分子机制-蛋白与核酸作用检测-EMSA

主题:凝胶迁移或电泳迁移率实验（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）

概述:

凝胶迁移或电泳迁移率实验（electrophoretic mobility shift assay，EMSA）是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术，可用于定性和定量分析。这一技术最初用于研究DNA结合蛋白，目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。

目的：

1.用于研究特定的转录因子以及转录因子所结合的顺式作用元件；

2.用于研究与蛋白质相结合的DNA序列的特异性；

3.评估突变对探针DNA与结合蛋白相互作用的影响；

4.用于研究DNA-foot printing。

原理：

通常将纯化的蛋白和细胞提取液和32P同位素标记的DNA或RNA探针一同保温，在非变性的聚丙烯凝胶电泳上，分离复合物和非结合的探针。DNA-复合物或RNA-复合物比非结合的探针移动得慢。同位素标记的探针依研究的结合蛋白的不同，可是双链或者是单链。当检测如转录因子一类的DNA结合蛋白，可用纯化蛋白，部分纯化蛋白，或核细胞抽提液。在检测RNA结合蛋白时，依据目的RNA结合蛋白的位置，可用纯化或部分纯化的蛋白，也可用核或胞质细胞抽提液。竞争实验中采用含蛋白结合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段（特异），和其它非相关的片段（非特异），来确定DNA或RNA结合蛋白的特异性。在竞争的特异和非特异片段的存在下，依据复合物的特点和强度来确定特异结合。

步骤：

使用Pierce生产的试剂盒，按照说明书操作。

1、寡聚核苷酸的标记

(1)冰上融化标记试剂盒所有试剂(TdT除外)；

(2)使用前，用lxTdT reaction buffer稀释TdT贮液，工作浓度为2U/μl；

(3)按下表加入试剂(总体积50μl):

UltraPure water25μl

5xTdT Reaction Buffer10μl

Sample oligo DNA(lμl)5μl(final concentration100nM) Biotin-N4-CTP(5μl)5μl(final concentration0.5μM) Diluted TdT(2U/μl)5μl(final concentration0.2U/μl)

(4)37C°30min；

(5)加2.5μl0.2M EDTA终止反应；

(6)加50μl氯仿:异戊醇(24：1)抽提TdT，剧烈震荡,高速离心，取上层水相；

(7)检测标记效率。

(8)互补连退火，退火后的用于EMSA分析或-20C°冻存。

2、EMSA实验步骤

(1)配制电泳胶：丙烯酰胺的浓度为4-6%，100V电压预电泳；

(2)结合反应

按下列顺序加试剂(总体积20μl):

UltraPure water dependent

10xBinding Buffer2μl

Poly(dIdC)lμl

Unlabeled taget DNA dependent

Protein Extract3-5μg

Biotin End-labeled Tagret lμl(Final concentration20fM/μl) Antibody4μg

(3)电泳

60V电压电泳，溴酚蓝前沿至胶的2/3处停止电泳；

(4)转膜

380mA电流，转膜lh；

(5)检测

a37C°融化Blocking buffer和4xWashing Buffer；

b加Blocking Bueffr，室温轻摇15min；

c制备Conjugate/blocking buffer solution；

d倒出Blocking Buffer，加入Conjugate/blocking buffer solution，室温轻摇15min；

e制备lxWashing Buffer；

f将膜转入一干净的容器，用lxWashing Buffer洗涤4次，每次5min，室温轻摇；

g将膜转入一干净的容器，加substrate Equilibration Buffer，室温轻摇5min；h制备substrate working solution(避光)；

i取出膜，在纸巾上吸去多余液体，放入干净容器，加substrate working solution，放置5min；

j取出膜，在纸巾上吸去多余液体，用保鲜膜包好,不要有褶皱；

k暗室中曝光，照相。

流程图：

Eppendorf_蛋白质核酸分析仪操作说明与注意事项

Eppendorf 蛋白质核酸分析仪操作说明与注意事项 操作说明： 准备：开始测定前只需开启仪器背后的电源开关即可开始测定。 1、打开电源预热30分钟； 2、根据样品的类型调取相应的程序，如：待检测样品微双链DNA,可按控制板上的dsDNA键， 显示屏显示进入测定双链DNA程序； 3、根据要求向一只比色皿中加入DNA标准样液或不含DNA的空白液做对照，将该比色皿放 值或0.000 A 入比色皿槽，按下Standard键或Blank键；待屏幕上显示标准样的A 260字样时，取出对照比色皿； 4、放入加有样品的比色皿，按下Sample键，显示屏将会显示测定结果； 5、记录测定结果或打印结果。 6、取出已测样品比色皿，放入含下一个待测样品的比色皿，按Sample键，读取结果； 7、通过该仪器可测定核酸或蛋白的纯度，浓度等等，只需根据样品类型及检测目的调取相 应程序即可。 一、核酸浓度测定（包括dsDNA、ssDNA、RNA、Oligo） 1. 例如待测定样品为dsDNA（eg：PCR产物），按下键“7 / dsDNA” （若待测样品为ssDNA，eg：反转录合成的第一链cDNA产物，则相应按下键“8 / ssDN A 若待测样品为RNA，则按下键“9 / RNA”； 若待测样品为Oligo（寡聚核苷酸），eg：PCR引物，则相应按下键“6 / Oligo”。） 2. 若测定样品需要稀释后测定，则需先设定样品的稀释度： （1）按下键“Dilution”； （2）输入样品体积和稀释液体积，按Enter键确认。 将空白对照置入样品孔。注意：空白对照是空白液，并非所有情况都是水。（例如用Tris 溶液溶解DNA制品，则要用Tri s液做空白对照。） 3. 按下键“Blank”； 4. 仪器记录空白对照，设置为0.000A；(先不取出对照，按下Sample，看是否调零成功，若成功则可开始测样品) 5. 将第一个样品置入样品孔； 6. 按下“Sample”； 7. 仪器显示第一个样品的相关参数（记下样品浓度，OD260，OD280，OD260/OD280） 8. 直接放入第二个样品； 9. 按下“Sample”； 10. 仪器显示第二个样品的吸光度值和浓度值，以及其他相关参考比值； 11. 依次测定，每个样品的测定值将自动存储在机器中，查看测定结果的方法如下：（1）按下键“./ Function” （2）选择“DISPLAY-RESULT”,按Enter键，查看每个样品的测定值记录（本机可存储100个样品的测定值）。 二、OD600 细菌生长密度测定 1. 按下键“5 /OD 600”； 2. 将空白对照置入样品孔； 3. 按下键“Blank”；

核酸检测基本 知识

核酸检测基本知识 1.什么是核酸检测 核酸的定义：核酸是由核苷酸或脱氧核苷酸通过3′，5′-磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。 核酸具有非常重要的生物功能，主要是贮存遗传信息 和传递遗传信息。 2.核酸的分类 核酸大分子可分为两类：脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）。 3.核酸的组成

DNA和RNA都是由一个一个核苷酸(nucleotide)头尾相连而形成的，由C、H、O、N、P，5种元素组成。DNA是绝大多数生物的遗传物质，RNA是少数不含DNA的病毒（如HIV病毒，流感病毒，SARS病毒等）的遗传物质。RNA平均长度大约为2000个核苷酸，而人的DNA却是很长的，约有3X10^9个核苷酸。 4.核酸的功能 在蛋白质的复制和合成中起着储存和传递遗传信息的 作用。核酸不仅是基本的遗传物质，而且在蛋白质的生物 合成上也占重要位置，因而在生长、遗传、变异等一系列 重大生命现象中起决定性的作用。 DNA与RNA都是核酸，它们在化学组成上有什么区别如 下： DNA与RNA的比较DNA RNA 主要存在部位细胞核细胞质 基本组成单位脱氧核苷酸核糖核苷酸碱基种类A、G、C、T A、G、C、U 五碳糖种类脱氧核糖核糖 核苷酸链两条脱氧核苷酸链一条核糖核苷酸链 5.检测方法 核酸检测方法，主要通过同时进行靶核酸扩增和可检 测信号的生成来检测样品中的靶核酸。可应用于临床微生

物学、血液筛选、遗传病诊断和预防、法医学等领域的核 酸检测。 目前主要使用的方法有以下几种： a.核酸序列依赖性扩增法 NASBA是由一对引物介导的、连续均一的、体外特异性 核苷酸序列等温扩增RNA的新技术。反应在42℃进行,可在2h内将RNA模板扩增约109倍。NASBA原理是提取病毒RNA,加入AMV逆转录酶、RNA酶H、T7RNA聚合酶和引物进行扩增。 整个反应分非循环相和循环相:在非循环相中,引物I与模板RNA退火后在AMV逆转录酶的作用下合成cDNA,形成RNA:DNA 杂合体,随即RNaseH降解RNA,引物Ⅱ与cDNA退火,在反转录酶作用下合成第2条DNA互补链。双链DNA可在T7RNA聚合酶的作用下,经其启动子序列起动而转录RNA，RNA又可在反转录酶的作用下反转录成DNA，进入循环相,对模板进行大量 扩增。 b.转录介导的扩增技术 TMA技术原理与NASBA基本一致，略有不同之处是TMA利用的是MMLV逆转录酶及T7RNA聚合酶两种酶，MMLV逆转录酶既有逆转录酶的活性又具有RNA酶H活性。反应在41.5℃进行,可在1h内将RNA模板扩增约109倍。 c.连接酶酶促链式反应(LCR) LCR是基于靶分子依赖的寡核苷酸探针相互连接的一种

核酸的性质

核酸的性质 核酸的理化性质及研究方法内容十分庞杂，本节只可能对若干比较重要的核酸理化性质和研究方法作概要叙述。 一、一般物理性质 1. 溶解度DNA为白色纤维状固体，RNA为白色粉末状固体，它们都微溶于水，其钠盐在水中的溶解度较大。它们可溶于2-甲氧乙醇，但不溶于乙醇、乙醚和氯仿等一般有机溶剂，因此，常用乙醇从溶液中沉淀核酸，当乙醇浓度达50%时，DNA就沉淀出来，当乙醇浓度达75%时RNA也沉淀出来。DNA和RNA在细胞内常与蛋白质结合成核蛋白，两种核蛋白在盐溶液中的溶解度不同，DNA核蛋白难溶于0.14mol/L的NaCl溶液，可溶于高浓度（1~2mol/L）的NaCl溶液，而RNA核蛋白则易溶于0.14mol/L的NaCl溶液，因此常用不同浓度的盐溶液分离两种核蛋白。 2. 分子大小DNA分子极大，分子量在106以上，RNA的分子比DNA分子小得多。核酸分子的大小可用长度、核苷酸对（或碱基对）数目、沉降系数（S）和分子量等来表示。 3. 形状及粘度核酸（特别是线形DNA）分子极为细长，其直径与长度之比可达1：107，因此核酸溶液的粘度很大，即使是很稀的DNA溶液也有很大的粘度。RNA溶液的粘度要小得多。核酸若发生变性或降解，其溶液的粘度降低。 二、核酸的紫外吸收 嘌呤碱和嘧啶碱具有共轭双键，使碱基、核苷、核苷酸和核酸在240~290nm的紫外波段有一强烈的吸收峰，因此核酸具有紫外吸收特性。DNA钠盐的紫外吸收在260nm附近有最大吸收值（图3-25），其吸光率（absorbance）以A260表示，A260是核酸的重要性质，在核酸的研究中很有用处。在230nm处为吸收低谷，RNA钠盐的吸收曲线与DNA无明显区别。不同核苷酸有不同的吸收特性。所以可以用紫外分光光度计加以定量及定性测定。 实验室中最常用的是定量测定小量的DNA或RNA。对待测样品是否纯品可用紫外分光光度计读出260nm与280nm的OD值，因为蛋白质的最大吸收在280nm处，因此从 A260/A280的比值即可判断样品的纯度。纯DNA的A260/A280应为1.8，纯RNA应为2.0。样品中如含有杂蛋白及苯酚，A260/A280比值即明显降低。不纯的样品不能用紫外吸收法作定量测定。对于纯的核酸溶液，测定A260，即可利用核酸的比吸光系数计算溶液中核酸的量，核酸的比吸光系数是指浓度为1μg／mL的核酸水溶液在260nm处的吸光率，天然状态的双链DNA的比吸光系数为0.020，变性DNA和RNA的比吸光系数为0.022。通常以1OD 值相当于50μg／mL双螺旋DNA，或40μg／mL单螺旋DNA（或RNA），或20μg／mL寡核苷酸计算。这个方法既快速，又相当准确，而且不会浪费样品。对于不纯的核酸可以用琼脂糖凝胶电泳分离出区带后，经啡啶溴红染色而粗略地估计其含量。 三、核酸的沉降特性

蛋白质结构与功能的研究进展

《生物化学》课程论文 姓名：曹SS 学号：11310300SS 专业：SS教育 成绩： SS学院生命科学学院 2015年 1 月 1 日

文献综述 蛋白质结构与功能的研究进展 学生：曹SS 指导老师：杜SS 【摘要】人类基因组计划即将完成。虽然基因组的序列作为信息库拥有大量的、重要的生物信息资源，但并不是基因本身,而是基因组所编码的蛋白质才能够直接参与和指导绝大多数的生物学过程。毫无疑问，只有阐明蛋白质的作用机理，才能够真正理解基因的功能。蛋白质结构与功能关系的揭示将有助于人类对于如生殖、发育、疾病等生命活动的基本机理的了解。同时，将对于人类疾病的防治和药物的发明具有重要的指导意义。 【关键词】蛋白质；结构；功能 1.引言 在人类进人21世纪新纪元之际,生命科学也迎来一个崭新的时代,即“后基因组时代(Post一genome era)”。在这一时代中,生命科学的中心任务是揭示基因组及其所包含的全部基因的功能,并在此基础上阐明遗传、发育、进化、功能调控等基本生物学问题,以及进一步解决与医学、环境保护、农业密切相关的问题。由于基因的功能最终总是通过其表达产物—蛋白质来实现的,因此,要了解基因组全部功能活动,最终也必须回到蛋白质分子上来。现已知道,以蛋白质为主体的生物大分子的功能主要决定于它们的三维结构,所以也有人认为当代生物学研究已经进人了“结构基因组时代(structural genomics era)”。目前,我们还不可能只用基因组DNA的一维序列去确定生命活动的机理(mechanism)和途径(path-way),也难以仅用基因的信息去解释疾病发生与发展的分子机理。显然,在人类基因组之后的时代,在有关生命活动整合知识的指导下,以蛋白质及其复合物、组装体为主体的生物大分子的精细三维结构及其在分子、亚细胞、细胞和整体水平上的生物学功能的研究是生命科学的重大前沿课题,也是当前生物学领域中最具有挑战性的任务之一,在后基因组时代生物学发展中处于战略性的关键地位。因此,在从现在到今后的5到15年中,我国在重点基础研究发展的战略性规划中,不失时机地组织精干的结构生物学研究队伍,开展对重要功能基因表达产物—蛋白质及其复合物、组装体的结构与功能的研究具有重要的科学意义,是推动我国生物学研究在21世纪生物学领域占据一席之地的必要措施[1]。 另外，以蛋白质为主体的生物大分子及其复合物和组装体三维结构与功能关系研究是生

检测仪使用说明书

检测仪使用说明书 一．概述 核酸蛋白检测仪、紫外检测仪是液湘色谱仪中的一种紫外检测装置，核酸蛋白检测仪、紫外检测仪是根据生命科学的发展对于现代色谱仪器的要求而改进设计的一种新型紫外检测仪。该仪器在创新方面的主要特点为： 1.该仪器除配有输出10ｍV记录仪信号外，还配有输出适合计算机积分仪的输口，这 样很方便构成色谱工作站系统。（可同时进行计算机和记录仪信号输出，亦可省去记录仪） 2.该仪器的数字显示设计为固定光吸收，A显示计算机用和可变量程光吸收Ａ显示记 录仪用两种可选模式，这样可方便于规范化读数（特别是可应用于药品生产的GMP 工艺规范化管理），同时亦可根据科研需要进行可变量程的高灵敏度读数，这样可方便于对低浓度样品检测。 3.该仪器采用新型进口IP28光电倍增管和改进型电路结构，使仪器工作更为稳定可 靠。 该仪器配有上层析柱、恒流泵、部分收集器等等，即组成一套完整的液色湘色谱分离分析系统。它可应用于现代生物学研究，药物测定、农业科研、化工、食品及医疗单位对具有紫外吸收的样品作定量分析。本仪器主要元器件均采用进口，仪器全部采用LED数字显示，使用方便。 二．主要技术性能 （１）核酸蛋白检测仪提供波长：254nm、280nm。 （２）紫外检测仪提供波长：220nm、254nm、280nm、340nm。 （３）量程范围：0～100％Ｔ、0～2Ａ、0～1Ａ、0～0.5Ａ、0～0.2Ａ、0～0.1Ａ、0～0.05Ａ。 （４）流式样品池：容积100微升、光程３毫米。 微量样品池：容积30微升、光程10毫米。 （５）记录仪输出：10ｍV （６）积分仪输出：0.1Ａ/ｍV （７）数显模式：固定Ａ量程读数（0～2.0Ａ）；可变Ａ量程读数（0～2.0Ａ、0～1.0Ａ、0～0.5Ａ、0～0.2Ａ、0～0.1Ａ、0～0.05Ａ）。 （８）量程在0.05Ａ档时：噪音≦0.002Ａ。 （９）工作环境温度：0℃～35℃。 （10）仪器可连续工作。 （11）电源：220ＶＡＣ±10％５０ＨＺ。 （12）单体外形尺寸：280×180×158（mm）。 （13）主机重量：5㎏。 三．工作原理 从光源发出的光经狭缝，滤色器聚焦到样品池上，此单色光通过样品池射到光电倍增管的光阴极面上，使光束由于样品浓度不同所引起透光强度的变化转换成光电流变化，此光电流经放大器放大，并输入到对数转换器、使透光率Ｔ转换成光吸收Ａ输出即Ａ=lgＴ/1=ε·ＣＬ式中ε为待测样品的摩尔消光系数，Ｃ为样品浓度，采用摩尔/升单位，Ｌ为光程，用厘米作单位。根据上式只要测出了Ａ、Ｌ和ε就可求出样品浓度Ｃ。若从放大器直接输入到记录仪，则在记录仪上绘出的是样品透光率Ｔ变化的图谱，若从对数转换器输入到记录仪上，在记录仪上绘出的是样品光吸收变化的图谱。 四．仪器结构 核酸蛋白检测仪、紫外检测仪是单光路结构，由紫外检测器、和记录仪部分组成现将其构造分别说明如下： １．紫外检测仪： 它由光源、干涉滤色片、样品池、光电倍增管、放大和对数板、低压板和高压板等组成。面板上有四氟塑料管的进样口和出样口，Ａ调零以及调节“光量”大小旋（光

常见实验方法的写作套路核酸检测篇9-Digital PCR

编号：2-9 主题：digital PCR 概述： Digital PCR（dPCR)即数字PCR，它是一种核酸分子绝对定量技术。相较于qPCR，数字PCR可以直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的绝对定量。数字PCR是最新的定量技术，基于单分子PCR方法来进行计数的核酸定量，是一种绝对定量的方法。由于数字PCR能够直接数出DNA分子的个数，是对起始样品的绝对定量，因此特别适用于依靠Real-time PCR的Ct值不能很好分辨的应用领域，例如：拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究（如等位基因不平衡表达）、二代测序结果验证、miRNA表达分析、单细胞基因表达分析等。目的： 对DNA分子的个数进行绝对定量。 原理： 其主要采用当前分析化学热门研究领域的微流控或微滴化方法，将大量稀释后的核酸溶液分散至芯片的微反应器或微滴中，每个反应器的核酸模板数少于或者等于1个。这样经过PCR循环之后，有一个核酸分子模板的反应器就会给出荧光信号，没有模板的反应器就没有荧光信号。根据相对比例和反应器的体积，就可以推算出原始溶液的核酸浓度。 步骤： 1.分离并纯化基因组DNA； 2.计划数字PCR实验，确定样品的最佳稀释度，以获得数字PCR答案；

3.上样，将DNA样品与TaqMan Assay以及OpenArray数字PCR预混液上样到OpenArray 384孔板； 4.循环和成像，利用OpenArray AccuFill 系统将反应上样到OpenArray平板。将OpenArray平板插入OpenArray箱中，装满浸液，并用封箱胶水密封。利用OpenArray? 实时定量PCR系统开展读取。 5.快速轻松地获取和分析数据。 流程图：

酸性蛋白酶的作用机理

酸性蛋白酶与碱性蛋白酶生产工艺的不同之处？ 酸性蛋白酶是一种在酸性环境下（pH 2.5-4.0）催化蛋白酶水解的酶制剂，适用于酸性介质中水解动植物蛋白质。可用于毛皮软化，酒精发酵，啤酒、果酒澄清，动植物蛋白质水解营养液，羊毛染色，废胶片回收，饲料添加剂等等。本品在酸性条件下有利于皮纤维松散，且软化液可连续使用，是当前理想的毛皮软化酶制剂；在酒精发酵中，添加酸性蛋白酶，能有效水解原料中的蛋白质，破坏原料颗粒粒间细胞壁的结构，有利于糖化酶的作用，使原料中可利用碳源增加，从而可提高原料出酒率；另一方面，蛋白质的水解提高了醪液中α-氨基态氮的含量，促进酵母菌的生长与繁殖，提高发酵速度，从而缩短发酵周期和提高发酵设备的生产能力。 碱性蛋白酶碱性蛋白酶是在碱性条件下水解蛋白质肽键的酶类,是一类非常重要的工业用酶,最早发现于猪胰脏。碱性蛋白酶广泛存在于动、植物及微生物中。微生物蛋白酶均为胞外酶,不仅具有动植物蛋白酶所具有的全部特性,还有下游技术处理相对简单、价格低廉、来源广、菌体易于培养、产量高、高产菌株选育简单、快速、易于实现工业化生产等诸多优点。1945年瑞士M等在地衣芽孢杆菌中发现了微生物碱性蛋白酶。 碱性蛋白酶是由细菌原生质体诱变选育出的地衣芽孢杆菌 2709，经深层发酵、提取及精制而成的一种蛋白水解酶，其主要酶成分为地衣芽孢杆菌蛋白酶，是一种丝氨酸型的内切蛋白酶，它能水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸，具有较强的分解蛋白质的能力，广泛应用

于食品、医疗、酿造、洗涤、丝绸、制革等行业。 1、碱性蛋白酶是一种无毒、无副作用的蛋白质，属于丝氨酸型内切蛋白酶，应用在食品行业可水解蛋白质分子肽链生成多肽或氨基酸，形成具有独特风味的蛋白质水解液。 2、碱性蛋白酶成功应用于洗涤剂用酶工业，可添加在普通洗衣粉、浓缩洗衣粉和液体洗涤剂当中，既可用于家庭洗衣，也可用于工业洗衣，可以有效的去除血渍、蛋类、乳制品、或肉汁、菜汁等蛋白类的污渍，另外也可作为医用试剂酶清洗生化仪器等。 3、在生物技术领域，碱性蛋白酶可作为工具酶用于核酸纯化过程中的蛋白质（包括核酸酶类）去除，而对DNA无降解作用，避免对DNA 完整性的破坏。 酸性蛋白酶如何灭活第一种方法几乎所有酶都适用，就是加热。第二种，既然是酸性酶，加入强碱应该也是可以的。 酸性蛋白酶产生菌的筛选方法？酸性蛋白酶是一种能在酸性环境下水解蛋白质的酶类，其最适作用pH值为2.5-5.0。由于酸性蛋白酶具有较好的耐酸性，因此被广泛地应用于食品、医药、轻工、皮革工艺以及饲料加工工业中。目前用于工业化生产的酸性蛋白酶大多为霉菌酸性蛋白酶，此类酶的最适作用pH值为3.0左右，当pH值升高时，酸性蛋白酶的酶活会明显降低，且此类酶不耐热，当温度达到50℃以上时很不稳定，从而限制了酸性蛋白酶的应用范围。因此，本研究以开发耐温偏酸性蛋白酶为目标，进行了以下几方面的研究：(1)偏酸性蛋白酶产生菌的分离筛选。 (2)偏酸性蛋白酶粗酶酶学性

核酸检测技术的应用

核酸检测技术的应用 规ELISA检测。部分标本因为ELISA检测项目不合格直接被淘汰而未 进入到核酸检测环节，有303616份标本分别实行混样核酸检测（191222人份）和单人份核酸检测（112394人份）。⑴混样核酸检测：按照试剂盒说明书要求，筛选ELISA检测合格标本实行8个标本混样 核酸检测，无反应性pooling的8个标本视为该项目核酸检测合格， 有反应性pooling实行标本的拆分单检，拆分无反应性的标本判为合格，拆分亦有反应性的标本判为该项目核酸检测不合格。⑵单人份核 酸检测：采用单个标本核酸检测模式，按照试剂盒和全自动核酸检测 设备要求实行检测，检测无反应性的标本视为HBVDNA、HCVRNA、HIV- 1RNA项目联检合格，检测有反应性的标本则视为HBVDNA、HCVRNA、 HIV-1RNA项目联检不合格。 1.2统计学处理采用x²检验,比较各项目不合格率的差异， p<0.05为差异有统计学意义。 2结果 其中112394人份采用单人份核酸检测系统实行检测，检出单独NAT不 合格数148例，不合格率为1.32‰；191222人份标本采用另外的混样 核酸检测系统实行检测，检出单独NAT不合格数63例，不合格率为 0.33‰.两者不合格率比较，有显著性差异（P<0.05）。 单采血小板标本中，采用ELISA方法检测全血标本278214人份，HBsAg、抗-HCV、抗-HIV-1/2三项不合格数2536例，不合格率为 9.1‰；采用ELISA方法检测单采血小板标本27698人份，HBsAg、抗-HCV、抗-HIV-1/2三项不合格数78例，不合格率为2.8‰.两者不合格 率比较，有显著性差异（P<0.05）。 类，一类为NAT反应性而ELISA无反应性，即为单独NAT不合格结果, 此类不合格的检出即为NAT在血液筛查中所发挥的检测效能。另一类 为NAT反应性ELISA亦为反应性。303616份标本中全血标本和单采血

核酸检测技术的应用

核酸检测技术的应用 1资料与方法 1.1检测方法及判定规则305912份全血标本和单采血小板标本进行常规ELISA检测。部分标本因为ELISA检测项目不合格直接被淘汰而未 进入到核酸检测环节，有303616份标本分别进行混样核酸检测（191222人份）和单人份核酸检测（112394人份）。⑴混样核酸检测：按照试剂盒说明书要求，筛选ELISA检测合格标本进行8个标本混样 核酸检测，无反应性pooling的8个标本视为该项目核酸检测合格， 有反应性pooling进行标本的拆分单检，拆分无反应性的标本判为合格，拆分亦有反应性的标本判为该项目核酸检测不合格。⑵单人份核 酸检测：采用单个标本核酸检测模式，按照试剂盒和全自动核酸检测 设备要求进行检测，检测无反应性的标本视为HBVDNA、HCVRNA、HIV- 1RNA项目联检合格，检测有反应性的标本则视为HBVDNA、HCVRNA、 HIV-1RNA项目联检不合格。 1.2统计学处理采用x²检验,比较各项目不合格率的差异， p<0.05为差异有统计学意义。 2结果 2.1单检模式及混检模式下的NAT结果303616人份标本进行核酸检测，其中112394人份采用单人份核酸检测系统进行检测，检出单独NAT不 合格数148例，不合格率为1.32‰；191222人份标本采用另外的混样 核酸检测系统进行检测，检出单独NAT不合格数63例，不合格率为 0.33‰.两者不合格率比较，有显著性差异（P<0.05）。 2.2全血标本和单采血小板标本ELISA检测结果305912份全血标本和单采血小板标本中，采用ELISA方法检测全血标本278214人份，HBsAg、抗-HCV、抗-HIV-1/2三项不合格数2536例，不合格率为 9.1‰；采用ELISA方法检测单采血小板标本27698人份，HBsAg、抗-

胶原蛋白的作用机理

胶原蛋白的作用机理 一. 什么是胶原蛋白？ 胶原蛋白是大分子蛋白质，其分子量在30万以上，并不能被人体直接吸收。 二. 什么是胶原蛋白肽？ 胶原蛋白肽是一种细胞外蛋白质，它是曲3条肽链拧成螺旋形的纤维状蛋白质，胶原蛋白是人体内含量最丰富的蛋白质，占全身总蛋白质的1/3。一个60kg的成年人的身体内约有3公斤胶原蛋白，主要存在于人体皮肤、骨骼、眼睛、牙齿、肌腱、内脏（包括心、胃、肠、血管）等部位，其功能是维持皮肤和组织器官的形态和结构，也是修复各损伤组织的重要原料物质。在人体皮肤成分中，有70%是由胶原蛋白所组成。 三. 胶原蛋白肽的功能 胶原蛋白肽，可以被人体主动且无障碍吸收，无需消化，供身体组织充分利用。并且海洋胶原肽平均分子量更小，甚至只有2-4个氨基酸构成，远远小于普通肽。胶原蛋白肽是以海鱼的鱼皮为原料，运用现代生物工程技术及酶工程技术提取，最后提炼为胶原蛋白肽。 胶原蛋白肽产品的原料来源目前主要有三种：1.来自牛羊等牲畜骨骼与皮肤。主要提取来自牛羊等动物皮肤或骨骼中的胶原蛋白。2.来自猪骨和猪皮。提取猪的皮肤与骨骼中的胶原蛋白。3来自深海鳕鱼鱼皮提取深海鳕鱼鱼皮中的胶原蛋白。阿拉斯加鳕鱼是鳕鱼中的极品，西方称之为“比黄金还珍贵的宝藏”。 胶原蛋白肽的八大功效：1、独特功能银子，阻止胶原流失。2、抑制黑色素，美白肌肤。 3、修复真皮层，延缓衰老。 4、改善微循环，祛斑祛皱。 5、收缩毛孔，补水保湿。 6、紧致肌肤，修复细纹。 7、祛除黑眼圈，消除眼袋。 8、白里透红，逆转衰老。 四. 补充胶原蛋白的得与失 胶原蛋白之父兰特博士断言：“皮肤衰老过程，就是胶原蛋白流失的过程。”女性在25岁时胶原蛋白已经开始老化、流失、含量逐年下降，同时女性由于月经、生育等生理因素的影响，胶原蛋白流失量是男人的2.5倍。根本的解决办法，就是通过口服胶原蛋白肽，还原肌肤年轻结构，使肌肤细腻光滑、水润光泽、充满弹性。 那么，通常都是怎样补充胶原蛋白呢？以下方法可以尝试： 一是吃猪蹄。猪蹄含有胶原蛋白，每天需要吃10只猪蹄可补充皮肤所需胶原蛋白的十分之一。二是吃猪皮。猪皮的胶原蛋白含量丰富，但是人体不能直接吸收。一般需要一次吃掉6口100公斤重的肥猪猪皮，才能有效果。三是护肤品。国际一线品牌高档护肤品含少量胶原蛋白，对皮肤有一定作用。四是口服胶原蛋白肽，吸收效果好，服用方法简单有效，是目前亚洲女性最喜爱的美容方法。

Eppendorf 蛋白质核酸自动分析仪操作说明与注意事项

Eppendorf 蛋白质核酸自动分析仪操作说明与注意事项 操作说明： 准备：开始测定前只需开启仪器背后的电源开关即可开始测定。 一、核酸浓度测定（包括dsDNA、ssDNA、RNA、Oligo） 1. 例如待测定样品为dsDNA（eg：PCR产物），按下键“7 / dsDNA” （若待测样品为ssDNA，eg：反转录合成的第一链cDNA产物，则相应按下键“8 / ssDN A 若待测样品为RNA，则按下键“9 / RNA”； 若待测样品为Oligo（寡聚核苷酸），eg：PCR引物，则相应按下键“6 / Oligo”。） 2. 若测定样品需要稀释后测定，则需先设定样品的稀释度： （1）按下键“Dilution”； （2）输入样品体积和稀释液体积，按Enter键确认。 将空白对照置入样品孔。注意：空白对照是空白液，并非所有情况都是水。（例如用Tris 溶液溶解DNA制品，则要用Tris液做空白对照。） 3. 按下键“Blank”； 4. 仪器记录空白对照，设置为0.000A；(先不取出对照，按下Sample，看是否调零成功，若成功则可开始测样品) 5. 将第一个样品置入样品孔； 6. 按下“Sample”； 7. 仪器显示第一个样品的相关参数（记下样品浓度，OD260，OD280，OD260/OD280） 8. 直接放入第二个样品； 9. 按下“Sample”； 10. 仪器显示第二个样品的吸光度值和浓度值，以及其他相关参考比值； 11. 依次测定，每个样品的测定值将自动存储在机器中，查看测定结果的方法如下：（1）按下键“./ Function” （2）选择“DISPLAY-RESULT”,按Enter键，查看每个样品的测定值记录（本机可存储100个样品的测定值）。 二、OD600 细菌生长密度测定 1. 按下键“5 /OD 600”； 2. 将空白对照置入样品孔； 3. 按下键“Blank”； 4. 仪器记录空白对照，设置为0.000A； 5. 将第一个样品置入样品孔； 6. 按下“Sample”； 7. 仪器显示第一个样品的吸光度值和浓度值； 8. 依次测定，每个样品的测定值将自动存储在机器中，查看测定结果。 三、蛋白质浓度的直接测定（280nm测定） 1. 按下键“4 / Protein”； 2. 将空白对照置入样品孔； 3. 按下键“Blank”；

最新蛋白质凝胶机理

蛋白质凝胶机理 蛋白质，凝胶： 1 蛋白质凝胶的定义、类型及其凝胶过程中分子构象的变化 蛋白质凝胶的形成可以定义为蛋白质分子的聚集现象，在这种聚集过程中，吸引力和排斥力处于平衡，以至于形成能保持大量水分的高度有序的三维网络结构或基体(matrix)。如果吸引力占主导，则形成凝结物，水分从凝胶基体排除出来。如果排斥力占主导，便难以形成网络结构。 蛋白质凝胶的类型主要决定于蛋白质分子的形状。由于凝胶过程是一个动态过程，也受外界环境的 pH、离子强度及加热的温度和时间的影响。纤维状蛋白质分子，如明胶和肌浆球蛋白凝胶的网络结构由随机的或螺旋结构的多肽链组成。Ledward报道，明胶的凝胶网络为线性分子通过形成连接区而形成凝胶网络。Hermanssan和langton观测到肌浆球蛋白凝胶是由线性分子间形成连接点而构建成三维网络。球蛋白的热凝胶是由仍保持球形结构的蛋白质分子首尾聚集而形成的。Tombs认为球蛋白形成两种类型的凝胶：高度定向有序的“念珠串状”网络结构和随机聚集的网络结构。“念珠串状”凝胶外观透明或半透明，Nakamura报道了大豆蛋白具有这种凝胶的网络结构。这种凝胶是在低离子强度和远离蛋白质等电点pI的条件下形成的。当环境的离子强度较高及pH接近等电点pI时，则形成随机聚集的凝胶。然而大多数球蛋白凝胶都具有这两种类型的凝胶网络，这决定于蛋白质的浓度、环境的pH与离子强度及加热的温度和时间。 蛋白质分子构象的变化是蛋白质分子聚集的先决条件，球蛋白更是如此。在串状网络结构中发现蛋白质分子仍保持球形构象。经典的球形蛋白质分子展开的“两种状态”理论认为仅存住两种状态的蛋白质：未变性的蛋白质和高度变性的无序蛋白质一现在已经证明，存从无序状态向未变性状态展开的路径中明显存在一动态的中间体。已经发现相似的中间体状态存在于低pH(或高pH)的平衡条件下、适当浓度变性剂的条件下和高温度的条件下。这种中间体状态被称为“熔融球蛋白状态”，它被定义为含有与未变性状态相似的二级结构而三级结构展开的紧凑的球形分子。从受热时的未变性状态到熔融球蛋白的转变及这种部分变性的形式主要与热凝胶的形成有关。

核酸检测技术及其在国内外血液筛检中的应用

核酸检测技术及其在国内外血液筛检中的应用 输血相关传染病的预防和控制已经成为全社会关注的焦点,新技术的引进是进一步提高血液安全性的重要一环。本文就病原体核酸检测技术(nucleic acid testing, NAT)及其在国内外血液筛检中的应用情况和结果作一介绍,并对该方法在我国推广和应用的必要性和可行性作初步探讨。 1. NAT在血液筛检中的必要性 酶免检测(EIA)技术已经广泛运用于血液筛检,该方法的灵敏度和特异性也在不断地改进和提高,但每年仍有少数新发输血后肝炎病例报道,如美国无偿献血者每单位供血传播HBV、HCV和HIV 的危险性分别为1∶66000、1∶103000和1∶676000[1]。这些危险的主要原因是: 病毒感染者“窗口期”献血,病毒变异,免疫静默感染(immuno silent infection)以及人工操作错误[2]。所谓“窗口期”,是指从感染病原开始,直至用某种检测方法能够检测到该病原存在为止的这一段时间[3]。血清学抗原、抗体检测的“窗口期”较长, 如HBsAg、抗-HIV、抗-HCV检测的“窗口期”分别为45-56ｄ、22ｄ、72ｄ[4,5],故美国90%以上输血传播HIV和HBV以及75%以上输血传播HCV的危险性来自“窗口期”感染献血[6]。EIA“窗口期”漏检是当前影响血液安全性进一步提高的瓶颈,对于献血者的筛选,单纯抗原或抗体血清学检测不能有效地保障血液安全。 NAT检测是直接检测病原体核酸的一系列技术的总称。其基本步骤包括核酸提取、扩增、和检测。NAT敏感性高,可检出标本中极微量的核酸,在病毒感染后数天即能检出,可大大缩短“窗口期”。初步研究表明,混合血样NAT检测可将HBV、HCV和HIV感染的平均“窗口期”缩短9d(缩短“窗口期”20%)、59d(82%)和11d(50%)[5,7];此外NAT还可以检出因上述其它3种原因而漏检的被感染献血。如法国应用NAT,从大约150万份献血中筛检出4份HCV RNA阳性、抗体阴性的样本,其中1份即为免疫静默感染[8]。尽管NAT从理论上并不能完全消除感染“窗口期”,但病毒核酸转阳之前的血液传染性极低,可以有效地预防经输血传播病毒性疾病[9]。因此,NAT的引入可使输血传播疾病的危险性降到最低[10]。 2. NAT检测的技术方法 1985年具有划时代意义的聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)的发明,标志着NAT 的诞生。随后,在PCR的基础上,派生出许多其它原理的体外NAT方法[11]。这些技术灵敏度和特异性或高或低,操作或简单或复杂,适合在各自不同的领域运用，目前适用于大样本量血液筛查并能满足高灵敏度要求的扩证扩增技术主要为PCR技术和TMA技术。 2.1 PCR扩增方法 PCR是一种体外模拟自然DNA复制过程的核酸扩增技术,以其高敏感性、高特异性和快速简便等优势得到了广泛的应用。通过简单的技术改进和联合,涌现出了各种各样不同的PCR方法,如检测RNA的逆转录PCR(RT PCR)、敏感性和特异性均较高的巢式PCR (nested PCR)、可对靶序列进行定量检测的定量PCR、检测基因超长分布的多重PCR以及PCR结合酶标技术(PCR ELISA)、PCR结合寡核酸探针杂交技术(PCR SSOP)、荧光PCR和免疫PCR等。 目前在临床检测中使用较多的是荧光定量PCR,主要用于各种传染病的诊断、病毒滴度监测以及疗效评估,因采用荧光标记的探针杂交或直接使用能和双链DNA结合的荧光素检测PCR扩增产物,

Bio-Rad 核酸蛋白测定仪中文操作说明

SmartSpec? Plus 核酸蛋白测定仪 中文操作指南 （本指南仅供参考，以英文说明书为准）

第一章仪器介绍 SmartSpec Plus 核酸蛋白测定仪比其它许多台式分光光度仪拥有更完善的特点和功能，其性能优越，运行稳定，功能强大。 特别适用于生命科学研究 SmartSpec Plus工作波长在200-800nm，是核酸和蛋白样品常规定量的完美工具。 SmartSpec Plus可用于 ●DNA，RNA 和寡核苷酸的定量 ●用Bradford，Lowry和BCA检测法定量蛋白 ●监控细胞的生长状况 ●简易的动力学分析 ●波长扫描和峰检测 更简单的样品分析 SmartSpec Plus 的设计充分考虑了用户的需求。简易的菜单式界面简化了测试过程，只需触摸一下按键就可以提供常用样品的计算结果。转换因子可以储存和修改。SmartSpec Plus能提供以下计算结果，如： ●显示核酸纯度的A260/A280比率 ●定量分析（考虑稀释因子） ●μg/ml样品浓度（寡核苷酸pmol/μl） ●寡核苷酸的摩尔消光系数和分子量 在测试结束时，打印显示使用者，日期和结果的报告 核酸定量 SmartSpec Plus能满足定量PCR产物、核酸制备或细胞转染样品的定量检测要求。选择定量dsDNA、ssDNA或RNA，并从预设的转换因子中选择或输入一个最适合代测样品的数值。SmartSpec Plus能提供吸收值、浓度和纯度值，确保下游工作的顺利进展。 SmartSpec Plus简化了DNA、RNA寡核苷酸的定量过程。当你输入序列、长度或组成时，SmartSpec Plus会以μg/ml或pmol/μl为单位显示出样品浓度，并计算摩尔消光系数和分子量。 蛋白定量 SmartSpec Plus安装了Bradford，Lowry和BCA蛋白定量检测方法的预编程序，每个检测方法都具有其独特的特性，方便数据收集及对测试

核酸提取仪

1 目的：建立KingFisher Duo 核酸提取仪的操作规程及维护保养，确保其操作规范化。 2 适用范围：适用于KingFisher Duo 核酸提取仪的操作，维护、保养。 3 责 任 者： KingFisher Duo 核酸提取仪的操作者。 4 正文： 4.1 使用方法 4.1.1 核酸提取前相应试剂的准备： 在使用磁珠法病毒总核酸提取试剂盒之前，配制好Carrier RNA 试剂、Wash Buffer 1和 Wash Buffer 2试剂。 按如下表格添加相应试剂 Prepare Fresh Lysis mastermix per sampie 4.1.2在96微孔板和洗脱条中按表格进行添加相应试剂 Plate Name and type Row Row name Content Reagent volume per well Viral Total NA Plate Microtiter deep well plate A Sample Sample Lysis mastermix 200ul 522ul G Wash 2 Wash Buffer 2 500ul H Wash 2 Wash Buffer2 550ul Elution strip Elution Nuclease Free Water 100ul

4.1.3将Thermo Scientific Kingfisher duo12-tip （磁套）放入96微孔板的B排。 4.1.4开始“KF-ViralTotalNA-Duo”程序，混匀模板和相应试剂3min。 4.1.5暂停后微孔板自动转出，取出96孔微量板在样品孔道加入蛋白酶K和磁珠。 Plate Name Row Row name Content volume per well Viral Total Plate A Sample Proteinase k10ul Magnetic Beads 20ul 4.1.6将微量板放回机器，选择相应程序开始，开始到结束约31min。结束后微量板会自动转出，最后将洗脱条内洗脱后的液体吸入相应的EP管中，以备用。 5 支持性文件 5.1 《操作手册》

蛋白质凝胶机理

蛋白质凝胶 摘要：凝胶特性是食品蛋白质的重要功能特性，蛋白质的凝胶行为及其流变性质是形成某些食品独特的质构、感官和风味的决定性因素长期以来，人们对蛋白质的凝胶行为进行了广泛深入的研究，但对蛋白质凝胶的机理和凝胶动力学还没有完全了解：本文对当前有关蛋白质凝胶的类型、凝胶过程中蛋白质分子构象的变化、形成蛋白质凝胶的主要作用力和凝胶动力学过程的研究进展作了综述：随着现代分析研究技术的进步，对蛋白质凝胶行为的认识也逐渐深入 关键词：蛋白质，凝胶机理 1 蛋白质凝胶的定义、类型及其凝胶过程中分子构象的变化 蛋白质凝胶的形成可以定义为蛋白质分子的聚集现象，在这种聚集过程中，吸引力和排斥力处于平衡，以至于形成能保持大量水分的高度有序的三维网络结构或基体(matrix)。如果吸引力占主导，则形成凝结物，水分从凝胶基体排除出来。如果排斥力占主导，便难以形成网络结构。 蛋白质凝胶的类型主要决定于蛋白质分子的形状。由于凝胶过程是一个动态过程，也受外界环境的 pH、离子强度及加热的温度和时间的影响。纤维状蛋白质分子，如明胶和肌浆球蛋白凝胶的网络结构由随机的或螺旋结构的多肽链组成。Ledward报道，明胶的凝胶网络为线性分子通过形成连接区而形成凝胶网络。Hermanssan和langton观测到肌浆球蛋白凝胶是由线性分子间形成连接点而构建成三维网络。球蛋白的热凝胶是由仍保持球形结构的蛋白质分子首尾聚集而形成的。Tombs认为球蛋白形成两种类型的凝胶：高度定向有序的“念珠串状”网络结构和随机聚集的网络结构。“念珠串状”凝胶外观透明或半透明，Nakamura报道了大豆蛋白具有这种凝胶的网络结构。这种凝胶是在低离子强度和远离蛋白质等电点pI的条件下形成的。当环境的离子强度较高及pH接近等电点pI时，则形成随机聚集的凝胶。然而大多数球蛋白凝胶都具有这两种类型的凝胶网络，这决定于蛋白质的浓度、环境的pH与离子强度及加热的温度和时间。 蛋白质分子构象的变化是蛋白质分子聚集的先决条件，球蛋白更是如此。在串状网络结构中发现蛋白质分子仍保持球形构象。经典的球形蛋白质分子展开的“两种状态”理论认为仅存住两种状态的蛋白质：未变性的蛋白质和高度变性的无序蛋白质一现在已经证明，存从无序状态向未变性状态展开的路径中明显存在一动态的中间体。已经发现相似的中间体状态存在于低pH(或高pH)的平衡条件下、适当浓度变性剂的条件下和高温度的条件下。这种中间体状态被称为“熔融球蛋白状态”，它被定义为含有与未变性状态相似的二级结构而三级结构展开的紧凑的球形分子。从受热时的未变性状态到熔融球蛋白的转变及这种部分变性的形式主要与热凝胶的形成有关。 2形成蛋白质热凝胶的作用力 蛋白质凝胶是变性的蛋白质分子间排斥和吸引相互作用力相平衡的结果。一般认为，形成和维持蛋白质凝胶的作用力主要是疏水相互作用、氢键、静电相互作用等物理作用力，但含有巯基的蛋白质分子间 SH-SS交换反应也可能对蛋白质的凝胶作用有贡献。 2．1 疏水相互作用 蛋白质受热时包埋的非极性多肽暴露出来，从而增强了I临近多肽非极十牛片段的疏水相互作用：因而，平均疏水性(例如蛋白质中疏水氨基酸的比率)应该影响凝胶的形成过程 I Shimada和Matsushita等报道，含有高于31．5％克分子分数的非极性氨基酸残基

核酸检测实施方案

全面推行核酸检测试运行工作方案 为预防和控制经血传播疾病的发生，保障临床用血质量和安全，经研究决定我站将全面开展核酸检测。为稳步推进核酸全面检测，不影响血液批放行，满足临床用血需求，制定本 试运行方案。 一、组织管理 为顺利开展全面核酸检测工作，成立核酸检测工作小组，工作组负责全面推行核酸检测试运行工作，协调处理试运行过程中的相关问题。核酸检测工作小组由田站长总负责，分管 站领导和相关科室积极配合。 二、工作目标 根据卫计生发〔2013〕22 号，国家卫生和计划生育委员会关于印发全面推进血站核酸检测工作实施方案（2013 —2015 年）提出的工作目标，到2015 年，血液筛查核酸检测基本覆 盖全国。 2014 年 5 月 27 日，山东省卫计委又下发了“关于全面推进供血核酸检测工作的通 知”，要求各市要按照原卫生部《全面推进血站核酸检测工作实施方案（2013-2015年）》要求，迅速开展核酸检测工作。确保 2014 年下半年在全省全面开展供血核酸检测。为全面推进我站核酸检测工作，目前前期准备工作已就绪，人员、设备、资金已到位。经研究决定自2014年7 月 1 日开始对我站所有献血员标本（包括沂源采血点）进行核酸检测。 三、保障措施 1、资源保障：器械科购买进口核酸采血管，仅供沂源采血点使用，为沂源采血点配备标本 离心机二台（一台备用），购买标本运输箱 3 个（ hiv 送检一个，沂源采血点一个，备用一个）。 （确认 6.20 号之后到位， 6.30 前完成） 2、沂源采血点标本的运送：沂源采血点工作人员严格按《血液标本留取程序 》留取标本和离心，置于2-6 ℃冰箱保存。标本由计划送血人员运回。根据工作需要，沂源计划送血增加一次，同时减少一次急症送血。即每周二、四、六计划送血三次，中午下 班时由送血司机把标本及原料血捎回。为保证核酸标本检测不超 48 小时，沂源采血点工作人员工 作时间调整，接血当日下午采血点工作人员休息，周日休息。 3、机采血小板计划的下达：血液供应科提前和临床沟通，说明我站下一步的工作目标和 任务（全面核酸检测并纳入批放行）及造成的血液供应时间的变更，达成共识，取得谅解。 合理安排血小板预约和采集计划，血小板采集计划截止到每天下午16：00 点之 前。？？？？？？ 4、机采血小板标本的交接：机采成分科按照血液供应科下达的采集计划预约献血员，安 排献血员第二天早上7：30 分之前到达血站，血小板标本必须于每天上午9： 30 之前分别与 酶免实验室和核酸实验室当面交接。 5、全血标本的交接：各采血点 2014 年 7 月 1 日起，所有采集的血液同时留取核酸标本和 酶免实验室标本。待检室每天早上与酶免实验室和核酸实验室当面交接标本，未检、待检 和待放行的原料血和成分血分别存放并标识。 四、核酸检测 1、核酸实验室与酶免实验室同步对当天采集的单采血小板标本和前一天接回的沂源采血 点的标本进行血筛三项检测，并对酶免实验室前一天初次检测无反应性的标本进行血筛三项的 检测，对酶免实验室前一天初次检测单试剂呈反应性的标本进行血筛三项的单检模式，每 天15:30 前完成实验。若遇拆分标本，及时与相关科室沟通，调整放行和血小板发放时间， 并且完成当天拆分检测，保证该批试验中不留待测的标本。若遇突发应急事件，核酸实验室和 酶免实验室同步检测。每天核酸检测完毕后出具书面检测报告交血液质量控制科、血液成 分制备科和献血服务科机采成分。 2、质量保证：核酸实验室应建立室内质控标准操作规程，实验室的每一批检测应至少有