时间分辨临床意义(..
时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）
在乙肝两对半定量检测的临床意义
一、极大地提高了检测灵敏度
TRFIA检测HBsAg灵敏度可达到0.2ng/ml，而酶标（ELISA）检测HBsAg灵敏度是2ng/ml，也就是说血清中的HBsAg达到2ng/ml酶标才会呈阳性。
1、缩短急性乙肝HBsAg检测"窗口期"。
2、如病毒发生变异后，表达量较低，常规ELISA检测不出抗原，而TRFIA定量具有极高的灵敏度，可发现并极有可能检测出HBsAg和HBsAb。
3、可发现低浓度的HBsAg携带者。
特别是一些群体，如医护工作者、病人家属等，由于长期密切接触，但又非直接经血传播感染成急性乙肝，而是长期少量感染，并刺激机体产生一定的免疫力，可能呈低浓度感染，特别应当引起人们的足够重视，密切关注并采取措施防止发展成乙肝或慢性携带者。
二、动态观察疗效和病情监
疾病的发生、发展、疗效、预后是一个动态的变化过程，TRFIA定量检测乙肝"两对半"各标志物的浓度变化可对乙肝的病程、治疗、预后起一个全程动态检测的作用，能够为医生对病情疗效作出合理的解释提供依据，指导治疗。
1、定量分析HBsAg和HBsAb的浓度变化，可以预见急性乙肝是否处于恢复期。
如HBsAg浓度降低，HBsAb的浓度逐渐升高，可说明病情正在往恢复期发展。反之，HBsAg 浓度处于较高水平或上升趋势，而HBsAb一直处于较低水平，则容易发展为慢性乙肝或携带者。
2、定量分析HBeAg和HBsAb的浓度变化，可以反映病情变化和治疗效果。
明确检测HBeAg向HBsAb转换的时期，即表现为HBeAg浓度下降和HBsAb浓度的升高的过程。
高浓度的HBeAg还可间接提示病毒处于高复制状态，具有较高的传染性。
高浓度的HBsAb 一方面提示病情的好转，而在某些时候（如肝功能指标很差）可能与肝坏死、肝硬化、肝癌有关。
3、HBsAb浓度的高低可以反映病毒感染的状态。
乙肝急性感染常呈现高浓度的HBsAb，恢复期浓度降低。慢性乙肝呈HBsAb持续高浓度。
低浓度的HBsAb一般为恢复期或既往感染。
4、有利于对慢性肝炎活动性和非活动性的判断。非活动性慢性乙肝各项指标相对稳定，活动性往往呈进行性变化。
三、血清HBV-DNA荧光定量PCR测定可以直接反映病毒复制状态，具有很多临床应用价值，但不能完全反映病毒复制静息期肝细胞内HBV病毒状态。HBV-DNA阴性并不完全代表体内HBV已被清除，结合"两对半"各项指标更能客观反映体内HBV病毒状态，正确判断预后和治疗。
四、HBsAb的定量测定能够对抗体是否真正具有"中和"HBV的免疫力作出正确评价，对乙肝的预防起到监督作用。HBsAb的含量在10mIU/ml以上病人在用ELISA检测就可呈HBsAb"阳性"结果，但并不提示机体都一定具有免疫力，而HBsAb的含量在10 ～100mIU/ml之间的样本，定性虽为"阳性"，但此时机体以对HBV的免疫力弱，甚至不能预防HBV感染，仍有感染HBV的危险只有HBsAb的含量达到100mIU/ml以上。时才能确定具有抵抗HBV入侵的作用。HBsAb的含量越高，机体抵抗HBV入侵的能力越强，持续保护时间越长。作定量测定根据HBsAb 的含量可判断机体对HBV的免疫状态及乙肝疫苗的免疫效果，HBsAb的含量较低，应该加强注射一针乙肝疫苗，使HBsAb的浓度提高起到保护作用。同时，乙肝疫苗接种后机体产生免疫力因个体差异而不同，有的可产生高浓度的抗体并持续数十年。而有的人产生的抗体浓度不是很高，且持续时间也不长，数年后就逐渐消失，这部分人应及时关注HBsAb浓度变化，必要时也应加强注射一针乙肝疫苗（但也有人认为机体在受到病毒感染时，会产生记忆反应，迅速提高免疫力）。因此定量测定对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防免疫具有重要意义，特别是在少年儿童预防乙肝方面。
高度的特异性
TRFIA、EMIA、ELISA法检测HBV—M结果分析
广州市第一人民医院检验科（510180）雷秀霞陈小辉徐邦牢陈英姿
【摘要】
目的比较MEIA、TRFIA、ELISA三种方法在测定HBV-M时结果的符合程度、灵敏度、特异性，了解TRFIA法测定HBV-M的准确性和可行性。
方法分别用ELISA和TRFIA法测定170份随机血清样本乙肝两对半并计算结果符合率；用三种不同方法对56份强阳性或临界值血清作HBsAg、HBsAb、HBeAg三项指标测定。结果TRFIA、ELISA法测定170份随机样本HBV-M结果符合率较高，阴阳结果经配对资料的卡方检验，无显著性差异，P>0.05。但资料同时显示，对HBeAg为临界值的血清，TRFIA有1.92%的漏检率；ELISA有9.62%的漏检率，同时ELISA还易出现假阳性反应。结论 TRFIA法测定HBV-M特异性、灵敏度及结果符合率较ELISA法高，TRFIA是定量的方法，可为临床疗效的观察及乙肝疫苗的接种提供依据。
关键词时间分辨荧光免疫分析法乙肝病毒标志物微粒子酶免疫分析法酶联免疫吸附试验
我国是乙型肝炎高感染的国家，据统计，全国人口10%以上为HBsAg携带者，乙型肝炎病毒的总感染率达35.5~61.1%，有报道[1]用目前常用的方法检测出HbsAg阴性的人群中，有11.0%HBV-DNA呈阳性反应，也就是说，常规的检测方法可能有11.0%的漏检率，究其原因主要是由于抗原含量低于现行方法的可检出水平。再者，传统的检测方法只能提供定性结果，最高也只能进行滴度的分析，放在临床使用上有一定的局限性，特别是在疗效观察和疫苗注射后抗体产生情况的观察上存在着明显的不足，故需要一种新的既灵敏快捷准确又不太昂贵的方法来填补这一缺陷，本实验用三种不同的方法检测了三种HBV-M（乙肝病毒标志物），旨在与同行探讨一下三种检测方法在日常工作中的可行性及相关性。现将实验结果报告如下。
1．材料与方法
1．1 标本来源：检测血清标本均取自本院住院病人和门诊病人，共226例。
1．2 仪器和试剂微粒子酶免疫分析法(MEIA)使用美国Abbott试剂和美国Abott公司AXSYM全自动酶免发光分析系统；ELISA法使用北京万泰药业公司生产的试剂；时间分辨荧光免疫分析法（Time-Resolved Fluoroimmunoassay 简称TRFIA）使用上海新波生物技术有限公司生产的ANYTEST2000型时间分辨荧光免疫检测系统及配套试剂。洗板机为北京天石医疗用品制作所ZMX-96III型自动酶标洗板机；酶标仪为奥地利CliniBio128C自动酶标仪。
1．3 检测方法：170份随机标本同时用TRFIA及ELISA法作乙肝两对半测定。56份强阳性或临界血清分别用TRFIA、ELISA、EMIA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg，严格按试剂、
仪器操作说明判断结果，专人操作。
2 结果
2．1 以美国Abbott试剂为标准，用ELISA、TRFIA两种不同方法测定56例强阳性或临界血清结果的相对灵敏度、相对特异性和结果符合率，结果见表1。
2.1 .1从表1可见，ELISA、TRFIA法测定HBsAg以MEIA法为标准，其灵敏度和结果符合率都很高，而特异性TRFIA法则明显高于ELISA法（依次为100%，8
3.83%），说明ELISA 法测HBsAg较易出现假阳性、假阴性反应。
2.1.2 TRFIA法测HBsAb灵敏度为100%，结果符合率为92%，高于ELISA法（95.35%和84%）。由于本项目实验选取的标本大多数为ELISA法弱阳性标本，阴性标本太少，故未作特异性计算。
2.1.3 TRFIA法测HBeAg灵敏度、特异性、结果符合率（依次为94.44%、100%、98.08%）均高于ELISA法（依次为76.47%、91.43%、88.46%）。ELISA、TRFIA法测临界值HBeAg均有不同程度的漏检，ELISA的漏检率为9.62%(5/52), TRFIA的漏检率为1.92%(1/52),ELISA 法还出现5.77%(3/52)的假阳性结果。
2.1.4 三种方法阴阳结果经配对资料的卡方检验，均无显著性差异，P>0.05。
2.2 170份随机标本TRFIA与ELISA法测定结果符合率的比较见表2。
就随机样本而言，两方法的结果符合率均在90%以上，尤其HBsAg、HBeAg结果符合率达99.41%和98.8%，各检测项目阴阳性结果经配对资料卡方检验均无显著性差异，P＞0.05。
而对于临界值血清，ELISA法测定HBV-M出现假阳性、假阴性反应明显高于TRFIA法。
2．讨论
有报道[2]用ELISA法测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb结果与MEIA法的结果符合率依次为96%、97%、98%、89%、93%，与本实验170份随机标本用ELISA及TRFIA法结果符合率相符(99.41%、94.12%、98.8%、93.53%、91.76%)，资料显示，测定五项HBV-M的灵敏度及特异性ELISA法普遍低于TRFIA法，究其原因，可能与两法反应原理不同密切相关。TRFIA用三价稀土原子（Eu3+）及其鳌合物作示踪物，代替酶和标记抗原、抗体，并且当免疫反应结束后，根据Eu3+离子鳌合物的荧光光谱的特点，采用解离-增强技术放大有效荧光，最后用时间分辨荧光分析仪，测定免疫反应最后产物的荧光强度，根据已知浓度确定的标准曲线来判断未知样品的浓度值，以达到定量分析的目的。朱艳冰等曾用Eu3+建立双抗体夹心的TRFIA法测定HBsAg，获得了满意结果，灵敏度高于ELISA法且具有不受样品背景荧光干扰，精确度高，线性范围宽（0~100ng/ml）等优点，且标记物制作稳定，显示出良好的应用前景[3]。
TRFIA为定量方法，经统计，该法测得三种HBV-M含量与MEIA法比较有良好的线性关系，尤其是HBsAb， r＝0.918。由于HBsAb为保护性抗体，在含量达到一定时，对机体有免疫保护作用，因此，良好的测定线性关系对于决定病人是否需要接受疫苗接种，提供了可靠的指标。HBsAg含量多少在一定程度上反映乙肝患者的病情，故定量的测定方法对于临床疗效的观察有一定参考价值。
TRFIA作为一种灵敏度高、特异性及重复性好的定量免疫测定方法，近年来应用范围不断扩大[4、5]。对于大型的实验室，应用各种非放免标记、非发色酶标的自动化设备来进行分析，是技术发展的趋势，相信在不久的将来，TRFIA法在各大实验室的普及将成为必然。
参考文献
[1] Pao cc，et al.Am J Clin Pathol 1991；95：591
[2] 黄波，张国元.ELISA法测定乙肝两对半中两种判断结果探讨.川北医学院学报，2003，18（1）：112
[3] 朱艳冰，李庆国，王桂兰等.新型铕络合物用于HBsAg的时间分辨荧光免疫.标记免疫分析与临床，2002，9（3）：157
[4] 顾爱萍，朱雪明，单卫民，等.丙型肝炎病毒抗体的时间分辨荧光分析法检测.临床检验杂志，2001，19（4）：215
[5] 黄飚，肖华龙，朱利国，等.糖蛋白抗原19-9时间分辨荧光免疫分析.中华检验医学杂志,2000，23（3）：171
时间分辨荧光免疫测定技术在HBV-M 定量检测及临床应用分析蔡意和 2004-7-24 15:34:00 中华中西医杂志2004年3月第5卷第6期
【摘要】
目的研究乙肝病毒感染者血清免疫学标志物，利用时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）检测其含量结果与ELISA法结果的符合程度、灵敏度、特异性;了解TRFIA测定HBV-M的准确性、可行性及临床应用价值。
方法分别用TRFIA和ELISA法测定260例随机血清标本HBV-M结果及含量。结果 HBsAg （ELISA）阳性36例，TRFIA阳性40例，χ 2 =4，P<0.05，两法符合率98.46%;抗-HBs（ELISA）阳性130例，TRFIA阳性160例，χ 2 =30，P<0.01，两法符合率88.5%;HBeAg（ELISA）阳性17例，TRFIA阳性18例，χ 2 =1，P>0.05，两法符合率99.6%;抗-HBe（ELISA）阳性86例，TRFIA阳性73例，χ 2 =6.76，P<0.01，两法符合率90.4%;抗-HBc（ELISA）阳性54例，TRFIA阳性72例，χ 2 =15.6，P<0.01，两法符合率91.5%。结论TRFIA法与ELISA 法比较，特异性、敏感性都高，TRFIA作用于HBV-M含量检测可为临床间接反映病毒的感染状况，同时也为临床疗效提供动力学观察及接种乙肝疫苗提供依据。
关键词HBV-M 时间分辨荧光免疫分析技术酶联免疫吸附试验
目前国内临床实验室最常用的乙型肝炎病毒（HBV）感染者的血清学标志物检测主要靠ELISA法，由于ELISA法简单、方便、快速的优点在临床得到广泛应用，但受方法学本身的限制，它不能提供HBV-M的具体含量，只能作为阴阳性判断，故不可能完成HBV感染的动力学观察，而时间分辨荧光免疫技术的出现提供了对HBV-M进行定量检测的手段。本文采用TRFIA法对260份血清标本进行HBV-M检测，并与ELISA法结果进行比较和分析。现报告如下。
1．对象与方法
1.1 对象血液标本均来自本院门诊及住院病人260例，无年龄性别要求。早晨空腹抽取静脉血，分离血清后立即检测。
1.2 检测试剂 ELISA试剂盒由上海荣盛生物技术有限公司提供。TRFIA试剂盒由上海新波生物技术有限公司提供。
1.3 仪器 EL-312e酶标仪。Anytest2000时间分辨荧光分析仪。Egate2310全自动洗涤。2510变频振荡器。
1.4 质控物由卫生部临床检验中心提供。
1.5 方法 ELISA法和TRFIA法测定HBV-M，严格按照试剂操作规程操作，同时加入相应
质控物监测。
1.6 统计学方法采用配对χ 2 检验。
2．结果
2.1． HBsAg ELISA法结果阳性36例，阳性率1
3.8%;TRˉFIA法结果阳性40例，阳性率15.4%;两法都阳性36例，两法都阴性220例，TRFIA阳性而ELISA阴性4例，TRFIA 阴性而ELISA阳性无，采用配对χ 2 检验，χ 2 =4，P<0.05，差异有显著性，两法比较符合率为256/260=98.46%;其中HBˉsAg含量0.5～5ng/ml占4例，6～25ng/ml占7例，26～50ng/ml占8例，51～150ng/ml占8例，150ng/ml以上占13例。
2.2．抗-HBs ELISA法结果阳性130例，阳性率50%;TRFIA法结果阳性160例，阳性率61.5%;两法都阳性130例，两法都阴性100例，TRFIA阳性而ELISA阴性30例，TRˉFIA 阴性而ELISA阳性无，采用配对χ 2 检验，χ 2 =30，P<0.01，差异有非常显著性，两法比较符合率为230/260=88.5%;其中抗-HBs含量10～100mIU/ml占79例，101～200mIU/ml 占16例，201～1000mIU/ml占46例，1000mIU/ml以上占19例。
2.3． HBeAg ELISA法结果阳性17例，阳性率6.5%;TRˉFIA法结果阳性18例，阳性率6.9%;两法都阳性17例，两法都阴性242例，TRFIA阳性而ELISA阴性1例，TRFIA阴性而ELISA阳性无，采用配对χ 2 检验，χ 2 =1，P>0.05，差异无显著性，两法比较符合率为259/260=99.6%;其中HBeAg含量0.03～0.1NCU/ml占1例，0.11～0.5NCU/ml占4例，0.51～2NCU/ml11例，2.1～8NCU/ml2例。
2.4 .抗-HBe ELISA法结果阳性86例，阳性率33%;TRˉFIA法结果阳性73例，阳性率28%;两法都阳性67例，两法都阴性168例，TRFIA阳性而ELISA阴性6例，TRFIA阴性而ELISA阳性19例，采用配对χ 2 检验，χ 2 =6.76，P<0.01，差异有非常显著性，两法比较符合率为235/260=90.4%;其中抗-HBe含量1.5～2NCU/ml4例，2.1～5NCU/ml14例，5.1～10NCU/ml23例，20NCU/ml以上24例。
2.5. 抗-HBc ELISA法结果阳性54例，阳性率20.8%;TRFIA法结果阳性72例，阳性率27.7%;两法都阳性52例，两法都阴性186例，TRFIA阳性而ELISA阴性20例，TRFIA阴性而ELISA阳性2例，采用配对χ 2 检验，χ 2 =15.6P<0.01，差异有非常显著性，两法比较符合率为238/260=91.5%;其中抗-HBc含量0.1～0.5NCU/ml11例，0.51～1NCU/ml1例，1～5NCU/ml10例，5.1～10NCU/ml36例，10NCU/ml以上14例。
3. 讨论
TRFIA法检测HBV-M与ELISA法相比，其特异性和敏感性都高，特别是能够检测低浓度HBsAg和HBeAg，对减少HBV感染漏诊和误诊具有较高价值。因HBsAg阳性是HBV感染的金
标准［1］。有学者对血清呈低水平存在、血清HBsAg约在5ng/ml以下者做过研究［2］，对象是非肝炎患者住院人群，结果是占总人群的2.34%，占HBsAg阳性人群的23.16%。而本文只检测出1.5%和10%。此结果存在一定差异，有待进一步探讨。抗-HBs是对HBV的保护性免疫指标，有学者认为仍有保护作用的最低抗-HBs的浓度为10mIU/ml，提出基础免疫后高度抗体滴度的再接种方案，最后一次接种后4周，如抗-HBs<10mIU/ml立即再接种;10～100mIU/ml，3～6个月后必须再接种［3］。实际工作中发现，抗-HBs定量检测对于监测、指导肝移植中乙型肝炎免疫球蛋白的应用具有肯定作用。说明了对抗-HBs定量的检测是很有必要的，同时也可了解人体是否有抗- HBs、是否有足够的量可抵御HBV的侵袭。本文抗-HBs结果显示，160例TRFIA法阳性79例，抗-HBs浓度值在10～100mIU/ml以内，此量因无确切的抵御能力，建议加强预防措施。对于抗-HBs阴性的人群更应做好预防，至于100mIU/ml以上含量的人群，说明他们已有好的抵御能力。另外结果提示，ELISA法的抗-HBe 阳性率明显高于TRFIA法，由于本身方法学的限制，最好在发出报告时加以综合分析或提高Cutoff值。
从实验结果表明HBV-M各项阳性结果都显示了不同的含量，说明了人体感染HBV后，病毒的复制程度或经抗病毒药物治疗后，HBV-M含量也随之变化，提示了动力学关系。据所掌握的资料观察，患者治疗前及治疗后HBV-M含量变化结果比较。
目前临床上对检测HBV-M的血清学常用方法是血清免疫学检测，也就是检测患者对病毒侵染机体产生的免疫反应，因此免疫血清学指标可间接反映病毒的感染状况。随着检测水平的不断提高，TRFIA技术的问世给免疫自身的研究和发展提供了新的手段。虽然DNA是直接反映病毒本身在机体内的存在情况，而人们越来越意识到两者既相关，又不尽一致，高灵敏准确的HBV-M定量结果可与HBV-DNA的检测相互印证，给临床提供更客观有效的实验报告，临床上需要将两者结合起来对患者进行综合诊断、治疗和预后等判断。如果在没有开展HBV-DNA项目检测的单位，HBV-M含量检测其本身也就是一个很好监测病毒动力学变化的辅助指标。
参考文献
1 陈紫榕.病毒性肝炎.北京:人民卫生出版社，2002，6，191.
2 陈瑜，钟步云，徐根云，等.低水平血清乙肝病毒表面抗原测定及其临床意义.中华检验医学杂志，2001，24:1.
3 Klaus-Peter Maier著，郝连杰等译.肝炎及其后果.第四版.北京:人民卫生出版社，1997，8，35.
时间荧光免疫（TRFIA）法乙型肝炎病毒的检测及临床意义
我国在世界上属于乙型肝炎病毒（乙肝病毒，HBV）感染的高发区，乙肝表面抗原（HBsAg）的携带者已超过10%，HBV具有明显的种属及嗜肝特性（尽管其亦可感染肝以外的组织、器官或细胞，如脾、睾丸、人外周血单个核细胞等），可致持续性病毒感染。通常判断HBV感染及其状况的指标为HBV的血清学标志物（HBVM），如HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc（即所谓的“两对半”）、抗HBc IgM和HBV DNA等。随着标记免疫学技术的飞速发展，特别是新型的TRFIA的应用，使HBV免疫检测趋于超微量化，了解这些指标在什么情况下出现及其临床意义，对于我们检验工作者来说，亦具有重要意义。
1. 乙型肝炎病毒的形态与结构
HBV属嗜肝DNA病毒科，为环状、双链DNA病毒，通过电子显微镜，在乙肝患者血液中发现三种颗粒:
（1）Dane颗粒，直径约42nm，内部具有核酸和核心抗原，所以是具有高度的传染性完整的DNA病毒;
(2）小球状颗粒，直径约22nm（16～25nm），是HBsAg主要成分，可刺激机体产生抗体，具有中和病毒作用;
(3）管状颗粒，直径约22nm，长50～230nm（推测是由小球状颗粒串聚而成），主要由表面抗原S蛋白和一定量的前S 1 和前S 2 蛋白组成。后两种颗粒是不含有核心抗原和核酸的空心Dane颗粒，不具有传染性。
据研究认为管状颗粒可能成为完整病毒的外壳，是HBsAg在肝细胞内质网表达的主要形式，小球状颗粒为HBV颗粒从肝细胞向血液释放的主要形式。空心Dane颗粒无复制作用，称缺陷颗粒，研究表明它可能对HBV在细胞水平的传播和细胞内复制有干扰作用，又称之为干扰性缺陷颗粒。
乙肝病毒的基本结构主要包括:外膜、核壳体、核心蛋白、DNA聚合酶和基因DNA组成。乙肝病毒感染肝细胞和在肝细胞内繁殖:
（1）首先，HBV病毒的前S 1 和前S 2 蛋白与肝细胞受体结合，从而侵入细胞内;
（2）脱去外膜蛋白，在细胞质内，DNA形成共价闭合环状DNA（cccDNA）;
（3）cccD-NA进入细胞核，脱核壳，并转录成信息核糖核酸（mRNA）释放到细胞质内;
（4）mRNA经逆转录酶形成病毒DNA，同时产生病毒蛋白;
（5）这样HBV DNA在肝细胞内循环复制，同时和病毒蛋白装配完整的病毒分泌到血液循环中。
2. 时间分辨荧光免疫（TRFIA）定量检测乙肝两对半的意义
2.1 定量检测乙肝表面抗原的临床意义目前TRFIA检测乙肝表面抗原（HBsAg）的参考值为0.5ng/ml，大于此值表明已有HBV感染。定量检测HBsAg，对肝炎病人动态疗效观察很有价值［1］。
HBsAg存在于Dane颗粒的外核及小球状颗粒和管状颗粒中，具有抗原性，不具有传染性，是HBV感染的特异标志，具体临床意义如下。
2.1.1 抗原的检测为乙型肝炎临床诊断和治疗提供病原学依据乙肝表面抗原（HBsAg）是HBV感染的特异标志，HBsAg的出现就可作为乙肝的早期诊断，绝大多数HBV感染者外周血可出现HBsAg，含量在5ng/ml～600μg/ml之间，高者可达2000μg/ml。有作者认为HBsAg 含量在0.1ng/ml时就有传染性，并且有研究表明HBsAg的含量与HBVDNA具有相当的相关性［2］。时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）检测HBsAg灵敏度可达0.2ng/ml，而酶标（EIASA）检测的灵敏度为（0.5～2）ng/ml，放射免疫（RIA）灵敏度是（0.5～1）ng/ml，TRFIA极大地提高检测的灵敏度。因此，在急性乙肝早期能及早检出HBsAg，确证HBV感染，缩短窗口期;其次，可发现低浓度HBsAg携带者;在部分慢性乙肝患者中，由于机体缺乏对HBV包膜蛋白的免疫应答，HBsAg表达较低，酶标检测可出现HBsAg和表面抗体（HBsAb）均阴性的情况，TRFIA技术的高灵敏度则可避免这些情况的发生，为正确判断病情提供依据。并且目前病毒性肝炎和其他病因所致的肝病甚多，而且临床症状、体征及肝功能无特殊改变差异，故只有依靠高灵敏度的病原学鉴别诊断。
2.1.2 乙肝表面抗原检测是婚前体检及是否引起垂直传播和献血筛查的重要指标 HBV 的传染性很强，据报道，接种0.00004ml含病毒的血足以使人发生感染，而婴儿表面抗原携带是社会上迁徙表面抗原携带者的主要来源。其传播方式可经胎盘和产道传播，分娩时母亲产道内通过婴儿的皮肤、黏膜或口腔传入。而新生儿和婴儿期的免疫系统不成熟，对外来的病毒不能识别和消灭，故形成感染。HBV感染的年龄是重要因素:新生儿和婴儿期感染约90%以上会成为慢性感染，2～6岁儿童感染约20%～30%以上会成为慢性感染，6～12岁感染约10%以上会成为慢性感染，成人（包括12岁以上的青少年）感染约≤5%以上会成为慢性感染。Michielsen等认为，母婴传播的危险性取决于HBV的复制水平，母亲HBsAg浓度越高，特别是有e抗原阳性者感染其婴儿的机会为80%～90%。其次表面抗原检测筛选献血员和预防输血后肝炎的重要措施。对每一份供血均应检测表面抗原和核心抗体，任何一项阳性者不能作为献血员为血库和病人提供血液。据文献报道，目前为止在献血员所发现的HBsAg携带者最低含量为0.2ng/ml，有的甚至达2000μg/ml以上，TRFIA微量检测为献血员筛选和预防输血后肝炎提供了有利的技术检测。
2.2 表面抗体（抗-HBs）定量检测能够对乙肝预防起监督作用目前TRFIA检测乙肝表面抗体（抗-HBs）的参考值为30mIU/ml，大于参考值表明机体已产生抗体。机体感染HBV 后，产生的抗-HBs认为与循环中病毒清除有关，故抗-HBs是一种保护性抗体，是对乙肝感染后获得免疫力的标志，乙肝治愈或趋向治愈的象征。其量在10～100mIU/ml定性检测可呈阳性结果，但此时机体免疫力较低，甚至不能预防HBV感染;量在100mIU/ml以上才具有抵抗HBV入侵的作用;但也有人提出，10mIU/ml抗-HBs为具有免疫力的临界水平［3］。TRFIA 检测HBsAb的灵敏度可达5mIU/ml，故表面抗体定量检测，可以判断机体对HBV的免疫状态及乙肝疫苗的效果，特别是少年儿童预防方面有重要意义。
2.3 定量检测乙型肝炎e抗原（HBeAg）及e抗体的意义目前TRFIA检测乙肝e抗原（HBeAg）的参考值为0.03Ncu/ml，e抗体（抗-HBe）的参考值为2.0Ncu/ml，大于参考值表明机体已产生相应的抗原或抗体。
感染HBV后，HBeAg及抗-HBe的出现与HBsAg的滴度（1:32）呈一定的关系［4］，HBsAg浓度越高HBeAg检出率越高［5］ ;有文献报道HBV-DNA含量与HBeAg、HBsAg的存在有明显关系，HBeAg、HBsAg在一定程度上也能反映HBV-DNA的复制程度［6］。血清学显示，乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBVDNA）和HBeAg的消失反映了HBV的清除［7］，有文献［7］研究表明，用拉米呋啶治疗乙肝患者，对HBV-DNA有效抑制率可达83.3%，低于检测限达50%;但对HBeAg的有效抑制率只有60%，转阴的只有13.3%，这可能是拉米呋啶可抑制HBV DNA聚合酶，造成HBV DNA合成终止，但不能消灭病毒超螺旋体，因而HBeAg 呈阳性，停药后极易复发，且有研究报道82.49%的HBeAg阳性血清可检测出HBV DNA。
HBeAg为乙肝核心抗原的可溶成分，是乙肝传染性标志，表明体内有大量HBV-DNA复制，也是急性乙肝发展为慢性的重要指标，HBeAg与HBV存在着特殊相关的联系，仅能在HBsAg 阳性的血清中检出［5］。在乙肝急性期HBeAg在发病3个月后持续阳性，则可能是急性乙肝发展为慢性的最早依据，患者肝组织伴有严重损害，易演变为慢性肝炎和肝硬化。慢性肝炎中HBeAg持续阳性提示HBV持续感染，是肝炎活动期的标志，而且发展肝硬化的概率比较高，HBeAg阳性孕妇是社会上婴儿表面抗原携带者的主要来源，应该引起全社会的关注。
抗-HBe主要存在于HBsAg阳性携带者及迁延稳定或恢复期肝炎患者的血清中，有研究表明抗-HBe检出率为肝癌>肝硬化>慢性乙肝，提示多数抗-HBe检出患者HBV感染时间较长，且抗-HBe主要见于低浓度HBsAg或抗-HBs阳性的急、慢性患者［3］。一般认为高浓度的抗-HBe也是乙肝病情好转的标志，但有实验证明多达36%的抗-HBe携带者具有相当数量的乙肝病毒颗粒，并值得注意的是部分患者仍能检测出HBV-DNA或高浓度HBsAg，可能:（1）
HBsAg的清除依赖T细胞体液免疫应答，当HB-sAg持续高水平时T细胞免疫应答受抑制;（2）HBV感染后，细胞毒T淋巴细胞（CTL）识别病毒抗原表位在机体免疫压力下发生变异从而逃避免疫清除有关，并且慢性感染者CTL反应微弱甚至无。甚至有作者认为抗-HBe可能是一种蔽护性抗体［4］，HBV逃避了机体免疫清除。
故定量检测HBeAg是有效监测乙肝复制及耐药和评估抗病毒药物疗效的指征，抗-HBe 对预后判断起了很大的作用。
2.4 定量检测核心抗体（抗-HBc）的意义目前TRFIA检测乙肝核心抗体（抗-HBc）的参考值为0.1Ncu/ml，大于参考值表明机体已产生相应的抗体。
核心抗体是最敏感的乙肝感染指标，有研究表明抗-HBc浓度波动与病情呈平行关系，与病毒增殖和肝细胞损害有关，在临床上常用高浓度或低浓度来判断乙肝的转归和预后，如果检出高滴度（1:1000以上）抗-HBc提示患病中［3，5］。卫生部临检中心规定用RIA 测定抗-HBc时，当抗-HBc浓度>60Ncu/ml已具有临床意义，提示患病中，应采取一定的治疗措施;在2～60Ncu/ml时已具有流行病学意义。随着HBsAg阴转或抗-HBs出现，抗-HBc 阳性率及浓度也随之降低［8］，且抗-HBc是HBV感染后血清中最早出现的标志抗体，是流行病学调查的良好指标，其效价高，持续时间长，甚至终生携带。
据统计，普通人群单项抗-HBc的阳性率超过0.9%～20%，在乙肝中总检出率为70%～80%。出现单项抗-HBc的可能:
（1）慢性乙肝感染，HB-sAg水平很低，用一般的血清学方法检测不出HBsAg，即低水平HBsAg携带;
（2）急性乙肝感染恢复早期，HBsAg已经消失而抗-HBs尚未产生，即“窗口期”;
（3）过去乙肝感染，由于抗-HBc比抗-HBs在体内存在的时间长，因此抗-HBs已消失或在检测水平以下时，抗-HBc仍存在;
（4）被动获得抗-HBc，输血抗-HBc阳性血液或血制品，注射有HBV感染后出现免疫反应者血液制备的乙型肝炎特异性免疫球蛋白均可被动获得抗-HBc而呈单项抗-HBc阳性。此外，母亲IgG抗-HBc可经胎盘传给胎儿，并于婴儿体内持续在1年以上。有研究报道，在HBsAg阴性血清中，结合抗-HBc检测，可提高HBV检出率26.3%。曾研究提出抗-HBc应作为献血员筛检项目［9］，也有报道抗-HBc在高滴度时，即使HBsAg阴性，也可能存在HBV 感染［10］，有笔者主张应以高滴度抗-HBc阳性为筛检标准。
3. TRFIA在乙肝病毒检测中的应用
TRFIA（Time-resolved fluoroimmunoassay），又称解离-增强镧系荧光免疫分析（DELFIA）。铕（Eu）标记TRFIA是一种非放射标记超微量免疫检测技术，具有敏感性高、
重复性好、特异性强、定量范围宽、检测速度快、标记物稳定等突出优点，成为继放射免疫分析之后的新的里程碑。
HBVM的检测为HBV感染的最主要病原标志和直接证据之一，其变化是评估HBV感染后病情转归的重要依据，也是抗病毒治疗的疗效考核指标之一。TRFIA所特有的超强的稳定性和高灵敏度近年来在国内外得到广泛的认可，同时国内多家公司在时间分辨技术基础上开发的乙肝两对半试剂，填补了我国检验界在乙肝微量检测方面的空白，是对乙肝标志物微量检测方面革命性的突破。研究证实，在部分HBV感染的人群中，血清HBsAg呈低水平存在［11～13］，而且目前采用的酶标的检测方法，对低水平人群容易造成漏检［12～13］，在较大范围的非肝炎患者住院人群的检测结果表明:血清HBsAg约在5ng/ml以下者占总人数的2.34%，占HBsAg阳性人群的23.16%，其中HBsAg在1ng/ml以下者占多数［13］。罗开忠等［14］与谭玉华等［15］均通过TRFIA定量检测乙肝两对半发现，大部分ELISA 法检测为HBsAg、抗-HBc阳性模式的患者其实为HBeAg假阴性或HBeAb假阴性，仅少部分为病毒变异的结果，谭玉华等还通过TRFIA定量检测“乙肝两对半”发现部分ELISA单项抗-HBc 阳性标本用TRFIA法能检测出HBsAg。1983年Siitari用TRFIA检测血清中HBsAg，并与RIA 测定结果比较，结果TRFIA检测下限为0.2ng/ml，RIA为0.5ng/ml，TRFIA灵敏度高于RIA ［16］，TRFIA对低浓度的乙肝血清标志物有效检测，具有重要的临床及流行病学意义［11～15］。
TRFIA定量检测乙肝两对半能动态观察疗效和监测病情:
（1）定量分析HBsAg和HBsAb的浓度变化，可预见急性乙肝是否处于恢复期。如HBsAg 浓度降低，HBsAb浓度逐渐升高，可说明病情正往恢复期发展;反之，HBsAg浓度处于较高水平或上升趋势，而HBsAb一直处于较低水平，则易发展为慢性乙肝或病毒携带者。
（2）定量分析HBeAg和HBeAb的浓度变化，可反映病情变化和治疗效果。定量测定能明确检测HBeAg向HBeAb转换的时期，即表现为HBeAg浓度下降和HBeAb升高的过程。高浓度的HBeAg还可间接提示病毒处于高复制状态，具有较高的传染性。高浓度的HBeAb一方面提示病情好转，而在某些时候（如肝功能指标很差）则可能与肝坏死、肝硬化、肝癌有关。
（3）HBcAb浓度的高低可反映病毒感染的状态。高浓度的抗-HBc提示乙肝急性感染，恢复期浓度降低。慢性乙肝呈抗-HBc持续高浓度。而低浓度的抗-HBc一般为恢复期或既往感染。
（4）有利于对慢性肝炎活动性或非活动性的判断。非活动性慢性乙肝各项指标相对稳定，活动性往往呈现进行性变化。
乙肝病毒感染后的常见临床转归:
（1）典型型:机体感染HBV后经过29～160天的潜伏期，于出现症状前1～2周可以在血清中检出HBsAg，紧接着出现e抗原，并伴有ALT的升高和临床症状，随后出现高滴度的抗-HBcIgM。经过2～3周e抗原下降而出现e抗体。HBsAb要在感染后3～6个月才能检出，一般机体在半年内恢复。病毒清除后几年内HBsAg、e-抗体可以逐渐下降，但抗-HBc可以保持存在，甚至终生。
(2）无血清转换型:主要特点是HBsAg、e抗原浓度高，并不转阴，HBsAb和e抗体一直不能检出，机体不能恢复，转为慢性肝炎。
(3）迟缓恢复型:血清主要特点是HBsAg持续阳性存在，e抗原持续约2年，e抗体在2年左右才能检出，机体恢复时间较长。
(4）隐性感染型:是无症状HBV感染者，HBsAg、e抗原在血清中存在时间短，浓度低甚至不易检出，HBsAb出现早，且浓度高。
（5）非典型恢复型:约占急性乙肝的10%，当症状和黄疸出现时，HB-sAg转阴，HBsAb 出现早。另一特点是e抗原较HBsAg长几周，可以检出e抗原阳性HBsAg阴性。此类患者肝损害轻，病程短，预后佳。但也有少见重症肝炎患者。
因此，TRFIA动态、定量检测乙肝两对半的抗原抗体阳性模式能帮助临床分析机体免疫反应的机制，判断临床转归，及时预测耐药病毒株的出现和监测停药反弹能起到积极的指导作用，TRFIA作为一项具有广阔发展潜力的新兴的生物技术，将会对临床和科研产生更大的促进作用［1，14～16］。
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凝血酶时间偏高的原因
如对您有帮助，可购买打赏，谢谢 凝血酶时间偏高的原因 导语：健康的身体对于我们每个人来说都是非常重要的，但是总是由于我们的不良生活习惯价值长期的服用药物特别的容易导致身体出现一些疾病，其中凝 健康的身体对于我们每个人来说都是非常重要的，但是总是由于我们的不良生活习惯价值长期的服用药物特别的容易导致身体出现一些疾病，其中凝血酶时间偏高就是比较常见的现象，如果不及时调整就会严重的影响身体健康，但是如果掌握好原因就能很好的进行预防，下面一起了解下凝血酶时间偏高的原因。 凝血酶时间偏高的原因 凝血酶原时间正常范围为：男性11～13.7s，女性11-14.3s。 造成凝血酶原时间偏高，凝血酶原时间延长的因素较多，但其根本原因是凝血因子的缺失。一切导致凝血因子减少的原因都可能导致凝血酶原时间延长。凝血酶原之所以是肝功能检查中重要的一项，那么其时间的长短一定反应肝功能的某些变化。 肝脏是凝血因子形成的主要场所，当肝功受损时凝血因子不能正常合成，导致凝血酶原时间偏高延长。凝血酶原时间高于正常值时会表现一系列的症状，如体表容易出血，出血后不容易止血。如牙龈出血、创伤出血等现象。同时凝血酶原时间较长的情况下身体容易出现青紫斑块，身体稍微受压就会产生或青或紫的斑，几分钟后才渐渐消失。 除肝功能异常造成凝血酶原偏高现象还有先天性凝血因子缺乏、继发性/原发性纤维蛋白溶解功能亢进等原因。当凝血酶原时间延长时首先要考虑肝功问题，做详细的肝功检查，确定病因及时进行治疗。 上面就是对凝血酶时间偏高的原因的介绍，通过了解之后希望对朋友们能够带来一定的帮助，平时在生活中尽量要保持良好的生活习惯， 预防疾病常识分享，对您有帮助可购买打赏
时间分辨技术的原理
时间分辨技术的原理目前最先进的免疫检测技术： 1、时间分辨原理： 用三价稀土离子及其鳌合剂作为示踪物，代替荧光物质、同位素或酶，标记蛋白质、多胎、激素、抗体、核酸探针或生物流行性细胞，当反应体系发生后，用时间分辨仪器测定最后产物中荧光强度。根据荧光强度或相对荧光强度比值，来判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析之目的。 2、时间分辨原子标记物的特点： ●发射光和激发光有较大的STOKES位移——高特异性 ●长寿命荧光，降低其他物质的荧光干扰——高灵敏度 ●半衰期长达几十万年，试剂受干扰小——高稳定性 原子标记与大分子标记物的对比 3、波长分辨： ●标记离子的荧光激发光波长范围较宽，发射光光谱范围较窄，是类线光谱， 有利于降低本底荧光强度，提高分辨率。 ●激发与发射光之间有一个较大的STOKES位移，有利于排除非特异荧光的 干扰，增强测量的特异性。
4、时间分辨： ●标记离子螯合物产生的荧光强度高，寿命长，有利于消除样品及环境中荧 光物质对检测结果的影响。 ●每一秒名检测样品1000次，取其中不受干扰的400次的均值作为测定值， 有利于提高检测的准确性。 时间分辨技术取代酶免、放免是免疫检测技术发展的必然趋势！ RIA（放免） ●放射性（125I），对环境和身体的危害，已经为重视环保的国家逐步取消， 如整个欧洲仅尚存几个放免试验室。 ●125I半衰期短，导致试剂的有效期短，需每次定标，造成很大的浪费。 ●由于标记物（125I）的不断变化，带来药盒批间、批内较大的变异，标准 曲线无法保存备用。 ELESA（酶免） ●灵敏度、重复性不及放免，易造成漏检和假阳性。 ●酶的纯度和反应过程容易受环境因素影响，导致稳定性、重复性不好。 与其它技术的相对优势： （1）、是现有的免疫检测方法中灵敏度最高的 （2）、是现有的免疫检测方法中稳定性最好的 （3）、多标记检测是目前所有免疫检测技术中独一无二的 TRF技术与电化学发光的比较
酶联免疫法与时间分辨荧光免疫法检测HBsAg
酶联免疫法与时间分辨荧光免疫法检测HBsAg 陈桂花1a，谭玉华2，罗颖照1b（1.广州经济技术开发区红十字会医院，a检验科,b体检中心，广东广州 510530 ；2.广州市丰华生物工程有限公司，广东广州 510730） 摘要：目的比较2种方法4种试剂乙型肝炎病毒（HBV）表面抗原（HBsAg）的检测性能，并探讨HBsAg阳性HBV血清标志物（HBV M）模式组间及其与HBsAg阴性模式组间的HBsAg 浓度差异。方法酶联免疫法（ELISA）对1205例标本HBV M进行定性检测。其中定性检测的153例标本再用3个厂家的时间分辨荧光免疫法（TrFIA）定量测试试剂进行HBsAg比对检测，其余经定性检测的1052例标本均再用TrFIA定量测试试剂进行HBsAg定量检测，对HBsAg结果进行统计分析。结果 2种方法4种试剂间HBsAg阳性检出率差异均无统计学(P>0.05)，3个厂家的TrFIA法试剂HBsAg定量检测结果相关性良好，r>0.95。TrFIA法能对0.2ng/ml—1.0ng/ml的低浓度HBsAg标本进行有效检测。研究发现TrFIA法定量检测未经稀释的HBV感染者血标本HBsAg浓度在0.2ng/ml—650ng/ml间。“HBsAg、e抗原（HBeAg）、核心抗体（抗-HBc）”阳性模式组HBsAg浓度与“HBsAg、抗-HBc”阳性、“HBsAg、e抗体（抗-HBe）、抗-HBc”阳性、“HBsAg”单阳性模式组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05），“HBsAg、抗-HBc”阳性模式组和“HBsAg、抗-HBe、抗-HBc”阳性模式组间HBsAg浓度差异无统计学意义(P>0.05)，“HBsAg、抗-HBc”阳性模式组、“HBsAg、抗-HBe、抗-HBc”阳性模式组HBsAg 浓度与“HBsAg”单阳性模式组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05），“HBsAg”单阳性模式组和“HBsAg阴性模式”组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05），“HBsAg阳性模式”组HBsAg浓度与“HBsAg阴性模式”组HBsAg浓度差异有统计学意义（P<0.05）。结论 HBsAg 出现的早晚和它被清除的早晚与感染剂量、感染方式以及病情轻重有关。HBeAg或抗-HBe 的出现与HBsAg的浓度呈一定的关系，HBsAg浓度与病毒的复制存在一定的关系。ELISA法HBV M定性检测结合TrFIA法HBsAg定量检测对HBV感染诊断和防治具有重要意义。 关键词：酶联免疫法；时间分辨荧光免疫法；乙型肝炎病毒，表面抗原 HBsAg是HBV感染后血清中首先出现的标志物HBV M，可作为乙肝的早期诊断和普查项目。HBsAg的检测受到许多研究者的关注[1-6]，随着标记免疫方法学的飞跃发展，HBsAg检测的灵敏度有了进一步提高，并且定量结果取代了定性报告，为临床诊断提供了更多的信息。作者采用了1个厂家的ELISA法定性诊断试剂与3个厂家的TrFIA定量测试试剂对HBsAg 进行了比对检测，结果与分析如下。 一材料与方法 1. 标本标本采自广州市经济技术开发区红十字会医院门诊病人、住院病人和体检人员标本1205例，及时分离血清，-20℃保存备用。 2. 仪器与试剂 ST-360 型酶标仪（上海科华公司），酶联免疫法乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒（国药准字S1*******，上海荣盛公司）；Victor2-D1420时间分辨荧光免疫仪（美国PE公司）；时间分辨荧光免疫法乙型肝炎病毒表面抗原定量测试试剂盒[国药准字S2*******，广州丰华公司；国药准字S2*******，苏州新波公司；国食药监械（准）字2007第3401095号，中山大学达安公司]；DEM-Ⅲ型自动酶标洗板机和FWZ-Ⅱ型恒温微量振荡仪（广州丰华公司）。 3. 方法 ELISA法与TrFIA法均严格按试剂盒和仪器说明书操作。ELISA法对以上1205例标本进行定性检测，按说明书结果判断方法判读阴阳性，对弱阳性的HBV M、“HBsAg、抗-HBs”或“e抗原、e抗体”双阳模式的HBVM均须2孔复查，仍为阳性者判为阳性。其中定性检测 作者简介：陈桂花，女，1974年9月生，本科，检验技师，主要从事免疫学检验工作。
凝血酶时间(TT)测定
出凝血凝血酶时间（TT）测定（第四版） 出凝血原理： 在37℃条件下，在血浆中加入“标准化”的凝血酶溶液后，血浆凝固所需要的时间。 出凝血标本处理： 患者处于休息状态下，采空腹静脉血（急诊病人除外）。采血者应技术熟练，“一针见血”，以防止组织损伤，使外源性凝血因子进入标本。最好不与其它实验一起采集而使血液停留在针管的时间延长。采完血后，将血液沿管壁缓缓注入试管，避免产生气泡；然后迅速将血液和抗凝剂轻轻颠倒混匀，避免用力震荡。 全血要在1小时内分离血浆。分离乏血小板血浆时，要在室温下3000rpm离心10分钟，室温下可存放4小时。全部试验不能在4小时内完成，应将乏血小板血浆分装在～的小试管中快速冷冻，储存于-20℃冰箱中。冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果会不准确。冷冻血浆融化时，应将盛冷冻血浆的容器置于37℃水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化。 出凝血试剂：TT试剂购于天津威士达公司：德灵Test Thrombin Reagent试剂（试剂盒代号OWHM13）。内含凝血酶测定试剂冻干品：标准浓度的牛凝血酶，牛白蛋白；凝血酶测定试剂缓冲液（25mmol/l,）。按要求的量用缓冲液溶解小瓶中的试剂，测试之前必须将试剂溶解液预温到37℃。复溶的试剂从冰箱中取出后室温平衡15min后上机分析。
出凝血仪器：使用Sysmex公司的CA-7000型全自动血液凝固仪。 出凝血操作：按仪器操作步骤执行标准操作。 出凝血4.６.1开机：按下机器侧面的POWER 按钮。开机后机器进行自检，当屏幕上边显示“Ready:”时可以进行试验。 出凝血4.６.2检查消耗品： 1、准备反应杯：打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量，不足时，需及时添加。（一次性最多可放1000 个杯子） 2、准备试剂：按照仪器对试剂的要求，把试剂准备好，放到仪器内相应位置，注意查看试剂的量和有效期。如还不熟悉试剂位置时，可在主屏幕上选Reagent Setting，按屏幕显示放置试剂。 3、查看仪器的洗液瓶和废液瓶 出凝血4.６.3准备标本：将样本放入样本架，再将样本架放到仪器进样器上。 出凝血4.６.4输入检测项目：主菜单上按下Work List 键，进入工作菜单，输入TT项目。 出凝血4.６.5输入样本号：按屏幕下菜单的ID No.键，按顺序输入样本的序号。 出凝血 4.６.6开始检测：录入完所有测试信息，按下屏幕右上角START 键，开始检测。 出凝血质量控制：使用德灵公司的leve11质控品做质量控制。每批质控品的值不超过2SD。（详见出凝血1质量控制） 出凝血计算：仪器自动计算出结果。
凝血四项内容及正常值
凝血四项内容及正常值(总 7页) 本页仅作为文档页封面，使用时可以删除 This document is for reference only-rar21year.March
凝血四项内容与正常值及意义 乐安中心卫生院钟恒 一.凝血因子测定： 1活化部分凝血活酶时间（APTT）：秒数:25-37，需与正常对照比较超过10s以上异常 2凝血酶原时间（PT）：秒数:11-14 ，需与正常对照超过3s以上异常。活动度:80-120% INR:0.8-1.2 3纤维蛋白原（FIB）：2-4 g/L 二.纤维蛋白溶解检测： 4凝血酶时间（TT）：秒数:12-16 需与正常对照超过3s以上异常 各项意义： PT：主要反映外源性凝血系统状况，其中INR常用于监测口服抗凝剂。延长见于先天性凝血因子ⅡⅤⅦⅩ缺乏及纤维蛋白原缺乏，后天凝血因子缺乏主要见于维生素K 缺乏、严重的肝脏疾病、纤溶亢进、DIC、口服抗凝剂等；缩短见于血液高凝状态和血栓性疾病等； APTT：主要反映内源性凝血系统状况，常用于监测肝素用量。增高见于血浆因子Ⅷ、因子Ⅸ和因子XI水平减低：如血友病A、血友病B及因子XI缺乏症；降低见于高凝状态：如促凝物质进入血液及凝血因子的活性增高等情况； TT：主要反映纤维蛋白原转为纤维蛋白的时间。增高见于DIC纤溶亢进期，低（无）纤维蛋白原血症，异常血红蛋白血症，雪中纤维蛋白（原）降解产物（FDPs）增高；降低无临床意义。 2
FIB：主要反映纤维蛋白原的含量。增高见于急性心肌梗死减低见于DIC消耗性低凝溶解期、原发性纤溶症、重症肝炎、肝硬化； 凝血酶原时间（PT）：秒数:11-14 ，需与正常对照超过3s以上异常。活动度:80-120% INR:0.8-1.2 PT:凝血酶原时间是检查外源性凝血因子的一种过筛试验，是用来证实先天性或获得性纤维蛋白原、凝血酶原、和凝血因子Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的缺陷或抑制物的存在，其中INR用于监测口服抗凝剂的用量，是监测口服抗凝剂的首选指标活化部分凝血活酶时间（APTT）：秒数:25-37，需与正常对照比较超过10s以上异常 APTT 检查内源性凝血因子的一/种过筛试验，是用来证实先天性或获得性凝血因子Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ的缺陷或是否存在它们相应的抑制物，同时，APTT也可用来凝血因子Ⅻ、激肽释放酶原和高分子量激肽释放酶原是否缺乏，由于APTT的高度敏感性和肝素的作用途径主要是内源性凝血途径，所以APTT 成为监测普通肝素首选指标。 凝血酶时间（TT）：秒数:12-16 需与正常对照超过 3s以上异常 TT凝血酶时间测定凝血酶时间延长见于肝素增多或类肝素抗凝物质存在、如SLE、肝病、肾病等，低（无）纤维蛋白血症、异常纤维蛋白原血症、纤维蛋白原降解产物（FDP）增多、如DIC、原发性纤溶等。 纤维蛋白原（FIB）：2-4 g/L FIB纤维蛋白原纤维蛋白原即凝血因子Ⅰ，是凝血过程中的主要蛋白质，FIB 增高除了生理情况下的应激反应和妊娠晚期外，主要出现在急性感染、烧伤、动脉粥样硬化、急性心肌梗死、自身免疫性疾病、多发性骨髓瘤、糖尿病、妊 3
时间分辨荧光免疫分析仪特点及性能
时间分辨荧光免疫分析仪特点及性能 时间分辨荧光免疫分析仪采用现代光学、机械、计算机等先进技术，通过标记离子螯合物产生的特异性荧光寿命长、强度高，消除本底干扰荧光；利用激发光波谱宽、荧光发射波谱窄，增强荧光强度，提高分辨率的原理，对临床免疫血样进行定量分析，为临床血样提供灵敏、准确、可靠的数据。 概述 时间分辨荧光免疫法所用的标记物是镧系元素螯合物，利用这类荧光物质荧光寿命长等特点，通过波长和时间两种分辨技术，有效排除了非特异本底荧光的干扰。 特点 1、灵敏度高； 2、标记物制备简单； 3、稳定性好； 4、标准曲线线性范围宽； 5、操作方便。 技术性能 电源：210～240V，50～60Hz；外型尺寸：550mm×600mm×270mm；重量：25 kg；灵敏度：10-13 mol/L；线性度：10-12～10-8 mol/L；快速测试：1秒/样；高稳定性：< ±1 %；工作制：连续运行；安全分类：I类；防电击程度：B型；熔断器：Φ5×20 5A。 应用领域 主要用于对人的血液和其它体液中的各种免疫检测项目进行定量分析，它可以适用与传染病检查、内分泌科检查、细胞学检查、肿瘤科检查等。随着检验医学的发展，对微量、超微量的测定会越来越多，同时RIA的污染问题会越来越被重视，因此，时间分辨荧光分析法具有越来越大的应用空间。 产品特性产品参数 产品特点： 1) 采用进口光源、光学镜片及光电倍增管，保证检测结果的稳定性及可靠性； 2) 测试速度快，1秒／样本； 3) 标本灵活，适合任意份标本量； 4) 全中文软件，操作界面简便； 5) 是国内首家研发出成功，填补国内空白，并获得国家科技进步二等奖。 技术参数： 1) 测定原理：时间分辨 2) 激发光源：进口氙灯 3) 灵敏度: 10 -17 mol／孔（Eu 3+） 4) 线性范围：10 -13 mol／孔～10 -17 mol／孔 5) 高稳定性：＜5 % 6) 电源：AC 198～242V 50～60Hz 7) 外型尺寸：710mm×520mm×320mm
化学发光免疫技术与时间分辨技术的异同点
化学发光免疫技术与时间分辨技术的异同点 概念 化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一项最新免疫测定技术。 时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）是以镧系元素标记抗原或抗体，并与时间分辨测定技术结合而建立起来的一种新型非放射性微量免疫分析技术，它根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。 原理 化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和化学发光分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个激发态的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的基态时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测 量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。鲁米诺(1umino1)、异鲁米诺(isolumino1)及其衍生物、吖啶酯(acIidinim ester)衍生物、辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)是目前CLIA中使用最多的四类标记物。 时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）基本原理 用三价稀土离子及其鳌合剂作为示踪物，代替荧光物质、同位素或酶，标 记蛋白质、激素、抗原、抗体、核酸探针等物质，当免疫反应体系发生后，根据稀土离子螯合物的荧光光谱的特点，用时间分辨荧光分析仪测定免疫反应最后产物中荧光强度。根据荧光强度或相对荧光强度比值，来判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析之目的。 应用 化学发光免疫分析技术（CLIA） 各种激素、病毒抗原抗体、肿瘤标志物、感染性疾病、心脏标志物、治疗药物检测等各种抗原、抗体和半抗原 时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）应用广泛 1.多肽类：蛋白质、激素（甲状腺激素、甾体类激素）。 2.病原体抗原/抗体 3.病毒性肝炎标志物 4.肿瘤相关抗原 5.药物 6.核酸 优缺点
时间分辨荧光免疫技术和酶联免疫吸附试验检测抗-HCV结果分析
时间分辨荧光免疫技术和酶联免疫吸附试验检测抗-HCV结果分析 发表时间：2015-10-09T16:57:53.750Z 来源：《医药前沿》2015年第21期供稿作者：陈华根刘小花宋强 [导读] 成都市新都区人民医院四川成都 HCV-RNA检测对于判断急慢性感染、复制水平、明确诊断和疗效观察具有重要意义，但受实验条件限制，难以常规应用。 陈华根刘小花宋强 （成都市新都区人民医院四川成都 610500） 【关键词】时间分辨；荧光免疫技术；酶联免疫吸附试验；抗-HCV 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2015）21-0081-02 丙型肝炎的病原体是HCV,主要经血液传播[1]。HCV有6种基因型，感染人体后，血液中出现抗-HCV,而HCV-RNA浓度相对较低，所以临床实验室常通过检测抗-HCV来判断HCV感染，诊断丙型肝炎[2-3]。可用酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光、凝集试验、金免疫层析试验等检测，应用广泛的ELISA检测抗-HCV灵敏度，准确度能满足临床诊断丙型肝炎需要，但缺乏全自动酶免疫分析仪的实验室却显繁琐。近年来，时间分辨荧光免疫技术(TRFIA)逐步在临床实验室用于抗-HCV检测，我们利用TRFIA检测，同时与ELISA方法比较，评价其检测效果，报道如下。 1.资料与方法 1.1 一般资料 收集本院2013年至2014年经ELISA检测抗-HCV阳性标本299例，其中男163例，女136例，年龄18至89岁。 1.2 方法 1.2.1试剂、仪器和质控品抗-HCV ELISA试剂分别购于厦门新创公司，MK3酶标仪和Well Wash Plus型洗板机系上海热电产品。TRFIA试剂、前处理仪和荧光测定仪购于苏州新波公司。质控品购于北京康彻思坦公司。仪器皆经过维护校准且通过技监局年度强检，质控品和试剂在效期内使用。 1.2.2方法采集患者静脉血3～5ml,自然收缩或37℃温育30分钟后，3000转/分离心15分钟，立即检测或置冰箱2℃～8℃保存2日。严格按照标准作业指导书操作。厦门新创公司ELISA检测阳性者，再用TRFIA检测。 2.结果 ELISA检测抗-HCV阳性299例，经TRFIA检测阳性299例，符合率100%。 3.讨论 丙型肝炎是由丙肝病毒所致的流行广泛，危害严重的传染性疾病。病原体检测是疾病诊断必不可少的手段，病原体诊断标志是抗-HCV 和HCV-RNA。HCV-RNA检测对于判断急慢性感染、复制水平、明确诊断和疗效观察具有重要意义，但受实验条件限制，难以常规应用。抗-HCV ELISA检测，仅需洗板机、酶标仪等一般实验设施，并且现在所用第三代试剂，所选抗原包括C区、NS3区、NS4区和NS5区，提高了检测的灵敏度和特异性，缩短了“窗口期”，反应性样本可不用重组免疫印迹试验（RIBA）验证，因此ELISA检测抗-HCV是各级实验室运用最多的丙型肝炎病原标志检测项目。但实验类型多采用间接二步法，检测周期较长。虽然选用抗原，试剂工艺有所改进，但酶免疫检测结果，受类风湿因子、补体、异嗜性抗体、用鼠抗诊疗诱导产生的抗鼠抗Ig、自身抗体、溶菌酶等内源性影响因素和溶血、细菌污染、标本收缩不充分、存贮过久、反复融冻等外源性影响因素干扰难以完全避免[4]。通过利用TRFIA法检测299例ELISA法检测抗-HCV阳性结果完全一致，说明利用TRFIA检测抗-HCV准确可靠，且智能化程度较高，值得推广应用。 【参考文献】 [1] 李梦东主编.实用传染病学[M].第2版.北京：人民卫生出版社.2000年，127-134. [2] 中华医学会传染病与寄生虫病学分会、肝脏病学分会.病毒性肝炎防治方案[J].中华肝脏病杂志，2000，16(8)：324-329. [3] 李金明主编.临床酶免测定技术[M].北京:人民军医出版社，2008：87-90. [4] 黄学斌,陈华根,刘冰.金免疫层析试验检测丙型肝炎抗体应用评价[J].检验医学与临床，2009,6（18）：1531-1532.
血浆凝血酶原时间(PT)及活化部分凝血活酶时间(APTT)测定
血浆凝血酶原时间（PT）及活化部分凝血活酶时间（APTT）测定 一、血浆凝血酶原时间（PT）测定 （一）参考值 一步法凝血酶原时间：11～13秒 凝血酶原比值：0.82～1.15 （二）临床意义 1．PT延长：PT超过正常对照3秒以上或凝血酶原比值超过正常范围即为延长，主要见于： ①先天性因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ减少及纤维蛋白原的缺乏（低或无纤维蛋白血症）； ②获得性凝血因子缺乏，如DIC、原发性纤溶亢进症、肝病的阻塞性黄疸和维生素K 缺乏、血循环中抗凝物质增多 等。 2．PT缩短： ①先天性因子Ⅴ增多； ②DIC早期（高凝状态）； ③口服避孕药、其它血栓前状态及血栓性疾病（凝血因子和血小板活性增高，血管损 伤等均为血栓形成的基础）。 3．口服抗凝药的监护临床上当NIR为2-4时为抗凝治疗的合适范围，当INR>4.5时，如纤维蛋白水平和血小板数仍正常，则提示抗凝过度，应三少或停止用药。INR>4.5时，同时伴有纤维蛋白原和血小板减低，则可能是DIC或肝病等所致也应减少或停止口服抗凝剂。 二、活化部分凝血活酶时间（APTT）测定 （一）参考值：33.68～40.32秒 （二）临床意义：基本与凝血时间意义相同，但敏感性高。目前所用的大多数APTT测定方法，凡当血浆凝血因子低于正常水平的15-30%即可异常。 1．APTT延长：APTT结果超过正常对照10秒以上即为延长。APTT是内源凝血因子缺乏最可靠的筛选试验，主要用于发现轻型的血友病。虽可检出因子Ⅷ：C水平低于25%甲
型血友病，但对于亚临床型血友病（因子Ⅷ大于25%）和血友病携带者敏感性欠佳。结果延长也见于因子Ⅺ（血友病乙）、Ⅻ和Ⅶ缺乏症；血中抗凝血物如凝血因子抑制物或肝素水平增高时，当凝血酶原、纤维蛋白原及因子Ⅴ、Ⅹ缺乏时也可延长，但敏感性略差；其它尚有肝病、DIC、大量输入库存血等。 2．APTT缩短：见于DIC，血栓前状态及血栓性疾病。 3．肝素治疗监护：APTT对血浆肝素的浓度很为敏感，故是目前广泛应用的实验室监护指标。此时要注意APTT测定结果 必须与肝素治疗范围的血浆浓度呈线性关系，否则不宜使用。一般在肝素治疗期间，APTT 维持在正常对照的1.5～3.0 倍为宜。
SIEMENS 凝血酶时间测定试剂盒
SIEMENS 凝血酶时间测定试剂盒（凝固法）说明书 【产品名称】 通用名称：凝血酶时间测定试剂盒（凝固法） 英文名称：Test Thrombin Reagent 【包装规格】 凝血酶时间测定试剂：10*5ml； 凝血酶时间测定试剂的缓冲液：1*50ml。 【预期用途】 在临床上用于检测人血浆的凝血酶时间（TT）。 【检验原理】 凝血酶可使血浆标本制度纤维蛋白原转化为纤维蛋白，形成凝块。形成凝块的时间即检测时间。 【主要组成成份】 凝血酶时间测定试剂，冻干品：标准浓度的牛凝血酶，牛白蛋白。 凝血酶时间测定试剂的缓冲液：HEPES（25mmol/L），pH7.4。 防腐剂：5-氯-2-甲基-4-乙噻唑-3-1（6mg/L）、2-甲基-4-乙噻唑-3-1（2mg/L）。 【储存条件及有效期】 未开瓶试剂贮存在2-8℃，有效期24个月。 复溶后稳定期： 37℃8小时 15-25℃10小时 2-8℃7天 -20℃4周 在原瓶中，复溶后试剂可冷冻保存。开瓶后缓冲液的稳定期：2-25℃稳定12周。 不同血凝分析仪有各自的稳定数据。 【适用仪器】 全自动凝血分析仪： CA-510/CA-520/CA-530/CA-540/CA-550/CA-560/CA-1500/CS2000i/CS-2100i/CA6000/CA7000 【样本要求】 采集血浆，将枸橼酸钠（0.109mol/L）1份与静脉全血9份混合，避免产生气泡，按不小于1500g，离心至少10min，出去上层血浆，保存在15-25℃备用。 更详细的步骤请参照CLSI文件H21-A5的第3条。 15-25℃标本稳定时间：4小时，含肝素标本在2小时内进行检测。 按试剂标签上标明的量用缓冲液复溶凝血酶时间测定试剂。测试前，必须将原瓶或塑料试管内试剂预温到37℃，并小心混匀。 【检验方法】 自动方法： 适用于手工或者全自动凝血分析仪，Siemens公司提供几种凝血分析仪的参考指南（应用表）。参考指南中包括分析仪和分析方法的详细操作方法以及可能和操作手册中提供的内容不同的性能指标。这种情况下，参考指南的信息将替代操作手册中的内容。请同时参考仪器厂家的操作指南！ 手工方法： 移液入37℃预温的试管：
时间分辨荧光分析技术
1.1 时间分辨荧光分析技术 时间分辨荧光生化分析技术是基于稀土荧光配合物特殊的荧光性质而建立起来的，自1978年提出以来[1]，已广泛的应用于免疫分析、核酸测定、荧光显微镜成像、细胞识别、单细胞原位测定、生物芯片等生化领域，并发展出了相应的时间分辨荧光免疫测定法、时间分辨荧光DNA 杂交测定法、时间分辨荧光显微镜成像测定法、时间分辨荧光细胞活性测定法及时间分辨荧光生物芯片测定法等分支。 本节主要对稀土荧光配合物的发光机理、荧光性质，时间分辨荧光测定的原理，时间分辨荧光免疫分析技术，时间分辨荧光显微镜成像技术的研究进展等加以介绍。 1.1.1 稀土荧光配合物的发光机理及荧光性质 稀土元素指的是元素周期表中IIIB 族的镧系元素以及钪和钇，共17种元素。其中镧系元素的外层电子结构为4f 0-145d 0-106s 1-2，由于5s 和5p 电子对4f 电子的屏蔽作用，导致这些金属及其离子的性质十分相似。图1.1给出了四种三价稀土离子的基态及激发态电子能级图[2]。 1020 152530355 E N E R G Y ,103c m -1 6 H 5/2 G 5/2 6 H 15/2 7 F 0 F 2D 0 5D 1 7F 6 F 5 4 5D 3 13/2 4 9/2 Sm 3+ Eu 3+ Tb 3+ Dy 3+ H 9/2 图1.1 部分三价稀土离子的电子能级图 Fig. 1.1 Electronic energy levels of certain lanthanide(III) ions 大部分稀土离子本身是不具有荧光性质的，只有Sm 3+、Eu 3+、Tb 3+和Dy 3+的水溶液在紫外光或可见光的激发下能够发出微弱的荧光。当Sm 3+、Eu 3+、Tb 3+和Dy 3+与某些有机配位体形成配合物时其荧光强度会显著增强，这种发光是基于配合物内由配位体到中心稀土离子的能量转移所产生的[3-8]。以铕(III)配合物为
新生儿促甲状腺素的时间分辨荧光免疫分析及其试剂盒研修订版
新生儿促甲状腺素的时间分辨荧光免疫分析及其试剂盒研修订版 IBMT standardization office【IBMT5AB-IBMT08-IBMT2C-ZZT18】
新生儿促甲状腺素的时间分辨荧光免疫分析及其试剂盒研制 谭玉华，冯健明，卢顺舵，罗建安，李建国，季涛，李贵情 （广州市丰华生物工程有限公司，广州 510730 ） 摘要：目的利用时间分辨荧光免疫分析（TrFIA）技术，建立新生儿促甲状腺素（Neonatal TSH）微量检测法，并研制其检测试剂盒。方法采用了一株TSH单克隆抗体用于固相包被，另一株TSH单克隆抗体用于标记铕（Eu3+），固相双抗体夹心时间分辨荧光免疫分析法检测Neonatal TSH。结果自建的Neonatal hTSH TrFIA法灵敏度高可达2.28μU/ml，且在测量范围内，自制试剂盒剂量-反应曲线的相关系数r达0.9987。与hLH、hFSH、HCG无明显交叉反应。分析内或分析间质控结果在靶值±25%内，室内低质控、高质控分析内和分析间变异系数(CV)分别为7.12%和6.09%，7.82%和7.03%。与DELFIA ? Neonatal TSH试剂标准品进行准确性比对实测值与标示效价比平均值为1.05。与DELFIA ? Neonatal TSH试剂比对试验符合率一致，相关性系数r可达0.9822。试剂盒室间质评能力比对成绩100%。结论自建的Neonatal TSH TrFIA法具有灵敏度高，特异性强，准确度高，精密性好和非放射性等优点，具有良好的临床应用价值。 ?基金项目：科技型中小企业技术创新基金（08C26114411281），广州市科技计划项目（2006V42C0051）。 作者简介：谭玉华，1980年10月，男，医学学士，检验技师，主要从事标记免疫试剂的研发、应用和医学检验工作。 Email:tanywhy@https://www.wendangku.net/doc/0f16682551.html,
时间分辨荧光免疫分析法(Time-resolved fluoroimmunoassay)操作
时间分辨荧光免疫分析法(Time-resolved fluoroimmunoassay)是在荧光分析的基础上发展起来的一种特殊的荧光分析。它利用具有长效荧光的稀土金属（Eu、Tb、Sm、Dy）作标记物，充分利用激发光与发射光之间的降移与发射光较长的半寿期，在激发光后延时测量发射光的强度。从而所测的荧光不受激发光和被检物中的非特异荧光干扰，提高了检测的特异性与灵敏度。在激发光后延时400微秒，测量400微秒，间歇200微秒后进入下一个测量周期，每一个周期为1000微秒。对每一个样品实施1秒钟的测量，意味着完成了1000个周期的测量，测量精确度极高。 （一）Auto DELFIA自动时间分辨荧光免疫分析仪开/关程序 1 开机 1.1 依次打开样品处理器电源，微孔板处理器电源，打印机电源。 1.2 打开计算机显示器。 1.3 启动计算机。 1.4 运行系统软件：Auto DELFIA与Multicalc系统软件在Windows启动后自动运行。Auto DELFIA workstation软件用于控制Auto DELFIA的运行，MultiCalc的主要功能是与主机通讯，对测试结果进行评估和对质控及其他数据处理（可通过双击屏幕上图标不运行）。在MultiCalc Auto DELFIA环境下，只有键盘有效，鼠标无效。 2 开机后准备 1.1 清洗液准备 1.1.1 微孔板处理器洗液（250ml浓缩液＋600ml去离子水混合），每做一块板至少1升用量，洗液在密闭条件可保存2周时间。 1.1.2 准备样品处理器洗液（50ml浓缩液＋5000ml去离子水混合），每做一块板至少需要800ml洗液，洗液在密闭条件下可保存1周时间。 1.2 样品处理器准备 1.2.1 在Wash bottle（清洗液瓶）、Rinse bottle (冲洗液瓶)分别注入足够用量的清洗液和去离子水，倒空废液瓶。拧紧各瓶盖，确保废液瓶管路向下。 1.2.2 如样品需要稀释，放入稀释杯和稀释液。系统安装时已调好有71ml和190ml两种规格的稀释杯，若使用71ml的稀释杯，从最右端开始放置，如有预处理样品，则不能使用190ml 的稀释杯。不能使用多个稀释杯。 1.3 微孔板处理器准备。
凝血酶时间测定(TT)
凝血酶时间测定（TT） 一、测定原理： 1、在凝血酶作用下，待检血浆中纤蛋白原变位纤维蛋白。当待检血浆中抗 凝物质增多是，凝血酶时间延长。 二、标本要求： 1、凝血专用管（CTAD管，枸椽酸钠0.109M，蓝帽）抽取静脉血至刻度线， 充分混匀。1000转离心10分钟后2小时内测定完毕。 2、测定量 100ul血浆 三、试剂： 1、STAGO公司原装试剂STA?-THROMBIN? 2、保存条件：2-8℃ 3、使用条件：使用前干粉与稀释液混匀，放入搅拌珠，以保持试剂为混悬 液，条码扫描后放入仪器试剂柜特定位置。 四、仪器和材料： 1、STA全自动血凝仪 2、含有磁珠的反应杯 五、标准和质控： 1、预定标，标准曲线由厂家在试剂中提供。 2、质控品为原装STA-COAG CONTROL N+P两批号定值血浆干粉，保存条件 2-8℃。使用前加蒸馏水1ml，混匀即可使用，试剂开启后在试剂柜内稳定8小时。 编写：伍海波制定日期：2011.12.1
六、操作程序： 1、装卸试剂：F2键打开试剂柜，条码扫描后确认试剂量，放入特定孔（带搅拌珠混匀功能）即可。 2、定标与室内质控：更换试剂批号时仪器根据每批试剂的标准曲线自动定标，24小时室内质控自动测定一次，未通过则仪器会提示报警。 3、标本测定：F1键打开标本柜，输入号码后随机插入标本孔，选择测定项目后关闭标本柜。吸样针加100ul血浆入反应杯，预温240秒后加入50ul TT试剂并开始计时。秒数计算均由仪器根据曲线自动完成换算。 4、传送并核收结果。 5、注意事项： a、血量与抗凝剂比例适宜，离心时间充分以确保血浆中无血小板干扰测定 结果。 b、标本无凝固。 七、计算和参考值 由仪器自动完成，正常参考值：14-21秒 编写：伍海波制定日期：2011.12.1
化学发光免疫技术与时间分辨技术的异同点
化学发光免疫技术与时间分辨技术的异同点 Newly compiled on November 23, 2020
化学发光免疫技术与时间分辨技术的异同点 概念 化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,),是将具有高灵敏度的测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、、抗体、激素、酶、脂肪酸、维生素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、和之后发展起来的一项最新免疫测定技术。 时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）是以标记抗原或抗体，并与时间分辨测定技术结合而建立起来的一种新型非放射性微量免疫分析技术，它根据镧系元素的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。 原理 化学发光免疫分析包含两个部分, 即免疫反应系统和分析系统。化学发光分析系统是利用化学发光物质经催化剂的催化和氧化剂的氧化, 形成一个的中间体, 当这种激发态中间体回到稳定的时, 同时发射出光子(hM) , 利用发光信号测量仪器测量光量子产额。免疫反应系统是将发光物质(在反应剂激发下生成激发态中间体) 直接标记在抗原(化学发光免疫分析) 或抗体(免疫化学发光分析) 上, 或酶作用于发光底物。鲁米诺 (1umino1)、异鲁米诺(isolumino1)及其衍生物、吖啶酯(acIidinimester)衍生物、辣根过氧化物酶(horseradishperoxidase，HRP)和碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)是目前CLIA中使用最多的四类标记物。 时间分辨荧光免疫测定（TRFIA）基本原理 用三价稀土离子及其鳌合剂作为示踪物，代替荧光物质、同位素或酶，标 记蛋白质、激素、抗原、抗体、核酸探针等物质，当免疫反应体系发生后，根据稀土离子螯合物的荧光光谱的特点，用时间分辨荧光分析仪测定免疫反应最后产物中荧光强度。根据荧光强度或相对荧光强度比值，来判断反应体系中分析物的浓度，达到定量分析之目的。 应用 （CLIA）
时间分辨荧光CRP-poct试纸条的设计
时间分辨荧光CRP-POCT 试纸条的设计 本试剂条内部采用侧向流免疫层析的三明治方法，装置包括一个样品垫、一个结合物释放垫、一个反应膜和一个吸收垫（图1）。其中样品垫用于加样（血清或全血）；结合物释放垫中含过量的CRP 抗体A 和Eu 的复合物(α-CRPA-Eu)；反应膜上有两道线：检测线，又称T 线:，含过量的CRP 抗体B(α-CRPB)；对照线，又称C 线，含定量的CRP 抗体A 的抗体（α-α-CRPA ）。 在测试中，血清样品在试纸条的毛细管 作用带动下流经结合物释放垫，血清中的 CRP 在此与CRP 抗体A-Eu 复合物结合，形 成CRP-抗体A-Eu 复合物（图2-A ），并在 流经反应膜上的捕获线时被捕获分子（CRP 抗体B ）结合，形成抗体B-CRP-抗体A-Eu 的三明治复合物，产生T 线信号（图2-B ）。 而结合物释放垫中过量的CRP 抗体A-Eu 复合物在流经反应膜上的捕获线时不能被捕获分子捕获，越过捕获线继续前行。当到达对照线（C 线）时，被其抗体捕获，产生C 线信号（图2-C ）。将T 、C 线进行整合，去除信噪比后，即可判定血清中CRP 的含量（图3）。 图1 ：CRP-POCT 试纸条的结构 1=样品垫，2=结合物释放垫，3=检测线，4=反应膜， 5=对照线，6=吸收垫 图2：铕标记的CRP 抗体与CRP 及本身抗体的结合 A. CRP 抗体A 与CRP 在结合物释放垫上结合； B. CRP 抗体A 与CRP 的结合物在T 线处与CRP 的另一抗体B 结合，被捕获于T 线； C. CRP 抗体A 与其本身的抗体被捕获于C 线 图3：时间分辨荧光CRP-POCT 试纸 条的检测结果
活化部分凝血酶时间(APTT)测定
出凝血3.1活化部分凝血酶时间（APTT）测定（第四版） 出凝血3.2 原理： 在37℃条件下用激活剂（糅花酸）激活因子XII和XI，以脑磷脂替代血小板提供凝血的催化表面，在因子IX的参与下，测定贫血小板血浆的凝固时间。部分活化凝血酶时间测定（APTT）是内源性凝血系统的筛选实验。 标本处理： 患者处于休息状态下，采空腹静脉血（急诊病人除外）。采血者应技术熟练，“一针见血”，以防止组织损伤，使外源性凝血因子进入标本。最好不与其它实验一起采集而使血液停留在针管的时间延长。采完血后，将血液沿管壁缓缓注入试管，避免产生气泡；然后迅速将血液和抗凝剂轻轻颠倒混匀，避免用力震荡。 全血要在1小时内分离血浆。分离乏血小板血浆时，要在室温下3000rpm离心10分钟，室温下可存放4小时。全部试验不能在4小时内完成，应将乏血小板血浆分装在0.5～1.0ml的小试管中快速冷冻，储存于-20℃冰箱中。冷冻过的标本不能再次冷冻，否则结果会不准确。冷冻血浆融化时，应将盛冷冻血浆的容器置于37℃水浴中，并轻轻摇动，使其迅速融化。 出凝血3.4 试剂： APTT试剂：试剂购于天津威士达公司。德灵Actin试剂（试剂盒代号B4218-1）。每瓶试剂内含磷脂（从兔脑中提取），1.0×104mol/L糅花酸，稳定剂共2ml。 0.025M氯化钙：实验室自制。 试剂从冰箱中取出，室温平衡15min后上机分析。
出凝血3.5 仪器：使用Sysmex公司的CA-7000型全自动血液凝固仪。出凝血3.6 操作：按仪器操作步骤执行标准操作。 出凝血3.６.1开机：按下机器侧面的POWER 按钮。开机后机器进行自检，当屏幕上边显示“Ready:”时可以进行试验。 出凝血3.６.2检查消耗品： 1、准备反应杯：打开仪器上盖装反应杯的盖子查看反应杯是否够量，不足时，需及时添加。（一次性最多可放1000 个杯子） 2、准备试剂：按照仪器对试剂的要求，把试剂准备好，放到仪器内相应位置，注意查看试剂的量和有效期。如还不熟悉试剂位置时，可在主屏幕上选Reagent Setting，按屏幕显示放置试剂。 3、查看仪器的洗液瓶和废液瓶 出凝血3.６.3准备标本：将样本放入样本架，再将样本架放到仪器进样器上。 出凝血3.６.4输入检测项目：主菜单上按下Work List 键，进入工作菜单，输入APPT项目。 出凝血3.６.5输入样本号：按屏幕下菜单的ID No.键，按顺序输入样本的序号。 出凝血 3.６.6开始检测：录入完所有测试信息，按下屏幕右上角START 键，开始检测。 出凝血3.7质量控制：使用德灵公司的leve11质控品做质量控制。每批质控品的值不超过2SD。（详见出凝血1质量控制） 出凝血3.8 计算：仪器自动计算出结果。 出凝血3.9 参考值：23s～33s,由DADE BEHRING公司推荐。
凝血酶原时间
凝血酶原时间 凝血酶原时间 百科名片 凝血酶 凝血酶原时间，简称PT，是指在缺乏血小板的血浆中加入过量的组织因子（兔脑渗出液）后，凝血酶原转化为凝血酶，导致血浆凝固所需的时间。正常值为12-14秒。PT超过正常对照3秒以上者有临床意义。应用正常血浆的凝血酶原时间/活动度曲线，对比患者血浆的PT，可以求出活动度。活动度的正常值为80%-100%。目录[隐藏] 原理与临床意义 PT在肝病中的应用价值 PTA与INR在肝病中应用价值的比较 PTA组间差异的相关因素
[编辑本段] 原理与临床意义 凝血酶原时间也是凝血系统的一个较为敏感的筛选试验。凝血酶原时间主要反映外源性凝血是否正常。其原理是在抗凝血中，加入足够量的组织凝血活酶(组织因子,TF)和适量的钙离子，满足外源性凝血条件，从加入钙离子到血浆凝固所需的时间即为PT。 实验室报告PT有4种方式：秒、活动度（prothrombintimeactivitypercentage,PTA）、率（prothrombintimeratio,PTR）、国际标准化比率（internationalnormalizedratio,INR）。4种形式在临床上应用价值不同。 凝血酶原时间延长见于： 先天性凝血因子缺乏，如凝血酶原（因子Ⅱ）、因子Ⅴ、因子Ⅶ、因子Ⅹ及纤维蛋白原缺乏。 获得性凝血因子缺乏：如继发性/原发性纤维蛋白溶解功能亢进、严重肝病等；
使用肝素，血循环中存在凝血酶原、因子Ⅴ、因子VII、因子Ⅹ及纤维蛋白原的抗体，可以造成凝血酶原时间延长。 凝血酶原时间缩短见于：妇女口服避孕药、血栓栓塞性疾病及高凝状态等。 凝血酶原时间（prothrombintime，PT）是反映肝脏合成功能、储备功能、病 变严重程度及预后的一个非常重要的指标。 [编辑本段] PT在肝病中的应用价值 PT主要由肝脏合成的凝血因子I、Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ的水平决定，它在肝病中的作用尤为重要。急性肝炎PT异常率为10%～15%，慢性肝炎为15%～51%，肝硬化为71%，重型肝炎为90%。在2000年病毒性肝炎诊断标准中，PTA是病毒性肝炎患者临床分期的指标之一。慢性病毒性肝炎患者轻度PTA>70%、中度70%～60%、重度60％～40%；肝硬化代偿期PTA>60%、失代偿期PTA<60%；重型肝炎PTA<40%[1]。Child-Pugh分级中PT延长1～4s计1分、4～