用彗星试验评价3种海洋生物肽的抗突变活性

文章编号：1003-8507（2009）18-3431-03中图分类号：R34文献标识码：A【营养与食品卫生】用彗星试验评价3种海洋生物肽的抗突变活性

朱婧，邹思颖，张立实

摘要：［目的］研究3种海洋生物肽（海洋胶原肽、海洋骨原肽和海洋蛋白肽）是否具有抗突变活性，为其开发和利用提供依据。［方法］共设置15个剂量组，包括阴性对照、阳性对照（K2Cr2O7）、抗突变对照（VitaminC+ K2Cr2O7）及3种海洋生物肽各4个剂量（60、30、15、7.5mg／ml+K2Cr2O7），处理TK6细胞4h后，按常规方法进行彗星试验。［结果］3种海洋生物肽各剂量组的拖尾细胞率和平均尾长均小于阳性对照组，差异有统计学意义，而与阴性对照和抗突变对照组比较无统计学差异，即表现出较强的拮抗阳性致突变物诱导的DNA损伤的作用。［结论］在本实验条件下，3种海洋生物肽均表明具有较好的抗突变活性。

关键词：海洋生物肽；抗突变活性；彗星试验

EVALUATION OF THE ANTIMUTAGENIC ACTIVITIES OF THREE MARINE PEPTIDES BY COMET ASSAY ZHU Jing，ZOU Si-ying，ZHANG Li-shi.（Department of Nutrition and Food Hygiene，West China School of Public Health，Sichuan University，Chengdu610041，China）

Abstract：［Objective］To study whether the three marine peptides have antimutagenic activity，and to provide scientific basis for its exploitation and utilization.［Methods］15treatment groups were established，including the negative control，the positive control（mutagen K2Cr2O7），antimutagenic control（Vitamin C+K2Cr2O7）and4dose groups of each marine peptides （60，30，15and7.5mg／ml+K2Cr2O7）.Comet assay were conducted by routine method after the TK6cells were treated by the materials above.［Results］The comet cell rates and average tail lengths in all dose groups of the three marine peptides were significantly lower than positive control group，and every dose group did not found significant difference with negative control and antimutagenic control.［Conclusion］Under this experimental conditions，three marine peptides have good antimutagenic activities.

Key words：Marine peptide；Antimutagenic activity；Comet assay

海洋环境的独特为海洋生物中发现结构特殊、生理活性独特的化合物提供了必要的条件和潜在的可能性，从海洋生物中获取具有生理活性的新化合物已经成为人们关注的热点之一。本研究中的3种海洋生物肽分别为海洋胶原肽、海洋骨原肽和海洋蛋白肽。海洋胶原肽是以三纹鱼，安康鱼等海洋鱼的皮为主要原料，海洋骨原肽是以沙丁鱼、金枪鱼等海洋鱼的骨和刺为主要原料，海洋蛋白肽是以深海鱼的鱼肉为主要原料，采用生物酶解技术，加工精制得到的混合寡肽，由2～6个氨基酸组成，具有吸收快，水溶性好等特点。现有研究已表明海洋胶原肽具有调节血脂、血糖和抗氧化作用，并具有增强免疫力、改善皮肤功能、增强骨密度等作用；海洋骨原肽具有增强免疫力、预防骨质疏松以及调节糖代谢等作用；海洋蛋白肽主要具有免疫调节作用［1～3］。现拟将这几种海洋生物肽进一步开发，成为具有改善老年记忆和预防老年痴呆、抗突变和抑制肿瘤等多种功能的保健食品。但国内外均少见其抗突变活性评价方面的报告。本研究通过体外彗星试验对其抗突变活性进行初步评价，为其进一步的开发利用积累实验依据。

基金项目：“十一五”国家科技支撑计划重大项目（2006BAD27B08）作者简介：朱婧（1986-），女，硕士，研究方向：营养与食品卫生通讯作者：张立实，教授，博导，研究方向：食品毒理／保健食品功能评价

作者单位：四川大学华西公共卫生学院营养与食品卫生学教研室，成都，6100411材料与方法

1.1细胞和培养条件

TK6人类淋巴母细胞株，由日本国立卫生研究所本间正充先生惠赠。用含10%马血清、200μg／ml丙酮酸钠、100U／ml 青霉素、100μg／ml链霉素的RPMI1640培养基于37℃、5% CO2、饱和湿度条件下常规悬浮培养，控制细胞密度不超过1×106／ml。

1.2受试物

3种海洋生物肽均由中食海氏生物技术有限公司提供，外观呈淡黄色粉末，胶原肽和骨原肽的人拟用推荐剂量为1.5g／人／d，蛋白肽的人拟用推荐剂量为2.0g／人／d。

1.3试剂

RPMI1640培养基、正常熔点琼脂糖（NMPA）、低熔点琼脂糖（LMPA）、阳性致突变剂重铬酸钾（K2Cr2O7）、阳性抗突变剂维生素C（VitC）。

1.4主要仪器

二氧化碳培养箱、超净工作台、低速离心机、水平电泳仪、倒置显微镜、荧光显微镜高压蒸汽灭菌器、纯水仪、冰箱等。

1.5方法

1.5.1受试物处理将TK6细胞密度调至5×105个／ml，受试物用RPMI1640培养基溶解，按1%比例加入到细胞悬液，每个受试物设置4个剂量组，最高剂量为60mg／ml，以下按两倍稀释度设3个剂量组，即30、15、7.5mg／ml，各剂量组均

以上结果表明，0h 和24h 收获时，阳性对照组拖尾率和平均尾长与阴性对照组比较差异均有统计学意义（P ﹤0.01），表明试验系统可靠。3种海洋生物肽各剂量组拖尾细胞率和平均尾长与维生素C 抗突变对照组和阴性对照组相比差异均无统计学意义（P ﹥0.05），而与阳性对照组相比差异均有统计学意义（P ﹤0.01），但各剂量组的剂量与拖尾细胞率和平均尾长之间不存在明显剂量—反应关系（P ﹥0.05）。各组24h 收获与0

h 收获的结果无显著差异（P ﹥0.05）。3

讨论

彗星试验（comet assay ）亦称单细胞凝胶电泳技术（single cell gel electrophoresis ，SCGE ），是一种在单细胞水平检测有核细胞DNA 损伤与修复的方法。细胞DNA 受损愈严重，产生的DNA 断片就愈多，断片也愈小，电泳表现为彗星尾长增加和尾部荧光增强，在一定条件下，DNA 迁移距离（彗星尾长）和DNA 含量（荧光强度）分布与DNA 损伤程度呈线性相关。

与传统的细胞遗传毒性相比，彗星试验具有明显的优势［5］：（1）所需细胞数目少（1~10000个），能检出细胞群中单个细胞DNA 损伤与修复的差异；

（2）灵敏度高，每109道尔顿

DNA 分子中可检出0.1个DNA 断裂；

（3）快速，从采样到分

析结果只需数小时，整个过程可在一个工作日内完成；

（4）

简便，无需放射性核素标记，无需复杂的仪器设备，成本低；（5）检测谱广，能检出DNA 断裂、碱不稳定位点、不完全切除修复位点（incomplete excision repair sites ）、DNA 交联以及氧化性损伤等多种类型的DNA 损伤；（6）适用范围广，凡能

制成单细胞悬液的有核细胞（包括静止状态的细胞）均可用于

彗星试验。

阳性对照物K 2Cr 2O 7在彗星试验中的常用浓度为0.5~1.0

mmol ／L ，而在本试验中采用的浓度为0.1mmol ／L ，这是由于

考虑到K 2Cr 2O 7的浓度较低更利于观察海洋生物肽是否具有拮抗阳性致突变物导致的DNA 损伤的抗突变活性。李明正［6］的研究也证明K 2Cr 2O 7在此剂量下具有DNA 损伤的致突变作用，

且张遵真等［7，8］的研究表明K 2Cr 2O 7在0.1mmol ／L 的浓度下，染毒2h 可以出现明显的DNA 迁移，且细胞存活率大于90%。本研究结果表明，在该剂量下染毒的阳性对照组表现出了明显的DNA 损伤。

本研究选用的细胞为TK6人类淋巴母细胞。该细胞对于X 线及化学物诱导的突变有较高的灵敏度［9］。TK6细胞呈悬浮生长，易于培养，在实验中无需酶消化，可避免人为损伤导致的彗星试验假阳性结果。另外动物与人类存在种属差异，即在外源化合物的代谢、反应敏感性等方面均可能存在差异，导致动

（下转第3440页）

加终浓度为1×10-4mmol ／ml 的K 2Cr 2O 7。同时设阴性对照、阳性对照（K 2Cr 2O 7，终浓度1×10-4mmol ／ml ）和抗突变对照（100μg ／mlVitaminC+1×10-4mmol ／ml K 2Cr 2O 7），于37℃二氧化碳恒温培养箱中处理4h 。

1.5.2收获细胞上述处理后立即（0h ）和培养24h 后收获细胞。方法是：1000r ／min 离心5min ，弃去培养液，用PBS 洗涤3次后制成细胞密度为5×105个／ml 的细胞悬液。

1.5.3彗星试验参照文献［4］的方法进行彗星试验。每一

剂量组随机观察200个细胞，记录拖尾细胞数，计算拖尾细胞率（comet cell rate ）

（以下简称拖尾率）。用目镜测微尺随机

测量30个拖尾细胞的核DNA 直径（头长）和全长，全长扣除

头长后即为彗星尾长（也称DNA 迁移距离），并计算平均尾长。试验重复3次得到平均拖尾细胞率和平均尾长。

1.6统计分析

使用SPSS 13.0统计软件，用卡方检验比较各剂量组与对

照组间拖尾细胞率的差异，用方差分析比较各剂量组与对照组间平均尾长的差异，用直线回归分析各剂量组剂量与细胞拖尾细胞率和细胞平均尾长之间是否存在剂量—反应关系。

2结果

受试物处理后，各组的细胞存活率均在85%以上。彗星试

验结果见表1。

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验CCl4造模组与正常对照组比较，ALT、AST活力明显升高，給予山药不同剂量的山药水提物后ALT、AST活力明显下降，提示山药水提物具有剂量依赖性的保护肝细胞膜的作用，能使细胞膜的通透性降低，抑制细胞内酶的释放，从而改善肝损伤，促进肝功能的恢复。

生物膜磷脂过氧化分解后，生成多种脂醇、脂醛和短链产物，MDA就是其中之一。MDA为脂质过氧化的最终产物，可严重破坏细胞膜结构，导致细胞膜肿胀坏死，起血清及组织中的含量反映了组织过氧化损伤的程度和细胞受损程度［5］。SOD 是动物机体内的抗氧化酶，其作用是清除自由基，防止自由基对细胞结构的损伤，其活力的大小反映机体抗氧化，清除自由基的能力，体内SOD活性越高，自由基清除的速度越快［6］。在本实验中造模组的小鼠肝组织中MDA含量明显升高，SOD活力明显下降，肝脏病理学检查肝细胞损伤明显，上述变化反映了脂质过氧化与肝损伤的关系。給予山药水提物后，CCl4肝损伤小鼠肝脏病理变化明显减轻，肝组织中的MDA含量明显下降，SOD活力明显提高，以上作用均呈剂量依赖性。说明山药水提物对清除自由基，抑制脂质过氧化反应，维持细胞质膜的正常结构，避免细胞的损害有一定的作用。

肝细胞损伤坏死进而引起肝Kupffer细胞的激活，分泌多种细胞因子如TNF-α、IL-1β、IL-6，这些细胞因子进一步刺激相邻的肝细胞和附近的Kupffer细胞表达TNF-α、IL-1β、IL-6［7］。TNF-α一方面参与机体的免疫防御机能，另一方面则介导休克、炎症反应、组织损伤等病理生理过程；TNF-α、IL-1β一起诱导IL-6和IL-8产生［8］，IL-6的主要作用：①参与机体的炎症反应和抗感染防御机制，与某些肿瘤和自身免疫疾病的发生和转归密切相关。②异常升高的IL-6参与肝病免疫病理反应，导致肝脏损害［9］。③IL-6诱导中性粒细胞向肝细胞浸润，促进肝窦状隙内皮细胞的黏附作用；增强血管内皮的促凝活性，引发血管内凝血，影响肝微循环，导致肝细胞的损害［10］。本研究显示山药水提物能明显降低肝组织中TNF-α、IL-1β含量，与造模组比较差异有统计学意义（P﹤0.003）。提示山药水提物能抑制由TNF-α、IL-1β所介导的肝细胞炎性反应，有效的保护肝细胞。

综上所述，山药水提物对化学性肝损伤有多种环节的保护作用，其机理可能是降低肝内脂质过氧化反应，清除自由基，保护肝细胞膜免受损害，进而减少各种细胞因子的释放。

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（收稿日期：2008-05-21）［1］

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（上接第3432页）

物实验结果外推至人有较大的不确定性，而使用人类细胞可避免由于种属差异而导致的这种外推不确定性，故选择人类细胞进行试验更有意义。

目前已经从各种海洋生物中分离获得14500余种海洋天然产物，新发现的海洋化合物以平均每4年增加50％的速度递增。在已发现的化合物中，近1／2具有各种生物活性；且许多海洋化合物结构新颖独特，活性显著，已成为新药开发的主要来源之一。本研究应用彗星试验对3种海洋生物肽（海洋胶原肽、海洋骨原肽、海洋蛋白肽）的抗突变活性进行了初步评价。结果表明，3种海洋生物肽可拮抗K2Cr2O7诱导的TK6细胞DNA单链断裂，即具有较强的抗突变活性。但本研究未发现3种海洋生物肽各剂量组的拖尾细胞率和平均尾长有明显剂量—反应关系（P﹥0.05），可能与所设计的剂量过大有关，尚有待进一步的研究证实。

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（收稿日期：2009-10-24）

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检验科微生物实验室生物安全事件应急预案

检验科微生物实验室生物安全事件应急预案 This manuscript was revised by JIEK MA on December 15th, 2012.

检验科微生物实验室生物安全事件应急预案为了有效的预防微生物实验室生物污染，有效应对实验室突发污染事件，保证实验结果的科学准确，保障实验工作人员的健康、生命财产安全，防止实验室污染对周围环境造成严重污染，加强检验工作的质量控制和实验室的管理，根据《中华人民共和国传染病防治法》、《突发公共卫生事件应急条例》和《实验室生物安全通用要求》等相关法律法规的规定，特制定本预案，确保一旦发生实验室污染事件及安全事故时，能及时、规范、科学、迅速有效地控制。 一、适用范围 本预案适用于微生物实验室发生的、与实验室安全相关的、危害科室工作人员健康以及社会公众健康和社会稳定的所有事件。主要包括：1．病原微生物的实验室污染事件； 2．工作人员受到实验室内有毒病原微生物的感染或侵害； 3．病原微生物被泄漏出实验室事件。 4．由于停电、火灾等不可预测因素所引起的实验室其他污染事件。 当出现以上适用范围中的任意情况，启动本预案。 二、应急管理小组 有微生物实验室生物安全事件应急管理小组，科主任任组长，制定实验室生物安全防护指导方针，规划对实验室的硬件建设、组织实施科学管理。在实验室生物安全事件发生时，决策指挥，调动人员，全面部署。发生突发事件后应急处理小组全体成员，应立即按实验室污染突发事件处理

的技术规范，采取有效措施控制事件、调查原因，减少人员伤亡和财产损失。 三、预防措施 1．加强实验室标准化建设，对实验室设备的配置、个人防护和实验室安全行为应按《实验室生物安全通用要求》做出明确规定。 2．建立实验室病原微生物专库，对于传染病病原样本建立严格的监督管理制度。 3．增强安全意识，合理完善实验室生物安全的各项规章制度。把生物安全管理责任和措施落到实处，消除安全隐患。实验室工作人员应自觉遵守实验室生物安全管理规定，严格按照操作规程和技术规范开展研究工作。 4．提高警惕，加强安全保卫，防止不法之徒盗窃病原微生物和有毒有害化学试剂，用于对人群进行生物化学恐怖攻击，对公众健康产生严重损害，影响社会稳定。 5．建立有效的预警机制，为各种病原微生物和有毒有害化学试剂建立档案和使用纪录，填写准确。每次使用后及时登记，发现遗失或被盗，立即报告。 6．建立实验室工作人员健康档案，定期体检。发现与实验室生物安全有关的人员感染或伤害应立即报告。 7．定期开展自查，及时发现安全隐患，发出预警通报。 四、应急控制措施

肽的吸收机制

肽的吸收机制 现已发现，寡肽和氨基酸存在两种相互独立的吸收转运机制。自由氨基酸通过刷状缘膜由特殊的氨基酸转运系统进入肠上皮细胞，寡肽则通过特殊的肽转运系统进行转运。肽转运系统位于小肠上皮细胞的刷状缘膜。已证明存在两种肽的转运载体，并对其进行了克隆表达。相对于氨基酸载体的专一性，肽载体对肽的氨基酸结构要求较小。下面对寡肽与游离氨基酸的吸收机制分别进行简要介绍： 1?游离氨基酸的吸收 实验表明，游离氨基酸的吸收主要是一个耗能的主动吸收过程，主要存在以下2种吸收机制： (1)氨基酸吸收载体 实验表明，小肠细胞膜上存在可以转运游离氨基酸的载体蛋白。游离氨基酸能够与载体蛋白以及Na+形成三联体，从而使氨基酸和Na+进入细胞内，此后Na+ 再借助钠泵排出细胞外，此过程是一个耗能的主动吸收过程。由于氨基酸结构的差异，主动转运氨基酸的载体也不相同。目前已知的载体至少有四种，即中性氨基酸载体、碱性氨基酸载体、酸性氨基酸载体和亚氨基酸与甘氨基酸载体。其中，中性氨基酸载体是主要载体。由于各种载体转运的氨基酸在结构上有一定的相似性，导致了当某些氨基酸共同使用同一载体的时候，它们在吸收过程中存在彼此相互竞争的关系。 (2)丫-谷氨酰基循环 Meister提出了关于氨基酸吸收的丫-谷氨酰基循环。他认为氨基酸吸收极其向细

胞内的转运过程是通过谷胱甘肽起作用的，其反应过程可以简单地分为两个阶段，即谷胱甘肽对氨基酸的转运和谷胱甘肽的再合成，并由此构成一个循环，也被称为Meister循环。目前已经发现，催化图中各种反应的酶在小肠粘膜细胞、肾小管细胞和脑组织中均广泛存在。其中，Y谷氨酰基转移酶位于细胞膜上，是催化这些反应的关键酶。其余的酶类则存在于细胞液中。值得指出的是，某些氨基酸例如脯氨酸，不能通过丫-谷氨酰基环转运入细胞，因此，不能排除其他转运过程的存在。 2?寡肽的吸收 寡肽的吸收机制与游离氨基酸完全不同，其吸收是逆浓度进行的，可能通过以下 3种过程进入细胞： (1)主动转运 是指细胞通过本身的耗能过程使肽分子逆浓度梯度作跨膜运动，即由膜的低浓度一侧移向高浓度一侧的过程。钙泵是肽分子进入细胞常用的主动转运之一，其需要的能量直接或间接地来自三磷酸腺苷的分解。这种转运方式在缺氧或添加代谢抑制剂的情况下可被抑制。 (2)具有pH依赖性的非耗能性Na+/H+交换转运系统 在转运过程中，刷状缘顶端细胞的互转通道的活动产生质子运动的驱动力，从而驱动两个质子和一个肽分子穿过刷状缘膜，H+向细胞内的电化学质子梯度供能。 寡肽以易化扩散方式进入细胞，引起细胞内pH值下降。随着细胞内pH的降低, Na+/H+交换转运系统被激活，在将细胞外的Na+转运细胞内的同时将细胞内的H+转

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生物化学实验知识点整理 实验一 还原糖的测定、实验二 粮食中总糖含量的测定 1.还原糖测定的原理 3,5-二硝基水杨酸与还原糖溶液共热后被还原成棕色的氨基化合物,在550nm 处测定光的吸收增加量，得出该溶液的浓度，从而计算得到还原糖的含量 2.总糖测定原理 多糖为非还原糖，可用酸将多糖和寡糖水解成具有还原性的单糖，在利用还原糖的性质进行测定，这样就可以分别求出总糖和还原糖的含量 3.电子天平使用 4.冷凝回流的作用： 使HCl 冷凝回流至锥形瓶中，防止HCl 挥发，从而降低HCl 的浓度。 5.多糖水解方法： 加酸进行水解 6.怎样检验淀粉都已经水解： 加入1-2滴碘液，如果立即变蓝则说明没有完全水解，反之，则说明已经完全水解。 7.各支试管中溶液的浓度计算 8.NaOH 用量：HCl NaOH n n = 9.不能中途换分光光度计,因为不同的分光光度计的光源发光强度不同 10.分光光度计的原理：在通常情况下，原子处于基态，当通过基态原子的某辐射线所具有的能量（或频率）恰好符合该原子从基态跃迁到激发态所需的能量（或频率）时，该基态原子就会从入射辐射中吸收能量，产生原子吸收光谱。原子的能级是量子化的，所以原子对不同频率辐射的吸收也是有选择的。这种选择吸收的定量关系服从式/E h hc νλ?==。 实验证明，在一定浓度范围内，物质的吸光度A 与吸光样品的浓度c 及厚度L 的乘积成正比，这就是光的吸收定律，也称为郎伯-比尔定律 分光光度计就是以郎伯比尔定律为原理，来测定浓度 11.为什么要水解多糖才能用DNS 因为DNS 只能与还原糖溶液在加热的条件下反应生成棕红色的氨基化合物，不能与没有还原性的多糖反应。 12.为什么要乘以0.9 以0.9才能得到多糖的含量。 13.为什么要中和后再测？ 因为DNS 要在中性或微碱性的环境下与葡萄糖反应 实验三 蛋白质的水解和纸色谱法分离氨基酸、实验四 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 1.纸色谱分离氨基酸分离原理 由于各氨基酸在固定相（水）和流动相（有机溶剂）中的分配系数不同，从而移动速度不同，经过一段时间后，不同的氨基酸将存在于不同的部位，达到分离的目的。 2.天然氨基酸为L 型 3.酸式水解的优点是：是保持氨基酸的旋光性不变，原来是L 型，水解后还是L 型，由于甘氨酸所有的R 基团是氢原子，所以它不是L 型

生物活性肽的研究及其进展汇总

生物活性肽的研究及其进展 摘要：生物活性肽作为一种来源广泛、种类繁多、功能性良好的生命因子，目前已成为全球范围内的研究热点。研究表明这些肽除具有常规的生物活性,如增加矿物质吸收、调节血压、抗菌、抗氧化、降胆固醇、免疫调节之外还对人类营养有调节作用,因而受到广泛关注。本文综述了生物活性肽的种类、生理功能、吸收、制备研究进展,以期为生物活性肽的进一步研究和应用提供参考。 关键词：生物活性肽，生理活性，吸收 Research and progress of biological active peptide Abstract:Bioactive peptides as one rich sources, wide variety, good functional life factors have been a global research hot spot. Studies have shown that these peptides have some conventional biological activities, such as increase mineral absorption, adjust blood pressure, antibacterial, antioxidant, decrease cholesterol, regulate immune. What’s more, they also have a regulating effect on human nutrition, so they have attracted widely attention. The kinds of bioactive peptides was reviewed in this paper, preparation research progress of physiological function, absorption and biological active peptide in order to provide reference for further research and application. Key words:Biological active peptide, Physiological activity, Absorb 1.功能肽的简介 肽(peptides)是分子结构介于氨基酸和蛋白质之间的一类化合物,是蛋白质的结构与功能片段,并使蛋白质具有数以千万计的生理功能。肽本身也具有很强的生物活性。是由蛋白质中20种天然氨基酸以不同的组合和排列的方式构成的，从二肽到复杂的线性或者环状的多肽的总成。一般说来,肽链上氨基酸数目在10个以内的叫寡肽,10～50个的叫多肽,50个以上的叫蛋白质。人们习惯上也把寡肽中的二、三肽称为小肽。由于构成肽的氨基酸种类、数目与排列顺序的不同,决定了肽纷繁复杂的结构与功能。 生物活性肽( biologically active peptide/ bioactive peptide/ biopeptide) 是指对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物,又称功能肽(functional peptide)[1]。肽由氨基酸组成,人体存在20 种氨基酸,由不同的氨基酸的种类排列,加上数量排列形成,再加上还可能有的二级、三级结构,其种类是十分庞大的[2,3]。每一种活性肽都具有独特的组成结构,不同活性肽的组成结构决定了其功能。此外活性肽在生物体内的含量是很微量的,但却具有显著的生理活性。据研究,有些多肽在10 - 7mol/ L 的浓度时仍具有生理活性,就是说1 mL 的多肽用60 倍水稀释后,仍然具有生理功能。功能肽是源于蛋白质的多功能化合物，是多样化且来源充足的食品原料，具有多种人体代谢和生理调节功能，如易消化吸收、促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等[4] 现代营养学研究发现，人体摄入蛋白质经消化道中的酶作用后，大部分是以寡肽的形式

促进肽吸收的方法

促进肽吸收的方法 蛋白质和多肽进入消化道后，被分解为游离氨基酸和寡肽，之后才能被吸收入血，继而发挥相应的生物学效应。为了克服大多数外源性肽口服后生物学效应低下的现象，发展了许多可以促进肽吸收的方法： 1.肽的定点释放技术。采用乳化、微胶囊等技术，用可生物降解的聚合体材料将肽包埋，使之免于与蛋白酶接触，然后在吸收目标区域将肽释放出来。这些聚合物包含氮交联的苯乙烯和羟基甲基丙烯酸盐，结肠微生物氮还原酶可降解聚合物骨架的氮键，以及对pH敏感的聚丙烯酸聚合体等。 2.延长肽在吸收位点的滞留时间。使用生物粘性聚合物可延长肽在胃肠道吸收位点的滞留时间，从而增加肽的吸收。来自西红柿和豆类的植物血凝素就具有这种作用。这种方法是促使寡肽吸收的一种较好的方法，但是必须认识到，延长在肠道的滞留时间同事也意味着与蛋白酶接触时间的增加。 3.蛋白酶抑制剂和吸收增强剂的使用。利用蛋白酶抑制剂，能防止肽的降解，研究显示蛋白酶剂对胰岛素、精氨酸血管收缩剂、肾素抑制剂的口服吸收有促进作用。吸收增强剂通常为低分子量的化合物。能够增强肽的穿透或吸收，主要有：螯合剂，如EDTA、胆盐衍生物、离子或非离子表面活性剂以及各种脂肪酸或水杨酸盐等。其作用机制为：通过打开细胞间的紧密连接增加跨细胞转运、代谢抑制、降低肠液的粘性或增加溶解性等。然而，增加肽的吸收也会同时增强肠道对有毒物质的吸收。 4.肽结构的修饰。在肽的N端或C端做一定的修饰或阻隔，如烯替换、羰基还原、D-氨基酸的替换、N端或C端的环化、去氢氨基酸替换等。将肽进行化学修饰后能降低肠道酶系的降解作用。 生物活性肽在人体消化系统中的不稳定性是其研究开发的主要问题之一。肽在人体内的吸收会遭遇层层的理化及生理上的障碍，包括肠道内壁的粘液、肠腔、刷状缘膜、绒毛细胞和肝脏等。在体外研究中具有某种生理活性的生物活性肽，要能够被人体有效利用，必须考虑针对肽本身的结构、大小，所要产生效应的目标位置，使用不同的方法帮助肽安全转运。目前，在克服渗透障碍和酶障碍方面虽取得了一些成绩，但尚无突破性进展。另外，多肽的肝清除问题应该受到重视，了解肝清除机制、肽分子机构与消除之间的关系将有助于实现多肽口服给药。

生化实验操作考核要点(新)

【实验操作考核要点】 一、目的要求 1．掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。 2．了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。 3．正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。 4．熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。 5．正确掌握溶液转移的操作。 6．正确操作使用分光光度计。 二、操作考核内容 按百分制计。 1．吸量管操作（20分）； 2．可调式微量移液器操作（20分）； 3．溶液混匀操作（视具体情况，采用合适的混匀方法）（15分）； 4．溶液转移操作（10分）； 5．分光光度计比色操作（25分）。 6．整体表现（10分）。 三、操作考核标准 （一）吸量管操作（20分，每项操作5分） 1．执管 要求右手拿吸量管，左手拿橡皮球，只能用食指而不能用拇指按压吸量管上口来调节吸取液量的刻度；吸液、排液整个操作过程吸量管应始终保持垂直。 2．坐姿 要求腰、背保持竖直，看刻度时眼睛保持平视。 3．吸取溶液 吸量管插入液面深度约0.5cm，不能一插到底，也不能插入过浅而吸进空气致使溶液进入橡皮球内；调控吸量管吸取液量的刻度时，吸量管尖应离开液面靠在容器内壁上。 4．排出液体

吸量管尖应靠上受纳容器内壁，让管内溶液自然流出。不能用橡皮球吹压，而且在流净后吸量管尖停靠受纳容器内壁至少3秒。 （二）可调式微量移液器操作（20分，每项操作5分） 1．设定容量值 转动加样器的调节旋钮，反时针方向转动旋钮，可提高设定取液量。顺时针方向转动旋钮，可降低设定取液量。在调整设定移液量的旋钮时，不要用力过猛，并应注意使取液器显示的数值不超过其可调范围。 2．吸液 （1）选择合适的吸头安放在取液套筒上，稍加扭转压紧吸嘴使之与套筒之间无空气间隙； （2）把按钮压至第一停点，垂直握持加样器,使吸头浸入液面下2~3毫米处,然后缓慢平稳地松开按钮，吸入液体，等一秒钟，然后将吸头提离液面，贴壁停留2-3秒，使管尖外侧的液滴滑落。 3．放液 （1）将吸头口贴到容器内壁底部并保持100°~40°倾斜； （2）平稳地把按钮压到第一停点，等一秒钟后再把按钮压到第二停点以排出剩余液体； （3）压住按钮，同时提起加样器，使吸头贴容器壁擦过，再松开按钮。按吸头弹射器除去吸头。 4．压放按钮时保持平稳；加样器不得倒转；吸头中有液体时不可将加样器平放。取液器吸嘴为一次性使用。实验完毕，将取液器读数调至最大量程值，竖立放于支架上。 （三）溶液的混匀（操作流程中下划实线的三处，每项操作5分，共15分）1．肝糖原的提取与鉴定操作中，肝匀浆上清液中加5ml 95%乙醇后的混匀最好用倾倒混匀，也可用滴管或吸量管吸、吹混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。 2．肝糖原定量测定中，肝组织消化液沸水浴后全部转入100 ml容量瓶，加水至刻线后的混匀应采用倒转混匀。 3．肝糖原定量测定中，加蒽酮溶液后的混匀，可将试管倾斜约45o再作旋转混匀。因蒽酮溶液（浓硫酸配制）比重大于样品水溶液很多，一加入便沉于管

生物化学实验内容

《生物化学实验》内容 课程类型：制药工程专业必修 实验总学时：32课时 开设实验项目数：8个 适用对象：2017制药工程1、2班 实验教师：段志芳 一、实验目标及基本要求 生物化学实验是一门独立的实验课程，培养学生生物化学实验基本操作技能、实验数据处理能力、分析问题解决问题的能力和实事求是的科学态度。 二、实验内容

三、成绩 包括实验时的表现（实验出勤、安全卫生、操作对错、损坏器皿情况等，占50%）及实验报告的完成情况和完成质量（占50%），每个实验按总分为100分为满分进行打分，共8个实验，总评取平均值。 四、要求 （1）实验过程中同组人可以配合进行； （2）实验报告独立完成，同组人数据相同，不得抄袭他组数据；（3）实验过程若出现失误应向老师汇报后再进行重做； （4）对实验结果进行简单的分析. 实验一植物组织中可溶性总糖的提取 一、实验目的 1. 掌握可溶性总糖的概念和性质。 2. 掌握可溶性总糖提取的基本原理。

3．掌握溶解、过滤、洗涤、定容等基本操作技术。 二、实验原理 可溶性糖是指易溶于水的糖，包括绝大部分的单糖、寡糖，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖等。它们在植物体内可以充当能量的储存、转移的介质、结构物质和功能分子如糖蛋白的配基。总糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖和在测定条件下能水解为还原性的单糖的蔗糖、麦芽糖以及可能部分水解的淀粉。可溶性总糖提取方法包括：热水提取法、酶提取法、超声波提取法等。其溶于热水，不溶于60%以上乙醇，所以用热水提取、乙醇沉淀除去部分醇溶性杂质。本实验利用可溶性糖溶于水的特性，将植物磨碎，用热水将组织中的可溶性糖提取出来，结合实验二得到总糖浓度，已知溶液体积和原料重量，可以求出总糖含量。 三、实验用品 1.仪器设备：电子天平（精确到0.0g，配称量纸若干）；可控温电 加热板或电炉或电热套或水浴锅均可。可共用。 2.玻璃器皿：研钵1套；100mL锥形瓶1个；25mL量筒1个；玻 璃棒1根；100mL烧杯2个；胶头滴管1支；过滤装置1套（铁架台1台+铁圈1个+玻璃漏斗1个+100mL容量瓶1个+洗瓶1个）； 不锈钢刮勺1个；剪刀1把。此部分为每组所用，集中到小框里，放置各实验台上。 3.药品试剂：新鲜植物叶片；蒸馏水。 4.其他：9cm滤纸若干（与玻璃漏斗配套）；纸巾若干；标签纸若

各种生物活性肽

各种生物活性肽 乳蛋白肽： 乳蛋白肽又称乳肽，是为了应付婴幼儿中发生的牛奶变态反应的需要而开发的。因此主要的应用领域是婴幼儿食品，以及有关对平衡营养食品、运动食品和普通食品进行改良之用。日本森永乳社首先使用调整奶粉的低变态反应原肽，除了8种已上市的乳蛋白肽之外，市场还出售各种等级的肽原料。在1997年首次出售了抗变态反应用的育儿奶粉。新产品则将酪蛋白的抗原性降低到10-8以下，当分子量在1000道尔顿以下时，产品几乎全部由氨基酸和低聚肽（oligopeptide）构成，其作为营养肽、用于抗变态反应的点心和婴儿食品，受到好评。而自酪蛋白还可以制出具有显著的发泡性、乳化性的多肽。 新西兰制造的乳肽在美国已有销售，主要用于健康食品、运动食品和对抗变态反应的食品。日本市场有代表性的4种肽原料中，经肠营养和育儿奶粉用的有3种（平均分子量1100、500、390道尔顿）和酪蛋白为原料的医疗用流食/运动食品1种（平均分子量350道尔顿）。 蛋清肽： 作为蛋白质中营养效价最高、氨基酸最为平衡的蛋清，其酶解后可得到蛋清肽。因为含巯基多，所以略有异味。蛋清肽能将原来得100分的平衡氨基酸很好地保持下来，由于水解使得分子量变小，所以加热不会发生凝固，因此可添加到液态食品中。 在日本，蛋清肽已市售、平均分子量1100，其水溶液呈乳状，广泛用于营养辅助食品和点心；此多肽再经高度水解后，可得到平均分子量约300道尔顿的药品级多肽，其水溶液透明，与蛋壳钙配合在营养上具有协同效果，用于婴儿食品、以及老年人食用的“银色食品”。

大豆肽： 大豆肽除具有易消化、吸收的营养效果外，还可能具有低变应原性，抑制胆固醇、促进脂质代谢，促进肠道发酵的功能等。大豆肽的特性使其利用领域相当宽广，如住院患者经常应用的经肠营养、老人应用的易消化吸收食品，对抗变态反应的食品，运动食品和有恢复疲劳等作用的健康食品。 玉米肽： 日本开发了以玉米蛋白为原料制成的肽——“peptino”。玉米蛋白质与其他蛋白质的氨基酸组成相比，富含缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等支链氨基酸和丙氨酸。对运动后疲劳恢复、改善肝脏病、防止醉酒、肠功能障碍有作用。目前韩国制药公司以醒酒饮料的形式上市，其对中性脂肪的抑制效果等功能在研究之中。 豌豆肽： 从豌豆蛋白水解而得，豌豆肽的PH值呈中性。豌豆肽没有苦味，且价格较低廉，与前述乳蛋白肽共同添加、其不仅营养合理，成本上也容易接受，有望应用在育儿调制奶粉方面。 氨基酸是人体必须的营养物质，但人体有8种氨基酸不能自身合成，需由外界摄取。豌豆多肽中这8种氨基酸的含量除蛋氨酸稍低外，其余的氨基酸比例接近于FAO/WHO推荐模式。 中国的豌豆蛋白资源广泛，价格便宜，但由于这些氨基酸基本上以聚合的形式存在于蛋白质中，严重影响人体对它们的吸收和利用。Mattews等课题组的研究成果告诉人们，蛋白质经消化道酶作用后主要以小分子肽的形式吸收，通过试验证明低肽的吸收率比氨基酸的吸收率大，比氨基酸更易更快被人体吸收、利用。基于这种理论，利用生物工程定向酶切技术开发出的豌豆多肽具有广泛的应用价值。

论多肽的吸收机制

论多肽的吸收机制 武汉九生堂生物工程有限公司邹远东 过去的科学研究认为，蛋白质经消化道酶促水解后，主要以氨基酸的形式被吸收。近两年的科学研究认为，人体吸收蛋白质的主要形式不是以氨基酸，而是以多肽的形式吸收的，这是人体吸收蛋白质机制研究的重大突破。科学试验证明，多肽的吸收机制具有十大特点： 1、不需消化，直接吸收。通常，多肽是人体自身合成的，是人体将所吃的蛋白质进行酶促水解（促酶、消化酶、胰酶、胃蛋白酶、胃酸、消化道碱性物质进行分解，先变成氨基酸，然后合成肽，最终通过小肠进行吸收，然后经人体细胞、组织、器官及血液大循环。）而人工合成的多肽表面有一层保护膜，不会受到人体的促酶、胃蛋白酶、胰酶、淀粉酶、消化酶及酸碱物质二次水解，它以完整的形式直接进入小肠，被小肠所吸收，进入人体循环系统，发挥生物学功能。 2、吸收快速。口服剂如同针剂。人工体外合成的多肽，口服进入人体，其速度如>同火箭一样，有的科学家把它称为"生物导弹"，快速地穿过人的口腔、胃，直接进入小肠，被小肠吸收，最终进入人体血液循环系统、器官及细胞组织，迅速发挥其生理作用和生物学功能。 3、吸收时，多肽体不会被破坏。多肽体自身有一层保护膜，人服用时，不会受到人体中的促酶、胰酶、淀粉酶、消化酶、胃蛋白酶及消化系统中的酸碱物质的损害或二次水解，多肽是以完整的形式被人体吸收和利用的。 4、多肽具有100被人体吸收的特点。吸收后，不会有任何排泄物，而且是全部被人体吸收和利用。 5、多肽具有主动被人体吸收的特点。对于因消化系统缺陷、障碍、损伤，而不能吸收营养者，多肽具有主动让人体吸收或迫使让人体吸收的特点。这对于那些消化能力差，营养缺乏，身体虚弱，体弱多病者，有着重要的意义。 6、多肽具有优先被人体吸收的特点。人们平常所食的营养物质，在吸收上，与多肽的竞争中，多肽具有优先吸收的特点。这与其主动吸收的特点是分不开的。

生物化学实验重点试题

一、解词 1、总氮量水中各种形态无机和有机氮的总量 2、酶的抑制作用是指在某个酶促反应系统中，某种低相对分子质量的物质加入后，导致酶活力降低的过程。 3、酶的最适温度酶催化活性最高时的温度 4、蛋白质的等电点每个蛋白都存在一个pH使它的表面净电荷为零即等电点 5、盐析增加中性盐浓度使蛋白质、气体、未带电分子溶解度降低的现象 6、蛋白质变性蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变，从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失6、酶的专一性酶对底物及其催化反应的严格选择性通常酶只能催化一种化学反应或一类相似的反应 7、激活剂能提高酶活性的物质大部分是离子或简单的有机化合物 8、抑制剂凡能使酶催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质 9、酶催化特定化学反应的蛋白质、RNA或其复合体 二、填空 1、球蛋白可在半饱和中性硫酸铵溶液中析出，清蛋白可在高盐浓度溶液中析出。 2、在PH3.0、和9.5时的电场中，卵清蛋白（PI4.6）移动方向分别为负移 动，正移动。 3、唾液淀粉酶的最适温度是37 4、还原糖与本乃狄试剂共热现象生成生成砖红色沉淀。 5、维生素C也称抗坏血酸，它具有很强还原性 6、用苔黑酚浓盐酸溶液可以鉴定核糖核酸 7、当溶液的PH低于蛋白质等电点时，蛋白质分子带正电荷；当溶液的 PH大于蛋白质等电点时，蛋白质分子带负电荷； 10．凯氏定氮法测定蛋白质含量消化终点颜色为清澈的蓝紫色色。 11．蛋白质变性的实质是空间结构被破坏。 12．常用的RNA提取方法有苯酚法、、高盐法等。 13、维持蛋白质亲水胶体稳定的因素是蛋白质颗粒表面的电荷层 和水化膜、 14、蛋白质在等电点时，主要以两性离子离子形式存在；当溶液的P H＞PI 时，蛋白质分子以负离子形式存在；当溶液的P H＜PI时，蛋白质分子带正离子形式存在。 15、蛋白质分子中氮的平均含量为 5.16% ，样品中的蛋白质含量常以测 氮量乘以 6.25 、即 6 。 三、选择 1、盐析法沉淀蛋白质的原理( ) A 与蛋白质结合成不溶性蛋白盐 B 次级键断裂蛋白质的构象改变 C 中和电荷，破坏水化膜 D 调节蛋白质溶液的等电点 2、以下哪项不是酶的特性（） A 酶是生物催化剂，催化效率极高 B 易受Ph，温度等外界因素的影响 C 能加速化学反应但不改变反应平衡点 D 有高度特异性 3、RNA和DNA的最大紫外吸收值是在（） A 280nm B 260nm C 510nm D 620nm 4、．凯氏定氮法使用的混合催化剂硫酸钾-硫酸铜配比为（） A 1:3 B 5:1 C 3:1 D 1:1

常见的一些生物活性肽

常见的一些生物活性肽 1 大豆肽 大豆多肽是指大豆蛋白经酶解或微生物技术处理而得到的水解产物，它以 3-6个氨基酸组成的小分子肽为主，还含有少量大分子肽、游离氨基酸、糖类和无机盐等成分。大豆多肽的分子质量以l 000 Da的为主，主要出现在300—700 Da 内。与大豆蛋白相比，大豆多肽具有消化吸收率高，能降低胆固醇、降血压和促进脂肪代谢的生理功能，以及无豆腥味、无蛋白变性、酸性不沉淀、加热不凝固、易溶于水和流动性好等良好的加工性能。大豆多肽还具有抑制蛋白质形成凝胶、调整蛋白质食品的硬度、改善口感和易消化吸收等特性，其氨基酸组成几乎与大豆蛋白完全一样。研究发现，大豆肽能够有效预防“负氮平衡”所引起的不良反应，增加肌红蛋白的合成，缓解机体的缺氧症状，达到抗疲劳的效果以及增强机体免疫功能。同时，大豆肽能够有效抑制血管紧张素转换酶(ACE)的活性，对于因ACE引起的人体血压升高具有一定的控制作用。 2 酪蛋白磷酸肽 酪蛋白磷酸肽：简称CPP，是以牛乳酪蛋白为原料，通过生物技术制得的具有生物活性的多肽，有α-酪蛋白磷酸肽β-酪蛋白磷酸肽，富含磷酸丝氨酸的天然多肽。CPP能在人和动物的小肠内与Ca+2、Fe+2等二价无机离子结合形成可溶性络合物，促进其吸收利用。 3 玉米肽 玉米肽是从天然食品玉米中提取的玉米蛋白，经过酶降解及特定小肽分离技术而获得的小分子多肽物质。 玉米肽作为玉米蛋白经过酶降解而获得的多种小肽的混合物，除具有肽类物质的优良特性——优于氨基酸或蛋白质的直接吸收、溶解性强（在大范围的pH 值下均能完全溶于水，无浑浊和沉淀物产生）、稳定性强（对热稳定，组分不改变，功能不丧失）、安全性高（天然食品蛋白，安全可靠，无毒副作用）等特性以外，还具有自己所独有的特殊功能。玉米肽所独有的特殊功能源于它特别的氨基酸分布，通过实验室的检测，发现玉米肽的氨基酸分布非常特别，它与大豆低聚肽中各种氨基酸分布均匀的特点不同，玉米肽中氨基酸的分布主要以丙氨酸、亮氨酸和谷氨酸3种氨基酸为主，这也就注定了玉米肽拥有以下与大豆低聚肽不一样的特殊功能。玉米肽具有抗疲劳、保肝、提高机体免疫力等功能；玉米肽独特的氨基酸构成，有利于促进酒精代谢，具有醒酒作用；玉米肽具有抑制血管紧张素转换酶的作用，从而降低血压；

微生物实验室意外应急措施

1．刺伤、切割伤或擦伤。受伤人员应脱下防护服，清洗双手和受伤部位，使用适当的皮肤消毒剂进行消毒，必要时进行医学处理。同时记录受伤原因和相关的微生物，并保留完整适当的医疗记录。 2．潜在感染性物质的食入。应脱下受害人的防护服，进行必要的医学处理。报告食入材料的鉴定和事故发生的细节，并保留完整适当的医疗记录。 3．潜在危害性气溶胶的释放（在生物安全柜以外）。所有人员必须立即撤离相关区域，暴露人员应接受医学咨询，同时立即通知实验室负责人和生物安全负责人。为了使气溶胶排出和使较大的粒子沉降，在一定时间内严禁人员入内，若实验室没有中央通风系统，应推迟 进入实验室的时间，同时张贴“禁止进入”的标志。待气溶胶排出、较大的粒子沉降后，在生物安全负责人的指导下，清理人员穿戴适当的防护服和呼吸保护装备进行污染的清除。 4．容器破碎及感染性物质的溢出。应立即用布或纸巾覆盖被感染性物质污染或受感染性物质溢洒的破碎物品，并倒上消毒剂。作用适当时间后，将覆盖物以及破碎物品清除，再用消毒剂擦拭污染区域。玻璃碎片应用镊子清理，已污染的布、纸巾和抹布等应放在盛放污染性废弃物的容器内。如果用簸箕清理破碎物，应对其进行高压灭菌或放在有效的消毒液内 浸泡消毒。所有操作过程中要求戴手套。若实验表格或其他打印或手写材料被污染，应将这些信息复制后，再将原件置于盛放污染性废弃物的容器内，按废弃物处理的方式进行处理。 5．未装可封闭离心桶的离心机内盛有潜在感染性物质的离心管发生破裂。如果机器正在运行时发生破裂或怀疑发生破裂，应关闭机器电源，让机器密闭适当时间（如 30min），使气溶胶沉积。如果机器停止后发现破裂，不开盖或立即将盖子盖上，并密闭（如 30min）。同时应通知生物安全负责人。玻璃碎片应使用镊子，或用镊子夹着棉花进行清理。所有破碎的离心管、玻璃碎片、离心桶、十字轴和转子都应放入无腐蚀性的、已知对相关微生物具有杀灭活性的消毒剂内进行消毒。未破损的带盖离心管应放在另一个有消毒剂的容器中，消毒后回收。离心机内腔应用适当浓度的同种消毒剂多次擦拭，再用水冲洗后干燥。清理时，应戴结实的手套（如厚橡胶手套），必要时在外面再戴适当的一次性手套。所使用的全部材料都应按感染性废弃物处理。 6．在可封闭的离心桶（安全杯）内离心管发生破裂。所有的密封离心桶都应在生物安全柜内装卸。 若怀疑在安全杯内发生破损，应松开安全杯盖子并将离心桶高压灭菌，也可采用化学消毒的方法进行处理。 7.生物安全柜内生物危害溢出。等待至少5min，让安全柜充满气溶胶，清理时应穿戴实验服，安全眼镜和手套，且让安全柜继续工作。使用浸泡消毒剂的消毒纸巾吸附溢出物，进行消毒处理应保证一定的接触时间（至少20min）。并用同样的消毒纸巾擦拭安全柜内壁、

多肽的十大营养(吸收机制)特点

多肽的十大营养（吸收机制）特点 过去的科学研究认为，蛋白质经消化道酶促水解后，主要以氨基酸的形式被吸收。近两年的科学研究认为，人体吸收蛋白质的主要形式不是以氨基酸，而是以多肽的形式吸收的，这是人体吸收蛋白质机制研究的重大突破。科学试验证明，多肽的吸收机制具有十大特点： 1、不需消化，直接吸收。通常，多肽是人体自身合成的，是人体将所吃的蛋白质进行酶促水解(促酶、消化酶、胰酶、胃蛋白酶、胃酸、消化道碱性物质进行分解，先变成氨基酸，然后合成肽，最终通过小肠进行吸收，然后经人体细胞、组织、器官及血液大循环)。在体外已经合成好了，进入人体后不需进行二次降解，直接吸收 2、吸收快速，口服剂如同针剂。人工体外合成的多肽，口服进入人体，其速度如同火箭一样，有的科学家把它称为“生物导弹”，快速地穿过人的口腔、胃，直接进入小肠，被小肠吸收，最终进入人体血液循环系统、器官及细胞组织，迅速发挥其生理作用和生物学功能。 3、以完整的形式吸收。多肽体自身有一层保护膜，人服用时，不会受到人体中的促酶、胰酶、淀粉酶、消化酶、胃蛋白酶及消化系统中的酸碱物质的损害或二次水解，多肽是以完整的形式被人体吸收和利用的。 4、多肽具有百分之百被人体吸收的特点。吸收后，不会有任何排泄物，全部被人体吸收和利用。 5、多肽具有主动被人体吸收的特点。人体吸收任何物质都要耗费人体能量，而吸收肽不需消耗人体能量，肽是以自身的能量迫使人体吸收。对于因消化系统缺陷、障碍、损伤，而不能吸收营养者。对于运动人群在急需补充氮源，而又不能增加胃肠功能负担者、对于那些消化能力差、营养缺乏、身体虚弱、体弱多病者，有着重要的意义。多肽自身具有极强的活性和能量，它的主动吸收、迫使吸收，就是自身的活性和能量在起作用。因此，它在被人体吸收时，不是人体要耗费自身的能量去吸收它，而是多肽以自身的能量让人体吸收。由此看来，它的这一显著特点对消化系统未发育成熟的婴幼儿，对消化系统开始退化的老年人以及因过度运动而急需氮源，而又不能增加胃肠功能负担的运动员、体力劳动者有着重要意义。 6、多肽具有优先被人体吸收的特点。人们平常所食的营养物质，在吸收上，与多肽的竞争中，多肽具有优先吸收的特点。这与其主动吸收的特点是分不开的。 7、小肽在被人体吸收时。对氨基酸有保护作用。可保护氨基酸不受破坏。因此，肽与氨基酸的混合物是人体吸收蛋白质的最佳吸收机制 8、多肽在人体中表现出载体作用。可将人平常所食的营养物质，特别是钙

生物化学实验练习题及参考答案[1]

生物化学实验 一、名词解释： 分配层析法电泳同工酶酶活性分光光度法层析技术比活力 二、填空题： 1. 测定蛋白质含量的方法有，，和。 2. CAT能把H2O2分解为H2O和O2，其活性大小以来表示，当CAT与H2O2反应结束，再用测定未分解的H2O2。 3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳是以作为载体的一种区带电泳，这种凝胶是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成。化学聚合法一般用来制备_____________胶，其自由基的引发剂是，催化剂是______________；光聚合法适于制备大孔径的_________________胶，催化剂是______________。 4.层析技术按分离过程所主要依据的物理化学性质进行分类，可分成以下几种：_______________，_______________，_______________，_______________和________________。 5. 使用离心机离心样品前，必须使离心管__________且对称放入离心机。 6. 米氏常数可近似表示酶和底物亲合力，Km愈小，表示E对S的亲合力愈，Km愈大，表示E对S 的亲合力愈。 7. 分光光度计在使用之前必须预热，注意预热及样品槽空时必须_________（打开、合上）样品池翻盖。 8. CAT是植物体内重要的酶促防御系统之一，其活性高低与植物的密切相关。 9. 纸层析实验中，____________形成固定相，____________流动相。 10. 聚丙烯酰胺凝胶是是由和交联剂在催化剂作用下聚合而成的，在具有自由基团体系时，两者就聚合。引发产生自由基的方法有两种：和。11. 层析技术按按固定相的使用形式进行分类，可分成以下几种：_______________，_______________，_______________和________________。 三、问答题： 1、简述4种测定蛋白质含量的方法及其原理。 2、简述不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳中的三个不连续及三种物理效应。 3、试分析影响电泳的主要因素有哪些？ 参考答案： 生物化学实验 一、名词解释： 1、电泳：指带电粒子在电场中向与其自身所带电荷相反的电极方向移动的现象。 2、同工酶：指催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。 3、分配层析法：用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离目的的一种实验方法。

生物化学实验

生物化学实验讲义 化学工程与技术学院 基础部

实验一酪蛋白的制备 一、目的 学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法。 二、原理． 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 三、器材 1 、离心机2、．抽滤装置 3、精密pH试纸或酸度计 4、电炉 5、烧杯 6、温度计． 四、试剂与材料 1、牛奶2500mL 2、95％乙醇1200mL 3、无水乙醚1200mL

4、0.2mol／L pH 4.7醋酸—醋酸钠缓冲液3000mL 5、．乙醇—乙醚混合液2000mL 五、操作 1、将100mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入 预热至40℃、pH 4.7的醋酸缓冲液100 mL。用精密pH试纸或酸度计调pH至4.7。将上述悬浮液冷却至室温。离心15分钟(3 000r／min)。弃去清液，得酪蛋白粗制品。 2、用水洗沉淀3次，离心10分钟(3000r／min)， 弃去上清液。 3、在沉淀中加入30mL乙醇，搅拌片刻，将全部悬 浊液转移至布氏漏斗中抽滤。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀2次。最后用乙醚洗沉淀2次，抽干。 4、将沉淀摊开在表面皿上，风干；得酪蛋白纯晶。 5、准确称重，计算含量和得率。 含量：酪蛋白g／100mL牛乳(g％)

得率： 测得含量 100 % 理论含量 思考题 1、制备高产率纯酪蛋白的关键是什么？ 实验二小麦萌发前 后淀粉酶活力的比较 一、目的 1.学习分光光度计的原理和使用方法。 2.学习测定淀粉酶活力的方法。 3.了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化。 二、原理 种子中贮藏的糖类主要以淀粉的形式存在。淀粉酶能使淀粉分解为麦芽糖。 2（C6H10O5）n +nH2O nC12H22O11 麦芽糖有还原性，能使3，5---二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基-5-硝基水扬酸。后者可用分光光度计测定。

生物活性肽

生物活性肽 百科名片 生物活性肽是蛋白质中25个天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称，是源于蛋白质的多功能化合物。活性肽具有多种人体代谢和生理调节功能，易消化吸收，有促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等作用，食用安全性极高，是当前国际食品界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。 目录[隐藏] 概述 特性 作用 食品中的应用 1.殊营养品 2.保健食品 3.乳品 4.糕点 5.糖类 6.其他 重要活性肽研究简介 1.乳肽 2.大豆肽 3.高F值寡肽 4.谷胱甘肽（GSH） 活性肽的分类 生产方法 原料选择原则 中国活性肽研究进展 [编辑本段] 概述

现代营养学研究发现：人类摄食蛋白质经消化道的酶作用后，大多是以低肽形式消化吸收的，以游离氨基酸形式吸收的比例很小。进一步的试验又揭示了肽比游离氨基酸消化更快、吸收更多，表明肽的生物效价和营养价值比游离氨基酸更高。这也正是活性肽的无穷魅力所在。 生物活性肽是蛋白质中25个天然氨基酸以不同组成和排列方式构成的从二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称，是源于蛋白质的多功能化合物。活性肽具有多种人体代谢和生理调节功能，易消化吸收，有促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等作用，食用安全性极高，是当前国际食品界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。 生物活性肽 20世纪末，科学家在破解基因的秘密的同时，也对存在于生物体内的另一类奇妙物质的研究发生极大的兴趣。这类物质就是生物活性肽，或称功能肽，由氨基酸组成，是一种小分子的蛋白质，比如胰岛素，就是一种多肽，再如在日本应用广泛的促进钙吸收的CCP，在欧美风靡一时的促进生长的HGH……。 [编辑本段] 特性 1、它有良好的吸收性，它的吸收效率比氨基酸和蛋白质都高。 2、它有独特的生理调节功能，胰岛素调节血糖就是一个例子。 3、肽的活性很高，往往很小的量就能起到很大的作用。 [编辑本段]

多肽吸收机制的十大特点

多肽吸收机制的十大特点 世界著名多肽科学家邹远东 过去的科学研究认为，蛋白质经消化道酶促水解后，主要以氨基酸的形式被吸收。近两年的科学研究认为，人体吸收蛋白质的主要形式不是氨基酸，而是以多肽的形式吸收的，这是人体吸收蛋白质机制研究的重大突破。科学试验证明，多肽的吸收机制表现出十大特点。 1. 不需消化，直接吸收。人体自身合成的多肽是人体将蛋白质进行酶促水解所得（由促酶、消化酶、胰酶、胃蛋白酶、胃酸、消化道碱性物质进行分解，有的被分解为小肽，有的被分解为氨基酸残基，有的被分解为游离氨基酸，小肽最终通过小肠进行吸收，然后经人体细胞、组织、器官及血液大循环）。而体外人工合成的小肽表面有一层保护膜，被人体服食后不会受到人体的各种酶及酸碱物质二次水解，它和人体合成的肽一样直接进入小肠，被小肠所吸收，进入人体循环系统，发挥生物学功能。 2.吸收快速。人工体外合成的多肽，口服进入人体，它较氨基酸快70%的速度，快速地穿过人的口腔、胃，直接进入小肠，被小肠吸收，最终进入人体血液循环系统、器官及细胞组织，迅速发挥其生理作用和生物学功能。 3. 以完整的形式吸收。多肽是以完整的形式被人体吸收和利用的。

4.多肽具有100%被人体吸收的特点。吸收后，不会有任何排泄物，而且是全部被人体吸收和利用。 5. 多肽具有主动被人体吸收的特点。对于因消化系统缺陷、障碍、损伤，而不能吸收营养者，多肽具有主动让人体吸收或迫使人体吸收的特点。这对于那些消化能力差、营养缺乏、身体虚弱者，有着重要的意义。 6. 多肽具有优先被人体吸收的特点。人们平常所食的营养物质，以及人体降解的氨基酸残基和氨基酸，与多肽的吸收竞争中，多肽具有优先吸收的特点。这与其被主动吸收的特点是分不开的。 7. 人体对多肽的吸收，具有不需耗费人体能量，不需增加消化道，特别是胃肠功能负担的特点。多肽自身具有极强的活性和能量，它的主动吸收、迫使吸收，就是自身的活性和能量在起作用。因此，它在被人体吸收时，不是人体耗费自身的能量去吸收它，而是多肽以自身的能量让人体吸收。它的这一显著特点对消化系统未发育成熟的婴幼儿，对消化系统开始退化的老年人以及因过度运动急需氮源，而又不能增加胃肠功能负担的运动员、体力劳动者有着重要意义。 8. 多肽在人体中表现出载体作用，可将平常人所食的营养物质，特别是钙等对人体有益的微量元素，吸附、粘贴、装载在本体上。 9. 多肽可在人体中起运输工具的作用。可将各种营养物质吸附在本体上后运送到人体各个细胞、器官、组织，同本体一起被人体吸收和利用，发挥各自不同的功能作用。这就是目前世界上人们把多肽