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克隆技术简介
克隆技术介绍 张勋学号：160820216 摘要克隆技术是生命科学技术领域里非常重要的部分，随着新时代的到来，克隆技术在人类生产生活中将发挥更加重要的作用。人们享受着克隆技术带来的巨大好处，但与此同时，克隆技术对人类的可持续发展也提出了问题和挑战。本文是通过从实质、方法、应用价值等方面对克隆技术进行一些介绍。 一、克隆技术实质 1963 年J.B.S.Haldane在题为“人类种族在未来二万年的生物可能性”的演讲上采用“克 隆(Clone)”的术语。学家把人工遗传操作动物繁殖的过程叫“克隆”，这门生物技术叫“克隆技术”，其本身的含义是无性繁殖，即由同一个祖先细胞分裂繁殖而形成的纯细胞系，该细胞系中每个细胞的基因彼此相同。早在1938年，德国胚胎学家Speman 最早提出克隆设想。1962年，英国剑桥大学的Gurdon进行了青蛙胚胎核移植，获得成年蛙。在经历半个多世纪的研究后，终于在1996年的7月5日，在苏格兰罗斯林研究所中，随着用体细胞克隆出来的小羊多莉的诞生，哺乳动物克隆技术真正的来到我们面前。克隆技术作为人类在生物科学领域取得的一项重大技术突破，反映了细胞核分化技术、细胞培养和控制技术的进步，它对于扩大良种动物群体，提高畜群的遗传素质和生产能力，拯救濒危动物等的方面而言是迄今为止最为理想手段。 克隆也可以理解为复制，就是从原型中产生出同样的复制品，它的外表及遗传基因与原型完全相同，但大多行为思想不同。时至今日，“克隆”的含义已不仅仅是“无性繁殖”，凡是来自同一个祖先，无性繁殖出的一群个体，也叫“克隆”。这种来自同一个祖先的无性繁殖的后代群体也叫“无性繁殖系”，简称无性系。简单讲就是一种人工诱导的无性繁殖方式。但克隆与无性繁殖是不同的。克隆是指人工操作动物繁殖的过程，无性繁殖是指：不经过两性生殖细胞的结合由母体直接产生新个体的生殖方式。 植物基因的克隆技术是生命科学研究的重要组成部分，是现代生命科学技术中最核心的内容，它是随着20 世纪70 年代初DNA 体外重组技术的发明而发展起来的，其目标是识别和分离特异基因并获得基因完整序列，确定其在染色体上的位置，阐明其生化功能，并利用生物工程手段应用到生产实践中去。一般来讲，基因克隆的策略可分为两种途径：正向遗传学途径和反向遗传学途径。 正向遗传学途径以待克隆的基因所表现的功能为基础，通过鉴定基因的表达产物或表型性状进行克隆，如功能克隆和表型克隆等；反向遗传学途径则着眼于基因本身特定的序列或者在基因组中的特定位置进行克隆，如定位克隆、同源序列法克隆等；随着DNA测序技术和生物信息学的发展，又产生了电子克隆等新兴克隆技术。目前，在玉米，水稻、油菜、拟南芥、烟草、番茄等多种植物中，已经克隆了许许多多与植物的产量、品质、抗性及农艺性状等相关的基因。现对在植物基因克隆过程中运用的主要技术进行综述，以把握植物基因克隆技术的发展历程，并对未来的发展趋势进行展望。
单克隆抗体生产为何要多次克隆专一抗体检验阳性细胞
课本中的图解谈到了在筛选培养基选择了杂交瘤细胞之后，专一抗体检验阳性细胞需进行多次克隆后检查，其机制和原理，教参与课本都没有解释清楚，经查询专业医药生产文章得知以下解释： 筛选培养基得到的专一阳性克隆需再次克隆的原因： 可以简单理解为： 1.可能含有不分泌抗体的细胞或有多株分泌抗体的细胞 2.刚融合的细胞不稳定 一般再经三次克隆选择后，才能达到100%阳性克隆。 细解做法为： 第一次筛选培养（HAT）：去除无关细胞，得到杂交瘤细胞。将融合的细胞悬浮于HAT培养基中，加入到96孔板内，根据情况2-3天换液一次，每次吸去二分之一到三分之二培养液，再加入等量新鲜培养液。7-14天改用HT培养液，14天以后用普通的RPMI1640完全培养液。因为杂交瘤数量很少，多半不易存活，所以通常要加入饲养细胞才能使其繁殖，常用小鼠腹腔巨噬细胞、脾细胞和胸腺细胞。能释放某些生长刺激因子，并能满足杂交瘤细胞对细胞密度的依赖性。（有的死，有的活，活的有些可以用单一抗体检验阳性，但阳性孔可能由1~多个细胞克隆得到） 第二次筛选：初筛阳性克隆可能含有不分泌抗体的细胞或有多株分泌抗体的细胞，且刚融合的细胞不稳定，故应尽早进行克隆。克隆后的细胞集团生物学特性完全相同。（将其单个分开）融合后的杂交瘤细胞要经过三次克隆化才能达到100%的阳性克隆。常用方法：有限稀释法和软琼脂法。有限稀释法，把杂交瘤细胞悬液稀释后，加入到96孔板中，理论上每孔一个细胞，第一次克隆化时用HT培养液，以后的克隆化可以用不含HT的RPMI1640培养液。也要加入饲养细胞。软琼脂法，在培养液中加入0.5%左右的琼脂糖凝胶，细胞分裂后形成小球样团块，由于培养基是半固体的，可用毛细管将小球吸出，团块经打碎后，移入96孔板继续培养。
《我看克隆人类》辩论赛反方初二辩论赛_反方材料
反方： 反对克隆人类 陈述： 大家好！我是反方的第一任辩手。我方坚决反对克隆人类！理由有四：一、目前克隆人类技术不够成熟；二、克隆人类违反了社会伦理；三、克隆人类违背了现今法律；四、克隆人类有违科学道德。就这四点而言，我方认为克隆人类这件事情是不可取的！至少就目前而言，是坚决不能就此进行试验的！ 理由一：目前克隆人类技术不够成熟 从《奇妙的克隆》一文中众多的克隆动物失败经验，我们不难看出，克隆动物有相当大的风险，更别说是克隆人类这一形态结构极为复杂的生物会了。更重要的是，科学家甚至还未克隆过人类的近亲大猩猩。 事实上，克隆羊“多莉”的成功，经历了277头克隆羊实验失败的波折，怪胎、畸形层出不穷，这一幕如果在克隆人时重演，谁来为277条生命的夭折负责？当人类刚进入21世纪，就不断有科学家声称，他们很快将使克隆人问世，但是人类至今也未真实地见到克隆人。由此人们起码可以感觉到做克隆人在技术上是困难的，对科学家实际能力的估计值得商榷。 美国赞成克隆人类的一派却说自己手上已有数百名申请克隆自己的人的名单，并说只要检查过克隆的胚胎，确定没有缺陷后才植入女性的子宫，就可以防止诞生出畸胎。然而，曾成功克隆过动物的科
学家说，假如以目前的科技能做得到这些检查，动物克隆实验的失败率就不会那么高。 其次，在克隆过程中，不仅仅存在被克隆体的安全问题，连提供子宫的代母都会有生命危险！ 那么，克隆人类会有什么结果呢？美国麻省科技研究所生物学家赞尼斯奇有以下估计： 1、在开首100次试验中，预料会约有5个克隆胚胎能完成怀孕诞生。 2、代母可能会发生危险的流产或死产，至少怀孕期十分辛苦，因为胚胎和胎盘都会比正常大。有些克隆动物出生时体重是正常的两倍。 3、成功出生的婴儿有些可能会在数日或数星期内因心脏、肾脏、肝脏或肺脏不正常而夭折。 4、或者会有一两个婴儿存活下来，表面上很正常，但他们的大脑是否正常？他们的细胞会否恰当分裂，不至于早衰或得癌症？ 因此，克隆技术应用在动物身上还只是处在实验的初级阶段，实验过程不仅十分困难，更有安全隐患！一味地对这种不成熟技术抱有乌托邦式的幻想而不曾考虑其中危险的对方辩友，觉得这样幼稚轻率的技术应当应用于人身上，我感到十分可笑！ 理由二：克隆人类违反了社会伦理 克隆动物可能与被克隆的动物年龄同样。1999年罗斯林研究所的科学家研究发现，多莉羊细胞中控制寿命的重要物质端粒比预期的
克隆人
克隆人的技术可行性和伦理学评价 1.1克隆技术的发展 克隆，是Clone的译音，意为无性繁殖，克隆技术即无性繁殖技术。前不久报道的英国罗斯林研究所试验成功的克隆羊多利，是首次利用体细胞克隆成功的，它在生物工程史上揭开了新的一页。 1.2克隆人概述 1938年汉斯·斯皮曼建议用成年的细胞核植入卵子的办法进行哺乳动物克隆1962年约翰·格登宣布他用一个成年细胞克隆出一只蝌蚪，从而引发了关于克隆的第一轮辩论 1984年斯蒂恩·威拉德森用胚胎细胞克隆出一只羊。这是第一例得到证实的克隆哺乳动物 1996年第一个用成年哺乳动物细胞克隆出的个体----克隆羊多莉出世了 2000年美国科学家用无性繁殖技术成功地克隆出一只猴子"泰特拉" ，这意味着克隆人本身已没有技术障碍 2001年美、意科学家联手展开克隆人的工作 克隆人畸形率极高？ 近年来，美意科学家打算克隆人类的举动引起了国际上的广泛关注。澳大利亚医生麦克拜恩认为，按照克隆动物时出现的畸形率，克隆人类时将可能出现不可接受的高畸形率。他指出，试管受精的畸形率与自然受精是一样的，但克隆方法则高得多。以克隆羊为例，每例成功之前都有许多起胚胎发育过早或者排斥发生。 麦克拜恩最后总结说，在伦理上，克隆人类试验得不到足够的支持；从技术角度来看，失败率将会非常高，所以它不太可能成功。 对此，俄罗斯科学家也表示，克隆人类的努力“百分之九十九会制造出怪物”。该专家警告，差不多所有克隆人类的努力，都会导致可怕的生理缺陷。 说客安蒂诺里：我为什么要克隆人 1、安蒂诺里认为自己是以一种安全和负责任的方式来发展人类克隆技术治疗不孕的。 2、同行科学家、新闻媒介和公众的强烈反对，是因为对人类克隆技术缺乏完全的理解。 3、克隆人是禁止不了的。
克隆
8、神奇的克隆（第二课时） 教学目标： 1、能正确、流利、有感情地朗读课文。 2、了解克隆技术的一般常识，体会克隆的神奇，激发学生对科学的兴趣和热爱。 3、抓住文章内在写作的“线”，指导学生有序写作，从写作的角度教阅读。 教学过程： 一、通读全文，交流课文知识。 1、师导入：《神奇的克隆》是一篇知识性文章，里面有不少关于克隆的知识。知识要记，别人才会说你有文化，知识多。给大家五分钟，边读边记，看谁记得快，克隆知识记得多。 2、（生读课文，边读边记）五分钟后交流： ●我知道克隆就是无性繁殖。（师：帮你记在黑板上） ●一般的高等动物，都是有性繁殖的，都有爸爸妈妈。（师：对，高等动物是有性繁殖） ●有一些植物先天会克隆。（师：哪些植物？）马铃薯、柳树、仙人掌等。（师：记在黑板上）植物的克隆还有压条和嫁接。（读书真细心，这些细节都记住了。） ●1996年，世界上克隆出了第一只克隆羊，它是高等动物的克隆。（贴在黑板上） ●一些细菌也会克隆，一分为二，再分为四，四分为八……这是低等生物的克隆。 3、学生自由读黑板上的知识内容。师问：这些都是关于克隆的知识，有关于克隆作用的知识吗？（根据回答继续板贴句子） ●克隆可以挽救濒临灭绝的动物，可以培植人体皮肤进行植皮手
术，能够“制造”出耳朵、肝脏等人体“配件”。（指名读这个句子，理解“制造”“配件”含义。） 4、初读小结，质疑导学。 关于克隆，可以写一本书，两本书，甚至几本书。我们的课文介绍了一点点，你肯定会觉得不满足，想发问。老师读到克隆羊的时候就想：为什么那只羊用乡村歌手的名字命名为“多利”呢？读书的时候，你有什么问题吗？（生提问） 这些问题，这些知识都很有意思，很多知识我们可以网上查询去弄明白。我上网查过后才知道，研究克隆的首席科学家，他最喜欢听女歌手多利帕顿的歌，因此给克隆羊取名“多利”。要是你将来克隆出了一只小猪，你又很喜欢周杰伦，你可以叫那只小猪为“杰伦”。 5、学生自由读黑板上记下的克隆知识。 二、再读课文，抓住“内在的线”。 师过渡：黑板上的内容，很乱，东一句西一句的。《神奇的克隆》是一篇说明文。我们现在看到的课文已经是一个成品了。说明文，成品之前要经过好几个步骤。第一步，将你要说明的那个东西的知识点，全部罗列出来，不管它有没有顺序，乱不乱。就像我们现在黑板上的。第二步，给这些凌乱的、没条理的知识点进行整理、归归类。 1、接下来，请你默读课文的二至五自然段，思考：黑板上的内容该怎样整理，你会排排序吗？ 2、生默读后回答：先是有性繁殖，再无性繁殖也就是克隆。然后写植物的克隆，低等生物的克隆，高等生物的克隆。（根据学生叙
大片段DNA的克隆
通常超过3Kb以上的片段不太容易构建到载体上，成功率也是非常的低，根据笔者多年的经验成功克隆过5kb左右的基因片段，先将一些心得与大家分享： 第一、PCR产物确保正确，扩增长片段往往会出现点突变，缺失插入突变，甚至是并非自己想要的片段，此时就要要求所用的TAQ酶是高质量高保真高前进能力的酶——推荐primerstar，并且保证所设计的引物的特异性，如果有错配的可以尝试不加MCS的巢式引物，拿第一次PCR产物再用加MCS的引物去扩，可保证起特异性和效率性。 第二、连接要求有效，通常大片段与载体相连接由于空间位阻的原因不太容易得到阳性克隆，所以一定要保证以下几点-目的基因绝对的大量保证在载体的10-15倍摩尔比值；载体最好不要太小，可以直接尝试表达载体；最好使用过夜16度连接（24h以上），快速连接的效果对于大片段来讲并不占优势；连接酶可适当多加。 第三、转化要高效，由于大片段克隆到载体上通常加上载体会比较大，有时甚至超过10-20kb，这时会严重影响转化效率和细菌的生长速度，可以考虑电转或者，300-400ul的感受态细胞，严格按要求转化，使用DH5a时，可能消耗能量的原因，细菌长得很慢，可以考虑用TOP10,或DH5a多培养一段时间 第四、不轻易放弃，长出来的菌因为质粒很大，去做菌落PCR不一定能检测出来阳性菌，可以考虑照样接种，次日提质粒酶切鉴定。也可以多对比几个不同的载体，相信一定能做出来的。 第五、实在是做不出来，将其肢解成多个小片段，每个片段构建到T载上，最后拼接到一起。 第六、克隆大片段真核基因，要保证高质量的RNA，以确保完整的片段，并且需要高质量的逆转录酶，可以将RNA的量加到说明书的上限，保证足够浓度的完整的cDNA片段。如果大片段的外显子不是很多，还可以考虑用基因组或BAC/Y AC来调取目的基因。 原文地址:https://www.wendangku.net/doc/102778535.html,/biotech/exp/molbio/DNA/2010/a818444974.html
单克隆抗体制备过程中经过两次筛选
单克隆抗体制备过程中经过两次筛选 单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。 第一次筛选的原理与方法：细胞融合后，杂交瘤细胞的选择性培养是第一次筛选的关键。普遍采用的HAT选择性培养液是在普通的动物细胞培养液中加入次黄嘌呤（H）、氨基喋呤（A）和胸腺嘧啶核苷酸（T）。其依据是细胞中的DNA合成有两条途径：一条途径是生物合成途径（“D途径”），即由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程，而HAT培养液中氨基喋呤是一种叶酸的拮抗物，可以阻断DNA合成的“D途径”。另一条途径是应急途径或补救途径（“S途径”），它是利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸，两种酶缺一不可。因此，在HAT培养液中，未融合的效应B细胞和两个效应B细胞融合的“D途径”被氨基喋呤阻断，虽“S途径”正常，但因缺乏在体外培养液中增殖的能力，一般10d左右会死亡。对于骨髓瘤细胞以及自身融合细胞而言，由于通常采用的骨髓瘤细胞是次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶缺陷型（HGPRT）细胞，因此自身没有“S途径”，且“D途径”又被氨基喋呤阻断，所以在HA T培养液中也不能增殖而很快死亡。惟有骨髓瘤细胞与效应B细胞相互融合形成的杂交瘤细胞，既具有效应B细胞的“S途径”，又具有骨髓瘤细胞在体外培养液中长期增殖的特性，因此能在HA T培养液中选择性存活下来，并不断增殖。 第二次筛选的原理和方法：在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应B淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应B淋巴细胞的特异性是不同的，经HA T培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上30%的孔中细胞数为0时，才能保证有些孔中是单个细胞），再由这些单细胞克隆生长，最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。因此，单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。 单克隆抗体制备的基本原理与过程 原理： B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。 过程： 1）免疫脾细胞的制备制备单克隆抗体的动物多采用纯系Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。 2）骨髓瘤细胞的培养与筛选在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT 的活性（恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活）。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养，融合前24h换液一次，使骨髓瘤细胞处于对数生长期。 3）细胞融合的关键: 1技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。 2融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一个干净的环境，以及适宜的无菌操作技术。 4）阳性克隆的筛选应尽早进行。通常在融合后10天作第一次检测，过早容易出现假阳性。检测方法应灵敏、准确、而且简便快速。具体应用的方法应根据抗原的性质，以及所需单克隆抗体的功能进行选择。常用的方法有RIA法、ELISA法和免疫荧光法等。其中ELISA法最简便，RIA法最准确。阳性克隆的筛选应进行多次，均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增。 5）克隆化克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进行并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的，有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。克隆化的方法很多，而最常用的是有限稀释法。 （1）显微操作法：在显微镜下取单细胞，然后进行单细胞培养。这种方法操作复杂，效率低，故不常用。 （2）有限稀释法：将对数生长期的杂交瘤细胞用培养液作一定的稀释后，按每孔1个细胞接种在培养皿中，细胞增值后成为单克隆细胞系。第一次克隆化时加一定量的饲养细胞。由于第一次克隆化生长的细胞不能保证单克隆化，所以为获得稳定的单克隆细胞株需经2～3次的再克隆才成。应该注意的是，每次克隆化过程中所有有意义的细胞都
《我看克隆人类》辩论赛正方
正方： 我看克隆人类 陈述： 大家好！我是正方的第一任辩手，首先请容我在此为大家解释一下什么是克隆人，克隆人是指利用克隆技术来复制出一个和被复制的人基因相同的一个人或者部分组织。而我方认为克隆人对人类的发展是利大于弊的，其标准是克隆人能使人类发展指数提高。我方所引用的联合国发布的人类发展指数包含人均预期寿命和人均GDP的对数等。我方将就此来阐述观点： 1)、克隆技术可解除那些不能成为母亲的女性的痛苦。克隆实验的实施促进了遗传学的发展，为“制造”能移植于人体的动物器官开辟了前景。 2)、克隆技术也可用于检测胎儿的遗传缺陷。将受精卵克隆用于检测各种遗传疾病，克隆的胚胎与子宫中发育的胎儿遗传特征完全相同。 3)、克隆技术可用于治疗神经系统的损伤。成年人的神经组织没有再生能力，但干细胞可以修复神经系统损伤。 4)、克隆人可以治愈包括白血病在内的很多绝症和慢性疾病，不一定要培育出完整的人再去剥夺器官，克隆人就代表了和克隆器官相同的技术。
5)、克隆人可以保留优秀基因，优化物种，避免自然进化的缓慢和随机。在研究过程中，可以增长我们胚胎学遗传学的知识，为将来攻克其他疾病作准备。 6）、克隆人可以促使我们重新思考人的意义所在，找到在生物意义背后更深层的东西，就像当年的黑奴制度最终促成了民主的进步，克隆人也会促进政治和文化的再次进步。 7）、“克隆”作为一项新生的科学技术手段，是科学发展到一定阶段的必然产物，它标志着人类科学技术新的发展阶段的到来，它为人类探索生命的奥秘，研究生命的发生、发展的规律提供了一项重要的技术手段，它与人们业已掌握的其他科技手段一样，应予以充分的肯定。 8）、“克隆”技术在保护珍贵稀有动物及医学方面有巨大的实用价值。人们完全可以运用这种技术大量繁殖出濒临灭绝的动物，以使其物种不致绝灭，也可以运用该技术大量繁殖供实验用的各种动物。可见，“克隆”技术不仅先进，而且有一定的实用价值。 9)、“克隆”是一种科学技术，人类既然能掌握它，就一定有办法控制它，而不会任由其危害人类社会。人们可以采取一些措施，如制订法律或作出一些规定等来限制这项技术的使用范围。所以大可不必谈“克隆”色变，视“克隆”为洪水猛兽。 10)、“克隆”技术是医学上一个伟大的里程碑。人类可以利用“克隆”技术复制出人类器官，以替换人类自身残废或功能不全的器官，或弥补人类自身缺失的器官。由于被复制的器官来源于自身的体细
单克隆免疫球蛋白血症
单克隆免疫球蛋白血症 单克隆免疫球蛋白血症可分为原发性单克隆免疫球蛋白血症和继发性单克隆免疫球蛋白血症。其病因尚不明了，可能与多种因素刺激导致单克隆B细胞-浆细胞过度增殖并分泌单克隆免疫球蛋白有关。原发性单克隆免疫球蛋白血症患者一般不具有多发性骨髓瘤或其它B淋巴细胞增生性疾病的症状和体征（如贫血，淋巴结肿大，浆细胞瘤，骨损害和淀粉样沉积）。有些患者常常是因蛋白电泳偶然发现血、尿中出现M蛋白而诊断。目前的处理标准是观察不需治疗。 1疾病简介 单克隆免疫球蛋白血症既可是浆细胞病的特征，也可出现于某些浆细胞疾病或原因不明。伴发于非浆细胞病的单克隆免疫球蛋白血症称为继发性单克隆免疫球蛋白血症；原因不明的单克隆免疫球蛋白血症称为“意义未明单克隆免疫球蛋白血症”(MGUS)，其诊断依据是血中出现单克隆免疫球蛋白，但既无浆细胞病也无可引起免疫球蛋白增多的其它疾病的存在。意义未明单克隆免疫球蛋白血症无需特殊治疗，但需长期随诊，因为部分患者可发展为多发性骨髓瘤。 2疾病分类 单克隆免疫球蛋白血症可分为①原发性单克隆免疫球蛋白血症；②继发性单克隆免疫球蛋白血症。 3定义 意义未明单克隆免疫球蛋白血症（MGUS）也称为原发性单克隆免疫球蛋白血症，其特点是患者无恶性浆细胞病或可引起免疫球蛋白增多的疾病，单克隆免疫球蛋白水平升高有限（血M蛋白小于30g/l），骨髓浆细胞小于10%，尿中少量或无M蛋白，无溶骨性损害，无浆细胞病相关性贫血、高钙血症或肾功能不全。无需特殊治疗，需要长期随诊，因为部分患者可发展为多发性骨髓瘤，巨球蛋白血症或淋巴瘤。患者多因体检或患其它无关疾病进行检查时发现。 4发病原因 病因尚不明了，可能与多种因素刺激导致单克隆B细胞-浆细胞过度增殖并分泌单克隆免疫球蛋白有关。
植物克隆的原理
释介 植物克隆释介 植物克隆 “克隆”是英文clone的译音，《新英汉词典》翻译为“复制、无性系”。简单地说，植物克隆也是植物的无性繁殖方法。 克隆之所以能够实现，是因为植物的细胞具有全能新，植物的器官具有再生机能。植物体的每一个活细胞都包含植物生长发育所必需的全部基因，都具有再生成一个完全的有机体所需的遗传信息。同样，植物的某一部分，一个器官或部分器官，在脱离母体之后，在一定的条件下，可以通过自身生理结构的调整，再次形成完整的植物个体。 国内外植物克隆的方法有试管组培和非试管微组织快繁两种。 试管组织培养是将外植体（即离体组织、器官或细胞）放置在试管等器皿中进行培养的方法。试管组培的培养基有固体和液体两种，所有培养过程必需在无菌的条件下进行，并且与控温、人工光照等措施密切结合。因此，试管组培设施、设备投资大，人员的专业素质要求高。 非试管微组织快繁技术是将外植体放置在室内外普通沙质培养基上进行培养的方法。由于非试管快繁所取组织相对较大，培养基又采用沙质无机物，故不容易被微生物感染，操作环节少，操作要求低，设施投资较小，易推广应用。 植物细胞的遗传性 无性繁殖之所以能成功，是因为植物每个活细胞都包含生产发育所必需的全部基因，这就是植物细胞在遗传性中表现出的全能性。即
是说：高等植物的细胞分裂，都能保留它们遗传上的任何一个潜在能力，使具有复杂机构的植物离体部分，经过细胞重复分裂繁殖而产生同于母本的各部分组织和器官。这为植物扦插繁殖提供了强有力的证明。全光雾插育苗技术在我国得到迅速发展，就是利用这个理论，将植物的嫩枝插穗在无菌和有助于生根的物质、光照、温度、水分、空气等条件下培养成与母体遗传信息完全相同的植株。 植物器官的再生机能 植物体的某一部分受伤被切除而植物整体的协调受到破坏时，能够表现出一种弥补损伤和恢复协调的机能，这种机能为植物的补充反应，即植物的再生作用。植物的嫩枝扦插育苗，就是利用植物器官的再生性能，从亲本上切取的枝条制成插穗，并及时进行扦插，插穗在适宜生根条件下，通过自身生理结构的调整，再次形成完整的植物个体。
克隆技术能够给人类带来哪些益处与弊处
《奇妙的克隆》教学设计 【教学目标】 1、培养学生严谨求实的科学态度和勇于创新的科学精神。 2、进一步了解说明顺序和说明方法。 3、引导学生养成搜集信息，筛选信息的学习习惯。 【教学重点】 培养学生严谨求实的科学态度和勇于创新的科学精神，进一步了解说明顺序和说明方法。 【教学难点】 培养学生严谨求实的科学态度和勇于创新的科学精神，引导学生养成搜集信息，筛选信息的学习习惯。 【教学方法】 阅读讨论探究。 【教学内容及过程】 第一课时 〖课前学习〗 1、阅读课文，借助工具书解决字词障碍。 2、查找克隆的相关资料，如文字资料、图片资料、实物资料。 3、思考：以克隆为例，谈谈对“科学是一把双刃剑”的理解。 〖课文学习〗 一、课文导入 1、导入： 古希腊有位哲学家曾经说过“世上不可能有两片完全相同的叶子”，但是，现在情况却有了变化，有一种新兴生物技术“克隆”，或许可以做到这一点。那么克隆是什么呢?它奇妙在哪里呢?今天，就让我们一起走近──“奇妙的克隆”。
2、展示查找的资料。 自然界中哪些动、植物先天就具有克隆的本领? (出示实物、图片：秋海棠落叶生根、富贵竹插枝即活、土豆、地瓜发芽生长、各种水果、蔬菜、稻麦的嫁接、水螅除夏初和秋末外通常进行无性生殖即身体长出芽体等) 二、整体感知 1、检查预习： 请学生快速自读课文，概括各部分主要内容，并出示问题，供小组讨论。 问题： ⑴ 课文使用了四个小标题，有什么作用? ⑵ “克隆”的突出特点是什么? ⑶ 第二小节写了许多实验，为什么要这样安排材料? ⑷ “多利”的诞生有什么重大的意义和影响? ⑸ 克隆技术能够给人类带来哪些益处与弊处? 明确： ⑴ 课文使用四个小标题，使全文内容层次分明，条理清晰。先写克隆的含义，接着写克 隆实验，再写克隆的发展，最后写克隆对人类的造福和对克隆的思考。 ⑵ 理解“克隆”的关键是：来自一个祖先，无性繁殖。 ⑶ 作者没有用时间顺序来介绍“克隆”实验，而是用两条线索来组织材料：一条是以中 外科学实验为线索，这样写突出了中国科学家在克隆实验方面的研究成果和贡献;一条是 以实验对象即由鱼类、两栖类到哺乳类为线索来安排材料，这样写便于认清克隆技术发展的脉络。 ⑷ 多利”的诞生标志着克隆研究取得新的进展和重大突破，而且这个结果证明：动物体 中执行特殊功能，具有特定形态的所谓高度分化的细胞与受精卵一样具有发育成完整个体的潜在能力。也就是说，动物细胞与植物细胞一样，也具有全能性。 ⑸ 课文从三方面来写克隆技术造福于人类：第一，克隆可以有效地繁殖具有“高附加值 的牲畜”;第二，克隆可以用来挽救珍稀动物;第三，克隆对于人类疾病姆乐巍。 三、内容研读
意义未明单克隆免疫球蛋白血症(专业知识值得参考借鉴)
本文极具参考价值，如若有用请打赏支持我们！不胜感激！ 意义未明单克隆免疫球蛋白血症(专业知识值得参考借鉴) 一概述意义未明单克隆免疫球蛋白血症（MGUS）是指血中存在单克隆免疫球蛋白（M蛋白＜3g/dl），尿中少量或无M蛋白，骨髓浆细胞比例小于10%，无终末脏器损伤的一类良性疾病。这里的终末脏器损伤是指多发性骨髓瘤（MM）相关的CRAB表现，包括高钙血症、肾功能不全、贫血和溶骨性损伤。根据M蛋白类型主要分为非IgM型（IgG或IgA型）、IgM型和轻链型MGUS，其中IgG型最为常见。偶见双克隆型MGUS。 患者多因体检或患其他无关疾病进行检查时偶然发现，处理原则是无需治疗、长期随诊；监测M 蛋白是否稳定，从而判断疾病是否出现转化进展。 二病因病因尚不明了。遗传因素、环境因素、放射线、化学药品（如杀虫剂、除草剂等）对该病的发生可能存在一定影响。随着年龄增长患病风险增高，50岁以上2%～3%，70岁以上约5%；此外，人种（黑人）、男性、肥胖者患病风险相对增高。 三临床表现患者一般不具有多发性骨髓瘤或其他B淋巴细胞增生性疾病的症状和体征，如贫血，骨痛，肾损害等。有些患者常常是因蛋白电泳偶然发现血、尿中出现M蛋白而确诊。国外资料显示某些患者因为正常的免疫球蛋白下降，感染的风险较正常人有所升高；个别患者因为已出现骨微结构的改变，骨质疏松和骨折的风险相对升高；还有少数患者血栓风险相对升高；至于M蛋白诱发的雷诺现象、溶血性贫血、免疫性血小板减少、凝血异常、皮肤改变等非常罕见。 四鉴别诊断MGUS首先要和多发性骨髓瘤（MM）进行鉴别。血常规、血肌酐、血钙、白蛋白、M蛋白水平、骨髓浆细胞、影像学检查可助两者的鉴别。由于MM的核型和FISH（荧光原位杂交）异常在MGUS中也可以存在，所以核型分析和FISH对于MGUS与MM的鉴别来说意义不大。其他需要鉴别的疾病还有巨球蛋白血症、轻链淀粉样变性、POEMS综合征等（表）。 MGUS MM 贫血 无 常有
外切酶3介导的LIC高效克隆系统操作步骤
The protocol for LIC by Exonuclease III 1. Design the primers with 15-bp overlap; 2. Digestion the vector by proper restriction enzyme; For getting high quality vectors, there are some good tips as follows: 1) The restriction sites we choose should be 5’-overhangs or blunt ends , but it shouldn ’t be 3'-protruding ends ; 2) Digestion by double enzymes; 3) Digestion the vector overnight to make sure complete cleavage as possible; 4. Quantitation the concentration of the vector through running DNA gel and the vector is prepared for LIC; 5. Amplifying the insert by PCR with the overlap primers, gel-purified, and quantitated, the insert is also prepared for LIC;（You can also treat the templates with DpnI, if there are scarcely any background bands and the positive PCR bands are dense and special enough.） 6. Mix the vector and insert in the reaction system as follows: Vector 25-50ng Insert 25-50ng Add ddw to 10ul 10ⅹExo Ⅲ buffer 1ul 7. Place the tube in the ice bath for 5mins ( Make sure the mixture in the tube is cooled to the temperature of the ice bath, and the following approach should also operate on the ice); 8. Add 1ul ExoIII(20units) to the reaction mixture; pipe the mixture for several times ; 9. Place the tube on the ice bath or 4℃ for 60mins; 10. Add 1ul 0.5M EDTA (pH 8.0) to stop the reaction; pipe the mixture for several times; 11. The mixture is then melted at 60℃ for 5mins; 12. Place on the ice bath for 5mins; 13. Centrifuge to concentrate the mixture; 14. Transform the mixture of DNA into DH5α; 15. Incubate the bacteria on the LB plates with proper antibiosis for 16h; 16. Pick up single clone for miniprepare ,analyze by restriction enzyme and further analyze by DNA sequencing.
大片段DNA的克隆
大片段DNA的克隆 通常超过3Kb以上的片段不太容易构建到载体上，成功率也是非常的低，根据笔者多年的经验成功克隆过5kb左右的基因片段， 先将一些心得与大家分享： 第一：PCR产物确保正确，扩增长片段往往会出现点突变，缺失插入突变，甚至是并非自己想要的片段，此时就要要求所用的TAQ酶是高质量高保真高前进能力的酶--推荐primerstar，并且保证所设计的引物的特异性，如果有错配的可以尝试不加MCS 的巢式引物，拿第一次PCR产物再用加MCS的引物去扩，可保证起特异性和效率性。 第二：连接要求有效，通常大片段与载体相连接由于空间位阻的原因不太容易得到阳性克隆，所以一定要保证以下几点-目的基因绝对的大量保证在载体的10-15倍摩尔比值；载体最好不要太小，可以直接尝试表达载体；最好使用过夜16度连接（24h以上），快速连接的效果对于大片段来讲并不占优势；连接酶可适当多加。 第三：转化要高效，由于大片段克隆到载体上通常加上载体会比较大，有时甚至超过10-20kb，这时会严重影响转化效率和细菌的生长速度，可以考虑电转或者，300-400ul的感受态细胞，严格按要求转化，使用DH5a时，可能消耗能量的原因，细菌长得 很慢，可以考虑用TOP10,或DH5a多培养一段时间 第四：不轻易放弃，长出来的菌因为质粒很大，去做菌落PCR不一定能检测出来阳性菌，可以考虑照样接种，次日提质粒酶切 鉴定。也可以多对比几个不同的载体，相信一定能做出来的。 第五：实在是做不出来，将其肢解成多个小片段，每个片段构建到T载上，最后拼接到一起。 第六：克隆大片段真核基因，要保证高质量的RNA，以确保完整的片段，并且需要高质量的逆转录酶，可以将RNA的量加到说明书的上限，保证足够浓度的完整的cDNA片段。如果大片段的外显子不是很多，还可以考虑用基因组或BAC/YAC来调取目的基因。
克隆人有利于人类社会发展
辩论赛立论稿 克隆人有利于社会发展 尊敬的评委，各位观众，大家好，我方所持的观点是克隆人有利于社会的发展。开宗明义，“克隆人”是指一个共同前体通过无性繁殖而形成的一群基因结构相同的细胞或个体，诚然克隆人这一新生事物有其弊端，但从全局来看还是其利大于其弊，下面我将从三个方面来阐述我方观点。 第一，从克隆人的医学价值角度看，克隆人可以为需要器官移植的病人提供更广泛的器官来源，从中克隆人中提取干细胞培育出遗传特征与提供细胞的病人完全吻合的细胞、组织或器官。这将给患白血病、帕金森氏症、癌症等患者带来生的希望。也正因如此，英以超过三分之二的压倒多数票通过一项法案，允许科学家克隆人类早期胚胎，进行“治疗性克隆”研究。 第二，从克隆人的遗传育种价值的角度看，人们利用克隆技术可以克隆出已经去世的人，这将使使痛失骨肉的亲人重温天伦之乐。克隆人的好处其一是可以让那些得不到孩子而非常痛苦的不育患者有自己的孩子。其二，这样的克隆是只用丈夫妻子自己的精子卵子，这就避免了伦理上和心理上的阴影。这对于人类的遗传育种来说意义重大。 第三，从克隆人少数名族保护和科学研究方面看，克隆人可以保护少数民族遗传基因。有很多民族面临着族人越来越少的情况，而克隆人技术的出现将有利于保护这些少数名族。而且更重
要的是，克隆人可被用来研究，以比较和证明环境与遗传对人成长究竟哪一个更重要等问题。 随着社会的发展，克隆人技术在不断地创新和发展，虽然它也存在诸多弊端，例如人们担心克隆人会违背伦理道德，但从整个社会发展来看它还是有利与我们整个社会的和谐发展。正因如此，连同中国在内的很多国家才会积极地支持克隆技术的研究。也正因为这样，比尔〃盖茨说：“当然应该'克隆'人，如果谁第一个掌握了这个技术，他就是我真正的、也是唯一的竞争对手”
克隆人的可行性及可能引发的问题
医学伦理学 克隆人的可行性及可能引发的问题
克隆人的可行性及可能引发的问题 摘要：目前来说，克隆技术仍是一把“双刃剑”。一方面,它给人类带来了诸多利益。另一方面,由于目前还处于摸索阶段,克隆技术本身还有很多需要完善的地方,而且,这项技术本身还存在着被滥用的可能性,从而将引发一系列严重的社会问题和伦理道德问题，导致意想不到的恶果。本文通过对克隆技术的分析和深入探索，并试图分析得出这样的结论：克隆技术尚处于初步发展的状态，还没有完全成形的形成完整体系的克隆技术，以及相关的克隆法律。要想让克隆技术充分发挥其积极的作用，首先要以法为准，以德为先，以人为本。只有使克隆技术和社会管理机制充分均衡协调发展,克隆技术才能趋利避害,成为人类社会发展的真正福音。 关键词：克隆人；社会问题；道德伦理； 自从克隆羊多莉诞生以来,有关克隆人的伦理学争论就一直喋喋不休。世界上的各种政治组织和各国政府都明确反对生殖性克隆,而科学家们则对克隆技术的不完善心存疑虑。为了克服克隆过程中的伦理学障碍和技术缺陷,科学家们在核移植技术的基础上,又发展了异种核移植技术、诱导多能干细胞技术等。诱导的多能干细胞可以分化成各种组织,甚至能发育成个体,这些方法使克隆技术不再破坏胚胎,避免了伦理学纠纷。尽管科学技术在进步,但是人们对克隆人仍有很多不解和困惑[1]。 克隆人技术的风险性 随着克隆羊多莉的诞生，克隆技术进入了一个蓬勃发展的时期。虽然经历过无数次的失败实验，但是不可怀疑的多莉的诞生是一个克隆历史上发展的里程碑，它标志着一种真正意义上的与雌雄生殖细胞融合脱离关系的无性繁殖技术的出现。而且，从基础理论上来说，偶蹄目动物和灵长类动物都是哺乳类动物的不同分支，体细胞结构没有根本差别。也就是说，完成了克隆羊多莉，也就意味着完成其他高等哺乳动物的克隆并不是一件不可能的事情，当然也包括克隆人这一物种。尽管直到现在克隆技术还并不成熟，却证明了新的繁殖方式的可行性。而且这种技术的发展，也只是需要通过研究的时间越来越长去不断探索完善。 然而，作为克隆历史上的里程碑的多莉却不是尽善尽美的。在多莉存活的数年当中，始[1]乔中东，王莲芸. 克隆技术引发的伦理之争[J].生命科学,2012,(11).
免疫算法的克隆选择过程
免疫算法的克隆选择过程 % 二维人工免疫优化算法 % m--抗体规模 % n--每个抗体二进制字符串长度 % mn--从抗体集合里选择n个具有较高亲和度的最佳个体进行克隆操作 % A--抗体集合(m×n),抗体的个数为m,每个抗体用n个二进制编码(代表参数) % T--临时存放克隆群体的集合,克隆规模是抗原亲和度度量的单调递增函数% FM--每代最大适应度值集合 % FMN--每代平均适应度值集合 % AAS--每个克隆的最终下标位置 % BBS--每代最优克隆的下标位置 % Fit--每代适应度值集合 % tnum--迭代代数 % xymin--自变量下限 % xymax--自变量上限 % pMutate--高频变异概率 % cfactor--克隆(复制)因子 % Affinity--亲和度值大小顺序 %% clear all clc tic; m=65; n=22; mn=60; xmin=0; xmax=8; tnum=100; pMutate=0.2; cfactor=0.1; A=InitializeFun(m,n); %生成抗体集合A,抗体数目为m,每个抗体基因长度为n F='X+10*sin(X.*5)+9*cos(X.*4)'; %目标函数 FM=[]; %存放各代最优值的集合 FMN=[]; %存放各代平均值的集合 t=0; %% while t T载体克隆连接原理、制备及载体序列 T载体的定义： T载体（T-Vector）是一种高效克隆 PCR 产物（TA克隆）的专用质粒载体，为线性化载体，无需酶切可直接与具有A末端的PCR产物连接，属于非定向克隆。 T载体的作用原理： 大部分耐热性DNA聚合酶进行PCR反应时都具有在PCR产物的3’末端添加一个“A”的特性（下图红色框内所示位置）。因此，人们在线性化平末端载体的两端分别又人工加上一个额外的T碱基（下图两个红色箭头所示），从而可与PCR克隆产物的A末端互补配对，提高了PCR产物连接和克隆的效率。 T载体进行TA克隆的优势： 相对于另一种非定向克隆——平末端克隆，使用T载体进行TA克隆是一种快速、高效、一步到位的非定向克隆法。有研究曾证明，平末端克隆的连接效率仅为粘端连接的1/50，且自身环化率高。 T载体的制备： ： 1 商业化T载体： 一般来说，商业化的T载体多是先使用平端限制性内切酶（如EcoRV）将克隆载体进行线性化，然后再单独加入dTTP和Taq酶72～75℃反应，进行末端的加T。 2 自制T载体： 一种常见的自制方法是利用限制性内切酶制造出具有单个T末端突出的片段，最常用的内切酶为XcmI，其识别和切割特点如下：其中XcmI的识别序列分别为两端的CCA和TGG，而切割序列则为中间三角箭头所指的N（N代表任意碱基）。由于N可以是任意碱基，所以如果将切割位置的N设置为T，那么在该酶的切割下，就可以产生一个3’ T末端。相似的，在其互补链上设置另一个相同或者类似的XcmI酶切位点（保证切割位点为T即可）就可以产生另一个T末端。一般可以在商业化的T载体基础上进行改造，通过PCR或者合成Oligo的方式插入上述两个XcmI位点。连接成功的质粒可按需要自行扩增和保存，使用时用XcmI进行完全酶切（这里的酶切必须保证完全，否则载体易自连，所以XcmI酶最好过量，或者适当延长消化时间），就可以制备得到T载体。[3] 常见T载体及序列： 虽然上面提到可以自制T-Vector，但实际上现在的商业化载体已经做到比较便宜，而且批次间稳定性保持的不错。最常见的T-Vector要属Takara公司的pMD系列（pMD18-T、pMD19-T、pMD20-T以及对应的去除多克隆酶切位点的Simple载体，如pMD19-T-Simple[4]）和Promega公司的pGEM系列（pGEM-T和pGEM-T Easy）[5]。 以下分别是两种T载体的序列：（序列已经经过调整，直接将需要插入的片段粘贴到序列的头端或者尾端即可得到最终的质粒序列）T载体克隆连接原理、制备及载体序列