芦丁的提取分离及鉴定A4
2011届本科生毕业论文
题目芦丁的提取分离及鉴定作者单位陇东学院化学化工学院指导老师胡浩斌
作者姓名张娜娜
专业班级2007级化学本科(2)班提交时间二〇一一年四月
2011届本科生毕业论文
芦丁的提取分离及鉴定
张娜娜，胡浩斌
（陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳745000）摘要：目的以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法，掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮甙，甙元和糖的部分鉴定方法。方法采用水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法对芦丁进行提取分离，并对其进行定性分析及色谱鉴定。结果水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法，三种方法均可制的芦丁，且质量合格。结论从提高芦丁产率和纯度的角度出发，乙醇回流是较理想的提取方法。制得芦丁产率高，且测定方法简单、迅速、灵敏度高。
关键词：槐花米；芦丁；槲皮素；提取；分离；鉴定
Extraction, Seperation and Identification of Rutin
Zhang Nana, Hu Haobin
(College of Chemistry and Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 745000, Gansu) Abstraction: Objection Rutin as an example to learn the extraction of flavonoids square. Grasp the main properties and flavonoids ingredients flavonoids glucoside. Method W ith the water extraction method, buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) extraction to extraction and separation of rutin and chromatographic identification. Result With water formulation,Buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) method of extraction rutin backflow separation,three methods are made rutin and obtaining rutin quality qualified. Conclusion From improve yield and purity of rutin angle, ethanol refluxing was ideal extraction method. Preparation of rutin of high yield,high sensitivity. determination method is simple to rutin rapid.
Key word: Sophora japonica; rutin; quercetin; extraction; separation; identification
引言
随着人们生活水平及质量的不断提高，心脑血管病的发病率也呈上升趋势，而且死亡率居各种疾病之首，因此，对治疗和预防心脑血管病的药品与保健品的开发研究就显得尤为重要，
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芦丁的提取分离及鉴定
黄酮类化合物在心脑血管病的治疗上起到举足轻重的作用。目前研究最为广泛的是以槐米为主要原料提取黄酮类化合物。
槐米，豆科植物槐（Sophora japonica L．）的未开放花蕾。中医临床上作为止血药，常用来治疗痔疮、子宫出血、吐血、鼻出血等，并有清肝泻火、治疗肝热目赤、头痛眩晕的功效。药理研究表明，它能保持毛细血管正常的抵抗力，降低血管通透性，可使因脆性增加而出血的毛细血管恢复正常的弹性，还有抗炎，解痉等作用。槐米的主要成分中芦丁含量高达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。近年来有文章报道槐米具有治疗糖尿病的功效。芦丁的药用价值开发利用较早，但芦丁与其苷元槲皮素均难溶于水，为了改善其在水中的溶解性状，增强其药理活性，科研人员对其进行了长期而又有效的研究，主要包括化学结构的改造，衍生物、复合物的制备，无机酸酯盐以及B-环糊精包合物和共沉淀物的研制等。为了提高芦丁的提取效率，避免资源浪费，摸索一种芦丁的提取方法也显得尤为重要，目前可采用的提取方法有（热）碱提取法、热水提冷析出法、热水提大孔吸附树脂纯化法、超声辐射法、热水提、醇除杂、酸沉淀法、冷碱渗漉提取—酸沉淀、连续回流提取、乙醇浸提法、超临界二氧化碳提取法、杀酶碱提、连续萃取法从槐米中提取芦丁和微波法等。其中最常用，工艺较成熟的是石灰水法。
芦丁，又名芸香甙、维生、紫槲成甙，广泛存在于植物界，如芸香、苦荞麦、槐树蕾、楸树叶、蒲公英、番茄茎、赤豆等均含有丰富的芦丁，尤以槐花米（Sophora japoina L.的花蕾）和荞麦叶中含量最高。芦丁能凉血止血，清肝泻火，具有抗炎作用。还具有抑制醛糖还原酶的作用，用于预防脑溢血，高血压，视网膜出血，急性出血肾炎，治疗慢性气管炎，对糖尿病型白内障也有较好的治疗，而且芦丁对紫外线具有较强的吸收作用，在化妆品中添加10%的芦丁，紫外线的吸收率可达98%以上[9]。
本实验主要以槐花米为原料提取芦丁，并以芦丁为例学习黄酮类化合物的性质及部分鉴定方法。
1 实验部分
1.1 实验原理
芦丁（Rutin）：C27H30O16·3H2O，浅黄色针状结晶，mp 174～178 ℃（含三分子水）；188 ℃（无水物）。难溶于冷水（1:8000～10000），可溶于热水（1:180～200），热甲醇（1:10），冷甲醇（1:100），热乙醇（1:60），冷乙醇（1:650），难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮，易溶于碱液。
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OH
OH
O O
OH
O O OH
OH
OH
OH
OH
CH 2
CH 3
OH
O
O
OH
芦丁
槲皮素（Quercetin ）：C 15H 10O 7·2H 2O ，黄色结晶，mp313～314 ℃（2分子结晶水），316 ℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1:290），易溶于沸乙醇（1:23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等，难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
O
O
HO
OH OH
OH
槲皮素
还含有皂甙，其粗制品为白色粉末，经酸水解后得二种皂甙元及糖部分，这两种皂甙元是白桦酯醇和槐花米双醇，另外还含槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。
本实验是利用芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液，在酸液中沉淀析出的性质进行提取分离。利用芦丁易溶于热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此可进行槲皮素的制备。通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。
芦丁的提取分离及鉴定
1.2 实验仪器及药品
SHZ-D循环水式真空泵（河南省巩义市英峪仪器一厂），HH-Z电热恒温水浴锅（上海医疗器械五厂），烧杯（1000ml），圆底烧瓶，球形冷凝管，漏斗，托盘天平，抽滤瓶，布氏漏斗滤纸，试管，滴管，新华1号滤纸，铅笔，铁架台，电炉，石棉网，橡皮管。
槐花米（2011年购于同仁堂大药房），95%乙醇，浓硫酸，浓盐酸，镁粉，醋酸铅试剂，1-萘酚，正丁醇，醋酸，1%三氯化铝-乙醇溶液，无水乙醇，硼砂水，饱和石灰水。
1.3 芦丁的提取
1.3.1 水提法
取20 g槐米于烧杯中用水漂洗干净，捞取上浮的花蕾弃去下沉的杂质，将洗净的花蕾置于1000 ml的烧杯中，加沸水500 ml煮沸45 min，不断补充蒸发掉的水，趁热过滤（用棉花），再用200 ml沸水提取30 min，合并两次滤液，浓缩体积至1/2放置过夜，析出芦丁，抽滤、沉淀用少量冷水洗三次、抽干，60 ℃以下干燥、称重，计算得率。
1.3.2 碱水(石灰水) 提取法
取20 g槐花米于研钵中研成粉状物，置于250 mL烧杯中，加入150 mL饱和石灰水溶液，于石棉网上加热至沸腾，并不断搅拌，煮沸15 min后抽滤，滤渣再用100 mL饱和石灰水溶液煮沸10 min，抽滤。合并两次滤液，然后用15%盐酸(约5 mL )中和，调节pH为3～4。放置1 h～2 h，使沉淀完全，抽滤，沉淀用水洗涤2～3 次，得芦丁粗品。将粗品芦丁置于250 mL的烧杯中，加水150 mL于石棉网上加热至沸腾，不断搅拌并慢慢加入约50 mL饱和石灰水溶液，调节溶液pH为8～9，待沉淀溶解后，趁热过滤。滤液置于250 mL的烧中，用15%盐酸调节溶液的pH值为4～5，静置30 min，芦丁以浅黄色结晶析出。抽滤，产品用水洗涤1～2次，烘干后约重1.5 g，熔点183 ℃～190 ℃(不含结晶水)。碱水提取是利用芦丁在碱水中成盐而增大溶解能力，加酸酸化后可析出结晶的原理进行的。
1.3.3 有机溶剂(乙醇) 回流法
将20 g粉状槐花米、碳酸氢钠和酒精置于回流装置中，加热至沸，待芦丁完全溶解后，取出过滤，进行蒸馏浓缩，至粘稠状时，加入蒸馏水及2 %的活性炭，调节pH为7.5～8，加热煮沸20 min，趁热过滤，滤液调节pH=为7，自然冷却，结晶析出，烘干，称重。
1.4 芦丁的精制
1.4.1 重结晶
将粗制芦丁研细，加95%乙醇回流溶解（每2 g芦丁需加70 ml左右乙醇）趁热过滤，取1/2滤液浓缩至原体积的1/3-1/4，放置，析出结晶，抽滤，干燥称重，得精制芦丁，计算得率。
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1.4.2 芦丁的水解
取另1/2量芦丁滤液，加入1 mol 硫酸（80 ml ）水浴回流一小时（用聚酰胺薄层检查水解是否完全）待全部水解后，蒸去乙醇，冷却、析出槲皮素、抽滤、滤液内含糖。槲皮素沉淀经水洗、抽干、干燥称重，计算得率。再用乙醇重结晶一次，得黄色针晶，为槲皮素精品。
OH
OH
O
O
OH
O O OH
OH
OH
OH
OH
CH 2
CH 3
OH
O
O
OH
O
O
HO
OH OH
OH
+鼠李糖+葡萄糖
含糖的溶液，取20 ml 于水浴上加热，同时于搅拌下加硫酸钡细粉中和至中性。滤除白色的硫酸钡沉淀，滤液在水浴上浓缩至1-2 ml ，供纸色谱用。
表1 芦丁的提取与精制（t=45min ）
Table 1 Rutin extraction and refined (t = 45min)
原料 槐米 芦丁 精制芦丁 槲皮素 质量（g ） 19.2 3.0 2.0 1.2 得率（%）
96
15.63
66.7
1.0
表2 芦丁的提取与精制(t=90min ） Table 2 Rutin extraction and refined (t = 90min)
原料 槐米 芦丁 精制芦丁 槲皮素 质量（g ） 19.2 1.8 0.9 0.6 得率（%）
96
9.38
50
66.67
2 鉴定
2.1 性质实验
2.1.1 盐酸-镁粉反应：取芦丁少量，加乙醇数滴溶解，再加浓盐酸5滴，最后加少量镁粉，观察颜色变化。
2.1.2 醋酸铅沉淀反应：取芦丁少许溶于热水，加醋酸铅试剂数滴，观察结果。 2.1.3
Molish 反应：取芦丁和槲皮素少量，分别置于两支试管中各加乙醇数滴，加1-萘酚数
芦丁的提取分离及鉴定
滴摇匀，倾斜试管，沿管壁滴加浓硫酸5滴，静置，观察二层溶液界面处的颜色变化。
表3 槲皮素和芦丁的性质实验
T able 3 Rutin quercetin and the nature of the experiment
盐酸-镁粉反应醋酸铅沉淀反应Molish反应样品芦丁芦丁芦丁槲皮素实验现象呈现红色出现粉红色沉淀出现棕色环呈现橘黄色
2.2 色谱鉴定
2.2.1 点样：取新华一号滤纸，距下端3厘米处用铅笔划线，为起始线，隔1.5厘米处点样品。将点好样品的滤纸挂在层析缸中饱和半小时，在上行展开。
a. 芦丁乙醇溶液
b. 精制槲皮素乙醇溶液
展开剂：正丁醇-醋酸-水（4:1:5，上层）
2.22. 显色：a. 可见光下观察色斑，紫外灯下观察荧光斑。
b. 1%三氯化铝-乙醇溶液，在观察荧光斑点。
表4 色谱鉴定
Table 4 Chromatographic identification
展开剂正丁醇-醋酸-水1%三氯化铝喷雾灯光日光紫外日光紫外
芦丁黄色浅亮绿色黄色亮绿色
槲皮素黄色浅亮黄色黄色亮黄色
3结果与分析
3.1 从表1和表2的对比中可以看出：槐米煮沸45 min提出芦丁的得率为15 %比煮沸90 min 提出芦丁的产率高。因此，水提法制芦丁煮沸时间太长会引起芦丁分解，导致产物产率太低。
3.2在可见光下，芦丁和槲皮素的色斑均呈现黄色，在253.7 nm紫外灯下，芦丁呈亮绿色，槲皮素呈亮黄色。再加入1%三氯化铝-乙醇溶液，荧光斑点的亮度更加明显。
3.3芦丁和槲皮素的区别在于芦丁水解后失去了糖苷，其本身的结构发生了变化，故在紫外灯光的照射下呈现出不同的颜色。
3.4 水提法取20 g 槐花米按水提法的流程操作，可提取出粗产品，收率仅为5.32 %。
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3.5 碱液提取法在加入石灰水中煮沸时, 调节不同酸度，得酸度对产品质量的影响（见表5）。
表5 酸度与产品质量的关系
Table5 Acidity and product quality relationship
pH 10 9 8 7 产品质量/ g 1.25 1.51 1.46 1.10 由表5可知，最佳提取酸度为pH= 8～9。pH＜9，煮沸时间稍长，可使芦丁水解；pH＜8，芦丁溶解不完全。
3.6有机溶剂回流法适宜的回流时间为5 h～6 h，结果见表6。
表6回流时间与收率的关系
Table 6 Backflow time and yields of the relationship
回流时间/ h 3 4 5 6
收率/ % 7.4 8.9 10.1 10.8
3.7 三种方法的收率结果见表7。
表7 方法与收率的关系
Table 7 Method and yield relationship
方法水提法碱提法乙醇法
收率/ % 5.3 9.6 10.1
3.8 三种方法产品纯度结果见表8。
表8 方法与产品颜色及熔点的关系
Table 8 Method and product color and melting point relationship
实验方法水提法碱提法乙醇法
产品颜色暗黄色灰绿色黄绿色
熔点/℃174～178 183～190 186～190 旋光度(醇中) / 13.75 13.75 13.83
4结论
4.1水提法装置简单，操作方便，也是平常中药的煎服方法，该法不足之处在于产率太低, 原料浪费严重。
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4.2用碱水提取可得粗产品，提取效率较水提法有明显提高，但该提取液通常因含有大量粘稠的杂质而难以过滤，而且整个过程对酸度控制要求较高。
4.3从提高芦丁产率和纯度的角度出发，乙醇回流法要优于以上两种方法，且乙醇可以回收再利用，其回收率达到92.3%。通过实验可得该方法最佳操作条件为：槐花米尽可能研细，加0.8%碳酸氢钠，20倍乙醇，回流4 h～5 h，浓缩回收溶剂。浓缩液加等量蒸馏水和2%的活性炭，调节使pH为7，冷却、结晶、过滤、烘干，产品收率可达10.1%。
此实验中，水提取法制取芦丁的得率为15%，纯度高达80%，所得产物量与张来新[2]的研究结果基本符合，实际产量相当。实验结果表明，芦丁是重要的黄酮类生物活性物质，槐米中含有丰富的芦丁，通过性质试验及色谱鉴定，能够清楚的表现处黄酮类化合物的一些性质。但与舒晓宏等[12]采用频率20 kHz的超声法从槐米中提取芦丁成分及黄汉昌13]采用冷碱（Na2SO3与石灰水混合—渗漉提取）酸沉淀法相比较则产率太低，原料浪费比较严重。
因此，本研究认为在探索芦丁的提取方法的过程中，特别是在医疗方面[10]，我们应尽可能采取更高效率的提取方法，如超声辐射法，热水提大孔吸附树脂纯化法等。无论采用什么方法,在实验的操作过程中，我们必须做到操作规范，严谨细致，实事求是。
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芦丁的提取分离及鉴定
致谢
走的最快的总是时间，来不及感叹，大学生活已近尾声，四年多的努力与付出，随着本次论文的完成，将要划下完美的句号。
从课题选择到具体的写作过程，无不凝聚着老师的心血和汗水。老师要指导很多同学的论文，加上本来就有的教学任务和科研项目，工作量之大可想而知，老师还在百忙之中抽出大量的时间来指导我们。他循循善诱的教导和不拘一格的思路给予我无尽的启迪，他渊博的专业知识，精益求精的工作作风，严以律己、宽以待人的崇高风范，将一直是我在工作、学习中的榜样。在我的毕业论文写作期间，老师为我提供了种种专业知识上的指导和一些富于创造性的建议，没有这样的帮助和关怀，我不会这么顺利的完成毕业论文。在此向胡浩斌老师表示深深的感谢和崇高的敬意。
同时，论文的顺利完成，离不开其它各位老师、同学和朋友的关心和帮助。在整个论文的写作中，各位老师、同学和朋友积极的帮助我查阅相关资料并提供大量有利于论文写作的建议和意见，让我掌握了毕业论文写作的基本过程。在在他们的帮助下，论文得以不断的完善，最终完整的写完了整个论文。
最后，也是最重要的，我要感谢我的父母，如果没有他们，就没有现在站在这里的我，是他们赐与我生命，赐与我上大学的机会，是他们创就今天的我。对于你们，我充满无穷的感激。
学生：张娜娜
2011年4月
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槐花米中芦丁的提取、分离与鉴定
槐花米中芦丁的提取与鉴定 背景知识 芦丁（Rutin）又称芸香苷，广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica L 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高(含量可达12-16%)，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水形成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有3分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10 000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液，酸化后又可析出，因此，本实验采用碱提取酸沉淀法提取芦丁。 芦丁具有维生素P样作用。能维持血管的正常通透性，减低血管的脆性，缩短流血时间，可作为高血压病的辅助治疗剂。亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。
一、实验目的 通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作；熟悉芦丁、槲皮素的结构性质和检识方法。 二、实验要求 独立完成实验，从槐花米中提取出芦丁并进行鉴定。 三、实验原理 芦丁属黄酮类化合物，分子中有较多酚羟基，具弱酸性，易溶于热碱中，酸化后又析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁，又利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差较大的特性进行重结晶精制。 四、实验材料和器皿 【器皿】 烧杯（500ml）2个，试管2个，布氏漏斗1个，玻璃棒1根，抽滤瓶1个，滴管，移液管（10ml）1根，洗耳球1个，滤纸，pH试纸，电热炉，真空抽滤机。 【材料】 槐米花30 g，饱和石灰水，0.4%硼砂水溶液，镁粉，pH试纸，浓盐酸，95%乙醇，10% α萘酚乙醇溶液，浓硫酸，蒸馏水。 五、实验内容 操作步骤： 称取30g槐花米于研钵中研成粉状物，置于500mL烧杯中，加入饱和石灰水，加热至沸，并不断搅拌，煮沸30分钟后，趁热抽滤。然后用浓盐酸调节pH值为4~5。放置1-2h，使沉淀完全，抽滤，沉淀用水洗涤2~3次，得到芦丁的粗产物。 流程图：
芦丁的提取分离和鉴定
综合化学实验: 芦丁的提取分离和鉴定 芦丁简介: 芦丁（Rutin）又名芸香苷化学式: C27H30O16·3H2O，是一种浅黄色针状结晶有机化合物，广泛存在于自然界植物中，是一种被人们广泛使用的有机天然产物。目前已发现含有芦丁的植物至少在70种以上，常见的如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均有不同含量。尤其以中药槐米（豆科、槐属，槐树Sophorajaponica的花蕾）和荞麦中含量最高，因此槐米可作为大量提取芦丁的天然植物原料。 中药槐米（炒碳）味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。西医研究其主要有效成分为有机化合物“芦丁”而中药槐米中芦丁的含量可高达12~16%，是主要的芦丁天然来源。槐米中还含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。研究文献证明芦丁具有VitP（维生素P）样作用（VitP具有生物类黄酮的功能，可防止维生素C被氧化而受到破坏，增强维生素功效；增加毛细血管壁强度，防止瘀伤。有助于牙龈出血的预防和治疗，有助于因内耳疾病引起的浮肿或头晕的治疗等）。而芦丁具有类似作用如可降低毛细血管脆性和调节通透性等，在医学临床上常将其用作毛细血管脆性引起的出血症以及防治高血压病等的辅助治疗药物。 芦丁是由槲皮素（quercetin）3位上的羟基与芸香糖（rutinose，一种由葡萄糖glucose与鼠李糖rhamnose组成的双糖）脱水合成的苷，是一种浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无结晶水时188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 补充知识:
芦丁的提取分离及鉴定A4
2011届本科生毕业论文 题目芦丁的提取分离及鉴定作者单位陇东学院化学化工学院指导老师胡浩斌 作者姓名张娜娜 专业班级2007级化学本科(2)班提交时间二〇一一年四月
2011届本科生毕业论文 芦丁的提取分离及鉴定 张娜娜，胡浩斌 （陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳745000）摘要：目的以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法，掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮甙，甙元和糖的部分鉴定方法。方法采用水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法对芦丁进行提取分离，并对其进行定性分析及色谱鉴定。结果水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法，三种方法均可制的芦丁，且质量合格。结论从提高芦丁产率和纯度的角度出发，乙醇回流是较理想的提取方法。制得芦丁产率高，且测定方法简单、迅速、灵敏度高。 关键词：槐花米；芦丁；槲皮素；提取；分离；鉴定 Extraction, Seperation and Identification of Rutin Zhang Nana, Hu Haobin (College of Chemistry and Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 745000, Gansu) Abstraction: Objection Rutin as an example to learn the extraction of flavonoids square. Grasp the main properties and flavonoids ingredients flavonoids glucoside. Method W ith the water extraction method, buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) extraction to extraction and separation of rutin and chromatographic identification. Result With water formulation,Buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) method of extraction rutin backflow separation,three methods are made rutin and obtaining rutin quality qualified. Conclusion From improve yield and purity of rutin angle, ethanol refluxing was ideal extraction method. Preparation of rutin of high yield,high sensitivity. determination method is simple to rutin rapid. Key word: Sophora japonica; rutin; quercetin; extraction; separation; identification 引言 随着人们生活水平及质量的不断提高，心脑血管病的发病率也呈上升趋势，而且死亡率居各种疾病之首，因此，对治疗和预防心脑血管病的药品与保健品的开发研究就显得尤为重要， 1
槐米中芦丁的提取
O HO O HO O OH OH O HO OH CH2 HO O OH OH HO O H3C 槐米中芦丁的提取、提纯和鉴定 一、实验目的 1．掌握芦丁提取和提纯的基本原理和方法。 2．掌握重结晶及过滤等基本操作。 3．学习芦丁及槲（hū）皮素的鉴定方法。 二、实验原理 芦丁（Rutin）亦称芸香苷，广泛存在于植物组织中，其中以槐花米和荞麦叶含量较高，槐米中含量高达12~16％，是提取芦丁的最佳原料。芦丁有减少毛细血管通透性的作用，临床上用作毛细血管止血药和高血压病的辅助治疗药物。近年来，芦丁及槲皮素作为抗癌药物的研究，取得了大量成果。芦丁属黄酮苷，其结构如下： 芦丁为淡黄色针状结晶，含有三分子结晶水（C27H36O16·3 H2O），熔点为177～178 ℃，无水物熔点为190~192 ℃，难溶于冷水，微溶于冷乙醇，可溶于热水和热乙醇中。此外，还难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。易溶于碱性溶液中呈黄色，酸化后又析出。本实验利用芦丁在冷热水和冷热乙醇中溶解度的差异进行提取与精制。 芦丁在不同溶剂中的溶液度： 芦丁的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：λmax = 259mm，266nm sh，299nm sh，359nm。 槲皮素（Quercetin）是芦丁水解得到的黄酮苷元，是芦丁药用功能的主要部分，大多数黄酮类物质都具有较高的药用价值。 槲皮素为黄色结晶，含两分子结晶水（C15H10O7·2 H2O），熔点313~314 ℃，无水
物熔点为316 ℃。可溶于甲醇、乙酸、吡啶、丙酮、乙酸乙酯等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。在沸腾的无水乙醇中溶解度为4.4 ，在室温下乙醇中的溶解度为0.35 。可利用槲皮素在冷热乙醇中的溶解度差进行提纯。槲皮素的结构式如下： 槲皮素的紫外吸收波长（CH 3OH 溶液）：λmax = 259nm ，266nm ，299nm ，359nm 。 三、实验步骤 （一）芦丁的提取 取15 g 槐米研成粉状，置烧杯中，加水300 mL ，煮沸30分钟（注意适量加水，补充蒸发损失），趁热过滤，滤渣再提取两次（每次用水250 mL ，煮沸15分钟），过滤，合并滤液，放置24小时，使沉淀完全析出。过滤，粗产物用少量水洗涤，得芦丁粗品，烘干，称重，计算提取率。 （二）芦丁的精制 将芦丁粗品研细，倒入圆底烧瓶中，加入100 mL 95％ 乙醇，加热回流至芦丁完全溶解，再加少量活性炭回流10分钟，然后趁热过滤于另一圆底烧瓶中，得黄色澄清溶液。蒸馏滤液并回收乙醇，待溶液剩10～15 mL 时停止加热，将浓缩液倒入小烧杯中，用少量乙醇洗涤烧瓶，将洗涤液合并于小烧杯中，放置使结晶完全析出。过滤（滤液回收），得芦丁精品，烘干，称重，计算产率，测其熔点。 （三）芦丁水解制取槲皮素 取芦丁精品1.0 g 于烧杯中，研细，加30％乙醇水溶液150 mL ，再加浓盐酸4 mL ，加热煮沸30分钟（注意观察）。放置冷却，过滤，水洗至滤液呈中性，烘干，称重，计算产率。测其熔点（如质量不合格，可用75％乙醇重结晶），计算产率。 （四）性质试验 取芦丁及槲皮素精品少许，用95％乙醇溶解，作为样品溶液，进行下列试验，并比较两者试验结果的差异。 1．Molish 反应 取两试样各l mL ，各加入10％α—萘酚溶液10滴，充分摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入1 mL 浓硫酸，勿摇，观察溶液界面的颜色变化。 O OH HO OH OH O OH
芦丁的提取及鉴定
实验二芦丁的提取及鉴定 （一）概述 芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。 芦丁具有维生素P样作用。有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。实验目的和要求 实验目的 ①通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 ②通过芦丁结构的检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 ③了解UV及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中的应用。 要求 ①要拿到以下三个化合物：芦丁、槲皮素、芦丁的全乙酰化合物。 ②能够拿根据化学试验及UV、NMR数据初步推断出芦丁的结构。并对黄酮类化合物的结构测定有一般性的了解。 试验方法 芦丁的提取与分离（见下图） 芦丁的鉴定 ①芦丁的定性反应 取芦丁3~4mg，加乙醇5~6ml使其溶解，分成三份作下述试验： A. 取上述溶液1~2ml，加2滴浓盐酸，在酌加少许镁粉，注意观察颜色变化情况。 B. 取上述溶液1~2ml，然后滴加2%柠檬酸的甲醇溶液，注意观察颜色变化情况，在继续向试管中加入2%ZrOCl2的甲醇溶液，并详细记录颜色变化情况。 C. 取上述溶液1~2ml，然后再加入10%α-等体积的萘酚乙醇溶液，摇匀，沿管壁滴加浓硫酸，注意观察两液面产生的颜色变化。 ②芦丁的紫外光谱解析 取芦丁溶于色谱纯甲醇中，加入规定的试剂，测定其UV光谱，试解析光谱并初步判断其结构。
芦丁的提取
实验从槐花米中提取芦丁P.198 【实验目的】 通过从槐花米中提取芦丁的实验,掌握用酸碱调节提取中药活性成分的方法. 【实验原理】 槐花米又名槐米,是槐花的花蕾.性凉,味苦,功能凉血,止血,主治肠风,痔血,便血等症.槐花米的主要活性成分是芦丁. 芦丁又名芸香苷,不仅存在于槐花米中(含量达10-20%),在荞麦叶等中,也有存在.结构式如下: 从结构式中不难看出,芦丁实际上是由黄酮与糖(葡萄糖和鼠李糖)形成的苷.由于含有黄酮结构,所以,呈黄色.黄酮部分连有许多酚-OH,故易溶于碱液,酸化复析出,这是本实验采用酸-碱调节法来提取芦丁的依据. 纯芦丁为淡黄色针状结晶,不溶于乙醇,氯仿等有机溶剂,熔点为188℃(理论值),带三个结晶水的熔点为174-178℃. 芦丁能增强毛细管的韧性,适用于毛细管脆弱的患者. 【实验步骤】 称取15g槐花米,用粉碎机研成粉状.置于250ml烧杯中,加入150ml饱和石灰水[1],于石棉网上加热至沸,并不断搅拌,煮沸15分钟后,抽滤[2].滤渣再用100ml饱和石灰水煮沸10分钟,抽滤. 合并两次滤液,用5%盐酸调节至pH3-4[3].放置1-2小时,使沉淀完全,抽滤,并用水洗涤2-3次,即得芦丁粗品. 将粗品置于250ml的烧杯中,加水150ml,在石棉网上加热至沸,不断搅拌,并慢慢加入约50ml 饱和石灰水,调节溶液pH值为8-9,待沉淀溶解后,趁热过滤.滤液置于250ml的烧杯中,用5%盐酸调节至pH4-5,静置30分钟.芦丁即以浅黄色结晶析出,抽滤,并用水洗涤1-2次,烘干,称重[4],测熔点. 【注解】 [1] 加入饱和石灰水既可达到用碱液提取芦丁的目的,同时,还可除去槐花米中的多糖粘液质. [2] 抽滤时,宜先小心倾出上层清液,再慢慢倒出带结晶的溶液,以防结晶过早堵住滤纸孔.后面的抽滤均需如此. [3] 注意小心滴加,约需7-8ml稀盐酸.如果滴加过多,pH值过低,芦丁(苷类)则易水解. [4] 产量约为1.5g. 【实验结果】 产品的外观性状 产量 【问题与讨论】 1 本实验中,开始用饱和石灰水提取,再用酸调节到pH3-4,这段pH值范围较宽;后来又用饱和石灰水调节到pH3-4,再用酸调节到pH4-5,这段pH值范围较窄.为什么要这样做如果反过来(先调窄后调宽)行不行 2 在一开始用酸调节pH值时,某生不小心,加入的稀盐酸过量,pH值小于3-4,请问对实验会产生什么后果为什么 3 根据这个实验,请总结出用酸碱调节法提取中药活性成分的适用条件及一般原理.
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定
实验四槐米中芸香苷的提取分离与鉴定 芦丁(Rutin)亦称芸香甙(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。 槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L。)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达12%~16%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性。临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。 槐花米中主要化学成分的结构及性质： 1.芦丁(Rutin) 淡黄色细小针状结晶，℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。 溶解度： 水：1:100(冷)，1:200(热) 甲醇：1:100(冷)，1:9(热) 乙醇：1:650(冷)，1:60(热) 吡啶：1:(冷)，易溶(热) 不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。 2. 槲皮素(Quercetin) 即芸香甙甙元，为黄色结晶，mp.313℃~314℃(含2分子结晶水)，316℃(无水物)。溶解度： 乙醇：1:290(无水乙醇)，1:23(热) 可溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮、吡啶、冰醋酸。不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚等。 3. 皂甙 粗品为白色粉末，mp.210℃~220℃(分解)。易溶于水、吡啶，能溶于200倍的甲醇中。酸水解后得白桦脂醇、槐二醇二种皂甙元及葡萄糖，葡萄糖醛酸及葡萄糖醛酸内酯。 (1) 白桦脂醇(Betulin) 无色针晶，℃~252℃。能溶于醋酸、丙酮、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、氯仿、
实验槐米中芦丁的提取分离和鉴定
实验一槐米中芦丁的提取、分离和鉴定 一、概述 槐米系豆科植物槐树（Sophora japonica L.）的花蕾（槐米）。具有清热、凉血、止血的功效，用于治疗便血、痔血，尿血、血淋，崩漏，赤血痢下，风热目赤，痛疽疮毒，还可用于预防中风。近年来被用作治疗高血压的辅助药物。 药理实验证明，槐花米具有调节毛细血管的渗透作用，抗炎作用，解痉、抗渍疡作用，影响脂质代谢，抗菌等多种生物活性。槐花米中主要含有黄酮苷，皂苷、甾醇和鞣质等成分，其中芦丁(Rutin)含量最高，达12～20%。 主要化学成分的结构及理化性质： 芦丁（rutin）：C 27H 30 O 16 ·3H 2 O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子 水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。 槲皮素（quercetin）：C 15H 10 O 7 ·2H 2 O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结 晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。 二、实验部分 （一）实验目的 1、通过芦丁的制备，掌握黄酮类化合物提取分离的原理和操作。 2、掌握酸水解将芦丁生成槲皮素的方法。 3、掌握芦丁与槲皮素的鉴别方法，聚酰胺薄膜的操作方法，电子天平的使用方法。 （二）实验原理 1、芦丁的提取原理：芦丁中含有多个酚羟基，具有酸性，故用碱提酸沉法。 2、芦丁的分离原理：芦丁在沸水中溶解，在冷水中析出。 3、芦丁的鉴定原理：芦丁与槲皮素分别为黄酮类化合物的苷与苷元，用Molish反应可以进行鉴别，也可以利用聚酰胺的氢键吸附性质进行定性分析，Rf值也应不同。 （三）实验药材、仪器与试剂 1、药材：槐米50g(每组)。
芦丁提取
实验一槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定 [目的要求] 1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2．掌握槲皮素的制备原理及操作。 3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用 4．通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 [实验原理] 芦丁（rutin）：C27H30O16·3H2O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三 分子水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。 槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分 子结晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23）， 可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。 +鼠李糖+葡萄糖 芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉 淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及 葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的 鉴定。 [实验内容] 一、芦丁的提取分离及精制 方法⑴ 槐米粗粉（50g） 置1000ml烧杯中，加入500ml饱和石灰水，加热，并维持pH8～9 煮沸20分钟，趁热滤过
滤液药渣 用300ml饱和石灰水煮沸10分钟，维持pH8～9 趁热滤过 滤液药渣（×） 合并 在60℃～70℃下用浓HCl调pH至4 ～5 静置，抽滤 沉淀 低温（80℃）干燥，称重。按1：200的比例加水， 加热使溶解，趁热滤过 滤液 静置，抽滤，减压干燥，计算收率 芦丁精制品 方法⑵利用芦丁在冷热溶剂中的溶解度不同进行提取分离。 槐米粗粉 沸水煮沸5～10分钟，反复2次 趁热滤过 水提取液药渣 放冷 沉淀析出（粗芦丁） 热水重结晶 或乙醇重结晶 芦丁结晶 二、槲皮素的制备 称取精品芦丁1g 置250ml烧瓶中 加2%H2SO4200ml 加热回流1小时 放冷，静置，抽滤 酸性滤液沉淀
实验 槐米中芦丁的提取、分离与鉴别
实验一槐米中芦丁的提取、分离与鉴别 一、实验目的 （1）掌握黄酮类化合物的提取原理和方法。 （2）掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方法。 二、实验原理 芦丁(Rutin)亦称芸香苷(Rutisude)，广泛存在于植物界中。现已发现含芦丁的植物约有70余种，如烟叶、槐花米、荞麦叶、蒲公英中均含有大量的芦丁。尤以槐花米和荞麦叶中含量最高，可作为提取芦丁的原料，使用最多的是槐花米。 槐花米为豆科植物槐(Sophora japonica L)的花蕾，所含主要成分为芦丁，含量可达23.5%，槐花开放后降至13.0%，其次含有槲皮素、三萜皂甙、槐花米甲素、乙素、丙素等。芦丁具有维生素P样作用，可降低毛细血管前壁的脆性和调节渗透性，临床上用于毛细血管脆性引起的出血症，并常作高血压症的辅助治疗药。 芦丁(Rutin)为淡黄色细小针状结晶，mp.174℃~178℃(含三分子结晶)，188℃(无水物)。溶解度情况如下： 水：1:10000(冷)，1:200(热) 甲醇：1:100(冷)，1:9(热) 乙醇：1:300(冷)，1:30(热) 吡啶：1:11.7(冷)，易溶(热) 不溶于乙醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮等溶剂，易溶于碱液中呈黄色，酸化后复析出。可溶于浓硫酸、浓盐酸，加水稀释复析出。 芦丁可溶于热水，难溶于冷水，其分子结构中具有较多的酚羟基，显弱酸性，在碱液中易溶解，而在酸性条件下，易析出沉淀，故本实验采用碱溶解酸沉淀的方法自槐米中提取芦丁。再利用其在冷热水中溶解度的差别采用沸水为结晶溶剂进行精制。利用芦丁可被稀酸水解，生成苷元和糖，通过颜色反应、薄层层析等方法进行检识和确认芦丁。 三、实验内容 （一）芦丁(芸香苷)的提取 1. 取1.5g石灰粉（CaO），置于干净的小研钵中，加入10mL水研成乳液备用。称取槐米20g，于1000m1烧杯中，加0.4%硼砂水溶液200mL，在搅拌下小心加入石灰乳调至pH 8～9，加热至微沸，维持pH值20-30分钟，趁热抽滤，弃去滤渣，冷至60-70℃用浓盐酸调至pH4-5，放置过夜，减压过滤，得粗芦丁（滤
槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定
槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定 槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L ．）的未开放花蕾。味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。槐米常炒炭应用。 槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。芦丁具有Vitp 样作用，可降低毛细血管脆性和调节通透性。临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。 [目的要求] 1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2．掌握槲皮素的制备原理及操作。 3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用 4．通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 [实验原理] 芦丁（rutin ）：C 27H 30O 16·3H 2O ，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。 槲皮素（quercetin ）：C 15H 10O 7·2H 2O ，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。 芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇， 较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择
槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定
实验二槐米中芦丁及槲皮素的提取分离及鉴定 槐米为豆科植物槐（Sophora japonica L．）的未开放花蕾。味苦性凉、具清热凉血、止血之功。常用于治疗多种出血症：肠风便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血、赤血下痢等。槐米常炒炭应用。 槐米的主要化学成分为芦丁，其含量可达12～16％，其次含有槲皮素、三萜皂苷、槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。芦丁具有Vitp样作用，可降低毛细血管脆性和调节通透性。临床上用作毛细血管脆性引起的出血症，常作为高血压症的辅助治疗药。 [目的要求] 1．通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2．掌握槲皮素的制备原理及操作。 3．熟悉紫外光谱在黄酮结构鉴定中的应用 4．通过芦丁的结构检识，了解苷类结构研究的一般程序和方法。[实验原理] 芦丁（rutin）：C27H30O16·3H2O，浅黄色针状结晶，mp174～178℃（含三分子水）；188℃（无水物）。难溶于冷水（1：8000～10000），可溶于热水（1：180～200），热甲醇（1：10），冷甲醇（1：100），热乙醇（1：60），冷乙醇（1：650）；难溶于乙醚、三氯甲烷、石油醚、乙酸乙酯、丙酮等，易溶于碱液。 槲皮素（quercetin）：C15H10O7·2H2O，黄色结晶，mp313～314℃（2分子结晶水），316℃（无水物）。能溶于冷乙醇（1：290），易溶于沸乙醇（1：23），可溶于甲醇、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶、丙酮等；难溶于水、苯、石油醚等溶剂。
芦丁为黄酮苷，分子中具有酚羟基，显酸性，可溶于稀碱液中，在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。 [实验内容] 一、芦丁的提取分离及精制 方法⑴ 500ml 饱和石灰水，加热，并维持pH8～9 滤液 药渣 10分钟，维持pH8～9 pH 至4 ～5 沉淀 低温（80℃）干燥，称重。按1：200的比例加水， 加热使溶解，趁热滤过 滤液 静置，抽滤，减压干燥，计算收率 芦丁精制品
槐米中芦丁的提取、分离与鉴定
槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（一） 一、实验目的 1、通过芦丁的提取与精制掌握碱酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 2、通过芦丁结构的鉴定，了解苷类结构研究的一般程序和方法。 二、实验原理 芦丁：浅黄色针状结晶，mp174℃-178℃。溶解度：1：8000；热水1:200；冷乙醇1:300；热乙醇1:30；冷甲醇1:100；热甲醇1:10.槲皮素：黄色结晶，mp313℃-314℃（2分子结晶水），能溶解于冷乙醇（1:650），易溶于沸乙醇（1:60），可溶于甲醇、乙酸乙酯等；难溶于水，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。 本实验主要是利用芦丁分子中含有较多的酚羟基，显弱酸性，可溶于碱中，加酸酸化后又可析出结晶的性质，采用碱溶酸沉法提取，并用芦丁对冷、热水的溶解度相差悬殊的特性进行精制。 三、药品材料 槐米、石灰乳、盐酸、广泛PH试纸 四、实验操作 芦丁的的提取和精制 芦丁的提取：取槐米20g置500ml烧杯中，加入沸水400ml及1g硼砂，搅拌下加入石灰乳调至PH8-9,保持微沸30分钟（注意保持
PH8-9），并随时补充蒸发掉的水分，趁热用双层纱布滤过，收集滤液，药渣再用200ml水按同样的操作再提取20分钟，合并两次滤液。浓缩至1/2体积，滤液在60
℃-70℃再用盐酸调至PH4-5，静置一周，析出芦丁。 五、实验说明及注意事项 1、本实验采用碱溶液酸沉法从槐米中提取芦丁，收率稳定，且操作简便。在提取前应注意将槐米捣碎，使芦丁易于被热水溶出。槐花中含有大量粘液质，加入石灰乳使生成钙盐沉淀除去。PH应严格控制8-9，不得超过10,。因为在强碱条件下煮沸，时间稍长可促使芦丁水解破坏，使提取率明显下降。酸沉淀时PH4-5，不宜过低，否则会使芸香苷成烊盐溶于水，降低了收率。 2、提取过程中加入硼砂作用：保护芦丁分子中的邻二酚羟基不被氧化，亦保护邻二酚羟基不与钙离子络合，使芦丁不受损失。 槐米中芦丁的提取、分离与鉴定（二） 一、实验目的 1、掌握芦丁水解生成苷元的方法及二者之间的分离。 2、熟悉芦丁、槲皮素的结构性质、检识方法和纸层析鉴定方法。 二实验原理
实验一至三芦丁提取纯化及分析2014修正终版
实验名称指导教师 实验1 芦丁的提取及水解制备槲皮素周延 实验2 高效液相色谱法芦丁及槲皮素标准曲线的测定周延 实验3 芦丁的大孔吸附树脂纯化梁浩 13-4人一组，每批9组（4个班学委自己协调分批，如有事，可与其他班同学调换。数据汇总到药1学委处，下周五7月4日前药1学委把每批的名单发我）以小组为单位进行实验。 2实验二分为2部分，实验二-1为标准曲线制作，实验二-2为样品测定。两次实验必须使用同一台色谱仪，否则实验结果无效。 3每组带洗净的250ml空饮料瓶1个。 4工艺实验教师起辅助作用，同学根据参考资料自己完成实验。提前预习关键点，设计实验记录表格，会检查预习笔记。实验1的条件为建议条件，可根据查阅文献，进行条件修改（报告中需说明理由和文献依据）。 5实验后原始记录需进行登记，收拾好老师检查后方可离开。 1 / 16
63个实验分别写报告，每个人的三份订在一起。完成实验后一起以班为单位尽早上交。最迟请于7月19日上午9点前交到制药工程办公室科西310。 实验一芦丁的提取及水解制备槲皮素 一、实验目的和要求 通过芦丁的提取与精制掌握碱-酸法提取黄酮类化合物的原理及操作。 通过测定芦丁和槲皮素含量巩固色谱仪使用方法。 2 / 16
二、实验原理 （一）概述 芦丁（Rutin）广泛存在于植物界中，现已发现含芦丁的植物至少在70种以上，如烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米（为植物Sophora japonica 的未开放的花蕾）和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羟基与芸香糖（Rutinose）〔为葡萄糖（Glucose）与鼠李糖（Rhamnose）组成的双糖〕脱水合成的苷。芦丁有助于保持及恢复毛细血管的正常弹性，主要用作防治高血压病的辅助治疗剂，亦可用于防治因缺乏芦丁所致的其他出血症。 芦丁为浅黄色粉末或极细的针状结晶，含有三分子的结晶水，熔点为174~178℃，无水物188~190℃。溶解度：冷水中为1:10000；热水中1:200；冷乙醇1:650；热乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。芦丁在酸性条件下可水解得到槲皮素。 利用芦丁易溶于碱性水，难溶于酸性水，可用碱性水提取，再调至酸性，黄酮苷（芦丁）即可沉淀析出。提取过程中为了防止芦丁氧化可加入焦亚硫酸钠抗氧化，并加入硼砂保护邻二酚羟基不被破坏。得到粗芦丁后利用其可溶于热水、难溶于冷水的性质重结晶进行精制。 三、仪器和试剂 1实验设备与仪器 烧瓶，温度计，布氏漏斗，抽滤瓶，循环真空泵，恒温加热及磁力搅拌装置，试管，量筒，烧杯，干燥箱，冷凝管，HPLC 2实验材料与试剂 槐花米，硼砂，焦亚硫酸钠，氧化钙，无水乙醇，甲醇，硫酸，盐酸，精确pH试纸， 四、实验内容 1 芦丁的提取 （1）将80g槐米，500mL（pH8-9）澄清石灰水，1.2g硼砂，2.4g焦亚硫酸钠一起置于1000mL圆底烧瓶中，65℃搅拌提取55min，注意添加蒸馏水及烧瓶中颜色的变化（深棕黄色），趁热过滤。 （2）滤下的槐米再次加入400mL澄清石灰水，0.9g硼砂和1.8g焦亚硫酸钠，65℃搅拌提取50min，趁热过滤。 （3）合并两次滤液，用浓HCl调pH至4，置于冰箱中。 2 芦丁的精制 3 / 16
芦丁的提取纯化鉴定
槐米中芦丁的提取、纯化和鉴定 摘要:芦丁为黄酮苷,分子中具有酚羟基,显酸性,可溶于稀碱液中,在酸液中沉淀析出，可利用此性质进行提取分离。利用芦丁易溶热水、热乙醇，较难溶于冷水、冷乙醇的性质选择重结晶方法进行精制。芦丁可被稀酸水解生成槲皮素及葡萄糖、鼠李糖，依此进行制备槲皮素。通过纸色谱及紫外光谱进行黄酮及糖的鉴定。 关键词:芦丁提取纯化鉴定 Ａbsｔract: ruｔin ａs flaｖoｎoｉd gｌyｃosiｄｅｓ,witｈｐｈe ｎｏlic hydｒoｘyl groｕｐs in mｏｌeculeｓ, acid，soｌuｂle in ｄiluｔe ｌｙe，ｐrecipｉtateｄｉn theａcid，canｕse tｈe ｐｒｏｐeｒｔiｅs oｆeｘtraｃtion and separａｔiｏn. Solubｌe ｒｕtｉｎｕsing hｏt waｔｅr, hｏt etｈａｎol and difｆicuｌｔｔo soｌuble ｉn ｃｏlｄwａter, cold etｈａｎｏｌnatuｒｅｏｆseleｃting recｒｙsｔalｌiｚation meｔhod fｏｒrefiｎiｎｇ．Ｒutin ｑｕercｅtin ｃan bｅgeneｒａtｅd ｂy dilｕte ａcｉd hydrｏlysiｓaｎd the gｌucose,rhamnoｓe, ｉn accordａnｃｅwith the ｐrepａration ｏf queｒcｅtin. Bｙｐａper cｈromatoｇｒaphy and ｕｌtraｖiolet sｐｅctroｓcopy identifｉｃation ｏf fｌａvonoｉｄs ａnd suｇaｒ. Keｙwｏrds：identificａtiｏn of ｒutiｎextrａctioｎａnd purification 二)实验的基本原理 １.芦丁的提取原理 利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质,可用碱性溶剂进行提取，提取液加酸后可沉淀析出(碱溶酸沉法)。也可利用芦丁在冷水中溶解度小,在热水中溶解度大的性质进行提取。 2. 芦丁的分离原理 利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大,以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分离。芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分离的目的（如不纯可再重复操作进行分离）。也可采用醇溶水沉法进行精制。
芦丁的提取分离和鉴别
芦丁的提取分离和鉴别 槐花米系豆科槐属植物槐树（Sophora japonica L）的花蕾。味苦性凉，入肝、大肠经。具有清热凉血、止血的功效，常用于治疗便血、痔血、尿血、衄血、崩漏下血和赤血下痢等，常炒炭应用。槐花米主要化学成分为芦丁（芸香甙），具有维生素P样作用，可降低毛细血管脆性、调解其渗透性。临床用于防治高血压脑病、视网膜出血和慢性气管炎等。芦丁羟基化衍生物曲克芦丁能抑制血小板聚集，防止血栓形成的作用，同时能对抗内源性血管损伤，增加毛细血管抵抗力，降低其脆性，防止水肿，对急性缺血性脑损伤有显著保护作用，临床用作抗血小板药物。 一、实验目的： 1．掌握酸碱法提取黄酮苷类的原理及方法； 2．掌握黄酮类成分的主要性质及鉴别方法。 二、仪器与试药 （一）仪器 SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵 HHS型电热恒温水浴锅玻璃仪器气流烘干器 圆底烧瓶（250mL） ZF-2型三用紫外仪电热恒温干燥箱移液管（10mL、5mL）（二）试药 槐花米粗粉硼砂氧化钙乙醇盐酸浓硫酸硅胶 CMC-Na 镁粉 α-萘酚甲醇乙酸乙酯脱脂棉三氯化铝试液芦丁和槲皮素对照品 甲酸丙酮 三、主要成分的结构与性质：
* 皂苷（Saponin ），粗品为白色粉末，mp 210～220℃，易溶于吡啶，能溶于200倍的甲醇中， 酸水解得上述两种苷元及糖。糖为葡萄糖，葡萄糖醛酸和葡萄醛酸内酯。 R=H 槲皮素 R=–glu –rha 芦丁 白桦脂醇 槐花二醇 四、实验原理： 1．芦丁分子结构中含有酚羟基，具有弱酸性，能与碱反应生成盐而溶于水，此盐加酸酸化，又析出芦丁，利用此性质进行提取。并可利用芦丁在冷水和热水中溶解度相差悬殊，用水重结晶。 2．芦丁在酸性溶液中可被水解，生成槲皮素和糖。 五、实验内容 O O RO OH OH O H O H O H CH 2OH O H OH
槐米中芦丁的提取
槐米中芦丁的提取、提纯和鉴定 一、实验目的 1．掌握芦丁提取和提纯的基本原理和方法。 2．掌握重结晶及过滤等基本操作。 3．学习芦丁及槲（hū）皮素的鉴定方法。 二、实验原理 芦丁（Rutin）亦称芸香苷，广泛存在于植物组织中，其中以槐花米和荞麦叶含量较高，槐米中含量高达12~16％，是提取芦丁的最佳原料。芦丁有减少毛细血管通透性的作用，临床上用作毛细血管止血药和高血压病的辅助治疗药物。近年来，芦丁及槲皮素作为抗癌药物的研究，取得了大量成果。芦丁属黄酮苷，其结构如下： 芦丁为淡黄色针状结晶，含有三分子结晶水（C27H36O16· 3 H2O），熔点为177～178 ℃，无水物熔点为190~192 ℃，难溶于冷水，微溶于冷乙醇，可溶于热水和热乙醇中。此外，还难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。易溶于碱性溶液中呈黄色，酸化后又析出。本实验利用芦丁在冷热水和冷热乙醇中溶解度的差异进行提取与精制。 芦丁在不同溶剂中的溶液度：
芦丁的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：λmax = 259mm，266nm sh，299nm sh，359nm。 槲皮素（Quercetin）是芦丁水解得到的黄酮苷元，是芦丁药用功能的主要部分，大多数黄酮类物质都具有较高的药用价值。 槲皮素为黄色结晶，含两分子结晶水（C15H10O7·2 H2O），熔点 313~314 ℃，无水物熔点为316 ℃。可溶于甲醇、乙酸、吡啶、丙酮、乙酸乙酯等溶剂，不溶于水、乙醚、苯、氯仿、石油醚。在沸腾的无水乙醇中溶解度为 4.4 ，在室温下乙醇中的溶解度为0.35 。可利用槲皮素在冷热乙醇中的溶解度差进行提纯。槲皮素的结构式如下： 槲皮素的紫外吸收波长（CH3OH溶液）：λmax = 259nm，266nm，299nm ， 359nm。 三、实验步骤 （一）芦丁的提取 取15 g槐米研成粉状，置烧杯中，加水300 mL，煮沸30分钟（注意适量加水，补充蒸发损失），趁热过滤，滤渣再提取两次（每次用水250 mL，煮沸15分钟），过滤，合并滤液，放置24小时，使沉淀完全析出。过滤，粗产物用少量水洗涤，得芦丁粗品，烘干，称重，计算提取率。
芦丁的提取与鉴定
芦丁的提取与鉴定 一、实验目的要求 1、熟悉黄酮类化合物的提取原理。 2、掌握芦丁的提取的基本方法。 二、实验重点和难点 芦丁的提取的基本方法。 三、实验原理 芦丁亦称芸香苷，广泛存在于植物界中，其中以槐花米（槐树的花蕾）和乔麦叶中含量较高。槐花米中的含量为12～16％，已知的成分为： 1、芦丁：熔点为177～178℃，为淡黄色小针状结晶。溶解度为：冷水中1：8000，热水中1：200，冷乙醇中1：300，热乙醇中1：30。难溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚及石油醚等溶剂。 2、槲皮素（Quercetin）：熔点为316℃，313～314℃，黄色结晶。溶于热乙醇1：60、冷乙醇1：650，可溶于甲醇、冰醋酸、乙酸乙酯、丙酮、吡啶，不溶于石油醚、乙醚、氯仿和水中，实验室以稀硫酸水解，乙醇重结晶制得。 3、皂苷：其粗品为白色粉末，经酸水解后得二种皂甙元及糖的部分，两种皂苷元为桦脂醇和槐花双醇，另外还含有槐花米甲素、槐花米乙素、槐花米丙素等。 本实验用芦丁在热水冷水溶解度差别较大的性质，用热水提取，然后再利用其在热乙醇和冷乙醇中溶解度的差异，进行精制。 四、实验仪器、试剂与材料 1、仪器：棉花、500ml烧杯、1000ml烧杯、电热套、漏斗、架盘天平、真空泵、抽滤瓶、布氏漏斗、滤纸、剪刀、冷凝管、蒸馏烧瓶、乳胶管、研钵、量筒、容量瓶、试管、紫外分析仪、层析缸、聚酰胺酯薄层板。 2、试液： （1）4mol/L硫酸溶液：取硫酸24ml，边搅拌边加入60ml水中，放冷，加水稀释至100ml，摇匀，即得。 （2）1％三氯化铝乙醇溶液：取三氯化铝1g，加水溶解使成100ml，摇匀，即得。 （3）0.1mol/L硝酸银试液：取硝酸银1.75g，加水溶解使成100ml，摇匀，即得。 （4）10％氨试液：取氨10ml，加水溶解使成100ml，摇匀，即得。 3、试剂与材料：槐米、芦丁对照品、乙醇、硫酸、碳酸钡、盐酸、镁粉、醋酸铅、α-萘酚、正丁醇、醋酸、三氯化铝、硝酸银、氨水、氯仿、甲醇、丁
芦丁的提取分离及鉴定16K
[键入文字] 2011届本科生毕业论文 题目芦丁的提取分离及鉴定 作者单位陇东学院化学化工学院 指导老师胡浩斌 作者姓名张娜娜 专业班级2007级化学本科(2)班 提交时间二〇一一年四月
芦丁的提取分离及鉴定 张娜娜，胡浩斌 （陇东学院化学化工学院，甘肃庆阳745000） 摘要：目的以芦丁为例学习黄酮类化合物的提取方法，掌握黄酮类成分的主要性质及黄酮甙，甙元和糖的部分鉴定方法。方法采用水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法对芦丁进行提取分离，并对其进行定性分析及色谱鉴定。结果水提法、碱水(石灰水) 提取法、有机溶剂(乙醇) 回流法，三种方法均可制的芦丁，且质量合格。结论从提高芦丁产率和纯度的角度出发，乙醇回流是较理想的提取方法。制得芦丁产率高，且测定方法简单、迅速、灵敏度高。 关键词：槐花米；芦丁；槲皮素；提取；分离；鉴定 Extraction, Seperation and Identification of Rutin Zhang Nana, Hu Haobin (College of Chemistry and Chemical Engineering, Longdong University, Qingyang 745000, Gansu) Abstraction: Objection Rutin as an example to learn the extraction of flavonoids square. Grasp the main properties and flavonoids ingredients flavonoids glucoside. Method W ith the water extraction method, buck (limewater) extraction,organic solvent (alcohol) extraction to extraction and separation of rutin and chromatographic identification. Result Water extraction method, Buck (limewater) extraction, organic solvent (alcohol) extraction,three methods are made rutin and obtaining rutin quality qualified. Conclusion From improve yield and purity of rutin angle, ethanol refluxing was ideal extraction method. Preparation of