髓过氧化物酶

髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)又称过氧化物酶，是一种重要的含 铁溶酶体，存在于髓系细胞(主要是中性粒细胞和单核细胞)的嗜苯胺蓝颗 粒中，是髓细胞的特异性标志，随着对 MPO 研究的深入，人们发现 MPO 基 因多态性导致个体对一些疾病易感性的差异，与人类多种疾病的发生、发 展密切相关，因此越来越受到国内外学者的重视。 髓过氧化物酶 MPO 研究 1.MPO 的结构髓过氧化物酶(MPO)是由中性粒细胞、单核细胞和某些组 织的巨噬细胞分泌的含血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶 超家族成员之一。MPO 是 I 相代谢酶。每个酶分子有两个铁素基团，顺磁共 振波谱表明血红素中的铁是在甲酰基血红素部分。 MPO 的合成是粒细胞进入 循环之前在骨髓内合成并贮存于嗜天青颗粒内，外界刺激可导致中性粒细 胞聚集，释放髓过氧化物酶(MPO)。在成熟的粒细胞中，MPO 是含量最丰富 的糖蛋白，约占外周血多形核中性粒细胞(PMNs)内总蛋白质含量的 5%，血 液中 95%的 MPO 来源于 PMNs。MPO 的相对分子质量为 150×103，是由 2 个 亚单位聚合而成的二聚体，每个亚单位又由一条重链(α 链,相对分子质量 约 60×103)和一条轻链(β 链,相对分子质量约 15×103)所构成。2 个亚单 位在 α 链处由 1 个二硫键相连。重链具有亚铁卟啉基团，说明 MPO 是铁依 赖性的。MPO 以 3 种亚形存在于髓系细胞中，分别为 MPOⅠ、Ⅱ、Ⅲ。3 种 亚型主要是重链有差异，轻链的差异较小，导致它们在相对分子质量及疏 水性等方面不同，3 种亚型在功能上的差异还不明确，有待进一步研究。 2.MPO 基因及其多态性人髓过氧化物酶基因位于染色体 17q23?q24，含 有 12 个外显子和 11 个内含子，长约 14 638 bp，调控其基因表达的是生长 因子。MPO 的 mRNA 在早幼粒细胞的表达水平最高，其次是原始粒细胞、幼 稚和原始单核细胞；当细胞分化到成熟时期，MPO 基因表达水平迅速下降。 现已知 MPO 基因首先表达的是一条相对分子质量为 89×103 的前体蛋白 (precursor protein)，经过翻译后加工，切割成 α 和 β 两种亚基，再聚 合为成熟的 MPO 分子，加上糖链，最后形成有功能的 MPO。MPO 在基因表达 过程中存在的缺陷，造成 MPO 基因 DNA 序列发生改变，影响其活力。MPO 基 因的多态性影响其基因的转录和表达，对机体的疾病易感性有一定的影响。 Chevrier 等发现了外显子 11 处和启动子区域的 V53F、A332V、I642L 和 IVS11? 2A→C4 个新的基因多态性位点， 它们的作用与功能需要进一步研究。 Piedrafita 等研究发现与疾病有关的位点有 5 个：463G/A，R569W，Y173C， M251T 和外显子 9 的碱基缺失。目前研究最多的是 MPO 基因启动子区第 463 位核苷酸 G/A 的突变，该位点位于 SP1 转录因子识别结合的顺式作用元件 中，内含 4 个 Alu 重复序列。G/A 的突变导致位于 Alu 反应元件的 SP1 转录 因子结合位点消失，从而使 MPO 转录水平显著下降。也有报道发现外显子 10 的密码子 569 存在 C 被 T 替代，使 CGG→TGG，导致遗传性 MPO 缺陷性疾

病。还有研究报道在 MPO 基因 129 位点存在 G 被 A 取代，使 MPO 基因的表 达水平显著降低。另外，据有关文献报道，MPO 基因 463A 等位基因与一些 癌症的风险降低相关。 3.MPO 的生物学作用 MPO 是中性粒细胞的功能标志和激活标志， 其水平 及活性变化代表着嗜中性多形核白细胞(PMN)的功能和活性状态。纯化的人 MPO 活性为 25～35 IU/mg，水溶性好，底物 H2O2 浓度>0.8 mmol 时酶受抑 制，酶反应最佳 pH 为 4.5～5.5，当 pH≥10，或≤2 时酶失活。MPO 的主要 功能是在吞噬细胞内杀灭微生物，利用过氧化氢和氯离子产生次氯酸盐， 并形成具有氧化能力的自由基。 构成 MPO–H2O2–卤素系统。 许多研究发现， MPO 不仅能杀灭吞噬于细胞内的微生物，而且可释放到细胞外，破坏多种靶 物质，如肿瘤细胞、血小板、NK 细胞、原虫、毒素等，对机体产生和调节 炎症反应等多方面发挥作用。然而，在特定条件下，MPO 催化反应生成过量 的氧化剂(HOCl、3–氯化酪氨酸、酪氨酰基、硝基酪氨酸等)，超过局部抗 氧化剂的防御反应时，就会导致氧化应激和氧化性组织损伤。MPO 还参与调 节炎症反应的许多过程， MPO 缺陷的中性粒细胞因过量的注入炎症部位而发 生氧化反应，大量的超氧化物和氧化物形成，造成炎症部位组织细胞损伤。 此外还有学者发现 MPO 能与 DNA 牢固结合形成复合物，有效保护 DNA 防止 其在氧化过程中受损，从而保证髓系细胞的正常分化成熟及功能。 编辑本段髓过氧化物酶(MPO)与相关疾病 1.MPO 与心血管疾病 1.1MPO 与冠状动脉疾病。冠心病是心血管系统中最常见的疾病，而动 脉粥样硬化(AS)又是形成冠心病的重要病理基础。AS 发病过程中通常出现 氧化低密度脂蛋白，进而巨噬细胞吞噬脂质变成泡沫细胞，泡沫细胞的形 成在 AS 的发生机制中起关键作用。研究发现 MPO 有促进 AS 病变形成的作 用， MPO 通过产生自由基和多种反应性物质， 促进斑块形成和不稳定性增加， 加速 AS 进展，进而引起多种并发症如急性冠脉综合征(ACS)。研究发现， MPO 缺陷的个体罹患心血管疾病的危险性明显下降。MPO 水平的升高不仅与 患冠状动脉疾病易感性相关，还可以预测早期患心肌梗死的危险性。 1.2MPO 与急性冠脉综合征(ACS).MPO 促进 ACS 病变形成，并影响粥样 斑块的稳定性，通过增大氧化应激而引起 ACS。目前的研究表明，MPO 是预 测 ACS 患者发生不良心血管事件的一个新的预测因子，特别是在肌钙蛋白 T(TnT)水平较低的患者， MPO 能够识别那些将来发生心血管事件危险性较高 的患者。 2.MPO 与肿瘤

2.1MPO 与肺癌在肺部受微生物侵袭、职业暴露以及吸烟时，MPO 会随 中性粒细胞的聚集释放到炎症部位。 MPO 可代谢激活多种与肺癌有关的环境 致癌物，能将前致癌物如多环芳烃类的苯并芘(BaP)转化成具有高度反应性 和致癌性的活性产物二醇环氧化苯并芘(BPDE)，BPDE 能与 DNA 形成加合物 并导致姐妹染色体互换，从而导致肺癌。 2.2MPO 与白血病白血病是累及造血干细胞的造血系统恶性肿瘤，其病 因尚不完全清楚。 3.MPO 与地方性砷中毒 3.1 近年来，随着分子生物学领域的不断发展，发现 MPO 在砷中毒所致 皮肤病变的发生发展中起着重要作用。 MPO 目前被研究者认为可能是砷中毒 新发现的一种易感标志物，将在慢性砷中毒的早期诊断和危险评估中具有 重要的意义，但国内就这方面的研究还没有涉及到，国外对其深入的影响 机制的研究也不是很多，因此还很难在现有的研究基础上建立起砷中毒易 感性与 MPO 及其多态性的明确关系，还需要进一步的研究证实。 4.MPO 与其他疾病 4.1MPO 在现阶段的研究也确定了它在疾病早期诊断与危险评估中具有 重要的意义。MPO 通过不同的途径可导致某些疾病，同时其基因多态性也会 降低机体对某些疾病的易感受性，从而对机体产生保护作用，但其作用机 制仍不清楚，随着分子生物学领域的不断发展，MPO 的作用机制研究将不断 深入，可能会发现其他一些与疾病易感性有关的多态性位点，从而使人们 更清楚的认识其相关疾病的发生、发展，以便对这些人群采取有效的预防 和治疗措施

髓过氧化物酶 myeloperoxidase 过氧化物酶含血红素辅基,主要存在于过氧化酶体,利用 H2O2 以氧化酚类及胺类化合物。 ... 动物的肝、肾中只有微弱的活性，在牛乳中已分离出过氧化物酶，在白细胞中含有髓性过氧 化物酶，这就是脓具有过氧化物酶活性的原因。红细胞也含过氧化物酶，极少量 ...
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髓过氧化物酶在急性冠状动脉综合征患者近期预后判断中的作用
目的探讨血浆髓过氧化物酶水平对急性冠状动脉综合征患者近期心脏事件的 预测作用。方法采用酶联免疫吸附法分别测定急性冠状动脉综合征组、稳定型心绞 痛组和非冠心病组患者的血浆髓过氧化物酶浓 ... 详情>>
中国动脉硬化杂志 2006 年 08 期 内科学; 血浆髓过氧化物酶; 急性冠状动脉综合征; 中性粒 细胞; 酶联免疫吸附法; 冠状动脉造影; 预后;
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非糖尿病维持性血液透析患者髓过氧化物酶与颈动脉硬化的相关性
目的探讨非糖尿病维持性血液透析患者髓过氧化物酶与颈动脉硬化相关指标 的关系。 方法酶联免疫吸附法测定非糖尿病维持性血液透析患者同一次透析前后血 浆髓过氧化物酶和血清弹性蛋白酶水平变化, ... 详情>>
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巨噬细胞髓过氧化物酶与低密度脂蛋白氧化关系的研究
目的从低密度脂蛋白 (L DL)诱导巨噬细胞髓过氧化物酶活性升高的角度探讨 体内 L DL 氧化的可能机制 ,为动脉粥样硬化 (AS)的抗氧化治疗提供新的思路。 方法以体外培养的大鼠 ... 详情>>

免疫学杂志
2001 年 01 期
巨噬细胞; 髓过氧化物酶; 低密度脂蛋白; 牛磺酸;
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探讨颈动脉粥样斑块超声造影显像特征及血浆髓过氧化物酶水平与脑梗死的关系
目的探讨颈动脉斑块实时超声造影的显像特征及血浆髓过氧化物酶水平对脑 梗死事件的预测作用。 方法对 73 例颈动脉硬化患者的 89 处斑块进行超声造影检查, 观察斑块的显像特点。将他们分为斑块造 ... 详情>>
中国超声医学杂志 死; 2008 年 08 期 超声检查; 造影剂; 颈动脉硬化; 血浆髓过氧化物酶; 脑梗
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光化学法诱导小鼠局灶性脑梗死肿瘤坏死因子α 表达及髓过氧化物酶活性的变化
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冠状动脉病变与 2 型糖尿病及髓过氧化物酶关系的探讨
目的:探讨冠状动脉病变与 2 型糖尿病和髓过氧化酶的关系。 方法:对 2006 年 9 月至 2007 年 9 月在我院就诊的 210 例胸痛临床怀疑患冠心病的患者进行冠状动脉

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唾液过氧化物酶
正 过氧化物酶具有多种生理功能,无论在细胞代谢调节还是在防御方面催化 许多重要反应,是重要的细胞氧化还原体系.1944 年 Dempsey 首先在甲状腺中发现 甲状腺过氧化物酶(TPO). ... 详情>>
生命的化学(中国生物化学会通讯) 1987 年 06 期
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联合测定免疫球蛋白 M 和髓过氧化物酶对新生儿细菌感染的早期诊断意义
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中华妇幼临床医学杂志 2009 年 06 期 免疫球蛋白 M; 髓过氧化物酶; 细菌感染; 新生儿;
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髓过氧化物酶基因 G-463A 多态性与肺癌易感性关系的 meta 分析
背景与目的关于髓过氧化物酶基因 G-463A 多态性与肺癌易感性关系已有广 泛研究,但研究结果不一致。本研究利用 meta 分析的方法探讨髓过氧化物酶基因 G-463A 多态性与肺癌易感性的相 ... 详情>>
中国肺癌杂志 2010 年 02 期 肺肿瘤; 髓过氧化物酶; 多态性; meta 分析;

人髓过氧化物酶(MPO)ELISA 检测试剂盒 本试剂仅供研究使用 试验原理： MPO 试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知 MPO 浓度的标准品、未知浓度的样品加入微 孔酶标板内进行检测。先将 MPO 物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的 HRP。再经过 温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物 A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅 和样品中 MPO 的活性浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存） 96/48 份酶标板 塑料膜板盖 标准品：400ng/ml 空白对照 标准品稀释缓冲液 生物素标记的 MPO 抗体 亲和链酶素-HRP 洗涤缓冲液 底物 A 底物 B 终止液 96 孔配置 1 块板（96T） 1块 1 瓶（0.6ml） 1 瓶（1.0ml） 1 瓶（5ml） 1 瓶（6ml） 1 瓶（10ml） 1 瓶（20ml） 1 瓶（6.0ml） 1 瓶（6.0ml） 1 瓶（6.0ml） 48 孔配置 半块板（48T） 半块 1 瓶（0.3ml） 1 瓶（0.5ml） 1 瓶（2.5ml） 1 瓶（3.0ml） 1 瓶（5.0ml） 1 瓶（10ml） 1 瓶（3.0ml） 1 瓶（3.0ml） 1 瓶（3.0ml） 配制 即用型 即用型 按说明书进行稀稀 即用型 即用型 即用型 即用型 按说明书进行稀释 即用型 即用型 即用型
自备材料 1． 蒸馏水。 2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200、500ul、1000ul。 3． 振荡器及磁力搅拌器等。 安全性 1． 避免直接接触终止液和底物 A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。 2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。 3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。 操作注意事项 1． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。 2． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。 3． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。 4． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物 A、B 液时，避免使用带金属部分的加样器。 5． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。 6． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。 7． 底物 A 应挥发，避免长时间打开盖子。底物 B 对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触， 有毒。实验完成后应立即读取 OD 值。 8． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。 9． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

样品收集、处理及保存方法 1、 血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g 离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。 2、 血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g 离心 30 分钟去除颗粒。 3、 细胞上清液---1000×g 离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。 4、 保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶 血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在 37℃或更高的温度加热解冻。应在室 温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。 试剂的准备 1． 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表 中进行： 400ng/ml 200ng/ml 100ng/ml 50ng/ml 25ng/ml 12.5ng/ml 0ng/ml （6 号标准品） （5 号标准品） （4 号标准品） （3 号标准品） （2 号标准品） （1 号标准品） （空白对照） 原倍浓度不用稀释直接加入 50ul。 100ul 的原倍标准品加入 100ul 的标准品稀释液 100ul 的 5 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液 100ul 的 4 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液 100ul 的 3 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液 100ul 的 2 号标准品加入 100ul 的标准品稀释液 原始浓度不用稀释直接加入 50ul。
2． 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水 50 倍稀释。 操作步骤 1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样 上的误差。 2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品 根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。 3． 加入稀释好后的标准品 50ul 于反应孔、加入待测样品 50ul 于反应孔内。立即加入 50ul 的生物素标记 的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育 1 小时。 4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果 用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 5． 每孔加入 80ul 的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育 30 分钟。 6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡 30 秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作 3 次。如果 用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。 7． 每孔加入底物 A、B 各 50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育 10 分钟。避免光照。 8． 取出酶标板，迅速加入 50ul 终止液，加入终止液后应立即测定结果。 9． 在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。 性能 1. 灵敏度：最小的检测浓度小于 1 号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.990。 2. 特异性：不与人其它细胞因子反应。 3. 重复性：板内、板间变异系数均小于 10%。 4.局限性：6 号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。

结果 判 断 与 分 析 1、仪器值：于波长 450nm 的酶标仪上读取各孔的 OD 值 2、以吸光度 OD 值为纵坐标（Y），相应的 MPO 标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的 MPO 含量可根据其 OD 值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围：0-400ng/ml
4、敏感度： 1.0ng/ml

品型号： 96T/48T 产品名 称： 产品报 价：
人髓过氧化物酶(MPO)ELISA 说明书
产品特 点：
人髓过氧化物酶(MPO)ELISA 价格公道、品质保证，售后服务完整，并提供免费代检测服务！ 本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中髓过氧化物酶(MPO)的活性。
96T/48T 人髓过氧化物酶(MPO)ELISA 说明书的详细资料：
人髓过氧化物酶(MPO)ELISA 说明书
目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中髓过氧化物酶 (MPO)的活性。 注意事项： 1． 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板 开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2． 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结 果。 3． 各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加 样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4． 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样 本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 6． 底物请避光保存。 7． 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8． 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9． 本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人髓过氧化物酶(MPO)水平。 用纯化的人 髓过氧化物酶(MPO)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入 髓过氧化物酶(MPO)， 再与 HRP 标记的羊抗人抗体结合， 形成抗体-抗原-酶标抗 体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成 蓝色， 并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的髓过氧化物酶 (MPO)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线 计算样品中人髓过氧化物酶(MPO)的浓度。

试剂盒组成： 试剂盒组成 说明书 封板膜 密封袋 酶标包被板 标准品：900U/L 标准品稀释液 酶标试剂 样品稀释液 显色剂 A 液 显色剂 B 液 终止液 浓缩洗涤液
48 孔配置 1份 2 片(48) 1个 1×48 0.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 3 ml×1 瓶 3 ml×1 瓶 3 ml×1 瓶 3 ml×1 瓶 3ml×1 瓶 (20ml×20 倍)×1 瓶
96 孔配置 1份 2 片(96) 1个 1×96 0.5ml×1 瓶 1.5ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 6 ml×1 瓶 6ml×1 瓶 (20ml×30 倍)×1 瓶
保存
2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存 2-8℃保存
样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。 仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分 钟后，离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有 沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清， 保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20 分钟左右 (2000-3000 转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS(PH7.2-7.4) 稀释细胞悬液，细胞浓度达到 100 万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏 并放出细胞内成份。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细收集上清。保 存过程中如有沉淀形成，应再次离心。 5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速 冷冻保存备用。 标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。 加入一定量的 PBS(PH7.4)， 用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 转/分)。仔细 收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。 若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10 孔，在第一、第二孔 中分别加标准品 100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀； 然后从第一孔、第二孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔，再在第三、 第四孔分别加标准品稀释液 50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分

别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取 50μl 分别加到 第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混匀后从 第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标 准品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。(稀释后各孔加样 量都为 50μl，浓度分别为 600U/L，400 U/L ，200 U/L，100 U/L，50 U/L)。 2. 加样： 分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂， 其余各步操作相同)、 待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加 待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。 4. 配液：将 30(48T 的 20 倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30(48T 的 20 倍)倍稀释后 备用。 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后 弃去，如此重复 5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同 3。 8. 洗涤：操作同 5。 9. 显色： 每孔先加入显色剂 A50μl， 再加入显色剂 B50μl， 轻轻震荡混匀， 37℃ 避光显色 15 分钟. 10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11. 测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应 在加终止液后 15 分钟以内进行。 计算： 以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标， 在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释 倍数；或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值 代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释 倍数，即为样品的实际浓度。 试剂盒性能： 1.样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.92 以上。 2.批内与批间应分别小于 9%和 15% 保存条件及有效期： 1.试剂盒保存：2-8℃。 2．有效期：6 个月
人髓过氧化物酶（MPO）酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 检测范围：7.8 ng/ml - 500 ng/ml

最低检测限：1.95 ng/ml 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人 MPO，且与其他相关蛋白无交叉反应。 有效期：6 个月 预期应用：ELISA 法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中 MPO 含 量。 说明 1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任 何影响。 实验原理 用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗 MPO 抗体的微孔中依次加入标本或标 准品、生物素化的抗 MPO 抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物 TMB 显色。 TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅 和样品中的 MPO 呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓 度。 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板（Assay plate ）：一块（96 孔）。 2. 标准品（Standard）：2 瓶（冻干品）。 3. 样品稀释液（Sample Diluent）：1× 20ml/瓶。 4. 生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1× 10ml/瓶。 5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1× 10ml/瓶。 6. 生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100） 7. 辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100） 8. 底物溶液（TMB Substrate）：1× 10ml/瓶。 9. 浓洗涤液（Wash Buffer）：1× 20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释 25 倍。 10. 终止液（Stop Solution）：1× 10ml/瓶（2N H2SO4）。 需要而未提供的试剂和器材 1. 标准规格酶标仪 2. 高速离心机 3. 电热恒温培养箱 4. 干净的试管和 Eppendof 管 5. 系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器 6. 蒸馏水，容量瓶等 标本的采集及保存 1. 血清：全血标本请于室温放置 2 小时或 4℃过夜后于 1000g 离心 20 分钟，取上清即可检 测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 2. 血浆：可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后 30 分钟内于 2 - 8° 1000 g 离心 15 分 C 钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 3. 细胞培养物上清或其它生物标本：1000g 离心 20 分钟，取上清即可检测，或将标本放于 -20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

标本的稀释原则： 首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量， 确定适当的稀释倍数。 只有稀释至标准 曲线的范围内，检测的结果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度 时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。 标准品的稀释原则：2 瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至 1ml，盖好后静置 10 分钟以上， 然后反复颠倒/搓动以助溶解， 其浓度为 500 ng/ml， 做系列倍比稀释后， 分别稀释 500 ng/ml， 250 ng/ml，125 ng/ml，62.5 ng/ml，31.2 ng/ml，15.6 ng/ml，7.8 ng/ml，样品稀释液直接作为 标准浓度 0 ng/ml，临用前 15 分钟内配制。 如配制 250 ng/ml 标准品：取 0.5ml（不要少于 0.5ml）500 ng/ml 的上述标准品加入含 0.5ml 样品稀释液的 Eppendorf 管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 生物素标记抗体的稀释原则： 临用前以生物素标记抗体稀释液稀释，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制 （每孔 100μl），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。如 10μl 生物素标记抗体加 990μl 生物素标 记抗体稀释液的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 辣根过氧化物酶标记亲和素的稀释原则： 临用前以辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液稀释， 稀释前根据预先计算好的每次实验所需的 总量配制（每孔 100μl），实际配制时应多配制 0.1-0.2ml。如 10μl 辣根过氧化物酶标记亲和 素加 990μl 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内 配制。 操作步骤 实验开始前， 请提前配置好所有试剂， 试剂或样品稀释时， 均需混匀， 混匀时尽量避免起泡。 每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试 剂盒的检测范围。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液 100μl，余孔分别加标 准品或待测样品 100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应 120 分钟。 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加生物素标记抗体工作液 100μl（取 1μl 生物素标记抗 体加 99μl 生物素标记抗体稀释液的比例配制， 轻轻混匀， 在使用前一小时内配制） 37℃,60 ， 分钟。 3. 温育 60 分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板 3 次，每次浸泡 1-2 分钟，200μl/每孔，甩 干。 4. 每孔加辣根过氧化物酶标记亲和素工作液（同生物素标记抗体工作液） 100μl，37℃， 60 分钟。 5. 温育 60 分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板 5 次，每次浸泡 1-2 分钟，200μl/每孔，甩 干。 6. 依序每孔加底物溶液 90μl，37℃避光显色（30 分钟内，此时肉眼可见标准品的前 3-4 孔 有明显的梯度蓝色，后 3-4 孔显色不明显，即可终止）。 7. 依序每孔加终止溶液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。终止液的加入顺序应尽量 与底物液的加入顺序相同。 为了保证实验结果的准确性， 底物反应时间到后应尽快加入终止 液。 8. 用酶联仪在 450nm 波长依序测量各孔的光密度（OD 值）。 在加终止液后 15 分钟以内 进行检测。 注：

1. 用户在初次使用试剂盒时，应将各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。 2. 每次实验留一孔作为空白调零孔， 该孔不加任何试剂， 只是最后加底物溶液及 2N H2SO4。 测量时先用此孔调 OD 值至零。 3. 为防止样品蒸发，试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内，酶标板加上盖或覆膜。 4. 未使用完的酶标板或者试剂，请于 2-8℃保存。标准品、生物素标记抗体工作液、辣根过 氧化物酶标记亲和素工作液请依据所需的量配置使用。 请勿重复使用已稀释过的标准品、 生 物素标记抗体工作液、或辣根过氧化物酶标记亲和素工作液。 5. 建议检测样品时均设双孔测定，以保证检测结果的准确性。 洗板方法 手工洗板方法： 吸去 （不可触及板壁） 或甩掉酶标板内的液体； 在实验台上铺垫几层吸水纸， 酶标板朝下用力拍几次；将推荐的洗涤缓冲液至少 0.3ml 注入孔内，浸泡 1-2 分钟。根据需 要，重复此过程数次。 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。 计算 以标准物的浓度为横坐标（对数坐标），OD 值为纵坐标（普通坐标），在半对数坐标纸上 绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准 物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出 样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 注意事项 1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓，避免起泡。 2. 洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性。 3. 一次加样时间最好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。 5. 如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最后乘以稀释倍数。 6. 在配制标准品、检测溶液工作液时，请以相应的稀释液配制，不能混淆。 7. 底物请避光保存。 8. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。

多酚氧化酶活性测定及控制[文献综述]

毕业论文文献综述 生物工程 多酚氧化酶活性测定及控制 1 前言 多酚氧化酶（PPO）广泛存在于自然界，在果实和蔬菜收获后，PPO所引起的反应常常会使果肉发生褐变、产生异味和损失营养。本文总结了多酚氧化酶的活性测定方法以及对其活性的控制，主要研究了抑制剂对其活性的影响，为果蔬贮藏和加工中酶促褐变的防治提供思路。 多酚氧化酶（PPO）作为一种植物酶类，是引起果蔬褐变的主要因素。鲜切果蔬因组织被切分使PPO与酚类底物的接触机会增加，酚类物质被氧化成棕褐色的醌，导致产品褐变。抑制PPO活性取决于抑制剂的性质和浓度、底物的可利用性、pH值和温度。一些还原剂、酶类、螯合剂和蜂蜜等均已被用于防止果蔬酶褐变。本文主要总结了抑制剂对于控制果蔬PPO活性的研究。 2 主题部分 2.1 从果蔬中提取PPO（以莲藕为例） 2.1.1 丙酮法（丙酮法提取所得酶液比活力最高。适合需大量制样时使用） 将莲藕洗净，去皮，切碎，加4倍量预冷至．18。C的丙酮(w／v为1：4)捣碎，搅拌3min，抽滤，冷风吹干残渣后，混匀，得丙酮粉。称取丙酮粉O．5 g，加入0．2 mol／L，pH为5．4的预冷磷酸二氢钠．柠檬酸缓冲液20ml，搅拌3min，8 000r／min离心10min，所得上层清液即为粗酶液。【1】 2.1.2 匀浆法（匀浆法提取的酶液没有活性） 将莲藕洗净，去皮，切碎，加入0．05mol／L，pH5．4的预冷磷酸氢二钠．柠檬酸缓冲溶液(含5％的PVPP)，料液比为1：2．2，捣碎，搅拌，抽滤。向滤渣中加入0．05mol／L，pH5．4磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液(W／V为1：1)再次搅拌，抽滤，两次滤液合并，8 000r／min离心10rain，所得上清液即为粗酶液。【2】 2.2.3 匀浆浸提法（匀浆浸提法提取所得粗酶液活性最高，操作简便，提取所得粗酶液活性

髓过氧化物酶

髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)又称过氧化物酶，是一种重要的含 铁溶酶体，存在于髓系细胞(主要是中性粒细胞和单核细胞)的嗜苯胺蓝颗 粒中，是髓细胞的特异性标志，随着对 MPO 研究的深入，人们发现 MPO 基 因多态性导致个体对一些疾病易感性的差异，与人类多种疾病的发生、发 展密切相关，因此越来越受到国内外学者的重视。 髓过氧化物酶 MPO 研究 1.MPO 的结构髓过氧化物酶(MPO)是由中性粒细胞、单核细胞和某些组 织的巨噬细胞分泌的含血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶 超家族成员之一。MPO 是 I 相代谢酶。每个酶分子有两个铁素基团，顺磁共 振波谱表明血红素中的铁是在甲酰基血红素部分。 MPO 的合成是粒细胞进入 循环之前在骨髓内合成并贮存于嗜天青颗粒内，外界刺激可导致中性粒细 胞聚集，释放髓过氧化物酶(MPO)。在成熟的粒细胞中，MPO 是含量最丰富 的糖蛋白，约占外周血多形核中性粒细胞(PMNs)内总蛋白质含量的 5%，血 液中 95%的 MPO 来源于 PMNs。MPO 的相对分子质量为 150×103，是由 2 个 亚单位聚合而成的二聚体，每个亚单位又由一条重链(α 链,相对分子质量 约 60×103)和一条轻链(β 链,相对分子质量约 15×103)所构成。2 个亚单 位在 α 链处由 1 个二硫键相连。重链具有亚铁卟啉基团，说明 MPO 是铁依 赖性的。MPO 以 3 种亚形存在于髓系细胞中，分别为 MPOⅠ、Ⅱ、Ⅲ。3 种 亚型主要是重链有差异，轻链的差异较小，导致它们在相对分子质量及疏 水性等方面不同，3 种亚型在功能上的差异还不明确，有待进一步研究。 2.MPO 基因及其多态性人髓过氧化物酶基因位于染色体 17q23?q24，含 有 12 个外显子和 11 个内含子，长约 14 638 bp，调控其基因表达的是生长 因子。MPO 的 mRNA 在早幼粒细胞的表达水平最高，其次是原始粒细胞、幼 稚和原始单核细胞；当细胞分化到成熟时期，MPO 基因表达水平迅速下降。 现已知 MPO 基因首先表达的是一条相对分子质量为 89×103 的前体蛋白 (precursor protein)，经过翻译后加工，切割成 α 和 β 两种亚基，再聚 合为成熟的 MPO 分子，加上糖链，最后形成有功能的 MPO。MPO 在基因表达 过程中存在的缺陷，造成 MPO 基因 DNA 序列发生改变，影响其活力。MPO 基 因的多态性影响其基因的转录和表达，对机体的疾病易感性有一定的影响。 Chevrier 等发现了外显子 11 处和启动子区域的 V53F、A332V、I642L 和 IVS11? 2A→C4 个新的基因多态性位点， 它们的作用与功能需要进一步研究。 Piedrafita 等研究发现与疾病有关的位点有 5 个：463G/A，R569W，Y173C， M251T 和外显子 9 的碱基缺失。目前研究最多的是 MPO 基因启动子区第 463 位核苷酸 G/A 的突变，该位点位于 SP1 转录因子识别结合的顺式作用元件 中，内含 4 个 Alu 重复序列。G/A 的突变导致位于 Alu 反应元件的 SP1 转录 因子结合位点消失，从而使 MPO 转录水平显著下降。也有报道发现外显子 10 的密码子 569 存在 C 被 T 替代，使 CGG→TGG，导致遗传性 MPO 缺陷性疾

小鼠髓过氧化物酶(MPO)酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)

仅供科研使用，不得用于临床检验。 小鼠髓过氧化物酶（MPO）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒）说明书 黄石市艾恩斯生物科技有限公司 【产品名称】 通用名称：小鼠髓过氧化物酶（MPO）酶联免疫试剂盒（ELISA试剂盒） 英文名称：Mouse Myeloperoxidase（MPO）ELISA KIT 【包装规格】 48人份/盒，96人份/盒 【预期用途】 仅供科研使用，定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中小鼠髓过氧化物酶（MPO）的浓度。【检验原理】 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗小鼠髓过氧化物酶（MPO）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入小鼠髓过氧化物酶（MPO）校准品和待测样本，再加入另一株HRP标记的抗小鼠髓过氧化物酶（MPO）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中小鼠髓过氧化物酶（MPO）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中小鼠髓过氧化物酶（MPO）的浓度。 【主要组成成分】 主要成分

校准品检测范围：0.156-10ng/ml。校准品已经通过测试，结果表明HBs抗原阴性，HIV1、HIV2和HCV抗体阴性，由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质，本品必须按照具有潜在的感染性进行处理，处理过程应当遵循通用的安全措施。 需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存，切勿冷冻，有效期6个月。 2、开封使用后，包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中，密闭自封袋，并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后，按照建议的条件保存，校准品、包被微孔板和HRP标记抗体，有效期为14天，其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。 【适用仪器】 半自动的酶标仪，如Thermo MK3，或者国产酶标仪。 【样本要求】 样本类型和采集 以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中，不得使用叠氮钠做为防腐剂。 1、细胞培养上清：4000rpm条件下离心20min，去除细胞颗粒和聚合物，上清液保存在- 20℃以下，避免反复冻融。 2、血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，4000rpm条件下离心20min，小心地分离出血清，保存在- 20℃以下，避免反复冻融。 3、血浆：肝素，EDTA，或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下，离心20分钟取上清，血浆保存在-20℃以下，避免反复冻融。

低温生物学课程综述

低温生物学课程综述 低温生物学是研究低温（包括深低温）对生物的影响及其应用的生物学分支学科。通常所谓低温是指0℃左右，深低温一般指-80℃以下。总所周知，离体细胞、组织和器官在常温环境下不能长期保存，为了长期保持这些离体的生命材料的生物功能，必须采用低温保存的方式对这些材料加以处理。低温生物学是近几十年随着生物学、医学和低温制冷技术的发展而逐渐形成的一门边缘学科，是研究在自然和人工低温条件下生命体、组织、细胞不同层次的活动规律及其应用的学科。具体而言，低温医学是研究低温对人体的影响、冷冻损伤的防治以及利用低温技术实现或达到医疗目的的一门学科。本文简要讨论细胞低温损伤机制以及低温保存的原理和应用。 1、细胞的低温保存 目前，低温保存是最常见的长期保存方法。细胞在低温下可以长期保存的机制在于低温下细胞的新陈代谢急速减慢，保存温度越低，新陈代谢越慢，保存时间也就越长。在低温冰箱（-80℃）中细胞可以保存半年，而在液氮（-196℃）中，细胞则可以保存更久，可以达到两到三年。低温保存的主要优点是：便于库存大量的细胞和组织，以为科学研究提供更长的研究时间；便于各研究单位之间实验材料的调配和研究机构之间的合作；在进行组织或器官移植之前，能够有足够的时间检测和消灭其中的病菌。 但是在实验中发现，低温保存过程中，本身也会对细胞和组织造成损害，低温保存是有条件的，细胞是生物体结构上、功能上、发生上的基本单位，所以低温损伤或低温保存都是以细胞变化为基础的。低温保存的目的是将损伤减到最小，使保存后的细胞结构、遗传性能和功能不改变。细胞及组织的这些损伤源于上面保存过程中的一个步骤或者它们的综合作用。低温生物学的一个极其重要的研究内容就是揭示与细胞及组织低温损伤相关的物理学和生物学规律，尤其是那些与细胞内外水结冰相关的损伤。理解这些原理有助于建立生物物理-数学模型，以描述低温保存过程中细胞对环境变化的反应，从而为长期低温保存细胞和防止低温损伤研制最佳的降温程序及设备。冷冻损伤主要发生在降温过程中冰晶形成的增长，相变时冰晶形成的影响以及解冻过程中冰晶的再行成。观察胚胎细胞的冻存过程发现，0℃-30℃是发生冷冻损伤的关键温区，溶液自发结晶的相变点与多

髓过氧化物酶MPO的临床应用

髓过氧化物酶指数在57例急性冠状动脉综合征患者的临床应用 髓过氧化物酶(MPO)是由中性粒细胞、单核细胞和某些组织的巨噬细胞分泌的含血红素辅基的血红素蛋白酶，是血红素过氧化物酶超家族成员之一。分子量为150KDa。MPO基因位于人第17号染色体，其编码蛋白翻译修饰后形成2条轻链和2条重链，构成四聚体糖基化蛋白。在早期由北京协和洛克和美国克利夫兰医院共同研究发现出来，它具有早期预警和提前筛查心脑血管疾病一个标记物。另一方面血液中95%的MPO来源于多形核白细胞。尽早明确急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)的诊断、危险分层及正确地评估个体近期发生ACS的危险性,对尽早干预治疗ACS至关重要。有研究表明,血浆髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MP0)是早期诊断ACS的重要指标,与心肌肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)联合应用更能增加ACS诊断的灵敏度[1]。尤其是当cTnI正常时,血浆MPO升高可预测心脏事件的发生[2]。但血浆MPO检测方法繁琐,目前无法自动化,临床应用受到限制。Unionluck全自动血细胞分析仪是一种基于流式细胞分析原理的仪器,现在广泛应用于大中型医院实验室,在计数全血细胞的同时可根据细胞内MPO染色的情况得出中性粒细胞过氧化物酶活性指数(myeloperoxidase index,MPXI),用于评价炎症状况和白血病[3-4]。现将本院分析MPXI在57例ACS患者的临床应用报道如下。

1资料与方法 1.1一股资料选择2011年5~8月本院收治的ACS患者57例。其中,不稳定型心绞痛(UAP)20例为UAP组,其中,男12例,女8例,年龄(70.00±10.10)岁。非ST段抬高心肌梗死(NSTEMI)20例为NSTEMI组,其中,男12例,女8例,年龄(67.00±18.10)岁。ST段抬高型心肌梗死(STEMI)17例为STEMI组,其中,男8例,女9例,年龄(69.90±15.20)岁。选取同期本院体检中心健康体检者20例为对照组,其中,男10例,女10例,年龄(63.3±3.0)岁。根据病史和辅助检查,ACS的临床诊断标准参照美国心脏病学会(美国心脏病协会)制订的标准[5]。排除标准:(1)近期罹患感染性疾病或慢性炎症疾病;(2)严重血液性疾病;(3)骨髓移植术;(4)结缔组织病和风湿病;(5)应用炎症抑制药物如非固醇类消炎镇痛药、类固醇类药物等;(6)创伤、肿瘤;(7)严重肝肾功能不全。4组年龄、性别等方面比较差异无统计学意义,具有可比性。 1.2方法 1.2.1标本采集人院后立即采集肘静脉血2管,一管为EDTA-K 抗凝标本查血 2 常规,一管为不抗凝标本查cTnI、肌红蛋白(MYO)、肌酸激酶(CK),对照组的生化指标检测采用空腹抽静脉血不抗凝标本。 1.2.2血常规检查使用全自动血细胞分析仪及其配套试剂,检测白细胞(WBC)、中性粒细胞计数(NEUT)、中性粒细胞百分率(NEUT%)、MPⅪ。 1.2.3血糖、糖化血红蛋白、血脂、肌酸激酶检查血清葡萄糖、血液糖化血红蛋白、血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、CK检测使用协和洛克的试剂盒,总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)使用北京协和洛克剂盒,在用全自动生化分析仪检测。

肿瘤细胞免疫组化综述

临床病理工作中，我们常用到“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”，但是许多单位只写阳性结果，不写临床意义，其结果对临床帮助不大，因为许多医生不懂得这些结果的意义，因此建议大家在出此类报告时，把“肿瘤细胞免疫组化耐药预后标记”的意义打印在报告中，以增加病理报告的使用价值。 1、恶性肿瘤免疫组化耐药预后标记，全套4项：P-gP，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67。 2、乳癌免疫组化耐药预后标记，全套7项：P-gp，GSTπ，TOPOⅡ，Ki-67，ER，PR，C-erbB-2。 3、意义：标记物--作用--阳性部位--临床意义 多药耐药基因蛋白（P-Gp）--药泵作用--胞膜/胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。 谷光甘肽S转移酶（GST π）--解毒作用--胞浆--阳性率越高，对下列药物耐药性越强：阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。 拓扑异构酶Ⅱ（TOPOⅡ）--靶点作用--胞核--阳性率越高，对下列药物越有效：蒽环类抗生素和鬼臼毒素类，如VP16、替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26。阳性率高者对VP16尤其有效。 雌激素受体（ER）--性激素作用--胞核--阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。 孕激素受体(PR) --性激素作用--胞核--阳性率越高，肿瘤对内分泌治疗越有效，预后越好。 C-erbB-2--癌基因产物--胞浆--阳性率越高，肿瘤恶性程度越高。ER、PE阳性而C-erbB-2也阳性者，用三苯氧胺治疗效果不好。 Ki-67--细胞增殖标志--胞核--阳性率越高，肿瘤增殖越快，恶性程度越高。 Ki-67为细胞增值的一种标记，在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达，G0期缺如，其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。PCNA(增埴细胞核抗原)。 CEA 多数腺癌表达CEA Rb (retinoblastoma视网膜母细胞瘤) 基因是肿瘤抑制基因，调节细胞周期。 P53在免疫组化中均为突变型，阳性率越高，预后约差。野生型半衰期很短 Nm23是转移抑制基因，其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。目前已被广泛应用于乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、喉癌等多种恶性肿瘤的检测。几

神经类药物综述

文 / 蔡德山 在国内医药市场中，中枢神经类药物是品种繁多的一类药物，主要包括脑循环与促智类药物、抗老年性痴呆药物及帕金森药物、抗癫痫药物、抗惊厥药和其他神经系统用药。在与全球医药市场逐渐接轨的推动下，我国医药水平有了大幅提高，在新药不断问世、医疗保障体系全面覆盖、人们保健费用投入加大等多种因素的带动下，中枢神经系统用药市场已得到快速增长。 摘 要 关键词　脑神经保护和循环代谢改善；脑循环代谢保护剂；市场研究 随着老龄化社会的发展，全球神经类药物市场呈现出快速增长的态势。据IMS Health报告显示，2007年世界领先500强畅销药物市场中，神经系统用药已达到了341.94亿美元，同比上一年增长了25.77%，2008年神经系统用药金额已达到400亿美元左右，比五年前增长了近两倍，成为全世界最具挑战性和经济收益最为丰厚的市场。 根据中国药学会科技发展中心提供的数据，2008年22个城市样本医院神经系统用药已超过了45亿元，比上一年同期增长了30.25%，是增长率超过30%的五大类药物之一，占全部用药的8.47%，是临床应用发展最快的一类药物。中枢神经类药物所涉及的品种较多，近两年，已从起步阶段步入了成长期。其中，影响脑血管、脑代谢和促进智力类药物占据了较大份额。神经镇痛类、抗癲痫类、抗阿尔茨海默病、抗帕金森、镇静催眠和抗惊厥类也已成为医院临床中较为重视的品种，推算我国中枢神经类药物市场已突破了100亿元大关。1 需求拉动市场 在中枢神经系统疾病中，脑卒中已是人类的主要死因之一，也是影响我国老年人健康的主要杀手。脑卒中是一种突发性脑血管循环障碍疾病，主要包括缺血性中风（短暂性脑缺血发作、动脉粥样硬化性血栓性脑梗塞、腔隙性脑梗塞、脑栓塞）、出血性中风（脑出血、蛛网膜下腔出血）、高血压脑病和血管性痴呆四大类。 目前，全球每年死于卒中的病人已达570多万人。我国属于脑卒中高发性国家，疾病死亡人数居世界首位。中国卫生部公布的第三次全国死因调查结果显示，脑血管病已占死亡总数的22.45%。我国每年新发生的脑卒中已达250万例，而每年死于脑卒中者为150万人，尚在存活的卒中病人约在为750～800万人，其中3/4患有不同程度的后遗症。与此同时，脑血管疾病的发病率还呈现出不断上升和年青化的趋势。 脑循环代谢保护剂市场快速增长

髓过氧化物酶在心血管疾病中的作用_王天菊

文章编号:1006-3110(2009)02-0623-03【综　述】髓过氧化物酶在心血管疾病中的作用 王天菊,卿之驹 摘要:　髓过氧化物酶是一种主要由中性粒细胞分泌的白细胞酶,在心血管疾病的发生发展中,包括发病初期、发展及动脉粥样硬化急性复合病变期,M PO及其介导的炎症途径促进了动脉粥样硬化的形成,因此M PO可以作为心肌损伤、治疗和预后的标志物。 关键词:　髓过氧化物酶;心血管疾病;低密度脂蛋白;高密度脂蛋白;内皮细胞功能障碍;不稳定斑块;一氧化氮 中图分类号:R322.1 文献标识码:A Ef fect of Myeloperoxidace in C ardiovascular Disease　WANG Tian-ju,QING Zhi-ju(Department of Clinical Laborato-ry,the Second Xiangya Hospital of Central South University,Changsha410011,Hunan) Abstract:　Myeloperoxidace(Mpo)is a leukocyte-derived enzym e that catalyzes the formation of a number of reactive oxidant species.Mpo-catalyzed reaction has been attributed to potentially proatherogenic biological activities throughout the evolution of cardiovascular disease,including dur ing initiation,propagation and acute com plication phases of the atheroscl e-rotic process.As a result,Mpo and its downstream inflamm atory pathways repres ent targets for myocardial injury,therapeutic and prognosis. Key words:　M yeloperoxidace;Cardiovascular disease;Low density li poprotein;H igh density lipoprotein;Endothelial cell dysfunction;U nstable plaque;Nitr ic oxide 1　髓过氧化物酶的生理 1.1　髓过氧化物酶的来源　在近40年前,第一次认识到了M PO的主要作用:对外来入侵发生固有免疫反应的组成成分之一[1,2]。M PO是白细胞中嗜天青颗粒的主要成分,固有免疫中在白细胞活化时分泌[3,4]。M PO是存在于中性粒细胞、单核细胞、某些组织巨嗜细胞中和小胶质细胞的溶酶体酶,可抗击细菌、真菌等病原菌入侵机体,参与多种疾病的发生如炎症、肺癌、阿尔茨海默病、多发性硬化、血管炎和动脉粥样硬化等[5]。多形核嗜中性粒细胞是血管内M PO最主要的细胞来源,分泌的M PO占全部细胞蛋白质的4%,占全部循环M PO含量的95%[6]。M PO的mRNA在早期髓细胞中表达,其中早幼粒细胞的表达水平最高,其次是原始粒细胞、幼稚细胞和原始单核细胞,当细胞分化到成熟时期,M PO基因表达水平迅速下降。据研究M PO水平与中性粒细胞激活程度之间存在极显著的相关性,是中性粒细胞的活化标志物[7]。 1.2　髓过氧化物酶的生物学功能　生理情况下是先天性免疫系统的一部分,参与炎症反应的氧化吸收过程,对外来的细菌有一定的杀伤作用。①炎症发生后,中性粒细胞被激活, M PO被释放,在炎症部位催化过氧化氢生成具有广泛生物学效应的活性氧分子,其中最重要的是次氯酸,它与蛋白质、多肽氨基酸上的氨基基团反应生成氯胺,氯胺随即与作用于ê-PI和作者单位:中南大学湘雅二医院检验科(湖南　长沙　410011) 通讯作者:卿之驹。ê2-巨球蛋白的甲硫氨酸残基结合,使其丧失与蛋白酶结合的能力,从而使各种免疫蛋白酶激活,增强机体的免疫反应[8]。此外经氯化的蛋白易于被抗原递呈细胞识别,具有更强的免疫原性。②M PO还可以通过细胞信号通路将活化信号由胞浆传递至胞核内,诱导炎症相关基因的表达,上调机体炎症反应,促进炎症效应细胞的增殖与活化,使效应细胞更易于穿越内皮屏障到达局部炎症组织[9,10],在抵御微生物入侵方面发挥重要作用。然而,在特定条件下,M PO催化反应所产生的氧化剂(次氯酸、3-氯化酪氨酸、酪氨酰基、硝基酪氨酸)生成过量,超过局部抗氧化剂的防御反应时,导致氧化应激和氧化性组织损伤,其中包括参与动脉壁的氧化损伤。M PO通过多种途径调节炎症反应,其中最重要的是调节NO对血管信号传递和舒张的作用,直接改变血管的炎症反应性[11]。 1.3　髓过氧化物酶的结构和基因的多态性　⑴M PO的结构:是血色素过氧化物酶超家族的一员,相对分子量为140kDa 的糖基化四聚体血红素蛋白,含有两个相同的亚单位,每个亚单位又由一条重链(59＊103)和一条轻链(13.5＊103)通过二硫键结合形成。M PO以三种亚型存在于髓系细胞中,分别为M POⅠ、M POⅡ、M POⅢ,三种亚型结构上的差异主要在重链,轻链的差异较小,最终导致它们在相对分子质量及疏水性等方面的不同,但三种亚型在功能上的差异尚无定论[12]。⑵M PO基因的多态性:编码人M PO的基因由12个外显子和11个内含子组成,长约14kb,位于染色体长臂17q23-q24段。在

ADCC效应综述

治疗方式方面，老年病人比较倾向于保守治疗，中、青年病人和复发的患者倾向于（微创）手术治疗。反映出不同患者有着不同的医疗期望。 4.2 两组病人治疗方法、临床疗效、费用及期望值统计（见表3） 无论保守治疗还是手术治疗，医生对绝大部分病人（非手术 组94.16%；手术组90.51%）都采取了2种以上的治疗方法。两组病人治疗有效率没有显著性差异（P ＞0.05）。 5 讨论 疾病诊疗超市医疗服务模式符合了当前社会医疗需求，满足了患者了解疾病、掌握疾病的心理，改变了过去一切由医生说了算、病人无条件服从的医疗模式。由于病人及其亲属参与，可以尽量实现患者的医疗期望值。 随着人们生活和工作方式的改变，慢性疼痛已经成为困扰人们工作、生活的一种主要疾病。疼痛的原因大多与椎间盘及其周围组织病变有关。中年人（40～50岁组）仍然是腰椎间盘疾病的高发人群，占发病人群的50%以上。在选择治疗方法方面，老年病患者（60岁以上）趋向于选择非手术治疗（占70.33%），以缓解疼痛为基本需求。而年轻病患者（40岁以下）在选择非手术和微创手术治疗方法方面没有明显的趋向性（分别为48.75%、51.25%）。患有2个以上腰椎间盘突出联合病变的病人，更愿意选择微创手术治疗（分别为34.81%、65.19%）。这可能与多部位联合病变患者临床症状更重、痛苦更大，要求快速解决痛苦的心情更迫切有关，因而选择快速解决疼痛的方法。 医生走出了“见病不见人”思维方式，真正将患者的躯体疾病与其身心因素、社会因素结合到一起。虽然在理论上，医疗模式已经从过去的单一躯体疾病诊疗模式转变到了现在的“生理-心理-社会”医疗模式，但是，在很多实际医疗状况下，医生更多的只顾及到患者的躯体疾病，较少考虑病人的身心感受和社会因 ADCC效应综述 赵海琳 何存兰 ［摘要］ 参与ADCC （antibody dependent cell-mediated cytotoxicity）的效应细胞主要有NK细胞、吞噬细胞、嗜酸性粒细胞等。抗体类型有IgG、 IgE和血清 型IgA。ADCC在抗感染、抗肿瘤方面具有重要意义。ADCC效应被用于B细胞恶性肿瘤的临床治疗。 ［关键词］ ADCC效应；Fc受体；NK细胞；吞噬细胞；嗜酸性粒细胞；肥大细胞 [Abstract] There are NK cells, macrophages, eosinophils, etc. in ADCC. Antibody types are IgG, IgE, and serum type IgA. It has a signi ? cant in resistance infection and tumor. ADCC effect was used to clinical treatment of B cells malignant tumors. 作者单位：655000 云南省曲靖医学高等专科学校 （赵海琳 何存兰） 表3 两组病人治疗方法、临床疗效及费用、期望值统计分组N 1种治法2种治法3种以上治法有效率费用/元住院天数期望值实现率非手术组25715（5.84%）145（56.42%）97（37.74%）95.33%519611.2395.15%手术组 211 25（9.49%） 150（72.29%） 36（18.22%） 98.58% 8429 13.14 91.00% 注：有效率=（痊愈+显效+有效）/总人数×100%；疗效判断标准采用国家中医药管理局《中医病证诊断疗效标准》进行评定 [2]。 素。因此，常常出现一些令医生们尴尬的局面：病人的病治好了， 病人的满意度却不高。一个最直接的原因就是病人的期望值没有实现。病人所期望的并不只是疾病的治愈，可能还有其他的因素。所以，实现病人的期望值是衡量现今医疗效果的一项重要指标，也符合卫生部“三好一满意”活动的精神[3]。 把握病人的期望值是运作椎间盘疾病诊疗超市的关键。人们 都说，医学是一门实践性很强的科学。同时，医学具有个体差异性 较大、变异性较多的特性。非专业人员常常难以理解这一点。病人来医院就医时往往带有一定的医疗愿望。这种愿望就是病人的期望值。病人的期望值，有的是符合医疗实际情况的，医生只要按照医疗常规操作就可以实现；有的是超出现实医学水平，从理论上说根本不可能达到的，这就需要医生向病人及其亲属予以详细说明，调整或者修正其期望值，从而符合现实。 后期延伸服务是疾病诊疗超市的重要内容之一，也是医疗超市区别于其他超市的重要内容。椎间盘疾病作为一个慢性疾病，具有明显的复发倾向。生活方式、运动方式、健康保养是预防复发的重要内容。虽然我们在病人住院期间开展了“椎间盘学校”和健康大讲堂教育，但是脱离了医院环境之后，病人的依从性就会下降。因此，我们认真执行病人回访制度：病人出院后第一天、第一周、第一个月必须电话回访。病人有需求时及时上门回访。以后根据病人的需求进行回访。邀请病人及其亲属继续参加医院椎间盘学校教育，医院举办专题讲座或邀请专家来院讲学时，也邀请病人参加。强化病人及其亲属的医疗依从性， 参考文献 [1] 夏新华.腰椎间盘突出症的分级治疗[N].健康报,2011-01-04（1版）. [2] 国家中医药管理局.中医病证诊断疗效标准[M].南京：南京中医药大学出版社,1994：201-203. [3] 韩璐.“三好一满意”活动定出量化指标[N].健康报,2011-06-10（1版）. doi:10.3969/j.issn.1009-4393.2011.34.016

植物组织培养综述

植物组织培养技术综述 摘要：组织培养是细胞生物学研究最常用的方法之一，是指从生物体中取出组织或细胞，在离体的条件下模拟体内的生理环境，使其生存、生长、繁殖或传代，借以观察、研究细胞的生长发育等生命活动现象。植物组织培养以其条件可控、便于观察的优点，在快速繁殖、育种、保护珍贵苗木等工作中应用广泛。以菊花的组织培养为例，从原理、方法和常见问题三个方面对植物组织培养进行讨论。 关键词：菊花；花瓣；MS培养基；组织培养 1 引言 自1902年，德国植物学家Haberlandt根据细胞学说，提出单个细胞的植物细胞全能性（totipotency）理论以来，组织培养技术的研究已有100多年历史。植物组织培养是指在无菌的条件下，将离体的植物器官（根、茎、叶、花、果实等）、组织（形成层、花药、皮层等）、细胞（体细胞和生殖细胞），以及原生质体，培养在人工配制的培养基上，给予适当的培养条件，使其长成完整的植株。根据所培养的植物材料的不同，可以把组织培养分为5种类型，即愈伤组织培养、悬浮组织培养、器官培养（胚、花药、子房、根和茎的培养等）、茎尖分生组织培养和原生质体组织培养。现在植物组织培养技术已在科研和生产中广泛应用，成为最引人注目的生物技术之一，广泛应用于植物的快速繁殖、品种改良、基因工程育种、种质资源保存、次生代谢产物生产等方面，产生了巨大的经济效益和社会效益，对现代农业和医药等领域产生了深刻影响。 2 组织培养基本原理 植物细胞具有全能性，即生物体的细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能。离体的植物组织或细胞（也称外植体），在培养了一段时间以后会通过细胞分裂形成愈伤组织（愈伤组织的细胞排列疏松而无规则，是一种高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞）。由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程，称为植物组织的脱分化，或者叫作去分化。脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫作再分化。再分化产生的试管苗，移栽到地里，可以发育成完整的植物体。 目前普遍使用的是MS培养基，其主要成分包括：大量元素，如N、P、S、K、Ca、Mg；微量元素，如B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co；有机物，如甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等，同时还要添加一些植物激素。MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4摄氏度保存配制好的培养基母液来制备。 细胞生长素和分裂素的比例影响组织块的分化方向。50年代，F.Skoog和https://www.wendangku.net/doc/103796463.html,ler在烟草茎髓愈伤组织中发现分裂素/生长素的比例高时，利于芽的分化；比例低时，利于根的分化；两者比例适中水平时，愈伤组织占优势。 3 菊花花瓣分化培养的基本操作 3.1 MS培养基的配制 适合菊花花瓣分化培养的培养基为MS+3mg/L6-BA+0.1mg/L NAA+糖3%+琼脂0.7%，pH 5.8。 3.2 外植体的灭菌消毒 选取新鲜的菊花花瓣，用洗衣服洗净表面，自来水冲洗30min，再用吸水纸吸干水分。然后移入超净工作台，用70%乙醇消毒30s，接着用饱和漂白粉消毒20min或0.1% HgCl2溶液消毒10min。最后用无菌水洗5~6次，灭菌过的滤纸吸干水分。 3.3 接种培养

髓过氧化物酶测定试剂盒(胶乳免疫比浊法)产品技术要求baiding

髓过氧化物酶测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）适用范围：用于体外定量测定人血清中髓过氧化物酶的含量。 1.1规格 校准品(选配)：1×1mL； 质控品(选配)：水平1：1×1mL，水平2：1×1mL。 1.2组成

注：校准品靶值、质控品质控范围详见包装标签。 2.1 外观 2.1.1试剂1：无色至淡黄色液体。 2.1.2试剂2：乳白色液体。 2.1.3校准品：无色至淡黄色液体。 2.1.4质控品：无色或淡黄色液体。 2.1.5包装外观应整洁，标签字迹清晰，不易脱落。 2.2 净含量 液体试剂的净含量不低于标示体积。 2.3 试剂空白吸光度 试剂空白吸光度≤2.0。 2.4 分析灵敏度 样本浓度为120 ng/mL时，△A≥0.01。 2.5 线性区间

在[25，1300] ng/mL范围内，线性相关系数r≥0.990；测试浓度在[25，200] ng/mL时，绝对偏差不超过±20 ng/mL，测试浓度在（200，1300] ng/mL 时，相对偏差不超过±10%。 2.6 精密度 2.6.1批內精密度 用高、低2个浓度的样本测试试剂盒，各重复测试10次，其变异系数（CV）应不大于10%。 2.6.2批间差 用样本分别测试3个不同批次的试剂盒，每个批次测试3次，其相对极差（R）应不大于15%。 2.7 准确度 回收率在85%-115%范围内。 2.8 质控品赋值有效性 测试结果在质控范围内。 2.9 瓶内均匀性 校准品和质控品瓶内均匀性（CV）应不大于10%。 2.10 量值溯源 校准品量值溯源至公司内部工作校准品，并与北京九强生物技术股份有限公司生产的髓过氧化物酶测定试剂盒（胶乳免疫比浊法）比对验证。 2.11 稳定性 2.11.1校准品开瓶稳定性 校准品开瓶后2℃～8℃避光保存可稳定3天。稳定期过后4小时内进行

髓过氧化物酶综述

MPO-预测心血管事件的新一代标志物 冠心病（coronary arterary disease, CAD）是严重威胁人类健康的疾病。形成冠心病的重要病理基础是动脉粥样硬化。近年来，髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）成为心血管疾病预测早期检测指标的研究重点。髓过氧化物酶是来源于白细胞的一种酶，主要存在于嗜中性粒细胞和巨噬细胞中。髓过氧化物酶通过产生自由基和多种反应性物质，促进斑块形成和不稳定性增加，加速动脉粥样硬化进展，进而引起多种并发症。 1 MPO的结构和生物学作用 MPO是一种亚铁血红素酶，来源于嗜中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和小胶质细胞，是由两条重链和两条轻链组成的四聚体的糖基化蛋白。MPO是中性粒细胞活化的自分泌和旁分泌细胞因子，发挥正反馈调节作用，同时是中性粒细胞活化的标志物正常情况下，MPO以氯和过氧化氢为底物，催化产生次氯酸等反应性物质和多种自由基，在天然免疫应答中发挥重要作用。当机体处于炎症、氧化应激状态时，不能有效清除自由基和氧化剂，引起多种病理过程和组织损伤。近年来，大量研究表明心血管生理功能失调与MPO消耗内皮型一氧化氮,将低密度脂蛋白转换成导致脉粥样硬化的氧化形式密切相关。作用方式见图1。MPO还有阻碍高密度脂蛋白抗动脉粥样硬化的作用，从而推动了动脉粥样硬化的进程。 图1 MPO在脉管系统中的不利影响：被活性氧修饰后的LDL(mmLDL)能穿透动脉内膜。随后，mmLDL诱导单核细

胞迁移至血管壁，并分化成巨噬细胞。氧化了的LDL（oxLDL）被巨噬细胞的清道夫识别受体识别后，巨噬细胞清除了过量的oxLDL后将形成泡沫细胞。在炎症和其他引起髓过氧化物酶衍生的活性物质（MDRS）形成的状态下巨噬细胞将会释放出MPO。而且MDRS可能通过不同途径（蓝色箭头标记）促进动脉粥样硬化的形成。MDRS可能更广泛的修饰氧化LDL，形成oxLDL。通过促进氧化HDL（oxHDL）的形成导致HDL失去功能，从而削弱了HDL 对LDL的保护作用和抑制了反向胆固醇的运输。MDRS也可能通过削弱纤维帽影响斑块的稳定性。引自Roger K,et al. Clincal chemistry,2009 2.MPO测定的临床意义 2.1 评价冠心病的危险性 髓过氧化物酶可作为冠状动脉疾病风险标志。Zhang等研究158例CAD患者和175例正常对照者中MPO水平与CAD危险性的关系。研究结果显示冠状动脉疾病患者的血和白细胞中的髓过氧化物酶活性比经血管造影证实的正常对照高，并且这种活性的升高和冠状动脉疾病的出现有极高的相关性（优势比11.9；95%可信区间，5.5-25.5），结果独立于患者年龄、性别、高血压、吸烟或者糖尿病的情况、LDL浓度、白细胞计数和Framingham全球风险评估分数。结果显示CAD患者白细胞和血液MPO水平明显高于正常对照着。MPO水平位于最高四分位数与位于最低四分位数者相比发生CAD的危险性增加. 图2 MPO和冠心病患病率的关系：图示中为MPO在白细胞和血液中的含量，通过333例检测得出（158例为CAD， 175例为非CAD）。引自zhang et al.JAMA,2001 2.2 预测未来心血管意外的发生

髓过氧化物酶测定试剂盒(酶法)产品技术要求lepu

髓过氧化物酶测定试剂盒(酶法) 适用范围：用于体外定量测定人血清中髓过氧化物酶的活性。 1.1规格 试剂1: 1×24mL，试剂2: 1×12mL，试剂3: 1×9mL； 试剂1: 2×24mL，试剂2: 2×12mL，试剂3: 2×9mL。 1.2主要组成成分 试剂1主要组分： 试剂2主要组分： 试剂3主要组分： 2.1 净含量 应不低于试剂瓶标示装量。 2.2 外观 试剂1：无色或淡黄色透明溶液；试剂2：无色或淡黄色透明溶液；试剂3：无色或淡黄色透明溶液。外包装完好、无破损，标签完好、字迹清晰。

2.3 试剂空白 2.3.1 试剂空白吸光度 在505nm处测定试剂空白吸光度，应≤1.2； 2.3.2 试剂空白吸光度变化率 试剂空白吸光度变化率△A/min≤0.3。 2.4 分析灵敏度 测试150 ng/mL的被测物时，吸光度变化率（ΔA/min）应不低于0.0055。 2.5 准确度 在样品中加入一定体积的纯品，计算回收率，应介于90%-110%之间。 2.6 重复性 批内变异系数（CV）应不超过10％。 2.7 线性 2.7.1在[50,1300] ng/mL区间内，线性相关系数r应不低于0.990； 2.7.2 [50,156 )ng/mL L区间内绝对偏差不超过±18.7 ng/mL；[156,1300] ng/mL 区间内相对偏差不超过±12%。 2.8 批间差 对同一份样品进行重复测定，相对极差≤12％。 2.9 稳定性 取在2℃～8℃条件下贮存达到12个月后的试剂进行检测，应符合本标准2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7之规定。

同型半胱氨酸相关机理研究综述

同型半胱氨酸 分子生物学机理、临床致病机理 同型半胱氨酸（Hcy）来源于饮食摄取的蛋氨酸(甲硫氨酸)，是甲硫氨酸循环中S-腺苷同型半胱氨酸水解反应后的产物，同时，又是胱硫醚β合成酶合成胱硫醚的底物[1,2]。血液中Hcy以三种形式存在，1%为还原状态的Hcy，70%-80%与蛋白结合，其余是Hcy二硫化物[3,4]。 一、分子生物学机理 血浆Hcy的水平取决于遗传和环境两方面因素，其中遗传因素为编码Hcy代谢关键酶基因的突变，目前仅在叶酸及Hcy代谢过程方面，共发现了上万种SNPs，其中有一些会影响叶酸及Hcy的代谢[8,9]： 1、亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR） MTHFR基因位于染色体1P36.3。 MTHFR C677T（rs1801133）位于MTHFR的外显子区，最早Kang等在芝加哥的研究发现，低活性、不耐热的MTHFR与血浆中Hcy水平升高相关，也与冠心病发病有明显联系[5]，之后Frosst等人[6]又分析证明了由于MTHFR基因在677位发生错义突变，碱基T置换了C，编码的丙氨酸由缬氨酸取代，使酶的耐热性和活性都大大降低（50-60%）[8,9]，从而影响Hcy再甲基化，导致血浆Hcy水平升高。基因型分析也证明MTHFR基因纯合突变者(+/+)和杂合突变者(+/－)，其血浆Hcy水平高于非突变的正常人[7]。 rs3737965位于MTHFR启动子区域，可能会影响下游基因转录的效率。其杂合型人体Hcy 水平较低（无统计学意义），纯合型个体Hcy水平较高，且具有统一学差异（样本量小，容易造成假阳性），同时发现其杂合型与低水平Hcy有关[8]。 2、胱硫醚β合成酶（CBS） CBS位于人类21号染色体上（21q22.3），CBS主要存在于大脑的中枢神经系统和部分血管内皮细胞中[3,10,11,12]。目前已发现的CBS基因突变位点有64个，其中最常见的是位于278密码子的T833C和307密码子的G919A，两者均位于第8个外显子中，但也有研究表示，此位点突变率很低，仅为1%[17,18]。另外有研究发现，其844ins68、C699T、T1080C位点的突变与高同型半胱氨酸血症密切相关[17,18]。CBS基因突变可能影响了CBS亚单位与血红素和5’-磷酸-吡哆醇的相互作用，从而使酶活性降低进一步导致高同型半胱氨酸血症[3]。 CBS G9191A（rs121964962）位点的多态性使得第307位甘氨酸变为丝氨酸[10,11,12]，影响Hcy与酶的结合[17,18]，此位点突变可能会导致高同型半胱氨酸血症，并且与脑卒中密切相关[15]。 CBS T833C位点的突变，位于外显子8，引起其第287位的异亮氨酸取代了苏氨酸，使酶与PLP（蛋白脂蛋白）不能结合，患者对维生素B6敏感[19]。突变者中风风险增高，且在中国人群中较为显著[15]。 CBS844ins68位点的突变常见于西方人群，且对Hcy浓度的影响程度较受争议，多数观点认为无影响，亦有观点认为有影响[17,18]。 C699T位于第5 外显子，C1080T位于第10外显子，这两个位点均属于同义突变，不引起氨基酸的改变，但是该位点常与转录上游区某些可影响酶蛋白表达的变异位点连锁。有研究表明这两种突变对Hcy水平升高无关，并有研究指出他们可能均为良性突变，可降低Hcy 浓度[24,25]。 rs234 713位于CBS的内含子区，该多态性导致G到A的改变，但与Hcy的代谢的关系，并未得到深入研究，有研究发现，其杂合突变显著降低Hcy水平[8,9]。 rs2851391位于CBS的内含子区，该多态性导致C到T的改变，纯合突变显著升高Hcy