细胞工程复习
绪论
1、RNAi：RNA Interference，RNA干扰:是指由特定双链RNA参与指导的，以外源和内源mRNA为降解目标的转录后基因沉默现象。
2、embryonic stem cell 胚胎干细胞
3、HIV：human immunodeficiency virus，人类获得性免疫缺陷病毒。
4、GFP：green fluorescent protein，绿色萤光蛋白，这种蛋白质最早是在水母中发现，其基因所产生的蛋白质会发出绿色荧光。在生物学领域中，绿色萤光蛋白基因常被用作为一个报告基因(reporter gene)。
思考题:
1）简介2005-2010年诺贝尔生理医学奖及2008年诺贝尔化学奖奖。
2005年Barry J. Marshall 和J. Robin Warren 获诺贝尔生理与医学奖，他们发现幽门螺杆菌及其在胃炎和胃溃疡方面的作用。
2006年Andrew Fire和Craig Mello诺贝尔医学奖RNA干扰:研究历史、作用机制和应用2007年生理学或医学奖诺贝尔奖美国犹他大学Eccles 人类遗传学研究所科学家Mario R. Capecchi 、美国北卡罗来纳州大学教会山分校医学院教授Oliver Smithies 与英国科学家卡迪夫大学卡迪夫生命科学学院Martin J. Evans因胚胎干细胞和基因打靶研究获得此奖项。2008年诺贝尔生理学或医学奖德国海德堡癌症研究中心的科学家哈拉尔德·祖尔·豪森（Harald zur Hausen）[发现了导致宫颈癌的人类乳头状瘤病毒（papilloma virus，HPV ）]、法国巴黎巴斯德研究所病毒学部的弗朗索瓦丝·巴蕾-西诺希（Fran?oise Barré-Sinoussi）及巴黎世界艾滋病研究和防治基金会的卢茨·蒙塔尼耶（Luc Montagnier）[弗朗索瓦丝·巴蕾-西诺希和卢茨·蒙塔尼耶则因为发现人类免疫缺陷病毒（HIV，即艾滋病毒）]分享了本年度的诺贝尔奖。
2008年诺贝尔化学奖日本科学家下村修、美国科学家马丁·沙尔菲和美籍华裔科学家钱永健获得2008年的诺贝尔化学奖。发现和研究绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）2008年美国科学家培育出世界首只能“发光”的猫
2009年端粒和端粒酶
2010年诺贝尔生理学或医学奖“试管婴儿之父”的英国科学家罗伯特?爱德华兹，因“在体外受精技术方面的贡献”而被授予该奖项。
2）请收集资料，简介湖州师范学院生命科学学院生物系各位老师，包括姓名、专业、研究方向、毕业院校、所获基金资助等。
第1-3章细胞工程技术基础
FISH （fluorescent in situ hybridization. 荧光原位杂交）is a relatively new technology utilizing
labeled DNA probes to detect or confirm gene or chromosome abnormalities that are generally beyond the resolution of routine Cytogenetics.
思考题：
1、动物细胞工程实验室的常用设备有哪些？
培养箱离心机显微操作仪细胞融合仪冷冻存储设备（冰箱、液氮罐）培养用器皿手术器械
2、为什么观察培养的动物细胞常用倒置显微镜？
倒置显微镜可以从培养皿的下方检查培养物，减少观察时对细胞生长的影响。
3、细胞培养实验有哪些物理消毒法?
1）紫外线消毒2）电离辐射消毒3）湿热消毒4）干热消毒5）过滤除菌
4、如何检测培养细胞的生长状况？
1）细胞计数法2）细胞生长曲线3）细胞分裂指数4）细胞贴壁率5）细胞周期6）MTT比色法测定细胞活率
5、简介培养细胞活率检测常用方法
1）染料排除检测法
普通光学染料：台盼兰(trypan blue)、伊红Y (eosin Y)
荧光染料：碘化丙锭(propidium iodide，PI)、Hoechst 33258、溴化乙锭(ethidium bromide, EB)、Hoechst 33342 （H342）。PI /H342为我校细胞工程研究所常用方法。
2）MTT比色法测定细胞活率
活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶干水的蓝紫色产物，并沉淀在细胞中，而死细胞没有这种功能。二甲亚砜（DMSO）能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物，再用酶标仪测定OD值。
6、简介细胞培养中支原体污染的检测方法
1）相差显微镜观察法
2）直接培养法
原理：直接培养支原体于培养基中，观察其生长及菌落生成。
特点：是目前最直接与灵敏之步骤，亦是用来评估其它侦测新步骤的标准
步骤。
缺点：培养时间长，须3-5星期才能判断。有些支原体不能在培养基培养出来。需同时培养支原体株作为正反应对照组，可能会造成污染。
3）DNA荧光染色法
原理︰利用荧光染剂（bisbenzimide, Hoechst 33258）检测支原体污染。此染剂会结合到DNA 之富含A-T区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而检测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之荧光小点，即为支原体之DNA，证明有支原体之污染。
特点：简单、经济与灵敏，广泛使用，可作为例行之侦测步骤。可以侦测不易培养之支原体，较直接培养法快，约一星期即可知道结果。
缺点：有时仍会有荧光背景，影响判读。
4）分子生物学方法：① PCR方法②荧光原位杂交（FISH）
第4章细胞培养
1、体外培养细胞在支持物上贴附生长时的形态：1）成纤维细胞型2）上皮细胞型3）游走
细胞型4)多行型细胞
2、Contact Inhibition：细胞相互接触后，如培养的是正常细胞，由于细胞的相互接触能抑制细胞的运动，这种现象称接触抑制。
3、细胞培养常用的缓冲液：PBS磷酸盐缓冲液，Phosphate buffered saline（abbreviated PBS）
4、细胞培养常用的消化液：胰酶（Trypsin）溶液和EDTA溶液，有时胶原酶（collagenase）溶液
5、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)
6、血清的主要作用：（1）提供基本营养物质；（2）提供激素和各种生长因子；（3）提供结合蛋白；（4）提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤；（5）对培养中的细胞起到某些保护作用：血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。
7、NIH3T3：美国国立卫生研究院（National Institute of Health）建立；每3天传代，每次接种3×105细胞/毫升
8、A TCC：American Type Culture Collection 美国A TCC菌种保藏中心
9、Barr body：在哺乳动物体细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体常浓缩成染色较深的染色质体，此即为巴氏小体，又称X小体，通常位于间期核膜边缘。
10、Primary Culture：原代培养，即初次培养，即从供体获取组织后的首次培养。
简答题：
1、根据形态特征，简介体外培养动物细胞的类型？
（1）贴壁型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。
（2）悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态即可生长的细胞。
2、简介正常动物细胞培养的典型特征？
（1）核型（染色体）正常，表明没有明显的基因改变
（2）细胞的传代次数大约在50代左右，有限的寿命反应了细胞的生长调节
（3）细胞无恶性，表现在将该细胞注入免疫抑制动物不能形成肿瘤；
（4）贴壁依赖、接触抑制和密度抑制表明其增殖受到抑制，当细胞在介质表面生长至汇合单层时增殖就停止。
3、动物细胞培养经常要添加血清，请简单介绍血清的主要作用和缺点。
主要作用：（1）提供基本营养物质（2）提供激素和各种生长因子（3）提供结合蛋白（4）提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤。（5）对培养中的细胞起到某些保护作用：血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。这种作用是偶然发现的，现在则有目的的使用血清来终止胰蛋白酶的消化作用。
缺点：（1）对大多数细胞，在体内状态，血清不是它们接触的生理学液体，只是在损伤愈合以及血液凝固过程中才接触血清，因此使用血清有可能改变某种细胞在体内的正常状态，血清可能促进某些细胞的生长（成纤维细胞）同时抑制另一类细胞生长（表皮细胞）。（2）血清含一些对细胞产生毒性的物质（3）动物个体不同，血清产地、批号不同，每批质量差异甚大。（4）取材中可能带入支原体、病毒，对细胞产生潜在影响，可能导致实验失败或结果不可靠。（5）血清的使用使得实验和生产的标准化困难，其中的蛋白质使得某些转基因药物蛋白分离纯化很难完成。（6）大规模生产中，血清来源越来越困难，价格昂贵，是构成动物细胞培养对生产成本的主要部分之一。
4、简介鸡胚胎成纤维细胞的原代培养方法
1）取9-11日龄的鸡胚，用酒精消毒，在超净工作台内，小心取出鸡胚，放在培养皿中，除去头尾、四肢及内脏；
2）胚体用含双抗PBS冲洗2~3次，切成1~2mm3的小块，然后转入容积适量大小的三角瓶
内（或试管、烧杯）；
3）按每个鸡胚加入约5mL的EDTA-胰酶消化液，在室温下消化10 min；
4）小牛血清终止消化，收集细胞悬液，没有消化完全的组织块可再消化一次；
5）收集到的细胞悬液经100目过滤筛过滤，1000 rpm离心5 min，弃上清；
6）细胞沉淀用DMEM培养液重新悬浮，取出少量细胞悬液台盼蓝染色，计算细胞活力；7）以5×105个/mL的密度接种到培养瓶中（30mL细胞液/鸡胚），于38.5℃、5%CO2浓度、饱和湿度条件下培养。
5、简介鸡胚胎成纤维细胞的传代培养方法
1）原代培养的细胞铺满瓶底时（约2天），即可进行传代；
2）吸出原培养液，然后用PBS清洗细胞2~3次，尽量除去残余的血清；
3）加入0.2 mL的消化液进行消化，消化程度可在倒置显微镜下观察，一般以细胞突起缩回、细胞间间隙增大、细胞近乎缩成圆形为度；
4）吸出消化液，加入适量的含小牛血清的培养液，反复轻轻吹打培养瓶底部，使经消化的细胞脱离瓶底并分散为单个细胞；
5）收集细胞悬液，1000 rpm离心5 min，弃上清；
6）用培养液重新悬浮细胞并计算细胞活力和密度，以5×105个/mL密度（1：3）接种到培养瓶中，于38.5℃、5% CO2浓度、饱和湿度条件下培养。
6、简介贴壁培养细胞的冷冻保存与复苏方法
冷冻保存：
1）酶解贴壁细胞，尽可能温和，使对细胞的损伤减少到最小。
2）在完全生长培养基中，再次悬浮分离细胞，确定有活力细胞数。
3）以大约1000 rpm离心5分钟沉淀细胞。使用移液管移去上清到最小体积，不要搅乱细胞。
4）以5×106到1×107细胞/ml密度，在冻存液中悬浮细胞。
5）分装进冻存管，将冻存管置于湿的冰上或放入4℃冰箱中１小时。
6）细胞以1℃/分钟进行冷冻，可以通过可编程序的冷冻器进行或者把隔离盒中的冻存管放到-80℃的冰箱中过夜，然后转移到液氮中长期贮存。
细胞复苏方法：（1）从液氮中取出冷冻管，迅速投入37 ℃水浴中，使其融化（1分钟左右）；
（2）5分钟内用培养液稀释至原体积的10倍以上；
（3）低速离心10分钟；
（4）去上清，加新鲜培养液培养刚复苏的细胞。
第5章单克隆抗体
1 单克隆抗体的原理：单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的与单一抗原决定簇结合的抗体。McAb：Monoclonal Antibody
2、鼠源单抗临床应用的障碍
血清半衰期短，20h
抗原抗体结合力、亲和力不够
募集效应细胞产生副作用
HAMA反应：8－10天出现，20－30天高峰, 加速单抗清除。
过敏休克
3、HAMA反应：Human Anti-Mouse Antibodies 人抗鼠抗体
4、SCID: severe combined immunodeficiency mouse重症联合免疫缺陷小鼠，既无有功能的T 细胞也无B细胞的小鼠,对异源移植物不产生任何排斥反应,可以作为良好的载体系统用于医
学及生物学各个领域的研究,但极易感染病菌,饲养和操作管理十分复杂。
思考题：
1、简介鼠源性单克隆抗体制备的原理，并绘图说明其操作流程
原理：单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的与单一抗原决定簇结合的抗体。
2、简介单克隆抗体的应用
（一）用作诊断试剂
①检测淋巴细胞表面分子，区分不同分化阶段的淋巴细胞，鉴别淋巴细胞。
②鉴定病原体，准确诊断传染病。
③用于肿瘤的诊断和分型。
④激素类单抗用于测定体内激素含量，判断内分泌的功能状态。
（二）用作研究工具
①纯化抗原
②分析和探查抗原结构
③分析抗原决定簇分子的功能
（三）用于疾病的治疗①抗细胞表面分子单抗，用于移植排斥反应的防治
②抗细胞因子单抗用于自身免疫性疾病的治疗
③抗肿瘤单抗用于肿瘤的导向治疗
3、为什么要对鼠源性单克隆抗体进行改造使之人源化，改造的方法有那些？
原因：HAMA反应对鼠源的单抗分子有着较强的破坏作用，严重影响了鼠源单抗在人体内的功效，所以非常有必要改进鼠源单抗。
改造方法：1）人-鼠杂交瘤单克隆抗体2）人-人杂交瘤单克隆抗体3）EB 病毒转化-融合技术4）转基因动物制备单克隆抗体5）重症联合免疫缺陷小鼠制备单克隆抗体
4、查阅资料，简介单抗最新研究进展
第6章胚胎工程
1、原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs) :精原干细胞（Testis精巢）；卵母细胞（Ovary 卵巢）
2、spermatogenesis：精子发生，从精原干细胞(spermatogonial stem cells, SSCs) 到形成高度分化和特异精子的极其复杂的细胞分化过程，由精原干细胞的增殖分化、减数分裂和精子形成三个阶段组成。（64天→3个月）
3、受精过程：
（1）受精（fertilization）：精子和卵子融合而成为受精卵的过程
（2）精子获能（sperm capacitation）：精子刚排出时是不能与卵受精的，需要在雌性生殖道中孵育一段时间，使覆盖在其表面的精浆蛋白被去除才能获得受精能力，这种现象称为精子获能，精子获能也可在体外进行。
4、顶体反应：当获能的精子与卵子相遇时，覆盖于精子顶体表面的细胞膜与顶体外膜融合，并释放出多种酶系，这一过程称为顶体反应（acrosome reaction）（哺乳动物；体外受精的鱼
类无顶体）
4、IVF：In Vitro Fertilization，体外受精是指哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。（试管婴儿2010）
5、PGCs：Primordial germ cells，原始生殖细胞，指能发育为精子或卵子的祖先细胞。
6、ICSI: Intra cytoplasmic sperm injection，卵母细胞胞浆内单精子显微注射，又称“第二代试管婴儿”，是在体外受精-胚胎移植基础上发展起来的显微受精技术，通过直接将精子注射入卵母细胞胞浆内，来达到助孕目的。
7、TDF：testis determining facter,睾丸决定因子，哺乳动物的Ｙ染色体上的一个性别的遗传控制因子。
思考题：
1、简要介绍人类不育症的可能原因及相应的辅助生殖技术。
从女方来看：最常见的病因是不排卵，它可以由生理、病理和内分泌失调等原因引起的。其次，盆腔炎性病变，其中有20%~40%盆腔炎可导致输卵管堵塞、损伤、而不能受孕。第三，女性生殖道产生可以杀死精子的抗体。第四，由于染色体异常、黄体期缺陷等，或尚不清楚的原因引起的。
辅助生殖技术：体外受精（试管婴儿）
从男方来看：男方方面最重要的原因是不能提供足够数量、健康的精子。男性精液质量随不同年代呈明显降低。
辅助生殖技术：人工授精
2、就自己所学知识试阐述哺乳动物胚胎工程的主要技术及其应用价值。
主要技术：（1）人工授精（2）体外受精（试管婴儿）（3）单精注射(显微受精)
胚胎工程的研究意义：
家畜繁殖:巨大的经济效益
人类不孕症的治疗
医学、制药业
保护珍稀动物和挽救濒临灭绝的野生动物
基础理论研究
3、简要介绍哺乳动物性别控制的主要方法及意义。
（1）胚胎性别鉴定
①细胞学方法
②生化微量分析法--→与X相关的酶
③免疫学方法
a, 细胞毒性分析法
b,间接免疫荧光法
c,胚囊形成抑制法
④分子生物学方法
（2）X、Y-精子分选
性别控制的意义：1）遗传疾病的预防2）提高生产效率
4、举例说明在辅助生殖领域中存在哪些生物伦理学问题，谈谈你对这些问题的看法。主要是异源授精问题，即使用的精子并非来源于丈夫。
1）割裂了生儿育女与传统婚姻的纽带
2）导致近亲繁殖的危险
3）精子的商品化
4）优生工程有喜有忧
5）谁是孩子的父亲？
5、查阅资料，简介胚胎工程最新研究进展
第7章肝细胞与组织工程
1、胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES细胞）
2、四个基本问题:
（1）什么是ES细胞？（定义）胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES细胞）
是从早期胚胎内细胞团(或生殖脊)分离，并经体外抑制分化培养所获得的干细胞。
囊胚blastocyst→ES
这些细胞能在体外进行长期培养增殖，且保持高度未分化状态和正常二倍体核型，具有发育的全能性，能分化出成体的所有种类的细胞（组织和器官），包括生殖细胞。
胎儿：原始生殖细胞→胚胎生殖细胞（embryonic germ cells, EG细胞）
（2）如何分离培养ES细胞（建系）
分离囊胚的内细胞群
与饲养层细胞共培养，ES细胞非分化增殖→胚胎干细胞的鉴定分离胚胎生殖脊细胞
→定向诱导分化→前体细胞→功能细胞。
（3）如何鉴定ES细胞？
①细胞形态特征、取材部位②细胞表面的特殊标志③细胞内干细胞标志基因的表达④端
粒酶⑤核型分析⑥分化潜能体内分化
体外分化
嵌合体:小鼠胚胎干细胞已经制备嵌合体（4）ES细胞有何应用价值？研究哺乳动物个体发生发育规律；研究细胞分化；研究基因功能；生产转基因动物；疾病治疗与治疗性克隆；研究细胞癌变机理及新
药物的筛选
3、诱导性多能干细胞(iPS cells)
2006年，Takahashi等通过巧妙的实验设计，从24 个候基因中筛选出4 个与胚胎干细胞多能性更为密切相关的基因––Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4，并将它们导入到小鼠胚胎成纤维细胞和鼠尾成纤维细胞，成功地将其重编程为具有胚胎干细胞多能性的细胞––诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell, iPS cell)
iPS cells是被重新编程从而进入一个类似胚胎干细胞状态的体细胞。
4、HSCs：hematopoietic stem cells，造血干细胞是从血液、骨髓、脐带血来源一群原始造血细胞，能自我更新、能分化成一些具有组织特化的细胞、能从骨髓中游离出来进入血液循环、能发生程序性死亡的细胞。
5、HSCT：hematopoietic stem cell trans-plantation，是给予患者进行大剂量放化疗或其他免疫抑制剂等预处理，清除患者体内的肿瘤细胞、恶性克隆细胞或异常造血干细胞，然后移植正常的异体或自体造血干细胞，重建正常的造血和免疫功能，从而达到治疗的目的。
6、MSC：Mesenchymal Stem Cell，是干细胞的一种，因能分化为间质组织而得名，具有亚全能分化潜能，在特定的体内外环境下，能够诱导分化成为多种组织细胞。间充质干细胞具有干细胞的共性，即自我更新、多向分化和归巢的能力。
7、SSCs：spermatogonial stem cells，精原干细胞，位于睾丸生精小管基膜上，是永久分化成精子细胞的克隆源，既可以自我更新生成新的干细胞，又可以增殖分化形成各阶段的生精细胞直至成熟的精子。
8、Tissue Engineering：组织工程，应用生命科学和工程学的原理和方法，研究、开发用于组织和器官修复、替换或增进其功能的生物替代品的一门学科。
问答：
1、什么是胚胎干细胞，有何应用价值？
是从早期胚胎内细胞团(或生殖脊)分离，并经体外抑制分化培养所获得的干细胞。
应用价值：
①研究哺乳动物个体发生发育规律
②研究细胞分化
③研究基因功能
④生产转基因动物
⑤疾病治疗与治疗性克隆
⑥研究细胞癌变机理及新药物的筛选
2、什么是诱导多能干细胞，有何应用前景？
iPS cells是被重新编程从而进入一个类似胚胎干细胞状态的体细胞。
应用前景：
①建立疾病模型
②研究人类发育生物学及新基因的发现
③自体干细胞移植
④新药发现及筛选
3、如何进行胚胎干细胞的建系？
分离囊胚的内细胞群
与饲养层细胞共培养，ES细胞非分化增殖→
分离胚胎生殖脊细胞
胚胎干细胞的鉴定→定向诱导分化→前体细胞→功能细胞。
4、什么是造血干细胞，有何应用价值？
造血干细胞是从血液、骨髓、脐带血来源一群原始造血细胞，能自我更新、能分化成一些具有组织特化的细胞、能从骨髓中游离出来进入血液循环、能发生程序性死亡的细胞。
应用价值：可治疗肿瘤性疾病，如:白血病,某些恶性实体瘤等,以及非肿瘤性疾病，如:再生障碍性贫血,重症免疫缺陷病,急性放射病，地中海贫血等。
目前，对造血干细胞的研究又有一些新突破，如对重症天疱疮严重并发症(双侧股骨头无菌性坏死)以及重症肌无力等疾病的患者治疗。
5什么是精原干细胞，有何应用前景？
位于睾丸生精小管基膜上，是永久分化成精子细胞的克隆源，既可以自我更新生成新的干细胞，又可以增殖分化形成各阶段的生精细胞直至成熟的精子。
应用前景：①雄性不育治疗
②转基因动物生产
③遗传资源保护
④干细胞研究模型
⑤定向分化
＊讨论题：就自己所学知识，试论述如何利用细胞工程的原理和技术，解决人类疾病治疗中所面临的难题。
第8章核移植技术与动物克隆
1、Reproductive cloning ：生殖性克隆。
2、Therapeutic cloning：治疗性克隆，将病人自身体细胞的细胞核移植到去核的卵母细胞内形成重构胚，从重构胚中分离出ES细胞，再将ES细胞定向分化为所需要的细胞进行移植治疗。
思考题：
1、绘图描述多莉羊的培育过程(核移植技术操作流程)
2、简介体细胞核移植技术的应用（polly，核基因移植的转基因动物）
制备转基因克隆动物，进行药物生产
培育优良品种，扩大良种种群
异种克隆，拯救濒危动物
治疗性克隆
培育各种实验动物(新加)
基础理论研究
3、支持还是反对克隆人？理由是什么？如何避免克隆技术被滥用？(课堂讨论)
4、中国克隆猪的研究（查找资料）
第9章转基因动物与动物生物反应器名词解释：
1、Gene targeting：基因打靶，是一种在胚胎干细胞(ES)技术和同源重组技术的基础之上,定向改变生物活体遗传信息的实验手段。
2、mammary gland bioreactor:乳腺生物反应器，利用动物乳腺生产高价值产品的方式。
思考题：
1、简介转基因动物技术的应用
（1）动物品种改良；
（2）生物制药(乳腺生物反应器)；
（3）建立人类疾病的动物模型；
（4）生产可移植用的动物器官；
（5）基因治疗(动物模型)；
（6）基因打靶。
2、简介转基因哺乳动物的制备方法
（1）显微注射法
（2）逆转录病毒载体感染
（3）精子载体介导法
（4）胚胎干细胞介导法
（5）体细胞克隆技术
（6）精原干细胞介导法
3、请阐述胚胎干细胞途径的基因打靶的基本原理及实验流程
首先获得ES细胞系，利用同源重组技术获得带有研究者预先设计突变的中靶ES细胞。通过显微注射将经过遗传修饰的ES细胞引入受体胚胎内。经过遗传修饰的ES细胞仍然保持分化的全能性，可以发育为嵌合体动物的生殖细胞，使得经过修饰的遗传信息经生殖系遗传。
第10章动物染色体工程
名词解释：
1、gynogenesis：雌核发育，指精子虽然能正常地钻入卵子中并激活卵子，但精子的细胞核并未参与卵球的发育，胚胎的发育仅在母体遗传物质的控制下进行。
2、androgenesis：雄核发育，用经过紫外线、X线或ｒ线处理的卵子与正常的精子受精，再在适当时间施以冷、热或高压等物理处理，使进入卵子内的精子染色体加倍，而发育成完全为父本性状的二倍体。
3、artificial chromosome：人工染色体，人工构建的含有复制起始点、着丝粒和端粒三个关键序列的载体系统。包括酵母人工染色体（yeast artificial chromosome, Y AC）；细菌人工染色体（bacterial artificial chromosome, BAC）；哺乳类人工染色体（mammalian artificial chromosome, MAC）
思考题
上海交大细胞工程期末试题2008b
一、选择题（每题1分，共计12分） 1、体外培养in vitro包括那三个层次（ABD）。 A细胞培养B组织培养 C大规模培养D器官培养 2、现在一般皆公认（B）为“组织培养之父”动物细胞培养的奠基人，因为他的实 验表明，为细菌学家早已应用的凹玻片悬滴制备细胞培养技术，不仅可以维持组织上体外生长数周，而且是一种能对生物学知识做出十分重要贡献的研究方法。 A Wilhelm Roux B Ross Granville Harrison C M.T.Burrows D Alexis Carrel E W.H.Lewis 3、培养的哺乳动物细胞一定要防止污染，特别是生物学污染，常见的生物学污染主要 是（ABC）。 A真菌B细菌C支原体 D炭疽菌E放线菌F病毒 4、在每一次传代培养过程中，培养物将首先被蛋白酶消化而被制备成细胞悬液，再用 于种植。种植后的细胞都要经历相似的恢复和生长过程。根据每一次传代培养的细胞生长变化的过程，习惯上把每一代细胞的生长过程分为（ABC）三个阶段。 A潜伏期B指数生长期C停滞期 D衰退期E贴壁黏附期F铺展期 5、“生物导弹”是指（D）。 A单克隆抗体 B杂交瘤细胞 C产生特定抗体的B淋巴细胞 D在单抗上连接抗癌药物
6、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（D）。 A容易产生各种变异B具有更强的全能性 C取材十分方便D分裂增殖的能力强 7、对细胞全能性的表述正确的是（D）。 A非离体植物细胞能够表现全能性 B动物细胞融合标志着动物细胞全能性的实现 C单克隆抗体的制备原理依据是细胞的全能性 D花粉可培育成单倍体，是细胞全能性的体现 E受精卵发育到囊胚阶段的内细胞团具有完全的细胞全能性 8、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（A）。 A经过免疫的B淋巴细胞 B没经过免疫的T淋巴细胞 C经过免疫的T淋巴细胞 D没经过免疫的Ｂ淋巴细胞 9、引起大规模细胞培养过程中的细胞凋亡的主要直接因素有哪些？（ABC） A有毒物质或抑制因子产生B营养成分耗尽 C其他物理因素D细胞遗传物质突变 10、大规模细胞培养方法比较多，大致可分为（ABC）。 A悬浮培养 B固定化培养 C载体培养法 D培养瓶培养 E96孔板培养
细胞工程复习题
细胞工程复习题 一、名词解释（每小题3分，共21分）1．酶工程： 2．继代培养 3．人工种子： 4．单倍体培养： 5．微细胞： 6．胚胎工程： 7．克隆： 8．蛋白质工程： 9．外植体： 10．动物细胞与组织培养： 11．组织工程： 12．雌核发育： 13．胚胎融合： 14．转基因动物： 15．生物化学工程： 16．愈伤组织： 17．看护培养： 18．细胞固定化： 19．染色体工程 20．细胞重组： 21．基因工程技术： 二、简答题 1．细胞工程的重要应用体现在哪些方面
2．何为植物细胞两相培养技术建立植物细胞的两相培养系统必须满足的条件是什么 3．动物细胞体外培养有哪些特点 4．动物器官培养技术中，传统的器官培养方法主要有哪些 5．什么是细胞核移植技术以鱼类细胞核移植为例，其技术要点有哪些方面6．植物组织培养与植物细胞培养有什么区别 7．何为细胞悬浮培养怎样做到悬浮培养细胞的同步化 8．动物细胞生物反应器培养生产的生物制品主要有哪些种类 9．什么是试管动物试管动物技术主要包括哪几个主要技术环节 10．何为体细胞克隆技术多莉羊是怎样培育出的 11．芦荟组织培养快速繁殖中，通过哪些途径可以得到完整的植株 12．人工种子利用有何优势 13．用于动物细胞与组织培养的生物反应器应具备哪些基本要求
14．何为胚胎移植主要包括哪些关键技术 15．转基因动物技术的应用主要体现在哪几个方面 三、论述题 1．请阐述单克隆抗体的制备过程 2．植物组织培养技术主要包括哪些环节各环节的主要工作内容有哪些 3．请阐述原生质的分离，纯化和活力鉴定的技术过程 四、计算题 μ和ppm浓度各是什么1．有一培养基的IAA浓度是1.5/ mg L，问其/ mol L （分子量） 2．培养基的配方是 2.0/0.5/ +++水解酪蛋白 MS BA mg L NAA mg L 500mg/L+3%蔗糖+%琼脂粉。MS母液的浓度分别是：大量元素10倍，微量元素100倍，铁盐100倍，有机物100倍；BA母液浓度ml，NAA母液浓度ml。要配制800ml 该培养基，需要吸取各种母液各多少ml分别称取蔗糖、琼脂粉各多少克 3．要配制1mol/L的 NaOH100ml, 要称取98%的固体NaOH多少克要配制1mol/L的HCl1000 ml,要量取浓HCl多少ml（NaOH分子量40，HCl分子量，浓HCl含量38%，比重） 五、填空题 1．生物工程操作的对象是什么这是与化学工程等其他工程类学科最明显的不同
细胞工程复习重点
思考题 1．细胞工程实验室的基本组成与要求是什么？ 一、实验室组成 1．基本实验室 ①准备室/化学实验室 功能：就是进行一切与实验有关的准备工作 要求：宽敞明亮，通风条件好，地面便于 清洁并应防滑处理。 ②接种室/无菌操作室 功能：是进行接种、继代、细胞融合等无 菌操作的场所。 要求：封闭性好，干燥清洁明亮，防止空 气对流。外应设缓冲室、更衣室。 防止微生物感染。 ③培养室 功能：是对接种到培养瓶的离体材料进行控制培养的场所。 要求：是要能控制光照和温度，应保持干燥和清洁，2．辅助实验室根据具体的实验需求而定。 细胞学实验室 生化分析室 摄影室及暗室 3. 移栽设施/温室 要求：配置人工光源并且能够控制室内温度，为 试管苗的正常生长提供适宜的环境。 2．外植体消毒的基本方法是什么？
3. 无菌操作在植物离体培养中的作用是什么？ 4. 配制培养基时，加入一定量的植物生长调节物质， 它们在离体培养过程中有哪些作用? 激素调控的一般规律是什么？ 植物激素或生长调节剂（ growth regulators）包 括： 生长素类（ auxin） 细胞分裂素类(cytokinin,CTK) 赤霉素类 (GA) 乙烯（ Eth) 脱落酸(ABA) 其中前三者为正向激素，后两者则为负向激素。 常用的主要有生长素类和细胞分裂素类两大类。 ①生长素类（ auxin）：在作用或结构上 类似于吲哚乙酸的一类物质的统称。生长素 是最早发现的植物激素。 作用：诱导愈伤组织形成，促进细胞的分裂和伸长，诱导根原基的发生和根系的生成，有调运养分的效应。使用浓度0.1～10mg/L。常用的生长素有: 吲哚乙酸 (IAA)、2， 4，二氯苯氧乙酸 (2,4-D) 吲哚丁酸 (IBA) 。 奈乙酸 (NAA)、 ②细胞分裂素类(cytokinin,CTK) ：是一类促进细 胞分裂的植物激素，细胞分裂素都为腺嘌呤的衍生物 作用：促进细胞分裂和分化，诱导不定芽的形成， 促进胚状体的发育，延缓组织的衰老，打破顶端 优势，有利于芽的增殖，常用于继代和增殖培养。 使用浓度0.1～10mg/L。 常用的细胞分裂素有： 激动素 (KT) 6-苄基腺嘌呤 (6-BA/BAP) 玉米素（ ZT） 异戊烯氨基嘌呤 (2-ip) 噻重氮苯基脲（ TDZ） 5. 常用的植物细胞培养基种类有哪些？各有什么特 点? MS培养基 无机盐含量较高，微量元素种类较全，浓度也高。其养分的数量和比例较合适，离子平衡性较好，具较强的缓冲能力，培养过程中较稳定，可满足植物的营养和生理需要。其中它的硝酸盐含量较其它培养基为高。 广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。有些培养基是由它演变而来的。 Ｎ6 培养基 ＫＮＯ3和（ＮＨ4） 2ＳＯ4 含量高，VB1含量高，不含钼。目前在国内已广泛应用于小麦、水稻及其它植物的花粉和花药培养和组织培养。 Ｂ5培养基 ＫＮＯ3含量高，有机物含量较高，但含有较低的铵，这可能对不少培养物的
[小学]南京师范大学生命科学学院2012年《细胞工程》期末重点总结
[ 小学] 南京师范大学生命科学学院2012 年《细胞工 程》期末重点总结 南京师范大学生命科学学院细胞工程期末重点一( 名词解释 发育阻滞: 体外受精的早期胚胎在体外发育过程中，往往会停滞在某一阶段不再发育，此现象称为发育阻滞。 胚胎移植: 也称受精卵移植、借腹怀胎，是指将良种母畜配种后，从其生殖道内取出受精卵后早期胚胎，移植到同种的、生理状态相同的母畜体内，使之继续发育称为新个体的技术。 组织工程: 指应用工程学和生命科学的原理和方法来研究开发用于修复或改善人体病损组织或器官的结构、功能的生物活性替代物的一门科学。人- 鼠嵌合抗体:就是用人源性抗体的一部分代替鼠源性抗体的一部分，使之保留对抗原的特异性，又具备与补体和细胞结合的功能，并减少异源性蛋白的抗原性。细胞融合: 在离体条件下，用人工方法将不同基因型的单细胞通过无性方式融合成一个杂合细胞的过程。 ES细胞： 即胚胎干细胞，将细胞团的细胞分离出来进行培养，在一定条件下这些细胞可在体外“无限期”地增值传代，同时还保留其全能性的细胞。乳腺生物反应器： 利用哺乳动物乳腺特异性表达的启动子元件构建转基因动物，指导外源基因在乳腺中表达，并从转基因动物的乳液中获得重组蛋白。 细胞全能性： 指细胞分裂分化后，仍具有形成完整有机体的潜能或特性。Ips（诱导性多能干细胞）:
利用病毒载体将四个转录因子（Oct4,Sox2,Klf4,c-Myc）的组合转入分化的体细胞中，使其重编程而得到的类似胚胎干细胞的一种细胞类型。胚胎分割: 将一枚胚胎用显微手术的方法分割为二分、四分甚至八分胚，经体内或体外培养，然后移植入受体中，以得到同卵双生或同卵多生后代的技术。核移植: 利用显微操作技术，将某一特定细胞的核转移和嵌入另一细胞中的过程。 细胞系、细胞株: 细胞系是由原代培养经初步纯化。获得的以一种细胞为主的、能在体外长期生存的不均一的细胞群体。细胞系经过进一步的克隆化，便得到由单一细胞组成的细胞株。 二、问答题 1. 如何鉴定转基因动物, 1. 分子杂交 Southern 印迹杂交技术是通过探针和已结合于硝酸纤维素膜（或尼龙膜）上的经酶切、电泳分离的变性DNA链杂交，检测样品中是否存在目的DNA序列的方 法。该法不 仅灵敏而且准确, 因而广泛用于转基因阳性鼠的筛选和鉴定。当转入基因与内源基因组 DNA有较高同源性时，仍可用此法。，此法对样品的质量和纯度要求较高，操作烦琐, 费用 也较高。 2. 斑点杂交 通过直接将变性的待测DNA样品点在尼龙膜(或硝酸纤维素膜)等固体支持物上, 然后 和探针杂交，从而检测样品中是否存在目的DNA序列。根据点样方式一和样品点的形状不同可分为斑点杂交、狭缝杂交( slot blot hybridization) 、打点杂交(spot blot
细胞工程复习资料1
细胞工程知识点 第一章细胞工程 1、细胞工程：是指应用细胞生物学和分子生物学的原理和方法，通过某种工程学手段，在细胞整体水平或细胞器水 平，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或获得细胞产品的一门综合科学技术。 操作水平：细胞整体水平或细胞器水平。目的：定向改变遗传物质或获得细胞产品。理论基础：细胞全能性发酵工程目的：定向地改造菌种,大量生产微生物菌体或代谢产物。 2、重要应用：快速繁殖；种苗脱毒；动物胚胎工程快速繁殖优良/濒危品种；利用动植物细胞培养生产活性产物/药品（动物细胞融合---单克隆抗体；植物细胞大量培养----次生代谢产物）；新型动植物品种的培育；供医学器官修复或移植的组织工程；珍稀动植物资源的保存与保护 3、生物技术包括：基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程四个方面。 动物细胞工程包括：细胞培养技术（组织培养、器官培养）；细胞融合技术；胚胎工程技术（核移植、胚胎分割等）； 克隆技术（单细胞系克隆、器官克隆、个体克隆）。 植物细胞工程：植物组织/器官培养技术；细胞培养技术；原生质体融合与培养技术；亚细胞水平的操作技术等。 4、细胞工程与基因工程相比：前者是细胞水平或细胞器水平上生物技术，后者是分子水平上的生物技术。（如克隆多莉羊技术是细胞水平上的技术，培育抗虫棉是分子水平上的技术。）细胞工程是基因工程的基础 第三章细胞工程实验室及实验基本操作 1、实验室包括：基本操作室、无菌操作室、培养室、鉴定分析室、温室等。 实验室应满足清洗、无菌操作、培养基制备、贮藏和培养鉴定等多方面工作的要求。 基本操作室包括：洗涤间、灭菌间、贮藏间、培养基配制间。无菌操作室分为：缓冲准备区、接种区。 2、消毒灭菌的方法： 物理方法：干热(烘箱)、湿热、过滤（0.25微米）、紫外灯、超声波等。 化学方法：使用灭菌剂或抗菌素，如酒精、次氯酸钠、升汞、漂白粉、高锰酸钾、双氧水、福尔马林等 （1）干热灭菌：适用于玻璃器皿和金属器械的灭菌。（3）过滤除菌法：适用于一些培养基、酶液、血清等。（2）湿热灭菌：适用于各种器皿、培养基、器皿、蒸馏水、棉塞、纸等。121℃ 维持20~30min （4）射线灭菌：主要是利用紫外灯进行照射，适合实验室空气、操作台等，灭菌时间20-30min。 （5）火焰灼烧灭菌：用火焰灼烧达到灭菌目的，适用于接种器皿的灭菌。 （6）消毒剂：适用外植体、实验器皿、操作表面、皮肤等。 第二章(植物)细胞工程的理论基础 **1、生命特征属性包括：新陈代谢、应激性、自我复制。离体培养细胞可展现该物种的生命特性。 2、植物组织培养的类型 按材料的类别分：愈伤组织培养（最为常见的组织培养）；细胞培养（分为悬浮细胞培养和单细胞培养）； 器官培养（胚、胚乳、珠心、子房、根、茎、叶、花和幼果的部分组织的培养）；原生质体培养 按培养方法分为：固体培养；液体培养；看护培养；微室培养；包埋培养。按培养过程分：初代培养；继代培养。 3、植物细胞全能性表现强弱： 营养生长中心> 形成层> 薄壁细胞> 厚壁细胞(木质化细胞) > 特化细胞(筛管、导管细胞)；
细胞工程 期末考试复习题目
细胞工程期末考试复习题目 细胞工程填空：20个ⅹ分=10分选择：10个ⅹ2分=20分名词：10个ⅹ6分=30分简答：5个ⅹ6分=30分论述: 1个ⅹ10分=10分第一章绪论1、细胞工程的定义及特点？细胞工程：是指主要以细胞为对象，应用生命科学的理论，借助工程学原理与技术，有目的地利用或改造生物遗传性状，以获得特定的细胞，组织产品或新型物种的一门综合性科学技术。细胞工程的特点：前沿性：现代生物技术的热点争议性：新技术给伦理道德带来的冲击综合性：多学科交叉应用性：工程类课程，重在产品与技术第二章细胞培养的设施与基本条件：1、什么是细胞及组织培养？组织工程：习惯上繁殖所有的体外培养，即器官培养，组织培养和细胞培养的总称。其本
意是指从活的机体中去取出器官、组织或细胞，模拟机体内生理条件，在体外建立无菌、室温和一定营养条件等，使之生长和生存，并维持其结构和功能能的技术称为组织培养。细胞培养：将组织块用机械方法或酶解法分离成单个细胞，做成细胞悬液，再培养于固体基质上，成单层细胞生长，活在培养液中呈悬浮转肽培养的技术称为细胞培养。2、了解细胞培养实验室的基本规划及相关注意事项？实验室规划：⑴准备室：培养用具清洗、消毒和做实验准备的场所，一般建在通风和光线充足的地方。⑵缓冲间：保护操作室的无菌环境，避免空气对流。 ⑶操作间：要求无菌。最好设在阴面，防止室温过高；天花板高度不超过2米，保证紫外线有效杀菌效应；门用拉门，避免空气流动。室内天花板、地板和四周墙壁要光滑无死角，要镶瓷砖或涂油漆，便于清洗与消毒，不易在墙角推挤灰尘。3、细胞培养的设备有
哪些？有何基本作用⑴超净工作台①最好安装在无尘室内，最好在无菌间，避免过多灰尘使滤器阻塞，降低净化效果，缩短使用寿命。②新安装的或长期未使用的工作台，工作前必须对工作台和其周围环境用真空吸尘器或不产生纤维的工具进行清洁工作，在采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。③每次使用时，应先用75%酒精擦洗台面，并进行30~50min紫外线灭菌灯处理净化工作区内累积的微生物，在关闭紫外灯后，应启动送风机使之转运2min后在进行培养操作。④净化工作区内不应存放不必要的物品，以保持洁净气流不受干扰⑤高效过滤器3年更换一次。请专业人员操作，以保持密封良好。定期将粗过滤器中的过布拆下清洗。⑥每次使用净化台要即使清楚工作台面上的物品，并用酒精擦洗台面使之始终保持洁净。⑵CO2培养箱：①一定浓度的CO2生长，尤其是原代培养和单
细胞工程复习题 (2)
《细胞工程》复习题 一、选择题： 1．在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（Ｂ）A．结果是相同的 B．杂种细胞的形成过程基本相同 C．操作过程中酶的作用相同 D．诱导融合的手段相同 2. 单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞 诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在 这种培养基上不能存活增殖的细胞是（ C ） ①淋巴细胞 ②小鼠骨髓瘤细胞 ③B淋巴细胞自身融合细胞 ④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞 ⑤杂交瘤细胞 A．②④ B．①③⑤ C．①②③④ D．②③ 3．动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的有（ D ）
A．诱导融合的方法完全相同B．所用的技术手段完全相同 C．所采用的原理完全相同D．都能形成杂种细胞 4.单克隆抗体是指（ C ） A．单个骨髓瘤细胞增殖产生的抗体 B．单个B淋巴细胞增殖产生的抗体 C．单个杂交瘤细胞增殖产生的抗体 D．单个抗体通过克隆化，产生大量抗体 5.将小鼠骨髓瘤细胞与一种B淋巴细胞融合，可使融合的细胞经培养产生单克隆抗体，其依据是（多选） （AC ） A．B淋巴细胞可以产生抗体，但不能无限增殖 B．B淋巴细胞只有与骨髓瘤细胞融合后才能产生抗体 C．骨髓瘤细胞可以无限增殖，但不能产生抗体 D．骨髓瘤细胞可以产生抗体，但不能无限增殖 6.要想获得大量的单克隆抗体就必须用单个的B淋巴细胞进行无性繁殖，形成细胞群。其原因是（ D ） A．在体外培养条件下B淋巴细胞可以无限增殖 B．在动物体内B淋巴细胞可产生多达百万种以上的抗体 C．每一个B淋巴细胞都参与特异性免疫反应
. D．每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 7.关于单克隆抗体，下列叙述不正确的是（D ） A、可以制成诊断盒．用于疾病的珍断 B、可以与药物结合，用于病变细胞的定向治疗 C、可以利用基因工程技术生产 D、可以在生物体内生产，不能体外生产 8. 以下不属于生长素的是(D) A IAA B NAA C 2,4- D D 6-BA 9.植物细胞有而动物细胞没有的结构是(D) A细胞质 B线粒体 C内质网 D叶绿体 10.拥有接触抑制的是(B) A原核细胞 B动物细胞 C植物细胞 D真核细胞 11.产生自胸腺的淋巴细胞是(A) A T淋巴细胞 B B淋巴细胞 C C淋 巴细胞 D G淋巴细胞
细胞工程期末试题库
一、名词解释 1.细胞工程：应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的实验方法或技术，在细胞水平上研究、改造生物遗传特性和生物学特性，获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的科学。 2.动物组织工程：将干细胞与材料科学相结合，将自体或异体的干细胞经体外扩增后种植在预先构建好的聚合物骨架上，在适宜的生长条件下干细胞沿聚合物骨架迁移、铺展、生长和分化，最终发育成具有特定形态及功能的工程组织。 3.细胞全能性：一个细胞所具有的产生完整生物个体的固有能力。 4.干细胞：动物体内具有分化潜能，并能自我更新的细胞，分为胚胎干细胞和组织干细胞。 5.全能干细胞：从早期胚胎的内细胞团分离出来的一种高度未分化的细胞系，可以无限增殖，可分化成为多种细胞类型，从而可形成任何组织、器官，具有形成完整个体的潜能。 6.多能干细胞：具有分化成多种细胞组织的潜能，但失去了发育成完整个体的能力，发育潜能受到一定限制。 7.植物细胞培养：指在离体条件下，对植物的单个细胞或小的细胞团进行培养使其增值的技术。 8.植物组织培养：在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。 9./ 10.细胞脱分化：一个已分化的细胞回复到未分化的状态或分生细胞的过程。 11.细胞再分化：指在离体的培养条件下，当细胞脱分化以后形成的无序生长的细胞或愈伤组织重新进入有序生长的过程。只有再分化才能再生个体。 12.体细胞杂交（融合）：指两个离体细胞通过一定的诱导技术使质膜接触而融合在一起，随后导致两个细胞核物质融合的技术。 13.细胞核移植：利用显微操作技术将细胞核与细胞质分离，然后再将不同来源的核与质重组，形成杂种细胞。 14.接触抑制：当两个细胞由于生长而相互靠近发生接触时，细胞不再移动，在接触区域的细胞膜褶皱样活动停止，这种由细胞接触而抑制细胞运动的现象称为接触抑制。 15.密度抑制：细胞接触汇合成片后，仍能进行增值分裂，但当细胞密度进一步增大，培养液营养成分减少，代谢产物增多时，细胞因营养的枯竭和代谢物的影响，而发生密度抑制，导致细胞分裂停止的现象。 16.抗原：进入动物体内并对机体的免疫系统产生刺激作用的外源物质。 17.抗体：由抗原刺激B淋巴细胞转化为浆细胞后产生的，并能与相应的抗原特异性结合、具有免疫功能的球蛋白。 18.单克隆抗体：通过小鼠B细胞杂交瘤技术制备的高度均一、单一特异性，仅针对抗原上的某一个抗原决定簇产生的抗体。 19.多克隆抗体：用天然的抗原物质免疫动物，刺激多个B细胞克隆所获得的免疫血清，含有多种特异性抗体。 20.# 21.二倍体细胞培养法：始终维持培养细胞染色体倍数恒定为二倍体的细胞培养方法。 22.克隆培养法：又叫单细胞分离培养法，把从细胞悬液中获得的单个细胞用于培养，使之分裂增殖而产生一个细胞群的方法。 二、填空 1.广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官培养及细胞离体操作和培养技术。
杨淑慎《细胞工程》复习总结
第一章 细胞工程（Cell Engineering）是应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的实验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特性，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的学科。 1.植物细胞工程：以植物细胞组织为基本单位，在离体条件下进行培养、繁殖或人为的精细操作，使细胞的某些生物学特性按人们的意愿发生改变，从而改良品种或创造新物种，或加速繁殖植物新个体，或获得有用物质的过程。 2.动物细胞工程：以动物细胞为基本单位在体外条件下进行培养、繁殖和人为操作，使细胞产生某些人们所需要的生物学特性，从而改良品质，加速繁殖动物个体或获得有用品系的技术。 3.外植体：是指用于离体培养的活的植物组织、器官等材料。 4.培养基的基本成分：水、无机盐、有机成分、激素、其他。 5.细胞工程分类：器官、组织和细胞培养；原生质体培养；植物胚胎培养；动物胚胎工程；转基因动植物；胚胎干细胞；染色体工程。 6.细胞学说的提出者：Schwann和Schleiden 第三章 1.细胞的全能性：一个细胞所具有的产生完整个体的固有能力。 2.植物细胞按照分裂能力分为三类： 第一类是始终保持分裂能力，如茎尖、根尖及形成层细胞；第二类是永久失去分裂能力的终端分化细胞，如筛管、导管、气孔保卫细胞等特化细胞； 细胞，如表皮细胞及各种薄壁细胞。第三类是在通常情况下不分裂，但在受到外界刺激后可重新启动分裂的G 3.细胞脱分化（dedifferentiation）：培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程 4.蛋白体的出现及细胞质密度的增加是细胞开始脱分化的标志。 5.细胞分化（Differentiation）：是指导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。 6.极性（polarity）：是指植物的器官、组织、甚至单个细胞在不同的轴向上存在的某种形态结构以及生理生化上的梯度差异。 7.器官发生：是指培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根、不定芽等器官的过程。 8.器官发生的类型：1）、先芽后根；2）、先根后芽；3）、根芽同步发生。 9.影响器官发生的因素：1）、激素；2）、光照；3）、培养物的年龄；4）、外植体的生理状态 10.体细胞胚：离体培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物（不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞），统称为体细胞胚或胚状体。 11.体细胞胚定义的3方面界定： 1）、体细胞胚是离体培养的产物，只限于离体培养范围使用，以区别于无融合生殖胚。2）、体细胞胚起源于非合子细胞，以区别于合子胚。3）、体细胞经过了胚胎发育过程，以区别于离体培养中器官发生形成个体的途径。 12.体细胞胚形成途径：1）、直接从外植体上产生体细胞胚 2）、由愈伤组织产生 3）、悬浮培养中由胚性细胞复合体表面产生 4）、由悬浮培养中游离的单细胞产生 5）、由单倍体细胞产生 13.愈伤组织：是一团无序生长的细胞，这些细胞大都处于随机分裂状态。 14.离体培养下细胞全能性表达是通过细胞分化和再分化实现的。 15.器官发生和体细胞胚胎发生是植物细胞再生个体的基本途径。 16.人工种子又称合成种子或体细胞种子：是将植物离体培养产生的体细胚包埋在含有营养成分和保护功能的物质中在适宜的条件下发芽出苗。 17.人工种子的优点： 1）、培养条件可以人为控制 具有省地省工可直接在田间播种等优点。2）、在人工种子制作中 可加入营养物质、植物生长调节剂、固氮菌、杀虫剂等。3）、用于制作人工种子的体细胞胚 可利用生物反应器大规模培养 大大提高了效率。4）、一些难以得到天然种子的珍稀植物或脱毒苗、基因工程植株 均可利用人工种子技术加速用于生产。 第九章和第四章 1.体细胞无性系：由任何形式的细胞培养所产生的植株统称为体细胞无性系。 2.体细胞无性系变异：由体细胞无性系表现出来的变异。 3.离体培养中的遗传与变异特点: 1)、离体培养中的遗传稳定性 2)、离体培养下的变异特点:变异的普遍性;变异的局限性;嵌合性4.培养类型 原生质体＞细胞＞组织器官。性细胞＞体细胞
细胞工程复习题
细胞工程复习题 一、名词解释 1、细胞工程（cell engineering） 2、细胞培养（cell culture） 3、细胞核移植(nuclear transplantation) 4、染色体工程(chromosome engineering ) 5、胚胎工程(embryonic engineering) 6、干细胞（stem cell） 7、组织工程 8、植物细胞工程 9、脱分化 10、再分化 11、细胞全能性 12、外植体 13、愈伤组织 14、细胞分化 15、极性 16、决定 17、体细胞遗传与变异 18、外遗传变异（epigenetic variation） 19、生理适应（physiologic adaptation） 20、不定根 22、不定芽 23、离体无性繁殖(propagation in vitro) 24、单株无性系或单芽无性系 25、植物脱毒（virus elimination） 26、体细胞胚或胚状体 27、初代培养 29、指示植物 30、酶连免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA） 31、花药培养(anther culture) 32、花粉培养(pollen culture) 33、胚胎培养 34、胚培养 35、早熟萌发(early mature sprouting) 36、胚性发育(embryonal development) 37、植物离体受精 38、污染 39、褐变 40、玻璃化 41、细胞悬浮培养(cell suspension culture) 42、最低有效密度 43、细胞同步化 44、细胞平板培养 45、看护培养 46、微室培养
植物细胞工程复习题(整理)
植物细胞工程复习资料 名词解释 细胞工程: 广义——在离体、无菌条件下，在人工培养基及适宜条件下，对植物器官、组织、细胞、原生质体等进行培养，促使其长成完整植株的技术。 狭义——应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的试验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特性，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的学科。广义的细胞工程包括所有的生物组织、器官及细胞离体操作和培养技术，狭义的细胞工程则是指细胞融合和细胞培养技术。 植物细胞的全能性: 生物体的每个细胞都具有该物种全部遗传信息和离体培养条件下发育成完整植株的潜在能力。 体细胞杂交:将不同来源（种、属间）的体细胞原生质体在诱导剂诱发下融合形成杂种细胞，并进一步分化形成杂种植物体，进而形成新物种或新品种的技术。 固体培养：将外植体接种在加有凝固剂的培养基上进行静止培养的技术。 超低温保存：将植物细胞或组织经防冻处理后，在-196℃条件下的低温保存的一整套技术。 细胞固定化培养：将游离的细胞包埋在多糖或多聚化合物制备成的网状支持物中、培养液呈流动状态进行无菌培养的技术。 外植体：用于培养的离体组织或器官。如下胚轴、叶片、胚、根等。 继代培养：把培养物转移到相同的、新鲜培养基中的过程。一般每隔4-6周进行一次继代培养。继代也不能过于频繁。 植物体细胞胚胎：体细胞在离体培养下未经受精过程，但经历类似合子胚胎发生和发育的过程，从而形成类似合子胚的结构。 花药及花粉培养：离体条件下对植物的花粉或花药进行培养获得单倍体植株的技术。 接种：将外植体种植于培养基上的过程。 人工种子：又称合成种子或体细胞种子。任何一种经人工种皮包被或裸露的，具有形成完整植株能力的繁殖体均可称之为人工种子。 离体快繁（微繁）：通过无菌培养方法进行的营养繁殖。 愈伤组织：由外植体脱分化形成的一团无序的、分生状态的薄壁细胞。
细胞工程学相关考试题及答案
细胞工程学名词解释及问答题 一、名词解释 1、细胞工程（cytotechnology或cell engineering）：它是以生物细胞、组织或器官为研究对象，运用工程学原理，按照预定目标，改变生物性状，生产生物产品，为人类生产或生活服务的科学。 或应用细胞生物学和分子生物学和分子生物学的理论和方法，按照人们的设计蓝图，在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。通过细胞工程可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株，并可以产生新的物种或品系。 2、看护培养（nursing culture）：用一块活跃生长的愈伤组织来促进培养细胞持续分裂增殖的方法。 3、细胞杂交（cell hybridization）：指用人工方法把不同类型的两个或两个以上细胞合并成一个细胞的技术。 4、外植体〔explant〕：从植物体上分离下来的用于离体培养的植物组织、器官等材料。 5、人工种子：是指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中所形成的能发芽出苗的颗粒体。 6、花药培养（anther culture）：将成熟或未成熟的花药从母体植株上取下，放在无菌的条件下，使其进一步生长、发育成单倍体细胞或植株的技术。（指离体培养花粉和花药，使小孢子改变原有的配子体发育途径，转向孢子体发育途径，形成花粉胚或花粉愈伤组织，最后形成花粉植株，并从中鉴定出单倍体植株，使之二倍化的细胞工程技术。 7、条件培养基(conditioned medium)：培养过程中，有些细胞可能会分泌活性物质到培养液中，这种培养过某种细胞以后，含有细胞分泌物的培养液称为条件培养基。 8、植物脱毒：由人工用物理、化学和生物方法将植物体组织器官病原体消除，以使这些组织器官生成完整植株。 9、原代细胞系：指从机体中取出而直接培养的细胞，从一代到十代的细胞培养是原代培养，形成的整个系统叫原代细胞系。 10、体细胞杂交：指在人工控制条件下，不经过有性过程，两种体细胞原生质体相互融合产生杂种的方法。 11、胚胎培养：是指胚或具胚器官（如子房、胚珠等）在离体无菌条件下发育成幼苗的技术。 12、互补选择：是指利用两个亲本具有不同的遗传和生理特征，在特定培养条件下，具有发生互补作用的杂种细胞才能生长的选择方法。 13、悬浮培养(suspension culture):是细胞培养的基本方法，是将单个游离细胞或小细胞团在液体培养基中进行培养增殖的技术。 14、植板率:植板率是能长出细胞团的单细胞在接种单细胞中所占的比例。 15、玻璃化冻存：是指液体转变为非晶态（玻璃态）的固化过程。 16、接触抑制(contact inhibition)：当细胞在基质上分裂增殖，逐渐汇合成片即每个细胞与其周围的细胞相互接触时，细胞就停止增殖，即细胞密度不再增加，这一现象称之为接触抑制或密度依赖抑制现象。 17、非对称融合（aymmetric fusion）：利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再进行融合。 18、对称融合（symmetric fusion）：两个完整的细胞原生质体融合。 19、胞质体：不含细胞核而仅含有部分细胞质的原生质体。 20、体细胞胚：离体培养下没有经过受精过程，但经过了胚胎发育过程所形成的胚的类似物（不管培养的细胞是体细胞还是生殖细胞）。 21、永久细胞系：大多数细胞系在有限的代数内以不变的形式增殖，当超过有限世代后，在体外永久存活下来发育成永久细胞系或称连续细胞系。
细胞工程期末复习
细胞工程期末复习（必考） 细胞工程：研究真核细胞的核—质关系以及细胞器、细胞质基因转移的技术。 组织工程：研究开发用于修复或改善人体病损组织或器官的结构、功能的生物活性替代物的一门科学。 染色体工程：是按照一定的设计，有计划的消减添加或替换同种或异种染色体从而达到定向改变遗传特性和选育新品种的一种技术。 细胞连接：使细胞间的联系结构。细胞表面的特化结构或特化区域，是细胞间建立长期组织上联系的结构基础。涉及细胞外基质蛋白、跨膜蛋白、胞质溶胶蛋白、细胞骨架蛋白等。细胞全能性：指分化细胞保留着全部的核基因组，具有生物个体成长、发育所需要的全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能。 细胞分化：指细胞在形态、结构和功能上发生差异的过程。包括时间和空间上的分化。 脱分化：又称去分化，指分化细胞失去特有的结构和功能变为具有未分化细胞特性的过程。即分化的细胞在适当条件下转变为胚性状态而重新获得分裂能力的过程。 再分化：是指在离体条件下，无序生长的脱分化细胞在适当条件下重新进入有序生长和分化状态的过程。 细胞培养：指从体内组织分离细胞，模拟体内环境，在无菌适当的条件使其生长繁殖的技术。人工种子：又称合成种子或体细胞种子，指将植物离体培养中产生的胚状体或芽包裹在含有养分和保护功能的人工胚乳和人工种皮中形成的类似种子的颗粒。 植物胚胎培养：指对植物的胚及胚器官进行人工离体无菌培养，使其发育成幼苗的技术。试管受精：指在无菌条件下离体培养未受精子房或胚珠和花粉萌发产生的花粉管进入胚珠从而完成受精过程。 细胞核移植：一种利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内的技术。 体外受精：指使哺乳动物的精子和卵子在体外人工控制的环境中完成受精过程的技术。 胚胎移植:指将受精卵或发育到一定阶段的胚胎移植到与供体同时发情排卵但为配种的受体母畜输卵管或子宫的技术。 人工受精：指将采集的精子注入人发情处理的母体内完成受精过程。 试管婴儿：指将卵子与精子取出在体外受精，培养发育成早期胚胎，再植回母体子宫内发育出生的婴儿，也就是采用体外受惊联合胚胎移植技术培育的婴儿。 胚胎核移植：一种利用显微操作技术将一种动物的细胞核移入同种或异种动物的去核成熟卵细胞内的技术。 愈伤组织：脱分化后的细胞经过细胞分裂，产生无组织结构、无明显极性的松散的细胞团。胚状体：由外植体或愈伤组织产生的与正常受精卵发育成的胚相类似的胚状结构。 胞质体：除去细胞核后由质膜包裹的无核细胞。 细胞融合：指使用人工的方法使2个或2个以上的细胞合并形成1个细胞的技术。 对称融合：两个完整的细胞间的融合。 异核体：来自不同基因型的融合细胞。 不对称融合：用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活再与另一完整的细胞进行融合。体细胞杂交：指将不同来源的体细胞融合并使之分化再生、形成新品种的技术。 花药和花粉培养：指离体培养花药和花粉，使小孢子改变原有的配子体发育途径，转向孢子体发育途径，形成花粉胚或花粉愈伤组织，最后形成花粉植株，从中鉴定出单倍体植株并使之二倍化的技术。 植物细胞培养：在离体条件下，将分离的植物细胞继代培养增殖，获得大量细胞群体的技术。动物细胞培养：模拟体内生理环境使分离的动物细胞在体外生存、增殖的技术。 细胞悬浮培养：将细胞接种于液体培养基中并保持良好的分散状态的培养方式。 细胞固定化培养：将游离的细胞包埋在支持物内部或表面进行培养的技术。 贴壁培养：指细胞贴附在一定的固相表面进行的培养。 原代培养：接种组织块直接长出单层细胞或将组织分散成单个细胞再进行培养，在首次传代前的培养成为原代培养。 传代培养：指将原代培养的细胞继续转接培养的过程。 原代细胞：有分裂但不旺盛，且多呈二倍体核型的细胞。
细胞工程知识点填空(附答案)
专题2 细胞工程 （一）植物细胞工程 1.理论基础（原理）： 全能性表达的难易程度： 2.植物组织培养技术 （1）过程：离体的植物器官、组织或细胞―→愈伤组织―→试管苗―→植物体 （2）用途：。（3）地位：是培育、培育植物新品种的最后一道工序。 3.植物体细胞杂交技术 （1）过程： （2）诱导融合的方法：物理法包括等。化学法一般是用 作为诱导剂。（3）意义： （二）动物细胞工程 1. 动物细胞培养 （1）概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的，将它分散成，然后放在适宜的中，让这些细胞。 （2）动物细胞培养的流程：取动物组织块（动物胚胎或幼龄动物的器官或组织）→剪碎→用 处理分散成→制成→转入培养瓶中进行培养→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续培养。（3）细胞贴壁和接触抑制：悬液中分散的细胞很快就，称为。细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面时，细胞就会，这种现象称为。 （4）动物细胞培养需要满足以下条件 ①：培养液应进行处理。通常还要在培养液中添加一 定量的，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防 止。 ②：合成培养基成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入 等天然成分。 ③：适宜温度：哺乳动物多是；pH：。 ④：95%＋5%。O2是所必需的，CO2的主要作用 是。 （5）动物细胞培养技术的应用： 2.动物体细胞核移植技术和克隆动物 （1）哺乳动物核移植可以分为核移植（比较容易）和核移植（比较难）。
（2）选用去核卵(母)细胞的原因：卵(母)细胞； 卵(母)细胞。 （3）体细胞核移植的大致过程是：（下图） （4）体细胞核移植技术的应用： ①② ③④ ⑤ （5）体细胞核移植技术存在的问题： 克隆动物存在着问题、表现出缺陷等。 3.动物细胞融合 （1）动物细胞融合也称，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。融合后形成的具有原来细胞遗传信息的单核细胞，称为。（2）动物细胞融合与植物原生质体融合的原理基本相同，诱导动物细胞融合的方法与植物原生质体融合的方法类似，常用的诱导因素有等。 （3）动物细胞融合的意义：克服了，成为研究 的重要手段。 （4）动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较： 比较项目细胞融合的原理细胞融合的方法诱导手段用法 植物体细 胞杂交 细胞膜的流动性去除细胞壁后诱 导原生质体融合 离心、电刺激、 振动，聚乙二醇 等试剂诱导 克服了远缘杂交 的不亲和性，获得 杂种植株 动物细胞 融合 细胞膜的流动性使细胞分散后诱 导细胞融合 除应用植物细胞 杂交手段外，再加 灭活的病毒诱导 制备单克隆抗体 的技术之一 4.单克隆抗体 （1）抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种。从血清中分离出的抗体 。 （2）单克隆抗体的制备过程： 注入小鼠 细胞融合 分离 抗原注入小鼠体内 B淋巴细胞骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 细胞培养 选择培养细胞 培养基 体内培养体外培养 从腹水提取从培养液提取 单克隆抗体 核移植 胚胎移植
高考生物复习题细胞工程含解析
配餐作业(四十一) 细胞工程 1．下列关于植物克隆的叙述，错误的是( ) A．通过花药离体培养可获得单倍体 B．通过平衡植物激素种类可实现器官发生 C．可利用细胞培养生产人参皂苷等中药成分 D．对植物愈伤组织进行诱变、培育和筛选可获得新品种 解析在植物组织培养中，通过控制不同浓度的不同类型的植物激素，可诱导产生不定根或丛芽，不能通过平衡植物激素种类使其发挥作用。 答案 B 2．下列有关动物细胞培养的叙述，错误的是( ) A．恶性肿瘤细胞系具有不死性和失去接触抑制等特性 B．利用液体培养基和CO2培养箱，模拟动物体的内环境 C．因细胞具有相互依存关系，细胞克隆需滋养细胞支持生长 D．细胞株没有差异性，在连续传代过程中遗传性状始终保持稳定 解析动物细胞的培养过程，是细胞有丝分裂的过程，在分裂过程中，由于基因突变或染色体变异会造成遗传物质的改变。 答案 D 3．如图为植物细胞融合后再生出新植株的部分过程示意图，请据图分析，以下叙述中不正确的是( ) A．使植物细胞形成原生质体阶段的关键技术是使用纤维素酶和果胶酶去除细胞壁 B．植物细胞融合一般要用聚乙二醇(PEG)等诱导剂进行诱导 C．原生质体融合成为一个新的杂种细胞的标志是出现新的细胞核 D．亲本植物A的细胞与亲本植物B的细胞两两融合后的细胞类型有3种 解析本题考查植物细胞融合的相关内容，意在考查考生的理解与分析能力。植物体细胞杂交前首先要用纤维素酶和果胶酶去除植物细胞的细胞壁以得到原生质体，A正确；诱导植物原生质体融合时，常用聚乙二醇作诱导剂，B正确；原生质体融合成一个新的杂种细胞
的标志是出现新的细胞壁，C不正确；A细胞和B细胞融合后形成AA、BB和AB三种类型的融合细胞，D正确。 答案 C 4．如图所示为白菜—甘蓝的培育流程，下列叙述错误的是( ) A．过程①用到的酶是纤维素酶和果胶酶 B．过程②常用的化学试剂是聚乙二醇 C．过程④使细胞的全能性提高 D．过程⑤使细胞的全能性降低，最终失去全能性 解析植物细胞壁的主要成分是纤维素和果胶，所以去除细胞壁应用纤维素酶和果胶酶，A正确；杂种细胞是已经分化的细胞，而愈伤组织是未分化的细胞，所以愈伤组织的全能性要高于杂种细胞，C正确；无论是分化的还是未分化的植物细胞都具有全能性，D错误。 答案 D 5．如图示植物组织培养过程。据图分析下列叙述正确的是( ) A．⑤植株根尖细胞的全能性比①植株根尖细胞的强 B．②试管的培养基中含有植物生长调节剂，不含有机物 C．③试管中的细胞能进行减数分裂 D．调节④培养基中植物生长调节剂的比例可诱导产生不同的植物器官 解析⑤植株根尖细胞的全能性与①植株根尖细胞相同。②试管的培养基中含有植物生长调节剂和有机物等。③试管中的细胞进行的分裂方式为有丝分裂。调节④培养基中植物生长调节剂的比例，可诱导产生根或芽。 答案 D 6．对于下面制备单克隆抗体过程示意图，不正确的叙述是( ) A．①表示B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，均是从小鼠的脾脏中提取的 B．④中的筛选是通过抗原—抗体反应进行的
细胞工程期末试题库
一、名词解释 细胞工程：应用细胞生物学和分子生物学方法，借助工程学的实验方法或技术，在细胞水平上研究、改造生物遗传特性和生物学特性，获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的科学。 动物组织工程：将干细胞与材料科学相结合，将自体或异体的干细胞经体外扩增后种植在预先构建好的聚合物骨架上，在适宜的生长条件下干细胞沿聚合物骨架迁移、铺展、生长和分化，最终发育成具有特定形态及功能的工程组织。 细胞全能性：一个细胞所具有的产生完整生物个体的固有能力。 干细胞：动物体内具有分化潜能，并能自我更新的细胞，分为胚胎干细胞和组织干细胞。 全能干细胞：从早期胚胎的内细胞团分离出来的一种高度未分化的细胞系，可以无限增殖，可分化成为多种细胞类型，从而可形成任何组织、器官，具有形成完整个体的潜能。 多能干细胞：具有分化成多种细胞组织的潜能，但失去了发育成完整个体的能力，发育潜能受到一定限制。 植物细胞培养：指在离体条件下，对植物的单个细胞或小的细胞团进行培养使其增值的技术。 植物组织培养：在无菌和人工控制的条件下，将离体的植物器官、组织、细胞培养在人工配制的培养基上，给予适宜的条件，诱导其产生愈伤组织、丛芽，最终形成完整的植株。 细胞脱分化：一个已分化的细胞回复到未分化的状态或分生细胞的过程。 细胞再分化：指在离体的培养条件下，当细胞脱分化以后形成的无序生长的细胞或愈伤组织重新进入有序生长的过程。只有再分化才能再生个体。 体细胞杂交（融合）：指两个离体细胞通过一定的诱导技术使质膜接触而融合在一起，随后导致两个细胞核物质融合的技术。 细胞核移植：利用显微操作技术将细胞核与细胞质分离，然后再将不同来源的核与质重组，形成杂种细胞。 接触抑制：当两个细胞由于生长而相互靠近发生接触时，细胞不再移动，在接触区域的细胞膜褶皱样活动停止，这种由细胞接触而抑制细胞运动的现象称为接触抑制。