八种常用生化实验步骤
实验一基因的PCR扩增技术
一、实验目的与原理简介
聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）是体外克隆基因的重要方法，它可在几个小时内使模板分子扩增百万倍以上。因此能用于从微量样品中获得目的基因，同时完成了基因在体外的克隆，是分子生物学及基因工程中极为有用的研究手段。
常规PCR反用于已知DNA序列的扩增，具体可分为三个主要过程：一、变性。通过升高温度使DNA双链模板分子中氢断裂，形成单链DNA分子，温度为94℃，时间1min。二、复性。降低温度使DNA单链分子同引物结合。温度为55℃，时间1min。三、延深。升高温度，在DNA聚合酶最佳活性的条件下在引物3端加入dNTP，实现模板的扩增，温度为72℃，时间2min。同时第一步变性前要在94℃下预变性5分钟，使DNA双链完全解开。经过 25-35个循环之后，在72℃下继续延伸10分钟。
PCR反应包含的七种基本成分：
1）热稳定性DNA聚合酶：Taq DNA聚合酶是最常适用的酶，商品化Taq DNA酶的特异性活性约为80000单位/mg.
2）寡核苷酸引物：寡核苷酸引物的设计是影响PCR扩增反应的效率与特异性的关键因素。
3）脱氧核苷三磷酸（dNTP）：标准的PCR反应体系应包括4种等摩尔浓度的脱氧核苷三磷酸，即dATP、dTTP、dCTP和dGTP。每种dNTP的浓度一般在200-250μl之间，高浓度的dNTP对扩增反应会起抑制作用，可能是dNTP与Mg2+螯合有关。
4）二价阳离子：一般需要Mg2+来激活热稳定的DNA聚合酶，由于dNTP与寡聚核酸结Mg2+合，因而反应体系中阳离子的浓度一般要超过dNTP和引物来源的磷酸盐基团的摩尔浓度。Mg2+的最佳浓度为1.5mmol/L。
5）维持PH值的缓冲液：用Tris-Cl在室温将PCR缓冲液的PH值调至8.3-8.8之间，标准PCR缓冲液浓度在10mmol/L。在72℃温育时，反应体系的温度将下降1个多单位，致使缓冲液的PH值接近7.2。
6）一价阳离子：标准PCR缓冲液内含有50mmol/L的KCl，它对扩增大于500bp长度的DNA是有益的。
7）模板DNA：含有靶序列的模板DNA可以以单链或双链形式加入到PCR混合液中，闭环DNA的及增效率略低于线性DNA。
学习PCR反应的基本原理和基本技术。
了解引物设计的一般要求。
二、材料和试剂
10Х扩增缓冲液
4种dNTP贮存液（20mmol/L，PH 8.0）
Tap DNA 聚合酶
5端引物（20μmol/L）及3端引物（20μmol/L）
模板DNA
琼脂糖凝胶
PCR仪（Bio-Rad公司）移液枪（0.5-10μL 5-50μL）枪头微量移液管
一、实验操作
1）按照以下次序，将各成分加到微量离子管内混合：
10Х扩增缓冲液2.5μl M g2+1.5μl 5端引物1μl
3端引物1μl
D D W16.25μl
d N T P2.5μl
T a q酶0.25μl 模板 1μl
2）按照以下方法进行PCR扩增：
循环数预变性变性复性聚合后延伸
35个循环 95 ℃ 5min 94℃ 1min 63℃ 1min 72℃ 1min 72℃ 10min 聚合反应时间是根据靶基因的长度按每分钟聚合1000bp的速率来计算出来的。
3）抽取每种扩增样品5-10μl，用琼脂糖电泳来分析扩增结果，用DNA marker 来判断扩增片段的大小。凝胶一般用Goldview 染色后观察扩增的量与片段大小。
从阳性对照样品的相对分子量的目的条带的亮度与粗细可以判断PCR扩增的效率；阴性对照样品在目的条带附近应该没有相应条带。
二、对可能发生PCR过程中主要疑难问题的解析
表2.1 多种PCR扩增过程的一些疑难问题的诊断与解决方法
现象可能原因补救措施
扩增的目的条带试剂不合格；PCR仪有故障；在两台不同的PCR仪上用新鲜购买的试剂与老的试剂分别进行
较弱或不能检测扩增程序有错误； PCR，比较扩增产物结果。
到相应的条带。
复性条件不是最合适的。重新计算引物Tm，必要时优化引物浓度。若是引物问题，要重
新合成引物。
被复性结合到模板上的优化MgCl2、模板DNA、和dNTP的浓度；
引物不适合延伸。重新纯化模板DNA以除去抑制物；
在恒定复性温度下增加PCR循环数。
变性不完全。增加变性时间或设置更调质变性温度。
两个引物之间的距离太大。应用那些能够扩增大的DNA片段的热稳定的DNA聚合酶。
多种扩增产物条带优化MgCl2、模板DNA、热稳定性DNA聚合酶和dNTP的浓度。
用首次扩增的PCR产物进行1：100稀释后作为模板，再加入
新的PCR缓冲液与引物在恒定复性温度条件下进行30个循环
的第二次PCR扩增；或者进行嵌套式PCR扩增；或者从凝胶上
割取取目的条带作模板重新进行PCR扩增。
引物二聚体过量应用降落PCR；重新设计合成引物，特别注意引物3末端的序
列。
实验二、碱裂解法大量提取质粒DNA及检测
三、实验目的与原理简介
质粒DNA的提取是基因工程操作中常用的基本技术。质粒作为载体应具备下列四个特点：①有足够的容纳目的基因的幅度，并且对于携带的目的基因能够借助载体的复制和调控系统得到忠实的复制与增殖。②在非必要的DNA克隆区有多种限制性核酸内切酶的单一识别位点，易于基因片段与载体的连接、重组与筛选。③与宿主细胞有天与一个或多个遗传表型（如抗药性、营养缺陷型或显色表型反应等）。④拷贝数多，易于宿主细胞的DNA分开，便于分离提纯。
分离质粒DNA的方法包括三个基本步骤：培养细胞使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。
碱裂解法质粒DNA是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的的。在强碱性pH时，染色体线性DNA 的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，调节pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复到原来的构型，而染色体DNA不能复性纠缠形成网状结构，经过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一直沉淀下来而被除去。
提取基因工程中运载基因的载体，掌握最常用的提取质粒DNA的方法。
二．试剂及步骤
试剂配制：SolⅠ： 1M Tris-HCL（pH8.0）2.5ml，0.5M EDTA 2ml, DDW 91ml, 20%葡萄糖4.5ml( 葡萄糖单独灭，灭完后加进Sol I)，高压灭菌，4°保存。 SolⅡ：（新鲜配制，常温使用）10% SDS 50ml， 2M NaOH 50ml。或者每100ml：SDS 1g，NaOH 0.8g，加DDW定容至100ml。不要剧烈搅拌！
SolⅢ：KAc 147g， HAc57.5ml，加300mlDDW搅拌，定容至500ml。高压灭菌，4°保存。STE buffer： 1M Tris-HCl （pH8.0）1ml， 0.5 M EDTA 0.2 ml,Nacl 0.5844g,DDW 98.8ml。高压灭菌！
70%乙醇 10ml
5M LiCl 20ml
3M醋酸钠，pH5.2
酚/氯仿/异戊醇无菌水DDW
13％(W/V)PEG8000，1.6M NaCl:6.5g PEG,4.6752g NaCl,加水定容至50ml,过滤除菌.(仅由第一组配制)
按1/100的比例接种保存的pPIC9K大肠杆菌克隆菌种到3 mL的含有适当抗生素LB培养基，37℃、180rpm培养过夜或培养12小时以上，活化菌种(至对数生长期)。将活化的菌种按1/100接种至200 ml的LB培养基，37℃、250rpm剧烈震荡培养过夜。
⒈离心管（50mL）分装菌液，离心去上清（10000rpm，5min，4℃）；重悬于15mL（原始菌液的1/4体积）STE中，离心去上清（10000rpm，1-2min，4℃）离心结束尽可能吸干上清液。
⒉重悬于2mL 冰冷的SolⅠ中；剧烈震荡重悬菌体。
⒊加入4mL SolⅡ轻轻颠倒数次（动作要轻柔，防止断裂DNA形成碎片），彻底混匀，室温放置10min。
⒋加入3mL冰冷的 SolⅢ立即轻轻颠倒完全彻底混匀，冰上放置10min。
⒌4℃，10000rpm离心10min。
⒍脱脂棉过滤收集上清至新的离心管，加等体积异丙醇，混匀沉淀核酸，室温放置大于10min。
⒎室温，10000rpm离心15min，小心弃去上清，收集核算沉淀；将离心管倒置纸巾上以除去残余的上清。
⒏少许70％乙醇清洗管壁及沉淀，室温挥发（一般室温放置10-15min足够）；
⒐加3mL 预冷DDW溶解核算沉淀。
⒑加等体积预冷5M LiCl，混匀，于4°C ，10000rpm离心10min，取上清至新的离心管。（沉淀大分子RNA及蛋白）
⒒加等体积异丙醇，混匀沉淀核算，离心去上清（12000rpm，15min，室温）。
⒓小心倒去上清，倒置管口，使液体溜干。少许70％乙醇清洗管壁及沉淀，室温挥发。
⒔用490μL DDW溶解核酸沉淀，将溶液转移至1.5 mL离心管中，加入RNaes A至终浓度20μg/mL，37℃反应45min。
⒕加500μL [13％(W/V)PEG8000，1.6M NaCl]，混匀静置，4℃沉淀3-4h。
⒖最大转速（12000rpm）离心20min，回收DNA沉淀；沉淀用500μL 70％乙醇重悬以除去微量PEG，高速离心5min以回收核酸；吸取乙醇，重复一次，室温挥发乙醇。
⒗500μL DDW溶解DNA，用等体积的酚，酚/氯仿/异戊醇，25:24:1；氯仿/异戊醇24:1各抽提一次；每次振荡摇匀，高速离心10min。（抽提过程中要小心，不要吸到有机相）
⒘收集最后水相至新的离心管，加1/10V的[3M醋酸钠，pH5.2]，混匀；用2倍体积的无水乙醇沉淀，低温(-20℃)放置>20min。
⒙高速冷冻离心10min，去上清。
⒚预冷70％乙醇洗涤沉淀；高速冷冻离心10min ；取上清，挥发乙醇；50μL DDW溶解质粒。
实验三、酶切与连接
一、实验目的与原理简介
限制性内切酶在基因工程中主要应用地以下两个方面：制作基因酶切图谱和进行基因克隆。制作基因图谱，就是利用特定的酶切出特定的条带：而利用基因克隆时选择酶应注意以下几个方面：1）克隆片段的长度；2）克隆片段中切点的情况3）载体上切点的情况；4）切割与连接方式；5）接头状态。
酶切方式可分为部分酶切和完全酶切两种：1）部分酶是指同一DNA片段上有些被切开而另一些未被切开，此法主要应用于基因的克隆。用部分酶切法是基于基因内部可能有此酶的位点。进行部分酶切可通过两个方式：一是不同的时间内在同一酶反应管中取样终止反应，利用时间来控制酶切的程度。另一种是在其余条件相同时控制酶的稀释度，利用不同酶浓度控制酶切程度，这种方法因易于控制反应而被广泛应用。2）完全酶切法适用于如载体切割、酶切图谱的制作、基因的鉴定与DNA片段的分离工作。完全酶切又可分为单酶切、多酶切两种。在多酶切反应中当2种或2种以上的酶有相同的反应条件时，可同时进行酶切，不然须在前一种酶作用完成后将其失活，而后进行第二种酶切反应，这样可以避免片段混乱现象的出现。
二、材料和试剂
限制性内切栈酶XhoI EcoRI 10╳Buffer PCR产物 pPIC9K质粒 10╳T4连接Buffer T4 Ligase DDW 琼脂糖电泳缓冲液 Goldview染液胶回收试剂盒
电泳仪恒温水浴锅 1.5ml EP管移液枪灭菌枪头紫外检测仪
三、实验步骤
1） PCR产物双酶切（XhoI、EcoRI） pPI9K质粒双酶切(XhoI部分酶切、EcoRI完全酶切)
DDW 23μl DDW 35μl
10╳H Buffer 5μl 10╳H Buffer 5μl
PCR产物 20μl pPI9K质粒 8μl
XhoI 1μl XhoI 1μl(37℃恒温部分酶切20min)
EcoRI 1μl EcoRI 1μl
(37℃恒温4小时) (37℃完全酶切3小时)
以上两步酶切都要制备两管,酶产物置于-20℃,电泳检测酶切结果并回收一管做连接.由于pPI9K质粒有两个XhoI酶切位点(1193\5730),故采用部分酶切法,并电泳回收,酶切后9K大小的线性片段用于连接。PCR产物双酶切可用乙醇沉淀回收。
2）然后电泳检测后在紫外检测仪下观察（UV，260nm）。
3）切胶回收（尽量更要切到不含目的片段的胶），按照胶回收试剂盒标准操作。
4）回收产物电泳检测后进行连接：
连接体系： 10×T4连接Buffer 1μl
目的基因 6μl
质粒载体 2μl
T4 Ligase 1μl
混合后16℃，过夜连接。完成后放入4℃冰箱可，备用。
四、注意事项
1、加样次序一般应为：水+缓冲液+DNA+酶。
2、限制性内切酶的量不要过多，最多不超过部体积的1/10，否则易发生酶的星号反应。所谓酶的星号反应就是指改变酶切条件时酶的识别位点专一性下降，导致酶切图谱混乱的现象。
3、内芭栈瓣选择和使用方案须根据具体的实验情况来精心设计。
4、限制性内切酶和连接酶都极易失活，须在冰盒上操作，同时防止污染。
实验四、感受态细胞的制备和连接产物的转化
一、实验原理与目的
感受态就是受体菌能接受外源DNA（周围环境中的DNA分子）能力的一种生理状态，一般认为处于生长对数期的后期能够发展成为感受态，但是细菌中能发展成为感受态的细胞是很少的，一般认为0.1%-1%，而且时间短暂。用CaCl2处理大肠杆菌细胞可以使20%的细胞成为具有转化能力的感受态细胞。冷冻也能增加感受态细胞有量，而且还可以延长感受态时间，提高转化效率。
学习CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞的方法；
掌握外源DNA重组质粒导入受体菌细胞并筛选阳性转化体的方法。
二、材料与试剂
1.5ml EP管灭菌枪头移液枪冰盒低温离心机涂布棒大肠杆菌Top10、重组质粒（实验三
的连接产物）、LB固体培养基、氨苄青霉素储存液 0.1M CaCl2
三、实验方法
1、大肠杆菌感受态细胞的制备（CaCl2法）
1 ）取-70℃超低温冰箱保存的大肠杆菌Top10菌液 30μl （过夜菌液约16小时）接种于3ml LB培养液（1：100接种）
37揺菌（250rpm）培养过夜；（OD=0.2—0.4）。
2 ）将过夜培养的菌液移入3ml LB培养基中，37℃快速振荡（250rpm），至OD=0.4—0.6（约2小时）；冰浴30分钟，使培
养物冷却至0度。
3 ）取1ml菌液于1.5ml EP管中，4度时4000rpm离心10分钟，去上清。（倒出培养液将管倒置1 分钟，以使前后残留的
培养液流尽。）沉淀用1ml冰上预泠的0.1M CaCl2（抽滤灭菌）悬浮，混合均匀，置于冰浴上30min 。
4 ）4度4000rpm离心10min，去上清沉淀再加200μl的0.1M CaCl2重悬，冰上放置2-7h 后可用于转化；或者每管加20-30%
的灭菌甘油，-70℃保存。
2、转化大肠杆菌感受态胞
1）取上述方法制备的感受态细胞，或者从-70℃超低温冰箱取出一管感受态细胞融化。
2）按每200μl菌液加100ng已纯化的质粒DNA（无菌操作）的标准，将5-10μlDNA的连接物加入一管感受态细胞中，混匀后放置冰上30min。（同时作两个对照组即受体菌对照组（-）和质粒DNA对照组（+），检测感受态细胞的质量及有无污染情况）
3）42℃水浴中热激90sec，迅速取出立即放于冰上2min 。注意：在水浴中切勿乱晃动。
4）上述各管中分别加入800μl 37℃预热的LB培养基至总体积为1ml，混匀后37℃ 180rpm培养1-2小时左右复苏。
5）4000rpm离心10min，去800μl上清液，将剩余的200μl菌液混匀。
6）用烧烤过的涂布将100μl的菌液涂布于加相应抗生素（Amp+50ppm）的LB 固体培养基，涂匀，置于超净台上1小时左右至菌液完全被培养基吸收。
7）37℃倒置培养12-24小时。从平板上挑选抗性菌落进行鉴定。
四、主意事项
1、为了提高转化效率活细胞数务必少于108个/ml，即OD600值为0.4左右，为了确保生长浓度不会太高，可每隔15-20min
进行一次OD值监测。
2、热激是一个非常重要的步骤，应准确的达到热激所需要的温度的时间。
3、如果加入太多的菌落裂解液，会改变了反应混合液的离子平衡，导致实验失败。
4、PCR扩增对DNA模板的要求量很低，因而在利用菌落裂解液作为模板时，应避免加入过量的模板DNA样品。
5、偶尔带入琼脂碎片于反应混合液中，会抑制的热稳定性DNA聚合酶的扩增。
实验五菌落PCR筛选阳性重组子及重组质粒的酶切鉴定
菌落PCR鉴定
1）反应体系： 10Х扩增缓冲液 2.5μl
Mg2+ 2.5μl
正向引物 1.25μl
反向引物 1.25μl
DDW 14.75μl
dNTP 2.5μl
taq 酶 0.25μl
模板为菌落
用灭菌的200μl的枪头挑选一个个细菌菌落，迅速的使挑取物溶于25μl的主混合液中，30个克隆另加一个阳性对照。
2）完全混合后，将反应管放于PCR 仪上，按照变性、复性、延伸三种程序设定温度、时间、循环次数。进行反应。程序设定同实验一。
3）抽取每种扩增产物5-10μl，用琼脂凝胶电泳来分析扩增结果，用DNA marker来判断扩增片段的大小。
实验六、质粒酶切及电转化毕赤酵母
一、实验原理及目的
核酸不能自动进入细胞，需要协助才能穿过细胞壁的物理屏障进入能够进行表达或复制的胞内位点。电流可逆性的击穿细胞膜形成瞬时水通路或膜上小孔，促使DNA分子进入胞内。电场强度为kV/ cm、持续时间为μs —ms 级的电脉冲刺激会使细胞膜发生电穿孔现象,即:细胞膜结构重组,出现微孔,电导率改变,暂时丧失屏障功能等,从而引起离子的流出, 代谢物的排泄, 细胞对药剂及DNA 等大分子的吸收量增加。线性DNA分子与环状DNA分子均可用于转染，但线性DNA无论是瞬时表达还是稳定转染的水平高于环状分子。所以对于闭合环状的质粒DNA来说，要首先利用限制性内切酶切割使其变成线性分子，然后进行转染。
同时转染的效率还会以下因素影响：外加电场的强度、电脉冲的长度、温度、培养基的离子成分。
掌握电穿孔转染DNA技术。
二、材料和试剂（两组共配一次）
RDB培养基 1、取Sorbitol 18.6g 及琼脂 2 g 溶于70ml水中。
2、 10ХD 10ml （8g葡萄糖，40mlDDW）
10 YNB 10ml （13.4gYNB 100mlDDW 过滤除菌）
500Х B 0.2ml ( 2mg 生物素，10ml水，过滤除菌)
100ХAA 1.0ml （过滤除菌）
DDW 8.8ml
将1、2 两种溶液混合，加热后倒平板，每个平板10ml.共10个平板。
YPD培养基（100）：Yeast extract 1g
Peptone 2 g
10×D 10ml 加水至100ml，高压灭菌
三、实验步骤
I、线性化质粒的制备
SacI酶切质粒3小时
酶切体系（根据质粒浓度而定，保定质粒浓度DNA大于1μg/μl）
DDW 33μl
BufferI 5μl
质粒 10μl
SacI 2μl
和电泳检测酶切结果，回收质粒
II、酵母感受态细胞的制备：
1、按1：100将300μl保种菌接种于3mlYPD培养基中30℃揺菌过夜（约15h）
2、取活化的菌液100μl接入100mlYPD液体培养基30℃揺菌过夜，至OD600 =1.3-1.5（12-15h），收集菌体制备感受态细胞。
3、4℃ 3000g离心5分钟，弃上清，向沉淀加5ml无菌DDW重悬，补加冰预冷的无菌水至250ml
4、4℃ 10000rpm离心5分钟，重悬于25ml冰预冷的无菌水中
5、4℃ 10000rpm离心5分钟，重悬于5ml冰预冷的山梨醇中
6、4℃ 10000rpm离心5分钟，重悬于0.25ml冰预冷的山梨醇中
7、按照80μl每管分装于1.5mlEP管中，立即使用或于-20℃存放
III、电转化
1、将感受态细胞80μl加入10μl（5-20μg）线性化质粒，混匀，加入到冰预冷的电转杯中，冰上放置5分钟。
2、设置电转仪于真核细胞程序，电转条件：1.5KV 25μF 250Ω
IV、阳性克隆筛选
1、电转成功后，将菌液涂于RDB板上，30℃恒温培养箱培养2-3天，观察克隆生长状况。
2、长出克隆后挑选单菌落作PCR，鉴定其是否为阳性克隆。若获得阳性克隆则揺菌保种，划线鉴定，小量表达，电泳检测
目的基因。
实验七重组蛋白的表达及western blot 鉴定
表达试剂：10×D 10×YNB 500×B（实验六中已配）
10×GY： 10ml甘油，90ml水，高压灭菌。
10×M：5ml 甲醇加水至100ml，过滤除菌。
1M磷酸钾缓冲液（ph6.0）:13.2 ml1M K2HPO4,86.8ml 1M KH2PO4,调至PH6.0。
（1M K2HPO4：22.822g，80ml水溶，定容至100ml；1M KH2PO4：6.8g，40ml水溶，定容至50ml）
BMGY培养基：4gYE，8gTryptone，280mlDDW，高压灭菌后，超净台中加10×GY，10×YNB，1M磷酸钾缓冲液（ph6.0）各40ml，0.8ml 500×B
BMMY培养基：1gYE，2gTryptone，70mlDDW，高压灭菌后，超净台中加10×M，10×YNB，1M磷酸钾缓冲液（ph6.0）各10ml，0.2ml 500×B
挑酵母重组子接种于3ml YPD，摇菌过夜（16h），转接于400ml BMGY培养基摇培24h，静置4h左右，倒掉上清，加入100mlBMMY，摇培30h左右，添加1ml
甲醇，24h后再添加1ml甲醇，24h后收菌，12000rpm 离心15min，留上清。western blot 鉴定
样品准备
不同发酵时间的发酵液（900ul），TCA-丙酮沉淀法沉淀蛋白。
1加脱氧胆酸钠至0.02％终浓度，混匀室温放置至少15min
2加100％TCA至10％终浓度，混匀，室温至少放置1h
3 4度14000转离心10分钟，弃上清，倒置干燥
3 加冰预冷的丙酮，混合，低温放置至少20分钟
5 4度最高转速离心10分钟，倒上清，倒置干燥丙酮
30ul一乘上样缓冲液溶解沉淀，沸水煮5分钟
总体时间3小时
所用试剂：
转膜缓冲液：（48mmol/L Tris，39mmol/L甘氨酸，0.037％ SDS，20％甲醇）甘氨酸（MW75.07） 2.9g
Tris（MW121.14） 5.8g
SDS 0.37g
甲醇 200ml
蒸馏水至 1000ml
溶解后室温保存，此溶液可重复使用3～5次（此溶液最好保存在4度冰箱，最多使用5次左右，不然影响转移效率）。（先用蒸馏水溶解甘氨酸、Tris和SDS，然后再加入甲醇，最后补足液体。如果先加入甲醇，溶解甘氨酸、Tris和SDS等比
较困难）（可以配制成2×转移缓冲液进行保存，稀释后使用）
TBS缓冲液：（10mM Tris-Hcl pH7.5, 150mmol/L NaCl）
1 mol/L Tris·HCl（pH7.5） 10ml
NaCl 8.8g
蒸馏水至 1000ml
（可以配制成10×TBS缓冲液进行保存，稀释10倍使用）
10×TBS: Tris 12.11g ，NaCl 88g
蒸馏水至 900ml，调节pH至7.5，定容1000ml
Tris 4.844g ，NaCl 35.2g 。蒸馏水至 350ml，调节pH至7.5，定容400ml
TBST缓冲液：（含0.05％Tween20的TBS缓冲液）
20％Tween20 1.65ml
TBS 700ml
混匀后即可使用，最好现用现配。
封闭液：脱脂奶粉 5g
TBST 100ml
最好现用现配。
或者用含5%BSA的TBST
溶解后4℃保存。使用时，恢复室温，用量以盖过膜面即可，一次性使用。
一．制备凝胶
样品制备过程中，制备凝胶
5％浓缩胶12％分离胶
配制凝固时间：分离胶30分钟，浓缩胶50分钟
电泳时间：80V二十分钟，100V 100分钟左右。
可以降低电压，60V 80V
滤纸和膜的准备 (在电泳结束前20分钟应开始准备工作)。
A. 检查是否有足够的transfer buffer，没有立即配制。
B. 检查是否有合适大小的滤纸和膜。
C. 将膜泡入甲醇中，约1-10分钟。再转入transfer buffer中。
D. 将合适的靠胶滤纸和靠膜滤纸分别泡入transfer buffer 中。
转膜
1.准备6张和凝胶大小相近的滤纸和1张PVDF膜。切滤纸和膜时一定要戴手套，因为手上的蛋白会污染膜。
2.甲醇活性化PVDF膜：一般活化5-10min，用镊子捏住膜的一边轻轻置于有甲醇的培养皿里浸泡。
3.转膜液浸泡：将电泳好的凝胶剥下，去掉浓缩胶，切割成合适大小，注意目的条带的位置。在加有转移液的培养皿中放入切好的凝胶、平头镊子、一支玻璃棒、滤纸、浸过的膜。
4.在转膜液中对齐三层滤纸，用平头镊子赶出滤纸层中的气泡，夹出放在转膜仪上；分离胶盖于滤纸上，用手调整使其与滤纸对齐，轻轻用玻璃棒轻轻擀去气泡（由中间向两边赶）。将膜盖于凝胶上，要盖满整个胶（膜盖下后不可再移动）并除气泡。在膜上盖3张滤纸并除去气泡。擀几下就可合起夹子。整个操作要不断的擀去气泡。
5.盖上转膜仪上盖，设置好电压和时间。一般用半干转膜仪10V 45-60min
6转完后将膜用1×丽春红染液染1-2min（平头蘖枝夹住边缘，轻轻浸入染液）。然后用水冲洗掉没染上的染液就可看到膜上的蛋白（超纯水多洗两遍，）。将膜晾干备用。
封闭：将膜用TBS从下向上浸湿后，移至含有封闭液的培养皿中，室温下脱色摇床上摇动封闭2h。用TBS将膜上的封闭液洗去(轻轻晃晃就可)。
孵育一抗：一抗用封闭液（或者用含有5%BSA的TBST）稀释至适当浓度（在1.5ml 离心管中）；将PVDF膜放入PE手套中，用封口机将膜封闭，将抗体溶液
加到膜的蛋白面（转膜时做好标记）赶出残留气泡；室温下孵育2h后，
用TBST在室温下脱色摇床上洗3次（多洗几次，多加TBST），每次10min；
再用TBS洗一次， 5min。
孵育二抗：同上方法准备稀释二抗，摇床，室温下孵育1h后，用TBST在室温下脱色摇床上洗3次，每次10min；再用TBS洗一次，5min。
一抗推荐稀释比例：1:200-1:2000
二抗推荐稀释比例：1:5000-1:100,0000
先前做过两次实验：一抗1:500，二抗1:2000，背景较重，出现非特异条带。
这次做可以先把二抗浓度改为1:20000，一抗：1:500 1:1000
DAB显色
DAB（3,3二氨基联苯胺）和HRP反应产生棕色的不溶终产物。这种棕色沉淀不溶于酒精和其它有机溶剂，对于必需使用传统复染和封固介质的免疫组化染色应用特别理想。
对于AP标记的二抗我们选用BCIP and NBT 显色，它们在碱性磷酸酶（AP）作用下反应可生成一种不溶性黑紫色沉淀的强信号。
ECL灵敏度比DAB高不少
实验八重组蛋白的纯化
上步所得上清，进行65%硫酸铵沉淀，每100ml上清加39.8硫酸铵（冰上操作，手动搅拌，不要剧烈），4°放置2h（可过夜）。12000rpm 离心15min，2ml Tris 缓冲液溶解，将溶解的液体放入透析袋，透析约16h，每隔6h换一次透析液，透析完毕后过离子交换层析柱（Q柱）。
5×Tris缓冲液： Tris 12.114g/L PH调至8.0
1×Tris缓冲液：5×Tris缓冲液稀释4倍
300mM NaCl洗脱液： 3.5064g NaCl，200ml 1×Tris缓冲液
500mM NaCl洗脱液：5.844g NaCl，200ml 1×Tris缓冲液
1M NaCl洗脱液：11.688g NaCl，200ml 1×Tris缓冲液
常见实验室仪器设备清单!(附实验室图)
一、疾病预防控制中心实验室仪器设备清单 1 气相色谱仪：定性定量分析 2 阿贝折射仪：测透明半透明液体或固体的折射率和平均色散 3 氨气分析仪：测样品中氨的含量 4 测汞仪：测固、体液体样品中汞含量 5 电导率仪：测电解质溶液电导率值 6 二氧化硫测定仪：大气环镜中二氧化硫浓度的自动监测 7 二氧化碳测定仪：大气环镜中二氧化碳浓度的自动监测 8 离子交换纯水器：使用离子交换法制纯水 9 粉层采样器：该采样器适用于煤矿及其它粉层作业环镜中进行粉层采样 10 光电浊度仪：测量浊度 11 光照度计：测定光照强度 12 火焰光度计：监床化验用病理研究 13 激光粉层仪：检测粉层浓度 14 紫外可见分光光度计：测量物质对不同波长单色辐射的吸收程度、定量分析 15 紫外辐射照度计：紫外辐射照度测量 16 自动量程照度计：测定光照强度 17 自动旋光仪：测物质旋光度，分析物质的浓度、纯度、含糖量 18 酶标仪：定性定量 19 冷原子荧光测汞仪：专用测贡仪器，测痕量贡 20 离子计：测离子浓度 21 CO分析仪：测大气环镜中一氧化碳含量 22 双道原子荧光光度计：固、液体中汞、砷、硒、锑、锗、锡含量测定析 23 手持糖量计：测体的含糖量 24 生化分析仪：测定样品的浓度，酶反映速率和酶的活性等数十种生化参数 25 洗板机：与酶标仪配套使用 26 微量可调移液器：移微量液体 27 显微镜：观察微小物质 28 荧光分光光度计：分析和测试各类微生物，氨基酸、蛋白质、核酸及多种监床药物 29 医用净化工作台：提供无尘无菌高洁净工作环镜 30 便携式红外线人析器：测定公共场所中的CO2浓度 31 电子微风仪：适用于工厂企业通风空调，镜污染览测动压平衡自动跟踪等速烟尘采样器的采样 32 放射性污染计量仪：测试放射性污染是否超标 33 热敏电阻（测辐射热计）：用于辐射探测 34 紫外光功力计：测试检测紫外光功率 35 热球式电风速仪：测定室内外或模型的气流速度时，是一种测量低风速的基本仪器 36 红血蛋白仪：检测血红蛋白
实验室常用仪器
口罩respirator试验管tube 耐酸橡胶手套rubber gloves试管架test tube rack (acid resistance)药匙lab spoon 洗瓶plastic wash bottle 钳子pliers玻璃搅棒glass stirring stick 扳子spanner研钵mortars 螺丝刀screw driver研棒pestles 多用电源插座multi-purpose socket冰盒ice box 复印纸copy paper液氮罐Dewar flask 笔记本note book 记号笔marker pen培养皿culture dish 夹子clip皮氏培养皿petri dish 擦镜纸wiper for lens培养三角瓶culture flask 标签纸paper label接种环inoculating loop 打火机lighter接种针inoculating needle 温度计thermometer过滤灭菌器syringe filters 定时器timer镊子forceps 棉线（细绳）cotton rope剪刀scissors 橡皮圈rubber band解剖刀片scalpel blade 清洁布rag解剖刀柄scalpel handle 牛皮纸kraft paper酒精灯alcohol burner 塑料筐plastic basker样品推车lab cart 塑料桶plastic basin 保温桶thermos封口膜parafilm wrap and dispenser 不锈钢盘stainless steel tray塑料膜plastic film 搪瓷盘enamel tray保鲜膜cling film 铝箔纸aluminum foil 烧杯beaker脱脂棉absorbent cotton 三角瓶、烧瓶flask 容量瓶volumetric flask铁架台iron support 量筒graduated cylinder石棉网asbestos board 移液器pipette玻璃干燥器glass desiccator 移液管serological pipette三角漏斗funnel 吸耳球bulb for pipet布氏漏斗buchner funnel 移液管架pipet rack玻璃漏斗glass funnel 离心管架centrifuge tube rack酸碱滴定管Burette
实验室常用器材使用方法及注意事项
实验室常用器材使用方法及注意事项
实验室常见仪器使用方法及注意事项 一、常见的仪器 （一）初中化学实验常见仪器 反应容器可直接受热的：试管、蒸发皿、燃烧匙、坩埚等能间接受热的：烧杯、烧瓶、锥形瓶（加热时，需加石棉网） 常存放药品的仪器：广口瓶（固体）、细口瓶（液体）、滴瓶 （少量液体）、集气瓶（气体） 用加热仪器：酒精灯 计量仪器：托盘天平（称固体质量）、量筒（量液体体积） 仪分离仪器：漏斗 取用仪器：药匙（粉末或小晶粒状）、镊子（块状或较大颗粒）、胶头滴管（少量液体） 器夹持仪器：试管夹、铁架台（带铁夹、铁圈）、坩埚钳其它仪器：长颈漏斗、石棉网、玻璃棒、试管刷、水槽 不能加热：量筒、集气瓶、漏斗、温度计、滴瓶、表面皿、广口瓶、细口瓶等 1、试管 （1）、用途： a、在常温或加热时，用作少量试剂的反应容器。 b、溶解少量固体。 c、收集少量气体的容器 d、用于装置成小型气体的发生
器。 （2）、注意事项： a、加热时外壁必须干燥，不能骤热骤冷，一般要先均匀受热，然后才能集中受热， 防止试管受热不均而破裂。 b、加热时，试管要先用铁夹夹持固定在铁架台上（短时间加热也可用试管夹夹持）。 试管夹应夹在的中上部（或铁夹应夹在离试管口的1/3处）。c、加热固体时，试管口要略向下倾斜，且未冷前试管不能直立，避免管口冷凝水倒流 使试管炸裂。 d、加热液体时，盛液量一般不超过试管容积的1/3（防止液体受热溢出），使试管与桌面 约成45°的角度（增大受热面积，防止暴沸），管口不能对着自己或别人（防止液体喷出伤人）。反应时试管内的液体不超过试管容积的1/2。 2、烧杯用途：①溶解固体物质、配制溶液，以及溶液的稀释、浓缩 ②也可用做较大量的物质间的反应 注意事项：受热时外壁要干燥，并放在石棉网上使其受热均匀（防止受热不均使烧杯炸裂）， 加液量一般不超过容积的1/3（防止加热沸腾使液体外溢）。
实验室常用仪器及其使用
实验室常用仪器及其使用 1.能区分和识别常用的仪器，了解化学实验常用仪器的主要用途 2.掌握常见反应器、加热仪器、计量仪器、分离仪器、干燥仪器的使用方法 3.能懂得选择合适的实验仪器进行实验，会绘制简单的仪器装置图 4.知道质谱仪、核磁共振仪、红外光谱仪等现代仪器在测定物质结构中的作用。 知识点1 反应器的使用方法 6.集气瓶
知识点2 计量仪器的使用方法 2.量筒 3.容量瓶 4.托盘天平 知识点3 加热、蒸发、蒸馏、结晶的仪器2.表面皿、蒸发皿
知识点4过滤、分离、注入液体的仪器 干燥管 干燥器 铁架台、 铁夹 试管夹 坩埚钳 二、质谱仪、核磁共振仪、红外光谱仪等现代仪器在测定物质结构中的作用 1.质谱仪 用途 。 2．核磁共振仪 用途 。 3．红外光谱仪
【例1】下列实验中所选用的仪器合理的是（） A. 用200mL量筒量取5.2mL稀硫酸 B. 用250mL容量瓶配制250mL0.2mol/L的氢氧化钠溶液 C. 用托盘天平称量11.7克氯化钠晶体 D. 用碱式滴定管量取25.1mL溴水 解析：这是一道考查称量仪器使用的题目。选用量筒时应注意选合适规格，量取5.2mL 稀硫酸要用10mL量筒，所以A不正确；滴定管量取液体时应精确到0.01mL，所以D不正确。 托盘天平可称量精确到0.1克，一般配制多大体积的溶液就选用多大体积的容量瓶。 答案：BC 【变式】准确量取25.00 mL高锰酸钾溶液，可选用的仪器是（ C ） A . 50 mL量筒 B. 10 mL量筒 C. 50 mL酸式滴定管 D. 50mL碱式滴定管【例2】一支40mL碱式滴定管注入苛性钠溶液后，液面正好在10mL刻度处，则苛性钠溶液体积为（） A . 10mL B. 大于10mL C. 30 mL D. 大于30 mL 解析：滴定管的0刻度线在上方，40mL刻度线下至尖嘴处仍有溶液，所以大于30 mL 答案：D 【变式】下列量器和温度计的刻度表示正确的是（CD） A.量筒的刻度值是由下向上增大，“0”刻度在下 B.250毫升容量瓶上一般刻有30℃250毫升的标记 C.滴定管的刻度值由上而下增大，“0”刻度在上 D.温度计的刻度是由下而上增大，“0”在有刻度标记区域 【例3】现有下列仪器或用品：①铁架台（含铁圈，各种铁夹）；②锥形瓶；③酸式滴定管与碱式滴定管；④烧杯（若干）；⑤玻璃棒；⑥胶头滴管；⑦天平（含砝码）；⑧滤纸；⑨量筒；⑩过滤漏斗。 （1）过滤时，应选用的上述仪器是（填编号）。 （2）配制一定物质的量浓度的溶液时，还缺少的仪器是。 （3）在中和滴定使用滴定管前，首先应。 解析这类试题的解题方法是首先看题目选项的具体操作。联想该操作的仪器、方法、注意事项等，对比题目中所给的仪器进行组合，看仪器是否完全具备进行某一项实验，这样才能得出正确结论，有时试题是给出一些仪器来完成某些实验操作，而所给的仪器不全，其解题方法与之类似，即通过联想完成。 答案（1）过滤所用的仪器有：铁架台、烧杯、玻璃棒、滤纸、过滤漏斗。 （2）配制一定物质的量浓度的仪器有：天平（含砝码）、容量瓶、烧杯、玻璃棒、胶头滴管。 （3）检查活塞是否漏水，在确保不漏水后方可使用。
生物化学实验技能大赛实验设计书
邻二氮菲法测定蔬菜中铁的含量 摘要 用邻二氮菲分光光度法直接测定蔬菜中的铁含量，方法简便、快速、准确，为指导人们合理食用蔬菜进行补铁及进一步开发蔬菜产品提供了可靠的理论依据[1 2]。 关键词蔬菜铁含量邻二氮菲 1.前言 铁作为必需的微量金属元素，对于人体的健康十分重要。铁是血红蛋白、肌红蛋白、细胞色素及其它酶系统的主要组分，可协助氧的运输，还能促进脂肪的氧化。蔬菜是人们摄取微量铁的主要途径之一，缺铁可造成贫血并容易疲劳，而过多则会导致急性中毒。所以，蔬菜中铁含量的测定具有重要的营养学意义，可为指导人们合理食用蔬菜进行补铁以防治缺铁性贫血，提供可靠的理论依据。 2.实验目的 综合运用所学知识，用仪器分析法测定金属元素含量；练习灵活运用各种基本操作和查阅资料的能力。 3.实验原理 蔬菜中金属元素常与有机物结合成难溶或难于解离的物质，常采用有机物破坏法是被测的金属元素以氧化物或无机盐的形式残留下来，以便测定。本实验采用有机物破坏法（干法），即在高温下加入氧化剂，使有机物质分解。根据不同浓度的物质具有不同的吸光度，采用分光光度法来测定蔬菜中的铁含量。在pH值4～6的条件下，以盐酸羟胺将三价铁还原为二价铁，二价铁再与邻二氮菲（phen）生成桔红色络合物［3］，用分光光度计在510nm测定蔬菜中铁的含量。 盐酸羟胺还原三价铁的反应如下： 2 Fe3++2NH2OH·HCl→2 Fe2++N2+2H2O+4H++2Cl- 邻二氮菲与二价铁的反应式如下： Fe2+ + 3(phen) =Fe(phen)3 4.实验器材 722型分光光度计（1台），电子天平（1台）蒸发皿（4个），100mL容量瓶(4个)，
实验室仪器清单
. . . . . 1、实验室常用仪器设备清单
2、选用及科研要求的仪器
3. 其它重要补充 1酸度计:测HP 值 2电导率仪:测电解质溶液电导率值 3旋光仪（自视自动）:测物质旋光度，分析物质的浓度、纯度、含糖量 4气相色谱仪:定性定量分析 5液相色谱仪:定性定量分析 6自动定位滴定仪:酸碱滴定、氧化还原滴定、沉淀滴定、络合滴定 7智能崩解仪:在设定温度（人体温度下）进行药片崩解实验 8药物溶出度仪:在设定温度（人体温度下）进行药片崩解实验 9脆碎度检查仪:在设定转速下进行药片脆碎度检验 10熔点仪:测量结晶性化学制品、药品和部分结晶聚合物熔点 11澄明度检测仪:观察溶液澄清程度，有否颗粒物 12紫外辐射照度计:紫外辐射照度测量 13紫外可见分光光度计:测量物质对不同波长单色辐射的吸收程度，定量分析14可见分光光度计:测量物质对不同波长单色辐射的吸收程度，定量分析 15微量进样器:液相、气相色谱分析中使用 16阿贝折射仪:测透明半透明液体或固体的折射率和平均色散 17原子吸收争光光度计:根据被测元素的基态原子对特征辐射的吸收程度进行定量分析 18荧光分光光度计:分析和测试和类微生物、氨基酸蛋白质、核酸及多种监床药物 19色差计:测量药品颜色
20红外分光光度计:定性定量分析 21手持糖量计:测定溶液中糖度、含糖量
22标准旋光管旋光仪: 测旋光度标准，检验旋光仪准确度 23超净水器：制超净水 24钠离子浓度计：测钠离子浓度 25尘埃粒子计数器：测定空气中的微粒 26永停滴定仪：根据电们变化指示滴定终点的滴定用仪器 27卡尔费休水份测定仪：测产品含水量 28薄层色谱仪：定性分析 29傅立液变换红外光谱仪：定性定量分析 30紫外强度计：测紫外线强度 31三用紫外线分析仪：药物生产和研究中，可用来检查荧光药品的质量 32生物显微镜：观察微小物质 33激光粒子数计：尘埃粒子计数 34多小长飞点扫描仪：凝胶电冰、薄层板等的精密定量 35风速仪：测风速 36数字式光度表：测量可见光辐照强度 37反渗透纯水机：超纯水系统的进水，也可作一般实验室用水 38环境参数测试仪：测试环镜参数 39医用净化工作台：提供无尘无菌高洁净工作环镜 40紫外线斑点检测仪：在药物生产研究中，可用来检查荧光药品质量 41浮游菌采样器：监控空气中细菌总数和检测空气中的和种细菌 42数字白度计：测试药品白度，以及荧光样品测量 43散射光浊渡仪：测量水质浊度 44实验淘（labtaobao.)-专业级科学仪器、分析仪器、实验室设备、检测及测试设备一站式选型与价格查询信息平台。 45
分子生物学实验室常用仪器设备简介(精)
实验一分子生物学实验室常用仪器设备简介 实验室主要仪器，设备的简介及使用方法 微量移液器 微量移液器是连续可调的、计量和转移液体的专用仪器，其装有直接读数容量计。 微量移液器有多种规格，在移液器量程范围内能连续调节读数。移液器常见的四种规格分别是： 0.5～10μl(读数窗显示0.5～10.0,每转1档为0.1μl); 10～100μl(读数窗显示10.0～100, 每转1档为1μl); 20～200μl(读数窗显示20～200, 每转1档1μl); 100～1000μl(读数窗显示100～1000, 每转1档为5μl). 量液的操作步骤： 1．将微量移液器装上吸头（不同规格的移液器用不同的吸头） 2．将微量移液器按钮轻轻压至第一停点； 3．垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液样面下几毫米，千万不要将吸嘴直接插到液体底部；4．缓慢、平稳地松开控制按钮，吸上样液。否则液体进入吸嘴太快，导致液体倒吸入移液器内部，或吸入体积减少； 5．等一秒钟后将吸嘴提离液面 6．平稳地把按钮压到第一停点，再把按钮压至第二停点以排出剩余液体； 7．提起微量移液器，然后按吸嘴弹射器除去吸嘴。 量液操作注意问题： 1．未装吸嘴的微量移液器绝对不可用来吸取任何液体。 2．一定要在允许量程范围内设定容量，千万不要将读数的调节超出其适用的刻度范围，否则会造成损坏。 3．不要横放带有残余液体吸嘴的移液器。 4．不要用大量程的移液器移取小体积样品。 5. 移液器使用完后，将刻度调到最大刻度，收藏。 低温台式高速离心机 离心机的分类 低速：每分钟几千转 高速：每分钟1 ~ 3万转 超速：每分钟3万转以上 离心机的功能：分离，纯化 低速：细胞等大分子 高速：DNA，蛋白等 超速: 病毒，蛋白等，根据用途又可分为分析超速离心机和制备超速离心机。 低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段 基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术 本实验室所用离心机为台式高速离心机（IBM），配有角式转头：24×1.5ml；极限转速20000rpm 台式高速离心机使用步骤 1、把离心机放置于平面桌或平面台上，目测使之平衡，用手轻摇一下离心机，检查离心机是否放置平衡。
生化试验技术
生化试验技术 绪论 1．生物体内某一组份，大致可分为五个基本阶段： (1)确定制备物研究目的及建立相应的分析鉴定方法。 (2)制备物物理化学性质稳定性的预备试验。(3)材料处理及抽提方法的选择。 (4)分离纯化方法的摸索。(5)获得制备物以后，均一性的测定。 2 1 2 (1)呈色法；(2)色谱法；(3)光谱法；(4)电泳法；(5)核磁共振波谱法。 (6)其他:如电子显微镜观察。 理化测定方法的最大优点是实验操作简便快速，能及时指导分离制备工作。 3 3．好的分析鉴定方法必须满足以下要求: 1）特异性和专一性强；2）重现性好；3）准确度大；4）灵敏度高；5）手续简便。4．制备物的理化性质及稳定性的预试验是对一个未知物质分离制备实验设计的基础。5．材料的处理： 1）选材：（1）工业生产：材料来源丰富、含量高、成本低； （2）未知物质：只要达到实验目的即可。 2）预处理：保证材料的纯净； 3）组织破碎方法：（1）机械法：组织捣碎机，匀浆器，研钵和研磨、压榨机 （2）物理法：(1)反复冻融法(2)急热骤冷法： (3)超声波处理（3）化学及生物化学法：(1)自溶法(2)酶解法(3)表面活性剂处理⑷溶胀法6．使生物活性物质保持活性，主要措施常有如下几点： 1）采用缓冲液。2）加入保护剂。3）抑制水解酶的破坏 4）一些特殊的措施：引起生物大分子变性的因素，如紫外线、强烈搅拌、过酸过碱、高温、冻结等均应避免，有的还要求提取时无氧等。 第一章 1．蛋白质纯化从原理上分可有哪几种方法？ 1）溶解度不同：如盐析、有机溶剂分级沉淀法； 2）分配系数不同：如分配层析法3）吸附性不同：如吸附层析法； 4）在电场中运动速度不同：如电泳法5）沉降系数或密度不同：如离心法； 6）分子量不同：如凝胶过滤层析法、SDS－PAGE法； 7）生物学特性不同：如亲和层析法； 2．蛋白质分离提取的一般步骤及注意事项？ 蛋白质的分离提取的一般步骤为：一般来说，蛋白质的制备包括以下过程：
微生物实验室常用仪器配置
微生物实验室常用仪器配置 1 超净工作台（已有）微生物的培养都是在特定培养基中进行无菌培养，那么无菌培养必然需要超净工作台提供一个无菌的工作环境 2、培养箱（已有）培养箱有多种类型，它的作用在于为微生物的生长提供一个适宜的环境。生化培养箱只能控制温度，可作为一般细菌的平板培养;霉菌培养箱可以控制温度和湿度，可作为霉菌的培养;CO2培养箱适用于厌氧微生物的培养。 3、天平（已有待完善）天平用于精确称量各类试剂。实验室常用的是电子天平，电子天平按照精度不同有不同的级别。 4、微生物均质器（无）用于从固体样品中提取细菌。用微生物均质器制备微生物检测样本具有样品无污染、无损伤、不升温、不需要灭菌处理，不需洗刷器皿等特点，是微生物实验中使用较为方便的仪器 5、菌落计数器（无）菌落计数仪可协助操作者计数菌落数量。通过放大，拍照，计数等方式准确的获取菌落的数量。有些高性能的菌落计数器还可连接电脑完成自动计数的操作。 微波炉/ 电炉用于溶液的快速加热，微生物固体培养基的加热溶化。 7、高压灭菌锅（已有坏）微生物学所用到的大部分实验物品、试剂、培养基都应严格消毒灭菌。灭菌锅也有不同大小型号，有些是手动的，有些是全自动的。用户需要根据自己的需要选购。 8、移液器（无）液体量器用于精密量取各类液体。常见的液体量器有量筒、移液管、微量取液器、刻度试管、烧杯。 9、低温冰箱（已有）冰箱是实验室保存试剂和样品必不可少的仪器。微生物学实验中用到的试剂有些要求是 4 度保存，有些要求是负20 度保存，实验人员一定要看清试剂的保存条件，放置在恰当的温度下保存。 11、摇床（已有）摇床是实验室常用的一种仪器，在微生物实验操作过程中，液体培养基培养细菌时需要在特定温度下振荡使用。 12、纯水装置 13、生物显微镜（无）由于微生物体积较小，所以在观察时需要借助生物显微镜。生物显微镜用于微生物和微小物品结构，形态等的观察。 16、恒温干燥箱 17、恒温水浴锅（已有------ 其他实验室） 水浴锅是一种控温装置，水浴控温对于样品来说比较快速且接触充分。有些微生物反应需要在37度，42度，56度下水浴进行，所以恒温水浴锅可以提供需要的温度。 （18）酸度计（无） 用于配置试剂时精确测量PH 值，从而保证配置的溶液的精确性。有时也需要利用pH 计测定样品溶液的酸碱度。 （19）离心机（无）用于收集微生物菌体以及其他沉淀物。离心机有冷冻和常温之分。 有些样品由于在常温下不太稳定，需要低温环境，要视样品的种类而定。 20 接种仪器：试管（有）、接种针、牛角勺（无）、药勺、接种环、接种钩，解剖刀、培养皿（无）、镊子、酒精灯、接种锄、玻璃刮刀（无）
生化实验五大技术
生化实验五大技术 一.分光光度技术 1.定义:根据物质对不同孩长的光线具有选择性吸收,每种物质都具有其特异的吸收光语。而建立起来的一种定t 、定性分析的技术。 2.基本原理:（图1-1光吸收示意） 透光度T=It/lo 吸光度A=lg(lo/ I1) 朗伯-比尔(lambert-Beeri)定律:A=KLc K 为吸光率，L 为溶液厚度(em), c 为溶液浓度 (mol/L)] 摩尔吸光系数日ε:1摩尔浓度的溶液在厚度为 I.cm 的吸光度。 c=A/ε 3. 定量分析: (1)标准曲线(工作曲线)法 (2) 对比法元-KCLCx (3)计算法: e=A/ε (4)差示分析法(适用于浓度过浓成过稀) (5) 多组分湖合物测定 4.技术分类 分子吸收法&原子吸收法:
可见光(400-760 nm) &紫外光(200~ 40m) &红外光(大于760 nm)分光光度法； 5.应用方向 有机物成分分析&结构分析红外分光光度法测定人体内的微量元囊原子吸收分光光度法 二电脉技术 1.定义:带电荷的供试品在情性支持介质中，在电场的作用下，向其对应的电 极方向按各自的速度进行脉动。使组分分离成族窄的区带，用透宜的检洲方法记录其电泳区带图请或计算其百分含量的方法。 2.基本原理: 球形质点的迁移率与所带电成正比，与其半径及介质粘度成反比。v=Q/6xrη 3.影响电泳迁移率的因素: 电场强度电场强度大，带电质点的迁移率加速 溶液的PH值: 溶液的pH离pl越远，质点所带净电荷越多，电泳迁移幸越大 溶液的离子强度:电泳液中的高子浓度增加时会引起质点迁移率的降低 电渗:在电场作用下液体对于固体支持物的相对移动称为电渗 4:技术分类: 自由电泳(无支持体) 区带电泳(有支持体):法纸电泳(常压及高压)，博层电泳(薄膜及薄板).凝波电泳(琼脂，琼脂糖、淀粉胶、柔丙烁配胶凝胶)等 5. 电泳分析常用方法及其特点: 小分子物质滤纸、纤维素、硅胶薄膜电泳复杂大分子物质凝胶电泳 ⑴醋酸纤维素薄膜电泳 ①这种薄顺对蛋白质样品吸阴性小，消除纸电沫中出现的“拖尾”现象 ②分离理应快，电泳时间短 ③样品用最少: ④经过冰最酸乙醉溶液或其它看明液处理后可使膜透明化有利丁对电泳图潜的光吸收措测店和爱的长期保 ------别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测(胰岛素、游菌酶、胎儿甲种球
生化实验室的仪器
实验主要仪器 仪器一、净化工作台 仪器名称：单人单面净化工作台 型号：SW-CJ-1D型 用途: 超净工作台是一种通用型局部净化设备。它能有效地排除工作区域空气中悬浮粒子和工艺粉尘对制品的有害影响，在我们实验室用于取酶液、接种和镜检等实验操作。 注意事项： 1）、挡风玻璃在进行上下移动使用时，请不要用力过猛，以免发生玻璃破环或伤人。 2）、风机风量的调整方法：以慢、快速二档的轻触键加以控制，送风机的转速得以实践。3）、为杜绝强紫外光对操作人员的侵害，在使用照明灯时，杀菌灯则无法开启使用。 4）、一般使用紫外线杀菌灯进行工作消毒时，应在正式操作前开风机，开灯为宜。 故障及排除： 故障现象原因排除方法 总电源开关和不上，自动跳闸1、风机卡斯导致电动机堵转， 或者线路有短路。 1、调整风机轴位置，或者更换叶轮和 轴承，检查线路是否完好 2、对照电路图，逐点检查线路、元器 件对外壳的绝缘电阻，修复绝缘故 障部位 风速较低1、初效过滤器积尘过多。 2、高效过滤器失效。 1、清洗初效过滤器。 2、清洗高效过滤器 风机不转 1、接触器不工作 2、风机电源熔芯已熔断。 1、检查接触器线路是否正常。 2、更换熔芯 应关灯不亮 1、灯管或继电器损坏 2、灯管电源熔丝已熔断 1、更换灯管或继电器 2、更换熔芯 注意事项：如何请洗或除尘 仪器二、恒温振荡器 仪器名称：恒温振荡器 型号：DHZ-D、THZ-D、ZD88-A 用途：主要用于菌种液体（摇瓶）的培养，做OD660、OD280测定和曲线的绘制 使用须知： 一、工作环境：仪器应放在清洁整齐，干燥通风的工作间内，场地平稳坚固，使其在水平状态下工作，不让阳光直射振荡器；工作电流稳定，确保工作安全；在振荡器内放置实验样品，锥形瓶之间保持适当间隙，以利热空气的对流循环。 二、使用方法： 1接通电源，打开电源开关 2.控制板上有温度控制和转速控制 2-1温度控制 温度设定方法:按Func/date键一次,看到温度值闪动后,按增大或减小键设定温度,实验室一般设为37℃,再按Func/date键一次进行确认,最后按Run/stop键执行. 2-2转速控制 转速控制方法与温度控制方法相同,连续按Func/date键三次,看到转速值闪动后,按增大或减小键设定温度,实验室一般设为180rmp,再按Func/date键一次进行确认,最后按Run/stop键执行. 3.单一设定时间或速度方法 例如要设定速度则连续按三次功能/数据键,前三位速度闪动后,用增大键或减小键,设定后按一下
生化试验基本技术
第二章生化实验基本技术 第一节离心分离技术 离心是蛋白质、酶、核酸及细胞亚组分分离的最常用的方法之一，也是生化实验室中常用的分离、纯化的方法。尤其是超速冷冻离心已经成为研究生物大分子实验室中的常用技术方法。离心机(centrifuge)是实施离心技术的装置。离心机的种类很多，按照使用目的，可分为两类，即制备型离心机和分析型离心机。前者主要用于分离生物材料，每次分离样品的容量比较大，后者则主要用于研究纯品大分子物质，包括某些颗粒体如核蛋白体等物质的性质，每次分析的样品容量很小，根据待测物质在离心场中的行为(可用离心机中的光学系统连续地监测)，能推断其纯度、形状和相对分子质量等性质。这两类离心机由于用途不同，故其主要结构也有差异。 一、离心原理 离心技术的主要原理就是将样品放入离心机转头的离心管内，离心机驱动时，样品液就随离心管做匀速圆周运动，于是就产生了一个向外的离心力。由于不同颗粒的质量、密度、大小及形状等彼此各不相同，在同一固定大小的离心场中沉降速度也就不相同，由此便可以得到相互间的分离。 (一)离心力和相对离心力 离心力的单位为g，即重力加速度(980.6cm/S2)，离心力的大小可根据离心时的旋转速度V(r/min 每分钟转数，revolution per minute)和物体离旋转轴中心的距离r(cm)按下式计算：g=r×V2×1.118×10或按下式计算所需的转速：()r 89445 =。 ? V／ g 离心技术是根据微小颗粒物质在离心场中的行为建立并发展起来的。离心机的转头能够以稳定的角速度做圆周运动，从而产生一个强大的辐射向外的离心力场，它赋予处于其中的任何物体一个离心加速度，使之受到一个外向的离心力，其定义为： F = mω2r 式中：F为离心力的强度；m为沉降颗粒的有效质量；ω为离心转子转动的角速度，其单位为rad/s；r为离心半径(cm)，即转子中心轴到沉降颗粒之间的
实验室常用仪器简介
实验室常用仪器简介 点击次数：412 发布时间：2010-8-4 显微镜用于放大微小物体成为人的肉眼所能看到的仪器 电子称电子称是用来对货物进行称重的自动化称重设备，通过传感器的力电转换，经称重仪表处理来完成对货物的计量，适用于各种散货的计量。 电子秤电子秤是用来对货物进行称重的自动化称重设备，通过传感器的力电转换，经称重仪表处理来完成对货物的计量，适用于各种散货的计量。 离心机该机适用于生物，化学，遗传学，医药学，医院，实验室对学业，生物体，叶绿素，蛋白核酸等液体混合物的分离。 测厚仪测厚仪用来测量不同单一材料或者覆盖层的厚度，分无损和有损两种，其中大部分是无损的。 切割机电阻切割机用于切割电阻.电容.晶体管等,可连续工作.效率高.切口整齐平滑等特点. 硬度计硬度计是测量各种材料硬度的仪器，分为洛氏、维氏、布氏、邵氏、里氏、消氏等不同类别。 抛光机在金相试样制备过程中，试样的抛光是一道主要工序，经过磨光的试样，在抛光机上抛光后，可获得光亮如镜的表面，它具有传动平稳、噪音小、操作、维修方便等优点。该机的抛光盘直径和传递功率均大于国内同类产品，能适合更多种材料的抛光要求。 电子天平是实验室分析或质量控制所必须的仪器，具有称量大，精度高，在较差使用环境下亦可达到精密称量的要求。 测温仪是温度计的一种，用红外线的原理来感应物体表面温度，操作比较方便，特别是高温物体的测量。应用广泛，如钢铸造、炉温、机器零件、玻璃及室温、体温等各种物体表面温度的测量。 干燥箱干燥箱是一种常用的仪器设备,主要用来干燥样品,也可以提供实验所需的温度环境.干燥箱应用与化工,电子,铸造,汽车,食品,机械等各个行业. 放大镜是用来对细小物体的放大以观察、识别、鉴定等最普通而方便、有效的仪器，有台式、便携式、带光源、带刻度等多种选择，可以应用于各行各业。 分光光度计常用分析仪器之一，常用于样品的定性与定量的分析，或透射、反射等光谱分析。广泛应用于医药，食品，石油，建材等各个领域 电导率仪电导率仪是适用于精密测量各种液体介质的仪器设备,主要用来精密测量液体介质的电导率值,当配以相应常数的电极可以精确测量高纯水电导率，广泛应用各领域的科研和生产. 粘度计一种用于测量液体的粘性阻力与液体的动力粘度的仪器，广泛应用于油脂、油漆。 千分尺外径千分尺：广泛用于长度厚度的测量。外径千分尺现在分为数显和机械两大类，数显的精度一般都是0.001mm,机械的分为两种，有0.01mm也有0.001mm 内径千分尺广泛应用于孔径直径，沟槽宽度的测量。其也分为两个大类：两点接杆式的内经千分尺，和三点式的三爪内径千分尺。两点式一般测量比较大的孔径，最长可以到6米。三爪主要测量小孔径，最小可以到达3.5mm的孔径。需要注意的是，三爪分为通孔和盲孔。 电流表电流表是测定电流强弱和方向的电学仪器。分直流电流表和交流电流表。供实验室和工业现场测试用。 温湿度计用来测定环境的温度及湿度，以确定产品生产或仓储的环境条件。也应用于人们日常生活。应
微生物实验室常用仪器配置
微生物实验室常用仪器配置 微生物学实验室是生物学领域的一个基本实验室，对于一个完备的微生物学实验室，我们需要配置哪些仪器呢?环凯为您的微生物学实验仪器配置提供如下参考。 1、超净工作台 微生物的培养都是在特定培养基中进行无菌培养，那么无菌培养必然需要超净工作台提供一个无菌的工作环境。 2、培养箱 培养箱有多种类型，它的作用在于为微生物的生长提供一个适宜的环境。生化培养箱只能控制温度，可作为一般细菌的平板培养;霉菌培养箱可以控制温度和湿度，可作为霉菌的培养;CO2培养箱适用于厌氧微生物的培养。 3、天平 天平用于精确称量各类试剂。实验室常用的是电子天平，电子天平按照精度不同有不同的级别。 4、微生物均质器
用于从固体样品中提取细菌。用微生物均质器制备微生物检测样本具有样品无污染、无损伤、不升温、不需要灭菌处理，不需洗刷器皿等特点，是微生物实验中使用较为方便的仪器。 5、菌落计数器 菌落计数仪可协助操作者计数菌落数量。通过放大，拍照，计数等方式准确的获取菌落的数量。有些高性能的菌落计数器还可连接电脑完成自动计数的操作。 6、微波炉/电炉 用于溶液的快速加热，微生物固体培养基的加热溶化。 7、高压灭菌锅 微生物学所用到的大部分实验物品、试剂、培养基都应严格消毒灭菌。灭菌锅也有不同大小型号，有些是手动的，有些是全自动的。用户需要根据自己的需要选购。 8、移液器 液体量器用于精密量取各类液体。常见的液体量器有量筒、移液管、微量取液器、刻度试管、烧杯。 9、低温冰箱 冰箱是实验室保存试剂和样品必不可少的仪器。微生物学实验中用到的试剂有些要求是4度保存，有些要求是负20度保存，实验人员一定要看清试剂的保存条件，放置在恰当的温度下保存。 10、生物安全柜 微生物实验中涉及的试剂和样品微生物有些是有毒的，对于操作人员来说伤害较大。为了防止有害悬浮微粒、气溶胶的扩散，可以利用生物安全柜对操作人员、样品及样品间交叉感染和环境提供安全保护。 11、摇床 摇床是实验室常用的一种仪器，在微生物实验操作过程中，液体培养基培养细菌时需要在特定温度下振荡使用。 12、纯水装置
生化实验报告模版
生物化学实验报告 姓名：郭玥 学号： 3120100021 专业年级： 2012级护理本科 组别：第8实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心
【实验报告第一部分（预习报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：XX】 实验目的：1、掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法 2、掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法 3、掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法 4、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法 5、了解柱层析技术 实验原理：1、蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。 2、不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。利用这些性质的差别， 可分离纯化各种蛋白质。 3、盐析法：盐析法是在蛋白质溶液中，加入无机盐至一定浓度或达饱和状态，可 使蛋白质在水中溶解度降低，从而分离出来。蛋白质溶液中加入中性盐后，由 于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化膜减弱乃 至消失。中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷 大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，蛋白质分子之间聚集而沉淀。
4、离子交换层析:离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆 的交换，利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离。 5、醋酸纤维素薄膜电泳原理：血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。 它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中 各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电 泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α 2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。 实验材料：人混合血清葡聚糖凝胶（G-25)层析柱 DEAE纤维离子交换层析柱饱和硫酸铵溶液 醋酸铵缓冲溶液 20%磺基水杨酸 1%BaCl 溶液氨基黑染色液 2 漂洗液 pH8.6巴比妥缓冲溶液 电泳仪、电泳槽 实验流程：盐析（粗分离）→葡聚糖凝胶层析（脱盐）→DEAE纤维素离子交换层析（纯化）→醋酸纤维素薄膜电泳（纯度鉴定） 实验步骤： （一）盐析+凝胶柱层析除盐：
生化实验室仪器名称中英文对照
容器类： 量杯measuring cup 烧杯beaker 不锈钢杯stainless-steel beaker 量筒measuring flask/measuring cylinder 量筒graduated flask/measuring cylinder 坩埚crucible 坩埚钳crucible clamp 坩埚crucible pot, melting pot 试管test tube 试管架test tube holder 漏斗funnel 分液漏斗separatory funnel 烧瓶flask 锥形瓶conical flask 塞子stopper 洗瓶plastic wash bottle 滴定管burette 玻璃活塞stopcock 冷凝器condenser 试剂瓶reagent bottles 玻棒glass rod 搅拌棒stirring rod 蒸馏烧瓶distilling flask 碘量瓶iodine flask 表面皿watch glass 蒸发皿evaporating dish 容量瓶volumetric flask/measuring flask 移液管(one-mark) pipette 刻度移液管graduated pipettes 称量瓶weighing bottle 吸液管pipette 滤管filter 天平balance/scale 分析天平analytical balance 台秤platform balance 游码crossbeams and sliding weights 酒精灯alcohol burner 酒精喷灯blast alcohol burner 搅拌装置stirring device 洗耳球rubber suction bulb 研磨钵mortar 研磨棒pestle 玛瑙研钵agate mortar 瓷器porcelain 白细口瓶flint glass solution bottle with stopper 滴瓶dropping bottle 小滴管dropper 蒸馏装置distilling apparatus 蒸发器evaporator 试验用器材： 升降台lab jack 铁架台iron support 万能夹extension clamp
实验室仪器清单
１、实验室常用仪器设备清单
2、选用及科研要求得仪器
3、其它重要补充 1酸度计:测HP 值 2电导率仪:测电解质溶液电导率值 3旋光仪(自视自动):测物质旋光度,分析物质得浓度、纯度、含糖量 4气相色谱仪:定性定量分析 5液相色谱仪:定性定量分析 6自动定位滴定仪:酸碱滴定、氧化还原滴定、沉淀滴定、络合滴定 7智能崩解仪:在设定温度(人体温度下)进行药片崩解实验 8药物溶出度仪:在设定温度(人体温度下)进行药片崩解实验 9脆碎度检查仪:在设定转速下进行药片脆碎度检验 10熔点仪：测量结晶性化学制品、药品与部分结晶聚合物熔点 11澄明度检测仪：观察溶液澄清程度,有否颗粒物 12紫外辐射照度计:紫外辐射照度测量 13紫外可见分光光度计:测量物质对不同波长单色辐射得吸收程度,定量分析14可见分光光度计:测量物质对不同波长单色辐射得吸收程度,定量分析 15微量进样器:液相、气相色谱分析中使用 16阿贝折射仪:测透明半透明液体或固体得折射率与平均色散 17原子吸收争光光度计：根据被测元素得基态原子对特征辐射得吸收程度进行定量分析 18荧光分光光度计：分析与测试与类微生物、氨基酸蛋白质、核酸及多种监床药物 19色差计:测量药品颜色
20红外分光光度计:定性定量分析 21手持糖量计：测定溶液中糖度、含糖量
22标准旋光管旋光仪: 测旋光度标准,检验旋光仪准确度 23超净水器:制超净水 24钠离子浓度计:测钠离子浓度 25尘埃粒子计数器:测定空气中得微粒 26永停滴定仪:根据电们变化指示滴定终点得滴定用仪器 27卡尔费休水份测定仪:测产品含水量 28薄层色谱仪:定性分析 29傅立液变换红外光谱仪:定性定量分析 30紫外强度计:测紫外线强度 31三用紫外线分析仪:药物生产与研究中,可用来检查荧光药品得质量 32生物显微镜:观察微小物质 33激光粒子数计:尘埃粒子计数 34多小长飞点扫描仪:凝胶电冰、薄层板等得精密定量 35风速仪:测风速 36数字式光度表：测量可见光辐照强度 37反渗透纯水机:超纯水系统得进水,也可作一般实验室用水 38环境参数测试仪:测试环镜参数 39医用净化工作台:提供无尘无菌高洁净工作环镜 40紫外线斑点检测仪:在药物生产研究中,可用来检查荧光药品质量 41浮游菌采样器:监控空气中细菌总数与检测空气中得与种细菌 42数字白度计:测试药品白度,以及荧光样品测量 43散射光浊渡仪：测量水质浊度 44实验淘(labtaobao、)-专业级科学仪器、分析仪器、实验室设备、检测及测试设备一站式选型与价格查询信息平台。
生化实验室常用仪器
生化实验室常用仪器操作一览 【冷冻真空干燥机】 基本原理 高真空状态下，利用升华原理使预先冻结的物料中的水份直接从冰态升华为水蒸汽而被除去，从而使物料干燥。真空冷冻干燥广泛应用于多种产品，可确保物品中蛋白质、维生素等各种营养成份，特别是那些易挥发热敏性成份不损失，因而能最大限度地保持原有的营养成份。还能有效防止干燥过程中的氧化，可以避免营养成份的转化和状态变化。冻干制品呈海绵状、无干缩、复水性好、含水份极少，相应包装后可在常温下长时间保存和运输。 操作步骤 1、系统准备 检查系统是否清洁和干燥，真空泵与冷冻机是否连接，接通电源，检查排气口、冷冻管的密封性。 2、加样 样品需要预冷到至少－40℃，可以在深低温冰箱（－70℃）或者液氮（－196℃）中进行。打开密封管开关，搬开冷冻舱，将样品置于冷冻舱里的隔板上。关闭密封管开关。 3、冷冻 打开冷冻开关，等待20～30分钟，直到冷冻舱的温度低于－40℃。 4、抽真空 打开真空泵开关，等待10～15分钟，直到系统压力低于100 millitorr。 5、监控过程 确保系统参数（冷冻温度、真空压力）在正常范围内； 定期检查冷冻舱中的结冰情况，决定是否要除霜； 观察样品是否干燥完全，一般干燥过程需要24～72小时，视具体样品通过目测而定。 6、关闭系统 关闭总开关，接上排气管或打开密封管开关以解除真空状态。 关闭真空开关，关闭冷冻开关，取出样品。 7、系统维护 除霜：冷冻舱下面的压缩舱内如果有霜，则接上排水管，然后用少量热水（不能超过压缩舱容积的一半）促进冰霜的融化。不能通过敲击冰块来除霜。 除湿：压缩舱、冷冻舱、真空泵压缩机以及垫圈等表面的水雾均需擦干。 清洁：压缩舱、冷冻舱可以用温和的去污剂或苏打水来清洗，然后干燥并撤去排水管，并重新密封排水孔。泵油：定期检查油位，排除油雾。 注意事项 1、样品要保持冷冻，不能“回融”。 大多数溶剂的冰点高于－40℃，所以冷冻舱温度低于－40℃可以使一般样品保持冰态。 为确保样品不“回融”，可将冰冻的样品制成小于20 mm的小块。 2、有毒或有腐蚀性的样品。 最好不要用来冷冻干燥，如果一定要用，则更加需要系统维护，并需要另外定购特定的滤器以保护真空泵。 3、真空泵油需保持干净。 微黄或无色的油是干净的，颜色变深表示有酸污染，雾状浑浊表示有水污染。有污染时需要更换好油。
有机实验室常用仪器
有机实验室常用仪器与使用 旋转蒸发仪 旋转蒸发仪，主要用于在减压条件下连续蒸馏大量易挥发性溶剂。尤其对萃取液的浓缩和色谱分离时的接收液的蒸馏，可以分离和纯化反应产物。旋转蒸发仪的基本原理就是减压蒸馏，也就是在减压情况下，当溶剂蒸馏时，蒸馏烧瓶在连续转动。结构:蒸馏烧瓶可是一个带有标准磨口接口的梨形或圆底烧瓶，通过一高度回流蛇形冷凝管与减压泵相连，回流冷凝管另一开口与带有磨口的接收烧瓶相连，用于接收被蒸发的有机溶剂。在冷凝管与减压泵之间有一三通活塞，当体系与大气相通时，可以将蒸馏烧瓶，接液烧瓶取下，转移溶剂，当体系与减压泵相通时，则体系应处于减压状态。使用时，应先减压，再开动电动机转动蒸馏烧瓶，结束时，应先停机，再通大气，以防蒸馏烧瓶在转动中脱落。作为蒸馏的热源，常配有相应的恒温水槽。 催化氢化装置 催化氢化是有机化学实验中的一项重要内容之一。这一反应的具体内容是气态氢在催化剂存在下，与有机化合物进行加成或还原反应，从而生成新的有机化合物。它的优点是： （1）有些反应，如碳碳不饱和键的加氢，应用其他方法比较复杂和困难，而应用催化氢化反应，则可以方便的达到目的。 （2）它对醛酮，硝基及亚硝基化合物都能起还原作用，生成相应的醇和胺，不需要任何还原剂和特殊溶剂。氢气本身极其便宜，因而成
本低操作方便。 （3）反应完毕后，只需滤去催化剂，蒸发掉溶剂即可得到所需产物，后处理方便，产品纯度、收率都比较满意。 根据氢化时选用的压力不同，可将催化氢化分为常压氢化，低压氢化（4-5atm）及高压氢化（＞6atm）。而高压氢化则需要非常特殊的装置，（由于有较高压力），这些已超出本书的范围，但不论是在任何压力进行氢化，都不得使用明火，包括电火花。 催化氢化装置：主要包括氢化用的圆底烧瓶，气压计，量（贮）气管和平衡瓶。贮气管的体积一般在100mL到2L之间，可根据反应的规模大小选择合适的贮气量；在平衡瓶里所装的液体通常是水或汞。在反映过程中，氢气的压力大小可以通过平衡瓶的高度来调节。反应结束后，再通过平衡瓶来测量参加反应的氢气的体积。气压计可以保证在反应前后，氢气都在相同的压力下（一般为1atm）进行体积测量。 压缩气体钢瓶 在有机化学实验中，有时会用到气体来作为反应物。如氢气、氧气等，也会用到气体作为保护气，例如氮气、氩气等，有的气体用来作为燃料，例如煤气、液化气等。所有这些气体都需要装在特制的容器中。一般都是用的压缩气体钢瓶。将气体以较高压力贮存在钢瓶中，既便于运输又可以在一般实验室里随时用到非常纯净的气体。由于钢瓶里装的高压的压缩气体，因此在使用时必须严格注意安全，否则将会十分危险。