荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤和慢性淋巴细胞白血病分子遗传学异常及其临床意义
分类号学号D200978175学校代码10487 密级
博士学位论文
荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤和慢性淋巴细胞白血病分子遗传学异常
及其临床意义
学位申请人：陈蕾
学科专业：内科学（血液病）
指导教师：胡豫教授
答辩日期：2012年5月
A dissertation submitted to Huazhong University of
Science and Technology for the Degree of
Doctor of Medicine
Clinical significance of genetic abnormalities detected by interphase fluorescence in situ hybridization in multiple myeloma and chronic lymphocyte leukemia
D.Candidate: Chen Lei
Major : Hematology
Supervisor : Prof. Hu Yu
Huazhong University of Science & Technology
Wuhan 430074, P. R. China
May 2012
独创性声明
本人郑重声明，本学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果的总结。尽我所知，除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本人将承担本声明引起的一切法律后果。
学位论文作者签名：
日期：年月日
学位论文版权使用授权书
本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权华中科技大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。
保密□，在_____年解密后适用本授权书。
本论文属于
不保密□。
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学位论文作者签名：指导教师签名：
日期：年月日日期：年月日
目录
主要缩略词表 (1)
前言 (2)
中文摘要 (5)
Abstract (8)
第一部分FISH检测多发性骨髓瘤分子遗传学异常及其临床意义 (12)
材料和方法 (12)
结果 (20)
讨论 (31)
参考文献 (34)
第二部分cIg FISH与FISH检测多发性骨髓瘤方法学比较 (37)
材料和方法 (37)
结果 (44)
讨论 (46)
参考文献 (47)
第三部分FISH检测慢性淋巴细胞白血病分子遗传学异常及其临床意义 (49)
材料和方法 (49)
结果 (54)
讨论 (59)
参考文献 (60)
结论..................................................... .. (63)
综述 (65)
参考文献 (70)
致谢 (75)
附录：攻读学位期间已发表的论文 (77)
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英文缩略词表
英文缩写英文全称中文名称
MM Multiple myeloma 多发性骨髓瘤
CLL Chronic lymphocyte leukemia 慢性淋巴细胞白血病
FISH Fluorescence in situ hybridization 荧光原位杂交
cIg FISH Cytoplasmic immunoglobulin light chain FISH 胞质轻链免疫荧光原位杂交PFS Progression-free survival 无进展生存期
OS Overall survival 总生存期
意义未明单克隆免疫球蛋白血症MGUS Monoclonal gammopathy of undetermined
significance
SMM Smoldering multiple myeloma 冒烟型多发性骨髓瘤
sCR Stringent complete response 严格完全缓解
CR Complete response 完全缓解
VGPR Very good partial response 非常好的部分缓解
PR Partial response 部分缓解
SD Stable disease 疾病稳定
ORR Overall response rate 总缓解率
RB1 Retinoblastoma 1 遗传性视网膜母细胞瘤致癌因子IGH Immunoglobulin heavy chain 免疫球蛋白重链基因
IGL Immunoglobulin light chain 免疫球蛋白轻链基因CCND1 Cyclin D1 周期蛋白D1
FGFR3 Fibroblast growth factor receptor 3 成纤维细胞成长因子受体3 MAF Musculoaponeurotic fibrosarcoma 肌腱膜纤维肉瘤癌基因
A TM The mutated form of the ataxia-telangiectasia gene 共济失调性毛细血管扩张症基因突
变形式
NF-κB Nuclear factor κB 核因子κB
DAPI 4',6-diamidino-2-phenylindole 4,6-二脒基-2-苯基吲哚
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荧光原位杂交技术检测多发性骨髓瘤和慢性淋巴细胞白血病分子遗传学异常及其临床意义
博士研究生：陈蕾
导师：胡豫教授
华中科技大学附属协和医院血液病研究所
前言
多发性骨髓瘤（MM）是分化终末期的B细胞（浆细胞）异常增殖，从而产生大量单克隆免疫球蛋白的恶性疾病。其临床症状包括浆细胞瘤性包块导致的压迫，骨髓造血微环境的改变从而使得造血功能下降血细胞减少，骨质破坏，蛋白沉积导致器官功能损失，免疫抑制导致感染等。
MM的单克隆浆细胞中存在多种复杂的染色体异常，且染色体异常在浆细胞的克隆增殖过程中发生较早，参与疾病的发生发展。多数B细胞肿瘤中可发现免疫球蛋白重链基因IGH易位和轻链基因IGL的易位。研究发现IGH易位存在于近50%的MGUS 或SMM中，髓内MM中可发现55~70%存在IGH易位，原发性浆细胞白血病中80%，人类骨髓瘤细胞系中90%。由此可见，IGH易位或许是MM发病中的早期遗传异常事件，且与疾病的进展有关。大多数IGH易位见于以下位点，影响定位于附近的基因表达：11q13(CCND1)，4p16(FGFR3和MMSET)，16q23(c-MAF)，6p21(CCND3)，20q11(MAFB)，这些基因表达的改变，对于MM患者的治疗以及预后均有不同程度的影响。IGL染色体的改变较为罕见，研究资料较少。MM患者中有30~50%存在13q 染色体缺失（del13q），对于接受常规化疗或者行自体干细胞移植术前的大剂量化疗的患者，del13q是不良预后因素之一。1q21染色体扩增(amp1q21)，见于约40%的MM 患者，存在amp1q21的患者预后较差，生存期较短，易复发。约10%MM患者可发现17p13染色体缺失（del17p13），此类患者病情进展快，生存期短，对治疗反应较差，髓外病变、高钙血症及浆细胞瘤的发生率较高，del17p13被认为是MM高危因素之一。
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大量临床研究证实，MM患者染色体异常在疾病发生发展过程中起着举足轻重的作用，对于指导治疗、判断预后均有重要的临床意义。
MM主要在老年人群中发病，近年来，MM有发病低龄化和发病率增高的趋势。迄今为止，MM仍然是个不可治愈的疾病。治疗的主要目标是延长无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）。马法兰联合地塞米松做为初治MM患者的一线治疗方案已有40余年，可获得中位生存期29至37个月。近十余年，临床医生更倾向于对低于65岁患者进行自体造血干细胞移植治疗，但高龄患者以及有严重临床并发症的患者并无法耐受。因MM本身是老年人疾病，患者的中位年龄在60岁左右，这意味着在初治期近半数的患者无法选择大剂量化疗。因此，选择安全有效的治疗方法，对这部分患者群来说尤为重要。
硼替佐米，是一种硼酸二肽，是首次应用于人类疾病治疗的蛋白酶体抑制剂。可通过干扰细胞信号通路而中断细胞周期，介导凋亡，抑制血管新生。其主要作用即抑制NF-κB，从而干扰NF-κB介导的细胞存活、肿瘤生长以及血管新生。在MM的治疗中显示出其巨大的优势。多项临床试验证实了硼替佐米以及硼替佐米联合应用其他药物对于初治及复发的MM患者，均有较好的疗效。
在适合使用大剂量化疗和自体移植的MM患者中，若能够达到完全缓解（CR）或至少接近完全缓解（VGPR），可获得较长的PFS和OS。在不适合做自体移植的MM患者，如高龄患者中，使用传统化疗方法很难获得CR，随着近年来新药的研发，沙利度胺和硼替佐米的临床应用，大大提高了此类患者的CR以及VGPR率。
慢性淋巴细胞白血病（CLL）是单克隆CD5+ B细胞在外周血、骨髓以及淋巴组织中恶性增殖的疾病。发病人群多为老年人，其发病中位年龄为70岁，发病率随着年龄增高而增多，男性患者多见。在西方国家，CLL是发病率最高的血液系统恶性疾病。CLL的中位生存期近10年，个体的预后存在很大的差异。随着诊断水平的进步，多数CLL病人可以在疾病早期获得诊断，但是病情进程却呈现出很大的不同，部分病人进展迅速，而部分病人病情可稳定10年以上，期间并不需要特殊治疗。因此，在病情早期，进行准备的预后判断，选择合适的治疗方式尤为重要。
Rai和Binet分期对CLL预后的判断曾起着举足轻重的作用，但是无法区分相同
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分期病人中预后的不同。多数的病人就诊于疾病的早期阶段，因此，临床医生只能通过实验室的多项检测来推测患者的病程进展。CD38表达和ZAP-70表达同样是较经典的评估CLL的预后因素。除此之外，免疫球蛋白重链基因可变区的突变（IGHV）同样是重要的预后因素之一。最近研究表明细胞遗传学异常对了解疾病进展和评估疾病预后有重要的临床意义。在CLL中，预后好的相关因素包括IGHV存在突变、低CD38表达、低ZAP-70表达以及不存在17p和11q缺失。
由于MM细胞和CLL细胞均为为分化终末期B细胞，增殖活性较低，分裂相不易获得，大多处于分裂间期。常规G显带分析仅可以发现30%的患者存在染色体异常。而部分染色体改变，如t(4;14)(p16.3;q32)，存在于15~20%的MM患者中，在常规核型分析中是无法识别的；t(14;16)(q32;q23)如果不借助其他特殊技术，则在G显带分析中很难分辨出。
荧光原位杂交（FISH）技术，可对间期细胞进行染色体定位分析，检出率高，灵敏度高，操作简单，不仅可用来检测三倍体或单倍体改变，也可检测染色体区段的缺失或扩增，亦可检测染色体的异常易位。在中期分裂相不易获得的MM和CLL中具有更突出的优势，可检测到与预后密切相关的累及基因位点的微缺失，异常克隆检出率可显著提高，并且FISH检测还可以相对定量恶性克隆细胞的比例。随着FISH技术的广泛应用，对MM和CLL的分子遗传学研究踏上了一个新台阶，检出率的提高以及对更多复杂染色体异常的确认，不仅为发病机制的研究提供了更多的依据，也为更好的开展临床诊治提供了支持。
由于部分MM患者骨髓浆细胞比例并不高，在FISH检测中，阳性率的检出依赖于骨髓穿刺术所获得的良好的浆细胞比例，为了更准确的得知MM染色体的异常率，FISH检测最好在克隆性浆细胞上进行。对于浆细胞的识别，目前主要有两种方式：CD138+磁珠分选和胞质轻链免疫荧光原位杂交法（cIg FISH）。对于骨髓浆细胞比例较低的患者，通过这两种浆细胞识别方法进行FISH检测具有重要的临床意义。
本研究FISH检测分析了大量临床MM与CLL患者标本，比较国人染色体异常与国外文献报告的异同，并初步分析了染色体异常的临床意义。
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中文摘要
第一部分
FISH检测多发性骨髓瘤分子遗传学异常及其临床意义
目的：了解中国人群MM患者的分子细胞遗传学异常情况，并探讨其临床意义。
方法：间期FISH技术检测166例初治多发性骨髓瘤患者的骨髓标本，汇总临床资料，分析染色体异常与临床特征、治疗反应以及预后的关系。
结果：经FISH检测，88.0%（146/166）的MM患者存在不同程度的染色体异常，IGH易位，即t(14q32)，其异常率为58.4%。其中t(11;14)为25.9%，t(4;14)为17.5%，t(14;16)为7.2%，其他未确定的易位7.8%。del13q14，RB1探针检出的异常率为55.4%，D13S319检出率为53.6%。amp1q21为49.4%，del17p13为25.3%。其分子遗传学异常与患者就诊时多项临床指标关系密切。使用硼替佐米化疗方案可改善患者的，尤其存在del13q14患者的CR+VGPR率（p=0.004）。染色体异常与患者的无进展生存期（PFS）有关，最显著的为del17p13患者中位PFS为4.9月，无del17p13患者的中位PFS为8.9月（p<0.001）。amp1q21患者的中位PFS为5.9月（vs 8.8月，p=0.002）。t(14;16)患者中位PFS为3.0月（vs 7.1月，p=0.006）。del13q14的患者中位PFS为6.7月（vs 8.6月，p=0.043）。del13q14患者中合并del17p13的中位PFS较短（4.6月vs 8.0月，p=0.002）。而在无del17p13的患者中，del13q14患者与无del13q14患者的PFS 无明显差异。
结论：中国人群MM患者的del17p13发生率较高，其余分子细胞遗传学异常率与西方国家人群类似。MM患者的染色体异常与临床特征、治疗反应和预后都有着密切的联系。
关键词：多发性骨髓瘤，荧光原位杂交技术，细胞遗传学，预后
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第二部分
cIg FISH与FISH检测多发性骨髓瘤方法学比较
目的：探讨cIg FISH与FISH对多发性骨髓瘤染色体异常检出率的差异。
方法：cIg FISH与FISH同时检测同一MM患者的骨髓样本，比较其检出率的差异，共比较55例MM患者的检出结果。
结果：55名MM患者中，cIg FISH检出del13q14阳性率为58.2%(32/55)，常规FISH检出率为41.8%(23/55)。amp1q21的cIg FISH检出阳性率为52.7%(29/55)，常规FISH检出率为40.0%(22/55)。在浆细胞<30%的患者中，del13q14的cIg FISH检出率为51.9%(14/27)，常规FISH检出率为22.2%(6/27)，差异有统计学意义（p=0.024）。amp1q21的cIg FISH检出率为55.6%(15/27)，常规FISH检出率为29.6%(8/27)（p=0.054）。在浆细胞>30%的患者中，cIg FISH与FISH检测的阳性率并没有明显的差异。
结论：在浆细胞低于30%的MM患者中，使用cIg FISH检测染色体异常可明显提高检出率。
关键词：多发性骨髓瘤，荧光原位杂交技术，胞质轻链免疫荧光原位杂交
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第三部分
FISH检测慢性淋巴细胞白血病分子遗传学异常及其临床意义
目的：了解中国人群CLL患者的分子细胞遗传学异常情况，并探讨其临床意义。
方法：间期FISH技术检测94例CLL患者的外周血标本，汇总临床资料，分析染色体异常与临床特征的关系。
结果：经FISH检测，81.9%（77/94）的患者存在不同程度的染色体异常。其中35名患者存在2种以上的染色体异常。最常见的染色体异常为del13q14，阳性率为55.3%（52/94）。其次为+12，阳性率为25.5%（24/94）。del11q22见于19.1%（18/94）的患者。del17p13阳性率为17.0%（16/94）。Del11q22和/或del17p13的患者分期多为Rai 3期和4期，以及Binet C期。del11q22与Rai分期具有明显相关性（r=0.223，p=0.030）。del17p13与Rai分期（r=0.310，p=0.003）及Binet分期（r=0.229，p=0.032）均呈明显相关。且del11q22细胞比例与Binet分期（p=0.001）有密切的相关性。
结论：中国人群CLL患者的分子细胞遗传学异常率与西方文献报道类似。CLL 染色体异常与临床分期等临床特征有密切的联系。
关键词：慢性淋巴细胞白血病，荧光原位杂交技术，细胞遗传学
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Abstract
Part I
Clinical significance of cytogenetic abnormalities detected by interphase fluorescence in situ hybridization in newly diagnosed
multiple myeloma patients
Object: To investigate the clinical significance of the chromosomal changes in Chinese MM patients.
Method: Interphase fluorescence in situ hybridization (FISH) on bone marrow (BM) cells was performed in 166 enrolled MM patients. Relationships between chromosomal abnormalities and clinical features, response to therapies and prognosis were analyzed. Results: As a result of FISH, 88.0% (146/166) patients had chromosome changes. The incidences of each probe were IGH 58.4%, t(11;14) 25.9%, t(4;14) 17.5%, t(14;16) 7.2%, undetermined t(14q32) 7.8%. RB1 55.4%, D13S319 53.6%, amp1q21 49.4%, and del17p13 25.3%. Each cytogenetic abnormality was significantly correlated to clinical features. Treatments with bortezomib gave patients a notably higher CR+VGPR rates, especially for patients with del13q14 (p=0.004). The media PFS of patients with del17p13 was 4.9 months (vs 8.9 m, p<0.001). The media PFS of patients with amp1q21 was 5.9 m (vs 8.8m, p=0.002). And t(14;16) was 3.0 m (vs 7.1 m, p=0.006), del13q14 was 6.7 m (vs 8.6 m, p=0.043). Among patients with del13q14, the ones with del17p13 had a shorter median PFS(4.6m vs 8.0m, p=0.002). And among patients without del17p13, there's no significant difference of PFS between patients with and without del13q14. Conclusion:Chinese MM patients had a higher del17p13 rate compared with people in western countries. The other prevalence of chromosomal abnormalities of MM patients was similar in Chinese and other people. Cytogenetic changes were associated with patients'
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responses to therapies and prognosis.
Key words: multiple myeloma, fluorescence in situ hybridization, cytogenetic, prognosis
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Part II
Comparison of cytoplasmic immunoglobulin light chain FISH and normal FISH on detecting cytogenetic abnormalities in
multiple myeloma patients
Object: To compare the positive rates of cytogenetic changes detected by cIg FISH and normal FISH in myeloma patients.
Method:To perform cIg FISH and FISH on same patient's sample and compare the positive rates. 55 myeloma patients were analyzed in all.
Results: As a result of cIg FISH, 58.2%(32/55) patients had del13q14 compared with 41.8%(23/55) by normal FISH. And 52.7%(29/55) patients had amp1q21 by cIg FISH compared with 41.8%(23/55). Among the patients with plasma cells<30%, cIg FISH found 51.9%(14/27) del13q14 patients compared with 22.2%(6/27) by normal FISH (p=0.024). And 55.6%(15/27) amp1q21 patients compared with 29.6%(8/27) (p=0.054). But in patients with plasma cells>30%, the positive rates showed no significant difference between cIg FISH and normal FISH.
Conclusion: Among the patients with plasma cells<30%, cIg FISH improved the detection rate of cytogenetic abnormalities significantly.
Key words:multiple myeloma, fluorescence in situ hybridization, cytoplasmic immunoglobulin light chain FISH
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Part III
Clinical significance of cytogenetic abnormalities detected by interphase fluorescence in situ hybridization in chronic lymphocyte leukemia
patients
Object: To investigate the clinical significance of the chromosomal changes in Chinese CLL patients.
Method: Interphase fluorescence in situ hybridization (FISH) on peripheral blood cells was performed in 94 CLL patients. Relationships between chromosomal abnormalities and clinical features was analyzed.
Results: As a result of interphase FISH, 81.9%(77/94) patients had chromosome changes.
35 patients had more than one abnormalities. The most frequent change was del13q14, the incidence of that was 55.3%(52/94). The next was trisomy 12, which was observed in 25.5%(24/94) patients. The incidence of del11q22 was 19.1%(18/94), del17p13 was 17.0%(16/94). Most del11q22 or/and del17p13 patients were in Rai stage 3 and 4, and in Binet stage C. Del17p13 had a significant relationship with Rai stage(r=0.310，p=0.003) and Binet stage(r=0.229，p=0.032). The percentage of del11q22 cells was significantly correlated to Binet (p=0.001) stage systems.
Conclusion:The prevalence of chromosomal abnormalities of CLL patients was similar compared to literatures. Cytogenetic changes were associated with patients' clinic stages. Key words: chronic lymphocyte leukemia, fluorescence in situ hybridization, cytogenetic
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第一部分FISH检测多发性骨髓瘤分子细胞遗传学异常
及其临床意义
多发性骨髓瘤（MM）是单克隆浆细胞的异常增殖性疾病。MM患者的临床进程呈现出很大的差异。大量遗传学的研究证明MM与其他血液系统恶性疾病一样，其单克隆浆细胞存在多种复杂的染色体异常，对MM的诊治具有重要临床意义。1-4 传统的染色体检查方法是G显带细胞遗传学技术，需细胞培养、染色体制备，且染色体分析需要有较好质量的中期分裂相。MM的中期分裂相不易获得，异常克隆检出率较低，对疾病的预后提示作用小。5-7 间期荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization, FISH）技术不需要中期分裂相，可分析大量间期细胞，且具有操作相对简单、敏感性和特异性高的优点，FISH不仅能够检测染色体的异常扩增与缺失，同样能检出染色体的平衡易位，大大提高了MM染色体异常的检出率。
材料和方法
一、实验试剂
1、肝素钠（Heparin Sodium）抗凝剂，2ml：12500 单位，购自南京新百药业公司。
2、MM FISH检测试剂盒（MM FISH test kit，货号F01003-02），购自北京金菩嘉医
疗科技有限公司。包括杂交缓冲液，DAPI及以下探针：
探针名称检测位点
RB1 13q14
D13S319 13q14.3
1q21 1q21
P53 17p13
IGH 14q32
3、IGH/CCND1 FISH检测试剂盒（Vysis LSI IGH/CCND1 Dual Color Dual Fusion
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Probes kit，货号05J69-001），购自美国雅培公司。
包括：a. IGH/CCND1双色融合探针
b. 杂交缓冲液
4、IGH/FGFR3 FISH检测试剂盒（Vysis LSI IGH/FGFR3 Dual Color Dual Fusion
Probes Kit，货号05J74-001），购自美国雅培公司。
包括：a. IGH/FGFR3双色融合探针
b. 杂交缓冲液
5、IGH/MAF FISH检测试剂盒（Vysis LSI IGH/MAF Dual Color Dual Fusion Probes
kit，货号05J84-004），购自美国雅培公司。
包括：a. IGH/MAF双色融合探针
b. 杂交缓冲液
6、4-壬基苯基-聚乙二醇，（Nonidet P-40，NP-40，octylphenoxypolyethoxyethanol），
购自Sigma公司。
7、1:15000胃蛋白酶，购自武汉天傲公司
8、无水乙醇，甲醇，冰醋酸，氯化钾，氯化钠，柠檬酸钠（国产分析纯）。
二、主要实验仪器
1、电子天平，美国Mettler Toledo 公司
2、恒温水浴箱，上海新苗有限公司
3、电热恒温培养箱，上海新苗有限公司
4、水平离心机，湖南赛特湘仪公司
5、BX51荧光显微镜，日本Olympus公司
6、ProgResMFcool显微镜分析仪
7、净水机，美的公司
8、0.5-1000μl移液器，德国Eppendoff 公司
9、-20度及4度冰箱，容声电器有限公司
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三、主要实验试剂的配制
1、标准柠檬酸盐贮存液：20×SSC
氯化钠88g
柠檬酸钠44g
去离子水400ml
充分溶解，用盐酸调节pH值至5.3，去离子水定容至500ml。
2、标准柠檬酸盐工作液：2×SSC
20×SSC（pH5.3）100ml
去离子水800ml
充分混匀，用碳酸氢钠调节pH值至7.0±0.2，去离子水定容至1L。
3、各浓度乙醇溶液：70％乙醇：将700ml无水乙醇，用去离子水稀释至1L；85％
乙醇：将850ml无水乙醇，用去离子水稀释至1L。
4、0.1%NP-40/2×SSC洗涤溶液
20×SSC（pH5.3）40ml
NP-40 0.4ml
去离子水300ml
充分混匀，用碳酸氢钠调节pH值至7.0±0.2，去离子水定容至400ml。
5、0.3％NP-40/0.4×SSC洗涤溶液
20×SSC（pH5.3）20ml
NP-40 3ml
去离子水950ml
充分混匀，用碳酸氢钠调节pH值至7.0-7.5，去离子水定容至1L。
6、氯化钾低渗液（0.075 M KCl）
KCl 2.795g
去离子水300ml
充分混匀，用去离子水定容至500ml。
7、固定液：（甲醇：冰乙酸体积比3：1）
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量取30ml甲醇和10ml冰乙酸，充分混匀，使用前新鲜配制。
8、胃蛋白酶工作液：
1:15000胃蛋白酶50μl
10M HCL 50μl
去离子水50ml
四、实验方法与步骤
1、病例收集及分类：从2008年3月至2011年12月，在协和医院、解放军301医院、
武汉市第一医院以及宜昌市中心医院，共有166名初治MM患者纳入研究。在获得患者知情同意之后，取骨髓进行FISH检测。
2、标本采集。采新鲜骨髓液3ml，0.3ml肝素抗凝。
3、收集细胞：将骨髓液移至15ml离心管，1300rpm/min，5min；弃上清，吸管混匀
后缓缓加入37℃预热的0.075mol/L KCL溶液至8ml进行低渗处理，继续用吸管混匀后置37℃水浴箱30min，中间吹打混匀1~2次；加入1ml 3:1 甲醇:冰醋酸固定液进行预固定，吸管充分混匀；1300rpm/min离心5min，弃上清，缓缓加入3:1 甲醇/冰醋酸固定液至8ml，混匀，室温下静置10min进行固定；1300rpm/min离心5min，去上清，缓缓加入3:1 甲醇/冰醋酸固定液至8ml，混匀，室温下静置10min，1300rpm/min离心5min，弃上清，充分混匀后，再加入固定液至2ml，置-20℃冰箱冷藏，可随时取出供FISH检验。
4、FISH玻片制片：取出细胞悬液，1300rpm/min离心5分钟，去上清，按细胞数量
加入适量固定液，用吸管将细胞悬液轻轻吹打混匀后吸取少量，滴至干净的载玻片上，自然晾干。
5、老化：室温放置过夜或56℃烤片至少60分钟，室温干燥保存。剩余标本置于-20℃
冰箱备用。
6、将玻片置于37℃ 2×SSC溶液中浸泡30分钟。
7、消化：将玻片置于37℃胃蛋白酶工作液中10~15分钟，直至滴片区域变透明。
8、室温下将玻片依次置于70%乙醇、85％乙醇和100％乙醇中各3分钟脱水。自然
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干燥玻片。
9、探针配制：所用探针RB1、D13S315、1q21、p53、IGH（北京金菩嘉医疗科技有
限公司），分别检测13q14、13q14.3、1q21、17p13、t(14q32)位点的异常。探针IGH/CCND1、IGH/FGFR3、IGH/MAF(Vysis，美国雅培公司)检测t(11;14)、t(4;14)和t(14;16)。
室温下将如下液体加入到微量离心管中。
杂交缓冲液7μl + 去离子水1μl + 探针2μl = 10μl
离心3秒，将探针混合液充分混匀。将10μl 探针混合物滴加于玻片杂交区域，立即加盖盖玻片，用rubber cement封片。共变性：76℃，5分钟；杂交：置于预热的42℃湿盒中，16小时。
10、洗涤：洗涤前将0.3%NP-40/2×SSC溶液置于73℃水浴箱中至少30分钟。轻轻移
去盖玻片，将玻片迅速置于0.3% NP-40/0.4×SSC溶液中，振荡3秒，漂洗2分钟；取出玻片，将玻片浸入室温0.1% NP-40/2×SSC溶液中，振荡3秒，漂洗2分钟；将玻片浸入70％乙醇溶液中3分钟。
11、样本复染：暗处自然干燥玻片。将10μl DAPI复染剂滴加于杂交区域位置，立即
盖上盖玻片。暗处放置10-20分钟后，在荧光显微镜下选用合适的滤光片组观察玻片。
12、样本FISH结果观察：首先在10倍物镜下，在FISH标本玻片上找到杂交细胞区
域；然后在40倍物镜下扫描整个区域，观察信号的质量，满意的标本应是75%以上的细胞核中都有杂交信号；在100倍物镜下观察细胞核的结果并进行信号计数和比值计算。计数200个细胞，计算异常信号细胞所占的百分率。结果分析时随机计数样本细胞。计数的细胞必须是各通道信号均清晰可辨的细胞。细胞核轮廓不清或有重叠的不计数。杂交不均匀的区域不计数。
13、建立阈值：健康人群20例设为对照组。每份样本分析200个细胞，计算异常信
号的细胞数、百分比的平均值及标准差，异常阈值定义为平均值+3倍标准差。
异常阈值=平均值（M）+3×标准差（SD）。
14、根据阈值判断结果：每例样本随机记数200个细胞，如果显示异常信号细胞比例
急性淋巴细胞白血病及其实验诊断题库1-2-10
急性淋巴细胞白血病及其实验诊断题库1- 2-10
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]急性淋巴细胞白血病L1型最重要的特点是（） A.篮细胞多见 B.小淋巴细胞为主，核浆比例高 C.PAS反应阳性 D.过氧化物酶染色阴性 E.以上都不正确 急性淋巴细胞白血病L1型最主要的是以小原淋巴细胞为主，核浆比例高。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]急淋白血病的特点（） A.白细胞数增高 B.过氧化物酶染色阳性 C.苏丹黑染色阳性 D.非特异性酯酶染色阳性 E.无Auer小体 Auer小体是急性非淋巴细胞白血病形态学上的诊断标志。见到它肯定是急性非淋巴细胞白血病。
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]有关ALL骨髓象特点以下说法正确的是（） A.多数病例增生低下 B.以成熟淋巴细胞增生为主 C.粒细胞系增生活跃 D.红细胞系增生活跃 E.篮细胞多见 ALL骨髓象有核细胞增生极度活跃或明显活跃，少数病例呈增生活跃，以原始和幼稚淋巴细胞为主，30%，可高达50%~90%。伴有形态异常，成熟淋巴细胞较少见。巨核细胞系数量显著减少或不见，血小板减少。退化细胞明显增多，篮细胞（涂抹细胞）多见，这是急淋的特征之一。 (辽宁11选5 https://www.wendangku.net/doc/0f16395988.html,)
问题： [单选,A2型题,A1A2型题]FAB分型将ALL按细胞大小分为（） A.3型 B.4型 C.5型 D.6型 E.7型 目前国际通用FAB形态学分型，即按照白血病细胞大小、核浆比例、核仁清楚与否及胞浆嗜碱程度将急淋分为L1、L1、L3三种亚型。
慢性淋巴细胞白血病施鹏飞
慢性淋巴细胞白血病（CLL） 杭州市第一人民医院血液科施鹏飞 CLL是欧洲和北美最常见的白血病，最主要但不是绝对的发生在老年患者。它的病程多样化，生存期从几个月到几十年不等。最主要的进展是分子和细胞学标记物对CLL病人的预后很有意义。尤其免疫球蛋白基因突变和一些细胞遗传学异常是重要的预后因素。然而这些发现也提出一些新问题，包括关于CLL生物学、预后和治疗等，有些问题我们下面会讨论。理解B细胞受体功能、遗传的自然改变、增殖和凋亡的平衡有利于我们预测和治疗CLL。尽管几乎所有的病人均会复发，但是治疗能使大部分病人缓解，CLL目前仍是个不可治愈的疾病。由于分子生物学进展进，CLL的病理生理学更加清楚，同时一些新的治疗药物的出现，这些都使CLL治疗更加合理和有效。但不幸的是，目前我们还不能阻止CLL的发生。早期发现很重要，但是似乎对病人最终结果没有什么影响。 流行病学 CLL发病率由于人群的年龄和性别比构成不同而有所差别。SEER数据分析美国的发病率在3.5/1000000(男性5.0，女性2.5)。白血病研究机构进行数据收集，这些数据来自于每个血液学专家各自负责的实验室，涵盖了英格兰和威尔士三分之一的人口，在英国CLL的发病率为每年6.15/1000 000,虽然这个数值隐藏了来自各个研究组从1.3到13.7巨大差异，数据取决于每个血液病学家对这个疾病的关注程度。我们的经验是3/4的CLL病人是偶尔一次血液检查被发现的，但是精确的流行病学主要取决于病例收集者的勤奋程度。 CLL在小于50岁的人群中很少见到，但是从这个年龄之后发生率迅速提高。根据SEER 数据，，诊断CLL的中位年龄男性70岁，女性74岁，平均死亡年龄男性76岁，女性81岁。白种美国人的发病率比美国的非洲人要高（3.9vs2.8/1000 000/年），尽管他们是完全美国式生活，但是在美国居住的中国人、日本人和菲律宾人发病率明显低于美国人5倍。早期的数据发现美国的犹太人CLL的发病率是美国非犹太人的2倍。 CLL有家族聚集现象。一级亲属中有患CLL的人发生CLL或者其他淋巴肿瘤风险是普通人的3倍。在一篇关于四色细胞流式计数的文献中，Rawstron和他的同事发现3.5%超过40岁的健康人，在他们的血液中有一些单克隆淋巴细胞，这些细胞的免疫学特点类似于CLL细胞，数量小于3.5×109/L，但是如果一级亲属中有患有CLL的人，他们血液中存在这样细胞的机率为13.5-18%。亚临床的CLL和CLL之间的关系是值得研究的课题。 除了农民和除草工人，现在没有任何证据证明CLL与环境有关，比如放射线和化学药物。2003年1月23日，美国国家医学科学院公布一项研究，有充分证据证明在越南CLL与除草剂有关系。尽管放射线一直排除在CLL致病因素外，但是最近的研究提示放射线不能完全排除。 诊断 CLL临床定义是：成熟淋巴细胞计数至少是5×109/L和适当的免疫表型（表1）。这些特点将CLL与其他类似的套细胞淋巴瘤和脾边缘区淋巴瘤相区别。在一些个例中，肿瘤只限于淋巴结和其他组织，未累及外周血和骨髓，这样被称为小淋巴细胞淋巴瘤，组织学和免疫学和CLL一致，治疗也是一样的。还有一些病人外周血或骨髓存在一些类似于CLL细胞，未累及淋巴结和其他组织，且这些细胞的数目未达到CLL的诊断标准，叫做单克隆B淋巴细胞增多症。 分子和细胞学标记物可以预测疾病进展情况。尤其免疫球蛋白基因突变和一些细胞遗传学异常对预后很有价值。然而这些生物学上的差别不能将CLL分割为两种疾病，它只是有不同遗传学特点的一种疾病。
中国成人急性淋巴细胞白血病诊断与治疗指南(完整版)
中国成人急性淋巴细胞白血病诊断与治疗指南(完整版) 成人急性淋巴细胞白血病(ALL)是最常见的成人急性白血病之一，约占成人急性白血病的20%~ 30%，目前国际上有比较统一的诊断标准和不同研究组报道的系统治疗方案，完全缓解(CR)率可达70%~90%，3~5年无病生存(DFS)率达30%~60%[1]；美国癌症综合网(NCCN)于2012年首次公布了ALL的诊断治疗指南，我国于2012年发表我国第1版成人ALL 诊断与治疗的专家共识[2]，得到了国内同行的认可。最近2016版WHO 造血与淋巴组织肿瘤分类[3]发表，对于ALL的分类有一些更新，提出了一些新概念；NCCN对于成人ALL的临床指南也先后几次修改[4]。基于此，对我国成人ALL诊断与治疗的专家共识进行了更新。 一、诊断分型 (一)概述 ALL诊断应采用MICM(形态学、免疫学、细胞遗传学和分子学)诊断模式[5]，诊断分型采用WHO 2016标准。最低标准应进行细胞形态学、免疫表型检查，以保证诊断的可靠性；骨髓中原始／幼稚淋巴细胞比例≥20％才可以诊断ALL；免疫分型应采用多参数流式细胞术，最低诊断分型可以参考1995年欧洲白血病免疫学分型协作组(EGIL)标准(表1)[6]，疾病分型参照WHO 2016版分类标准[3]。同时应除外混合表型急性白血病，混合表型急性白血病的系列确定建议参照WHO 2008造血及淋巴组织肿瘤分类的标准(表2)，可以同时参考1998 EGIL标准(表3)[7]。
表1 急性淋巴细胞白血病(ALL)的免疫学分型(EGIL，1995) 表2 混合表型急性白血病的WHO 2008诊断标准 表3 双表型急性白血病的诊断积分系统(EGIL, 1998)
急性非淋巴细胞白血病诊疗方案
急性非淋巴细胞白血病诊疗方案 急性白血病（acute Leukemia，AL）是由于造血干祖细胞恶变，导致某系列白细胞成熟障碍，其幼稚白细胞在骨髓或其它造血组织中恶性增殖，浸润全身组织器官，使正常造血功能受抑，以贫血、发热、出血、肝脾及淋巴结肿大、感染等为主要表现的一组造血系统恶性肿瘤。本病多起病急骤，发展迅速。 急性白血病的发病率全世界平均发病率约3.1/10万，欧美国家发病率较高，国发病率占癌肿发病率的第6～8位，为十大恶性肿瘤之一。男性多于女性，是儿童及青少年最常见的恶性肿瘤。 本病属中医急劳、虚劳、血证、伤发热、温病、症积等围。 【病因病理】 一、西医病因病理 （一）病因及发病机制 急性白血病的病因尚未完全清楚，经近年研究表明，可能与下列因素有关： 1．病毒感染 C型RNA病毒、成人T细胞白血病病毒（HTLV）等，目前被认为可引起白血病。 2．化学物质与环境因素多种具骨髓毒性的化学物质均可能引起白血病，包括苯及其化合物、有机溶剂、杀虫药，某些药物（如氯霉素、保泰松、镇静安眠药、磺胺、烷化剂等抗癌药等），可能引起本病。 3．电离辐射长期接触γ射线、X线等放射线，可诱发白血病。 4．遗传因素某些遗传性疾病或免疫缺陷症患者易发白血病。 急性白血病的发病机制尚未充分阐明。一般认为是上述因素作用下，机体免疫功能失调，或基因变异，使造血干祖细胞恶变，分化、成熟障碍，凋亡减少，原始幼稚血细胞恶性增殖并浸润骨髓及全身组织器官，导致正常造血细胞明显减少，不能发挥正常功能而发生出血和感染等。 （二）病理 1．白血病细胞增生和浸润为本病特异性病理变化，主要发生于造血组织，如骨髓、肝脾、淋巴结，并可累及全身组织器官。 2．出血、组织营养不良及坏死出血可发生于任何部位，程度各异，常见于皮肤、鼻、口腔粘膜、肺、胃及脑等；白血病细胞的浸润、组织出血及梗死可引起局部组织变性、坏死；代障碍可引起全身组织营养不良。 3．继发感染以细菌及真菌感染较常见。感染发生时，局部炎症反应较微，但病灶易扩散，组织变性较严重。 二、中医病因病机 1．素秉不足，复感邪毒先天禀赋不足，后天失于调养，致脏腑功能失调，正虚体弱，复感风寒暑湿燥热或温毒之邪，入里化火成毒，损伤脏腑气血阴阳；
慢性淋巴细胞白血病介绍
慢性淋巴细胞白血病介绍 提要：慢性淋巴细胞白血病简称慢淋，是一种起病缓慢的淋巴细胞系中某些免疫功 能不全的淋巴细胞恶性增生性疾病。慢性淋巴细胞白血病主要死亡原因为感染，尤其是肺炎多见。其他死亡原因有全身衰竭，骨髓造血功能衰竭引起的严重贫血或出血。本文就来对淋巴细胞白血病进行详细的介绍。 一、慢性淋巴细胞白血病概述 慢性淋巴细胞白血病简称慢淋，是一种起病缓慢的淋巴细胞系中某些免疫功能不全的淋巴细胞恶性增生性疾病。本病在我国少见，仅占白血病的3.4%，在欧美白种人中较常见占25－30%。发病年龄大多在50岁以上、30岁以下者很少见。男性比女性多。本病的主要表现是全身淋巴结肿大，脾大，贫血及外周血中淋巴细胞异常增多。本病的病程长短悬殊，短者1－2年，长者10年以上，平均4－6年，主要死亡原因为感染，尤其是肺炎多见。其他死亡原因有全身衰竭，骨髓造血功能衰竭引起的严重贫血或出血。 二、慢性淋巴细胞白血病分类 血液内科，肿瘤科，普通外科 三、慢性淋巴细胞白血病症状体征 肝、脾肿大、腹水、黄疸。 四、慢性淋巴细胞白血病的辅助检查 血象中白细胞增多是本病的特点，最突出的发现是小淋巴细胞增多，白细胞计数大多在15～50×109/L，少数可超过100×109 /L。早期、小淋巴细胞占白细胞的65％～75％，晚期90％～98％，其形态与正常的小淋巴细胞难以区别。中性粒细胞和其他正常白细胞均显著减少。早期，贫血可不存在，以后逐渐加重，晚期贫血可以很严重，网织红细胞增高，血清胆红素增加。晚期血小板计数常减低。骨髓象：早期白血病细胞仅在少数骨髓腔内出现，因此，早期骨髓象可无明显改变；晚期正常的骨髓细胞几乎全部被成熟的小淋巴细胞所代替，原始淋巴细胞和幼稚淋巴细胞仅占5％～10％。另外，50％的病例有丙种球蛋白减少；10％～20％的病人有自身抗体；30％患者有高尿酸血症。 五、慢性淋巴细胞白血病治疗方案 选择性脾切除可在一定程度上缓解病情，但并不能延长存活期。 慢性淋巴细胞白血病术前准备： 1.对门静脉高压患者，术前应改善肝功能，纠正出血倾向。 2.对某些严重贫血者，应反复多次输血后，再行脾切除。 3.对长期使用激素者，应预防性使用抗生素。 4.按普外科腹部手术前准备。 慢性淋巴细胞白血病麻醉要求： 气管内插管麻醉。 慢性淋巴细胞白血病术中注意点： 1.手术可取左侧肋缘下或上腹正中“L”形切口，术野显露充分。 2.切睥前宜先结扎脾动脉。
急性淋巴细胞白血病3
急性淋巴细胞白血病 关键词：急性淋巴细胞白血病癌症ALL 症状预后生存率年龄 急性淋巴细胞白血病（ALL）是一种血液癌症，是成年人中比较常见的白血病类型之一。 1发病机制： 急性淋巴细胞白血病为骨髓正常造血衰竭和白血病细胞髓外浸润所引起。起病有急有缓，主要取决于白血病细胞的体内增殖速率和蓄积程度。急骤者表现突发高热、严重出血倾向、骨关节疼痛或全身衰竭等；缓慢者仅有渐进性苍白、疲乏、低热或轻微出血症状。淋巴细胞有三种表象：一为原始和幼稚淋巴细胞明显增生，比例增高，以小淋巴细胞为主；核圆形，偶有凹陷与折叠，染色质较粗，结构较一致核仁少，不清楚；胞浆少，轻或中度嗜碱。二为原始和幼稚淋巴细胞明显增生，比例增高，淋巴细胞大小不一，以大细胞为主；核形不规则，凹陷与折叠易见，染色质较疏松，结构不一致，核仁较清楚，一个或多个；胞浆量较多，轻或中度嗜碱。三为原始和幼稚淋巴细胞明显增生，比例增高，但细胞大小较一致，以大细胞为主；核形较规则，染色质呈均匀细点状，核仁一个或多个，较明显，呈小泡状；胞浆量多，深蓝色，空泡常明显，呈蜂窝状。 2影响急性淋巴细胞白血病病程和治疗结果的决定因素 急性淋巴细胞白血病侵入血液，可在体内扩散至其他器官，如肝，脾和淋巴结肿大，但它通常不会象肿瘤一样分化成多种癌症，急性淋巴细胞白血病是发展很快急性癌症，如果不及时治疗，患者会在几个月内死亡。 影响病程和治疗结果的主要因素：1年龄，年轻的患者往往会有一个更好的治疗前景。2实验室诊断，当诊断有一个较低的白细胞计数，治疗效果会更好。3根据法，美，英等国的分類，即用於所有的急性白血病（包括急性髓細胞性白血病，白血病）①全母語：小細胞均勻②全二級：大变异細胞③全三級：大不同的細胞空泡（泡沫狀功能）各种亞型分类，然后再通过测定表面标志物的异常淋巴細胞，依据2個主要的免疫類型：前B細胞和前T細胞。成熟的B細胞ALL （三級）現在列為伯基特淋巴瘤/白血病，根据分型来确定最合适的治疗方式。④如果发现费城染色体即异常染色体，将会有个较差的治疗结果。{患者的染色体发生移位表现为9号染色体长臂移至22号染色体短臂上，其基因型为bcr/abl融合，在大部分CML,部分ALL，及少数急性髓细胞白血病可见。ph染色体（费城1号染色体）：nowell及hungerford于1960年发现慢性粒细胞性白血病（cml）血中有一个小于g组的染色体，由于首先在美国费城（philadelphia）发现，故命名为ph染色体。最初认为是22号染色体的长臂缺失所致，后经显带证明是9号和22号染色体长臂易位的结果。易位使9号染色体长臂（9q34）上的原癌基因abl和22号染色体(22q11)上的bcr(break point cluster region)基因重新组合成融合基因。后者具有增高了的酪氨酸激酶活性，这是慢性粒细胞性白血病的发病原因。ph的重要临床意义在于：大约95％的慢性粒细胞性白血病病例都是ph阳性，因此它可以作为诊断的依据...}⑤及时化疗。治疗前景更好，在证明为急性淋巴细胞白血病的4，5周开始化疗，会有非常好的治疗前景。 3导致急性淋巴细胞白血病的危险因素 对于大多数人来说，急性淋巴细胞白血病致病原因不明。由于这个原因，有没有已知的方法来阻止它。然而，有一些已知的危险因素，这些因素可能会增加获得急性淋巴细胞白血病的机会。但目前还不知道是否这些危险因素是白血病的实际致病原因： Ⅰ暴露于高剂量辐射区或治疗其他类型的癌症引起本病。 Ⅱ暴露于如苯或某些化学品—用于石油精炼厂和其他行业和香烟的烟雾，某些清洁产品，清洁剂如溶剂、脱漆剂等 Ⅲ与人类T细胞淋巴瘤感染/白血病病毒1型或美国以外的EB病毒（EBV）的区域，相关的白血病更普遍出现在非洲的罕见情况下（白血病病毒- 1）。 Ⅳ有一种遗传性遗传综合征如唐氏综合症 Ⅴ白人男性 4急性淋巴细胞白血病的症状
急性非淋巴细胞白血病介绍
急性非淋巴细胞白血病介绍 提要：急性非淋巴细胞白血病约占小儿急性白血病的25％左右，可发生于任何年 龄，无明显年龄的发病高峰，男女之间无差异。本文将从概述、分型、症状等方面对急性非淋巴细胞白血病进行详细介绍。 一、急性非淋巴细胞白血病的概述 急性非淋巴细胞白血病(acute nonlymphocytic leukemia，ANLL)约占小儿急性白血病的25％左右，可发生于任何年龄，无明显年龄的发病高峰，男女之间无差异。二、急性非淋巴细胞白血病的分型 １．形态学分型１９８６年天津召开的白血病分类分型讨论会，将ＡＮＬＬ分为七型，诊断标准如下： (１)急性粒细胞白血病未分化型(Ｍ1)骨髓中原粒细胞(Ｉ+Ⅱ型)≥90％(非红系细胞)，早幼粒细胞很少，中性中幼粒细胞以下阶段不见或罕见。 (２)急性粒细胞白血病部分分化型(Ｍ2)分两个亚型，①Ｍ2a:骨髓中原粒细胞(Ｉ+Ⅱ型)＞30～＜90％(非红系细胞)，单核细胞＜20％，早幼粒细胞以下阶段＞１０％； ②Ｍ2b:骨髓中异常原始及早幼粒细胞明显增多，以异常的中性中幼粒细胞增生为主，其胞核常有核仁，有明显的核浆发育不平衡，此类细胞＞30％。 (３)急性颗粒增多的早幼粒细胞白血病(Ｍ3)骨髓中以颗粒增多的异常早幼粒细胞增生为主，＞30％(非红系细胞)，其胞核大小不一，胞浆中有大小不等的颗粒。可分两个亚型，①粗颗粒型(Ｍ3a)：嗜苯胺蓝颗粒粗大，密集甚或融合；②细颗粒型(Ｍ3b)：嗜苯胺蓝颗粒密集而细小。 (４)急性粒-单核细胞白血病(Ｍ4)依原粒和单核细胞系形态不同，可包括下列四种亚型：①Ｍ4a:原始和早幼粒细胞增生为主，原幼单和单核细胞＞20％(非红系细胞)；②Ｍ4b:原、幼单核细胞增生为主，原始和早幼粒细胞＞20％(非红系细胞)；③Ｍ4c:原始细胞既具粒系，又具单核细胞系形态特征者＞30％；④Ｍ4ED：除上述特点外，有粗大而圆的，嗜酸颗粒着色较深的嗜酸粒细胞，占５～30%。
急性淋巴细胞白血病诊疗常规
急性淋巴细胞白血病诊疗常规 一、急性淋巴细胞白血病(ALL) 的诊断及分型 (一) ALL 基本诊断依据 1、临床症状、体征:有发热、苍白、乏力、出血、骨关节疼痛,有肝、脾、淋巴结肿大 等浸润灶表现。 2、血象改变:血红蛋白及红细胞计数降低,血小板减少,白细胞计数增高、正常或减低, 分类可发现不等数量的原、幼淋巴细胞或未见原、幼淋巴细胞。 3、骨髓形态学改变: 是确诊本病的主要依据。骨髓涂片中有核细胞大多呈明显增生或极度增生,仅少数呈增生低下,均以淋巴细胞增生为主,原始+幼稚淋巴细胞必须≥30% 才可确诊为ALL 。除了对骨髓涂片作瑞氏染色分类计数并观察细胞形态改变外,应该做过氧 化酶(POX) 、糖原(PAS) 、非特异性酯酶(NSE)等细胞化学染色检查,以进一步确定异常细胞性质并与其他类型的白血病鉴别。 (二) ALL 的M IC 分型 除了临床及细胞形态学(M) 诊断以外,还应该用单克隆抗体作免疫分型(I) 及细胞遗传 学C) 检查,即M I C 分型诊断,尽可能作分子遗传学/融合基因(molecular genetics,M ) 检测, 即M ICM 分型。 1、细胞形态学分型:淋巴细胞型按FAB 分型标准分为L1、 2 和L3 型,但L1、2 型之间已不具有明显的预后意义。 2、免疫分型:分为T、B型二大系列: (1) T系急性淋巴细胞白血病(T-ALL) :具有阳性的T 淋巴细胞标志,如CD1 、CD2、CyCD3 、CD4 、CD5 、CD7 、CD8 以及TdT 等。(2) B 系急性淋巴细胞白血病(B 系ALL) :根据其对 B 系淋巴细胞特异的单克隆抗体标志反应的表现临床分为 3 个亚型: ①早期前 B 型急性淋巴细胞白血病(early Pre B2ALL) , CD79a、CD19 和(或) CyCD22 、CD10 及HLA2DR 阳性, Sm Ig、CyIg 阴性; ②前 B 型急性淋巴细胞白血病(Pre B2ALL) , CyIg 阳性, Sm Ig 阴性,其他 B 系标志CD79a 、CD19 、CD20 、CD10 、CyCD22 以及HLA2DR 常为阳性; ③成熟 B 型急性淋巴细胞白血病(B2ALL) , Sm Ig 阳性, 其他 B 系标志CD79a 、CD19、CD22 、CD10、CD20 以及HLA2DR 常为阳性。 此外,尚可见伴有髓系标志的ALL (My 2ALL) : 具淋巴系的形态学特征表现,以淋巴系特 异的抗原标志表达为主,但伴有个别、次要的髓系特征的抗原标志(CD13、CD33 或CD14等) 。 3、细胞遗传学改变: (1)染色体数量改变:有≤45 条染色体的低二倍体和≥47条染色体的高二倍体。(2) 染色体核型改变: 与ALL 预后有利的核型异常有: t (12; 21) / AML12TEL (ETV62CBFA2) 融合基因; 与ALL 预后不利的核型异常有: t(9; 22) /BCR2ABL 融合基因; t(4; 11) /MLL2AF4 融合基因及其他MLL 基因重排。 (三)临床危险度分型 1、与儿童ALL 预后确切相关的危险因素: (1) 年龄在< 12 个月的婴儿白血病或≥10 岁的年长儿童。 (2) 诊断时外周血白细胞计数≥50 ×10 /L。 (3) 诊断时已发生中枢神经系统白血病(CNSL)或睾丸白血病(TL) 者。 (4) 免疫表型为T 细胞白血病。 (5) 不利的细胞遗传学特征:染色体数目为<45 的低二倍体, t (4; 11) /MLL2AF4 融合 基因或其他MLL 基因重排,或t (9; 22) /BCR2ABL 融合基因异常。 (6) 早期治疗反应不佳者:泼尼松诱导试验60 mg/ (m ·d) , ×7 d，第8 天外周血幼 稚淋巴细胞≥1 ×10 /L (1000/ μl) ,定为泼尼松不良效应者(PPR) ,和(或) 标准方案联
急性非淋巴细胞白血病的检验诊断
急性非淋巴细胞白血病的检验诊断 发表时间：2013-02-28T11:07:44.653Z 来源：《中外健康文摘》2012年第46期供稿作者：范志广朱俊英马虹宇[导读] 目的讨论急性非淋巴细胞白血病的检验诊断。 范志广朱俊英马虹宇 (黑龙江省医院南岗分院 150000) 【中图分类号】R733.7 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）46-0223-02 【摘要】目的讨论急性非淋巴细胞白血病的检验诊断。方法对患者进行临床检验并依据检验结果进行诊断。【关键词】急性非淋巴细胞白血病的检验诊断 急性白血病的诊断是以形态学诊断为基础，结合免疫学、细胞遗传学和分子生物学检验的MICM综合性诊断。目前仍以FAB分类标准对急性白血病进行诊断与分型，急性非淋巴细胞白血病分8型。 (一)急性髓细胞白血病微分化型(M0) 1．血象白细胞数可低可高，血小板减少或正常，伴正细胞正色素性贫血。 2．骨髓象骨髓有核细胞增生活跃，原始细胞>30％，可达90％以上，无嗜天青颗粒及Auer小体，核仁明显，易误诊为急性淋巴细胞白血病(ALL)的Ll或L2型，红系、巨核系有不同程度的增生减低。 3．细胞化学染色光镜下髓过氧化物酶(MPO)及苏丹黑B阳性细胞<3％，电镜下过氧化物酶阳性。 4．免疫学标志检测一般HLA-DR和CD34阳性。CDl3，CD33，CDl4，CDl5，CDllb中至少有一种阳性，不表达淋巴T和B系特异性抗原，血小板抗原阴性。 (二)急性粒细胞白血病未成熟型(M1) 1．血象血红蛋白和红细胞下降明显，大部分患者血红蛋白<60g／L，外周血可见幼红细胞，白细胞总数升高，血片中以原始粒细胞为主，可占30％～60％，有时高达90％以上，可见畸形原始粒细胞，血小板中度到重度减少。 2．骨髓象骨髓增生极度活跃或明显活跃，骨髓中I型+Ⅱ型原始粒细胞>90％(非红系)，可见小原粒细胞，须与淋巴细胞鉴别。 3．细胞化学染色骨髓过氧化物酶染色至少有3％细胞阳性。 4．免疫学标志检测细胞表面分化抗原往往显示HLA-DR，MP0，CD34，CD33，CDl5及CDl3阳性。CD33阳性者治疗完全缓解率高，CDl3阳性和CD33阴性者治疗完全缓解率低。 (三)急性粒细胞白血病部分分化型(M2) 国内将M2型分为M2a和M2b两种亚型。 1．M2a型 (1)血象：贫血显著，白细胞的改变与Ml相似，以原始粒细胞及早幼粒细胞为主，血小板中度到重度减少。 (2)骨髓象：骨髓中原始粒细胞占30％～89％(非红系)，早幼粒细胞以下阶段至中性分叶核粒细胞>10％，单核细胞<20％，约半数病例的白血病细胞内可见Auer小体。有些病例出现小原始粒细胞，易误认为原始淋巴细胞。 2．M2b型 (1)血象：多数病例为全血细胞减少，易被误诊为再生障碍性贫血。 (2)骨髓象：骨髓多为增生明显活跃或增生活跃，红细胞系及巨核细胞系增生均减低，骨髓中异常的原粒细胞及早幼粒细胞明显增多，以异常的中性中幼粒细胞为主，且>30％。 3．细胞化学染色 (1)过氧化物酶(MPO)和苏丹黑(SBB)染色原始粒细胞分化低者呈阴性，分化良好的原始粒细胞呈阳性反应。 (2)非特异性酯酶染色呈阳性反应，且不被氟化钠抑制。 (3)中性粒细胞碱性磷酸酶染色活性降低，甚至消失。 4．免疫学标志检测细胞表面分化抗原表达HLA-DR，MP0，CDl3，CD33，CDll，CDl5和CD57，其中CD33和CDl3阳性率减低，而表达未成熟的髓系抗原CDl5和CDllb。 (四)急性早幼粒细胞白血病(M3) 1．血象血红蛋白、红细胞及血小板计数减少，大多数病例白细胞轻度增高，少数患者白细胞总数减少，此时患者的血象表现为全血细胞减少。分类以异常早幼粒细胞为主，可见少数原粒细胞及其他阶段的粒细胞，Auer小体易见。 2．骨髓象多数病例增生明显或极度活跃。多颗粒异常早幼粒细胞为≥30％(非红系)。部分病例早幼粒细胞胞浆中有Auer小体，有的病例一个细胞可有数至数十根，呈柴捆样排列，称为“柴捆细胞”。根据胞浆中颗粒的大小又将M3型分为两种亚型：①M3a(粗颗粒型)，颗粒粗大密集或融合染深紫色，可掩盖核周围甚至整个胞核；②M3b(细颗粒型)，胞浆中嗜苯胺蓝颗粒密集而细小，核扭曲、折叠或分叶，易与急单白血病混淆。 3．细胞化学染色①过氧化物酶(MPO)和苏丹黑(SBB)染色呈阳性或强阳性反应；②非特异性酯酶染色呈阳性反应，但不被氟化钠抑制；③中性粒细胞碱性磷酸酶染色活性降低，甚至消失。 4．免疫学标志检测典型的免疫表型呈CDl3和CD33阳性。故以髓系标志为主而HLA-DR为阴性者M3型的可能性大。CD34阳性的APL，恶性细胞颗粒小而少，且易出现白细胞计数增高，预后较差。 (五)急性粒-单核细胞白血病(M4) 1．血象血红蛋白和红细胞数为中度到重度减少，白细胞数可增高、正常或减少，可见粒及单核两系早期细胞，原单核和幼单核细胞有时可达30％～40％，且有较活跃的吞噬现象，而粒系早幼粒细胞以下各阶段均易见到。血小板呈重度减少。 2．骨髓象骨髓增生极度活跃或明显活跃，粒、单核两系同时增生，原始细胞≥30％(非红系)，各阶段单核细胞>20％，各阶段粒细胞>20％。按粒系和单核细胞系形态不同，分为下列4种亚型： (1)M4a：原始和早幼粒细胞增生为主，原、幼单核和单核细胞>20％(非红系细胞)。
急性淋巴细胞白血病的症状有哪些
急性淋巴细胞白血病的症状有哪些 急性白血病起病一般比较急，但也有缓慢起病者。起病急者急性淋巴细胞白血病（简称急淋）多于急性非淋巴细胞白血病（简称急非淋），急淋罕见有白血病前期表现；缓慢起病者主要见于急非淋。各种类型的急性白血病常有共同的临床表现。因正常的血细胞减少，导致贫血、出血、继发性感染和发热；因白血病细胞广泛浸润各组织脏器，导致肝、脾淋巴肿大及其它器官功能障碍。 （1）贫血： 急性白血病患者贫血的症状常出现得早而且严重，呈进行性发展，确诊时约60％以上患有血红蛋白低于60g／L。贫血发生的机理和以下因素有关：1）红细胞生成减少：白血病细胞可抑制正常多能干细胞和红系祖细胞，并可破坏红系诱导微环境，导致红细胞生成减少；2）无效性红细胞生成：DiGuglielmo 综合征和某些急非淋白血病可见幼红细胞增生，其发生贫血机理与无效性红细胞生成有关；3）溶血：某些急性白血病可存在隐性溶血，DiGuglielmo综合征的红细胞寿命缩短，由于造血代偿能力降低，也会发生溶血性贫血；4）失血；5）化疗药物引起的贫血包括抗代谢药产生药物性巨幼红细胞性贫血。 总之，急性白血病发生贫血的原因是综合的，但主要原因是红细胞生成减少。 （2）出血： 以出血为早期表现者占成人急性白血病的38.6％。急性白血病的死因分析中，62.24%死于出血，其中87%为颅内出血。血小板减少是急性白血病出血的最重要原因。 （3）感染和发热： 成人急性白血病以发热为早期表现者占52％，发热常伴有感染。其中以口腔炎最多见，齿龈炎或咽峡炎严重时可发生溃疡，甚至坏死。肛周炎或肛旁脓肿及肺部感染也甚常见，严重感染常导致败血病和菌血症。 （4）淋巴结和肝脾肿大： 淋巴结肿大以急淋发生率最高，初诊时可达80％，尤见于T细胞、B细胞和前B细胞型急淋，常有淋巴结显著肿大。 （5）骨和关节表现： 骨痛以急淋多见，初诊时有骨、关节症状者急淋11％，急非淋占2％。慢性粒细胞白血病急变有显著骨痛，剧烈者可呈持续性有炸裂感。胸骨下端压痛也甚常见。伴骨髓坏死者也不少见，易发生于儿童急淋。以关节肿为起病症状者多见于小儿。 （6）眼部表现： 白血病的眼部表现常由浸润或出血引起，白血病细胞可直接浸润视神经、
急性非淋巴细胞白血病
急性非淋巴细胞白血病 病例概述 急性非淋巴细胞白血病（acute nonlymphocytic leukemia，ANLL）约占小儿急性白血病的25％左右，可发生于任何年龄，无明显年龄的发病高峰，男女之间无差异。 病例原因 【分型】 1．形态学分型1986年天津召开的白血病分类分型讨论会，将ANLL分为七型，诊断标准如下： （1）急性粒细胞白血病未分化型（M1）骨髓中原粒细胞（I+Ⅱ型）≥90％（非红系细胞），早幼粒细胞很少，中性中幼粒细胞以下阶段不见或罕见。 （2）急性粒细胞白血病部分分化型（M2）分两个亚型，①M2a:骨髓中原粒细胞（I+Ⅱ型）＞30～＜90％（非红系细胞），单核细胞＜20％，早幼粒细胞以下阶段＞10％；②M2b:骨髓中异常原始及早幼粒细胞明显增多，以异常的中性中幼粒细胞增生为主，其胞核常有核仁，有明显的核浆发育不平衡，此类细胞＞30％。 （3）急性颗粒增多的早幼粒细胞白血病（M3）骨髓中以颗粒增多的异常早幼粒细胞增生为主，＞30％（非红系细胞），其胞核大小不一，胞浆中有大小不等的颗粒。可分两个亚型，①粗颗粒型（M3a）：嗜苯胺蓝颗粒粗大，密集甚或融合；②细颗粒型（M3b）：嗜苯胺蓝颗粒密集而细小。 （4）急性粒-单核细胞白血病（M4）依原粒和单核细胞系形态不同，可包括下列四种亚型：①M4a:原始和早幼粒细胞增生为主，原幼单和单核细胞＞20％（非红系细胞）；②M4b:原、幼单核细胞增生为主，原始和早幼粒细胞＞20％（非红系细胞）；③M4c:原始细胞既具粒系，又具单核细胞系形态特征者＞30％；④M4ED：除上述特点外，有粗大而圆的，嗜酸颗粒着色较深的嗜酸粒细胞，占5～30%。 （5）急性单核细胞白血病（M5）分两个亚型：①未分化型（M5a）：骨髓中原始单核细胞（I+Ⅱ型）（非红系细胞）≥80％；②部分分化型（M5b）：骨髓中原始和幼稚细胞＞30％（非红系细胞）；原单核细胞（I+Ⅱ型）＜80％。 （6）红白血病（M6）骨髓中红细胞系＞50％，且常有形态学异常的原始粒细胞（I+Ⅱ型），（或原始十幼单核细胞）＞30％；血片中原粒（I+Ⅱ型）（或原单）细胞＞5％，骨髓非红系细胞中原粒细胞（或原始十幼单核细胞）＞20％。 （7）巨核细胞白血病（M7）外周血有原巨核（小巨核）细胞；骨髓中原巨核细胞＞30％。原巨核细胞有组化电镜或单克隆抗体证实；骨髓造血细胞少时往往"干抽"，活检有原始和巨核细胞增多，网状纤维增加。 2．免疫学分型ANLL的分型主要依靠形态学（包括细胞化学）来区分。免疫学分型的研究进展较ALL慢，主要用于ANLL与ALL的区别。在髓系细胞的分化过程中，CD34出现于粒系-单核系祖细胞（granulocyte-macrophage progenitor cell，CFU-GM），分化至原始粒
白血病的分类
血液学白血病 白血病只根据骨髓骨髓细胞学（形态）就可确诊，特点：异常增生伴分化成熟，根据分化程度分为急性，慢性，， 一：急性白血病（根据细胞的类型分为急性淋巴，急性非淋巴）骨髓象特征原始+早幼（幼稚）细胞≥30％ （1）急性淋巴细胞白血病（ALL，易引起中枢神经系统白血病，淋巴细胞白血病无Auer小体，非淋巴有）外周血有大量淋巴细胞，根据细胞形态学，将ALL分为L1，L2，L3三个亚型。根据免疫学分为T-ALL (CD3 CD7) B-ALL(CD19) L1型：以小淋巴细胞为主，核浆比例高,浆量多 T细胞白血免疫抗原13.DR.19.7 -+-+ L2型：大多数细胞体积是小淋巴细胞的2倍， B .......................... 13................. -++- L3型：由均匀一致的大细胞组成 （2）急性非淋巴(髓性）白血病（AML）临床将AML分为8个亚型。
M7：（急性巨核细胞白血病常用CD41.CD42免疫指标诊断）骨髓或外周血中原始幼稚巨核细胞≥30%，分为2型①未分化型，骨髓中原巨核细胞>30%，②分化型，骨髓及外用血中以单圆核和多圆核病态巨核细胞为主。 急性粒，急性单，区别αNAE染色加NaF抑制试验鉴别红白血病M6与巨幼细胞性贫血PAS染色最常见的类白血病反应的类型是中性粒细胞型，慢性粒与类白血病可用Ph染色体和NAP染色，例如慢性粒白NAP 积分值为0，再生障碍贫血NAP积分值增高 二:慢性白血病 慢性粒细胞（最重要诊断依据ph染色体（出现在大部分非淋巴细胞白血病中）阳性，也可用ALP/ANP检测）:不引起血细胞变化，骨髓增生极度活跃，外周血大量幼稚粒细胞，嗜酸性嗜碱性易见，白细胞血小板增多，肝脾肿大，出现BCR/ABL融合基因 慢性淋巴细胞:外周血中，大量篮细胞（糖原染色积分增加），没有幼稚淋巴细胞，但是急性周围有。老年人多见，白细胞增多，溶血性贫血，。pas积分值增高 三特殊类型急性白血病 T细胞白血免疫抗原13.DR.19.7 -+-+ ①毛细胞白血病:表面有免疫球蛋白，抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性，属于B细胞白血病 B ............................. 13................. -++-
慢性淋巴细胞白血病考点总结
慢性淋巴细胞白血病考点总结 临床表现 老年多见，男女比例2：1，CLL起病缓慢，早期多无自觉症状，往往因血象检查异常或体检发现淋巴结或脾肿大才就诊。 1.一般表现早起症状常见疲劳、乏力、不适感，随着病情进展而出现消瘦、发热、盗汗等，晚期因骨髓造血功能受损，出现贫血和血小板减少，宜并发感染。 2.淋巴结和肝、脾大 60%～80%患者淋巴结肿大，颈部、锁骨上部位常见。 3.自身免疫表现合并免疫功能异常，伴发AIHA、ITP。 4.其他小部分患者有肾病综合征、天疱疮、血管性水肿等副肿瘤表现。 实验室检查 1.血象 外周血白细胞＞10×109/L，淋巴细胞＞50%，绝对值≥5×109/L，以小淋巴细胞为主。Coombs试验可（＋）。 2.骨髓象 淋巴细胞≥40%，以成熟淋巴细胞为主。 3.免疫分型 多为B淋巴细胞标志，CD5（＋），CD19（＋），CD23（＋），CD27（＋），CD43（＋）。 4.细胞遗传学常规核型分析仅40%～50%的CLL患者伴染色体异常，13q-最常见。 5.分子生物学 50%～60%患者存在免疫球蛋白重链可变区基因（IgV H）体细胞突变。 诊断 ①CLL时淋巴细胞绝对值＞5×109/L且至少持续3个月，具有CLL免疫表型特征；或 ②虽然外周淋巴细胞＜5×109/L，但有典型骨髓浸润引起的血细胞减少及典型的CLL免疫表型特征，均可诊断为CLL。 鉴别诊断 1.病毒或细菌感染引起的反应性淋巴细胞增多 2.淋巴瘤细胞白血病 3.毛细胞白血病 临床分期 1.Rai分期 2.Binet分期
治疗 1.化疗 苯丁酸氮芥（瘤可宁），对C期患者可合用泼尼松、环磷酰胺。嘌呤类似物：氟达拉滨（Fludarabine）抑制腺苷脱氨酶作用，亦可联合烷化剂，如环磷酰胺（FC方案），优于单用氟达拉滨。 2.放疗 3.生物治疗 利妥昔单抗（抗CD20单克隆抗体）、α-干扰素（INF-α）等。 4.造血干细胞移植 多数不适合移植治疗，预后较差的年轻患者可作为二线治疗。
慢性淋巴细胞白血病的发病病因
---------------------------------------------------------------最新资料推荐------------------------------------------------------ 慢性淋巴细胞白血病的发病病因 一、慢性淋巴细胞白血病的发病病因： 目前认为，慢性淋巴细胞白血病的病因尚未明了，可能遗传因素具有一定的作用，部分慢性淋巴细胞白血病患者有染色体核型、数量和结构的异常，其中以 12～14 号染色体异常多见，以 12 号染色体三体最多见。 B 细胞慢性淋巴细胞白血病染色体易位（11； 14），其 11 号染色体上的原瘤基因 bCL1（B 细胞淋巴瘤／白血病一 1）易位至14 号染色体上含有重链基因的断裂点处，从而产生异常蛋白质，可能是 B 细胞生长因子。 慢性淋巴细胞白血病大多数为 B 细胞性， T 细胞性极少见。 慢性粒细胞白血病的病因迄今未完全明了，是物理、化学、生物、遗传等多因素性疾病。 目前研究表明： 电离辐射及苯导致慢性粒细胞白血病比较肯定，有人推测与干细胞的染色体损伤有密切关系。 二、慢性淋巴细胞白血病的发病机制： 慢性淋巴细胞白血病(慢淋) 是淋巴细胞系中某些免疫功能不全的淋巴细胞恶性增生性疾病。 这些成熟形态的淋巴细胞在体内积累，可使淋巴结结构消失，血液和骨髓内淋巴细胞增多，淋巴结和肝脾肿大，最 1 / 13
后还可累及淋巴系统以外的其他组织。 慢淋细胞系单克隆性。 95％以上慢淋为 B 细胞型， 5％－ 10%病例为 T 细胞型。 患者常有免疫功能异常。 三、慢性淋巴细胞白血病的临床表现： 1. 起病缓慢，早期常无明显症状，最早症状常为疲乏无力，活动后气促，随后可出现消瘦、低热、盗汗，食欲减退、贫血、晚期可有出血。 2. 约10%病人合并自身免疫性溶血性贫血，是贫血加重的原因之一，此时常有黄疸。 3. 可有皮肤损害，表现为紫红色或棕红色结节、红皮病、荨麻疹、瘙痒或带状胞疹等。 4. 感染，尤其是呼吸道。 5. 全身淋巴结肿大是主要体征，肝脾轻度肿大。 四、慢性淋巴细胞白血病的诊断标准： （一）、病史及症状⑴ 病史提问： 起病缓慢，病人多无明显症状，问诊应注意是否有低热、盗汗，易感染表现。 ⑵ 临床症状： 乏力、消瘦、纳差、盗汗、体力减退、发热，偶有皮肤瘙痒。
慢性淋巴细胞白血病
疾病名：慢性淋巴细胞白血病 英文名：chronic lymphocytic leukemia 缩写：CLL 别名：慢淋；慢性淋巴细胞性白血病 ICD号：C91.1 分类：血液科 概述：慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)是一种淋巴细胞克隆性增殖的肿瘤性疾病，淋巴细胞在骨髓、淋巴结、血液、脾脏、肝脏及其他器官聚集。95%以上的CLL为B细胞的克隆性增殖(即B-CLL)，仅不到5%的病例为T细胞表型(即T-CLL)。该病最早由Velpeau(1827)尸解发现，1846年Fuller临床报道。1847年Virchow正式提出白血病的概念，1903年Turk提出CLL细胞和淋巴细胞具有相似特点，这段时间里认识到CLL是一种预后较好的淋巴细胞白血病。 流行病学：CLL在西方国家是最常见的白血病，在美国其发病率1977年为3.3/10万人，1990年2.3/10万人。发病率近年下降与对CLL和其相关疾病的认识提高，分类进一步完善有关。在西方国家，CLL约占全部成人白血病的30%，男女比例为1.3∶1～2.0∶1，犹太人中CLL发病率较高。CLL在亚洲人较少见。我国对CLL无确切的发病率统计，但CLL占全部成人白血病的比例仅为3%，与日本相似，明显低于西方国家。估计发病率为西方人的1/10，约为0.3/10万人。男女比例为1.3∶1～2.0∶1，细胞遗传学研究不同人种中CLL发病率不同与其具有不同的细胞生物学特性有关。 病因：CLL病因不详，目前尚无证据说明反转录病毒、电离辐射可引起该类型白血病；但发现几种因素与该病密切相关：遗传性(种族和家族性)及性别。 1.遗传因素 有CLL或其他淋巴系统恶性疾病家族史者，直系亲属发病率较一般人群高3倍。CLL患者的亲属自身免疫病的发生率也明显增加。 2.染色体异常 约50%的CLL患者具有染色体异常，常累及12或4号染色体，-8、i (7)、i(2p)、t(13；21)、 18、6q-、14q-、-X等异常均有报道。染色体异常与病程有关，疾病早期染色体异常占20%左右，晚期病例可达70%。CLL受累的染色体常涉及免疫球蛋白编码基因(如14号染色体的重链基因)或癌基因(如12号染色体的c-ras-Harvey和11号染色体的c-ras-Kirsten)。C D D C D D C D D C D D
慢性淋巴细胞白血病
慢性淋巴细胞白血病 【慢淋病因病理】 CLL是西方国家最常见的白血病类型，可占全部白血病例的1/3.亚洲国家发生率较低，我国CLL约占白血病总数的3%以下。90%以上的CLL发病年龄在50岁以上，男性发病率高于女性，男:女=2:1。 CLL病因不详，目前尚无证据说明逆转录病毒、电离辐射可引起该类型白血病；但发现几种因素与该病密切相关：遗传性（种族和家庭性）及性别。 1、遗传因素有CLL或其他淋巴系统恶性疾病家族史者，直系亲属发病率较一般人群高3倍。CLL患者的亲属自身免疫病的发生率也明显增加。 2、染色体异常约50%的CLL患者具有染色体异常，常累及12或4号染色体，-8、i(7)、i(2p)、t(13;21)、+18、6q-、14q-、-X等异常均有报道。染色体异常与病程有关，疾病早期染色体异常占20%左右，晚期病例可达70%。CLL受累的染色体常涉及免疫球蛋白编码基因（如14号染色体的重链基因）或癌基因（如12号染色体的 c-ras-Harvey和11号染色体的c-ras-Kirsten）。 【慢淋临床表现】 典型B细胞慢淋起病缓慢早期常无症状可在体检或血常规检查时偶然发现另一些则因淋巴结或肝脾肿大而被发现 (一)淋巴结肿大最常见(占70%)可为全身性轻至中度肿大偶可明显肿大无压痛触之有橡皮感与皮肤不粘连常 见于颈部腋下及腹股沟等处扁桃体泪腺唾液腺累及时可产生Mikulicz综合征 (二)肝脾肿大脾肿大常见(40%)轻至中度肿大晚期可达盆腔偶可发生脾梗死或脾破裂肝肿大(10%)程度不如脾脏当明显肿大伴肝功能损害常提示晚期病例 (三)其它脏器浸润表现50%患者有皮肤表现较慢粒多见特异性的如结节红皮病等也有非特异性如瘙痒症等胃及小肠浸润常见可见纳减腹胀消化不良黑粪腹泻等肺部浸润主要有弥漫性结节粟粒状浸润(40%)及胸腔积液(15%) 胸水常血性也可因淋巴梗阻发生乳糜胸水骨骼病变常见的有脱钙及骨质稀疏(5%)溶骨少见病理检查60%以上患 者肾脏双侧性白血病浸润但一般病变轻微约20%患者有蛋白尿及显微镜血尿神经系统病变有斑点状脑浸润甚至 结节性脑瘤形成也可发生脑膜第7对颅神经下丘脑垂体及周围神经病变颅内压可增高 (四)免疫缺陷表现带状或单纯疱疹发生率较高患者易有化脓性感染如肺炎等也有伴发第二种恶性肿瘤尤以皮肤及结肠肿瘤同时伴发弥漫性组织细胞性淋巴瘤者称为Richter综合征发生率约3.3%此外也可伴发类风湿性关节炎及重症肌无力等。 T细胞慢淋的临床特点是起病迅速肝脾肿大淋巴细胞中度增多常侵犯中枢神经系统性腺及真皮深部对治疗反 应差生存时间短 症状和体征往往较血象发生明显改变晚些出现慢淋是一种中年以上人的疾病约90%的患者年龄超过50岁平均年龄为65岁许多病人是偶然发现淋巴细胞增多最早出现的症状常常是乏力疲倦体力活动时气促浅表淋巴结特别是颈部淋巴结肿大常首先引起病人的注意晚期成串成堆直径可达2～3cm无压痛质硬可移动肠系膜或腹膜后淋巴结可引起腹部或泌尿系统症状脾轻至中度肿大肝亦可肿大但不如慢粒显著稍晚出现食欲减退消瘦低热盗汗贫血 等症状约10%或以上病人可发生自体免疫性溶血性贫血此时贫血常较严重并可出现黄疸晚期可有皮肤紫癜和出 血倾向易感染尤其是呼吸道感染这与正常免疫球蛋白的产生减少有关可能成为死亡的直接原因另外胃肠道骨骼 系统可出现不同程度的损害有些病人有皮肤瘙痒偶见白血病性皮肤浸润表现为紫红色或棕红色结节或皮肤增厚 全身皮肤对以发红扁桃体唾液腺或泪腺也可肿大. 【慢淋诊断标准】 1、诊断标准：1988年，美国NCI CLL协作组（NCI）及1989年CLL国际工作会议及WHO采用的标准。 ⑴外周血淋巴细胞绝对值增加：>5×109/L，经反复检查，至少持续4周以上（NCI），或>10×109/L，持续存在