当前位置：文档库 › 2,2’一亚甲基一双(4,6一二叔丁基苯基)磷酸酯合成实验方法

2,2’一亚甲基一双(4,6一二叔丁基苯基)磷酸酯合成实验方法

DNA甲基化实验操作原理及方法-Hxg

DNA 甲基化重亚硫酸氢盐修饰法（DNA METHYLATION BISULFITE MODIFICATION）实验操作原理及方法一、实验目的：通过本实验，可以检测特定DNA序列的甲基化状态。二、实验原理： DNA 甲基化是指由S-腺苷甲硫氨酸（SAM）提供甲基基团，在DNA 甲基转移酶（DNA methyltransferases，DNMTs）的作用下，将CpG 二核苷酸的胞嘧啶（C）甲基化为5-甲基化胞嘧啶（5-m C）的一种化学反应。DNA 甲基化是调节基因转录表达的一种重要的表观遗传的修饰方式。 DNA 甲基化主要在转录水平抑制基因的表达。DNA 甲基化引起基因转录抑制的机制可能主要有以下3 种：（1）DNA甲基化直接干扰特异性转录因子与各基因启动子中识别位置的结合。（2）序列特异性的甲基化DNA 结合蛋白与启动子区甲基化CpG 岛结合，募集一些蛋白，形成转录抑制复合物，阻止转录因子与启动子区靶序列的结合，从而影响基因的转录。（3）DNA 甲基化通过改变染色质结构，抑制基因表达。重亚硫酸氢盐修饰法检测DNA甲基化的基本原理是基于DNA变性后用重亚硫酸氢盐处理，可将未甲基化胞嘧啶修饰成尿嘧啶。此反应的步骤是：1、在C-6位点磺化胞嘧啶残基；2、在C-4处水解去氨基来产生尿嘧啶磺酸盐；3、在碱性条件下去硫酸化。在这个过程中，5-甲基胞嘧啶由于甲基化基团干扰了重亚硫酸氢盐进入到C-6位点而保持着未反应的状态。在重亚硫酸氢盐处理后，使用针对每个修饰后DNA链的引物进行PCR反应。在这个PCR产物中，每5-甲基胞嘧啶显示为胞嘧啶，而由未甲基化胞嘧啶转变成的尿嘧啶则在扩增过程中被胸腺嘧啶所取代。 BSP(bisulfate sequencing PCR) ：重亚硫酸盐使DNA中未发生甲基化的胞嘧啶脱氨基转变成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变，进行PCR扩增。最后，对PCR产物进行测序，并且与未经处理的序列比较，判断是否CpG位点发生甲基化。

【路亚】路亚钓鱼技巧大全

【路亚】路亚钓鱼技巧大全一、路亚来源路亚钓鱼取名来源为 Lure 的音译，是我国港澳台地区对拟饵的称乎，即假饵钓鱼，是模仿弱小生物引发大鱼攻击的一种方法。讲究技巧，需要竿、饵、轮的综合操作。在整个过程中，钓者是在做全身运动，同时路亚装备简洁，干净环保，与传统钓法有着极大的差异。路亚钓在欧洲非常盛行，自2007年我国也逐渐兴起路亚钓，被越来越多的钓鱼爱好者所喜爱。路亚，君子爱渔，取之有道（趣道）。钓具配法1：直柄杆配纺车轮钓具配法2：枪柄竿配水滴轮或者鼓轮路亚饵：硬饵和软饵二、路亚历史传说19世纪初，美国钓鱼人豪顿氏在河边与朋友闲聊，手中把玩这一个小木片，一不小心，木片掉进河里，一条不知名的鱼立刻窜出叼走了木片。这个偶然的小事，触发了豪顿氏的灵感，此后他发明了世界上第一个路亚饵(拟饵)。芬兰人Lauri Rapala把拟饵做的更加极致，并推广到了全世界。随着人们对路亚的认识，根据肉食性鱼类的食性及捕食的方法，总结出了路亚钓法。路亚钓法作为一种健康运动，环保、时尚，一直令路亚钓者引以为豪，也有人称作“水上高尔夫”。

三、路亚竿 1、路亚竿一般可区分为：直柄竿、枪柄竿。钓竿通常有分为两节式组合方便携带。当然也有单节式、多节式及伸缩式。 2、钓竿标示 SC—602ML Lure 1/8~3/8oz Line 5~10Ib；其中SC代表型号，数字60表示竿长5250 px，数字2表示节数，ML表示钓竿特性：中轻量。Lure 1/8~3/8oz表示为：钓竿使用路亚重量为：3.5—10.5g重量，Line 5~10Ib表示为钓竿实用的钓线为5—10磅，相当于1.5—2.5号尼龙线。 ?钓竿特性表示说明 ?UL=超轻量、极软。 ?L=轻量、软。 ?ML=中轻量、中软。 ?M=中量、中间。 ?MH=中重量、中硬。 ?H=重量、硬。 ?XH=特重量、极硬 ?有时还会加上F=快速调。 ?R=中间调。 ?S=慢速调

甲基化检测原理及步骤 DNA实验技术方法汇总

DNA亚硫酸氢盐修饰和纯化操作步骤修饰设计：使用CpGenome TM kit使胞嘧啶转化为尿嘧啶的步骤如下。中等温度碱性pH下使DNA变性成为单链形式暴露出碱基。试剂一，一种包含亚硫酸氢根的钠盐，可使未甲基化的胞嘧啶磺化和水解脱氨，产生一种尿嘧啶磺酸盐中间产物。然后DNA在另一种盐﹙试剂二﹚存在的条件下与一种微粒载体﹙试剂三﹚结合，并通过重复离心和在70%的乙醇中重悬浮脱盐。向尿嘧啶的转化是通过在90%的乙醇中反复碱性脱磺酸基作用和脱盐完成的。DNA最终在TE缓冲液中通过加热从载体上洗脱下来。第一步：试剂准备（1）3 M NaOH原料（用前现配）把1g干NaOH片剂溶解在8.3mL水中。使用此类腐蚀性碱，注意小心谨慎和实验操作。（2）20 mM NaOH/90% EtOH（用前现配）配制1mL该溶液需：900μl 100%的乙醇，93.4μl水，6.6μl 3M的氢氧化钠。（3）溶解试剂Ⅰ（用前现配）打开前将试剂瓶加温至室温。对每份待修饰的样本，称取0.227g DNA修饰试剂Ⅰ加入0.571mL水中。充分涡旋振荡混合。使用该试剂时要小心谨慎，因为它对呼吸系统和皮肤有刺激性。用大约20μl 3M NaOH调整pH至5.0，用pH试纸检测pH值。试剂Ⅰ避光保存以免分解。为了最佳效果，试剂应在配置后立即使用。（4）溶解试剂Ⅱ 打开前将试剂瓶加温至室温。将1μl β-巯基乙醇加入20mL去离子水中。每份待修饰的DNA样本需将750μl该溶液加入到1.35g DNA修饰Ⅱ。充分混合确保完全溶解。过量的试剂可用箔纸包裹的容器、2℃-8℃、避光保存长达6周。第二步：DNA修饰程序 1、在带有螺旋形瓶盖的1.5-2.0mL的微量离心管中：将7.0μl 3M NaOH加入到含有1.0 μg DNA的100μl水中（10ng/μl），混匀。注意：如果样本含有的DNA量不到1.0μg，就向样本DNA中加入2 μl DNA修饰试剂Ⅳ并加水至总体积100μl。再加入7.0μl 3M NaOH并混匀。 2、50℃ DNA孵育10分钟（加热块或水浴）

甲基化--经验

Ensembl data bank 甲基化测序BSP法的那个黑白点状图（黑表示甲基化、白点表示非甲基化）是怎么做出来的呀上用BiQ ANALYZER软件，免费的可以下载，安装需要最新的java程序，关于后续的一些步骤，我看了一篇国内的硕士论文，如下： 2.2.1.4.6连接反应产物的转化 (l)每个连接反应准备1个含有氨节青霉素的LB平板，涂板前半小时将平板从冰箱中取出平衡至室温。 (2)离心使连接反应内容物汇集到管底，吸取10ul连接反应产物加到置于冰上的 1.5ml离心管中. (3)将冻存的JM109高效率感受态细胞从一70℃冰箱中取出，放置在冰浴直至融化 (大概5分钟)，轻轻振动离心管使之混匀。 (4)向步骤2准备的每个转化管中加入50ul感受态细胞。 (5)轻轻振动小管混匀，冰浴30分钟。 (6)在精确的42℃水浴中热击45一50秒(不要振动)。 (7)迅速将管子移到冰浴中，使细胞冷却2分钟。 (8)每管连接反应转化细胞中加入平衡至室温的200ulLB培养基， (9)在37℃振荡培养(150rpm)1小时。 (10)将每个转化培养基200ul涂到LB/氨苄/IPTG/X-Gal平板上。 (11)将平板于37℃恒温箱中过夜培养(16一24小时)。 2.2.L4.7阳性克隆筛选从培养箱中取出平板，置于4℃冰箱使蓝色充分显现。挑取白斑菌落到5mLB培基，37℃摇床上培养过夜。吸取lml菌液送测序，引物为通用引物M13。进入丁香园，是从做MSP开始的。从对DNA甲基化的一无所知到MSP实验成功，经历了很多艰难，同时也收获得了不少经验。从丁香园的帖子可以看出，近几年来，国内对DNA 甲基化的研究在逐年增加，战友们在实验中遇到的困难也不少。在这里谈一下对MSP,及BSP的一点体会，希望能对新手们有所帮助，也请老手们批评补充。亚硫酸氢盐转化和PCR扩增是MSP,BSP的两个基本步骤。亚硫酸氢盐转化，估计现在做手工修饰的也不多了，试剂盒能够很方便的帮我们解决问题。但PCR中的引物设计，现在可能还是个难题。看到很多帖子里提到的引物都是来源于文献的，但事实上在很多情况下，我们是没法找到现存引物的，因此掌握BSP,MSP引物的设计就显得非常必要了。 BSP，MSP引物设计的一个最大问题在于亚硫酸氢盐的转化使得模板的序列复杂性大大降低，而且经常产生T或G或者富含GC片段交替出现的序列。这个会使引物选择变得困难。因此，往往我们需要设计巢式引物来解决这个问题。BSP,MSP引物的设计，除了要遵循引物设计的基本原则外，还要注意一下一些规则：

(完整版)甲基叔丁基醚的合成

甲基叔丁基醚的合成烷基以取代醇类或酚类-OH中的氢原子或以与环醚上的氧原子结合的方式,可生成脂肪族醚类和芳香族醚类。常见的脂肪族醚有单醚和混合醚、甲基纤维素和乙基纤维基、乙二醇-乙醚和二乙二醇-乙醚、平平加、甲基叔丁基醚等,芳香族醚类有苯甲醚、β-萘基甲基醚、二苯甲醚等,其中生产吨位最大者要数甲基叔丁基醚。甲基叔丁基醚(简称MTBE)是汽油添加剂醚类的主要产品,稍为次要的醚类还有甲基叔戊基醚(TAME)、乙基叔丁基醚(ETBE)、乙基叔戊基醚(TAEE)和二异丙基醚(DIPE)等。据预测,到2000年对上述醚类的需求在30Mt/a以上。汽油中添加上述醚类后,不仅能提高汽油的辛烷值(MTBE本身的马达辛烷值可达101,研究法辛烷值可达118),改善汽车的行车性能,而且还能降低排气中CO含量。生产成本(达相同辛烷值汽油)仅为烷基化油的80%。现在,MTBE除主要用作汽油添加剂外,还用来经裂解制取高纯异丁烯。 1.化学反应

MTBE通常是由甲醇与异丁烯在磺化离子交换树脂的催化作用下合成的: 主要副反应有:异丁烯与原料中的水分反应生成叔丁醇、甲醇脱水缩合生成二甲醚,异丁烯聚合生成二聚物或三聚物等。生成的这些副产物会影响产品的纯度和质量,因此要控制适宜的反应条件以减少副反应的发生。此外,为让磺化离子交换树脂发挥正常的催化作用,要求原料中的金属阳离子如Na＋、Ｋ＋、Ca２＋、Mg２＋等的含量小于1 ppm,不含碱性物质及游离水等。 2.合成技术分类甲醇与异丁烯之间发生的醚化反应,甲醇是烷基化原料,异丁烯是烷基化剂。在实际生产中,常以C４混合烃作烷基化剂,其中异丁烯含量在10%～50%之间,其余为正丁烷和正丁烯等惰性组分,由于醚化反应进行得很完善,异丁烯转化率很高,反应尾气稍经分离就可得到纯度很高的正丁烯,用于有机合成或高聚物单体。因此,按照异丁烯在MTBE装置中达到的转化率及下游配套工艺的不同,合成MTBE技术可分为三种类型,见表5-3-03。表中的标准转化型对异丁烯的转化没有严格的限制,剩余的异丁烯仍可用作烷基化装置的有

(整理)常用路亚假饵种类图解

常用路亚假饵种类图解分步阅读步骤 ?1 ?2 ?3 ?4 为了区分路亚钓法当中使用的鱼饵，我们通常使用英文名称的译音来称呼它们为假饵（拟饵）。由于名称不包含中文意思，很容易让路亚钓的初学者们搞不清楚各个品种路亚的概念和适用环境和使用方法。这里我们整合一个路亚假饵图片来向大家简单介绍它们。方法 1. 1 图中的路亚假饵叫铅笔属于鱼形假饵的一种，也是水面系的假饵。正像它的英文名字pencil的意思一样，光溜溜的笔形身体只是多了两只三本钩。铅笔的主要操作方法叫做“遛狗”，钓手用手腕不断地抖动钓竿，利用竿尖产生的弹力由钓线断续的牵引假饵，同时由于水流的阻力和假饵重心的偏移，使得它在能在水面上做出左窜一下右窜一下的动作，俗称“遛狗”了。与popper一样，鱼在攻击这类假饵时的效果也是常令钓者感觉最刺激的

2. 2 Crank假饵在国内也被叫做“小摇滚”“小胖头”“小胖儿”等等可爱的名字，英文单词Crank的中文意思一是弯曲，描述这中假饵在水中行进的姿态——摇摇摆摆。而国内的称谓则又是根据它的外观而来。 Crank在水中的游动姿态非常夸张的摇摆，它也有不同的浅水深度设定。抛投入水后抽竿，使假饵快速下降到设定深度。采用快慢结合的方式收线牵引，也可以采用竿尖牵拉的方法搜索鱼的攻击。

3. 3 路亚假饵米诺的称谓来源于英文单词minnow，直译是小鱼的意思，很形象的描绘出了这种假饵的特点。常用于针对游速较低或者鱼的活性不强的时候，属于中上层搜索假饵。其潜水深度根据其舌板的长度和宽度决定，在产品的外包装上都有标注，可以针对需要选用。基本操作方法：扯饵法：用力扯钓线，使路亚饵潜水后上浮，利用路亚从水面到水底的动作，以及激起的水波引起鱼儿的注意。颤竿：不规则间歇地轻颤动钓竿，带动路亚在水中游动。抽饵法：和扯饵法相比，抽饵法中的抽竿幅度较大，用力也较强，移动的距离也大，移动的速度较快，适当掌握力度。不给鱼儿喘息的机会，使它们条件反射似的马上咬饵，具有极强的诱惑性。

甲基化原理及方法

甲基化检测方法（亚硫酸氢盐修饰测序法）基本原理在于：样本经亚硫氢酸盐处理后,甲基化的胞嘧啶（C）保持不变,但非甲基化的胞嘧啶被转化成脲嘧啶,因此在利用该处理产物作为模板的PCR产物中,甲基化的胞嘧啶还是胞嘧啶,但非甲基化胞嘧啶变成了脲嘧啶（胸腺嘧啶）,此时检测到的胞嘧啶（C）即是样品中本身的甲基化位点. 第一部分基因组DNA的提取。 DNA提取试剂盒，如果实验室条件成熟，自己配试剂提取完全可以。DNA比较稳定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因组DNA应该是完整的。此步重点在于DNA的纯度，即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取过程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除两者。使用两者的细节： 1：蛋白酶K可以使用灭菌双蒸水配制成20mg/ml； 2：RNA酶必须要配制成不含DNA酶的RNA酶，即在购买市售RNA酶后进行再处理，配制成10mg/ml。否则可能的后果是不仅没有RNA，连DNA也被消化了。两者均于-20度保存。验证提取DNA的纯度的方法有二： 1：紫外分光光度计计算OD比值； 2：1%-1.5%的琼脂糖凝胶电泳。我倾向于第二种方法，这种方法完全可以明确所提基因组DNA的纯度，并根据Marker的上样量估计其浓度，以用于下一步的修饰。第二部分亚硫酸氢钠修饰基因组DNA 如不特别指出，所用双蒸水（DDW）均经高压蒸汽灭菌。 1：将约2ugDNA于1.5mlEP管中使用DDW稀释至50ul； 2：加5.5ul新鲜配制的3M NaOH； 3：42℃水浴30min；水浴期间配制： 4：10mM对苯二酚（氢醌），加30ul至上述水浴后混合液中；（溶液变成淡黄色） 5：3.6M亚硫酸氢钠（Sigma，S9000），配制方法：1.88g亚硫酸氢钠使用DDW稀释，并以3M NaOH滴定溶液至PH 5.0，最终体积为5ml。这么大浓度的亚硫酸氢钠很难溶，但加入NaOH后会慢慢溶解，需要有耐心。PH一定要准确为5.0。加520ul至上述水浴后溶液中。 6：EP管外裹以铝箔纸，避光，轻柔颠倒混匀溶液。 7：加200 ul 石蜡油，防止水分蒸发，限制氧化。 8：50℃避光水浴16h。一般此步在4pm开始做，熟练的话不到5pm即可完成，水浴16h正好至次日8am以后收，时间上很合适。这一步细节： 1：基因组DNA的量不需十分精确，宁多勿少，因为在以后纯化回收步骤中会有丢失，且此方法修饰最多可至4ug。

甲基叔丁基醚MTBE工艺

万吨/年MTBE 装置工艺设计摘要：简述甲基叔丁基醚（MTBE）生产的工艺流程，对国内外MTBE生产工艺进行对比，阐述了本装置相对于传统装置的优势。甲基叔丁基醚是汽油的一种无毒添加剂，也可作为二次加工化工产品的原料，对于国民经济发展具有重要作用。甲基叔丁基醚（MTBE）装置是一个催化反应与精馏操作相结合的装置。整套装置涵盖筒式催化反应技术及催化精馏技术等先进理念，融合国内外先进技术。它包括筒反、催化精馏[1][2]、甲醇水洗回收三个单元。其中催化精馏技术较为先进，正在逐渐应用到化工生产中。整套装置具有操作方便、投资小、节约能源的特点。关键词：甲基叔丁基醚；甲醇；混合碳四；催化精馏 tons / year MTBE plant process design Abstract：Description methyl tert-butyl ether (MTBE) production process,MTBE production processes at home and abroad to compare,described the device as opposed to the advantages of conventional devices. Methyl tert-butyl ether is a non-toxic gasoline additive, but also can be used as secondary processing chemical products, raw materials play an important role for national economic development. Methyl tert-butyl ether (MTBE) device is a catalytic reaction and distillation operations combined device. Cover the entire cylindrical catalytic reaction device technology and advanced concept of catalytic distillation technology, integration of advanced technology at home and abr oad. It consists of anti-cylinder, catalytic distillation, methanol washing recovery of three modules. One catalytic distillation technology is more advanced, is gradually applied to the chemical into the births. Whole device has easy operation, low invest ment, energy-saving features. Key Word：Methyl tert-butyl ether；Methanol；Hybrid Carbon 4；Catalytic distillation 目录一、绪论 (4) （一）概况 (4)

路亚饵的种类

路亚饵的种类：- P! c' s A- D, r( ` |+ Y 路亚饵主要有三种分类，分别是硬体路亚饵、软体路亚饵、铁板亮片饵。一、硬体路亚饵(HAND BAITS)又有五种分类，分别是Minnow 米诺、Crank 摇滚、VIB震动、Popper 波扒、Pencil 铅笔五类。 1、Minnow 米诺型：潜浮水类假饵，假饵前部的‘舌头’叫压水板，压水板的长度、大小、角度，决定假饵的潜水深度，此类饵根据鱼的生活习惯，或者不同天气进行选择使用，一般适合各种路亚鱼类都可使用。米诺型身体较为细长，也有两节或三节式的设计，这种设计主要是模仿鱼受伤游动的姿态，在鱼比较谨慎的情况下，可以引发很好的攻击效果。 2、1 Q+ e% V/ q1 H9 X Popper 波扒型：水面撞水类假饵，此类饵没有‘舌头’形压水板，主要在水面上使用，其凹陷形的前部可以在水面拖动时撞出水花，模仿小鱼在水面跳跃、戏耍，或者有大鱼追击小鱼慌不择路的效果，引发大鱼追击、攻击。 3、 Crank 摇滚(曲盆羞)：潜浮水类假饵，此种饵身体一般较短，称短圆形，有人叫小胖子，其潜水特点与米诺基本一样，只是此类饵游动姿态很‘淫贱’，摆幅较大，有些像肥臀扭动，所以也叫曲盆羞，也有两节式设计。 4、9 V) Q( Q$ g; S0 |2 w VIB(vibration) 震动型：沉水类假饵，此类饵也没有压水板，重量较重，适合远投使用，扔到水里会自动下沉，根据操作者控制可进行全层搜钓，不过此类饵使用时，对水域情况比较了解最好，否则非常容易挂地球。 5、3 N, ], v' E" c0 T/ [ Pencil 铅笔型：水面类假饵，此类与波扒有些类似，不过不会形成水面撞击的水花，只会在水面左窜右窜，做出涟漪，比较适合在清晨、傍晚钓鲈鱼使用。二、软体路亚饵(SHOFT BAITS)：软体饵基本都为沉水型，根据重量不同，比较适合远投或全层钓使用，常见类别一般分为蠕虫类、蛆虫类、爬虫虾形类、蛙类或鱼形类。 Worm蠕虫 Grub蛆型 Frog 蛙型 LIZARD 虾型、爬虫型、蜥蜴型 Pinfish 鱼型第三大类，铁板饵，形状各异，不同克数适合不同水域，国外那种深海铁板大鱼，都是此种饵的功劳。还有一种是旋转亮片，此类饵比较适合浅海特别是淡水使用，使用小型亮片钓翘嘴也是非常有效果的。米诺.jpg(67 KB, 下载次数: 1)

pcr扩增的原理和步骤

PCR 扩增的原理和步骤聚合酶链反应(polymerasechain reaction PCR)技术是20世纪80年代中期发展起来的一项基因检测即一种体外核酸扩增技术。它具有许多优点：特异性、易重复、高效性等，可以在几个小时完成过去几天或者更长时间完成的实验，因此这项技术在生物医学领域具有划时代的意义。但是，传统PCR技术有它的缺点，它通过电泳对扩增反应的最终产物进行定性分析而不能对起始模板准确定量，同时也无法对扩增反应实时检测且在实验过程中易污染而出现假阳性。人们为了寻找更为灵敏、快速、简便、高特异性的方法进行了许多探索研究，直到1996 年由美国Applied Biosystems公司推出了一种新的定量试验技术—荧光定量PCR(F lurogenic Quantitative Polymerase Chain Reaction，FQ-PCR；real-time quantitati ve PCR,RT-qPCR or qPCR)，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，标记跟踪PCR产物进行实时监测反应，利用与之相适应的软件对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度，实现了PCR 从定性到定量质的跨越，具有里程碑意义。目前，此项技术已应用于干细胞研究、肿瘤学和遗传疾病研究、病原体检测和传染病研究、药物分析、药物基因组学、植物学研究和农业生物科技等多领域研究中。本文对实时荧光定量PCR 的原理、分类和应用进行阐述。一、实时荧光定量PCR技术的原理 real-time quantitative PCR 技术是指在 PCR 反应体系中加入荧光基团，通过荧光信号不断累积而实现实时监测PCR全程，然后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。在荧光定量PCR技术中有2个概念比较重要。(1)荧光域值(t hreshold)的设定： PCR 反应的前 15 个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3～15 个循环的荧光信号标准偏差的10 倍。(2)Ct 值：C 代表Cycle，t 代表 threshold，Ct 值的含义是每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。在实时荧光定量PCR中，对全程PCR扩增过程进行实时检测，根据反应时间和荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。一般来说，整条曲线可以分3个阶段：荧光背景信号阶段、荧光信号指数扩增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号与背景无法区分，无法判断产物量的变化。在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，所以反应终产物量与起始模板量之间已经不存在线性关系，通过反应终产物也算不出起始DNA 拷贝数。只有在荧光产

路亚钓鱼装备介绍

路亚学堂基础知识一、什么是路亚路亚一词来自于“lure”的译音，是引诱的意思，是一种以现代科技辅以人类智慧的一种新兴钓法，也有人称作为假饵钓，拟饵钓，由于必须比其他静态钓法，更充分将环境，气候，鱼类习性等因素加以综合考量，才能在自然环境中透过操作，使假饵能发挥引诱对象鱼觅食的作用，从某个程度上来说，也就是作到真正的以假乱真。二、路亚竿的知识路亚竿从直观上来看有两大类直柄式（spinning）和枪柄式（casting）,飞蝇竿（fly rod）除外。但又因假饵有很多样式以及操作手法的需要还有水域、对象鱼之差异，路亚竿又分为很多细的种类，如：淡水鲈鱼竿（bass rod）、鳟鱼竿（trout rod）、飞蝇竿（fly rod）、海鲈竿（sea bass rod）、乌贼竿（egi rod）、船钓铁板竿（jigging rod）等等。三、路亚竿的常见参数路亚竿要轻，对竿子上的导环质量要求较高，因为在一次钓鱼过程中要不停的抛投。在一般的抛投中，中调（medium）的竿子较好使用，对于操作表层系的用先调（fast或extra fast）的竿子能够最大程度的用竿子来体现假饵的活力。竿子的从软到硬的表示方法如下表 UL——Ultra light 超软YH——Heavy 硬 L——Light 软XH——Extra heavy 超硬 ML——Medium light 中软XXH——Extra extra heavy 超超硬 M——Medium 中等

MH——Medium heavy 中硬纺车轮纺车轮大概是所有渔轮里面最简单使用的渔轮，由于操作简易，使用范围广，因此也一样适用在路亚钓法中。纺车轮的特点在于能够利用机械结构，透过简单的方式，使渔线有条理的分配在线轮上，因此对于需要时常反覆抛投收线的路亚钓法来说，纺车轮是非常适合在一般人刚跨入路亚钓法所选择的渔轮款。除了和与其他钓法上有着相同的评价标准，轻量化是纺车轮在长时间路亚钓操竿过程中一个非常重要的选购考量。一般来说，路亚钓选择的纺车轮是以4000型以内的渔轮为最佳，但仍可针对使用考量而有不同的选择。近年来有许多路亚钓法开始使用编织线作为路亚钓的主要线种的趋势，因此为了节省体育线的用量，在选配的机种上，也有在纺车渔轮机种上配备浅线轮的机种出现，除了节省空间不用为了把PE线的容量缠到饱满而浪费成本，较大的线轮内直径也可有效的增加收线效率，也是一个经济实惠的选择。

甲基叔丁基醚安全技术说明书

甲基叔丁基醚安全技术说明书化学品中文名称：甲基叔丁基醚化学品英文名称：methyl-tert-butyl ether 中文名称2：英文名称2：tert-butyl methyl ether 技术说明书编码：317 CAS No.：1634-04-4 分子式：C5H12O 分子量：88.2 第二部分：成分/组成信息回目录有害物成分含量CAS No. 甲基叔丁基醚1634-04-4 第三部分：危险性概述回目录危险性类别：侵入途径：健康危害：本品蒸气或雾对眼睛、粘膜和上呼吸道有刺激作用，可引起化学性肺炎。对皮肤有刺激性。环境危害：对环境有危害。燃爆危险：本品易燃，具刺激性。第四部分：急救措施回目录皮肤接触：脱去污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。眼睛接触：提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗。就医。吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，给输氧。如呼吸停止，立即进行人工呼吸。就医。食入：饮足量温水，催吐。就医。第五部分：消防措施回目录危险特性：易燃，其蒸气与空气可形成爆炸性混合物，遇明火、高热或与氧化剂接触，有引起燃烧爆炸的危险。与氧化剂接触猛烈反应。其蒸气比空气重，能在较低处扩散到相当远的地方，遇火源会着火回燃。有害燃烧产物：一氧化碳、二氧化碳。灭火方法：尽可能将容器从火场移至空旷处。喷水保持火场容器冷却，直至灭火结束。处在火场中的容器若已变色或从安全泄压装置中产生声音，必须马上撤离。灭火剂：抗溶性泡沫、干粉、二氧化碳、砂土。第六部分：泄漏应急处理回目录应急处理：迅速撤离泄漏污染区人员至安全区，并进行隔离，严格限制出入。切断火源。建议应急处理人员戴自给正压式呼吸器，穿防静电工作服。尽可能切断泄漏源。防止流入下水道、排洪沟等限制性空间。小量泄漏：用砂土、蛭石或其它惰性材料吸收。大量泄漏：构筑围堤或挖坑收容。用泡沫覆盖，降低蒸气灾害。用防爆泵转移至槽车或专用收集器内，回收或运至废物处理场所处置。第七部分：操作处置与储存回目录操作注意事项：密闭操作，全面通风。操作人员必须经过专门培训，严格遵守操作规程。建议操作人员佩戴过滤式防毒面具（半面罩），戴化学安全防护眼镜，穿防静电工作服，戴橡胶耐油手套。远离火种、热源，工作场所严禁吸烟。使用防爆型的通风系统和设备。防止

[海钓路亚饵的用法] 路亚海钓用什么假饵

[海钓路亚饵的用法] 路亚海钓用什么假饵钓鱼是一种运动，是一种有益身心健康的运动，多做运动对身体健康有益，所以玩。当你用手上路亚中鱼了，那真是一种精神享受，你就更能慢慢的体会到魅力的所在。今天小编给大家介绍海钓路亚假饵的使用方法。海钓路亚饵的种类假饵的外形生动可爱，不但是鱼钩，也是一种艺术品。通常我们所选择的路亚硬假饵均有几个：米诺、小胖、波扒、VIB，斜切亮片，勺型亮片、铅笔这几种作为我们还是海上之旅。海钓路亚饵如何使用 1、米诺-----米诺路亚比较容易操作，在抛投后压低竿头，保持稳定的速度回收，这是最基本的操控手法，非常实用。但有一点要注意，操控米诺时人不适合站在较高的地方使用，如果站在高处使用米诺的话，千万不要拉得米诺贴着水面像快艇似的飞快向前冲，这样会使掠食鱼追不上的!速度太快的假饵回收到一半就已经到了你的跟前，就做不了诱鱼的动作了。那就要本着不急不躁的心情匀速回收线时，每收几圈线竿尖轻轻一抽，略使路亚加速，模仿小鱼慌忙逃窜的样子，也可在收线时，竿尖往左轻抽一下，再往右轻抽一下，如此反复，这样使水中的路亚呈”之”字形前进路线生动的样子，就更易引起掠鱼的注意。至于回收的快慢，没有什么规定，如果回收的速度慢鱼不咬饵便试快点的速度，快不追再放回慢，掌握这基本的操作手法后，你可以再加进一些花式手法，反反复复地多试试几次后必有心得，这就是米诺的精髓所在之出。 2、小胖-----小胖的操控手法与米诺差不多，按照米诺的操控手法就可以了。多数小胖的压水板都比较宽大，动作比较夸张，鱼儿活性比较低的时段，使用小胖就不太适合了。有一点要稍加注意的是，小胖与米诺有着一个不同之处，就是站于高处时，它的压水性较高，不易浮到水面来，也可以拉动一段距离时，停1-2秒再拉动，这样使用小胖就比米诺较好，此方法比较好用。如果同样在一个较高的码头边使用米诺的话，回收到一半米诺已到了水面，这样米诺就做不了什么诱鱼动作了，优越性就比不上小胖了。所以呢还是要本人慢慢的去体会了! 3、波扒-----手法是投饵后降低竿头，不停的用微小的动作操控伴以高速收回，比较好用的手法有举高竿头，中速不停地收，到近岸时降低竿头收回来，在鱼儿活性低的时段，动作应以较慢和低频率撞出水花较好，在水浊时使用波扒效果也不错。清晨用波扒是最佳时机，早晨和黄昏沿着岸边拖动，鱼儿活跃或在水面附近找小鱼群时，钓手操控钓竿在速度快慢不同撞出的水花也有所不同，你可以看到水花四溅，扮演被大鱼追赶时在水面撞出的水花来诱鱼时是最有效的。如果你中鱼了，就会感觉到其中的乐趣了! 4、VIB、斜切亮片、勺型亮片-----这三种假饵用来攻全泳层是很有效的，但是不适用于浅场，原因就是容易挂底，会丢失你心爱的假饵。所使用操作手法的速度很简单，有点要注意的是，投饵前要注意水流，水流会影响到假饵的下沉速度，投饵后心中开始读秒，，待饵沉到自己预定的水层深度后便可回收，待差不多收到跟前时小心挂底，所以接近时要举起竿头来收。这就要自己多多练习体会了! 5、铅笔-----铅笔型路亚饵身体较为瘦长，头部较小，没有压水板，也为水面型路亚饵，拖动时它会在水面左右摆动，或做点头动作，但和波扒不同的是，铅笔不会像波扒那样在水面激起水花，而是在水面左右窜动，做出涟漪，钓上层翘嘴或水面鲈鱼都很不错，在障碍物附近使用会有很好的效果。铅笔的手法十分讲究，如果操作方法不得当的话，一尾鱼都钓不到的。其操作方法是在投饵后，一路回收，以固定的手法拉竿头，一下一下地拉，不要停，

甲基化整体研究思路

甲基化整体研究思路 DNA甲基化是最早发现的修饰途径之一，真核生物中甲基化仅发生于胞嘧啶，即在DNA 甲基化转移酶（DNMTs）的作用下的CpG二核苷酸5’端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶。大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。DNA甲基化通常抑制基因表达，去甲基化则诱导了基因重新活化和表达。研究这种DNA修饰方式在不改变基因序列的前提下实现对基因表达的调控。脊椎动物DNA甲基化状态与生长发育调控及生理状态密切相关，比如在肿瘤发生时，抑癌基因CpG岛以外的CpG序列非甲基化程度增加，CpG岛中的CpG则程高度的甲基化状态，导致抑癌基因表达的下降。原核生物中甲基化多发生在CCA/TGG和GATC序列；真核生物中DNA甲基化一般发生在CpG位点上；哺乳动物DNA甲基化只发生在CpG岛的胞嘧啶，植物甲基化发生在CpG和CpNpG。甲基化会使胞嘧啶转为5-甲基胞嘧啶，CpG位点在基因组是不常见的，主要密集于接近基因启动子的位置，统称为CpG岛。CpG位点的甲基化可以对基因表现有重要的影响。哺乳动物中，CpG序列在基因组中出现的频率仅有1%，远低于的其它双核苷酸序列。但在基因组的某些区域中CpG序列密度很高，可以达均值的5倍以上即所谓的CpG岛。通常，CpG岛大约含有500多个碱基，位于基因的启动子区或第一个外显子区。在哺乳动物基因组中约有4万个CpG岛，而且只有CpG岛的胞嘧啶能够被甲基化。甲基化研究思路：

1. 寻找甲基化位点 1) 甲基化二代测序寻找甲基化位点； 2) 对照组和实验组进行甲基化芯片检测，找到相关的甲基化位点； 3) 一些相关研究显示某些基因存在表达量降低的现象，可预测该基因是否存在CpG岛； 4) 根据文献寻找相关基因的甲基化位点。 2. 验证甲基化位点，并进行甲基化程度分析采用对照组和实验组样本进行甲基化验证。 1) MSP方法：可进行特定位点甲基化验证，适用于甲基化芯片后的结果，无法进行甲基化程度分析； 2) BSP克隆测序法：验证某些相关基因的甲基化位点，并计算出精确的甲基化程度百分比； 3) HRM法：适用于大批量样本甲基化验证，并能计算出甲基化程度范围； 4）焦磷酸测序法：验证某些相关基因的甲基化位点，并计算出精确的甲基化程度百分比。 3. 分析甲基化位点与研究的相关性根据对照组和实验组样本的检测结果，分析与研究的相关性。 1) 比较对照组和实验组相同甲基化位点甲基化是否有差异； 2) 比对对照组合实验组相同基因启动子区甲基化程度是否有差异； 4. 验证启动子发生甲基化的基因的表达量变化采用荧光定量PCR的方法检测相关基因的表达量，如果表达量降低，可能由于启动子区发生甲基化导致的，从而影响该基因所在的某些通路，导致一些疾病，或表型发生变化；如果没有发生变化，可能由于发生甲基化的区域与转录因子之间关联不是很密切，从而不会影响基因的表达。除了以上4个基础方向外，还有两个特殊方向： 1.省钱思路：老数据二次挖掘第一步：先从原有的表达谱芯片数据或转录组数据中，挖掘到差异表达的甲基化酶；第二步：对挖掘到的甲基化酶如METTL3或FTO等进行qPCR验证，并进行m6A-seq分析哪些基因甲基化水平发生改变；第三步：在细胞或动物模型中对这些基因进行敲低和过表达，qPCR和WB检测基因表达情况，并用LC-MS/MS法检测RNA整体m6A水平；第四步：继续对这些敲低和过表达的细胞进行转录组测序/小RNA测序或表达谱芯片/小RNA 芯片，分析哪些基因出现差异表达变化和可变剪切变化；第五步：找到甲基化酶调控的靶基因，进行敲低和过表达，看甲基化酶缺陷的细胞或动物模型表型能否补救；第六步：在确定上一步靶基因确实受到甲基化酶调控后，对靶基因上的motif进行点突变后进行验证；第七步：鉴定新型的甲基化酶（可选）。

甲基叔丁基醚实用工艺设计

年产4.0万吨甲基叔丁基醚的工艺设计摘要：本设计是年产4.0万吨甲基叔丁基醚装置生产工艺设计，主要以精馏工段为工艺设计对象，结合了中联能源年产3.0万吨MTBE项目的基础上，按任务要求生产量设计此工艺流程。此反应采用的合成工艺是汽油经脱丙烷后的混合成分中的异丁烯与甲醇在强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂催化剂上进行反应生成MTBE。随着我国国民经济和轿车行业的发展，加上国家对无铅汽油的禁止使用，作为环保型无铅汽油主要添加剂的甲基叔丁基醚，不仅能有效的提高汽油的辛烷值和汽油燃烧效率，并且减少有害气体的排放，还可有效改善汽油的冷启动特性和加速性能，对气阻无不良影响，因此其其社会需求量与日俱增。关键词：甲基叔丁基醚；异丁烯；甲醇；MTBE工艺设计 Process design of an annual output of 40000 tons of methyl tert- butyl ether Abstract: The design is annual outputs of 40000 tons of methyl tart-butyl ether device production process design, mainly in the distillation process for process design; combined with the Anhui Zhonglian Energy Company Limited annual production capacity of 30000 tons of MTBE project according to the task requirements, design the production process. The synthesis process of this reaction is used in gasoline by isobutene and methanol mixture components after depropanizer in strongly acidic styrene was the reaction of MTBE cation exchange resin catalyst. With the rapid development of our national economy and the car industry, together with the national ban on the use of unleaded gasoline, methyl tert butyl ether environment-friendly lead-free gasoline as main additive, not only can effectively improve the octane number of gasoline and gasoline combustion efficiency, and reduce the emission of harmful gases, the cold start characteristics can effectively improve the gasoline and the acceleration performance, no adverse effect on the air resistance, so its social demand grow with each passing day Key Words：Methyl tert-butyl ether；Isobutene ；Methanol; MTBE process design

甲基化检测方法

甲基化检测方法（亚硫酸氢盐修饰后测序法）第一部分基因组DNA的提取。这一步没有悬念，完全可以购买供细胞或组织使用的DNA提取试剂盒，如果实验室条件成熟，自己配试剂提取完全可以。DNA比较稳定，只要在操作中不要使用暴力，提出的基因组DNA 应该是完整的。此步重点在于DNA的纯度，即减少或避免RNA、蛋白的污染很重要。因此在提取过程中需使用蛋白酶K及RNA酶以去除两者。使用两者的细节： 1：蛋白酶K可以使用灭菌双蒸水配制成20mg/ml； 2：RNA酶必须要配制成不含DNA酶的RNA酶，即在购买市售RNA酶后进行再处理，配制成10mg/ml。否则可能的后果是不仅没有RNA，连DNA也被消化了。两者均于-20度保存。验证提取DNA的纯度的方法有二： 1：紫外分光光度计计算OD比值； 2：1%-1.5%的琼脂糖凝胶电泳。我倾向于第二种方法，这种方法完全可以明确所提基因组DNA的纯度，并根据Marker的上样量估计其浓度，以用于下一步的修饰。第二部分亚硫酸氢钠修饰基因组DNA 如不特别指出，所用双蒸水（DDW）均经高压蒸汽灭菌。 1：将约2ugDNA于1.5mlEP管中使用DDW稀释至50ul； 2：加5.5ul新鲜配制的3M NaOH； 3：42℃水浴30min；水浴期间配制： 4：10mM对苯二酚（氢醌），加30ul至上述水浴后混合液中；（溶液变成淡黄色） 5：3.6M亚硫酸氢钠（Sigma，S9000），配制方法：1.88g亚硫酸氢钠使用DDW稀释，并以3M NaOH滴定溶液至PH 5.0，最终体积为5ml。这么大浓度的亚硫酸氢钠很难溶，但加入NaOH后会慢慢溶解，需要有耐心。PH一定要准确为5.0。加520ul至上述水浴后溶液中。6：EP管外裹以铝箔纸，避光，轻柔颠倒混匀溶液。 7：加200 ul 石蜡油，防止水分蒸发，限制氧化。 8：50℃避光水浴16h。一般此步在4pm开始做，熟练的话不到5pm即可完成，水浴16h正好至次日8am以后收，时间上很合适。这一步细节： 1：基因组DNA的量不需十分精确，宁多勿少，因为在以后纯化回收步骤中会有丢失，且此方法修饰最多可至4ug。 2：所有试剂均须新鲜配制，所以配液的技术要过关，既要快，又要精确。 3：亚硫酸氢钠溶液呈强酸性，一定用碱将PH调制5.0，否则PH不合适会影响后续纯化吸收。