细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导目录
一．显微镜的使用
实验一、几种光学显微镜的使用
实验二、参观电子显微镜及生物超薄切片标本制备
二．细胞形态结构
实验三、细胞大小的形态观察——测微尺的使用
实验四、细胞活体染色技术
实验五、植物细胞骨架光学显微观察
实验六、胞间连丝观察
三．细胞化学
实验七、鉴定RNA的细胞化学方法——Branchet反应
实验八、DNA显色的观察——Feulgen反应
实验九、固绿染色法鉴定细胞内酸性蛋白与碱性蛋白
实验十、多糖及过氧化酶的显示
实验十一、核仁组成区的银染显示与观察
四．细胞生理
实验十二、细胞膜的通透性
实验十三、细胞电泳
五．细胞和组织培养技术
实验十四、植物原生质体的分离和融合
实验十五、植物细胞的培养与观察
实验十六、动物细胞融合
实验十七、动物细胞的培养与观察
六．细胞化学成分的分离
实验十八、细胞器的分离、纯化——细胞分级分离
实验十九、荧光的细胞化学测定
实验二十、细胞活力的鉴别
实验一几种光学显微镜的使用
一、实验目的
了解几种光学显微镜的结构、工作原理、主要用途和使用方法；掌握使用普通显微镜提高分辨力的方法。
二、实验原理
(一)基本原理
一般实验室经常使用的光学显微镜都是由物镜、目镜、聚光器和光阑组成，普通显微镜它们的放大原理及光路图如下：
AB物体．A1B l第一次成像，A2B2第二次成像，O l目镜．O2物镜，
F1为O l的前焦点，F2为O2的前焦点
各种光学显微镜的光学放大原理基本相同，各种特殊用途的光镜不过只是在光源、物镜、聚光器等方面作了改动，或在其它方面增设了某些特殊的设备。
(二)几种光学显微镜
l、普通光学显微镜：
普通光学显微镜也叫复式显微镜，是最常见，最简单的显微镜。它适于观察一般固定的，有色的透明度较高的标本。其最大分辨力一般为0.2微米，从构造上可分光学、机械和电子三大系统。
2、暗视野显微镜：
暗视野显微镜是以丁达尔现象(Tyndall phenomenon)(即光的微粒散射现象)为基础设计的,它使用了特殊的聚光器进行斜射照明,因光源中心束不直入物镜，所以视野黑暗，而被检细胞器因斜射照明发生衍射和反射，所以发亮可见。暗视野显微镜可用增加光照方法增加物体与背景的反差，因而可观察到0．2—0．004微米直径的微小粒子，但它分不清被检物的细微构造，它常用于观察物体的存在与运动。而暗视野显微镜与普通光学显微镜的区别，主要在于聚光器的不同，致使照明方法有别。确切地说，称暗视野显微镜为暗视野照明更为贴切。它是照明光线仅照亮被检样品而不进入物镜。使视野背景暗黑，样品明亮的照明方法。
3、相差显微镜：
相差是指同一光线经过折射率不同的介质其相位发生变化并产生的差异。相位是指在某一时间上，光的波动所达到的位置。
一般由于被检物体(如不染色的细胞) 所能产生的相差的差别太小，我们的眼睛是很难分辨出这种差别的，只有在变相差为振幅差(明暗之差) 之后，才能被分辨。
相差显微镜是以光的干涉现象为基础设计的。与普通光学显微镜比较，它在聚光器和物镜上作了改动。用装有环状光阑的聚光器造成的空心光线柱，使直射光(背景) 和衍射光(样品) 分开。同时在物镜的后焦面上装有相板，使直射光和衍射光发生干涉，从而把我们肉眼不能见的相位差变为可见的振幅差，同时相板上装有吸收膜，吸收部分直射(或衍射) 光以增加反差，使人们能够看清更加细微的结构。所以相差显微镜一般用于观察活细胞的细微结构。
4、荧光显微镜：
荧光是指某些物质经波长较短的光线照射后，分子被激活吸收能量后呈激发态，其能量部分转化为热量或用于光化学反应外，相当一部分则以波长较长的光能形式辐射出来，这种波长长于激发光的可见光称作荧光。
荧光显微镜是以紫外线(3650A) 或兰紫光(4200A) 照射某些物质，可激发其产生荧光的原理为基础设计的，利用一个高发光效率的光源，经过一个滤光系统得到紫外光(或兰紫外光)，直接照射标本中的自然荧光物质，使其产生自发荧光，再加以镜检。或以荧光染料先对标本进行染色，然后使之在上述光源照射下产生次生荧光，再加以镜检。这种显微镜主要用于观察荧光(或次生荧光)物质在细胞内分布情况，以及测定细
胞器的生理活性。
(三)如何提高分辨力
显微镜的能力是质量和性能的标志。能力包括分辨率、放大率、焦点深度和视场宽度等。其中最重要的是分辨率。各种能力都有一定的限界，既互相作用，又互相制约，改善和提高了某种能力，同时降低了某些能力，只能顾其主要，兼顾其它，综合筹统。
1、数片孔径(numerial aperture)
数片孔径(N．A．) 也叫镜口率，是物镜和被检样品之间的介质的折射率(n) 与物镜所接受的光锥顶角(亦称孔径角) 的一半α (半孔径角) 正弦的乘积。其公式如下：N．A．=n·sinα
物镜的数值孔径愈大，显微镜的能力愈强，数值孔径与分辨率成正比，与焦点深度成反比．物镜的数值孔径的N．A．值刻在物镜壳上，如40／0．65表示40倍的物镜，数值孔径为0．65。物镜的数值孔径随前透镜直径的减少而增大。显微镜物镜的前透镜口径愈小，数值孔径愈大，放大倍数愈高，价格愈高。
2、分辨率(resolving power)
物镜分辨力是指分辨被检样品微细结构的能力。通常以能清晰地分辨两个物体点的最短距离来表示。其公式如下：
R=0.61×λ/ N．A．
R：分辨率；λ：照射光线波长；N．A．：物镜数值孔径
分辨率以分辨两个点的最短距离表示，R值愈小，分辨能力愈大。物镜的分辨率与照明光线的波长成反比，与物镜的数值孔径成正比。
照明光线波长愈短，物镜的数值孔径愈大，显微镜的分辨率亦愈大。
物镜的分辨力即显微镜的分辨率，目镜与显徽镜的分辨力无关，它只把物像第二次放大，使眼睛便于观察。目镜只能将物镜已经分辨的影像进行放大，无法观察到未被物镜分辨的细节。在光学成像过程中，目镜不起初始造像作用，仅作放大而已。
3、放大率(magnification)
显微镜最后形成的物体放大影像，对被检物体的大小比例称为放大率，即像高比物高。放大倍数以长度计算，而不是以面积或体积计算。
显微镜的总放大率(Mt)应为：
Mt=Mob×Me×Mph
Mt：总放大率；Mob：物镜放大率；Me：目镜放大率；Mph：摄影透镜放大率
一般镜检观察时，摄影附加透镜的放大倍率不计算在内，因它未参予造像，显微镜辨别微细结构的能力，不取决于总放大率，而归于物镜的分辨率。显微镜的总放大率，绝非愈高愈好，有其适量范围：最低和最高界限。适宜的总放大率是所用物镜数值孔径的500～1000倍。在此范围称作有效放大率。例如：使用40／0．65物镜时，应选配适宜的目镜倍数范围。
首先计算出有效放大倍率：
0．65×500～0．65×1000=325—650
再用物镜放大倍率除以有效放大率：
325÷40～650÷40=8～16
求得的数值是应选配的目镜放大倍率的范围，即要选用8×～16×的目镜。
总之，总放大率超过物镜数值孔径的1000倍时，微细结构分辨不清，为空的放大，低于500倍时由于放大率过低，肉眼难以分辨。
4、焦点深度(depth of focus)
当显微镜对被检样品的某一点或平面准焦时，影像的清晰范围，不局限于这一点或面，在某上下的一定距离或深度内也是清晰的。这段清晰的距离或深度，就叫做焦点深度，简称焦深，焦深长表示清晰的上下范围或深度大，焦深短，清晰的上下限界短。
显微镜的焦深可变，它与物镜的数值孔径和总放大率相关。焦深与物镜的数值孔径和总放大率成反比，收缩孔径。影像的焦深加大，提高物镜的数值孔径，清晰深度变小，总放大率提高，焦深度小，总放大率降低，焦深加大。使用同一物镜，配用倍率的目镜，其焦深随目镜倍率加大而减少。
三、实验用品：
(一)材料：草履虫，洋葱内表皮，紫鸭趾草等花粉，菠菜叶。
(二)用品：普通光学显微镜，暗视野显微镜。相差显微镜，荧光显微镜，载玻片，
盖玻片，吸管，镊子，剪刀等。
四、实验方法：
l、观察草履虫的外形、运动、纤毛、食物泡等。
取少许棉花纤维或擦镜纸纤维，放于载玻片上，在其上滴一滴草履虫悬液，然后加盖玻片观察。
2、洋葱表皮细胞和菠菜叶的细胞核、叶绿体的观察
在载玻片上滴一滴水，撕洋葱鳞茎内表皮或菠菜下表皮一小块放于其中，使其展开，然后加盖片观察。
3、紫鸭趾草花粉外形、表面突起的观察
在载玻片上滴一滴水，取紫鸭趾草雄蕊在其中沾几下，然后盖片观察。
五、作业：
1、谈谈如何提高显微镜的分辨力。
2、根据实验结果，把所能观察到内容的材料符号填在表内适当的位置。
A、草履虫
B、洋葱表皮细胞
C、菠菜叶细胞
3、通过实验简述所使用的几种显微镜的用途。
实验二参观电子显微镜及生物超薄切片标本制备
一、实验目的：
通过参观示范，了解电子显微镜的基本结构和工作原理，了解制备生物超薄切片的基本过程；观察细胞的亚显微结构。
二、实验设备及用品：
透射扫描电子显微镜；超薄切片标本，超薄切片机；细胞的亚显微结构照片。三、电子表显微镜原理及构造：参考有关书。
四、实验内容：
(一)参观生物超薄切片标本制备过程
利用电镜进行研究工作，是从亚显微水平研究生物学、医学的一个不可缺少的手段，电镜样品制备的好坏往往会决定研究工作的成败，样品制备在电镜工作中是最为重要的环节，并且也是最困难的工作，参观过程中注意听有经验的老师讲解，了解超薄切片制备过程中的：取材、固定、脱水、渗透、包理、切片、染色等步骤，同时了解支持膜的制备工作，玻璃刀的制作等技术内容。
(二)参观电子显微镜和电镜照片
听有关教师讲解电镜子的构造，成像原理，了解透射电镜和扫描电镜的用途。在此过程中自己有意识地与光学显微镜进行比较，观看细胞材料时，注意质膜，核，线粒体，叶绿体，核仁，液泡，高尔基体等的结构，所参观的电镜分辨率如何，放大倍数如何，同时与光子显微镜进行比较。
观看照片注意各种细胞器的形状结构，分布位置与我们通常的亚显微结构的模式图进行比较。
五、作业：
1、超薄切片标本的制作过程和简要内容?一般电镜标本要求的厚度?
2、所参观的电镜的加速电压，分辨率，放大率各是多大?
3、在电镜下或电镜照片中看到了哪些光镜下看不到的超微结构试加以比较。
实验三细胞形态大小的观测——测微尺的使用
一、实验目的：
观察不同组织的细胞形态，了解它们与功能的关系，学会和掌握测微尺的使用。
二、实验原理：
细胞形态、大小种类繁多，差别较大，从形状上动物卵细胞、植物的基本组织细胞(薄壁细胞)是球形或近球形细胞。人的红细胞呈圆饼状，神经细胞分枝状，植物细胞执行不同功能，其形状差异很大。如输导组织细胞呈柱状，机械组织细胞呈棱形等。细胞的形态与其功能相适应。细胞的形态可以通过显微镜观察得以描述，而细胞的大小是通过一定的测量工具来获得较为准确的测量结果，下面介绍几种测量用的测微尺。
l、镜台测微尺：是一种特制的载玻片，中央有刻度线的标尺，一般全长为lmm，共分l0个大格、100个小格，每一小格长度(0．01mm)，用加拿大树胶将圆盖玻片密封在载玻片上。
2、目镜测微尺：是放在目镜筒内的标尺。我们使用的是固定式目微尺，为一块圆片玻璃片，直径20—2lmm，上面有刻度，分为直线式和网格式的。
(1)直线式目微尺：用于测量被检物的长度，整个刻度一般长约10mm，分成l0个大格，100个小格。
(2)网式目微尺：主要用于计算被检物的数目和测量物体的面积，方格大小各有不同。
3、镜台标准推动器上的纵横游标尺：
一些较高级的显微镜都有该装置，它可以用来测量被检物的长度和位置，由标尺和副标尺组成。
4、微调焦轮的标尺：是在调上、下厚度时，微调焦轮读出的数值，一般有100个刻度，每一刻度为l一2μm。
三、实验用品：
l、0.5％蕃红或l／3000中性红溶液
2、香柏油，二甲苯
3、兔的肝、肾、卵细胞永久制片
4、蚕豆根尖切片．洋葱新鲜材料
四、实验步骤：
(一) 台微尺和目微尺的校对
1、卸下目镜，拧开后面的透镜，将目微尺装入其焦面上，使刻度向下。
2、将台微尺置于载物台上，使刻度向上。
3、调焦至能看清台微尺刻度线。
4、移动台微尺，并转动目微尺，使两个测微尺的左边第一条刻度线完全重合，然
后向右边找完全重合的刻度线。分别记录两重合线间台微尺刻度数n和目微尺刻度数m，并查出台微尺的实际刻度值a(一般为0.0lmm)。
5、计算目微尺的实际刻度值x (mm)
X=n·a /m
6、校对后，卸下台微尺进行细胞形态、大小观测，如果物镜倍数改变，需进行重
新校对。
(二) 细胞形态观察和细胞大小的测量
1、兔不同组织细胞永久制片
观察其细胞间隙、细胞形状、细胞核及核仁形状与数目、细胞质的形态结构等。
2、．蚕豆根尖的永久制片
观察蚕豆根尖纵切面概况，注意生长点与生长点成熟区细胞的异同。
3、大肠杆菌标本示范，注意细胞形状、大小及核物质等情况。
4、细胞大小的测量
对于圆形椭圆形细胞或正方形细胞，它们的直径、长、宽可以用目微尺进行测量，对于长方体的细胞来说，算出体积要有一厚度的问题，它是不能用目微尺测量的，而需要用显微镜微调焦轮上的标尺，具体方法如下：
(1)将微调“O”刻度与基部镜臂上刻度线对准。
(2)转动粗调看清细胞的上端面或下端面；然后顺时针或逆时针旋转微调，看清细胞的下端面或上端面，计下微调旋过的刻度数L，则厚度为：
h=L．b
(b为微调每转一刻度，物镜垂直下降的距离一般显微镜都给出了)
5、求核质比NP
核质比的计算=V n(核体积)/V c(细胞体)-V n（核体）
注：椭圆体积v=4／3πab2
圆球体积v=4／3π
长方体V=a．b．c
(1)兔肾细胞的永久制片求NP值。
(2)洋葱内表皮细胞，用0.5％蕃红染色5分钟观察，求NP值。
五、作业
1、通过观察，说明真核细胞和原核细胞，植物细胞和动物细胞在形态结构的复杂
性上和大小上有何差异。
2、写出目微尺在10倍、40倍镜下的实际刻度值X的计算过程和结果。
3、分别计算出兔肾细胞和洋葱表皮细胞的NP值。
实验四细胞活体染色技术
一、实验目的：
l、学习细胞活体染色的方法。
2、观察动、植物活细胞内线粒体，液泡系的形态、数量与分布。
二、实验原理：
活体染色是利用某些无毒或毒性较小的染色剂，在不影响细胞生命活动的情况下显示细胞的天然构造，更具真实性。活性染色又分为体内活体染色和体外活体染色。
詹纳斯绿B(Janus green B)能够活染线粒体为蓝色，主要是由于线粒体内膜上的细胞色素酶系使染料始终保持在氧化状态(即有色状态)，在周围的细胞质内，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。
中性红是液泡系的特殊活体染色剂，它可将不同发育时期的液泡染成不同深度的红色，在细胞处于生活状态下细胞质和核不被染色，该染料对液泡系具有一定专一性。
台盼蓝(trypan blue)是一种偶氮类酸性染料，它可以通过死亡细胞的质膜而使细胞着色，但不能通过活细胞的质膜，故可用台盼蓝鉴别活细胞与死细胞。
三、实验用品：
(一)材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。
(二)器械：显微镜、镊子、刀片、’剪刀、解剖针、表面皿、载玻片、盖玻片、
吸管、收水纸等。
(三)试剂：
l、Ringer氏液
NaCl 0．90g
KCl 0．42g
CaCl20．25g
2、1／3000中性红溶液
先配制l％的中性红Ringer氏源液，因中性红难溶解，需稍加热，(30℃一40℃)使之溶解，过滤，将滤液装入棕色瓶中暗处保存，临用前取少许源液用Ringer氏液稀释成1／3000的中性红溶液。
3、1／5000詹纳斯绿B
先配制1％詹纳丝绿B溶Ringer氏溶液，方法同上。
4、台盼蓝染色液
将l克台盼蓝溶于100毫升生理盐水中
5、香柏油、二甲苯、蒸馏水等。
四、实验方法：
(一)液泡系的中性红活体染色
l、用双面刀片将黄豆芽根尖(约l一2cm2) 处小心纵切断面，一定要薄且均匀。
2、在载玻片中央滴加中性红染料。使材料在其中染色5一10分钟。
3、吸去染料，滴加Ringer氏液一滴，盖片、镜检、注意液泡系染成什么颜色，
其形态、大小如何、分布位置。
(二)线料体的活体染色
l、用植物细胞观察线粒体的活体染色
(1)用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块(约lcm2)，放在载玻片上用1/5000詹纳斯
绿B染色约30分钟。
(2)吸出染液，滴加Ringer氏液，盖片、镜检，注意观察线粒体分布及所呈形
状。
2、用动物细胞观察线粒体的活体染色。
(1)取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块，放入盛有Ringer氏液的表面皿中洗去血液。
(2)将肝组织洗净后吸去血液，加入1／5000詹纳斯绿B染液染色30分钟，注意不
可将组织块完全淹没。
(3)染色后撕开组织块，这样溶液中就会有一些细胞或细胞群。
(4)用吸管吸取溶液，放在载玻片的Ringer氏液中。垫两根短头发，加盖玻片，即
可镜检。
(5)用油镜观察活染色的线粒体标本，要不断地来回转动细调焦螺旋，使盖玻片上
下慢慢移动。使材料总是得到氧气，线粒体的染色才显得非常清楚。
3、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察
（1）取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1／5000詹纳斯绿B溶液。
(2)用牙签取口腔上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10 一15分钟(注意不能干燥)，盖上盖片，吸去多余的溶液，即可镜检。
（三）台盼蓝染色鏊别死活细胞。
抽取小鼠腹腔水细胞涂于洁净载玻片上，滴加l％台盼蓝1滴，盖上盖玻片于显微镜下观察。
五、作业:
l、所观察到的液泡大小是否有差别，染色深度是否一样，并绘图加以说明。
2、所观察到线粒体分布在细胞何处．呈什么颜色，其形状如何，绘图加以说明。
3、比较线粒体在动、植物中的分布、颜色，其形状如何?
实验五植物细胞骨架的光学显微观察
一、实验目的：
观察光学显微镜下细胞骨架的结构，了解显示植物细胞骨架的方法及其原理。
二、实验原理：
细胞骨架是指在细胞中支持和连接细胞各组分，以及与细胞运动有关的结构，它包括微管、中间纤维、微丝。当用适当浓度的Triton X一100处理时，可将细胞内大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白质却仍被保存，经过固定和考马斯亮蓝R250染色，从而在光镜下观察到细胞骨架的网状结构。
三、实验用品：
(一)器材：显微镜、50ml烧杯、滴管、容量瓶、载玻片、盖玻片、镊子。
(二)试剂：
1、M一缓冲液：50mmol／L眯唑，50mmol／L kCl：，0.5 mmol／LMgCl2，
lmmol／L EGTA(乙二醇双(a一氨基乙酸)醚四乙酸)0．1mmoL／L EDTA，lmmol ／L巯基乙醇或DTT(二硫苏糖醇)。
2、6m mol／L PH6．8磷酸缓冲液。
3、1％Triton X一100，用M一缓冲液配。
4、0.2％考马斯亮蓝R250，其溶剂是甲醇46.5ml，冰乙酸7ml，蒸馏水46.5ml。
5、3％戊二醛，用6m mol／L磷酸缓冲液(PH6．8)配制。
6、5％、7％、95％乙醇。
7、叔丁醇、正丁醇、二甲苯、树胶。
(三)材料：洋葱鳞茎。
四、实验方法：
(一)取洋葱鳞茎内表皮细胞(约lcm2大小)若干片温于装有PH6．8磷酸缓冲液
的50ml烧杯中，使其下沉。
(二)吸去磷酸缓冲液，用1％Triton X一100处理20—30分钟。
(三)吸去Triton X—loo，用M一缓冲液洗3次，，每次10分钟。．
(四)3％戊二醛固定0.5—1小时，(对照组开始处理)。
(五)PH6.8磷酸缓冲液洗3次，每次10分钟。
(六)用0．2％考马斯亮蓝R250染色20—30分钟。
(七)用蒸馏水洗1—2次，材料置于载玻片上，加盖玻片，即可镜检。
(八)如作永久制片，可使样品，顺序通过如下试剂：50％乙醇，70％乙醇。95％
乙醇，95％乙醇和叔丁醇混合液(1：1)，每次5一10分钟，或正丁醇→正丁醇二→甲苯二→甲苯，每次5—10分钟。然后捞取样品，平展于载玻片上，中性树胶封固。
五、作业
I、比较对照组和处理组的细胞骨架结构有何不同？
2、绘制细胞骨架图。
实验六胞间连丝的观察
一、实验目的：
观察植物细胞的胞间连丝，了解其意义。
二、实验原理：
高等植物细胞之间通过胞间连丝相互连接，完成植物细胞间的通讯连结，胞间连丝穿越细胞壁，由相互连接的相邻的细胞质膜共同组成的直径为20—40nm的管状结构，中央是由内质网延伸形成的链管结构，胞间连丝的形成是在细胞分裂时由GB内质网小泡形成胞间层，内质网穿过胞间层形成胞间连丝，在细胞生长过程中胞间连丝的数目还会增加。
三、实验用品:
(一)器材：显微镜，载玻片，盖玻片，解剖刀，刀片，镊子，剪刀。
(二)试剂：0.5％的蕃红水溶液。
(三)材料：红辣椒，玉米籽粒，洋葱。
四、实验方法:
(一)红辣椒表皮细胞临时制片。
取一小块红辣椒，用刀片小心刮除果肉，留下一层极薄的表皮，放于载玻片上，封片观察、镜检时光线不要太亮。
（二）玉米种子糊粉层临时制片
将玉米种子在水中浸泡一天，用镊子剥去表皮露出糊粉层，这时可以用摄子轻撕糊粉层放于水中，或制作徒手切片。刀口与糊粉层平行，切极薄片，封片观察。
(三)洋葱内表皮细胞观察
撕洋葱内表皮一小块，0.5％番红染色2—3分钟，冲洗，封片观察，多余的水用
吸水纸吸干。
五、作业
绘各种材料的胞间连丝图。
实验七 鉴定RNA 的细胞化学方法一Branchet 反应
一、实验目的：
通过实验了解Branchet 反应的原理及操作方法，观察DNA 、RNA 在细胞内分布的主要位置。
二、实验原理：
Branchet 反应是鉴定细胞内的RNA 的一种标准方法，主要是利用核酸分子上的负电荷(PO 43-)与带正电荷的碱性染料结合形成盐键而在原位沉淀显色，所以它可以同时染出RNA 和DNA 。
Unna 试剂中的甲基绿(methyl green)和DNA 亲和力高，派若宁(Pyroin)和RNA 亲合力高。因此DNA 可被染成兰绿色，而RNA 被染成红色，通过观察细胞内不同颜色所分布的位置，可初步判断DNA 和RNA 在细胞内的分布情况。
三、实验用品:
(一)材料：蚕豆根尖石腊切片 (二)试剂：
l 、Unna 染色剂：
甲液：5％ Pyronin 水溶液 6ml 2％ methgl green 水溶液 6ml 蒸馏水 16ml 乙液：1M 醋酸盐缓冲液(PH4.8) 16ml
甲乙两液分别置4~C 冰箱备用，用时两液混匀。 2、5％三氯醋酸
3、0.1％RNase 的醋酸缓冲液(PH4．8)
4、二甲苯
5、乙醇(70％，85％，95％，100％)
6、丙酮
7、中性树胶
四、实验方法:
(一) B rachet 反应：按如下所示步骤进行操作
l 、脱蜡：切片 二甲苯l ／2 （二甲苯+纯酒精)
2、复水： 100％乙醇 ％乙醇 ％乙醇
3、染色：Unna 染色 蒸馏水
4、分色： 丙酮
5、透明： 1／2(二甲苯+丙酮) I
6、封片：已染色的标本盖玻片中性树脂封片。
7、镜检。
（二）油镜观察
l 、RNA 被Unna 试剂染成红色；DNA 被Unna 染色成兰绿色，注意两种颜色的分
布区域。
2、在对照片I 中，DNA 与RNA 被三氯醋酸抽提；在对照片Ⅱ中，RNA 被RNase 处理，而DNA 不受影响，分别观察之。
五、作业：
l 、 镜检后，说明RNA 和DNA 在细胞内的分布情况。
2、仔细观察两种对照片，说明与正常片有何区别。并加以解释，以此说明Brachet
反应对证明RNA 的存在的可靠性。
实验八Feulgen 反应显示DNA
一、实验目的：
l、掌握显示DNA的主要方法一Feulgen反应。
2、了解石蜡切片的一般过程。
二、实验原理:
DNA经1mol／L HCL水解后，连接嘌呤碱基与脱氧核糖的糖苷键断裂并在脱氧核糖的第一位碳原子上形成游离的醛基，这些醛基就在原位与Schiff试剂特异性反应，生成紫红色的化合物,亚硫酸水可使碱性品红(红色)变为无色品红，从而消除了非特异性染色造成的误差。这样就可以定性，定位甚至定量地测定细胞内DNA的分布和含量。若再用亮绿复染，可使细胞质，核仁染上绿色。
三、实验用品:
(一) 器材：立式染色缸，恒温水浴，载玻片，小镊子，切片机，显微镜等。
(二) 试剂：
l、Camog固定液：无水乙醇60ml，氯仿30m1．冰乙酸10ml混匀。
2、乙醇：配成100％，95％，85％，70％等各级浓度。
3、二甲苯，切片石蜡，树胶。
4、5％三氯乙酸水溶液：5克三氯乙酸溶于100毫升蒸馏水中。
5、1mol／L HCl。
6、Schiff试剂：取l克碱性品红溶于200毫升沸的重蒸水中振荡5分钟，冷至恰为
50℃时过滤，在滤液中加20毫升lmol／l HCl，冷至25℃加1克NaHS03，置
于暗处12—24小时，加2克活性炭振荡1分钟后过滤，在0—4℃暗处密封保
存，配好的试剂应为无色，略有红色则应重配，所用的玻璃器皿应绝对清洁。
7、亚硫酸水：自来水500ml，加入3克亚硫酸氢钠和20ml lmol／L HCl摇匀，瓶
塞要盖紧。此液必须在使用前配制，否则S02逸出即失效。
8、0．5—1％亮绿：亮绿0．5一l克溶于lOOml蒸馏水中。
(三)材料：小鼠肝、肾、小肠或睾丸，洋葱根尖或大蒜根尖。
四、实验内容:
(一)动物细胞石蜡切片Feulgen反应。
1、取材：新鲜材料以生理盐水洗净后切成1—2mm小块。
↓
2、固定：Camog 固定液
↓2—4小时
3、脱水：100％乙酸
↓30分钟一1小时
4、透明：二甲苯I
↓30分钟一1小时
二甲苯Ⅱ
↓30分钟一1小时
5、浸蜡： 2／3体积二甲苯+1／3体积石蜡 ↓ 40分钟
1／2体积二甲苯+1／2体积石蜡 ↓ 40分钟 纯石蜡
↓ 1小时
6、包埋：纸盒包埋材料，修整蜡块，粘于方木上。
7、切片：以石蜡切片机切成7μm 薄片。
8、展片：45℃水浴使材料舒展后贴于玻片上，并于60℃温箱烤片过夜，至此做成 石蜡切片。
9、脱蜡： 二甲苯I
↓ 5—10分钟 二甲苯Ⅱ
↓ 5—10分钟
1／2体积二甲苯+1／2体积无水乙醇 ↓ 3—5分钟
10、复水： 100％乙醇
↓ 2—3分钟 95％乙醇
↓ l 一2分钟
85％乙醇
↓ 1一2分钟 70％乙醇
↓ l 一2分钟
蒸馏水 5％三氯醋酸
↓ 1一2 11、稀酸水解 lmol ／L HCI 90℃15分钟 ↓ 室温1分钟 1mol ／L HCl
↓ 60℃水浴8分钟 lmol ／L HCL
↓ 室温1分钟 蒸馏水 ↓
12、显色： schiff 试剂
↓ 37℃避光30—60分钟 13、分色： 亚硫酸水I
↓ 1.5—2分钟 亚硫酸水Ⅱ ↓ 2分钟 亚硫酸水Ⅲ ↓ 2分钟
流水洗
↓5分钟
蒸馏水
↓片刻
14、复染：l％亮绿
↓数秒
蒸馏水
↓l一2分钟
15、脱水：70％乙醇
↓l一2分钟
85％乙醇
↓1—2分钟
95％乙醇
↓1—2分钟，用吸水纸吸干
100％乙醇I
↓2—3分钟
100％乙醇Ⅱ
↓2—3分钟
16、透明：1／2体积无水乙醇+1／2体积二甲苯
↓2—5分钟
二甲苯I
↓5—10分钟
二甲苯Ⅱ
↓5—10分钟
17、封片：中性树胶封片，并贴标签，注明材料、方法、姓名。
(二)植物细胞Feulgen反应：
1、取材：洋葱根尖(甲醇：冰乙酸=3：1固定)
↓
70％乙醇
对照
蒸馏水↓5
90℃，15分钟
2水解：
↓室温1—2分钟
1mol／L HCl
↓室温1—2分钟
蒸馏水
↓l一2分钟
3、显色：schiff反应
↓30分钟避光
4、分色：亚硫酸水I
↓l一2分钟
亚硫酸水Ⅱ
↓l一2分钟
蒸馏水
↓
5、复染：0.1％亮绿
↓0.5分钟
6、压片：压片
↓
7、观察：观察
五、结果观察：
实验组：细胞核染为紫红色，细胞质和核仁染为绿色。
对照组：细胞核无色，细胞质及核仁绿色。
六、作业：
1、简述石蜡切片的一般过程及各步骤的作用。
2、每人各一份，实验结束的描述图。
实验九固绿染色法鉴定细胞内酸性蛋白与碱性蛋白
细胞化学是通过化学方法在原位上显示并测定组织细胞中各组份的化学组成，以便达到定性和定位的一种应用技术。
一、实验目的：
学会用细胞化学的方法显示细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白及在细胞内的分布。
二、实验原理：
组织经三氨乙酸处理后将核酸(DNA和RNA)抽提样，细胞内剩余的蛋白质为组
蛋白和此外的其它蛋白质——总蛋白。组蛋白为碱性蛋白质，总蛋自由于呈酸性反应称为酸性蛋白质。
蛋白质为两性电解质，在较其等电点为碱性的环境中(PH高于蛋白质的PI)蛋白
质本身带负电荷，在较其等电点为酸性环境中(PH低于蛋白质的PI)蛋白质本身带正
电荷，固绿为酸性染料，其色素离子带负电荷。组蛋白的PI约8．5，总蛋白的PI约4．7—6．75，在PH 2．2的溶液中组蛋白和总蛋白均带正电荷，均可以与色素离子结合而着色，在PH 8.0的溶液中组蛋白仍带有正电荷，仍然可以与色素离子结合着色，而总蛋白此时全部带有负电荷不能着色。
三、实验用品：
(一)器材：显微镜、解剖针、镊子、剪刀、水浴锅、载玻片等。
(二)试剂：
1、5％三氯乙酸水溶液。
2、磷酸缓冲液Mcllvain一氏配方。
I. 0.2mol／L磷酸氢二钠(Na2HPO4·2H20)——每1000ml重蒸水中含35．62g。
Ⅱ. 0.1mol／L柠檬酸(citric acod)——每1000ml重蒸水中含21．01g。
各级缓冲液配法见下表。
3、0.1％固绿(fast green)PH 2．2染液。
临用前取0．2％固绿水溶液加等量PH 2．2缓冲液即可。
4、0.1％固绿PH 8．O染液
临用前取0．2％固绿水溶液加等量PH8．0缓冲液即可。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导目录 一．显微镜的使用 实验一、几种光学显微镜的使用 实验二、参观电子显微镜及生物超薄切片标本制备 二．细胞形态结构 实验三、细胞大小的形态观察——测微尺的使用 实验四、细胞活体染色技术 实验五、植物细胞骨架光学显微观察 实验六、胞间连丝观察 三．细胞化学 实验七、鉴定RNA的细胞化学方法——Branchet反应 实验八、DNA显色的观察——Feulgen反应 实验九、固绿染色法鉴定细胞内酸性蛋白与碱性蛋白 实验十、多糖及过氧化酶的显示 实验十一、核仁组成区的银染显示与观察 四．细胞生理 实验十二、细胞膜的通透性 实验十三、细胞电泳 五．细胞和组织培养技术 实验十四、植物原生质体的分离和融合 实验十五、植物细胞的培养与观察 实验十六、动物细胞融合 实验十七、动物细胞的培养与观察 六．细胞化学成分的分离 实验十八、细胞器的分离、纯化——细胞分级分离 实验十九、荧光的细胞化学测定 实验二十、细胞活力的鉴别 实验一几种光学显微镜的使用
一、实验目的 了解几种光学显微镜的结构、工作原理、主要用途和使用方法；掌握使用普通显微镜提高分辨力的方法。 二、实验原理 (一)基本原理 一般实验室经常使用的光学显微镜都是由物镜、目镜、聚光器和光阑组成，普通显微镜它们的放大原理及光路图如下： AB物体．A1B l第一次成像，A2B2第二次成像，O l目镜．O2物镜， F1为O l的前焦点，F2为O2的前焦点 各种光学显微镜的光学放大原理基本相同，各种特殊用途的光镜不过只是在光源、物镜、聚光器等方面作了改动，或在其它方面增设了某些特殊的设备。 (二)几种光学显微镜 l、普通光学显微镜： 普通光学显微镜也叫复式显微镜，是最常见，最简单的显微镜。它适于观察一般固定的，有色的透明度较高的标本。其最大分辨力一般为0.2微米，从构造上可分光学、机械和电子三大系统。 2、暗视野显微镜： 暗视野显微镜是以丁达尔现象(Tyndall phenomenon)(即光的微粒散射现象)为基础设计的,它使用了特殊的聚光器进行斜射照明,因光源中心束不直入物镜，所以视野黑暗，而被检细胞器因斜射照明发生衍射和反射，所以发亮可见。暗视野显微镜可用增加光照方法增加物体与背景的反差，因而可观察到0．2—0．004微米直径的微小粒子，但它分不清被检物的细微构造，它常用于观察物体的存在与运动。而暗视野显微镜与普通光学显微镜的区别，主要在于聚光器的不同，致使照明方法有别。确切地说，称暗视野显微镜为暗视野照明更为贴切。它是照明光线仅照亮被检样品而不进入物镜。使视野背景暗黑，样品明亮的照明方法。 3、相差显微镜： 相差是指同一光线经过折射率不同的介质其相位发生变化并产生的差异。相位是指在某一时间上，光的波动所达到的位置。
细胞生物学实验
1. 什么是细胞培养？ 细胞生物学实验 指从动物活体体内取出组织，并将其分散为单个细胞（机械或酶消化），在体外模拟体内的生理环境，使其在人工培养条件下保持生长、分裂繁殖、细胞的接触性抑制以及细胞衰老过程等生命现象。 最常见的细胞一般有两种，一种是原代细胞，另一种是传代细胞。 原代细胞是指动物组织经过胰酶或胶原酶等酶类的消化，使其分散，从而获得单个细胞，再使这些单个细胞生长于培养容器中的过程。大多数组织可以制备原代细胞，但制备的方法略有不同，制备的细胞生长快慢及难易程度也不相同。 不同的原代细胞，其形态也不尽相同。一般将10代以内的细胞称之为原代细胞。 传代细胞一般指无限繁殖的细胞系，理论上这类细胞可以无限次的传代。做实验的时候也会经常使用这类细胞，如Hela、293、Vero 等细胞。 2. 细胞的生长周期 游离期：细胞刚接种到新的培养容器中到贴壁前的一段时期，这个时期的长短由细胞类型决定，从几分钟到几个小时不等。 贴壁期：细胞从游离状态变为贴附到培养器皿表面并展现出一定细胞形态的时期。 潜伏期：细胞在完成贴壁后，并不会马上进行增殖，会进行增殖所必须的物质和能量的储备，这个时候称之为潜伏期。
对数生长期：细胞在完成物质和能量储备后，开始大量的增殖的时期。这个时期的细胞活力旺盛，且状态稳定，我们所做的绝大多数实验都是在这个时期开展的。 停止期：随着细胞的生长，细胞密度越来越大，由于营养物质的消耗、细胞间的接触抑制等因素，细胞生长缓慢，甚至停止生长。这个时候，我们就要给细胞进行传代了，使细胞可以继续进行增殖，保持旺盛的活力。 3. 细胞生长所需要营养条件 细胞的培养所需要的营养成份一般来自于基础培养基（比如DMEM培养基）和血清。 基础培养基：主要是提供细胞生长所需要的氨基酸（组成蛋白质的基本单位）、维生素（细胞代谢中辅酶的组成成分）、无机离子（K+，Na+等）、碳水化合物（碳源和能量来源）和一些激素等营养物质。 血清：主要是提供一些基础培养基不能提供的生长因子和低分子的营养物质，此外它还有促进细胞的贴壁、中和有害重金属离子等作用。如果只提供基础培养基而不提供血清，绝大多数细胞是无法生长的。血清对于我们实验的重要性就不言而喻了，那么什么样的血清才算是合格的血清呢？ 合格的血清需要通过各种检测，包括无细菌，无真菌，无支原体检测，无病毒污染。血清一般呈现为淡黄色，透明状液体，由于含有大量的蛋白质等成分，会略有黏稠。以全式金公司的TransSerum EQ Fetal Bovine Serum (FS201-02)为例，它通过了牛腹泻病毒、牛副
生物学实验原理与技术 教学大纲
生物学实验原理与技术教学大纲 10.1教学任务： 本课程由植物生物学、生理学、微生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、生物化学和分子生物学等方面相关的实验理论知识、实验技术和实验方法组成，是一门与实验课相衔接的实验理论讲授课程，各部分内容在实验课开课前统一进行集中讲授，学生课后预习，为学生进行的实验操作奠定了理论基础。 10.2教学要求： 本课程是各门基础实验课程的前导课，涉及各个实验项目的原理与基本技术方法。因此，要求学生在实验前认真听教师讲解相关基础知识，积极思考、认真记录。课后认真复习、认真回答思考题，并参加每次实验前的预习测试。 10.3教学目的： 使实验课程与理论课程合理衔接，加强学生对实验的相关理论知识的理解与掌握，促进学生充分预习和对即将进行实验的基本技术和基本方法全面的理解。为学生进行的实验操作奠定理论基础。 11．学生应掌握的实验技术及实验能力 本课程是一门与实验课相衔接的实验理论讲授课，涉及8门生物学基础实验课程的实验原理、技术和方法。具体内容包括显微镜技术、分离类胡萝卜素和叶绿素、提取叶绿体色素、观察叶绿素的荧光现象、观察光对叶绿素的破坏作用、测定种子发芽率、观察呼吸运动的调节、麻醉家兔、气管插管、制备蛙类坐骨神经腓肠肌标本、证实反射弧的完整性与反射活动的关系、验证心肌有效不应期较长的特征、观察蛙期前收缩与代偿间歇、钝性分离气管、无菌操作技术、微生物
简单染色方法、血球计数板的使用、灭菌锅的使用方法、微生物分离纯化技术常规微生物涂片观察技术微生物培养技术、菌种保藏技术、无菌操作技术、微生物简单染色方法、血球计数板的使用、灭菌锅的使用方法、微生物分离纯化技术、常规微生物涂片观察技术、微生物培养技术、菌种保藏技术、显微镜技术、观察胀泡的形成、鉴别纺锤体、鉴别姐妹染色单体、植物染色体制片技术、染色体臂形成、观察细胞内多糖的分布、观察细胞内DNA的分布、原代细胞培养、传代细胞培养、细胞的消化分散、观察细胞融合的现象、詹纳斯绿染色、PEG诱导鸡静脉血的化学融合、植物组织培养技术、制作石蜡切片及HE染色、核酸的乙醇沉淀、测定RNA含量、测定核酸含量、定磷法测定核酸的含量、地衣酚法测定RNA含量、预处理组织、匀浆组织、提取核酸、核酸核蛋白（RNP）苯酚分离、剥离凝胶板、自溶处理、超声破碎、制冰盐浴、目测酶活力、免疫小鼠、颈部皮下注射抗原、腹腔注射抗原、统计处理数据、梯度稀释血清、离心分离血清、摘眼球取血、测抗体效价、体外重组DNA、连接DNA片段、凝胶回收DNA、CaCl2法制备感受态、转化外源DNA、PCR扩增、DNA琼脂糖凝胶电泳、碱裂解法提取质粒、蓝白斑筛选、限制性内切酶使用等。 本课程还加入了安全环保及习惯教育内容。主要内容包括火灾预防与逃生常识，触电防护知识，烧烫伤处理方法，实验室有毒废弃物处理常识，实验动物尸体处理常识，实验习惯教育及实验室环保教育等。 12．开设实验项目 开设实验项目一览表
细胞生物学实验指导(植物版)
细胞生物学实验 实验一不同显微镜的使用及细胞一般形态结构的观测[实验目的] 通过本实验，使学生巩固普通光学显微镜的使用，学习相差显微镜、暗视野显微镜和荧光显微镜的使用方法，学习显微测量及显微摄影的操作方法，增强对细胞的形态和真实大小的感性认识。 通过本实验操作，要求学生掌握细胞形态结构的基本观测方法与技术，为进一步的细胞生物学研究打好基础。 [实验原理] 应用显微镜的成像原理(详见翟中和等主编《细胞生物学》，第三章第一节)，同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺，两尺配合使用，进行测量和运算，观察细胞形态，得出细胞的大小。 该实验完成需时6学时。 [实验材料、试剂和仪器] 一、仪器 普通光学显微镜、相差显微镜、暗视野显微镜、荧光显微镜、显微拍摄系统、37℃温箱、镜台测微尺、目镜测微尺等。 二、材料 洋葱根尖切片标本，念珠藻永久装片，兔肝细胞标本，夹竹桃花丝毛细胞，人口腔上皮细胞等。 三、试剂 生理盐水，10μg/mL罗丹明123染液（溶于甲醇，避光于4℃保存） [实验步骤] 一、暗视野显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞 1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水。用镊子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生理盐水中，盖上盖玻片，略微压片，用滤纸条吸去盖玻片四周多余的水分。 2、将上述装片置于显微镜载物台上，在10×物镜下找到夹竹桃花丝毛细胞清晰的图像。 3、换上暗视野聚光器，调节至最佳位置，通过聚光器上的调中螺旋调节聚光器的中心位置，得到最好的暗视野图像效果。 4、观察夹竹桃花丝毛细胞内部的显微结构和细胞质环流现象，并拍照。 5、换用高倍物镜观察时，要换用与高倍镜相匹配的暗视野聚光器，重复以上调节步骤。 二、相差显微镜观察夹竹桃花丝毛细胞 1、取一张清洁的载玻片，滴上一滴生理盐水。用镊子轻轻夹下一根夹竹桃花丝，置生
细胞生物学常用研究方法
Southern杂交: 是体外分析特异DNA序列的方法，操作时先用限制性内切酶将核DNA或线粒体DNA切成DNA片段，经凝胶电泳分离后，转移到醋酸纤维薄膜上，再用探针杂交，通过放射自显影，即可辨认出与探针互补的特殊核苷序列。 将RNA转移到薄膜上，用探针杂交，则称为Northern杂交。 RNAi技术: 是指在进化过程中高度保守的、由双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）诱发的、同源mRNA高效特异性降解的现象。由于使用RNAi技术可以特异性剔除或关闭特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的基因治疗领域。可以利用siRNA或siRNA表达载体快速、经济、简便的以序列特异方式剔除目的基因表达，所以现在已经成为探索基因功能的重要研究手段。 Southern杂交一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量]。 扫描电镜技术：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与样品表面结构有关，次级电子由探测器收集，信号经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。 细胞显微分光光度计：用来描述薄膜、涂层厚度超过1微米的物件的光学性能的显微技术。 免疫荧光技术：将免疫学方法(抗原抗体特异结合)与荧光标记技术结合起来研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。由于荧光素所发的荧光可在荧光显微镜下检出，从而可对抗原进行细胞定位。 电镜超薄切片技术：超薄切片是为电镜观察提供极薄的切片样品的专门技术。用当代较好的超薄切片机，大多数生物材料，如果固定、包埋处理得合适，可以切成50-100微米的超薄切片。 Northern印迹杂交（Northern blot）。这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。 放射自显影技术：放射自显影技术是利用放射性同位素的电离辐射对乳胶（含AgBr或AgCl）的感光作用，对细胞内生物大分子进行定性、定位与半定量研究的一种细胞化学技术。放射自显影技术（radioautography；autoradiography）用于研究标记化合物在机体、组织和细胞中的分布、定位、排出以及合成、更新、作用机理、作用部位等等。其原理是将放射性同位素（如14C和3H）标记的化合物导入生物体内，经过一段时间后，将标本制成切片或涂片，涂上卤化银乳胶，经一定时间的放射性曝光，组织中的放射性即可使乳胶感光。 核磁共振技术：可以直接研究溶液和活细胞中相对分子质量较小(20，000 道尔顿以下)的蛋白质、核酸以及其它分子的结构，而不损伤细胞。 DNA序列分析：在获得一个基因序列后，需要对其进行生物信息学分析，从中尽量发掘信
(完整版)细胞生物学实验测试题
细胞生物学实验测试题 1、试述荧光显微镜的原理和用途。（并操作） 原理：荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。 （滤光镜片：获得所需波长的激发光；光源：高压汞灯） 用途：荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光； 另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研 究的工具之一。 2、试述酸性磷酸酶显示法的原理及主要步骤。 原理：酸性磷酸酶（ACP）是溶酶体的标志酶，通常酸性磷酸酶在pH 为5左右时发挥作用能水解磷酸酯而释放出磷酸基，PO43-与底物中硝酸 铅反应生成磷酸铅沉淀物。由于这些沉淀物是无色的，需再与黄色的硫化 铵反应，生成棕黄色到棕黑色的硫化铅沉淀而被显示出来。其反应过程如 下： β-甘油磷酸钠+酸性磷酸酶→甘油+PO43- PO43-+Pb(NO3)2 →Pb3(PO4)2↓ Pb3(PO4)2+(NH4)2S →PbS↓(棕黑色) 主要步骤： 1、前处理：获取小白鼠或大白兔腹腔液（猪肝） 2、制片： （1）、将腹腔液（肝细胞悬液）滴一滴于冰冻的干净载玻片上，用牙签涂开，自然干燥。 （2）、放入10%中性福尔马林固定液中固定30min。 （3）、蒸馏水中漂洗,3-5次。（洗去固定液） （4）、磷酸酶作用液，37°C，30Min。 （5）、蒸馏水中漂洗3次，5min一次。（洗去游离铅离子） （6）、1%硫化铵处理（3-5min）; （7）、吉姆沙染液复染15min;（使细胞核、轮廓显示出来） （8）、制片观察。 结果：阳性细胞内有大小不等的棕色或棕黑色的颗粒即为酸性磷酸酶。 对照实验：标本放入作用液前先用高温（50℃）处理 30min，使酶失去活 性，做好标记，其他步骤相同。 3、试述DNA的Feulgen染色法的原理及主要步骤。 原理：DNA经稀盐酸（1mol/L HCL溶液）处理后，可使嘌呤碱与脱氧
细胞生物学实验指导(精)
细胞生物学实验指导 细胞生物学的发展总是依赖于技术和实验手段的进步,所以学习细胞生物学的技术和方法至关重要。 实验一普通显微镜及其使用（装片观察） 一、目的要求： 1、掌握显微镜的构造、油浸系的原理、使用方法、保护要点。 2、参观了解其他各类显微镜。 二、材料：普通光学显微镜及其他显微镜、细菌标本片、香柏油、二甲苯、擦镜纸。 三、方法和步骤： 1、介绍普通光学显微镜的构造 机械部分：镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、调焦螺旋。 光学部分：接目镜、物镜、反光镜、聚光器。 2、油镜的原理及使用方法 原理：油镜头的晶片细小，进入镜中的光线亦少，光线经聚光器，通过载玻片进油镜时，由于空气介质和玻璃介质的折射率不一样，光线因折射而损失，使视野更暗。在载玻片和油镜之间加上和玻璃折光系数相同的香柏油，光线直接进入镜头，不发生折射，视野明亮，便于观察。 3、如何维护显微镜：机械部分的维护，光学部分的维护。 4、注意事项： （1）观察油镜载片时，先在载片上有菌影的地方滴1-2滴香柏油，然后放载物台中央，眼侧面看，慢慢降低油镜浸入香柏油中，镜头几乎接触标本。再用左眼在接目镜观察，同时慢慢旋动粗螺旋提起镜筒至能模糊看到物象时，再转动微调螺旋，直至看清晰为止。注意镜头离开油，就不能看清，重新按刚才的步骤进行。 （2）油镜使用过后，立即用擦镜纸擦拭镜头，如油渍已干，则可用香柏油粘二甲苯擦拭镜
头，再用干净擦镜纸擦去二甲苯。 5、观察几种细菌标本片。 6、示教看相差显微镜和荧光显微镜。 四、作业及思考题： 1、油镜的原理是什么？ 2、光线强弱如何调节？与哪些部件有关？ 实验二、细胞膜的渗透性 实验目的 了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。 实验原理 将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血，由于溶质透入速度互不相同，因此溶血时间也不相同。 实验用品 一、器材 50ml烧杯, 试管（1～10cm）, 10ml移液管, 试管架。 二、材料 羊血。 三、试剂0.17mol/L氯化钠，0.17mol/L氯化胺，0.17mol/L醋酸胺，0.17mol/L硝酸钠，0.12mol/草酸胺，0.12mol/硫酸钠，0.32mol/葡萄糖，0.32mol/甘油，0.32mol/乙醇，0.32mol/丙酮。 实验方法 一、羊血细胞悬液 取50ml小烧杯一个，加1份羊血和10份0.17mol/L氯化钠，形成一种不透 明的红色液体，此即稀释的羊血。
细胞生物学实验
实验室规则和要求 一般规定 1.上课第一天请先熟悉环境，牢记“安全”是进行任何实验最重要的事项。 2.在实验室内请穿著实验衣（最好长及膝盖下），避免穿著凉鞋、拖鞋（脚 趾不要裸露）。留有长发者，需以橡皮圈束于后，以防止引火危险或污染实验。 3.在实验室内禁止吸烟、吃东西、饮食、化妆、嚼口香糖、嬉戏奔跑，食 物饮料勿存放于实验室的冰箱中，实验桌上勿堆放书包、书籍、衣服外 套及杂物等。 4.所有实验仪器、耗材、药品等均属实验室所有，不得携出实验室外。每 组分配之仪器、耗材请在课程开始前确定清点与保管，课程结束后如数 清点缴回。公用仪器请善加爱惜使用。实验前后，请把工作区域清理擦 拭，并随时保持环境清洁。 5.实验前详阅实验内容，了解实验细节的原理及操作，注意上课所告知的 注意事项。实验进行中有任何状况或疑问，随时发问，切勿私自变更实 验程序。打翻任何药品试剂及器皿时，请随即清理。实验后，适切记下 自己的结果，严禁抄袭，确实关闭不用之电源、水、酒精灯及瓦斯等。 6.身体不适、睡眠不足、精神不济或注意力无法集中，请立即停止实验。 实验时间若延长，请注意时间的管制及自身的安全，不可自行逗留实验 室。 7.实验完毕，请清理实验室、倒垃圾、灭菌、关闭灯光及冷气，离开实验 室前记得洗手。 8.任何意外事件应立即报告教师或实验室管理人员，并应熟知相关之应变 措施。
药品 1.使用任何药品，请先看清楚标示说明、注意事项，翻阅物质安全资料， 查明是否对人体造成伤害，使用完毕请放回原位。 2.新配制的试剂请清楚注明内容物、浓度、注意事项及配制日期，为避免 污染，勿将未用完的药剂倒回容器内。 3.挥发性、腐蚀性、有毒溶剂（如甲醇、丙酮、醋酸、氯仿、盐酸、硫酸、 -巯基乙醇、甲醛、酚等）要在排烟柜中戴手套量取配制，取用完应随即盖好盖子，若不小心打翻试剂，马上处理。 4.有毒、致癌药剂例如丙稀酰胺（神经毒）、溴化乙啶（突变剂）、SDS（粉 尘）请戴手套及口罩取用，并勿到处污染，脱下手套后，养成洗手的好 习惯。 5.使用后的实验试剂和材料，应放在专用的收集桶内。固体培养基、琼脂 糖或有毒物品不得倒入水槽或下水道中。 6.使用刻度吸管取物时，切勿用嘴吸取，请用自动吸管或吸耳球。 仪器 1.使用仪器前先了解其性能、配备及正确操作方法，零件及附件严禁拆卸， 勿私自调整，并注意插座电压（110V或220V）之类别。 2.使用离心机时，离心管要两两对称、重量平衡，离心机未停下不得打开 盖子。冷冻离心机于开机状态时，务必盖紧盖子，以保持离心槽之低温并避免结霜。 3.电源供应器有高电压，切勿触摸电极或电泳槽内溶液，手湿切勿开启电 源。
细胞生物学发展简史
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细胞生物学发展简史 一细胞的发现和细胞学说的建立 1665年，英国学者Robert Hooke用自制的显微镜观察栎树软木塞的薄切片，发现了其中有许多蜂窝状的小室，并将这些小室命名为cell。实际上当时看到的是植物细胞的细胞壁。此后，生物学家用cell一词描述生物体的基本结构单位，中文翻译为细胞。Hooke对有关细胞的首次描述见于1665年他的《显微图谱》中，因此人们认为细胞的发现是在1665年。 真正观察活细胞的是荷兰科学家Antony von Leeuwenhoek，他用设计较好的显微镜观察池塘水中的原生动物、蛙肠道内的原生动物、人类和哺乳动物的精子，并于1674年在观察鱼的红细胞时描述了细胞核的结构。 由以上可见，细胞生物学的基础建立于17世纪，并且Hooke和Leeuwenhoek两位科学家为此做出了重要贡献。 在Hooke发现细胞后的近170年中，人们用光学显微镜相继发现了一些不同类型的细胞，但对细胞的认识基本上没什么新的进展。直到19世纪30年代，显微镜制造技术有了明显的改进，分辨率提高到1μm以内；同时还由于切片机的制造成功，从而对细胞的观察有了许多新的进展，细胞核、核仁、细胞的原生质等被揭示，人们才真正认识到细胞的生物学意义。 1838~1839年，德国植物学家Scheleiden（1838年）和动物学家Schwann （1839年）总结前人的工作，综合了植物和动物组织中细胞的结构，提出了“细胞学说（cell theory）”，指出“一切生物，从单细胞生物到高等动、植物都是由细胞组成的；细胞是生物体结构和功能的基本单位”。后来德国科学家
细胞生物学实验指导书09年
实验一普通光学显微镜的构造和使用 一、目的要求 1了解显微镜的基本构造和使用方法 2 掌握油镜的原理和使用方法 二、显微镜的基本结构及油镜的工作原理 1．显微镜的基本构造 光学部分：接目镜、接物镜、照明装置（聚光镜、虹彩光圈、反光镜等）。 机械部分：镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。 2．显微镜的放大倍数和分辨率 放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 显微镜的分辨率：表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力3．油镜的使用原理 当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 三、器材 1．永久切片 2. 溶液或试剂：香柏油、二甲苯。 3. 仪器或其他用具：显微镜、擦镜纸等。 四、操作步骤 1．观察前的准备 （1）显微镜的安置，检查零件是否齐全，镜头是否清洁。 （2）调节光源 2．显微镜观察
（1）低倍镜观察 （2）高倍镜观察 （3）油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。3．显微镜用毕后的处理 观察完毕，上升镜筒，用擦镜纸和二甲苯清洗镜头，后将镜体全部复原。 五、思考题 1．用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间滴加什么油？起什么作用？ 2．为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作？ 实验二胞间连丝的观察 一、实验目的 观察植物细胞的胞间连丝，加深对胞间连丝功能的认识． 二、实验原理 植物细胞的细胞壁上有许多原生质的细丝，称胞间连丝。相邻细胞的胞间连丝相互联接，在细胞间的物质运输与信息传递中起桥粱作用，并使细胞的各种生理活动协调一致，使植物体成为统一的有机体。用合适的植物细胞为材料，经简单处理，即能方便地看到胞间连丝。 三、实验材料 红辣椒表皮细胞临时装片、柿胚乳细胞间胞间连丝切片 四、实验步骤
(完整版)16考研厦大生科院初试第一,分享备考经验+复试环节
16考研厦大生科院初试第一，分享备考经验+复试环节 本人是华侨大学的，2016届考厦大生科院，是聚英厦大考研网的学员，今年以初试第一，复试第七名的成绩考进厦门大学生命科学院，广大研友的要求分享一下我的备考经验：包括初试经验分享（已更新），考研时间规划和所用书籍，包括初复试环节和复习注意事项，十分详尽，希望同学们做好笔记~ 环节一、初试 1.考研初试分数分配 初试科目： 英语：100 政治100 832生物化学：150 620细胞生物学150 厦大生科院近几年分数线： 2014年：322分2015年：310分2016年：310分 近几年生命科学院专业课压分比较严重，所以与厦大理科基本保持一致，而厦大理科线每年浮动小，如果没有重大改革，分数线不会有较大变化。总体来说，厦大生科院较之其他学院，虽然分数线比较低，但试卷题目难度大，而且招生特点是宁缺毋滥，近两年都收不满，都需要调剂，调剂的原则上要求考生是985/211的院校出身。 2.620细胞生物学的初试情况 2016年620试卷分数分配 选择题15题，30分；名词解释5题，30分；问答题2题，30分；英译汉3题，30分；实验题3题，30分。 其中选择题、名词解释、问答题最基础，但是以16年情况来看，出的偏题怪题比较多，这类题型主要来自中科院生物学的往年考研题，大家可以关注一下。而英译汉的题型要求熟记基本名词解释的英文，重点掌握关于癌症和癌细胞、生态系统。实验题基本上是厦大生命科学院常用的一些实验技术，重点掌握蛋白质与蛋白质之间的相互作用。另外2015年及之前每年都有考到RNA干扰，但2016年没考，该技术很可能会被基因编辑CRISPR所取代，16年复试有考，要重视这个动向。 关于初试的目标分数，建议至少要考到320分，因为如果初试分数太低，复试很容易被淘汰。由于厦大生科院专业课压分比较严重，主观题给的分数低，政治和英语的平均分最好都要过60,620分子生物细胞学和832生物化学平均要达到100分，这样总分加起来：60+60+100+100=320分，初试基本上没有问题。 在这里推荐一下聚英厦大的英语政治的暑期强化班和最后冲刺班，会邀请北京的大牛老师像陈正康、李海洋来讲课，一方面你可以把握一下考试重点在哪里，另一方面尤其是英语可以学到很多非常实用的应试技巧。专业课的话，推荐聚英官网的《620分子细胞生物学复习全书》和《620分子细胞生物学实验用书》，可以帮你梳理知识点，把握核心考点。 2017厦大生科院考研资料
细胞生物学实验指导
实验一显微镜的结构及使用 [实验目的] （一）熟悉显微镜的结构及各部件性能。 （二）掌握显微镜的使用方法。 （三）了解显微镜的维护方法。 [实验原理] 虽然显微镜的目镜和物镜的结构很复杂，但它的作用相当于一个凸透镜，其成像原理和光路图如图1所示，被检物体AB放在物镜（O1）下方的1—2倍焦距之间，则在物镜（O1）后形成一个倒立的放大实像A1B1，这个实像正好位于目镜（O2）的下焦点之内，通过目镜后形成一个放大的虚像A2B2，这个虚像通过调焦装置使其落在眼睛的明视距离处，即25cm,使所看到的物体最清晰，也就是说虚像A2B2是在眼球晶状体的两倍焦距之外，通过眼球后在视网膜形成一个倒立的A2B2缩小像A3B3。 [实验器材]擦镜纸字母装片羊毛交叉擦片普通光学显微镜二甲苯香柏油 三内容与方法： 普通光学显微镜(Microscope)的外形和结构因类型不同略有差异，但基本结构和功能是相似的。（图2） （一）微镜的基本结构及功能：光学显微镜由机械部分、照明部分和光学部分构成。1.机械部分： （1）镜座：位于底部的金属座。一般为马蹄形，用以支持和稳定整个镜体。 （2）镜柱：镜座与镜臂相连的短柱。 （3）镜臂：镜柱上方弯曲部分，是取用显微镜时握拿的部位。 （4）镜筒：在镜臂的上方倾斜的金属园筒，上端装有目镜、下端转折处装有棱镜，使光线转折450。其上有一固定螺钉将镜筒连接于镜臂上方。 （5）调节器：在镜柱两侧有大小两个螺旋，大螺旋为粗调节器，转动时能使载物台快速升降。调节范围较大，适于低倍镜调焦用。小螺旋为细调节器，转动是载物台仅缓慢升降，调节范围较小，适于调节物象的清晰度。此外，在右侧粗调节器内侧有一窄环，称粗调松紧调节轮，用以调节粗调节器的松紧度。向外转时偏紧，向内转时偏松。左侧粗调节器内侧有一粗调限位调节环凸柄，向上推紧时，镜台上的最高点被固定（这两个环一般不需调节）。（6）旋转盘：又称物镜转换器，安装在镜筒下端，为一可旋转的圆盘，上有4个圆孔，
生物学一级学科(专业)攻读硕士学位研究生培养方案
生物学一级学科（专业）攻读硕士学位研究生培养方案 （专业代码：） 一、培养目标 本学科培养的研究生，要热爱祖国，崇尚科学，诚实守信；应能较好地掌握辨证唯物主义的原理与方法，具有良好的科学素养和合作精神，学风严谨，谦虚、进取、敬业，有较强的事业心和社会责任感；具有健康的身体和心理素质。 本学科研究生应掌握扎实宽广的生物学基础理论和系统的各自相关的专业知识与实验科研技能，掌握一门外语（一般为英语）；具有从事科学研究工作或独立担负专门技术工作的能力。毕业后可从事生命学科及相关学科的科研、教学、环境保护及科技管理等方面的工作。 二、二级学科各专业及研究方向 1. 植物学 2. 动物学 3. 微生物学 4. 遗传学 5. 发育生物学 6. 细胞生物学 7. 生物化学与分子生物学 8. 海洋生物学 9. 生物物理学
三、学制与学习年限 全日制硕士研究生的学制为3年，在校学习期限为2-4年。3年制硕士研究生可申请提前毕业，最长提前时间不能超过一年。成绩优秀，提前完成论文、且在SCI刊物上发表与毕业论文有关的研究论文者，硕士论文经学位委员会指定的3人以上指导小组预答辩，推荐进行硕士论文答辩方可向学校申请。 四、培养方式 1．根据宽口径、厚基础的原则，本学科按生物学一级学科招收硕士研究生，按一级学科开设专业基础课程，在学生进入到实验室后，由导师或导师组对学生进行专业知识和专业技能的培训，完成相应的专业学习。 2．本学科鼓励开展硕士研究生的“三种经历”工作，即海外学习经历、第二校园经历和社会实践经历，在海外学习经历、第二校园经历中实行双导师合作培养。 五、应修总学分数 硕士生的课程学习一般为一年，应修总学分不少于30学分，其中必修课不少于22学分（含前沿讲座与社会实践），选修课不少于8学分；具体课程见课程设置一览表。 六、课程的类别及设置 硕士研究生课程分为必修课与选修课两大类，具体课程见课程设置一览表。 1、必修课22学分
细胞生物学实验
细胞培养基本理论 一细胞培养概述 细胞培养（cell culture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。 群体培养（mass culture）将大量细胞置于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细胞或单细胞悬液。 克隆培养（clone culture）即将少数的细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆。 组织培养（tissue culture）指把活体的组织取出，分成小块，直接置于培养瓶底或通过胶原纤维血浆支持物的培养瓶底来进行培养。 特点：1.，组织不失散，细胞保持原有的组织关系。2，形成生长(cut growth)或形成由扁薄细胞构成的单层细胞培养物。3，在体外生长时，细胞间呈相互依存、互相影响的关系。 器官培养（organ culture）将活体中器官或器官一部分取出，在体外生长、生存，并使其保持器官原有的结构和功能特征的培养。 特点：1，培养的器官在合适的条件下能生长和分化，存活数周或1 年。2，观察受限，只能用组织切片的方法观察或用透射电镜、扫描电镜观察。 细胞培养优点：.1．活细胞：同时、大量、均一性、重复性；2．可控制：各种物理、化学、生物等因素可调控；3．研究方法多样：倒置、荧光、电子、激光共焦显微镜、流式细胞术、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记；4．应用广：不同物种、年龄、组织，正常或异常缺点：人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同；当细胞被置于体外培养后， 生活在缺乏动态平衡的环境中，时间久了，必然发生变化。 三细胞的形态和类型由不同生长方式造成的差异 呈悬浮生长时，因生长在液体环境中，胞内渗透压高于周围液体环境，因此胞体基本呈圆形。呈贴附于支持物上生长的细胞，开始为圆形，很快过渡成扁平形，并逐渐恢复至原先的细胞形态. 细胞来源：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型 细胞按生长方式：贴壁型细胞（Monolayer cells）；悬浮型细胞（Suspension cells）绝大多数有机体细胞属贴壁型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。 按细胞形态(贴壁细胞）：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型 贴壁型生长细胞或锚着依存性细胞 处于体外培养状态下的贴附生长型细胞在形态上表现单一而失去了在体内原有的某些特征。形态各异反映其胚层起源。如来源于内外胚层的细胞多呈上皮型；来自中胚层的则易呈成纤维细胞型。分为成纤维型细胞；皮型细胞；游走型细胞；多形型细胞 贴壁型细胞形态比较 成纤维型细胞：梭形或不规则三角形；中央有卵圆形核；胞质向外伸出长短不同的突起；中胚层间质起源 上皮型细胞：扁平不规则多角形；细胞中央有圆形核；紧密相连单层膜样生长；内、外胚层细胞如皮肤、表皮衍生物、消化管上皮等 游走型细胞：散在生长，一般不连成片；细胞质经常伸出伪足或突起；活跃的游走或变形运动；羊水细胞培养的早期 多形细胞型：难以确定规律和稳定的形态；如神经组织的细胞等
细胞生物学实验员招聘实验考试
细胞生物学实验 1 考核方式 平时实验记录，实验报告，实验操作，考试笔试 2 考核内容 仪器设备使用；所开设实验：实验原理、步骤作用、试剂作用、结果分析、注意事项、实验异常原因分析；其它：实验安全，试剂使用注意事项，试剂配制，试剂标签包括的内容，等等。 2.1仪器设备使用 本课程重点掌握：普通双目显微镜，离心机，微量取液器，组织匀浆机 一般通用仪器：电子天平，恒温水浴，恒温培养厢，低温冰箱，烧杯，量筒，容量瓶，离心管，血球计数板。 生物技术专业加：系统显微镜及其自动曝光系统 2.2 开设实验 细胞化学：细胞总体蛋白和碱性蛋白的定位 理解运用固绿染色原理（例：pH5.5固绿染色的是哪些蛋白质？） 蛋白质两性电解质性质 固绿染色特点 细胞内蛋白质酸碱性 10%福尔马林作用？ 5%三氯乙酸作用？ 染色异常的原因分析 实验成功需要注意事项？ 细胞化学：孚尔根（Feulgen）DNA染色法 理解运用实验原理。 固定液有什么作用？ 热盐酸处理的作用？ Schiff试剂的有效成分是什么？ 漂洗液的有效成分是什么，有什么作用？ 显示DNA时，根材料的哪部分最好？ 显微镜下怎样分辨细胞的间、前、中、后、末五个时期？ 一个良好的压片至少具备哪些特征？（列举3个） 实验成功的关键是什么？ 细胞生理：细胞膜的通透性 理解运用实验原理。 能够从实验数据推理，得出结论。（例：从下表中数据和描述，你能得出什么结论？）从EXCEL制图。 三线表制作。 图表格式的规范。（例：指出下表格式的欠规范之处）。 细胞分离技术：叶绿体的分离及荧光观察 掌握细胞分离的一般原理。取样原则？保护方法？细胞裂解方法及选择？ 差速离心。
细胞生物学实验实验报告
细胞生物学实验 班级：生科142 姓名：旷江 学号：10143131 组号： 2 小组成员：旷江、韦立尧、莫霞指导老师：范立强、李鹏飞 华东理工大学 应用生物学系
摘要 本次细胞生物学实验通过细胞形态与结构的观察技术，细胞化学，细胞生理，细胞培养与分析，细胞周期分析，细胞成分分离与分析，细胞增殖与染色等技术对动植物细胞进行细胞形态结构的观察、细胞生理过程的研究、细胞培养与细胞分析、细胞冻存与复苏等，以此来研究动植物细胞的结构、功能和各种生命规律。 关键词：细胞增殖、细胞染色、冻存复苏、生理过程、形态结构
Abstract The cell biology experiment was carried out by cell morphology and structure observation technique, cytochemistry, cell physiology, cell culture and analysis, cell cycle analysis, cell fractionation and analysis, cell proliferation and staining. Observation of cell physiological processes, cell culture and cell analysis, cell cryopreservation and resuscitation, in order to study the structure of animals and plants, functions and a variety of laws of life. Key words: cell proliferation, cell staining, cryopreservation, physiological processes, morphological structur
(完整版)细胞生物学学习心得
细胞生物学学习体会 通过网络课程学习,有幸聆听到王金发教授对《细胞生物学》课程的讲授，使我不仅学到了细胞生物学专业新的知识与研究技术、方法,而且在教学方面也受益非浅。下面就我的学习谈一些体会。 一、全面学习了细胞生物学的专业知识 《细胞生物学》是一门包容量大、发展迅速的学科。内容涉及生物膜的结构与功能；内膜系统区室化形成及各种细胞器的结构与功能；细胞信号转导；细胞核、染色体以及基因表达；细胞骨架体系；细胞增殖及其调控；细胞分化、癌变及其调控；细胞的衰老与程序性死亡；细胞的起源与进化；细胞工程技术等多个方面。 (一)对细胞生物学的专业知识有了更深的认识。 1、细胞通讯方面 记得第一次听王老师的课就是讲授细胞的通讯，在多细胞生物中，细胞不是孤立存在的，而是生活在细胞社会中，它们必须协调一致，才能维持机体的正常生理机能，它们的协调是通过细胞通讯来完成的。细胞通讯是通过信号分子与受体的识别，从而在靶细胞内产生一系列反应的过程。信号分子有第一信使和第二信使之分，第二信使位于细胞内，由第一信使与受体识别后最先在胞内产生的，它主要与细胞内受体作用，所以受体也可分为表面受体和胞内受体。信号分子与受体的识别作用具有特异性。细胞信号传递所发生的反应有快速反应和慢速反应。快速反应是信号分子与受体作用后直接引起细胞内的一系列代谢反应；慢速反应则需要引起基因表达，再表现出各种代谢反应。细胞通讯过程是个复杂的过程，一个细胞的周围有上百种不同的信号分子，细胞要对这些信号分子进行分析，做出正确的反应。信号转换的研究在近年很热门，但进展缓慢，主要是因为信号转换的复杂性，不同信号的组合产生的效应是不一样的。 2、蛋白质的合成和分选机理 蛋白质的合成是在核糖体上，有两种合成体系，一种是在细胞质中游离的核糖体上，另一种是在膜旁核糖体上合成，它们合成的蛋白质将分布到不同的部
细胞生物学实验教案大全
细胞生物学实验教案 【经典学习资料，收藏必备】
实验一、细胞形态结构与几种细胞器的观察 【实验目的】 在普通光学显微镜下识别细胞和细胞器的形态结构，掌握生物绘图的方法。 【实验原理】 细胞在形态上是多种多样的，有球形、椭圆形、扁平形、立方形、梭形、星形等。虽然细胞的形状各异，但是它们却有共同的基本结构特点，都由细胞膜（动物）、细胞壁（植物）、细胞质和细胞核组成。细胞中的各种细胞器，如线粒体、高尔基体、中心体、核仁、染色体等，一般经过一定固定染色处理后，大多数在光学显微镜下是可以看见的（图）。细胞器的形态结构在普通光学显微镜下与电子显微镜下所看到的结构有很大的差别。 （自拍图） （a）（b） （c）（d） 图 1 细胞形态结构 a. 柿胚乳细胞示胞间连丝； b. 马蛔虫受精卵分裂中期示中心粒； c. 兔的神经细胞中高尔基体； d.小鼠肝细胞线粒体 【实验仪器、材料和试剂】 1. 仪器：复式显微镜、擦镜纸 2．材料：洋葱根尖切片、小白鼠肝切片、兔神经节切片、马蛔虫受精卵切片3．香柏油或石蜡油、二甲苯 【方法与步骤】
一、洋葱根尖切片细胞的观察 先用低倍镜观察根尖的纵切面，注意分生区、伸长区、成熟区细胞的异同，然后再仔细观察细胞的形态结构，特别注意细胞的形状、大小，以及细胞壁、细胞核、核仁、细胞质、液泡的形态结构。 二、兔神经节细胞切片高尔基体的观察 先在低倍镜下找到兔神经节细胞，然后转用高倍镜观察，可看到细胞内淡黄色的背景上有黄褐色的细胞核，核的周围分布着许多深褐色的（硝酸银镀染）高尔基体，呈弯曲的线状，颗粒状，少量分散在细胞质。 三、小白鼠肝细胞切片线粒体的观察 先用低倍镜后用高倍镜观察，可见到许多肝小叶，每小叶有许多紧密排列成索状的多角形的肝细胞，细胞中央有大而圆的细胞核。这时，转用油镜观察，可见到细胞质内分布着许多被苏木精染成深紫色的线粒体，呈颗粒状和线状。 四、马蛔虫受精卵切片中心体的观察 1．取马蛔虫受精卵切片，在显微镜下找到充满子宫腔的受精卵，每个马蛔虫受精卵外围有一层较厚的卵膜，膜内有宽大的围卵腔，各围卵腔内有处在不同分裂期的卵细胞。找到分裂中期的细胞，在细胞中央被染成蓝色条状或棒状的结构，这就是染色体。在染色体两侧可见各有一个较小的，亦被染成蓝色的小粒，称中心粒。在中心粒的周围可见呈放射状的星丝。 实验一、细胞的显微测量 【实验目的】 掌握显微测微计的基本原理及使用方法。 【实验原理】 细胞长度、面积、体积的测量是研究正常的或病理组织细胞的基本方法之一。在显微镜下用来测量细胞长度的工具叫显微测量计，由目镜测微尺（ocular micrometer）和镜台测微尺（stage micrometer）组成，两尺要配合使用。目镜测微尺是放在目镜内的一直径为2cm圆形玻片上，里面有100等分格的刻度尺。每一小格表示的实际长度随不同的显微镜、不同放大倍数的物镜而不同。镜台测微尺是一块特制的载玻片，在它的中央由一片圆形盖片封固着一具有精细刻度的标尺，标尺全长为lmm，分为100等份的小格，每小格的长度为0.01 mm（10μm），标尺的外围有一小黑环，便于找到标尺的位置。显微测量时，先用镜台测微尺标定目镜测微尺每小格所表示的实际长度。在测量细胞时，移去镜台测微尺，换上被测标本，用目镜测微尺即可测得观察标本的实际长度。 【实验仪器、材料和试剂】 （一）仪器：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、解剖剪、解剖镊、注射器、载玻片、盖玻片、试管、无菌采血针 （二）材料：血涂片 （三）试剂：生理盐水、瑞氏（Wright）染色液 【方法与步骤】