CpG-ODN对人膀胱癌细胞T24的作用以及与化疗药联用的药效研究
目录
中文摘要 (1)
Abstract (3)
前言 (5)
第一部分 CpG及脂质体包裹的CpG对T24细胞的作用 (10)
1材料 (10)
1.1试剂 (10)
1.2CpG-ODN序列 (10)
1.3主要仪器 (11)
2 方法 (11)
2.1 细胞培养 (11)
2.2 细胞毒性实验 (12)
2.3 Real-time PCR (12)
2.4 数据统计与处理 (15)
3 实验结果 (15)
3.1 CpG-ODN对T24细胞的增殖抑制作用 (15)
3.2 CpG-ODN与卡介苗对T24细胞活性抑制作用的比较 (16)
3.3 脂质体包裹的CpG-ODN对T24细胞的活性影响 (17)
3.4 T24细胞内Bcl-2的表达变化 (18)
4 讨论 (18)
第二部分 CpG-ODN与化疗药联用对药效的影响 (20)
1 材料 (20)
1.1 试剂 (20)
2 方法 (21)
2.1 细胞活性检测 (21)
2.2 细胞核形态变化 (21)
2.3 细胞凋亡 (22)
2.4 细胞周期 (22)
2.5 Real-Time PCR (23)
2.6 数据统计与处理 (25)
3 实验结果 (26)
3.1 抑制T24细胞的体外增殖 (26)
3.2 影响T24细胞的细胞核形态 (28)
3.3 促进T24细胞的细胞凋亡 (29)
3.4 诱导T24细胞的S期和G2/M期阻滞 (31)
3.5 下调T24细胞中Bcl-2 mRNA的表达 (32)
4 讨论 (33)
全文总结 (35)
展望 (35)
本研究的主要创新点 (36)
参考文献 (37)
致谢 (45)
中文摘要
目的
作为泌尿系统中常见的肿瘤疾病之一，膀胱癌的发病率近年来呈现逐渐增长的趋势。先前的有关数据表明，一种具有特定结构的寡聚脱氧核苷酸（CpG-ODN）对某些肿瘤疾病具有潜在的治疗效果。本实验中，我们主要研究这种特定结构的CpG-ODN 对人膀胱癌细胞T24的影响及相关作用机制；同时，评价CpG-ODN与化疗药联用对药效的影响，为临床治疗提供实验基础。
方法
常规培养T24细胞，采用MTS法检测CpG-ODN及其脂质体对T24细胞的体外抑制作用，并探讨剂量-时间-效应关系，同时对比CpG-ODN与卡介苗单独作用的效果以及脂质体包裹与否对抑制作用的影响；此外可以通过Real-time PCR法检测T24细胞内抗凋亡因子Bcl-2在CpG-ODN及其脂质体作用后的表达变化。
CpG-ODN与阿霉素（DOX）或五氟尿嘧啶（5-FU）单独或联合体外作用于T24细胞，采用MTS、Hoechst 33258、以及流式细胞仪等方法分别检测细胞活性，观察细胞核的形态变化，分析T24细胞的凋亡和周期分布情况，再通过Real-time PCR法分析细胞内抗凋亡因子Bcl-2的表达变化。
结果
CpG-ODN能够有效遏制T24细胞的体外活性，并且呈浓度和时间依赖性，其单独作用的效果也强于卡介苗，而脂质体包裹的CpG-ODN能够更加显著的抑制T24细胞的体外活性。Real-time PCR则检测到在CpG-ODN及其脂质体的作用下，T24细胞内抗凋亡因子Bcl-2 mRNA的表达都有所下调，并且脂质体组下调效果更显著。Bcl-2 家族抗凋亡因子与肿瘤的发生发展密切相关，Bcl-2的表达下调也可以刺激相关药物作用于肿瘤细胞，引起凋亡的发生。
CpG-ODN和DOX单独作用都可以降低T24细胞的活性，联用后对T24的活性抑制作用减弱。而CpG-ODN与5-FU联用后，对T24细胞的体外活性抑制效果强于二者
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