ Amp-。（第一个字母要大写，“+”或“r”表示有抗性，“-”表示无抗性或敏感）。 8、根据某些特异性蛋白的变异及其导致的结果变化进行表示。例如：TH2菌株上有一种基因型表示如下：hsdS20 （rB-、mB-），其中S20代表特异性识别蛋白发生变异，（）中的rB-、mB-表示由于 S20的变异而导致B株来源的hsdR和hsdM的功能缺失。 9、蛋白质的名称与对应的基因或等位基因相同，但不用斜体，且首字母大写，如，UvrA、UvrB。二、基因符号和意义（见表1）

大肠杆菌表达系统的研究进展综述

基因工程制药综述班级：生技132 ：学号：

大肠杆菌表达系统的研究进展综述自上世纪 70 年代以来, 大肠杆菌一直是基因工程中应用最为广泛的表达系统。尽管基因工程表达系统已经从大肠杆菌扩大到酵母、昆虫、植物及哺乳动物细胞,并且近年来出现了很多新型的真核表达系统, 但是大肠杆菌仍然是基因表达的重要工具。尤其是进入后基因组时代以来, 有关蛋白结构以及功能研究的开展 ,对基因表达的要求更高,这时大肠杆菌往往是表达的第一选择。文章综述了近年来有关大肠杆菌表达载体及宿主细胞的改造工作。 1 表达载体 1. 1 表达调控构建有效的表达载体是表达目的基因的基本要求, 同时也是影响基因表达水平以及蛋白活性的重要因素。标准的大肠杆菌表达载体的主要组成: 启动子、操纵子、核糖体结合位点、翻译起始区、多克隆位点、终止子、复制起点以及抗性筛选因子等。理想的表达载体要求在转录和翻译水平上可以控制目的基因的表达 ,然而目的基因在宿主体过分表达(选用较强的启动子等)会对宿主造成压力, 引起相关的细胞应答反应, 影响蛋白的活性等。基因组、RNA 转录组、蛋白质组、代调控组等领域的研究成果给我们提供了大量关于基因表达调控的信息[ 1]。现已能从基因和细胞的整体水平来方便地选择合适的启动子或合理开发新的载体系统。譬如 Lee 等利用二维凝胶电泳法比较了重组载体和空载体被分别转入宿主细胞后蛋白组学的差异,发现两者都产生了大肠杆菌热休克蛋白并引起了 cAMPCRP 调节蛋白的应答, 其中重组子的影响更为强烈；另外, 还发现外源基因的表达使宿主核糖体合成速率、翻译延长因子和折叠酶表达水平、细胞生长率下降 , 而使细胞呼吸活力上升[ 2]。目前应用的表达载体主要问题是表达过程中出现的全或无的情况, 通常表达的培养物都是非纯种的细胞群, 其中有一些细胞可以最大限度地被诱导,而另一些细胞在诱导后基因的表达被关闭。分离具有合适强度启动子及翻译速率的载体变种可以优化表达水平,说明启动子的选择对于基因的诱导表达非常重要。 Deborahat 提出在芯片上排列具有不同强度级别启动子的载体进行互补分析, 可能有助于筛选最为适合的启动子[3]。开发非 IPTG 或阿拉伯糖诱导的载体也可以提高基因表达水平, Qing 等利用 cspA 基因的独特性开发了一系列冷休克表达载体pCold, 使目的基因在低温下(<15℃) 诱导表达,提高了产物的溶解性和稳定性[4]。 1. 2 融合表达载体除了表达载体的调控性,为了提高蛋白产物的活性以及简化下游纯化的操作等 ,往往在表达载体上插入其它辅助的基因序列与目的基因构成融合蛋白表达。融合信号肽(PelB、Om pA 、MalE、PhoA 等)表达可以使融合蛋白通过经典的 Sec 途径分泌到周质或胞外表达, 有利于形成二硫键以及避免胞质蛋白酶的水解和 N 端甲硫氨酸的延伸。另外,最近开发的双精氨酸转运体系(Tat)可以有效分泌正确折叠的重组蛋白[5]。常见的纯化标签多根据亲和层

大肠杆菌病得常用药物

禽大肠杆菌病就是由埃希氏大肠杆菌得某些致病性菌株引起得多种疾病总称,包括大肠杆菌性败血症、肠炎、脐带炎、肝周炎、心包炎、腹膜炎、全眼球炎、卵黄性腹膜炎、输卵管炎、滑膜炎、关节炎、肉芽肿等,并能导致胚胎与幼雏死亡。由于大肠杆菌血清型复杂,给免疫防治带来一定得困难,药物防治仍就是控制禽大肠杆菌病得主要手段。yz、ag365yz、ag365 本文就防治禽大肠杆菌病得常用药物作一简述。yz、ag365yz、ag365

一、β-内酰胺类抗生素yz、ag365yz、ag365 β-内酰胺类抗生素为化学结构中含有β-内酰胺环一类抗生素,主要包括青霉素类、头孢菌素类、β－内酰胺酶抑制剂。抗病作用机理均为抑制细胞壁得合成。yz、ag365yz、ag365 1、青霉素类。防治禽大肠杆菌病得青霉素类抗生素主要为半合成广谱抗生素氨苄西林、阿莫西林。氨苄西林、阿莫西林均耐酸、不耐酶,内服或肌注易吸收。阿莫西林耐

酸较氨苄西林强,该药抗菌谱广,杀菌力强,作用迅速,阿莫西林得血清浓度比氨苄西林高1、5-3倍。阿莫西林对大肠杆菌有较强得抗菌作用,其体外抗菌谱等同于氨苄西林,但体内效果则增强2-3倍。yz、ag365yz、ag365 用法与用量:⑴氨苄西林:内服一次量为每千克体重10毫升或肌注为一次量每千克体重10毫升,1日2-3次。⑵阿莫西林:内服一次量为每千克体重10-15毫升,1日2次。yz、ag365yz、ag365

2、头孢菌素类。为广谱半合成抗生素,具杀菌力强、抗菌谱广、毒性小、对酸与β-内酰胺酶比青霉素类稳定等优点,第三、四代头孢菌素对大肠杆菌具有较强得抗菌作用,因较贵而多用于宠物、种畜禽及贵重动物。临床上应用得有头孢噻呋、头孢噻肟、头孢唑肟、头孢曲松、头孢哌酮、头孢她啶、头孢吡肟。yz、ag365yz、ag365 头孢噻呋就是美国普强于80年代开发成功得兽医专用第三代头孢菌素,该药1998年在美国首次上市。头孢噻呋抗菌谱广,抗菌活性强,对G+菌、G-菌及一些厌氧菌有很强

pET-48b(+)大肠杆菌表达载体说明

pET-48b(+) 编号载体名称北京华越洋生物VECT4670 pET--‐48b(+) pET48b载体基本信息别名: pET48b, p ET 48b 质粒类型: 大肠杆菌蛋白表达表达水平: 高克隆方法: 多克隆位点，限制性内切酶载体大小: 5605 b p 5' 测序引物序列: T7: 5'--‐TAATACGACTCACTATAGGG--‐3'; Trx--‐F: 5'--‐TTCCTCGACGCTAACCTG--‐3' 3' 测序引物序列: T7t: 5'--‐TGCTAGTTATTGCTCAGCGG--‐3' 载体标签: N--‐Trx, N--‐His,N--‐HRV 3C, C--‐S, C--‐Thrombin 载体抗性: Kanamycin (卡那霉素) 备注: Same as pET47 but also has Nterm Trx Tag; contains HRV 3C Protease cleavage site for fusion tag removal at low temperatures; Cterm thrombin c leavage s ite. 稳定性: 瞬时表达组成型: 组成型病毒/非病毒: 非病毒 pET48b载体质粒图谱和多克隆位点信息

pET48b载体简介 pET--‐48b载体含有N端Trx和His标签，在标签后面紧跟着的是HRV 3C蛋白酶切位点。HRV 3C蛋白酶能够高特异性的识别LEVLFQ↓GP蛋白序列，能够在低温下高效切割掉融合标签序列。pET--‐48b载体还含有一个可选择的C端Thrombin蛋白酶切位点，紧接着位点后是S标签。 pET48b载体的单一的多克隆位点见上面的环状质粒图谱。注意：载体序列是以pBR322质粒的编码规矩进行编码的，所以T7蛋白表达区在质粒图谱上面是反向的。 T7 RNA聚合酶启动的克隆和表达区域在质粒图谱中也被标注了出来。质粒的F1复制子是被定向的，所以在T7噬菌体聚合酶的作用下，包含有蛋白编码序列的病毒粒子能够