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应用ELISA试剂盒检测鸡传染性支气管炎抗体_文英

应用ELISA 试剂盒检测鸡传染性支气管炎抗体

文英1,2,杨增岐2*

(1 青海大学农牧学院,青海西宁 810003;2 西北农林科技大学,陕西杨凌 712100)

摘要:应用ELI SA 试剂盒对西宁市及乐都县344份血清样品进行了鸡传染性支气管炎抗体水平检测,结果阳性率达97 96%,其中333份样品抗体滴度在500~15000之间;1份样品的抗体滴度小于500;3份样品滴度大于15000。

关键词:鸡传染性支气管炎;ELI SA 试剂盒;抗体

中图分类号:S831 文献标识码:A 文章编号:1006-8996(2007)06-0057-03

The antibody detection of avian infectious

bronchitis virus by ELIS A test kit

WEN Ying 1,2

,Y ANG Zeng -qi

(1 College of Agriculture and Animal Husbandry,Qinghai University,Xining 810003,C hina;

2 Northwest Agriculture and Forest university,Yanglin 712100,China)

Abstract:344serum sanptes were inspected for antibody of avian infectious bronchitis virus by ELISA test kit in Xining and Ledu county.The results showed that positive rate was 97 96%,and antibody titre of 333serums were between 500-15000;One serums was below 500,and the others were above 15000.Key words:avian infectious bronchitis;ELISA test kit;antibody

鸡传染性支气管炎(infectious bronchitis,IB)是由传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus,IB V)引起鸡的一种高度接触性、致死性呼吸道疾病,是严重危害我国乃至世界养鸡业的重要疾病之一[1,2]。临床上主要呈现呼吸道、生殖道、肾脏病变和腺胃肿大等。IB V 属于冠状病毒属的冠状病毒,具有高度变异性,血清型众多,且各血清型之间的交叉较少,因而临床上很难控制[2~4],传统的IB V 主要引起呼吸道病变,但近年来报道的IBV 主要以嗜肾脏型和嗜腺胃型为主,虽然至今嗜腺胃型IBV 还未能成功地复制出临床病例,但至少已证明IBV 是引起腺胃病变的重要病原因子之一[5,6]

。因此,为了解该病的流行及免疫情况,应青海省农牧厅全省疫病调查项目要求,笔者于2006年7月应用进口IB 抗体检测试剂盒对西宁市(下辖西宁市区、湟中县、湟源县、大通县)及乐都县鸡场送检的血清样品的抗体水平进行了检测,现报道如下。

1 材料与方法

1 1 试验材料

1 1 1 ELISA 试剂盒进口IB 抗体检测试剂盒。包括IB V 抗原包被板,IBV 阴性对照血清、阳性对照血清、酶标抗体、(山羊)抗鸡抗体-辣根过氧化物酶(HRPO)结合物、样品稀释液、TMB 底物、终止液。由北京爱德士元亨生物科技有限公司(中美合作)生产,批号:0926-CB472。1 1

2 待检血清各地区养鸡场送检的血清样品,置4 冰箱备用。

1 1 3 器材精确移液管、多道移液管、吸头、96孔读数仪、样品稀释用试管、洗液吸移装置。1

2 检测步骤

收稿日期:2007-04-10

作者简介:文英(1974 ),女,青海乐都人,讲师,西北农林科技大学在读硕士研究生。*通讯作者

第25卷第6期2007年12月

青海大学学报(自然科学版)Journal of Qinghai University(Nature Science)

Vol 25No 6Dec 2007

(1)将待检血清用样品稀释液作500倍稀释,同时按试剂盒说明书要求分别设2个阳性和2个阴性对照孔,每孔加100 L 样品,室温反应30min 后洗涤,用蒸馏水洗涤3~5次。

(2)每孔加入酶标羊抗鸡抗体(HRPO)100 L,室温反应30min,洗涤程序同上。

(3)每孔加入100 L TMB 底物溶液,室温反应15min 后,每孔再加入100 L 终止液终止反应。(4)在空气中读空白数。

(5)在650nm,A(650)测量和记录吸光值。

1 3 结果判定

本试剂盒要求实际测定样品时,阳性对照孔所得的均值减去阴性对照孔所得的均值(PCX-NCX)大于0 075时,阴性对照孔所得的均值小于或等于0 150时测定结果才有效。IBV 抗体的存在与否由样品对阳性的S/P 值来决定。阳性对照是标准化的,代表鸡血清的有效抗体水平。样品抗体的相对水平由样品对阳性的S/P 比值来决定。样品的S/P 值小于或等于0 2,判为阴性,大于0 2时则判为阳性。

S/P 值=样品PCX(650)-NCX(650)/PC X-NCX

终点抗体滴度(1 500)与S/P 的关系式: L 0g 10滴度=1 09(L 0g 10S/P)+3 36

2 结果与分析

2 1 IB 检测

本次IB 检测,血清样品共计344份,其中阳性样本337份,阳性率达到97 96%。西宁市区、大通、湟源、乐都四个地区阳性率较高,达到100%,湟中地区阳性样品14份,阳性率为66 66%。详细结果见表1。

2 2 IB 抗体水平检测

对337份血清阳性样品进行IB 抗体滴度测定,其中333份样品抗体滴度在500~15000之间,

表1 IB 检测结果

地区样品数阳性数阳性率(%)西宁市区2020100 00大通124124100 00湟中211466 66湟源2121100 00乐都县158158100 00合计

344

337

97 96

占阳性样品的98 8%;湟中地区有1份样品的抗体滴度较低(小于500);乐都地区3份样品滴度较高(大于15000);有28份样品滴度在500~3000之间,其中西宁10份,其次为大通8份,湟中6份,乐都3份、湟源1份;305份样品滴度介于3000~15000之间,其中乐都152份,其次为大通116份、湟源20份、西宁10份、湟中7份。详细结果见表2。

表2 IB 抗体水平检测结果

ELISA 效价地区

乐都湟源湟中大通西宁市区样品数

500001001500~3000316810283000~1500015220711610305 150********总计

158

124

337

3 讨论

(1)IB 的抗体检测有多种血清学方法可资利用,目前常用的方法有琼脂扩散试验(AGP)、血清中和试验(SN)、间接血凝试验(I HA)、免疫荧光法(IFA)、斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)及斑点免疫金(DIGFA)等测定方法,随着分子生物学的发展,一些先进的检测方法如反转录多聚酶链式反应(RT-PC R)、限制性酶切片段长度多态性分析(RFLP)、PC R-ELISA 、核酸探针技术等也得到了应用[7~

10]

。其

中DIGFA 和PC R-E LISA 在国际上较为流行。而国内很多学者建立了ELISA 方法检测IB 抗体均取得

58 青海大学学报第25卷

理想结果[11]。本次实验采用进口的ELISA 试剂盒对鸡场所送来的血清进行检测,结果表明该试盒质量可靠,结果确实,无非特异性反应影响,是一种敏感、快速的临床检测方法。

(2)本次实验结果阳性率达97 96%,与郭世梅等[12]

报道的结果(阳性率为1 54%)差异很大,这与免疫接种有关,检出的阳性抗体为疫苗抗体。说明疫病防治工作见成效。

(3)在这次检测中出现了7个阴性样品(湟中地区),这可能与免疫密度不够或血样来源于散养鸡有关,所以要全面了解整个鸡群IB 抗体水平的基本情况,采集血样时一定要保证足够的样本数。(4)本次实验结果表明有90 5%以上鸡的抗体滴度在3000~150000之间,这与王乐义等[13]

报道的结果相接近,可以说明这些鸡场IB 抗体水平处于较稳定状态,3份样品滴度高于15000,可能与强毒感染有关,具体原因有待进一步地研究,28份样品滴度在500~3000之间,可能与鸡只的个体免疫状态有关。

(5)由于IB 是病毒引起的疾病,发病后无特效药物治疗,故对于大型鸡场做好免疫接种是预防本病的重要措施[14,15]。该病的主要传播方式为垂直传播和接触传播,平时应加强饲养管理,搞好环境卫生,防止疫苗毒株污染。参考文献:

[1]卡尔尼克B W.禽病学(第10版)[M].高福,刘文军,译.北京:中国农业出版社,1999.653-673.[2]江国托,刘思国,唐丽娟,等.鸡传染性支气管炎病毒的遗传变异[J].养禽与禽病防治,1999,(4~6):6-9.[3]张国庆,刘晶,李广兴.鸡传染性支气管炎病毒变异机制的研究进展[J].中国病毒学,2004,19(2):192-196.

[4]Lee C W,Jackwood M W.Ori gin and evolution of Georgia 98(GA98),a new serotype of avian infecti ous bronchitis vi rus[J].Virus Res,2001,80(1~

2):33-39.

[5]Wi nterfield R W,Hi tcher S B.Etiology of an infectious ne2phri tis 2nephrosi s s yndrome of chickens[J].Am J Vet Res,1962,23:1273-1279.[6]Cumming R B.Infec tious avian nephrosi s(urae mia)i n Aus2ralia[J].Aus t Vet J,1963,39:145-147.

[7]Lin Z,Kato A,Kudou Y,et al.A new typing method for the avi an infectiors bronchitis vi rus using pol ymerase chai n reaction and restrcti on enazyme

fragment length polymorphis m[J].Arch Virol,1991,116:19-31.

[8]Wit J J,M ekkes D R,Koch G,et al.Detection of specific Ig M anti bodies to i nfecti ous bronchitis virus by an anti body2capture ELISA[J].Avian

Pathology,1998,27(2):109-121.

[9]朱建国,焦新安,张如宽,等.用单抗介导的荧光抗体技术检测鸡尿囊细胞内传染性支气管炎病毒的研究[J].中国预防兽医学报,

1996,(1):6-8.

[10]李新生,陈红英,吴华,等.斑点免疫金检测鸡传染性支气管炎病毒的研究[J].河南农业大学学报,1996,30(2):116-119.[11]张国庆,刘晶,李广兴.鸡传染性支气管炎实验室诊断技术[J].畜牧与兽医,2004,(7):19.[12]郭世梅,马彩萍.海东地区8种鸡疫病血清学调查[J].青海畜牧兽医杂志,1997,27(4):39.

[13]王乐义,李升学,井冈.应用进口ELISA 试剂盒检测鸡传染性支气管炎抗体[J].中国禽业导刊,2005,22(23):31.[14]张汉成.鸡传染性支气管炎病防制措施[J].畜牧兽医科技信息,2006,(10):75.[15]刘春雨,刘宝林.鸡传染性支气管炎病防制措施[J].畜牧兽医科技信息,2006,(7):77.

(责任编辑杨君丽)

59第6期文英,杨增岐:应用ELISA 试剂盒检测鸡传染性支气管炎抗体

2017年新项目结核分枝杆菌IgGIgM抗体检测(2)

湘雅博爱康复医院开展医疗新技术新项目申请书项目名称：结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测申请人：张艳申请人职称：副主任技师所在科室：检验科申请日期：2017.06

医务部印制说明 1、开展新技术新项目是医院可持续发展的重要建设内容，但新技术新项目的开展需严格执行准入制度，并遵循伦理原则，并具有实用、有效、安全、先进等技术特点。 2、项目各栏请认真填写，如无相关内容，请填写“无”，以确认该栏无需填写相关说明；各栏填写内容较多，可另附页。 3、填写本表，如涉及伦理问题，即视为申请者已提请本院医学伦理委员会针对所申请项目进行伦理审查和评议，可不再另行提交申请表。 4、项目审批过程包括填写申请表、专家预审、医疗技术管理或/和医学伦理委员会讨论，表格填写如存在字迹潦草、内容不完整等，视为废表，将不予预审和讨论。 5、凡未履行准入并填写该申请书的新技术新项目，不得参与医院年度新技术新项目成果奖励的申报。 6、本申请书及其审批结果，是申请项目完成后进行成果申请、鉴定的重要基本支持依据。 8、申请项目获得批准后，根据申请人、申请科室承诺，管理部门有责任对批准项目进行全程追踪管理、进度检查、伦理督查，可根据完成情况给予表彰和奖励。

一、新技术新项目开展的目的及主要内容（简述）结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测基于免疫层析和胶体金显色技术开发而成的一步法检测。用于体外定性检测人血清、血浆或全血样本中的结核分枝杆菌IgG/IgM抗体。应用目前国际医学基础研究最新进展及公认的最新抗原片段，采用基因工程制备的结核抗原和胶体金免疫层析技术，在确保灵敏度和特异性的基础上，更加符合《结核病管理办法》的核心要旨：“提高肺结核患者的发现水平”进而实现快速普及和广泛应用于结核病的辅助诊断、鉴别诊断和化疗过程中的动态监测及特殊人群体检筛查等。二、该技术项目相关的国内外进展（简要说明）肺结核主要由结核分枝杆菌复合群引起的一种慢性传染病，以肺结核常见，其他器官也可受感染致病。结核病主要通过飞沫传播，传染性强，各类人群易感，接种疫苗是有效的预防方式。结核病的常用诊断方法有痰结核菌检查，影像学诊断，PPD试验，抗体诊断方法是近几年引进的结核辅助诊断方法。该技术的国内外使用单位综述：《血清中结核分枝杆菌IgG/IgM抗体检测在肺结核诊断中的应用价值》江西省胸科医院检验科实验与检验医学2015年8月第33卷第4期《结核抗体IgG/IgM检测在肺结核诊断中的应用价值》四川省绵竹市人民医院感染科实用临床医药杂志2016年第20卷第15期该技术项目的国内外参考文献：胶体金免疫层析法检测结核分枝杆菌特异性IgG/IgM抗体对结核病诊断的应用价值--《中国人兽共患病学报》现阶段结核抗体检测在我国临床应用的专家共识--《中国防痨杂志》三、该技术项目的技术原理、先进性、有效性、安全性及应用价值采用基因工程制备的结核抗原和胶体金免疫层析技术，定性检测血清中的结核分枝杆菌（IgG和IgM）。检测时，样本中的结核抗体可与胶体金标记的抗原形成结核抗体-金标抗原复合物，由于层析作用该复合物沿着试剂条向前移动，经过T1检测线时IgM抗体-金标抗原复合物与膜上包被的小鼠抗人IgM结合而显色，经过T2检测线时IgG抗体-金标抗原复合物与膜上包被的结核抗原结核

人血管内皮细胞生长因子(VEGF)定量检测试剂盒(ELISA)

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断。人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA）使用说明书【试剂盒名称】人血管内皮细胞生长因子（VEGF）定量检测试剂盒（ELISA）【试剂盒用途】定量检测人子血清、血浆及相关液体样本中血管内皮细胞生长因子（VEGF）的含量。【检测原理】本试剂盒采用双抗体两步夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将标准品、待测样本加入到预先包被人血管内皮细胞生长因子（VEGF））多克隆抗体透明酶标包被板中，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分，再加入酶标工作液，温育足够时间后，洗涤除去未结合的成分。依次加入底物A、B，底物（TMB）在辣根过氧化物酶（HRP）催化下转化为蓝色产物，在酸的作用下变成黄色，颜色的深浅与样品中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））浓度呈正相关，450nm波长下测定OD值，根据标准品和样品的OD值，计算样本中人血管内皮细胞生长因子（VEGF））含量。【试剂盒组成】 1 酶标包被板12孔×8条7 底物夜A6mL 2 标准品：1600pg/ml0.6mL 8 底物夜B6mL 3 20倍浓缩洗涤液20mL9 终止液6mL 4 标准品稀释液6mL10 说明书1份 5 样本稀释液6mL 11 封板膜1张 6 酶标试剂6mL12 密封袋1个备注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：1600、800、400、200、100、50pg/ml 【需要而未提供的试剂和器材】 1、37℃恒温箱 2、标准规格酶标仪 3、精密移液器及一次性吸头 4、蒸馏水 5、一次性试管 6、吸水纸【操作步骤】 1、准备：从冰箱取出试剂盒，室温复温平衡30分钟。 2、配液：用蒸馏水将20倍浓缩洗涤液稀释成原倍的洗涤液。 3、加标准品和待测样本：取足够数量的酶标包被板，固定于框架上，分别设置标准品孔、

elisa试剂盒

elisa试剂盒 Elisa试验是一种敏感性高，特异性强，重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存，操作简便，结果判断较客观等因素，已广泛应用在免疫学检验的各领域中。ELISA检测试剂盒是用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎（HEV）病毒IgM 抗体ELISA检测。目录 1elisa试剂盒简介 2优点 3回收率 4发展 5使用方法 6制备方法 7影响 8检测原理 9操作步骤 10试剂器材 elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2优点一、高效、灵敏、特异的抗体；二、稳定的重复性和可靠性；三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；五、节省实验经费。

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梅里埃快速病原体检测解决方案多重呼吸道病原体检测项目建议书提供精准快速的病原体结果

流行病数据与现状呼吸道感染：呼吸道感染是指病原体感染人体的鼻腔、咽喉、气管和支气管等呼吸系统。呼吸道感染通常由病毒、细菌、非典型病原体等引起，治疗时必须明确引起感染的病原体以选择对应的治疗方案。呼吸道感染是临床的常见病，其发病具有着明显的季节性：甲型流感在中国北方多出现于每年1-2月，而在中部地区亦可多出现于6-8月，在南方地区则多现于每年的4-6月；而乙型流感则多发于寒冷季节。中国各个地区流感发病率表格引自Yu H等“Characterization of Regional Influenza Seasonality Patterns in China and Implications for Vaccination Strategies: Spatio-Temporal Modeling of Surveillance Data” 我国主要的流感病原体是甲型流感H1和H3型以及乙型流感。除了甲型流感和乙型流感之外，其他多种病原体也能造成呼吸道感染，比如鼻病毒、肠病毒、冠状病毒、腺病毒、副流感病毒、偏肺病毒及呼吸道合胞病毒等。急性呼吸道感染的发生同人体免疫力降低有着直接的关系，儿童和老年人都是易感人群。一项针对儿童患者的流行病学研究发现：肠病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒是造成儿童急性上呼吸道感染的主要病原体。

引起儿童急性呼吸道感染的致病体表格引自顾艳红等“儿童急性呼吸道感染夏季和冬季病毒病原学分析” 中国儿童普通感冒规范诊治专家共识（2013年）中指出，病毒的病原学地位突出,其中以鼻病毒最常见(30%~ 50%),其次为冠状病毒(10% ~15%)、呼吸道合胞病毒( 5 % ) 、副流感病毒( 5 % ) 、腺病毒( < 5 % ) 和肠道病毒( <5%)等。对于新生儿和低龄儿童，呼吸道合胞病毒具有非常强的传染性和致病性，因此对于呼吸道合胞病毒的爆发和医院内感染需要特别的重视；另外由于腺病毒造成的呼吸道感染往往病情较重，所以对于腺病毒感染的快速病原体确认也是十分重要的。一项2015 年WHO 在12 个国家开展的调查显示，64% 的大众受调查者认为抗菌药物可以用来治疗病毒及病毒感染所导致的流感和普通感冒。常识的缺乏，导致了患者和一些医生，滥用抗菌药物。WHO的统计数据表明，中国真正需要使用抗生素的病人不到20%, 抗生素的不合理使用会引起细菌的耐药性，耐药性往往会导致很多严重感染治疗无效，给患者健康乃至生命造成重大影响. WHO曾发表全球抗菌素耐药性报告称，如果不能迅速采取措施应对这一问题，世界将迈向“后抗生素时代”，呼吁各国加强在抗生素耐药方面的合作。病原体的明确诊断对于指导有效合理使用抗生素发挥着至关重要的作用, 这是遏制抗生素耐药出现的关键. 抗击抗生素耐药性需要涵盖全方面的临床诊断方案: 微生物鉴定和药敏试验, 感染性疾病筛查和主动监测,疫情管理和监测,细菌以及病毒感染的病原确定和分型. 2016中国儿童流感指南中提出，在流感病人出现症状的48小时之内使用奥司他韦（达菲）可以明显提高治疗成功率、缩短病程。非典型病原体，如社区性获得

大鼠皮质醇(Cortisol)ELISA试剂盒说明书

大鼠皮质醇(Cortisol)酶联免疫分析试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂盒仅供体外研究使用! 预期应用 ELISA法定量测定大鼠血清、血浆或其它相关生物液体中皮质醇(Cortisol)含量。实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗皮质醇(Cortisol)抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗皮质醇(Cortisol)抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的皮质醇(Cortisol)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。ELISA法试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板：一块（96孔） 2. 标准品（冻干品）：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为180 ng/ml，做系列倍比稀释(注：不要直接在板中进行倍比稀释)后，分别稀释成180 ng/ml，90 ng/ml，45 ng/ml，22.5 ng/ml，11.25 ng/ml， 5.63 ng/ml，2.82 ng/ml，样品稀释液直接作为标准浓度0 ng/ml，临用前15分钟内配制。如配制90 ng/ml标准品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 180 ng/ml的上述标准品加入含有 0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3. 样品稀释液：1×20ml。 4. 检测稀释液A：1×10ml。 5. 检测稀释液B：1×10ml。 6. 检测溶液A：1×120μl（1:100）临用前以检测稀释液A 1:100稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100μl/孔），实际配制时应多配制0.1-0.2ml。如10μl检测溶液A加990μl检测稀释液A的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 7. 检测溶液B：1×120μl/瓶（1:100）临用前以检测稀释液B 1:100稀释。稀释方法同检测溶液A。 8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 10. 终止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。 11. 覆膜：5张 12. 使用说明书：1份自备物品 1. 酶标仪（建议参考仪器使用说明提前预热） 2. 微量加液器及吸头，EP管 3. 蒸馏水或去离子水，全新滤纸

ELISA检测方法有哪些

ELISA检测方法有哪些？酶联免疫吸附测定（Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay，ELISA）是研究蛋白抗体的重要方法。它是采用抗原与抗体的特异结合将被测物质与酶标抗体进行直接或间接结合，然后通过标记酶与底物产生颜色反应进行定性和定量分析。那么，它与其它检测方法的灵敏度及您了解吗？跟着小编往下看 ELISA通常分为四种类型：直接法、间接法、竞争法、夹心法等，直接上图：直接法（Direct ELISA）仅需要抗原和酶标一抗，操作简便，可避免交叉反应，然而该方法要求酶标一抗有较高的特异性要求，同时也并非所有的一抗适合标记处理。直接法在实际运用中并不多见，它并不能对样本中抗体进行定量分析，因为样本中抗体是非酶标抗体，无法进行后续显色，但是该法经过改进就是竞争性ELISA方法，见后文。间接法（Indirect ELISA）使用了二抗增加信号强度，也使抗体的选择多样化，然而间接法容易产生交叉反应。间接法只能用于测定抗体，主要用于疾病的诊断，其优点是只需要改变包被抗原，酶标抗体是通用的。夹心法（Sandwich ELISA）分为双抗体夹心法和双抗原夹心法：双抗体夹心法中抗原被两个抗体——捕捉抗体和检测抗体，结合于不同位点。捕捉抗体固定于载体上，检测抗体通过结合抗原进行显色分析。应用于双抗体夹心法检测的抗体需是单抗，而且对同一抗原结合位点不同，如此才能避免交叉反应或两种抗体竞争性结合同一位点。夹心法具有高灵敏度、高专一性的优势，但该法只适用于有多个结合位点的抗原检测，主要用于检测各种大分子抗原——例如在医学检测中测定HBsAg、HBeAg、AFP等。由于双抗体夹心法特异性高，在检测过程中有时会将样本和酶标抗体同时加入进行反应（一步法），此时如果样本中抗原含量过高会导致其与固相抗体和酶标抗体均有结合而不形成“夹心复合物”，

人白细胞介素6(IL-6)定量检测试剂盒(ELISA)

仅供科研使用，不得用于临床检验。人白细胞介素6（IL-6）定量检测试剂盒（ELISA）说明书【产品名称】通用名称：人白细胞介素6（IL-6）定量检测试剂盒（ELISA）英文名称：Human Interleukin-6（IL-6）ELISA KIT 【包装规格】 48人份/盒，96人份/盒【预期用途】仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人白细胞介素6（IL-6）的浓度。【检验原理】本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗人白细胞介素6（IL-6）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入人白细胞介素6（IL-6）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗人白细胞介素6（IL-6）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A 和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中人白细胞介素6（IL-6）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中人白细胞介素6（IL-6）的浓度。【主要组成成分】主要成分

校准品浓度依次为：320、160、80、40、20、0 pg/ml。校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 8、质控品（可从蓝图生物科技产品研发系统中选择）【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。 2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

人(Human)瘦素(LEP)ELISA试剂盒说明书

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断人（Human）瘦素（LEP）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被瘦素（LEP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的瘦素（LEP）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。样品收集、处理及保存方法 1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。 3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。 4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。 5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品 1.酶标仪（450nm） 2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3.37℃恒温箱操作注意事项 1.试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。 2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。 3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。 4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。 5.所有液体组分使用前充分摇匀。

人CX3C趋化因子受体1(CX3CR1)ELISA检测试剂盒说明书

人CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）ELISA检测试剂盒说明书本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆樊克生物专业供应：使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本CX3C趋化因子受体1（CX3CR1）含量。试验原理： CX3CR1试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知CX3CR1浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将CX3CR1和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中CX3CR1的浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48人份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑料膜板盖1块半块即用型标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的抗CX3CR1抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀释底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。安全性 1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。

结核抗体检测试剂盒

结核抗体检测试剂盒康珠生物一.公司概述：武汉康珠生物技术有限公司是专业的体外诊断试剂生产企业。也是国内第一批通过国家食品药品监督管理局GMP认证的体外诊断试剂生产厂家。体系覆盖酶联免疫，金标，生化，化学发光等多条生产线。产品涉及传染病，肿瘤筛查等多个领域。现已有国药准（械）字50余个产品文号。拥有诸多自主知识产权专利产品，并获得了多项科研成果奖。公司秉承“厚德载物、诚信待人、团结务实、创新进取”的企业精神，注重以人为本，致力于把“康珠生物”打造成国际先进水平的生物医药高新技术企业。公司规模：专注诊断试剂，集研发、生产、经营为一体的高新技术企业；第一批通过国家食品药品监督管理局GMP认证；占地30亩的生产基地；光谷生物产业园5000平方米标准厂房。公司资质：药品生产许可证医疗器械生产许可证医疗器械经营许可证拥有完善的体外诊断试剂质量管理体系，体系覆盖胶体金法、乳胶法、酶联免疫法和化学法产品线，并通过国家食品药品监督管理局的现场体系考核。所获荣誉：中科院生物高科技创新基金光谷生物园第5批3551基金生物创新基金湖北省科技型中小企业技术创新基金无偿资助项目十余项专利二．结核杆菌IgG抗体检测概述：

结核分枝杆菌（M.tuberculosis）,简称结核杆菌,此菌主要引起肺结核病，肺结核是一种通过呼吸道传染、具有强烈传染性的慢性消耗性疾病。肺结核的诊断方法主要以细菌学痰涂片显微镜检查，而免疫血清学对结核杆菌IgG抗体水平检测，可辅助诊断结核病，并为结核病监测提供有力的手段。三.康珠生物结核抗体检测试剂盒简介：结核杆菌IgG抗体检测试剂盒采用了间接ELISA法定性检测人血清/脑脊液/胸积水样本中的结核分枝杆菌IgG抗体水平，适用于结核病的辅助诊断及结合临床症状该病情发展IgG 抗体水平的监测。四.试剂盒组成： 1、含纯化TB-IgG抗原包被的酶标反应板 2、样品稀释液1瓶 3、TB-IgG酶结合物试剂1瓶 4、浓缩洗涤液(25×)1瓶 5、TB-IgG阴性对照液和TB-IgG阳性对照液各1瓶 6、显色剂A和显色剂B各1瓶 7、终止液1瓶 8、自封袋2个、封板膜2片、说明书1份五.产品相关信息产品名称：结核分枝杆菌IgG抗体检测试剂盒（胶体金法）包装规格：48T/96T 预期用途：该产品用于定性检测待测血清或血浆中可能存在的结核分枝杆菌IgG抗体。医疗器械生产企业许可证编号：鄂食药监械生产许20120396 医疗器械注册证书编号：国食药监械（准）字2013第3401627号产品标准编号：YZB/国5912-2013 储存有效期：2-8℃保存，有效期12个月生产企业：武汉康珠生物技术有限公司

ELISA检测

ELISA检测 ----- 固相捕获法测IgM抗体在病原体急性感染的诊断中，通常需检测IgM抗体，如急性甲型肝炎诊断的血清抗HAVIgM检测、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗HBc lgM检测和TORCH项目的系列IgM检测等。IgM抗体也有使用间接法测定的，如目前在市场上可见到的有些TORCH系列的IgM检测试剂盒。在使用间接法测IgM抗体时，由于临床血清样本中含有高浓度的IgG抗体，其中部分特异IgG抗体将与IgM抗体竞争与固相抗原结合，从而干扰IgM抗体的检测。因此，在使用间接法测定IgM抗体时，通常须将血清样本用抗人IgG抗体或SPA预处理，以去除IgG的干扰。这样不但测定较为繁琐，而且影响测定的特异性和灵敏度。目前，常用的IgM抗体检测方法为捕获法，即以抗人IgM抗体(抗人u链)作为固相抗体，当加入血清标本时，其中的IgM类抗体(特异的和非特异的)即可被固相抗体捕获，再加入特异抗原，其与固相上捕获的IgM抗体结合后，加入酶标抗特异抗原的抗体，最后加入底物显色。具体操作步骤如下： 1．首先将抗人IgMbt链抗体于碳酸盐缓冲液中40c下过夜包被聚苯乙烯等固相，形成固相抗体，洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭，洗涤去除未结合的部分及杂质。 2．加入含待测IgM抗体的临床样本如血清等，温育一定时间后洗板；此时，待测样本中的IgM抗体就会与固相上的抗P链抗体反应而吸附于固相上。 3．加入特异的抗原如HAV抗原、HBcAg等，温育一定时间后洗板；此时，特异抗原就会与固相上的特异IgM抗体发生反应。 4．加入酶标记的抗特异抗原的抗体，温育一定时间后洗板；此时，在固相上即形成相应的抗原抗体复合物。 5．加入酶底物，温育显色测定本方法要着重注意的是RF(1gM类)及其他非特异IgM的干扰。RF(1gM类)由于其能与固相抗人u 链抗体结合，并可与随后加入的酶标抗体(动物IgG)反应，从而导致假阳性反应。而非特异IgM由于其

人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书,5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒

人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒产品规格：96T/48T。供应商：上海乔羽生物有限公司上海乔羽有限公司，有elisa试剂盒，抗体，培养基人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒其主要特点如下专一性强：抗原与抗体的免疫反应是专一反应，而免疫酶技术以免疫反应为基础，所检测的对象是抗原（或抗体），使用的抗体除标记了酶以外，与普通抗体的免疫反应特性并无多大差别。灵敏度高：由于抗体联结上了酶，因此，借助于酶与底物的显色反应，显示抗原与抗体的结合，大大提高了检测的灵敏性，使检测水平接近放射免疫测定法。人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。 1.标准品复溶：试剂盒提供6管标准品，每管已标定浓度，并且冻干。实验前在每个标准品管中加入0.5mL 样本稀释液，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动助其溶解，使其恢复为每个标准品管身标注的浓度。 2.20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。人(5-HIAA)ELISA试剂盒说明书，5羟基吲哚乙酸ELISA检测试剂盒试剂的准备：按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的，应为新鲜的和高质量的。自配的缓冲液应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剂应待温度与室温平衡后使用。试剂盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存。 ELISA试剂盒的优势：全面——混合8 种不同的常见抗原，对自身免疫性疾病进行全面筛查。

结核分枝杆菌IgG抗体TB检测试剂盒

结核分枝杆菌IgG抗体(TB)检测试剂盒一、检测原理------斑点金免疫渗滤法二、临床意义------结核分枝杆菌抗体结果呈阳性（一）、抗细胞壁脂多糖LAM抗体呈阳性 1、脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)是分枝杆菌细胞壁的重要组成部分，具有较强的免疫原性和免疫调节功能，可刺激机体产生相应的抗体。 2、检测到此抗体阳性，结合临床症状和其他检查要考虑是活动性结核病患者。 3、由于在某些呼吸道炎症等良性疾病中，此抗体也会呈现阳性，所以，请医生要结合其他的临床信息加以鉴别诊断。（二）、38KDa抗体阳性 1、38KDa抗原是定位在质膜上的磷酸盐转运蛋白。 2、检测到此抗体阳性，结合临床病史，非常有助于活动性结核的诊断。 3、由于此抗原和大肠埃希菌(简称大肠杆菌)同源蛋白有30％以上的交叉，所以，在肠道感染患者中有一定的假阳性，要注意加以鉴别。 4、值得注意的是在部分接种过卡介苗（BCG）的患者中，也会出现阳性，要注意鉴别。（三）、16kDa抗体阳性 1、16kDa蛋白又被称为HSP16.3蛋白，是小分子热休克蛋白（sHSP）家族成员之一。 2、此抗体在结核病患者中有相当高的阳性率（46～50% )，检测到此抗体阳性，并结合临床要考虑是活动性结核病患者。 3、在大多数接种过卡介苗（BCG）的患者中，并不会出现阳性，能将结核病患者与BCG 接种患者区别开来。 4、作为儿童结核的早期诊断指标，敏感性为64.8%左右，特异性96.2%左右。

（四）、MPT63抗体阳性 1、MPT63抗原是结核杆菌的分泌蛋白之一。 2、它的灵敏度为15～40％，特异性很高，约为98％左右。即在检测到此抗体阳性时，临床上基本就可诊断是活动性结核病患者。三、临床意义------结核分枝杆菌抗体结果呈阴性（一）不是结核病患者（二）病情好转（三）在结核病患者病情加重、合并人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的结核病患者、痰涂片、痰培养呈阴性的患者中，由于机体免疫能力低下等原因，导致产生的抗体滴度太低，以至于不能被检测到，会呈现假阴性的结果，需要结合临床加以鉴别。四、多指标联合检测的优势（一）多指标联合检测，提高了阳性率由于单个抗原不可能捕获全部或大多数抗体，所以，多指标联合检测，提高了阳性率，减少了漏检，是结核血清学诊断的发展趋势。指标组合灵敏度 LAM 56.5% LAM+38KD 68.3% LAM+38KD+16KD 75.2% LAM+38KD+16KD+MPT63 77.4% （二）多指标独立的检测结果，有助于医生对患者病情的监控结核菌侵入机体后刺激机体产生一系列体液免疫反应，体液免疫随着病变的加重（或血行播散）而增加。当多个抗体呈现阳性时，提示病情有加重的迹象，所以，临床医生可以根据不同时期的抗体谱，并结合患者的临床病症，进行病情的监控和疗效的判断。

ELISA检测方法

ELISA（酶联免疫吸附测定，enzyme linked immunosorbent assay）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。基本原理： ①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 ②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。 ③在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。 ④加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅有无定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。双抗夹心法夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步骤为: ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体； ②加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结； ③洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的一次抗体，与待测抗原进行键结； ④洗去多余未键结一次抗体，加入带有酶的二次抗体，与一次抗体键结； ⑤洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果。间接法间接法常用于检测抗体，一般的操作步骤为： ①将已知的抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余的抗原。

②加入待测检体，检体中若含有待测的一次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。 ③洗去多余待测检体，加入带有酶的二次抗体，与待测的一次抗体键结。 ④洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酶呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。竞争法竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为： ①将具有专一性的抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体； ②加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结； ③加入带有酶的抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酶的抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。 ④洗去检体与带有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酶的抗原越少，显色也就越浅。注：当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。

ELISA试剂盒

1、elisa试剂盒简介 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度。ELISA 可用于测定抗原，也可用于测定抗体。然而，影响Elisa试验结果的因素很多，故加强各个环节的质量保证才能充分发挥其方法学的优点。 2 优点一、高效、灵敏、特异的抗体；二、稳定的重复性和可靠性；三、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相载体；四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型；五、节省实验经费。 3 回收率 elisa试剂盒回收率是反应待测物在样品分析过程中的损失的程度，损失越少，回收率越高，如果作标液1PPM，就是1毫克/升，而作出标准数据为0.99毫克/升，就是说你的回收率是99%，这个与真实成分有密切的关系，说明方法的准确度。比如水中总无机氯含量测定，样品水中含有无机氯20mg/L，取100mL 被测水样品，加入0.1mL浓度为10mg/mL的含无机氯标准样品，测定时忽略体积变化，如果测定出样品中无机氯为2.98mg/L，则认为回收率为99%。 4 发展临床测定技术的发展主要在于方法学的发展，而方法学的发展依托于试剂生产技术不断进步更新和型标记物的应用。目前，分子生物学正在并最终肯定会让我们对整个生命科学有一个全面而彻底的认识，其对免疫测定技术发展的影响也是直接而又有效的，它使我们对以前一些难以检测的生物活性物质的测定变得轻而易举，并且大大提高了检测的灵敏度和特异性。 5 使用方法（1）血清：操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。（2）血浆：EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。（3）细胞上清液：1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。（4）组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清

结核杆菌(TB)核酸扩增(PCR)荧光体外检测试剂盒

结核杆菌（TB）核酸扩增（PCR）荧光体外检测试剂盒试剂盒简介：深圳匹基生物工程有限公司开发的结核杆菌（TB）核酸扩增（PCR）荧光体外检测试剂盒采用RT－PCR荧光探针检测技术检测结核杆菌TB核酸。试剂盒特点高灵敏度:该试剂盒在香港卫生署公共卫生检测中心与欧盟已批准的商业化ＡＲＴＵＳ试剂进行比对试验结果显示，相关性达到93％，达到国际先进水平。高特异性防污染:该试剂盒无需PCR后处理，完全闭管扩增和检测，有效地防范了PCR扩增产物的污染，避免假阳性结果，提高临床诊断依据的可靠性。操作简单、耗时短:试剂盒在特定的荧光PCR检测仪上进行扩增和检测，不需要进行电泳或杂交的操作，只需0.5－1.5小时（针对不同机型）即可完成PCR过程，有利于提高报告出具的速度。适用面广:本试剂盒可对粪便和血浆样本进行检测。结果客观可靠:无需人为判断，仪器自动收集和分析数据。适用机型：PE5700；PE7000；MJ OpticonⅡ；Roche LightCycler； ABI7300/7500/7900；Roter-gene等近20年来，曾经控制在很低水平的结核病，在世界范围内有死灰复燃

的趋势。全球现有结核病人2000万人，其中95%的病人是在发展中国家，如果不加控制，今后10年还将有3亿人受到结核杆菌的感染。为此，世界卫生组织于1993年宣布全球进入结核病紧急状态，1998年又重申遏制结核病的行动。根据最新的卫生部调查显示：我国有5.5亿人感染过结核杆菌，目前有肺结核病人约450万，其中传染性肺结核病人约150万，结核病患者数量居世界第二位。中国每年style="COLOR: black"约有145万新发病例，是全球22个结核病高负担国家之一，每年因结核病死亡人数达13万，大大超过其他传染病死亡人数的总和。如果不采取有效措施，在未来的10年中，可能有3000万人发生结核病。结核病的致病菌是结核杆菌，属于放线菌目分支杆菌科分支杆菌属。结核杆菌主要通过呼吸道传播，还可通过消化道进入人体。结核杆菌对外界的抵抗力较强，在阴湿的地方能生存5个月以上，因此带菌的痰液是结核杆菌主要的传染源。健康人吸入病人咳嗽、打喷嚏时喷出的飞沫，即可引起肺部结核杆菌感染。结核病有一个不同于一般传染病的发病特点，即大多数人被传染上结核杆菌后并不马上发病，多数可以终生不发病。结核杆菌在人体内可以长期潜伏，处于静止不活动状态，其中约5%~8%的人在随后的几年甚至数十年后，由于各种原因导致机体抵抗力降低时发病。结核杆菌被吞噬细胞吞噬后可经淋巴-血循环散播到全身，在人体免疫力低下时而造成多种系统或脏器的结核病变，如骨结核、肾结核、生殖器结核、结核性脑膜炎等。

小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)-ELISA试剂盒说明书

小鼠Ⅰ型胶原 (Col I)酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书产品编号：E-EL-M0314 （本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断!）声明：尊敬的客户，感谢您选用本公司的产品。本产品选用世界著名生产厂家的原料，采用专业ELISA kit生产技术制造。适用于体外定量检测小鼠血清、血浆、组织匀浆或细胞培养上清液中天然和重组Col I浓度。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时联系伊莱瑞特生物科技有限公司。 *: [96T/48T]（打开包装后请及时检查所有物品是否齐全完整）

检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。用抗小鼠Col I抗体包被于酶标板上，实验时标本或标准品中的Col I会与包被抗体结合，游离的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠Col I抗体和辣根过氧化物酶标记的亲和素。抗小鼠Col I抗体与结合在包被抗体上的小鼠Col I结合、生物素与亲和素特异性结合而形成免疫复合物，游离的成分被洗去。加入显色底物(TMB)，TMB在辣根过氧化物酶的催化下现蓝色，加终止液后变黄。用酶标仪在450nm波长处测OD值，Col I浓度与OD450值之间呈正比，通过绘制标准曲线求出标本中Col I的浓度。标本收集: 1.血清：全血标本于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。 2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA.Na2，标本采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂标本。 3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，以去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g 离心5~10分钟，取上清检测。 4.细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。 5.其它生物标本：1000×g离心20分钟，取上清即可检测（具体处理方法可参考：https://www.wendangku.net/doc/0812938261.html,/news2.asp?tid=477 ） 6.标本应清澈透明，悬浮物应离心去除。 7.标本收集后若不及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃/-80℃冰箱内，避免反复冻融， 1-6月内检测,4℃保存的应在1周内进行检测。 8.如果您的样本中检测物浓度高于标准品最高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释(建议先做预实验，以确定稀释倍数)。试验所需自备物品: 1.酶标仪(450nm波长滤光片) 2.高精度移液器，EP管及一次性吸头：0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 3.37℃恒温箱, 双蒸水或去离子水 4.吸水纸

人白细胞介素ELISA检测试剂盒

人白细胞介素ELISA 检测试剂盒人IL-17 ELISA试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织、缓冲液中细胞上清液及各种体液中的IL-17 。本试剂盒可以检测天然和重组的IL-17 。本试剂盒专用于科研、而非用于临床诊断。试验原理：人IL-17 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知IL-17 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将IL-17 和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-17 的浓度呈比例关系。自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10 ul、50 ul、100 ul、200、500 u、1000lul。 3．振荡器及磁力搅拌器等。安全性 1．此试剂盒的人血制品中的HbsAg、和抗HIV为阴性，但没有实验室可完全保证此血制品不会传染肝炎、AIDS或其它传染病，依据当地的安全条例处理本试剂盒里的成份及血清和血浆等样品。 2．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 3．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 4．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。操作注意事项 1．试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2．实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3．不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4．使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。 5．使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6．洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7．底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。 8．加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9．按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。样品收集、处理及保存方法 1、血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。 3、细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。