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分子植物育种,2004年,第2卷,第4期,第574-580页

Molecular Plant Breeding,2004,Vol.2,No.4,574-580

实验方法

EXPERIMENTAL TECHNIQUE

TILLING技术的原理与方法述评

吴海滨1,2朱汝财2赵德刚1*

1贵州省农业生物工程重点实验室,贵州大学,贵阳,550025

2海南省农作物分子育种重点实验室,三亚,572025

*通讯作者,degangzhao@https://www.wendangku.net/doc/111603976.html,

摘要

TILLING,即Targeting Induced Local Lesions IN Genomes(定向诱导基因组局部突变技术),是由美国Fred Hutchinson癌症研究中心Steven Henikoff领导的研究小组发展起来的,是一种全新的反向遗传学研究方法。TILLING技术借助高通量的检测手段,快速有效地从由化学诱变剂(EMS)诱变过的突变群体中鉴定出点突变。目前,TILLING已被应用于多种生物的研究中。本文系统介绍了TILLING技术的基本原理、技术路线及其技术优势,同时列举了TILLING的应用实例,并展望了TILLING技术的应用前景。

关键词

TILLING,点突变,检测

Introduction to the TILLING Strategy

Wu Haibin1,2Zhu Rucai2Zhao Degang1*

1Guizhou Key Laboratory of Agricultural Bioengineering,Guizhou University,Guiyang,550025

2Hainan Provincial Key Laboratory of Crop Molecular Breeding,Sanya,572025

*Corresponding author,degangzhao@https://www.wendangku.net/doc/111603976.html,

ABSTRACT

TILLING,Targeting Induced Local Lesions IN Genomes,was developed by Dr.Steven Henikoff's Research Group of Fred Hutchinson Cancer Research Center in Seattle,Washington,USA.TILLING is a novel reverse ge-netics strategy that provides a completely solutions for high throughput and low cost discovery of induced point mutations in populations of chemically mutagenized individuals.Recently TILLING has been applied to lot of or-ganisms such as arabidopsis,tomato,maize,rice,soybean,lotus,nemetode,mouse,zebrafish,drosophila etc. This paper briefly introduced the TILLING methodologies and its advantages,and also listed the Arabidopsis TILLING Project as an application case.

KEYWORDS

TILLING,Point mutations,Detection

TILLING,即Targeting Induced Local Lesions IN Genomes(定向诱导基因组局部突变技术),是由美国Fred Hutchinson癌症研究中心Steven Henikoff 领导的研究小组发展起来的,是一种全新的反向遗

传学研究方法。主要的技术论文先后发表在Plant Physiology、Nature Biotechnology、Genome Research 等学术刊物上。TILLING已成为自动化反向遗传学解决方案的关键词,以美国为首的北美实验室借助高通量的TILLING技术,启动了拟南芥TILLING 项目(Arabidopsis TILLING Project),获得美国国家科学基金会植物基因组计划(Plant Genome Re-search Program,PGRP)大力资助,在ATP项目组内部已经实现了材料、DNA样品及突变信息的充分共享,该项目在立项的第一年里就为拟南芥研究者们提供了超过100个基因上的1000多个突变位点。国际上也有许多研究机构以TILLING作为技术平台,展开了各自感兴趣的目标生物的功能基因组学研究。TILLING技术借助高通量的检测手段,快速有效地从由化学诱变剂(EMS)诱变过的突变群体中鉴定出点突变。目前,TILLING已被应用于多种生物的研究中。本文系统介绍了TILLING技术的基本原理、技术路线及其技术优势,同时列举了TILL-ING的应用实例,并展望了TILLING技术地应用前景。

1TILLING技术路线

TILLING利用化学诱变方法(Chemical mutage-nesis)来产生一系列的点突变,经过PCR放大,PCR 片段变性退火,产生异源双链核酸分子(Heterodu-

plex),再利用CEL I核酸酶处理后,进行双色电泳分析。TILLING的具体操作步骤是(图1):⑴EMS (Ethyl Methane Sulfonic acid)处理种子,诱导产生一系列点突变;⑵将种子培养,获得第一代突变个体(M

1

);⑶M

1

植株自花授粉,产生第二代植株(M

2

);

⑷M

2

植株抽提DNA存放于96孔微量滴定板,并

保留M

2

代种子;⑸将多个96孔板的DNA样本合并到一个96孔板内(最多可合并8个)得到DNA 池;⑹根据目标基因序列设计一对特异性引物进行PCR扩增,两个引物分别用700nm和800nm荧光染料标记;⑺PCR扩增片段变性、退火,从而得到野生型和突变型所形成的异源双链核酸分子;⑻用特异性识别并切割错配碱基的核酸内切酶剪切异源双链核酸分子;⑼酶切产物用变性的聚丙烯酰胺(DPAGE)凝胶电泳分离,然后用标准的图象处理程序分析电泳图象,获得突变池;⑽利用相同方法从突变池中筛选突变个体;⑾突变个体PCR片段测序验证;⑿突变表型鉴定(Colbert et al.,2001;Till et al.,2003)。

图1植物中TILLING的技术路线(Colbert et al.,2001)

Figure1Schematic depicting the TILLING strategy applied to a plant(Colbert et al.,2001)TILLING技术的原理与方法述评

Introduction to the TILLING

Strategy

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分子植物育种Molecular Plant Breeding

最初的TILLING是利用DHPLC对DNA池中的突变进行检测(McCallum et al.,2000a;2000b)。为了进一步提高这个方法的效率,适应大规模筛选的要求,Colbert等(2001)对TILLING作了改进。他们将所获PCR片段先用特异性识别错配碱基的内切酶酶切异源双链核酸分子,再用变性的序列胶电泳分离酶切产物,用标准的图像处理程序分析点突变的存在。有几种酶已经被用于错配碱基的特异性识别、切割,包括S1核酸酶(Howard et al.,1999)和T4核酸内切酶Ⅶ(Youil et al.,1996)。目前,使用较多的是S1核酸内切酶家族中的CEL I酶,它是一种从芹菜(celery)中分离出的植物所特有的核酸内切酶(Oleykowski et al.,1998)。CEL I酶能够识别错配碱基并在错配碱基的3'端进行切割,再用变性的序列胶(PAGE)分离酶切产物,能够将超过1kb的PCR 扩增产物内的点突变定位在几个碱基对内。因此,改进的TILLING充分运用了CEL I酶和凝胶电泳技术,从而使其成为一个低成本、高通量的筛选突变基因的技术平台。

1.1TILLING中的引物设计

根据目标基因序列设计引物,是TILLING中可操作性较强的一个步骤,引物设计的好坏直接影响TILLING筛选的结果。为此,Nick Taybr和Eliza-beth A.Greene(Fred Hutchinson Cancer Research Center,Seattle;http:∥https://www.wendangku.net/doc/111603976.html,/coddle)为拟南芥TILLING项目(Arabidopsis TILLING Project,ATP)研究开发了CODDLE(Codons Optimized to Discover Deleterious)程序。CODDLE能够识别各种形式的序列信息,并能根据输入的碱基序列产生基因模型和蛋白质保守区域模型(Henikoff et al., 2000)。CODDLE能够列出EMS诱导植株产生有害突变的可能范围,当1000bp左右的区段被选中后,系统就会根据最有可能突变成为高频率终止密码子的区域或进化保守区域(McCallum et al.,2000b)设计引物。设计完成后,研究人员可以用Primer3程序(Rozen and Skaletsky,2000)对CODDLE列出的候选引物进行选择。

1.2TILLING中的点突变检测

通常点突变很难被检测,一直是TILLING应用上的一个障碍。要得到好的结果,要求检测仪器不仅要灵敏度高,还要能够准确识别假阳性位点。Collbert等(2001)将双色红外荧光扫描系统(Mid

dendorf et al.,1992)引入TILLING中,大大提高了筛选效率。由于杂质、干扰分子在红外光区几乎不发光,用红外荧光检测的背景非常低,灵敏度高,能够对由8个DNA样品组成的DNA池中检测出100atto moles的CEL I酶切产物。加上双通道检测(680nm激发,710nm检测;780nm激发,820nm检测),两个通道检测波长相距110nm,几乎没有光谱重叠的干扰,保证TILLING分析中每一个突变碱基的准确识别及整个检测的灵敏度。在两个通道的电泳图上的相同泳道都可以检测到新的条带。用U-NIX程序“grab”(http:∥https://www.wendangku.net/doc/111603976.html,)可以将LI-COR扫描仪上的图像文件处理成适合于Adobe Photoshop分析的JPEG压缩文件,并进行存档。图2是一张典型的双色红外荧光检测电泳图谱。由于两个剪切片断采用不同的荧光染料标记,发生突变的泳道,在700nm的图上可以在野生型条带下方看到一个条带,同时在800nm的图上的相同的泳道也会有一个条带,这两个条带就是CEL I核酸酶的剪切产物,两个条带片段大小之和等于扩增片段的大小,从而很容易对扩增产物进行突变检测。近似的迁移距离可以通过对比Mr得出。Pho-toshop图像处理工具能够容易的确定出发生突变的泳道和突变带的迁移距离(Colbert et al.,2001)。

1.3TILLING中的突变体鉴定

一旦在一个DNA池中检测到了一个突变,那么就要对这个DNA池中每一个单株的DNA样品进行筛选。单株的DNA样品可以排列在一个8×8的微量滴定板中,每一个DNA池对应一排(8个) DNA样品。用一个有8个吸头的移液器将阳性DNA池对应的8个DNA样品转移至一个新的微量滴定板(8×12)中。因此每块板可以对12个阳性的DNA池中的所有单株进行筛选。利用UNIX程序(pick)可以方便的将要筛选的每一块96孔板的每一行与阳性DNA池对应起来,并能以表格的形式将结果输出。为了能够检测出突变,每一个单株的DNA样品中等量混入野生型DNA样品。然后用与筛选DNA池同样的方法筛选突变个体,包括PCR扩增,CEL I酶切,凝胶电泳,Grab、Photoshop等软件分析。筛选结果能将突变位点定位在几个碱基对内。用这种两次筛选的方法,筛选1kb左右的目标片段,每块胶大约可以筛选750kb的基因组序列(1kb×8个单株DNA×96孔)。每个96孔DNA池相当于768个单株,平均可筛选到7个点突变(Col-

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bert et al.,2001)。1.4TILLING 中的突变表型鉴定

虽然TILLING 大幅减少了发现突变的工作量,但是后期确定突变表型需要做更多的工作。化学诱变引入大量点突变,使得表型分析变得相对困难。

通常的做法是通过异型杂交,

产生多样性后代来确定突变表型。然而一种快速方法是发现两个具有独

立有害突变位点的个体,

将二者杂交,分析后代的基因型。在每一个含有异等位基因的个体中,都会发现一个属于两个亲本之一的突变表型,而将不互补的背景突变独立归类(McCallum et al .,2000b )。

2TILLING 技术优势

反义RNA 技术(antisense RNA )和插入突变技术

(insertional mutagenesis )是植物中两种最常用的反向遗传学研究方法。然而反义RNA 抑制技术需要花费相当大的精力来预先确定目标基因是否将会表达;插入突变技术很难致使每个基因都发生插入突变。当前RNAi

(RNA interference )抑制基因表达技术应用非常广泛

(Waterhouse et al .,1998)。然而RNAi 的作用机理并不十分清楚,例如后代表型

图2双色红外荧光检测电泳图谱(Colbert et al.,2001)

注:左边为800nm 电泳图,右边为700nm 电泳图。在700nm 电泳图上,用方框框出了四个突变条带,并在最右边进行了放大。Figure 2A typical gel image of IR Dye 800(left)and IR Dye 700(right)channels (Colbert et al.,2001)

Note:Bands corresponding to four mutations detected on this gel are shown boxed,and sections of the IR Dye 700images are magni-fied in offsets (far right)

的多样性和不可预知性(Que and Jorgensen.,1998)。同时,因为这些技术都要依赖于农杆菌T-DNA 载体进行转化或依赖于内源标签系统,

从而使这些技术在反向遗传学的应用中受到极大限制(McCallum et al.,2000b )

。TILLING 不同于其它引起基因敲除突变的方法,它利用化学诱变方法来获得所有基因的传统点突变等位基因系列。对那些表型分析时会牵涉到亚致死等位基因的重要基因,TILLING 的方法具有其独特的优势。由于化学诱变剂能够对生物体诱导产生高频率的点突变,

所以筛选所有目的基因只需要相对较少的突变群体。

而且由于TILLING 利用传统的化学诱变方法,

所以不需要耗时的转基因和复杂的组织培养。从而使TILLING 成为一种高通量、低成本、高效率的反向遗传学研究方法。

2.1TILLING 能够预测突变概率

TILLING 技术的优点之一是有害突变的概率能够预先计算出来。目前使用较多的诱变剂是EMS 。EMS 是一个稳定、高效的烷基化诱变剂,已被广泛用于农作物的诱变育种。EMS 主要诱发点突变,可能导致三种突变类型。第一种,

诱导密码子变TILLING 技术的原理与方法述评Introduction to the TILLING

Strategy

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分子植物育种Molecular Plant Breeding

为终止密码子,使翻译出的蛋白质失去原有功能,导致无义突变(nonsense mutations);第二种,诱导突变发生在编码区以外或发生在编码区内,但不改变氨基酸编码顺序,导致沉默突变(silence muta-tions);第三种,诱导突变引起氨基酸编码顺序的改变,被称为错义突变(missense mutations)。估计三种突变的比例对构建突变群体和TILLING后期确定突变位点具有很大的指导意义。EMS主要诱导碱基从C到T的改变,从而导致碱基对从C/G到T/A 的转换突变。根据各种作物的氨基酸编码习惯,就可以大概预计出发生三种突变的比例。例如,在拟南芥中,可知大约5%的突变是无义突变,35%是沉默突变,65%是错义突变(McCallun et al.,2000a)。

2.2TILLING能够有效排除假阳性

TILLING技术的优点之二是采用双色红外荧光检测CEL I酶切产物,能够有效排除假阳性条带。假阳性通常有两种情况,一种是在一个通道的电泳图中多个泳道出现阳性条带;另一种情况是在两个电泳图的相同泳道的相同位置出现阳性条带。因为在两个不同植株中出现相同的点突变的可能性很低,推测发生第一种情况可能是由于某种同源双链对CEL I酶特别敏感,能够被其酶切,从而使得同样条带出现在一张电泳图的不同泳道上。而发生第二种情况可能是由于错误的引发导致产生大量的相同大小的双末端标记产物,在扩增循环中,小的产物比大的产物有一定的选择优势。Colbert等研究发现,当一对引物分别用700nm和800nm荧光染料标记时,PCR产物的产量会比较低并且不稳定;但是当把有标记的引物和没用标记的引物混和后进行扩增,PCR产物就会相当稳定(Colbert et al.,200 1)。

2.3TILLING技术可自动化操作

TILLING技术集成了高通量的电泳检测设备,优秀的图像处理系统和分析软件及一种能够给96孔微量滴定板自动加样的设备(Underhill et al., 1997),容易地实现了自动化操作。目前在拟南芥中TILLING已能够完全自动化(Till et al.,2003)。

TILLING是一种高通量并且相对廉价的技术,它不需要先进的仪器设备就能够实现对突变体库的大规模筛选。筛选每块96孔微量滴定板相当于筛选了768个M

2

单株(8×96),每个目标筛选区段大约为1000bp,那么每块胶大约可以检测750kb的

基因组序列。Colbert等(2001)的实验中,仅需要一个技术员,一天就能完成四轮筛选工作,可以对3000个突变株进行检测,相当于检测了三百万个碱基对。对于有着高突变频率的群体,一天就可以筛选出20个突变,至少可以鉴定出一个基因。

2.4TILLING技术适用于大量或小量筛选

TILLING技术在适应于大量筛选的同时,也适合于少量筛选,因为高密度的点突变需要相对少的突变群体。在拟南芥中,高通量的TILLING筛选基因只需要原来一半数目的突变群体,Till等的试验中,只需要6912个拟南芥突变单株,就能够用一对引物筛选出期望的突变基因(Till et al.,2003)。如果使用多对引物筛选一个基因,那就需要更少的突变单株,McCallum等(2000b)报导,1000个突变株即可达到要求。

3TILLING技术的应用实例

目前,TILLING作为一种全新的反向遗传学研究方法已经应用于多种生物中,如拟南芥(Ara-bidopsis)、玉米(maize)、水稻(rice)、百脉根(Lotus japonicus)、小鼠(mouse)、斑马鱼(Zebrafish)、果蝇

(Drosophila)、线虫(C.elegans)等。对于拟南芥,这一技术已经非常成熟,并能够实现流水线操作,大量的突变序列都可以应用in silico进行分析。

近年来,美国国家科学基金会植物基因组计划(Plant Genome Research Program,PGRP)大力应用高通量TILLING技术,并直接推动了以美国为首的北美实验室联合启动拟南芥TILLING项目(Ara-bidopsis TILLING Project)。该项目在立项的第一年里就为拟南芥研究者们提供了超过100个基因上的1000多个突变位点。

在ATP项目组内部已经实现了材料、DNA样品及突变信息的充分共享。ATP的TILLING由四步组成(图3)。第一步,研究人员根据感兴趣的基因,设计合适的引物。研究人员可以在网上通过自动的“Front end”系统进行设计,利用“Front end”系统中的CODDLE程序(https://www.wendangku.net/doc/111603976.html,/coddle),可以得到基因模型和保守的蛋白质模型,并能够进行引物设计。目前“Front end”系统非常完备,TILLING 中超过90%引物都是通过这一系统设计的。研究人员收到引物以后,第二步筛选由八个DNA样品组成的DNA池。第三步是对阳性DNA池进行突变个

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体筛选及突变个体PCR 片段的测序验证。第四步,研究人员可以进入一个ATP 项目组的公用突变信

息数据库,

(https://www.wendangku.net/doc/111603976.html,/parsesnp/),利用BLASTN 和BLASTP 程序对所得到的突变序列进

行分析。同时,

研究人员在PARSEANP (https://www.wendangku.net/doc/111603976.html,/parsesnp/)程序的帮助下可以分析出突变的性质。最后,

研究人员根据筛选得到的突变植株编号,可以在拟南芥生物资源中心的种子库中得

到相应突变株的种子,

从而再进行表型鉴定。Fred hutchinson 癌症研究中心的Till 等(2003)利用6台能够自动加样的LI-COR 凝胶分析系统,每8h 进行两轮筛选,从而可以达到对大约10000株拟南芥进行检测,

每天筛选3个基因的水平。4展望

反向遗传学是相对于正向遗传学(forward ge-netics )

来说的,在已知基因序列的基础上研究基因的生物学功能。随着各种生物基因序列库的扩充,

反向遗传学方法将逐渐取代表型筛选

(正向遗传学方法)成为功能基因组学研究的主要方法。传统的

反向遗传学方法,如用转座子(transposon )

或图3拟南芥TILLING 项目(ATP )主要步骤(Till et al.,2003)

Figure3Outline of steps involved in the Arabidopsis TILLING Project.(Till et al.,2003)

T-DNA 敲除特定基因,虽然可以准确测定表型,

但需要进行耗时的转基因和复杂的组织培养,而且这些方法是将整个基因敲除,无法观察到活性基因功能部分缺失的结果。利用点突变可以精确鉴定基因的功能,在基因功能鉴定上有着独特的优势,但由

于点突变不易鉴定,

在功能基因组学上的应用受到限制。美国Fred Hutchinson 癌症研究中心Steven Henikoff 领导的研究小组发展起来的TILLING 技

术借助高通量的检测手段,

快速有效地从由化学诱变剂

(EMS )诱变过的突变群体中鉴定出点突变。有效地解决了这一问题。

TILLING 作为一种高通量,

低成本的反向遗传学研究方法,并不需要先进的生物学仪器设备,基因组序列信息就是其工作的弹药(McCallum et al.,2000b)。

随着越来越多生物全基因组测序的完成,我们有理由相信TILLING 技术将会得到更加广泛的应用。

致谢

作者感谢海南省热带农业资源开发利用研究所所长方宣钧博士阅读本文初稿并提出宝贵的修

TILLING 技术的原理与方法述评Introduction to the TILLING

Strategy

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分子植物育种Molecular Plant Breeding

改意见。本工作由海南省农作物分子育种重点实验室开放基金及贵州“十五”攻关项目“水稻抗冷害基因工程育种研究”黔科合(2002)1134资助。

参考文献

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PDMS中文教程结构建库

VPD VANTAGE Plant Design System 工厂三维布置设计管理系统 PDMS结构建库 培训手册

型钢库 PDMS已经提供了较完善的元件库,包括型材截面、配件和节点库。但不一定十分齐全,所以PDMS提供了非常方便的建库工具,这些功能都可在PARAGON中实现。 设计库、元件库和等级库之间的关系 等级库(Specificaion)是设计库与元件库之间的桥梁。设计者在等级库中选择元件后,等级中的元件自动找到对应的元件库中的元件;元件库中的几何形状和数据被设计库参考。如下图。 型钢库层次结构 型钢库World下包含了许多元件库和等级库,它们也是一种树状结构库。下图就是型钢库层次结构: 型钢等级库层次结构 等级库相当于元件库的索引,其目的是为设计人员提供一个选择元件的界面,它的层次结构既与界面的关系如下图所示。 本章主要内容: 1.定义型钢截面(Profile) 2.定义型钢配件(Fitting) 3.定义节点(Joint) 定义型钢截面(Profile) 练习一:定义型钢截面库 1.元件库最终的层次结构如下: 2.以管理员身份(如SYSTEM)登录PARAGON模块,再进入Paragon>Steelwork子模块。 3.在 4.选择菜单Create>Section,创建新的STSE, 5.在刚创建的STSE下,选择菜单Create>Element,创建三个元素:“ref.DTSE”、“ref.GMSS”和“ref.PTSS”。 现在的数据库结构如下: 6.设置。选择Settings>Referance Data… 和Display>Members…按下图设置: 7.鼠标指向CATA层,选择菜单Create>Section,创建新的STSE:example/PRFL/BOX。8.选择菜单Create>Category>For Profiles,创建新的STCA,如下图: 9.鼠标指向STCA:example/PRFL/REF.DTSE层,在命令行中键入命令:“NEW DTSE /BOX/EQUAL/DTSE”,这样新建了一个DTSE,如下图。 10.创建截面本身。选择菜单Create>Profile,按下图设置:

关于3GPP标准中基站频谱发射模板和ACLR两个指标的考虑

关于3GPP 标准中频谱发射模板和 ACLR 两个指标的考虑 一. 指标 1. 3GPP 中频谱发射模板的指标要求: Table 6.14: Spectrum emissi on mask values, BS maximum output power P _ 43 dBm Table 6.15: Spectrum emissi on mask values, BS maximum output power

Table 6.16: Spectrum emissi on mask values, BS maximum output power 31 < P < 39 2. 3GPP 中ACLR 的指标要求: Table 6.22: BS ACLR

二.问题的提出: 在WCDMA高功放的测试中发现,在单载波满足ACLR指标要求时,频谱发射模板要求并 不满足,必须将输出功率回退,使其临道ACLR指标达到—48dBc左右,才有可能能满足频谱发射模板要求。为什么同为临近频带的线性指标要求,ACLR能满足指标甚至留有余量 2dB左右,而频谱发射模板指标却过不去? 三.分析 定义分析: 1. 共性:频谱发射模板和ACLR两个指标在3GPP中是同属于“带外发射(out of band emission)”指 标。带外发射的定义是:由调制过程和传输中的非线性产生的紧邻有用信道外的有害发射,不包括杂散发射。 2. 区别:A.适用范围不同。频谱发射模板只是在特定的一些区域需要满足的一个指 标,而在其他某些地域则不一定要求。ACLR指标则是在任何情况都必须满足。 ACLR指标只是针对WCDMA系统自身干扰而言的,也就是不希望对同一系统内工作在其相邻载波 的其他基站造成干扰。而频谱发射模板更多的则是考虑非 WCDMA系统,如和工作在UMTS相邻频段的其他系统共存,或是和工作在PCS 频段的其他系统共存。因此其测量带宽也会和相应的系统对应起来,如30K测量 带宽就是对应PCS系统和卫星系统。B.对载波数要求不同。频谱发射模板指标都是在单载波情况下 定义的,如果是多载波功放,测辐射模板只用单载波。而ACLR 指标则是无论载波数多少,传输模式是什么,都必须满足。 指标分析: 以基站输出功率39 < P < 43 dBm为例,频谱发射模板指标为: Table 6.15: Spectrum emissi on mask values, BS maximum output power 39 _ P < 43 dBm 假设基站输出功率P=40dBm,将每一频段的要求转换成测量带宽为 3.84M的要求:

Plaxis中常见问题集锦

1 问:Geo FEM,Plaxis,Z-Soil软件比较? 2008/6/5 9:34:48 答:三者针对某个算例计算结果相差不大,误差在可接受范围之内。 就易用性来说,Plaxis好于Z-Soil好于GEO。Plaxis大家都用得很多了,Z-Soil的建模可以在前 处理模块中用CAD元素绘制,或者通过dxf文件导入;GEO4只能输入剖面线的坐标,比较烦琐。 Plaxis和Z-soil基本可以解决岩土工程所有问题,但GEO4由于建模功能的限制,只能解决隧道、 边坡等相关问题;Plaxis和Z-Soil可以进行渗流分析(非饱和)包括流固偶合分析。 总的来说,Plaxis和Z-Soil是专业的岩土工程有限元程序;GEO FEM是GEO4里面的一个工具 包,而GEO4类似于国内的理正一样,是遵循Eurocode的设计软件。 2 问:在plaxis中,用折减系数作出它的几个滑裂面,如何查看滑裂面的角度、圆心、半径等 这些滑裂面的相关参数呢? 2008/6/5 9:36:26 答:使用强度折减法,不用假定slip surface,故不会有这些数据。 3 问:Plaxis怎么模拟路堤分步填筑?在实际施工中,填筑不是一次加载的,可能先填一半, 过个月再填一半,而且这一半也不是一次填完,要在几天内完成,请问怎么在Plaxis中模拟,怎 么设置可以反应填筑速率,请高手指教? 2008/6/5 9:47:25 答:手册里有相关例子,你可以参考一下lesson 5。 堆载速率可以通过设置堆载这个stage的时间间隔来设置。如果只有基本模块,可以设置mstage 的数值。mstage=1.0,说明100%施加上去了,mstage=0.1,说明只有10%的荷载。由于Plaxis 不能设置load function,比较麻烦。当然,你可以将一层土细分成几个stage完成,也可以实现。 4 问:Plaxis 3D 用这个软件分析基坑时,基坑是钢格栅喷混凝土支护,支护用板来模拟,EI 和EA中的I和A分别指哪个面的惯性矩和面积,以及单位后面的/m应该是哪个长度? 2008/6/5 9:49:13 答:应该是:A=沿着洞轴方向L×厚度d E是弹性模量I是惯性矩 5 问:在网上看到有人怀疑Plaxis 3D Foundation和3D Tunnel的真三维性,有人说它们不是 真正的三维计算,有谁知道是怎么回事吗? 2008/6/5 9:59:42 答:Plaxis 3D Tunnel计算内核是三维的。但是目前只支持平面拉伸建模,建附加模型还存在困 难。3D Tunnel的确不能生成复杂的斜交隧道。 3D Foundation是专门解决基础问题的三维有限元计算软件。其解决基础问题要比FLAC3D要专 业,特别是考虑了一些工程实际,但开放性不如FLAC3d。近期3D Foundation将在此方面有重 大改进,新版本前处理借用GID作为前处理工具。Plaxis 系列优点长处是其理论,尤其是hs和 hs-small模型。 6 问:最近在算一个基坑,很好的地质条件,桩、撑刚度都取得很大,居然算出来水平位移始终 都有70mm左右,但用同济启明星算水土分算,并且参数都没有取最大值,算的结果只有17mm 左右。深圳规范要求水平位移不超过30mm,要是用Plaxis是很难算出小于规范值的结果的,事 实上,也不至于有那么大的位移的? 2008/6/5 10:05:32 答:主要问题是现在很多地质报告都不提供三轴的试验参数:例如E50模量,Eur模量,Es模量, 有效强度指标等;土体的本构参数比较特殊,要做特殊的试验,因此一般的项目参数方面的确有 问题。不过,即便是只有Es模量和直剪固快指标,通过换算和引入K0、孔隙比、Cc,Cs等其 他参数,也是可以得到其他需要的参数,不过这需要比较扎实的本构模型方面的知识和岩土工程 经验,知道不同的本构适合模拟什么土层,知道本构的优点和局限性,这对使用者的要求的确比 较高。 7 问:隧道已经组成一个类组,所以一定要对其进行材料定义。如果不定义得话,就不能对其 进行网格划分,这要怎么解决呢? 2008/6/5 10:08:42 答:你是不是只想模拟基坑开挖对既有隧道结构的影响,而省略掉前面隧道开挖过程的模拟。 这样的话,结果恐怕很难正确,而且会碰到你所说的问题。因为隧道在基坑开挖前,有一定的受

3GPP技术标准中文版

3GPP TS 25.401 V3.10.0 (2002-06) 翻译小组成员 翻译的部分姓名俱乐部ID 电子邮件 3GPP TS 25.401 V3.10.0 (2002-06) 5-9 孙扬 phaeton yang_sun_80@https://www.wendangku.net/doc/111603976.html, 3GPP TS 25.401 V3.10.0 (2002-06) 9-11 赵建青 happyqq zjqqcc@https://www.wendangku.net/doc/111603976.html, 3GPP TS 25.401 V3.10.0 (2002-06) 11-14 周翔babytunny babytunny@https://www.wendangku.net/doc/111603976.html, 3GPP TS 25.401 V3.10.0 (2002-06) 15-18 马进xma 2003xm@https://www.wendangku.net/doc/111603976.html, 3GPP TS 25.401 V3.10.0 (2002-06) 15-18 bluesnowing bluesnowing@https://www.wendangku.net/doc/111603976.html, 3GPP TS 25.401 V3.10.0 (2002-06) 21-24 tonyhunter tonyhunter@https://www.wendangku.net/doc/111603976.html, 3GPP TS 25.401 V3.10.0 (2002-06) 26-28,37 maggie maggiemail88@https://www.wendangku.net/doc/111603976.html, 3GPP TS 25.401 V3.10.0 (2002-06) 29-32 caisongjin caisongjin@https://www.wendangku.net/doc/111603976.html, 3GPP TS 25.401 V3.10.0 (2002-06) 33-36 陈华安 ny2k3d4c c_huaan@https://www.wendangku.net/doc/111603976.html, 关于“移动通信俱乐部3G本土化研究组” 移动通信俱乐部3G本土化研究组 3G Research&Localization Group of Mobile Club,简称3G RLG.MC 由移动通信俱乐部(https://www.wendangku.net/doc/111603976.html,)发起成立的。3G RLG.MC致力于3G的本土化研究工作,工作方式是开放式的,非盈利目的的。任何个人、组织均可参与3G RLG.MC。3G RLG.MC最高纲领:成为中国最大的3G 研究社区和中文化团队,推进中国3G通信事业健康发展。3G RLG.MC初级纲领:让每一个社区成员都能参与到3G中文化和学习中来,促进业界交流,营造一个深入探讨学习和交流3G的平台

中文参考手册-PLAXIS 2D--岩土三维建模分析

参 考 手 册

目录 1简介 (7) 2 一般说明 (7) 2.2 文件处理 (9) 2.3 帮助工具 (9) 2.4 输入方法 (10) 3 输入前处理 (10) 3.1 输入程序 (10) 3.5 荷载和边界条件 (28) 4 材料属性和材料数据组 (33) 4.1 模拟土体及界面行为 (35) 4.1.1 一般标签页 (35) 4.1.2 参数标签页 (39) 4.1.3 渗流参数标签页 (50) 4.1.4 界面标签页 (56) 4.1.5 初始标签页 (61) 4.2 不排水行为模拟 (63) 4.2.1 不排水(A) (64) 4.2.2 不排水(B) (64) 4.2.3 不排水(C) (64) 4.3 土工试验模拟 (64) 4.3.1 三轴试验 (67) 4.3.2 固结仪试验 (68) 4.3.3 CRS (68) 4.3.4 DDS (69) 4.3.6 结果 (70) 4.4 板的材料数据组 (70) 4.4.1 材料数据组 (71) 4.4.2 属性 (71)

4.5.1 材料数据组 (74) 4.5.2 属性 (74) 4.6 锚杆的材料数据组 (75) 4.6.1 材料数据组 (76) 4.6.2 属性 (76) 4.7 几何构件的材料数据组赋值 (76) 5 计算 (77) 5.1 计算程序界面 (77) 5.2 计算菜单 (78) 5.3 计算模式 (79) 5.3.1 经典模式 (80) 5.3.2 高级模式 (80) 5.3.3 渗流模式 (81) 5.4 定义计算阶段 (81) 5.4.1 计算标签页 (81) 5.4.2 插入或删除计算阶段 (82) 5.4.3 计算阶段的标识和顺序 (82) 5.5 分析类型 (83) 5.5.1 初始应力生成 (83) 5.5.2 塑性计算 (85) 5.5.3塑性(排水)计算 (85) 5.5.4 固结(EPP)分析 (85) 5.5.5 固结(TPP)分析 (86) 5.5.6 安全性(PHI/C折减) (86) 5.5.7 动力分析 (87) 5.5.8 自由振动 (87) 5.5.9 地下水渗流(稳态) (88) 5.5.10 地下水渗流(瞬态) (88) 5.5.11 塑性零增长步 (88)

3GPP规范命名规则解读

学习了解电信技术知识的一个很好的手段是阅读3GPP的规范。但是3GPP有大量的规范,我们可能经常面对这些规范觉得无从下手:应该从那里开始,究竟那些是与我们的工作内容直接相关的,等等。如果能够对3GPP规范的命名规则有所了解的话,可能会有很大的帮助。 3GPP规范的全名由规范编号加版本号构成(例如:3GPP TS 29.329 V6.3.0)。规范编号由被点号(“.”)隔开的4或5个数字构成(例如09.02或29.002),其中点号之前的2个数字是规范的系列号,点号之后的2或3个数字是文档号。 这些信息很好的体现了规范所属的系统、规范的类别、版本等属性。下面分别进行说明。 关于系列号 了解了系列号含义实际上在很大程度上就掌握了3GPP规范的命名含义。系列号的前1个数字体现了规范所属的系统,后1个数字体现了规范的类别(与前1个数字结合)。 3GPP负责两个系统的规范:“3G系统”和“GSM系统”。所谓“3G系统”和“GSM系统”主要根据无线接入部分的不同来区分的。具体而言,"3G系统"是指的是使用UTRAN无线接入网的系统;"GSM系统"指的是使用GERAN 无线接入网的3GPP系统。 如果根据从分配的系列号来看,还可以更为细致的划分为3个系统:“3G系统”、“GSM系统”和“早期GSM系统”。这三个系列之间有着紧密的关联。简单来说,“早期GSM系统”代表的是过去,是后两者的前身,其本身已不再发展了,“3G系统”和“GSM系统”都是在“早期GSM系统”的基础上继承而来的。后二者是并行发展的,它们的区别主要在于无线接入部分。某种程度上“3G系统”的无线接入部分相对与“早期GSM系统”可以认为是一场革命,而“GSM系统”的无线接入部分则是对“早期GSM系统”的改良;对于核心网部分二者基本上是雷同的。 从系列号的命名上,可以很容易区分出这三个系统的规范。一般来说,系列号01~13用于命名“早期GSM系统”;系列号21~35用于“3G系统”;系列号41~55用于命名“GSM系统”。然而,由于“3G系统”和“GSM系统”许多内容(特别是在核心网方面)都是相同的,所以很多规范都是同时适用于“3G系统”和“GSM系统”,这样的规范通常也使用系统号21~35来命名,但是文档号的第1位必须为"0" 指示该规范可适用于两个系统。例如,29.002可以同时适用于“3G系统”和“GSM系统”,而25.101和25.201只适用于“3G系统”。 无论“3G系统”、“GSM系统”还是“早期GSM系统”它们的文档的类别的划分都是基本一致的,都可以基本可划分为:1)需求;2)业务方面;3)技术实现;4)信令协议(用户设备-网络);5)无线方面;6)媒体编码CODECs;7)数据Data;8)信令协议(无线系统-核心网);9)信令协议(核心网内);10)Programme management;11)用户标识模块(SIM / USIM);12)操作和维护O&M;等等若干方面。 规范的所属的类别也同样会体现在其系列号上,例如,09,29,49系列的规范是关于核心网信令协议方面的。 00 01 02 03 04 05 06 07

3GPP标准

Agilent E1963A W-CDMA Mobile Test Application For the E5515C (8960) Wireless Communications Test Set Technical Overview Speed UMTS test plan development and get your devices to market sooner, while ensuring compliance with TS34.121 test standards. The E1963A W-CDMA Mobile Test Application, when used with the Agilent GSM, GPRS, and EGPRS applications, is the industry standard for Universal Mobile Telecommunications (UMTS) mobile test. Agilent’s 8960 (E5515C) test set provides you with a single hardware platform that covers all the UMTS/3GPP (Third Generation Partnership Project) radio formats: W-CDMA, HSPA, GSM, GPRS, and EGPRS. Exceed your calibration test time goals with the E1999A-202 fast device tune measurement. Simultaneously calibrate your device’s transmitter (Tx) output power and receiver (Rx) input level across level and frequency. E1999A-202 is a superset of the discontinued E1999A-201. It not only offers the equivalent capabilities of the E1999A-201, but is also further enhanced to reduce the calibration test times for W-CDMA, cdma2000?, and 1xEV-DO wireless devices with smaller step size support (10 ms step size versus 20 ms step size). Reach your high-volume production goals by moving prototypes quickly into production with this test solution’s fast and repeatable measurements, accurate characterization, and ease of programming. The HSPA, W-CDMA, GSM, GPRS, and EGPRS product combination delivers a complete and integrated UMTS test solution in a single box. FM radio source, a single channel GPS source (E1999A-206) and PESQ measurement (E1999A-301) are also added into the test box for FM radio receiver calibration, GPS receiver calibration and audio quality test without the need of an external audio analyzer. This fast, one-box approach simplifies your production process and increases your production line effectiveness. With the most complete test functionality for 3GPP TS34.121 Section 5 and 6 tests, E1963A Options 403,405 and 413 provide fast, flexible measurements and options in user equipment (UE) connectivity, giving design and manufacturing test engineers more flexibility in creating test plans and the assurance that designs meet technology standards. The option 423 supports 64QAM downlink modulation and RB test mode connection. Key Capabilities ?Fast device calibration across level and frequency simultaneously ?Test HSPA devices as defined in 3GPP TS34.121 ?Switch between HSPA sub-test conditions while on an active connection ?Test all UMTS technologies with one connection maintained throughout ?Test all frequency bands I through XIV ?FM and GPS receiver calibration in one box ?Test vocoder speech quality using the industry standard PESQ algorithm Tx measurements W-CDMA HSDPA HSUPA Thermal power Yes Yes Yes Channel power Yes Yes Yes Adjacent channel leakage ratio Yes Yes Yes Waveform quality Yes Yes Yes Spectrum emission mask Yes Yes Yes Phase discontinuity Yes Yes Yes Inner loop power Yes Occupied bandwidth Yes Yes Yes Code domain power Yes Yes Yes IQ constellation Yes Yes- Yes Tx on/off power Yes Yes Yes Frequency stability Yes Yes Yes Dynamic power analysis Yes Yes Yes Tx dynamic power Yes Spectrum monitor Yes Yes Yes Rx measurements W-CDMA HSDPA HSUPA Loopback BER Yes N/A N/A BLER on DPCH (W-CDMA)Yes N/A N/A HBLER on HS-DPCCH (HSDPA)N/A Yes N/A

Plaxis中常见问题集锦

1 问:Geo FEM,Plaxis,Z-Soil软件比较?2008/6/5 9:34:48 答:三者针对某个算例计算结果相差不大,误差在可接受围之。 就易用性来说,Plaxis好于Z-Soil好于GEO。Plaxis大家都用得很多了,Z-Soil的建模可以在前处理模块中用CAD元素绘制,或者通过dxf文件导入;GEO4只能输入剖面线的坐标,比较烦琐。Plaxis和Z-soil基本可以解决岩土工程所有问题,但GEO4由于建模功能的限制,只能解决隧道、边坡等相关问题;Plaxis和Z-Soil可以进行渗流分析(非饱和)包括流固偶合分析。 总的来说,Plaxis和Z-Soil是专业的岩土工程有限元程序;GEO FEM是GEO4里面的一个工具包,而GEO4类似于国的理正一样,是遵循Eurocode的设计软件。 2 问:在plaxis中,用折减系数作出它的几个滑裂面,如何查看滑裂面的角度、圆心、半径等 这些滑裂面的相关参数呢? 2008/6/5 9:36:26 答:使用强度折减法,不用假定slip surface,故不会有这些数据。 3 问:Plaxis怎么模拟路堤分步填筑?在实际施工中,填筑不是一次加载的,可能先填一半, 过个月再填一半,而且这一半也不是一次填完,要在几天完成,请问怎么在Plaxis中模拟,怎么 设置可以反应填筑速率,请高手指教? 2008/6/5 9:47:25 答:手册里有相关例子,你可以参考一下lesson 5。 堆载速率可以通过设置堆载这个stage的时间间隔来设置。如果只有基本模块,可以设置mstage 的数值。mstage=1.0,说明100%施加上去了,mstage=0.1,说明只有10%的荷载。由于Plaxis 不能设置load function,比较麻烦。当然,你可以将一层土细分成几个stage完成,也可以实现。 4 问:Plaxis 3D 用这个软件分析基坑时,基坑是钢格栅喷混凝土支护,支护用板来模拟,EI 和EA中的I和A分别指哪个面的惯性矩和面积,以及单位后面的/m应该是哪个长度? 2008/6/5 9:49:13 答:应该是:A=沿着洞轴方向L×厚度d E是弹性模量I是惯性矩 5 问:在网上看到有人怀疑Plaxis 3D Foundation和3D Tunnel的真三维性,有人说它们不是 真正的三维计算,有谁知道是怎么回事吗? 2008/6/5 9:59:42 答:Plaxis 3D Tunnel计算核是三维的。但是目前只支持平面拉伸建模,建附加模型还存在困难。 3D Tunnel的确不能生成复杂的斜交隧道。 3D Foundation是专门解决基础问题的三维有限元计算软件。其解决基础问题要比FLAC3D要专 业,特别是考虑了一些工程实际,但开放性不如FLAC3d。近期3D Foundation将在此方面有重 大改进,新版本前处理借用GID作为前处理工具。Plaxis 系列优点长处是其理论,尤其是hs和 hs-small模型。 6 问:最近在算一个基坑,很好的地质条件,桩、撑刚度都取得很大,居然算出来水平位移始终 都有70mm左右,但用同济启明星算水土分算,并且参数都没有取最大值,算的结果只有17mm 左右。规要求水平位移不超过30mm,要是用Plaxis是很难算出小于规值的结果的,事实上,也 不至于有那么大的位移的? 2008/6/5 10:05:32 答:主要问题是现在很多地质报告都不提供三轴的试验参数:例如E50模量,Eur模量,Es模量, 有效强度指标等;土体的本构参数比较特殊,要做特殊的试验,因此一般的项目参数方面的确有 问题。不过,即便是只有Es模量和直剪固快指标,通过换算和引入K0、孔隙比、Cc,Cs等其 他参数,也是可以得到其他需要的参数,不过这需要比较扎实的本构模型方面的知识和岩土工程 经验,知道不同的本构适合模拟什么土层,知道本构的优点和局限性,这对使用者的要求的确比 较高。 7 问:隧道已经组成一个类组,所以一定要对其进行材料定义。如果不定义得话,就不能对其 进行网格划分,这要怎么解决呢? 2008/6/5 10:08:42 答:你是不是只想模拟基坑开挖对既有隧道结构的影响,而省略掉前面隧道开挖过程的模拟。 这样的话,结果恐怕很难正确,而且会碰到你所说的问题。因为隧道在基坑开挖前,有一定的受 力状况,这需要模拟隧道开挖过程才能得到其受力状况,基坑开挖的影响也是在其这个受力状况 上产生的。你现在的目的是让基坑开挖前,隧道结构的力和弯矩都为零了,所以结果很难正确。

关于3GPP标准中基站频谱发射模板和ACLR两个指标的考虑

关于3GPP标准中频谱发射模板和ACLR两个指标的考虑一.指标 1.3GPP中频谱发射模板的指标要求: Table 6.14: Spectrum emission mask values, BS maximum output power P ≥ 43 dBm Table 6.15: Spectrum emission mask values, BS maximum output power 39 ≤ P < 43 dBm

Table 6.16: Spectrum emission mask values, BS maximum output power 31 ≤ P < 39 dBm Table 6.17: Spectrum emission mask values, BS maximum output power P < 31 dBm 2. 3GPP 中ACLR 的指标要求: Table 6.22: BS ACLR

二.问题的提出: 在WCDMA高功放的测试中发现,在单载波满足ACLR指标要求时,频谱发射模板要求并不满足,必须将输出功率回退,使其临道ACLR指标达到-48dBc左右,才有可能能满足频谱发射模板要求。为什么同为临近频带的线性指标要求,ACLR能满足指标甚至留有余量2dB左右,而频谱发射模板指标却过不去? 三.分析 ●定义分析: 1.共性:频谱发射模板和ACLR两个指标在3GPP中是同属于“带外发射(out of band emission)”指标。带外发射的定义是:由调制过程和传输中的非线性产生的紧邻有 用信道外的有害发射,不包括杂散发射。 2.区别:A. 适用范围不同。频谱发射模板只是在特定的一些区域需要满足的一个指 标,而在其他某些地域则不一定要求。ACLR指标则是在任何情况都必须满足。 ACLR指标只是针对WCDMA系统自身干扰而言的,也就是不希望对同一系统内 工作在其相邻载波的其他基站造成干扰。而频谱发射模板更多的则是考虑非 WCDMA系统,如和工作在UMTS相邻频段的其他系统共存,或是和工作在PCS 频段的其他系统共存。因此其测量带宽也会和相应的系统对应起来,如30K测量 带宽就是对应PCS系统和卫星系统。B.对载波数要求不同。频谱发射模板指标都 是在单载波情况下定义的,如果是多载波功放,测辐射模板只用单载波。而ACLR 指标则是无论载波数多少,传输模式是什么,都必须满足。 ●指标分析: 以基站输出功率39 ≤ P < 43 dBm为例,频谱发射模板指标为: Table 6.15: Spectrum emission mask values, BS maximum output power 39 ≤ P < 43 dBm 假设基站输出功率P=40dBm,将每一频段的要求转换成测量带宽为3.84M的要求:

地铁地表沉降外文翻译(适用于毕业论文外文翻译+中英文对照)

外文原文 Surface settlement predictions for Istanbul Metro tunnels excavated by EPB-TBM S. G. Ercelebi ?H. Copur ?I. Ocak Abstract In this study, short-term surface settlements are predicted for twin tunnels, which are to be excavated in the chainage of 0 ? 850 to 0 ? 900 m between the Esenler and Kirazl?stations of the Istanbul Metro line, which is 4 km in length. The total length of the excavation line is 21.2 km between Esenler and Basaksehir. Tunnels are excavated by employing two earth pressure balance (EPB) tunnel boring machines (TBMs) that have twin tubes of 6.5 m diameter and with 14 m distance from center to center. The TBM in the right tube follows about 100 m behind the other tube. Segmental lining of 1.4 m length is currently employed as the final support. Settlement predictions are performed with finite element method by using Plaxis finite element program. Excavation, ground support and face support steps in FEM analyses are simulated as applied in the field. Predictions are performed for a typical geological zone, which is considered as critical in terms of surface settlement. Geology in the study area is composed of fill, very stiff clay, dense sand, very dense sand and hard clay, respectively, starting from the surface. In addition to finite element modeling, the surface settlements are also predicted by using semi-theoretical (semi-empirical) and analytical methods. The results indicate that the FE model predicts well the short-term surface settlements for a given volume loss value. The results of semi-theoretical and analytical methods are found to be in good agreement with the FE model. The results of predictions are compared and verified by field measurements. It is suggested that grouting of the excavation void should be performed as fast as possible after excavation of a section as a precaution against surface settlements during excavation. Face pressure of the TBMs should be closely monitored and adjusted for different zones. Keywords Surface settlement prediction _ Finite element method _ Analytical method _ Semi-theoretical method _ EPB-TBM tunneling _ Istanbul Metro Introduction Increasing demand on infrastructures increases attention to shallow soft ground tunneling methods in urbanized areas. Many surface and sub-surface structures make underground construction works very delicate due to the influence of ground deformation, which should be definitely limited/controlled to acceptable levels. Independent of the excavation method, the short- and long-term surface and sub-surface ground deformations should be predicted and remedial precautions against any damage to existing structures planned prior to construction. Tunneling cost substantially increases due to damages to structures resulting from surface settlements, which are above tolerable limits (Bilgin et al. 2009).

实验室血清学常用检测方法

常用血清学检测方法介绍 一、酶联免疫吸附试验诊断技术 目前,该项技术已在兽医学上得到广泛的应用,大多数动物传染病都已经研制成ELISA检测方法。 1、酶联免疫吸附试验的原理 ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。在测定时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反应的结果,使测定方法达到很高的敏感度。 2、ELISA的类型 根据试剂的来源和标本的情况以及检测的具体条件,可设计出各种不同类型的检测方法。用于动物疫病检测的ELISA主要有以下几种类型: ①.双抗体夹心法测抗原 双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法。在临床检验中,此法适用于检验各种蛋白质、微生物病原体第二价或二价以上的大分子抗原,但不适用于测定半抗原及小分子单价抗原,因其不能形成两位点夹心。例如猪瘟病毒检测ELISA、禽流感病毒抗原捕获ELISA,就是根据这种原理设计的。 ②.双抗原夹心法测抗体 反应模式与双抗体夹心法类似。用特异性抗原进行包被和制备酶结合物,以检测相应的抗体。与间接法测抗体的不同之处为以酶标抗原代替酶标抗抗体。乙肝HBs的检测常采用本法。本法关键在于酶标抗原的制备,需要根据抗原结构的不同,寻找合适的标记方法。 此法中受检标本不需稀释,可直接用于测定,因此其敏感度相对高于于间接法。此外,该方法不受被检动物种属差异的限制。

Plaxis中常见问题集锦

1 问:Geo FEM, Plaxis, Z-Soil软件比较?2008/6/5 9:34:48 答:三者针对某个算例计算结果相差不大,误差在可接受范围之内。 就易用性来说,Plaxis好于Z-Soil好于GEO。Plaxis大家都用得很多了,Z-Soil的建模可以在前处理模块中用CAD元素绘制,或者通过dxf文件导入;GEO4只能输入剖面线的坐标,比较烦琐。Plaxis和Z-soil基本可以解决岩土工程所有问题,但GEO4由于建模功能的限制,只能解决隧道、边坡等相关问题;Plaxis和Z-Soil可以进行渗流分析(非饱和)包括流固偶合分析。 总的来说,Plaxis和Z-Soil是专业的岩土工程有限元程序;GEO FEM是GEO4里面的一个工具包,而GEO4类似于国内的理正一样,是遵循Eurocode的设计软件。 2 问:在plaxis中,用折减系数作出它的几个滑裂面,如何查看滑裂面的角度、圆心、半径等 这些滑裂面的相关参数呢? 2008/6/5 9:36:26 答:使用强度折减法,不用假定slip surface,故不会有这些数据。 3 问:Plaxis怎么模拟路堤分步填筑?在实际施工中,填筑不是一次加载的,可能先填一半, 过个月再填一半,而且这一半也不是一次填完,要在几天内完成,请问怎么在Plaxis中模拟,怎 么设置可以反应填筑速率,请高手指教? 2008/6/5 9:47:25 答:手册里有相关例子,你可以参考一下lesson 5。 堆载速率可以通过设置堆载这个stage的时间间隔来设置。如果只有基本模块,可以设置mstage 的数值。mstage=1.0,说明100%施加上去了,mstage=0.1,说明只有10%的荷载。由于Plaxis 不能设置load function,比较麻烦。当然,你可以将一层土细分成几个stage完成,也可以实 现。 4 问:Plaxis 3D 用这个软件分析基坑时,基坑是钢格栅喷混凝土支护,支护用板来模拟,E I和EA中的I和A分别指哪个面的惯性矩和面积,以及单位后面的/m应该是哪个长度? 2008/6/5 9:49:13 答:应该是: A=沿着洞轴方向L×厚度d E是弹性模量 I是惯性矩 5 问:在网上看到有人怀疑Plaxis 3D Foundation和3D Tunnel的真三维性,有人说它们不是 真正的三维计算,有谁知道是怎么回事吗? 2008/6/5 9:59:42 答:Plaxis 3D Tunnel计算内核是三维的。但是目前只支持平面拉伸建模,建附加模型还存在困 难。3D Tunnel的确不能生成复杂的斜交隧道。 3D Foundation是专门解决基础问题的三维有限元计算软件。其解决基础问题要比FLAC3D要专 业,特别是考虑了一些工程实际,但开放性不如FLAC3d。近期3D Foundation将在此方面有重大 改进,新版本前处理借用GID作为前处理工具。Plaxis 系列优点长处是其理论,尤其是hs和 hs-small模型。 6 问:最近在算一个基坑,很好的地质条件,桩、撑刚度都取得很大,居然算出来水平位移始终 都有70mm左右,但用同济启明星算水土分算,并且参数都没有取最大值,算的结果只有17mm左 右。深圳规范要求水平位移不超过30mm,要是用Plaxis是很难算出小于规范值的结果的,事实 上,也不至于有那么大的位移的? 2008/6/5 10:05:32 答:主要问题是现在很多地质报告都不提供三轴的试验参数:例如E50模量,Eur模量,Es模量, 有效强度指标等;土体的本构参数比较特殊,要做特殊的试验,因此一般的项目参数方面的确有 问题。不过,即便是只有Es模量和直剪固快指标,通过换算和引入K0、孔隙比、Cc,Cs等其他 参数,也是可以得到其他需要的参数,不过这需要比较扎实的本构模型方面的知识和岩土工程经 验,知道不同的本构适合模拟什么土层,知道本构的优点和局限性,这对使用者的要求的确比较 高。 7 问:隧道已经组成一个类组,所以一定要对其进行材料定义。如果不定义得话,就不能对其 进行网格划分,这要怎么解决呢? 2008/6/5 10:08:42 答:你是不是只想模拟基坑开挖对既有隧道结构的影响,而省略掉前面隧道开挖过程的模拟。 这样的话,结果恐怕很难正确,而且会碰到你所说的问题。因为隧道在基坑开挖前,有一定的受 力状况,这需要模拟隧道开挖过程才能得到其受力状况,基坑开挖的影响也是在其这个受力状况

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