动物病理组织免疫组化制片操作规程

动物病理组织免疫组化制片操作规程

1、取材选材部位以病灶与正常组织交界处的组织标本为好，取材要完整，要尽可能注意到整个器官的结构特点。大小一般是1cm×1 cm×0.5 cm为宜。

在夹取组织时不要用力压、挤、揉等以免损坏组织。

2、固定以10%中性福尔马林固定液（固定液的量应为组织块的10-20倍）固定时间24-36小时。组织长时间固定，固定液中的福尔马林含有的杂质会产生一种酸，影响核的染色，整个组织显得非常陈旧。

3、全自动脱水机：包括脱水、透明、浸蜡等步骤

3.1、脱水组织经固定后，内含大量水分，须除尽水分才利于透明、浸蜡。常用酒精为脱水剂，逐级提高酒精浓度，以防组织过度收缩、变脆或脱水不完全而影响制片效果。脱水一般在室温下进行，由60%酒精、70%酒精、80%酒精、90%酒精、95%酒精、100%酒精I、100%酒精II组成。组织块在酒精中时间不宜过长，否则组织块容易变硬。

如切片后的蜡块中央呈灰白粗糙而不透亮，放置一段时间后蜡块中央出现一陷窝，此即表明组织脱水不够彻底，组织面暴露后水分蒸发，蜡块中央收缩形成陷窝，严重时难以切出完整切片。注意定时更换新的脱水剂，一般在使用到1500个脱水盒(含组织块)后即可考虑更换脱水液。

3.2、透明在室温下，组织块采用二甲苯或TO透明剂中进行透明。一般透明剂分为I、II两个试剂缸。组织在二甲苯或TO透明剂中贮留时间必须严格掌握，时间稍长，则组织脆硬易碎；时间过短，石蜡不易渗透进去，使浸蜡不完全。3.3、浸蜡恒温杯内温度应调至58-60℃为宜，使石蜡熔化完全。石蜡分为I、II两个缸。尽量控制组织块在石蜡中的浸泡时间，时间过长组织易碎；时间过短，石蜡未渗透进去，组织不能切片。

附：自动脱水机使用操作规程

4、包埋将温箱中熔化好的石蜡倒进包埋框内，迅速用热镊子将组织放入包埋模具内，将要切的面朝下并摆正位置，多块的小的组织应集中放在一起，处于一个水平面上，管状组织如血管、气管、肠道等须立起来包埋，然后压上塑料盒，再注入少量的石蜡液，将其移放室温下一定时间后，再转移至冰冻台上冰冻固定，待其蜡块完全凝结后，取出蜡块，修切去抱抱盒周边浓度余蜡。

5、在普通载玻片上涂一层合适的组织粘附液，或使用免疫组化专用载玻片。

6、切片在切片前，须对蜡块进行修切，如此才能适合于切片。切片机装上锋利的切片刀(刀的斜度为5度)，调节器调在4-6微米厚度，调整蜡块切面使之与刀口平行。左手平持毛笔，右手旋动切片机把，切片带出来之后，用毛笔轻轻托起，切片切取一定长度之后，用毛笔或镊子轻轻取起石蜡切片，平铺于摊片机恒温水里，使石蜡切片展平。

7、裱片摊烘烤片机内水温保持在40-45℃，将切片光泽面向下铺于温水上。等切片展开后用清洁的载玻片从水中捞出，拨正位置，把贴好切片的载玻片放在摊烘烤片机的烤片板上，烤干水分。

8、烤片把贴有切片的载玻片直立放在染片架上，送入59~63℃左右的温箱中烘烤4~6小时，直到蜡片融化，组织片成半透明状。注意烤片温度的控制。

9、二甲苯或TO透明剂脱蜡，降梯度酒精洗脱，最后自来水冲洗。

10、将1500mL抗原修复液放入不锈钢高压锅中加热直至沸腾，盖上锅盖，但不盖紧、不关闭加压阀。

11、将染色架放入高压锅内，让切片完全浸没再修复液中，盖上锅盖，关闭加压阀。

12、计时月6min。关闭电源，打开加压阀，并于其上加盖一湿毛巾。高压蒸汽未放完严禁打开锅盖。

13、压力正常后，打开锅盖，取出高压锅内胆，放入预放好的冷水中冷却。

14、取出染色架，立即放入自来水中冲洗。

15、PBS冲洗。

16、3%H2O2液阻断内源性过氧化物酶，室温孵育10min。

17、流水冲洗，PBS液洗，擦干切片组织周围表面水分，PAP笔划圈；

18、滴加稀释的正常血清孵育10min。

19、用最佳稀释浓度的一抗工作液孵育，室温或37℃下2~3小时。PBS冲洗。

20、滴加生物素标记的羊抗兔/鼠二抗工作液，室温下孵育20min。PBS冲洗。

21、滴加HRP标记的链霉亲和素(三抗)，室温下孵育20min。PBS冲洗。

22、DBA显色工作液孵育3~10min。PBS冲洗。

23、苏木素复染，脱水、透明盒封片。

结果：阳性物质在胞（浆）内呈棕黄色细颗粒状。

免疫组织化学染色结果判断：

细胞相应部位（细胞核、细胞浆、细胞膜等）出现黄色反应为阳性，以阳性对照成份阳性而检测部分无反应为阴性。根据显色强度和阳性细胞数两项指标判断阳性等级。按显色强度分为无色、淡黄，黄色、棕黄色，分别计为0、1、2、3分；按阳性细胞占同类细胞的比例分为0、<1/3、1/3~2/3、>2/3，分别计为0、1、2、3分。将两项积分相乘，确定0分为阴性，1~3分为弱阳性，4~6分为中等阳性，9分为强阳性，分别计为—、+、++、+++。

注意事项：①操作过程中组织必须保持在湿润状态，不能干燥；②所加试剂以完全覆盖组织为度。

养殖场动物防疫管理制度

养殖场动物防疫管理制度 (一)免疫制度 1、遵守《动物防疫法》，按市级兽医主管部门的统一布置和要求，认真做好口蹄疫、高致病蓝耳病、猪瘟等强制性免疫病种的免疫工作。 2、严格按场内制定的免疫程序做好其它疫病的免疫接种工作，严格免疫操作规程，确保免疫质量。 3、遵守国家关于生物安全方面的规定，使用来自于合法渠道的合法疫苗产品，不使用实验产品或中试产品。 4、在市动物疫病预防控制中心的指导下，根据本场实际，制定科学合理的免疫程序，并严格遵守。 5、建立疫苗出入库制度，严格按照要求贮运疫苗，确保药苗的有效性。 6、废弃疫苗按照国家规定无害化处理，不乱丢乱弃疫苗及疫苗包袋物。 7、疫苗接种及反应处置由取得合法资质的兽医进行或在其指导下进行。 8、遵守操作规程、免疫程序接种疫苗并严格消毒，防止带毒或交叉感染 9、疫苗接种后，按规定佩戴免疫标识，并详细记入免疫档案。 10、免疫接种人员按国家规定作好个人防护。 11、定期对主要病种进行免疫效价监测，及时改进免疫计划，完善免疫程序，使本场的免疫工作更科学更实效。

（二）用药制度 1、场内预防性或治疗性用药，必须由兽医决定，其它人员不得擅自使用。 2、兽医使用兽药必须遵守国家相关法律法规规定，不得使用非法产品。 3、必须遵守国家关于休药期的规定，未满休药期的家禽不得出售、屠宰，不得用于食品消费。 4、树立合理科学用药观念，不乱用药。 5、不擅自改变给药途径、投药方法及使用时间等。 6、做好用药记录，包括：动物品种、年龄、性别、用药时间、药品名称、生产厂家、批号、剂量、用药原因、疗程、反应及休药期。必要时应付医嘱：用药动物种类、休药期及医嘱等。 7、做好添加剂、药物等材料的采购和保管记录。

动物微生物与免疫期末答案.docx

动物微生物与免疫期末答案 问：《自由引导人民》是作者对1830年法国发生的七月革命事件的真实写照。 答：× 问：下列关于华盛顿城市设计描述正确的是()。 答：属于多点辐射城市是一个政治色彩浓厚的城市 问：企业开展目标营销的第二个步骤是（）。 答：目标市场选择 问：林肯纪念馆和华盛顿纪念馆之间的广场有两个纪念碑,分别是()。 答：朝鲜战争纪念碑越南战争纪念碑 问：（）是设计公司的产品和形象，以求在目标顾客心目中占据一个独特位置的行动。 答：市场定位 问：对于渐进式肌肉放松法，下列注意事项正确的是（）。 答：每天做2次这样的练习在一个安静的空间中进行每块肌肉群2-3次对于特别紧张的部位可以多做几次 问：如下图所示的目标市场战略是（）。 https://www.wendangku.net/doc/1b3091832.html,/star3/375_1024/ec0ecf6b06d24eeee8ffac1ad ef37f27.png 答：无差异市场营销 问：《楚辞》的形式是在（）时期。

答：汉代 问：现今常用的古筝型号是21弦S筝。 答：对 问：（）决定了烧制陶瓷的过程中窑变的效果。 答：B 问：8ECDIS的航行监控可提供偏航报警.转向点提醒等报警或警示，一般还能进行_____以外的报警或辅助计算。 答：油耗计算 问：古琴定型于东汉时期，后经演变而来的古琴有（B）根弦。 答：7 问：《大学》认为明德专属于君主。 答：错误 问：羊毫加健毛笔对于画（）类型的画没有优势。 答：A 问：模版和母版是同一回事 答：× 问：日本歌曲《樱花》应用的是（）音阶 答：都节 问：真正实现全球覆盖的是_____系统。 (130600:第6章 EPIRB-SART设备) (A-0,B-0,C-0,D-0,错误-0) 答：COSPAS/SARSAT 问：孙成要打什么酒？（） 答：老酒

组织病理学技术

组织病理学技术 组织病理学技术 一. 实验综述 组织病理学切片技术是融解剖学、组织胚胎学及技术、病理学及技术和临床于一体的综合性课程。是一门新兴的学科。在当今不断发展、变革的社会中，在学科相互融合，知识相互渗透，技术不断发展、概念不断更新的时代，在时代要求综合素质人才辈出的今天，组织病理学切片技术的兴起尤为必要和重要。主要任务是：使学生获得和掌握学会观察人体重要器官的解剖学特征、组织学结构、病理学变化并联系相关功能，从而在形态上观察、机能上分析、综合上判断和科学上研究疾病。同时联系病变器官的代谢和机能的改变，探讨疾病的病因、发病机制以及病理变化与临床表现的内在联系和相互的关系。为由基础走向临床打下坚实的基础。 二. 实验目的 1. 掌握病理组织切片的基本制作过程步骤 2. 掌握病变器官的代谢和机能的改变 3. 明白病理组织切片制作过程中的注意事项 4. 了解病理切片的制作程序及仪器的操作和注意事项 二.实验材料 1. 实验材料：手术盘、镊子、手术刀、石蜡、小鼠病理组织、纱布、烧杯、脱水机、塑料包埋盒、水浴锅、切片机、染色机、载玻片、盖玻片、铅笔、标签 2. 实验试剂：福尔马林、酒精（50% 55% 70% 75% 80% 85% 95% 无水浓度）、二甲苯、苏木素、盐酸酒精、伊红染液、树胶 四.实验步骤 （一）取材 从尸体解剖材料或临床手术切除的待检材料上选取供作切片标本的病理组织切块，称为取材。 1. 取材要全面具有代表性，能显示病变的发展过程。为此要选取病变显著的区域和可疑 灶，在统一组织块中最好包括病灶及其周围的健康组织，并应包含该器官的主要结构部分。较大而重要的病变可从病灶中心到外周的不同部位取材，以反映病变各阶段的形态学变化。

病理组织切片的制作过程

病理组织切片的制作过程 1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下： (1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。 (2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm 即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。 (3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。 (4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。 (5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。 (6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。 (7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。 2．固定 (1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。 (2)注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部，或需要对整个脏器或整个动物体进行固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入血管，经血管分支到达整个组织和全身，从而得到充分的固定。 (3)蒸汽固定法：比较小而厚的标本，可采用锇酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片，则应在血片未干燥前采用锇酸或甲醛蒸汽接触固定。 最常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。

动物防疫合同

动物防疫服务协议 甲方: 养殖场（户） 乙方:XX镇村级防疫员 为扎实搞好动物防疫工作，明确甲乙双方的权利义务，本着公平公正、互惠互利的原则，双方同意以下协议条款。 第一条乙方在甲方养殖场内根据甲方场的实际情况和相关技术规范开展系统的防疫服务，包括存栏数据动态统计、免疫程序建立与实施、免疫台账建立、免疫效果监测、免疫标识佩戴等，目的是确保甲方场内不发生协议内传染病。此项服务为乙方提供的有偿服务，服务价格参照上级相关主管部门制定的指导价格。 第二条乙方负责通过XX公司向乙方提供合格疫苗，疫苗的种类、档次由甲方制定，乙方可作技术性建议；若甲方外购疫苗，则需要通过乙方同意，且必须为合法、合格疫苗。 第三条乙方为甲方建立免疫程序后，乙方应适时联系甲方，并为其服务；甲方应及时告知乙方，新增/新生幼畜禽苗数据。 第四条乙方应严格遵守职业遭德和防疫操作规程，按照免疫程序实施防疫，保证使用疫苗的质量和防疫效果。免疫注射后要及时、准确地登记和录入数据。 第五条乙方对甲方场内应免畜禽的口蹄疫、禽流感等人兽共患病的免疫密度要求达到100%，生猪耳标挂耳率必须达到100%。 第六条因乙方技术操作失误给甲方造成损失的，由乙方负责。

第七条乙方完成防疫服务（包括存栏数据动态统计、免疫程序建立与实施、免疫台账建立、免疫效果监测、免疫标识佩戴等）后，甲方应按约定方式和数额向乙方支付报酬。 第八条乙方有权将甲方场内疫情上报给XX农业综合服务站，不得越级上报。 第九条未尽事项，由甲乙双方协商解决。 第十条本合同签字后生效，双方要自觉遵守，认真履行。 第十一条本协议有效期年月日至年月日。 第十二条本合同一式叁份，甲方、乙方、XX农业综合服务站备执一份。 甲方负责人签字： 乙方签字：

动物病理组织免疫组化制片操作规程

动物病理组织免疫组化制片操作规程 1、取材选材部位以病灶与正常组织交界处的组织标本为好，取材要完整，要尽可能注意到整个器官的结构特点。大小一般是1cm×1 cm×0.5 cm为宜。 在夹取组织时不要用力压、挤、揉等以免损坏组织。 2、固定以10%中性福尔马林固定液（固定液的量应为组织块的10-20倍）固定时间24-36小时。组织长时间固定，固定液中的福尔马林含有的杂质会产生一种酸，影响核的染色，整个组织显得非常陈旧。 3、全自动脱水机：包括脱水、透明、浸蜡等步骤 3.1、脱水组织经固定后，内含大量水分，须除尽水分才利于透明、浸蜡。常用酒精为脱水剂，逐级提高酒精浓度，以防组织过度收缩、变脆或脱水不完全而影响制片效果。脱水一般在室温下进行，由60%酒精、70%酒精、80%酒精、90%酒精、95%酒精、100%酒精I、100%酒精II组成。组织块在酒精中时间不宜过长，否则组织块容易变硬。 如切片后的蜡块中央呈灰白粗糙而不透亮，放置一段时间后蜡块中央出现一陷窝，此即表明组织脱水不够彻底，组织面暴露后水分蒸发，蜡块中央收缩形成陷窝，严重时难以切出完整切片。注意定时更换新的脱水剂，一般在使用到1500个脱水盒(含组织块)后即可考虑更换脱水液。 3.2、透明在室温下，组织块采用二甲苯或TO透明剂中进行透明。一般透明剂分为I、II两个试剂缸。组织在二甲苯或TO透明剂中贮留时间必须严格掌握，时间稍长，则组织脆硬易碎；时间过短，石蜡不易渗透进去，使浸蜡不完全。3.3、浸蜡恒温杯内温度应调至58-60℃为宜，使石蜡熔化完全。石蜡分为I、II两个缸。尽量控制组织块在石蜡中的浸泡时间，时间过长组织易碎；时间过短，石蜡未渗透进去，组织不能切片。

《动物微生物与免疫》课程试卷B卷及答案

《动物微生物与免疫》课程试卷B卷及答案 一、名词解释（每题2分，共20分） 1.病毒凝集单位 2.异养菌 3.变态反应 4.抗体 5.灭菌 6.拮抗作用 7.干扰素 8.免疫 9.非特异性免疫 10.细菌的呼吸 二、填空题（每空1分，共25分） 1．细菌的特殊构造包括（）、（）、（）、（）。 2．有囊膜的病毒有三类形状，即（）、（）、（）。 3．外毒素主要由革兰氏（）性菌产生，毒性较（）。 4．布氏杆菌为革兰氏（）性菌，炭疽杆菌为革兰氏（）性菌。 5.。湿热灭菌法包括（）、（）、（）、（）。 6。生物制品可分为（）、（）、（）三大类。 7.细菌摄取营养的方式包括（）（）（）（）。 8.细菌的基本形态包括（）（）（）。 三、单选题（每题1分，共10分） （说明：将认为正确答案的序号填在每小题后面的括号内）

1．距土壤表面（）厘米深处，因为有丰富的营养物质，温度适宜，氧气较足，所以微生物较 多。 A 1-5 cm B 10-20cm C 50-80cm D 100-200cm 2．合成能力较强，能以简单的无机碳化物作为碳源，合成菌体所需的复杂的有机物质，这种菌叫（）。 A 厌氧菌 B 异养菌 C 需氧菌 D 自 养菌 3.结核杆菌属于（） A 专性需氧菌 B 兼性厌氧菌 C 厌氧菌 D 专性厌氧菌 4.下列哪种微生物没有细胞结构（） A 细菌 B 病毒 C 立克次氏体 D 真菌 5.大多数细菌生长繁殖所需要的PH值为（） A 8-9 B 4-5 C7.2-7.6 D 10-11 6. 下列不属于主动运输特点的是（） A 逆浓度 B 需要载体 C 不需能量 D 选择性 强 7. 制备培养基的最常用的凝固剂为（） A琼脂B明胶 C 硅胶 D纤维素 8. 干热灭菌法要求的温度和时间为（） A 105℃,2小时B1 21℃,30分钟 C 160℃,2小时 D 160℃,4小时 9. 遗传物质只是DNA或RNA一种核酸的微生物是（） A.细菌 B.支原体 C.立克次体 D.病毒 10. 关于IV型变态反应，下列哪项是正确的（） A 有补体参与 B 属于细胞免疫反应 C 接触变应原后30分钟内发生 D 机制涉及ADCC 四、简答题：（每题5分，共25分） 1．简述柯氏染色法的基本程序。它常用于什么菌的鉴别？ 2.病毒具有哪些基本特性？ 3.免役的功能有哪些？

组织病理学技术

组织病理学技术 一．实验综述 组织病理学切片技术是融解剖学、组织胚胎学及技术、病理学及技术和临床于一体的综合性课程。是一门新兴的学科。在当今不断发展、变革的社会中，在学科相互融合，知识相互渗透，技术不断发展、概念不断更新的时代，在时代要求综合素质人才辈出的今天，组织病理学切片技术的兴起尤为必要和重要。主要任务是：使学生获得和掌握学会观察人体重要器官的解剖学特征、组织学结构、病理学变化并联系相关功能，从而在形态上观察、机能上分析、综合上判断和科学上研究疾病。同时联系病变器官的代谢和机能的改变，探讨疾病的病因、发病机制以及病理变化与临床表现的内在联系和相互的关系。为由基础走向临床打下坚实的基础。 二．实验目的 1.掌握病理组织切片的基本制作过程步骤 2.掌握病变器官的代谢和机能的改变 3.明白病理组织切片制作过程中的注意事项 4.了解病理切片的制作程序及仪器的操作和注意事项 二．实验材料 1.实验材料：手术盘、镊子、手术刀、石蜡、小鼠病理组织、纱布、烧杯、脱水机、塑料包埋盒、水浴锅、切片机、染色机、载玻片、盖玻片、铅笔、标签 2.实验试剂：福尔马林、酒精（50%、55%、70%、75%、80%、85%、95%、无水浓度）、二甲苯、苏木素、盐酸酒精、伊红染液、树胶 四．实验步骤 （一）取材 从尸体解剖材料或临床手术切除的待检材料上选取供作切片标本的病理组织切块，称为取材。 1.取材要全面具有代表性，能显示病变的发展过程。为此要选取病变显著的区 域和可疑灶，在统一组织块中最好包括病灶及其周围的健康组织，并应包含该器官的主要结构部分。较大而重要的病变可从病灶中心到外周的不同部位取材，以反映病变各阶段的形态学变化。 2.取材时要尽量保持组织的自然状态与完整性，避免认为变化。为此，切取组 织块的剪刀要锋利，切取时勿使组织受挤压、拉扯胡揉搓。 3.组织块的大小要适当，通常其长、宽、厚以1.5×1×0.4cm为宜，必要时可 增大到2×1.5×0.5cm，以便于固定液迅速浸透。尸体剖检时采取病理组织块可切得稍大些，待固定几小时后在家以修整，切到适当的大小。 4.对于特殊病灶要做适当标记。 5.注意避免类似的组织块混淆。 6.制片的组织块，越新鲜越好。 7.接受送检标本时，须依据送检单详细检查送检物。 （二）固定和固定液 将组织浸在固定液内，使细胞组织内的物质成为不溶性，让固有形态和结构得以保存叫作固定。固定是为了保持组织、细胞与生活时的形态相似。 1. 本次试验的固定液为：10%福尔马林液（实验室常用固定液） 福尔马林 100ml 自来水 900ml

组织病理切片的制作过程

组织病理切片的制作过程 1．取材组织取材的法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下： (1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。 (2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。 (3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。 (4)规取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规化取材。 (5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。 (6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。

(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。 2．固定 (1)小块组织固定法：这是最常用的法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。 (2)注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入部，或需要对整个脏器或整个动物体进行固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入血管，经血管分支到达整个组织和全身，从而得到充分的固定。 (3)蒸汽固定法：比较小而厚的标本，可采用锇酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片，则应在血片未干燥前采用锇酸或甲醛蒸汽接触固定。 最常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。 3．脱水透明标本经过固定和冲洗后，组织中含有较多的水分，必须将组织块的水分置换出来，这一过程叫做脱水。无论是用蜡切片，还是用火棉胶切片，都必须除去组织中所含水分，因含水组织与蜡、火棉胶等包埋材料不相容，常用的脱水剂为一系列不同浓度的乙醇。 脱水的步骤是：80%、90%、95%、100%各种浓度乙醇2小时，此过程可用脱水机自控完成。 丙酮也是一种脱水能力很强的脱水剂，但因其脱水能力很强，对组织有剧烈收缩作用，在制作科研、教学切片时一般不用该试剂。因乙醇、丙酮等不溶于蜡，还要经过一个能溶于蜡的溶剂替代过程称为透明。常用的透明剂有二甲苯、三氯甲烷、水酸甲酯等。 4．浸蜡、包埋

动物防疫制度流程

精心整理 动物防疫制度 一、自觉遵守《动物防疫法》、《畜牧法》、《畜禽标识和养殖档案管理办法》等法律法规，坚持“预防为主，防治结合，防重于治”原则，预防动物疫病发生，提高养殖效益。

动物免疫制度 一、严格执行政府强制免疫计划和实施方案，严格按规定做好强制免疫疫病及其它疫病的免疫工作，确保免疫密度和质量达到国家规定标准。 二、遵守国家关于生物安全管理规定，使用来自于合法渠道的合格疫苗产品。 一、合理选择消毒方法、消毒剂，科学制定消毒计划和程序，严格按照消毒规程实施消毒，并做好人员防护。 二、生产区出入口设与门同宽，长至少4米，深0.3米以上的消毒池，各养殖栋舍出入口设置消毒池或者消毒垫。适时更换池（垫）水、池（垫）药，保持有效药液容量和浓度。

三、生产区入口处设置更衣消毒室。所有人员必须经更衣、对手消毒，经过消毒池和消毒室后才能进入生产区。工作服、胶鞋等要专人使用并定期清洗消毒，不得带出。 四、进入生产区车辆必须彻底消毒，同时应对随车人员、物品进行严格消毒。 五、定期或适时对圈舍、场地、用具及周围环境（包括污水池、排粪沟、 空置1

精心整理 病死畜禽无害化处理制度 一、对病死或死因不明畜禽，应坚持“五不一处理”原则，即不宰杀、不食用、不销售、不转运、不乱丢，规范进行无害化处理。 二、病死或死因不明畜禽无害化处理应按照《病害动物和病害动物产品生物安全处理规程》进行，修建与处理规模相适应的无害化处理设施。 三、病死或死因不明畜禽的无害化处理应在动物卫生监督机构或挂牌兽医

一、动物疫情实行逐级报告制度。养殖场（小区）业主是疫情报告第一责任人，应当按照规定要求，及时向当地乡镇（街道）畜牧兽医站报告本场突发动物疫情，并按规定按月上报本场动物

组织病理学技术

组织病理学技术

组织病理学技术 一．实验综述 组织病理学切片技术是融解剖学、组织胚胎学及技术、病理学及技术和临床于一体的综合性课程。是一门新兴的学科。在当今不断发展、变革的社会中，在学科相互融合，知识相互渗透，技术不断发展、概念不断更新的时代，在时代要求综合素质人才辈出的今天，组织病理学切片技术的兴起尤为必要和重要。主要任务是：使学生获得和掌握学会观察人体重要器官的解剖学特征、组织学结构、病理学变化并联系相关功能，从而在形态上观察、机能上分析、综合上判断和科学上研究疾病。同时联系病变器官的代谢和机能的改变，探讨疾病的病因、发病机制以及病理变化与临床表现的内在联系和相互的关系。为由基础走向临床打下坚实的基础。 二．实验目的 1.掌握病理组织切片的基本制作过程步骤 2.掌握病变器官的代谢和机能的改变 3.明白病理组织切片制作过程中的注意事项 4.了解病理切片的制作程序及仪器的操作和注意事项 二．实验材料 1.实验材料：手术盘、镊子、手术刀、石蜡、小鼠病理组织、纱布、烧杯、脱水机、塑料包埋盒、水浴锅、切片机、染色机、载玻片、盖玻片、铅笔、标签 2.实验试剂：福尔马林、酒精（50%、55%、70%、75%、80%、85%、95%、无水浓度）、二甲苯、苏木素、盐酸酒精、伊红染液、树胶 四．实验步骤 （一）取材 从尸体解剖材料或临床手术切除的待检材料上选取供作切片标本的病理组织切块，称为取材。 1.取材要全面具有代表性，能显示病变的发展过程。为此要选取病变显著的区 域和可疑灶，在统一组织块中最好包括病灶及其周围的健康组织，并应包含该器官的主要结构部分。较大而重要的病变可从病灶中心到外周的不同部位取材，以反映病变各阶段的形态学变化。 2.取材时要尽量保持组织的自然状态与完整性，避免认为变化。为此，切取组 织块的剪刀要锋利，切取时勿使组织受挤压、拉扯胡揉搓。 3.组织块的大小要适当，通常其长、宽、厚以1.5×1×0.4cm为宜，必要时可 增大到2×1.5×0.5cm，以便于固定液迅速浸透。尸体剖检时采取病理组织块可切得稍大些，待固定几小时后在家以修整，切到适当的大小。 4.对于特殊病灶要做适当标记。 5.注意避免类似的组织块混淆。 6.制片的组织块，越新鲜越好。 7.接受送检标本时，须依据送检单详细检查送检物。 （二）固定和固定液 将组织浸在固定液内，使细胞组织内的物质成为不溶性，让固有形态和结构得以保存叫作固定。固定是为了保持组织、细胞与生活时的形态相似。 1. 本次试验的固定液为：10%福尔马林液（实验室常用固定液） 福尔马林 100ml 自来水 900ml

病理切片的制作过程

1.7.1 修整组织 将手术切取的乳腺肿瘤切成一个平整面，各组织块不宜太大，以便固定剂穿透和组织脱水等操作，通常以10 mm×10 mm×3mm或5mm×5mm×3mm为宜。找到不同的部位切取2块，以备后用。 1.7.2 组织洗涤 组织经修整后，组织中的福尔马林等必须冲洗干净，尤其是含有重金属的物质存在。因为残留在组织中的福尔马林，有的不利于染色，有的产生沉淀或结晶影响观察，所以组织修整后应冲洗12h左右。 1.7.3 组织脱水 组织经洗涤后，组织中含有大量水分，由于水与石蜡不能互溶，所以必须将组织中的水分除去。 80%乙醇溶液：2h 95%乙醇溶液:1h 95%乙醇溶液:1h 100%乙醇溶液:30min 100%乙醇溶液:30min 1.7.4 组织透明 由于乙醇与石蜡不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡，所以脱水后还要经过二甲苯以过渡。当组织中全部被二甲苯占有时，光线可以透过，组织呈现出不同程度的透明状态。 二甲苯Ⅰ：30min 二甲苯Ⅱ：10min 1.7.5 组织浸蜡 浸蜡的目的是除去组织中的透明剂（如二甲苯等），使石蜡渗透到组织内部达到饱和程度以便组织包埋。浸蜡时间根据组织的透蜡时间较长，需3h左右。浸蜡应在恒温箱内进行，并保持箱内温度在55℃左右，注意温度不要过高，以免组织发脆。 石蜡Ⅰ：1h

石蜡Ⅱ：1h。 石蜡Ⅲ：1h 1.7.6 组织包埋 将经过透蜡的组织连同熔化的石蜡，一起倒入容器内，然后立即投入冷水中，使其立刻凝固成蜡块的过程。包埋时，将纸盒放在温箱旁边，用镊子夹取组织平放于纸盒底部，，再用温镊子轻轻拨动组织，从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，沿壁倒入包埋用的纸盒中，速度要慢。待石蜡凝固（约30min）后放入冰箱保鲜层内以备后用。包埋时应根据组织材料、切片厚度、气候条件等因素，选择不同熔点的石蜡，新的石蜡一般要熬顿几次，以免石蜡固定后有气泡，影响切片。用于包埋的石蜡的熔点在50~60℃之间。 1.7.7 组织切片 （1）从冰箱里拿出蜡块，进行修快 （2）将已固定和修好的石蜡块台木装在切片机的夹物台上。 （3）将切片刀固定在刀夹上，刀口向上。 （4）摇动推动螺旋，使石蜡块与刀口贴近，但不可超过刀口。 （5）调整石蜡块与刀口之间的角度与位置，刀片与石蜡切片约成15度左右。 （6）调整厚度调节器到所需的切片厚度，先调约为25um，待切平后改为5um。 （7）一切调整好后方可以开始切片。此时右手摇动转轮，让蜡块切成蜡带，左手持毛笔将蜡带提起，摇转速度不可太急，通常以40-60r/min。 （8）切成的蜡带到10-20cm长时，右手用另一支毛笔轻轻地将蜡带挑起，以免卷曲，并牵引成带，平放在蜡带盒上，靠刀面的一面较光滑，朝下，较皱的一面朝上。 （9）感觉效果较好的蜡片一小段，用单面刀片切取，再放入约43℃的水浴锅中展片，观察切片是否良好。 （10）切片工作结束后，应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着的石蜡，把切片机擦拭干净妥为保存。 1.7.8 贴片

动物防疫制度

动物防疫制度 一、自觉遵守《动物防疫法》、《畜牧法》、《畜禽标识和养殖档案管理办法》等法律法规，坚持“预防为主，防治结合，防重于治”原则，预防动物疫病发生，提高养殖效益。 二、养殖场（小区）配备与养殖规模相适应的畜牧兽医技术人员，建设符合动物防疫条件并依法申领《动物防疫条件合格证》。 三、养殖场（小区）法人为动物防疫工作主要责任人，负责组织落实动物防疫各项制度，定期做好场内环境清洁、消毒、灭鼠、灭蝇等工作，履行动物疫病综合防控职责。 四、提倡自繁自养，商品畜禽实行全进全出或分单元全进全出制饲养管理。 五、实行封闭性管理，生产区内禁养其他动物。定期对生产区、栏舍、用具等进行严格消毒。禁止无关人员、动物、车辆随意进出，对进出人员、车辆要严格消毒。 六、严格按规定做好强制免疫、消毒、病死畜禽无害化处理、检疫、调运备案、隔离观察、疫情报告、疫苗使用管理、疫病监测等防控工作。 七、严格按规定建立和规范填写防疫档案、免疫证（卡），加施免疫标识。各类档案记录应真实、完整、整洁并有相关人员签名。养殖档案和防疫档案保存时间：商品猪、禽为2年，牛为 20年，羊为 10年，种畜禽长期保存。 八、接受主管部门、动物卫生监管及动物疫控机构和挂牌兽医的依法监管和抽样监测。

动物免疫制度 一、严格执行政府强制免疫计划和实施方案，严格按规定做好强制免疫疫病及其它疫病的免疫工作，确保免疫密度和质量达到国家规定标准。 二、遵守国家关于生物安全管理规定，使用来自于合法渠道的合格疫苗产品。 三、严格按规定和疫苗说明书分类保管、储藏、规范管理疫苗。失效、废弃或残余疫苗以及使用过的疫苗瓶一律按规定无害化处理，不乱丢弃疫苗及疫苗包装物。 四、落实养殖场（小区）按程序自主实施免疫制度，按需领用国家免费强制免疫疫苗。领用前，应向当地乡镇（街道）畜牧兽医站报告畜禽种类、饲养规模、疫苗品种及用量等，经审核后方能领取疫苗。 五、严格按免疫操作规程、免疫程序实施免疫，正确免疫途径、部位、剂量等，确保有效性。认真做好免疫各环节的消毒工作，防止带毒或交叉感染。 六、按照国家关于免疫标识管理的规定，在应当加施标识畜禽的指定部位加施标识。 七、定期对主要病种进行免疫抗体监测，落实补免措施，确保防疫质量。 八、按规定做好免疫记录、填写免疫证（卡）。 九、接受动物卫生监督机构或挂牌兽医的监管。

动物微生物及免疫学复习题

《动物微生物及免疫学》复习题 一、多选题 1.中枢免疫器官有ABD A 胸腺 B 腔上囊 C 脾脏 D 骨髓 2.中枢免疫器官的特点有ACD A 胚胎早期出现 B 胚胎晚期出现 C 控制机体免疫反应 D 能诱导淋巴细胞分化 3.抗原具有BD A 特异性 B 免疫原性 C 专一性 D 反应原性 4.抗原按性质分为AC A 完全抗原 B 自身抗原 C 不完全抗原 D 异嗜抗原 5. 全菌抗原或整个病毒粒子抗原所制备的血清为C A 多联血清 B 单价血清 C多价血清D --- 6.免疫球蛋白的种类有ABCD A IgG B IgM C IgA D IgE 7.单克隆抗体的特点ABCD A纯度高 B专一性强 C 重复性好 D能在动物体内外持续产生同质性抗体 8.抗体具有亲细胞性质，能与下列细胞结合ABC A 肥大细胞 B T细胞 C B细胞 D 神经细胞 9. 血清学反应的类型有ABCD A 凝集反应 B 沉淀反应 C 中和反应 D 补体结合反应 10.沉淀反应的类型有ABC A 电泳 B 琼脂扩散试验 C 环状沉淀试验 D ELISA 11.试管凝集的特点有ACD A 方法简单 B 特异性不强 C 可定性 D 可定量 12.常用于检测炭疽病的实验方法是B A 琼脂扩散试验 B 环状沉淀反应 C 对流免疫电泳 D 血凝试验 13.间接凝集反应的类型有AD A 乳胶凝集 B 试管凝集 C 平板凝集 D 间接血凝 14.补体结合实验中，如果最终出现溶血现象，其结果应为C A 阳性 B 不确定 C 阴性 D A或B 15.血清学反应的一般特点 AC A 特异性强 B 特异性不强 C 抗原间血缘越近交叉程度越高 D 不会出现带现象 16.免疫原性:能刺激机体产生抗体和致敏淋巴细胞的特性 17.下列有关非特异性免疫应答说法正确的有AC A 先天的,遗传的 B 作用慢,范围窄 C 为第一线防御作用 D 有再次反应的能力,有记忆 18.干扰素的特性有AC A 可溶性蛋白 B 对热不稳定 C 对酶敏感 D 对病毒种类有特异性 19.非特异性免疫的防御屏障有BD A 血脑屏障 B 皮肤 C 胎盘屏障 D 黏膜 20.影响非特异性免疫的因素有ABCD A 遗传 B 年龄 C 环境（温度、湿度） D 动物种类 二、名词解释

病理制片过程

病理制片过程 在临床病理科与组织学实验室,切片就是最重要得技术之一。切片得质量不好,就无法对标本进行观察。好得切片机只就是整个样品制备过程中得一个环节。要制备一张好得切片,必须要将技术、知识与技巧进行完美得结合。 待切片样品得质量就是非常关键得因素,而样品质量有取决于前期处理工作得准确无误(例如:固定、巨检、脱水与包埋)必须选择正确得切片机型号以及合适得钢刀或一次性刀片。切片必须根据实际应用出发,需要根据样品得类型、大小、期望得厚度认真考虑,还要兼顾操作者得便利性与舒适性。 要且出高质量得切片,经验丰富得操作者也就是必不可少得条件之一。操作者必须懂得切片机得工作原理,能够对机器进行精细调节以达到最佳效果;并且能应对常见故障,消除一些潜在得切片问题;还可以运用恰当得切片技术,提高切 片速度但不影响质量。 目前能做病理组织切片得地方很多,但要数上海舜田生物做出得病理切片相对质量上比较好,该公司有1位专业从事病理实验得老师及相关实验技术人员,积累了丰富得实验经验,所作出得切片及染色效果相当不错。 1 正确处理标本得重要性 1、1 固定 正确得固定就是病理制片技术中最重要得一步,这个步骤会影响到后续得每个环节。如果固定不充分,样品得质量就会有欠缺。组织必须在选定得固定剂中浸泡足够长得时间,使大分子保持固有形态。正确得固定可以防止样品在脱水剂中发生变性以及后期处理步骤对于样品造成得损害。固定不充分可能增加切片得困难,表现出过度收缩,并且会导致细胞核染色不足与/或胞核呈现“泡沫”状。 1、2巨检 样品需要修切成薄片,并尽可能做到均匀,否则很难在切片机上切出好得片子。如果样品太厚以至于无法渗透充分,则必须经过再次处理才能进行切片。这样会影响样品得质量,更浪费时间。从最初得步骤开始就正确处理会使后面得工作更简单,因此在大体取材得时候多花些功夫会为以后得步骤节省大量时间与精力。 备注:包埋盒塞满组织且组织过厚就无法很好得固定,后续得处理步骤也会效果欠佳。 1、3脱钙 为了后期进行石蜡包埋切片,骨组织需要进行脱钙,钙必须被完全去除才能确保切片得完整,并且可以防止刀具得损坏。在用酸溶液进行脱钙之前,骨组织必须经过彻底得固定,这样其中得软组织成分才能够被保护,且防止细胞核在酸得作用下被破坏,比如蛋白质水解作用。 1、4组织处理(脱水) 组织经过一系列经典得处理过程,就是使原本亲水性得组织最终可以用疏水性得介质进行包埋,比如石蜡,火棉胶与绝大多数树酯。 备注:样品无论就是处理不充分还就是处理过度,都可能导致切片效果不理想。

大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色

大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色 步骤如下： （一）固定与修块 取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面 刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。 （二）脱水与透明 1. 75%乙醇50分钟 2. 85%乙醇50分钟 3. 95%乙醇(I) 30分钟 4. 95%乙醇(II) 30分钟 5. 100%乙醇(I) 30分钟 6. 100%乙醇(II) 30分钟 7 1/2二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟 &二甲苯（I）20分钟 9 .二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定） 若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。在每一步骤之后，要充分滤干组织块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。全过程约需要5h。（三）浸蜡、包埋与修蜡块 1.浸蜡：将60C恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将组织块转入石蜡里，放置于60 C恒温箱120分钟。 2 .包埋：将60 C的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺序排列好，使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板 上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90 C左右热水上，包埋时蜡盒底部要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。 3 .修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘之间的距离不得小于2mm。 （四）切片 在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹 匀，呈半干状为佳。切片厚约4-8卩m，将切片在55C左右水浴中展开，展开程度 以带黄颜色的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37C烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后，将载玻片置于玻片架上， 进行下面的实验。 （五）脱蜡、染色与脱水 倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓 度的影响。全过程约需要60分钟。 1.脱蜡 （1）二甲苯（I）15分钟 （2）二甲苯（II）15分钟 （3）100%乙醇2分钟 （4）95%乙醇（I）1分钟 （5）95%乙醇（II）1分钟 （6）蒸馏水浸洗1分钟 2 .染色

免疫荧光通用操作规程

免疫荧光通用操作规程 冰冻切片的免疫荧光 1，动物组织直接OCT包埋，或灌流后的组织30%蔗糖溶液4℃过夜后，OCT包埋。-20℃保存3月，-80℃长期保存。请勿保存于液氮。2，冰冻切片机切片至少10um，空气干燥2分钟后，-20℃储存 3，切片从-20取出后，在通风橱放10-30分钟以去除水汽，4%PFA 固定15分钟，或-20℃丙酮固定15分钟置通风橱2小时 4, 1XPBS清洗玻片，3X5min 从此请保持玻片湿润 5，有时，抗原修复3小时会得到更好的结果。为此请：选用稳定的抗原修复方式（真空负压.微波修复.高压修复.隔水加热.电炉加热）…关注修复的温度，时间（抗原修复时在有效的温度范围内所持续的时间），抗原修复液必须遵循自然降温规律，使用足量的抗原修复液…选择不同PH值的修复液（A液枸盐酸缓冲液PH6.0，B液EDTA-Na缓冲液PH8.0，C液枸盐酸缓冲液PH4.5） 6，室温封闭1小时 封闭液：5%BSA+10%二抗种属来源的正常血清in 1xPBS 条件封闭液：1%BSA+3%二抗种属来源的正常血清in 1xPBS（细胞因子，无需封闭的蛋白

7，一抗4℃过夜 请用封闭液稀释一抗 8, 第二天Wash,1XPBS, 2x1min 9,二抗，1:1000 （alexa系列）1:300（dyelight )in封闭液，避光室温1小时 10, Wash,1XPBS, 3x5min 11, DAPI 染核5min， 12，DDW Rinse 13，抗淬灭剂封片，（避免气泡）避光置于通风橱过夜 14，干片后4℃保存 石蜡切片的免疫荧光 1，动物组织取出后经固定-脱水-包埋（见随后操作步骤)，制成石蜡包块 2，组织学染色切片厚度2um，免疫荧光染色切片厚度至少6um，切片复水：58℃20min- xylene 2x10min- 100%EtoH2x10min 95%EtoH2x10min- 70%EtoH10min-，DDW5min

动物微生物及免疫学(实践教学)实验报告

四川农业大学 动物微生物及免疫学（实践教学） 实验报告 组长：********** 组员：********** 二零一二年四月

一、实验目的 （一）掌握一般培养基的制备原理及要求，掌握培养基酸碱度的测定，熟悉一般培养基的制备过程和各种器皿灭菌方法。 （二）掌握细菌分离培养的基本要领和方法，掌握细菌抹片的制备方法和革兰氏染色法及油镜的使用方法，并认识革兰氏染色的反应特性。（三）掌握学习用微生物学原理诊断疾病的一般方法及步骤。 二、实验用品 （一）器材 量筒、烧杯、电子天平、漏斗、三角烧瓶、空试剂瓶、玻璃棒、玻璃平 皿、刻度吸管、pH试纸、纱布、脱脂棉、天平、电炉、试剂瓶瓶塞、扎 绳、放大镜、包装纸、洗耳球、酒精灯、载玻片、火柴、吸水纸、剪 刀、记号笔、接种环、注射器、镊子、钳子、毫米尺、培养箱、水浴培 养箱、高压蒸汽灭菌锅、油镜 （二）试剂及材料 肘胨、蛋白胨、猪胆盐、氯化钠、琼脂、乳糖、0.01%结晶紫水溶液、 0.5%中性红水溶液、血清、胰化蛋白胨、酵母提取物、氢氧化钠、盐 酸、牛血清、革兰氏染色液、蒸馏水、小白鼠、病猪内脏 三、实验步骤 （一）培养基的制备 （所有用到的器皿都已121℃高压灭菌15~30min，倾注平板在无菌操作台内完成，并放在无菌操作台内） 1、麦康凯培养基 （1）组成：蛋白胨17g、肘胨3g、猪胆盐5g、氯化钠5g、琼脂17g、乳糖10g、0.01%结晶紫水溶液10ml、0.5%中性红水溶液5ml、蒸馏水1000ml

（2）方法：将蛋白胨、肘胨、猪胆盐和氯化钠溶解于400ml蒸馏水中，调节pH至7.2。将琼脂加入600ml蒸馏水中，并加入乳糖，加热熔化。将两 液混合，分装于烧瓶内，用纱布、扎绳等捆好后，121℃高压灭菌 15~30min。待冷却至50 ~ 55℃时，加入结晶紫和中性红水溶液，摇匀后倾注平板。 注：结晶紫和中性红水溶液配好后需经高压灭菌。 2、血清平板 （1）组成：营养琼脂、牛血清 （2）方法：将灭菌的营养琼脂加热熔化，冷却至45~50℃时，加入牛血清，并混匀，倾注平板。 注：不得将牛血清一并加入后再灭菌。 3、LB培养基 （1）组成：胰化蛋白胨10g、酵母提取物5g、氯化钠10g、琼脂15g （2）方法：在950ml蒸馏水中加入胰化蛋白胨、酵母提取物、琼脂和氯化钠，调节pH至7.4，加热熔化，分装于瓶中，用纱布、扎绳等捆好后，121℃高压灭菌15~30min。待冷却至50 ~ 55℃时，倾注平板。 4、液体培养基（在LB培养基的基础上，装入大试剂瓶中，不加琼脂，不分 装） （二）病料取材 在病猪死亡后，首先用显微镜检查其末梢血液膜片中是否有炭疽杆菌存 在，未发现，则立即用消毒的器械对其进行生理解剖，观察其病理特征 现象，取出病猪的十二指肠、胃、肝脏三处的组织物，并注意组织的完 整性，用储物袋密封保存。 （三）细菌粗培养

春季动物防疫操作规程

春季动物防疫操作规程 一、防疫时间：3月10日-4月10日。 二、防疫病种：牲畜口蹄疫、猪瘟、猪丹毒、猪肺疫、禽流感、鸡新城疫、羊梭菌病、仔猪副伤寒、高致病性猪蓝耳病等。 三、注射剂量及使用方法： 1、口蹄疫：使用前一定要充分摇荡。①猪：大猪每头2毫升，小猪每头1毫升。②羊：大羊2毫升,小羊 1毫升。 ③牛：大牛每头5毫升,小牛每头2毫升。 2、猪瘟：用生理盐水稀释，每头1头份，种猪每头4 头份。 3、禽流感：使用前充分摇荡。每只鸡颈部皮下或胸部肌肉注射，2—5周龄0.3毫升，5周龄以上的每只0.5毫升。 4、羊三联四防疫苗：每只4毫升。 5、鸡新城疫Ⅰ系：滴眼或滴鼻，2倍以上剂量饮水。 6、仔猪副伤寒：按瓶签注明头分口服或浅层肌肉注射，但瓶签注明限于口服得不的肌肉注射。①口服法：按瓶签注明头分，临用前用冷开水稀释每头5-10毫升，也可以拌饲料自由采食。②注射：每头猪1头分。 7、猪蓝耳病：活苗：专用稀释液稀释，每猪一头份。 四、注射顺序： 1、猪：猪瘟疫苗和猪口蹄疫苗同时分两侧注射，隔7 天注射猪蓝耳病苗。 2、羊：先注射三联四防苗，隔5天注射口蹄疫疫苗。

3、鸡:先注射禽流感疫苗隔7天注射鸡新城疫疫苗。 五、疫苗保存： 1、猪瘟苗、猪蓝耳病活苗、仔猪副伤寒，猪三联苗、鸡新城疫苗要冷冻保存（—15℃以下），口蹄疫、禽流感苗要常温保存（2℃-8℃）. 2、避免阳光直射。 3、当天稀释当天用完（有些疫苗按瓶签说明限时用完）。 六、注意事项： 1、不同疫苗不能混用注射器，做到一畜一针。 2、注射口蹄疫疫苗做到三不一备一解释，三不即老弱畜不免、病畜不免、孕畜不免；一备即准备适量肾上腺素，以防中毒急救；一解释即向畜主说明，猪、牛、羊免疫口蹄疫疫苗后一顿或二顿不食、减食、轻微发热等属正常情况，猪蓝耳病苗不论猪种用途全免，注意孕猪保定方法。 3、液体苗使用前充分摇荡，并恢复常温。 4、使用后的空疫苗瓶和剩余疫苗要集中做深埋处理。 5、各乡镇要储备一定量的疫苗，以备急用。