病毒潜伏膜蛋白
抗病毒感染免疫
抗病毒感染免疫 在病毒感染早期，主要以固有免疫为主，这包括病毒入侵部位的屏障作用、吞噬细胞的吞噬作用、体液中的抗微生物物质，如补体、降解素和溶菌酶等，干扰素和NK细胞。其中IFN和NK细胞的作用尤显突出。对防止病毒入侵、杀灭和清除病毒、终止感染，起着主要的免疫作用。适应性免疫出现较晚，包括细胞免疫和体液免疫。病毒是严格细胞内寄生的非细胞型微生物。这就决定了细胞免疫在消除病毒感染过程中起主导作用，但抗体可以中和游离于细胞外的病毒，使病毒丧失对宿主细胞的黏附和感染力。其在抗感染扩散过程中的作用也较为重要。 （一）固有免疫 1.干扰素不能直接灭活病毒，而是通过与宿主细胞表面的干扰素受体结合，诱导合成多种抗病毒蛋白，从而实现对病毒的抑制。抗病毒蛋白主要有2'-5'腺嘌呤核苷合成酶和蛋白激酶等。前者可降解病毒的mRNA,后者可阻断病毒的转录和翻译，抑制病毒蛋白的合成，终止病毒复制。受病毒感染的细胞在病毒复制的同时即产生和释放干扰素，并很快诱导邻近细胞使之产生干扰素。因此，干扰素既能限制病毒在感染细胞内的增殖，又能限制病毒在细胞间的扩散(图22-2)。IFN-a和IFN-β不仅可活化巨噬细胞及NK细胞，而且还可促进病毒感染细胞表达MHC I类抗原，有利于CTL发挥杀伤性作用。IFN-γ除具有抗病毒作用之外，还可诱导抗原呈递细胞表达MHC II类抗原，强化特异性免疫的识别过程，并可增强NK细胞、巨噬细胞和CTL的杀伤功能，促进Th0细胞向Th1细胞转化。
2.NK细胞无需抗原预先致敏，即可直接非特异性地杀伤病毒感染的细胞。病毒感染细胞后，由于MHC I类分子表达减少或缺失而活化NK细胞，通过释放穿孔素及颗粒酶，溶解破坏病毒感染细胞；或通过活化病毒感染细胞内的核酸酶，降解细胞基因组DNA，引起病毒感染细胞凋亡。NK细胞的杀伤作用出现较快，因此在机体免疫监视和早期抗感染免疫过程中具有重要作用，此外，NK细胞激活后，还可释放IFN-γ、TNF 等细胞因子，调节机体免疫功能。NK细胞也可通过多种途径被活化，其中以干扰素的激活尤为重要。 (二)适应性免疫
朊病毒及朊病毒病的研究进展
朊病毒及朊病毒病的研究进展 1982年，美国生理学家Prusiner及其同事，在大量实验的基础上，突破经典病毒学理论而提出朊病毒（prion）的概念，认为绵羊瘙痒病的病原体是一种尚未证实有核酸结构的蛋白质侵染颗粒（proteinaceous infectious particles），并将其称为朊病毒蛋白（Prion protein），简称为PrP。朊病毒是医学生物学领域中至今尚未彻底弄清，与病毒和类病毒都很不相同的一种蛋白质传染病原体。它是一组至今不能查到任何核酸、对各种理化作用具有很强抵抗力、传染性甚强、分子重量在27000～30000道尔顿的蛋白质颗粒，它们是在人和动物中引起可传递的海绵脑病的特殊病因。 朊病毒是一个超出经典病毒学和生物学的全新概念，蛋白质在特定条件下发生突变或构型上的变化由良性变为恶性，即变为具有传染性的侵染颗粒，可引起人和动物脑内神经元空泡变性（即海绵状变性），所以这类病毒引起的疾病被称为传染性海绵状脑病 （ Transmissible Spongiform Encephalopathy，TSE），又称为朊病毒病。 一、朊病毒引起的相关疾病 朊病毒都是致死性中枢神经系统的慢性退化性疾病，病理学上的特点是大脑皮层的神经元细胞退化、空泡变性、死亡、消失，最终被星状细胞取代，因而造成海绵状态。患者具有痴呆、共济失调、震颤等症状。已知人和动物朊病毒有以下几种：人的库鲁氏病，又称新几内亚震颤病（Kuru）；克－雅氏病（Creutzfeldt－Jakob disease，CJD），又称皮质－基底节－脊椎变性综合征，也有人称其为人类海绵状脑病和早老性痴呆症（Presenile Dementia）；致死性睡眠综合症（Fatal Familial Insomnia，FFI）；吉斯综合症，又称脑软化病（Gersrmann -Straussler-Scheikerg disease，Gss）;疯牛病（ Mad Cow Disease，MCD），即牛海绵状脑病（ Bovine Spongiform EncePhalopathy，BSE）；传染性紫貂脑病（TME）；猫海绵状脑病（ Feline Spongiform Encephalopathy， FSE）；羊瘙痒症（Sctapie），有绵羊瘙痒（Scrapie of sheep）和山羊瘙痒症（scrapie of gaats）两种；大耳鹿慢性消耗病（Chronic Wasting Disease of Mule Deer，CWD）；传染性雪貂白质脑病（Transmissible Mink Encepholopathy，TME）。 这些疾病有些在二百年前就已发现，如人们在羊群中发现一种传染病，其主要表现为兴奋、瘙痒、瘫痪等症状，最后死亡，称之为羊瘙痒病（Sctaple in sheep and goat）。1985年英国暴发疯牛病事件，人们注意到疯牛病的症状及脑部病理变化与羊瘙痒症类似，同属于海绵状脑病，多有食用病羊和病牛内脏或骨粉饲料的病史，于是人们才认识到种间传播的可能性，并将它们和人类的某些中枢神经疾病相联系，同时开始怀疑疯牛病会传染给人，至此，对此类疾病的研究达到高潮。 二、朊病毒病原学特征及分子机制 羊瘙痒病是最早发现的传染性脑病，其病原体也是研究最早和最多的病原体。1961年Chandler通过实验成功地把羊瘙痒病传染给小鼠，随后其他实验室的动物模型如白鼠、豚鼠、大鼠等相继获得成功，羊瘙痒病伴随纤维（Scrapie Associated Fibrile，SAF）是在Scrapie感染的小鼠脑组织用去污剂处理提取的膜性部分中观察到的一种特殊纤维结构。它有两个类型：Ⅰ型纤维，直径为11～14nm，由两根直径为4～6nm的原纤维相互盘绕而成，螺距为40～ 80nm不等；Ⅱ型纤维，直径为34nm，有四根相同的原纤维组成，每两根之间间隙为3～4nm。Ⅱ型纤维每100～120nm即出现一个狭窄区，狭窄区的直径约为9～11mn。进一步研究表明，无论是自然发生朊病毒病的动物还是人工感染朊病毒病的实验室动物，在脑组织的提取物中均观察到SAF，而对照组均为阴性。 1982年，Prusiner等人发现羊瘙痒因子感染的仓鼠脑组织中部分纯化的Scrapie病原的片段，经过了修饰或者蛋白酶水解后能够减弱其抗原性，同时发现寻求Scrapie特异性核酸所作的试验不能证实它有独立的传染性，他将分离出的这一特殊的蛋白质——蛋白酶抗性蛋白称之为朊病毒蛋白（PrP）。PrP是一种膜蛋白，存在于大部分组织细胞中，其正常功能尚不十分清楚，可能与细胞表面的信号识别和粘着有关；在淋巴细胞中，PrP可能与激活有关；在神经系统中，PrP可能与突触功能及调节生物钟节律有关。随着实验的进展，Prusiner又把朊病毒（PrP）称作传染性蛋白颗粒（proteineceous infectious particle）。该蛋白能够抵抗蛋白酶K的消化作用，分子质量为27000～30000道尔顿，故又称作PrP27－30，用免疫亲和层析纯化去污剂溶解的病脑提取物时，PrP27－30浓度与朊病毒滴度成正
细胞膜蛋白质
膜结构中含有蛋白质早已证实，但有兴趣的问题是膜中蛋白质究以何种形式存在。70年代以前，多数人主张蛋白质是平铺在脂质双分子层的内外两侧，后来证明，蛋白质分子是以а-螺旋或球形结构分散镶嵌在膜的脂质双分子层中。膜蛋白质主要以两种形式同膜脂质相结合：有些蛋白质以其肽链中带电的氨基酸或基团，与两侧的脂质极性基团相互吸引，使蛋白质分子像是附着在膜的表面。这称为表面蛋白质；有些蛋白质分子的肽链则可以一次或反复多次贯穿整个脂质双分子层，两端露出在膜的两侧，这称为结合蛋白质。在用分子生物学技术确定了一个蛋白质分子或其中亚单位的一级结构、即肽链中不同氨基酸的排列顺序后，发现所有结合蛋白质的肽链中都有一个或数个主要由20-30个疏水性氨基酸组成的片段。这些氨基酸又由于所含基团之间的吸引而形成а-螺旋，即这段肽链沿一条轴线盘旋，形成每一圈约含3.6个氨基酸残基的螺旋，螺旋的长度大致相当于膜的厚度，因而推测这些疏水的а螺旋可能就是肽链贯穿膜的部分，它的疏水性正好同膜内疏水性烃基相吸引。这样，肽链中有几个疏水性а-螺旋，就可能几次贯穿膜结构；相邻的а-螺旋则以位于膜外侧和内侧的不同长度的直肽链连接。膜结构中的蛋白质，具有不同的分子结构和功能。生物膜所具有的各种功能，在很大程度上决定于膜所含的蛋白质；细胞和周围环境之间的物质、能量和信息交换，大都与细胞膜上的蛋白质分子有关。由于脂质分子层是液态的，镶嵌在脂质层中的蛋白质是可移动的，即蛋白质分子可以在膜脂分子间横向漂浮移位；不同细胞膜中的不同蛋白质分子的移动和所在位置，存在着精细的调控机制。例如，骨骼肌细胞膜中与神经肌肉间信息传递有关的通道蛋白质分子，通常都集中在肌细胞膜与神经未梢分布相对应的那些部分；而在肾小管和消化管上皮细胞，与管腔相对的膜和其余部分的膜中所含的蛋白质种类大不相同，说明各种功能蛋白质分子并不都能在所在的细胞膜中自由移动和随机分布，而实际存在着的有区域特性的分布，显然同蛋白质完成其特殊功能有关。膜内侧的细胞骨架可能对某种蛋白质分子局限在膜的某一特殊部分起着重要作用。
第五章病毒同步练习题(三)
第五章病毒同步练习题（三） 一、选择题。 1、病毒囊膜的组成成分是：（B ） A.脂类 B.多糖 C.蛋白质D、磷脂双分子 2、最先发现病毒的是：（A ） A.巴斯德 B.柯赫 C.伊万诺夫斯基 D.吕文虎克 3、病毒含有的核酸通常是：（B ） A.DNA和RNA B.DNA或RNA C.DNA D.RNA 4、病毒的大小以（B ）为单位量度。 A、 m B、nm C、mm D、cm 5、下列生物属于病毒的是（C ）。 A、痢疾杆菌； B、结核杆菌； C、痢疾杆菌噬菌体； D、大肠杆菌。 6、病毒的增殖方式是：(A) A．复制B．二分裂 C．分枝 D．减数分裂 7、以下病毒在细胞核内复制的有（A） A. 腺病毒 B.痘病毒 C. 小RNA病毒 D.嗜肝DNA病毒 8、病毒物理颗粒计数方法测定的是（C） A. 有活力的病毒数量 B. 无活力的病毒数量 C. 有活力的病毒数量与无活力的病毒数量总和 D. 致病性的病毒数量 9、病毒壳体的组成成份是：（B ） A.核酸 B.蛋白质 C.多糖 D.脂类 10、T4噬菌体属于（C） A螺旋对称 B立方体对称 C复合对称 D都不是 11、以增殖为主要繁殖方式的是（D） A细菌 B酵母菌 C霉菌 D病毒 12、下列微生物能通过细菌滤器的是(C) A细菌 B酵母菌 C病毒 D霉菌 13、决定病毒感染专一性的物质基础是(A) A核酸 B蛋白质 C脂类 D糖类 14、以温和性噬菌体为媒介,把供体细胞的DNA片段转移到受体细胞中,从而使后者获得前者部分遗传性状的过程称为（B） A转化 B转导 C接合 D突变
15、溶源性细菌对（C ）具有免疫性。 A所有噬菌体B部分噬菌体 C外来同源噬菌体D其他噬菌体 二、填空。 1、毒粒的基本化学组成是（核酸）和（蛋白质）。 2、病毒蛋白根据其是否存在于毒粒中分为：结构蛋白、非结构蛋白 3、非增值性感染的类型：流产感染、限制性感染、潜伏性感染 4、病毒的寄主有：微生物植物动物 5、病毒颗粒的核体与核心一起构成的复合物为（核壳） 6、温和噬菌体有三种存在状态即游离态，整合态，营养态 7.病毒由于无核糖体和-能量、代谢酶,故不能独立生活。 8、能使病毒变形失活的物理因素有X-射线、r-射线、紫外线、高温。 9、大多数DNA动物病毒的核酸在细胞核复制，蛋白质在-细胞质合成，病毒粒子的组装在细胞质完成。 10、只含有侵染性蛋白质的病毒是阮病毒。 三、名词解释 1.、溶源细胞：含有温和噬菌体的寄主细胞称为溶源细胞，或叫细胞溶源化，溶源细胞在正常情况下，以极低的频率（10-6）发生自发裂解，在用物理或化学方式处理后，会发生大量裂解。 2、类病毒：是含有侵染性RNA分子，没有蛋白质外壳的一类植物病毒。 3、前嗜菌体：整合在溶源细胞染色体上的噬菌体核酸称为原噬菌体或前噬菌体。 4、逆转录病毒：这一类病毒含有逆转录酶，在该酶的作用下，能以病毒自身的（+）RNA 为模扳，合成（-）DNA，再以（-）DNA为模板合成（+）DNA，（+）DNA可以作为模板转录mRNA后合成蛋白质。 四、填图 绘出T4噬菌体的形态图并标明各部位名称。 五、简答 1、简述病毒的复制的5个阶 段 答：吸附、侵入、脱壳、病毒 大分子的合成、装配与释放 2、请简述病毒的特点 答：（1）不具有细胞结构，一 些简单的病毒仅由核酸和蛋
病毒外壳蛋白
病毒外壳蛋白（CP）基因的介绍 来源：中国烟草在线摘自《烟草与生物技术》作者：发表时间：2003-9-19 中国烟草在线摘自《烟草与生物技术》1929年麦克纳研究发现，当一种弱侵染性病毒侵染烟草后在一定程度上能抵挡其它强病毒侵染，也就是说植物经病原物诱导后可产生一定的抗性。植物由此获得的抗性被称之为诱导抗性。后来的研究证明：病毒的外壳蛋白在交叉保护现象中起着关键性作用。而且两种病毒之间的外壳蛋白成分及结构越相似，交叉保护作用就越强。 美国科学家Beachy根据交叉保护的机制，设计出将病毒的外壳蛋白基因引入植物基因组的抗病毒基因工程方案。1986年，他们将这一设想付诸实施，并成功地获得了抗TMV的转基因植株。具体做法是：将TMVU1植株的RNA分离出来，通过反转录酶将RNA反转录成cDNA，克隆其中一段编码病毒外壳蛋白的cDNA，在这一段cDNA的5′末端接上一个很强的植物启动子（CaMV35S），然后通过Ti质粒体转化系统将这一嵌合基因整合到烟草基因组内。用类似的方法将TMV外壳蛋白基因导入番茄，所的结果与上述相仿。大田试验表明，在接种TMV后，转基因番茄只有5%植株得病，因此番茄产量未减；而作为对照的非基因番茄约99%得病，产量损失达26%～35%。经美国农业部同意，这些转基因番茄已进入大田试验。这一结果为植物抗病毒基因工程展示了十分诱人的前景。从此，利用病毒外壳蛋白基因抗病毒的方法被迅速用于其他感病毒植物。 到目前为止，已克隆了包括TMV、TRV（烟草脆裂病毒）、CMV（黄瓜花叶病毒）、SMV（大豆花叶病毒）、ALMV（苜蓿花叶病毒）、RSV（水稻Stripe病毒）、PVX（马铃薯X病毒）及PVY（马铃薯Y病毒）在内的至少10种病毒的外壳蛋白基因，并成功地转入烟草、番茄、马铃薯、大豆及水稻等寄主植物中，所获得的转基因植株都具有阻止或延迟相关病毒病害发生的能力。我国在这一领域也取得了一些可喜的成就。北京大学蛋白质工程和植物基因工程国家重点实验室分离出造成我国烟草生产重大损失的病毒，将其外壳蛋白基因转入香料烟品种，获得了抗病的优质香料烟品种。 转病毒外壳蛋白植物有以下特点：第一，外壳蛋白基因在植物中可稳定遗传；第二，对病毒的抗性具有特异性，即能抵抗与提供外壳蛋白基因的“供体”亲缘较近的病毒，而对亲缘关系较远的病毒不具抗性；第三，抗病毒能力与外壳蛋白基因在转基因植物体内的表达量成正比。 关键词：病毒外壳蛋白基因反转录基因重组基因工程 互补DNA：信使RNA(mRNA)分子的双链DNA拷贝 两条互补的单链DNA分子组成一个双链cDNA分子.因此,双链cDNA分子的序列同转录产生的mRNA分子的基因是相同的.所以一个cDNA分子就代表一个基因.但是cDNA仍不同于基因,因为基因在转录产生mRNA时,一些不编码的序列即内含子被删除了,保留的只是编码序列,即外显子.所以cDNA序列都比基因序列要短得多,因为cDNA中不包括基因的非编码序列---内含子.
抗病毒药在兽药领域的应用
精心整理 抗病毒药在兽药领域的应用 邢勇（包头轻工学院） 由于病毒结构简单，需借助寄主细胞的功能而繁殖。抗病毒药物必须通过细胞膜，进入细胞，始可作用于病毒。不少抗病毒物质对细胞或机体有毒而不能应用，大大限制了抗病毒药物的发展。理想的药物应当不影响细胞的代谢。然而，由于许多代谢步骤为病毒细胞的功能所共有，所以很难研制出一种无毒的抗病毒药物。许多抗病毒药物在体外细胞培养中虽然是病毒复制的强抑制剂，但NA5’1.）但不能2. 合胞病毒、痘病毒等的感染性疾病的防治，但其对机体细胞有一定毒性，不可长期使用。 3. 焦磷酸化合物：鳞甲酸钠（fos-carnet ）是焦磷酸类似物，它主要抑制疱疹病毒、嗜肝DNA 病毒及逆转录病毒，兽医临床上常用于防治鸡马立克氏病、猪伪狂犬病、牛乳房炎、牛传染性鼻气管炎、鸡传染性喉气管炎病等。 4. 缩氨硫脲：靛红-?-缩氨硫脲（IBT ）是痘病毒的一种强抑制剂，也对某些腺病毒有效，只要干扰晚期的病毒mRNA 转译，另外对犬传染性肝炎、鸡包涵体肝炎、火鸡出血性肠炎等疾病亦有作用。
5.2—脱氧—D—葡萄糖（2—dG）及葡萄胺：2—dG抑制许多在细胞膜上成熟的病毒的增殖。有人认为它能干扰病毒特异性糖蛋白的合成，这种物质正是粘病毒、副粘病毒并且还可能是疱疹病毒囊膜的重要组成部分。在兽医临床上，只要用于防治兔的疱疹性角膜炎以及由牛传染性鼻气管炎病毒引起的犊牛角膜结膜炎。 6.其他抗毒药的化学药物：利福霉素、托利普霉素、曲张链丝菌素对某些痘病毒及肿瘤病毒显示有抗病毒活性，但对机体细胞有毒。嘌呤霉素、放线菌酮、对已氟苯丙氨酸等能抑制病毒及细胞蛋白质的合成，也能够易致细胞培养中的病毒复制，但因毒性较大而失去实用价值。左旋咪唑作为宿 IFN IFN IgY 、 气管炎病毒、鸡新城疫病毒、鸡传染性法氏囊病毒等有一定抑制作用，在临床上应用较为广泛。目前对重要抗病毒的研究，以作用机制、有效成分提取、单方或复方制剂等的研究作为重点。重要更显示其无可比拟的优越性而成为学术界的热门课题，产业界对此也十分关注。 虽然国内外对抗病毒要的研究、筛选比较热门，但因毒性、残留、价格、疗效等因素可供生产运用的科技成果并不丰硕，这仍将是学术界和产业界重要的而且是必要的攻关课题。此外，因病毒感染性疾病的传染性、致死性以及动物经济价值的问题，我们不能一味靠药物预防和治疗，而主要应从饲料管理、品种选育等方面认真研究对策，最大限度的避免畜禽遭受病毒侵袭，确保养殖成功。抗
朊病毒
生命科学学院11级生物工程 C01114013 宋强微生物学 朊病毒综述 一、朊病毒的发现 早在300年前，人们已经注意到在绵羊和山羊身上患的“羊搔痒症”。其症状表现为：丧失协调性、站立不稳、烦躁不安、奇痒难熬，直至瘫痪死亡。20世纪60年代，英国生物学家阿尔卑斯用放射处理破坏DNA和RNA后，其组织仍具感染性，因而认为“羊搔痒症”的致病因子并非核酸，而可能是蛋白质。由于这种推断不符合当时的一般认识，也缺乏有力的实验支持，因而没有得到认同，甚至被视为异端邪说。1947年发现水貂脑软化病，其症状与“羊搔症症”相似。以后又陆续发现了马鹿和鹿的慢性消瘦病（萎缩病）、猫的海绵状脑病。最为震惊的当首推1996年春天“疯牛病”在英国以至于全世界引起的一场空前的恐慌，甚至引发了政治与经济的动荡，一时间人们“谈牛色变”。1997年，诺贝尔生理医学奖授予了美国生物化学家斯坦利·普鲁辛纳（Stanley B.P Prusiner），因为他发现了一种新型的生物——朊病毒（Piron）。“朊病毒”最早是由美国加州大学Prusiner等提出的，在此之前，它曾经有许多不同的名称，如非寻常病毒、慢病毒、传染性大脑样变等，多年来的大量实验研究表明，它是一组至今不能查到任何核酸，对各种理化作用具有很强抵抗力，传染性极强，分子量在2.7万～3万的蛋白质颗粒，它是能在人和动物中引起可传染性脑病（TSE）的一个特殊的病因。 二、朊病毒的概念 1982年stanly B1prusiner等提出蛋白质感染颗粒（pro teinaceous infectious particles，prion）假说，提出了朊病毒（prion）的概念，他给朊病毒所下的定义是：朊病毒是不被大多数修饰核酸的方法灭活的蛋白质传染性颗粒（proteinaceous infectious particle；缩写为prion，今的朊病毒假说是唯蛋白质说，认为朊病毒是一种蛋白质，不含核酸，分子量33kD~35kD，抗蛋白酶的PrPSc是其唯一（或主要）成分；它是宿主PrP基因编码的蛋白PrPC经翻译后修饰构象改变形成，在朊病毒病病理发生中起主导作用，其复制和分离物（或毒株）的不同特性都由其自身和宿主PrPC相互作用决定，而不依赖于任何核酸。
为什么转入病毒外壳蛋白基因或病毒复制酶基因就具备抗病毒的能力
为什么植物转入病毒外壳蛋白基因或病毒复制酶基因就具备抗病毒的能力（1）病毒外壳蛋白（coat protein, CP）基因：在植物中表达病毒外壳蛋白基因可以阻止病毒的侵染或症状的产生。 病毒外壳蛋白的抗性机理：一种假说认为，当入侵病毒的裸露核酸进入植物细胞后，它们立即被细胞中的自由CP所重新包裹，从而阻止了入侵病毒核酸的翻译和复制。在离体条件下，附加自由CP能够抑制末装配病毒的翻译的实验结果支持了上述假说；另一假说认为，抗性机制是在CP水平上抑制病毒脱壳，此说法最有力的证据是转基因植株可抗完整病毒的侵染．但不能抵御裸露病毒RNA的入侵；还有一种观点认为病毒外壳蛋白的抗性机制不是外壳蛋白在起作用，而可能是它的RNA转录物与入侵病毒RNA之间的相互作用 （2）病毒复制酶基因：RNA病毒（如烟草花叶病毒）的复制酶是依赖于RNA的RNA聚合酶。病毒复制酶一般是在病毒核酸进入寄主细胞并结合到寄主核糖体之后形成的。在植物中表达不完整的病毒复制酶基因可以显著提高植物对病毒的抗性，作用机制还不十分清楚，可能与基因转录后沉默有关。 植物抗病毒基因工程 植物病毒病难以防治已成为植物界的“癌症”，给全球农业生产造成巨大的损失。有效地防治植物病毒病，减少经济损失，满足日益增长的世界人口需求。是农业生产当务之急。病毒分子生物学，植物基因工程的迅速发展，为筛选培育抗病、优质、丰产的新植物开辟了广阔的前景。自1986年，全球范围内兴起了多种利用分子生物学及基因工程研究成果防治植物病毒病害的策略，并成功地培育筛选出多种抗病毒的工程植物。 1．病毒外壳蛋白介导的基因工程抗病性 外壳蛋白是形成病毒颗粒的结构蛋白，它的功能是将病毒基因组核酸包被起来，保护核酸；与宿主互相识别，决定宿主范围；参与病毒的长距离运输等。1986年，美国的Beachy 实验室的Powell－Abel等第一次将烟草花叶病毒外壳蛋白（TMV－Cp）基因插入修饰过的农杆菌质粒中，并置于花椰菜花叶病毒（CaMV）35S启动子下，经农杆菌侵染而将TMV －Cp基因转入烟草，并在烟草中表达TMV－Cp，分子生物学检测表明TMV－Cp基因已整合到烟草的基因组中，并能稳定地遗传给子代，在转基因烟草中TMV－Cp表达量占叶蛋白0．1％左右。攻毒试验表明：转基因烟草能够抑制TMV的复制，在一定程度上降低或阻止TMV的系统侵染；并延迟发病12～30天。这一突破性的研究成果标志着植物抗病毒基因工程的诞生。自此科学家继续用黄瓜花叶病毒（CMV），马铃薯病毒X和Y，大豆花叶病毒（SMV），苜蓿花叶病毒（AiMV）等病毒的外壳蛋白基因导入植物体后，均得到类似的实验结果，使转基因植物获得对该病毒的抗性。至今世界各地科学家已在15个病毒组中的30多种病毒中，证实了由病毒外壳蛋白介导的抗病性，许多抗性工程植物相继进入大田试验。目前认为外壳蛋白介导的抗病性是比较成熟的植物抗病毒基因工程策略，有人认为其机制是外壳蛋白在转基因植物中的积累干扰了病毒脱衣壳，从而抑制了病毒在植物体中的复制，转运与积累，但许多实验结果预示其机制的复杂性。 2．复制酶介导的抗病性 复制酶即特异性依赖于病毒RNA的RNA多聚酶。是病毒基因组编码的自身复制不可缺少的部分，特异地合成病毒的正负链RNA。1990年Golemboski等报道他们将TMVU1株编码的复制酶的一部分基因序列，即54kD蛋白基因转入烟草中得到的工程植株用很高浓度的TMVU1（500μg/mL）及TMV RNA（300μg/mL）接种时，均表现出很高的抗性，比一般转外壳蛋白基因的植物介导的植物抗病性高得多。后来豌豆早枯病毒54kD的蛋白基因和CMVFny RNA2编码的切去活性中心部位GDD（Gly－Asp－Asp）的复制酶部分基因片段转入烟草，均获得了高抗的工程植物。此外在马铃薯病毒X和Y中也报道了同样成功的研
具有广泛抗病毒活性的SAMHD1蛋白的研究进展
具有广泛抗病毒活性的SAMHD1蛋白的研究进展 摘要：SAMHD1蛋白是2011年首次被认定为一种独特的天然抗病毒因子，它主要在树突状细胞、巨噬细胞等髓系细胞中表达。它通过降解细胞内dNTPs 的水平，使细胞内的dNTPs的水平低于病毒复制所需的水平，从而抑制髓系细胞中反转录病毒和DNA病毒的复制。HIV-2产生的病毒蛋白X（Vpx）可将泛素连接酶与SAMHD1相结合，使SAMHD1分子最后被蛋白酶体降解。最近还发现SAMHD1蛋白活性受多种因子影响，具有调节肿瘤细胞中LINE-1活性的功能。结合最新研究成果对SAMHD1的结构、功能、抗病毒机制以及影响因子进行综述。 关键词：SAMHD1蛋白；HIV限制因子；影响因子；抗病毒机制 人类免疫缺陷病毒（human immunodeficiencyvirus，HIV）是人类获得性免疫缺陷综合症（ac-quired immunodeficiency syndrome，AIDS）的病原体。该病毒属于逆转录病毒科（Retroviridae）侵病毒属、灵长类免疫缺陷病毒亚属。1983年，法国巴斯德研究所的Montaginer和美国国家卫生研究院癌症研究所Gallo等首次证实HIV是艾滋病的病原体以来，该病毒已成为世界上最严重危害人类健康的病原体之一。1985年，在中国境内发现了首例艾滋病患者，其后HIV感染人数及（AIDS）患者逐年增加，并发展为全国流行。尽管最近艾滋病的流行已得到有效遏制，但“防艾”仍是我国亟待解决的医疗卫生与社会问题。在逾30年的研究历程中，全球研究者在HIV的发病机制、高效抗逆转录病毒疗法、病毒标志物的检测、机体免疫反应机制等方面都取得了显著成就，但仍没有开发出可彻底治愈艾滋病的药物和预防性疫苗。2011年，研究者在髓系细胞中发现了一种新型天然抗病毒因子-SAMHD1蛋白，具有独特的抗HIV病毒机制，并且对多种不同类别的病毒有确定限制作用。本文将对SAMHD1蛋白的最新研究进展作以下综述。 1SAMHD1蛋白的发现历程 人源SAMHD1蛋白由我国著名免疫学家曹雪涛院上在2000年首次在人树突细胞中发现，并于2009年确定该蛋白与人体自身免疫疾病AGS （aicardi-goutie’res syndrome）综合症相关。SAMHD1蛋白是人体自身免疫系统中的一部分，它的主要功能是监测细胞库核苷酸量的水平和清除髓系细胞内过多的核苷酸，从而减少机体的对核苷酸代谢障碍所产生的免疫反应。AGS疾病为Mgl1基因突变所致，是一种非常罕见遗传性自身免疫性疾病，机体产生大量的干扰素，激活机体非正常免疫反应，出现系统性的红斑狼疮自身免疫疾病，严重者还会出现脑萎缩并产生脑病相关的后遗症。该疾病主要原因是髓系细胞内缺乏内源性SAMHD1蛋白和细胞内核苷酸代谢失调，机体的非正常免疫反应被激活所造成。 2SAMHD1蛋白的结构和功能区域
病毒一般是指由核酸和蛋白质外壳组成的具有侵染活性的细胞内寄生生...
病毒的结构与研究技术 柳正(0313302152) 中山大学生命科学学院 摘要:文章简要介绍了病毒常见的三维结构,并且介绍了研究病毒三维结构的方法,X射线单晶衍射分析技术,电子显微学技术,核磁共振技术. 关键词:正二十面体;螺旋对称;X射线衍射;核磁共振;冷冻电镜三维重构. 病毒一般是指由核酸和蛋白质外壳组成的具有侵染活性的细胞内寄生生物.迄今为止是人们在超微世界里所认识的最小生物之一[1].自从人们发现病毒以后,对病毒形态与结构研究一直是病毒学家孜孜探索的课题,病毒的形态结构是自然选择的结果,是功能的体现者.其生理状态结构的真实阐明是对其生存机制和侵染功能了解的有效途径,自1935年美国科学家Stanly获得烟草花叶病毒(TMV)的结晶,1939年德国科学家Kausch 利用电子显微镜看到TMV 长形粒子以来, 原有研究病毒的结构技术不断更新,新技术不断涌现.[2] 1病毒的形态结构 病毒的形态是多种多样的,在电子显微镜下不同的病毒有不同的形态,同一种病毒也不尽相同.最初应用电镜技术观察病毒形态只有球形,杆状,蝌蚪形.随着研究技术发展,对病毒的形态结构越来越精细,球状,弹状,砖形,冠状,杯状,轮状,肾形,等多种多样的形状,从这些千差万别的形态中,病毒取型只有两种基本的形状,一是多面体型,另外一种是螺旋型.根据病毒本身形态结构特点,和衣壳对称型划分为四种,.二十面体对称病毒,螺旋对称病毒,复合对称病毒,复杂对称病毒.[3] 其它相关形态空瘪型病毒颗粒,在对称壳膜病毒感染的细胞中,往往见到中空的或者空瘪形的病毒颗粒,是由于其中核酸没有或者含量较少,有学者认为存在这种可能是病毒样品处理过程中,病毒遭到破坏,核酸丢失造成,另一种可能壳膜装配时核酸还没有装入进去的暂时形态.病毒的衣膜在其壳膜外表面有一层含有磷脂的衣膜,其来源包括有宿主细胞的质膜或者宿主细胞的核膜如疱疹病毒在核内装配核壳,当它经过核膜时带上一层外膜,当从细胞质卷出胞外时又带有另外一层细胞膜.把这类带有来自宿主细胞的膜性结构称为披膜病毒.[4] 1.1正二十面体病毒结构 在立体对称中,除了一些噬菌体具有八面体对称外,Crick和Watson断定有些球形病毒时二十面体对称的.现已已经证实许多动物病毒都具有二十面体对称. 一般说来,正二十面体衣壳分两级形态结构:一是由蛋白质原体的短带形成电镜可见的壳粒结构,二是由壳粒进一步排列形成的衣壳.原体和壳粒都是通过非共价键结合在一起,原体间键比壳粒间键要短.这造成在电镜下能够看到区分壳粒,而不能区分原体.衣壳呈二十面体对称,主要由它的蛋白质一级结构决定,是原体和壳粒遵循几何晶体集结形成的.空心衣壳在提纯时往往可以解离成完整的壳粒,在用化学试剂裂解病毒时,可以得到原体和一些寡聚体. 二十面体是由20个等边三角形的面,20个顶点和30条棱所组成.若以相对应的顶点为轴旋转72度其型不变,旋转5次复位,称为5-重对称轴;若以相对应的三角形面的中心连线为轴,旋转120度其型不变,旋转3次复位,称为3-重对称;若以相对应的棱的中点连线为轴,旋转180度其型不变,旋转2次复位,称为2-重对称轴.对于病毒是二十面体的证实,一是利用X射线技术获得脊髓灰质炎病毒结晶样品的清晰的衍射图象,二是电镜技术,用双屏蔽方法测定的大纹红色
朊病毒简介
朊病毒简介 朊病毒（Prion），又称“普里昂”或蛋白质侵染子，是一种可以引起同种或异种蛋白质构象改变而致病或功能改变的蛋白质。最常见的是引起传染性海绵样脑病(疯牛病)的蛋白质。“朊病毒”最早是由布鲁希纳等提出的，在此之前，它曾经有许多不同的名称，非寻常病毒、慢病毒，传染性大脑样变等。 早在300年前，人们已经注意到在绵羊和山羊身上患的“羊瘙痒症”。20世纪60年代，生物学家阿尔卑斯破坏其DNA和RNA后，其仍具感染性。1947年水貂脑软化病，其症状与“羊瘙痒病”相似。最为震惊的是1996年“疯牛病”，在英国引起的一场空前的恐慌，一时间人们“谈牛色变”。 多年来人们一直认为它是一种不能查到任何核酸，对各种理化作用有很强抵抗力，传染性极强，分子量在2.7万~3万的蛋白质颗粒，但近来又有研究报道，朊病毒含有微量核酸。它是能在人和动物中引起可传染性脑病（TSE）的一个特殊原因。 朊病毒与真病毒存在一些主要区别：阮病毒呈淀粉样颗粒状，无免疫原性，无核酸成分，由宿主细胞内的基因编码，抗逆性强、能耐杀菌剂和高温。 朊病毒的致病机理是1982年普鲁宰纳提出的朊病毒致病的“蛋白质构象致病假说”，以后魏斯曼等人对其逐步完善。其要点如下：1.朊病毒蛋白有两种构象：细胞型（正常型PrPc）和瘙痒型（致病型PrPsc）。两者的主要区别在于其空间构象上的差异。PrPc仅存在a螺旋，而PrPsc有多个β折叠存在，后者溶解度低，且抗蛋白酶解；2.PrPsc可胁迫PrPc转化为PrPsc，实现自我复制，并产生病理效应；3.基因突变可导致细胞型PrPc中的α螺旋结构不稳定，至一定量时产生自发性转化，β片层增加，最终变为PrPsc型，并通过多米诺效应倍增致病。 朊病毒致病如此强，其传播途径也是多样的，主要通过以下几种途径传播：1.食用动物肉骨粉饲料、牛骨粉汤；2.医源性感染：如使用脑垂体生长激素、促性腺激素和硬脑膜移植、角膜移植、输血等；3、朊病毒存在变异和跨种族感染，主要为牛、羊等反刍动物；4、朊病毒可感染多个器官，已知的主要为脑髓。故预防难度大，人畜一旦发病，6个月至1年全部死亡，100%的死亡率。其预防措施主要是：一是堵漏洞，严把海关进出口国门，严禁从疯牛病疫区进口动物源性饲料、生物制品和与牛相关制品；二是查内源，加强对本土羊瘙痒病的筛查，监测疯牛病，预防医源感染；三是强基础，加强对朊病毒发病机理、传染途径、灭活消毒手段的研究。 虽然朊病毒如此凶狠残暴，但其发现也给我们带来了许多有用的方面。如： 1.“中心法则”认为DNA复制是“自我复制”，即DNA~DNA，而朊病毒是PrP→PrP，是为“其他复制”。这对遗传学理论有一定的补充作用。 2.丰富生物学有关领域内容；对病理学、分子生物学、分子病毒学、分子遗
潜伏期膜蛋白1 与疾病关系的研究进度
潜伏期膜蛋白1 与疾病关系的研究进度本文从网络收集而来，上传到平台为了帮到更多的人，如果您需要使用本文档，请点击下载按钮下载本文档（有偿下载），另外祝您生活愉快，工作顺利，万事如意！ EB 病毒(Epstein-Barr virus，EBV)为人类Ⅳ型疱疹病毒，是一种线状双链DNA病毒，EBV原发感染发生在儿童时期，感染后终生携带病毒，具有致瘤性。这种原处于静止状态的病毒一旦转化为活化状态即可成为包括肿瘤在内的很多疾病的相关病因，而EB病毒编码的潜伏期膜蛋白1(Latent membraneprotein 1，LMP1)的完整结构包括162 个氨基酸的6 个疏水跨膜区域，23个氨基酸的N端伸向胞外，200个氨基酸的C端伸向胞内。LMP1的生物学功能存在于许多方面，包括诱发人角质细胞致瘤;抑制上皮细胞分化;转化BALBPC3T3、RAT1细胞;参与B淋巴细胞的永生化等。且LMP1 作为结构活性受体，可通过C 端激活一些信号途径，包括NF-κB、STATs、AP-1、PBK/Akt、JNK1和P38MAPK参与细胞增殖、凋亡和侵袭转移。目前，LMP1是唯一被证实的具有瘤基因功能的EB 病毒编码产物，是EB病毒的主要癌基因蛋白的表达，负责诱导细胞转化和永生化等。 1 LMP1与细胞调控
细胞调控是在细胞分裂周期内通过真核细胞内的调控机构进行自我调控的过程。LMP1含有2个功能效应区(TES)，TES2 参与TRADD 途径活化NF-κB，能有效地促进细胞生长。LMP1通过上调数种细胞抗凋亡基因来间接的抑制细胞凋亡，促进细胞增殖，诱导细胞中mRNA 和蛋白的表达，p53 和Bcl-2是细胞和DNA受损伤时肿瘤细胞逃避正常凋亡程序的2个关键基因。LMP1通过其CTAR1募集TRAFs分子精细调控EGFR表达和上调EGFR磷酸化水平，且LMP1通过CTAR1介导的NF-κB信号通路反式激活EGFR 启动子活性。 LMP1介导的NPC信号通路LMP1能通过多条 信号通路参与鼻咽癌(NPC)的发生发展。曾亮等研究证明，LMP1可促进p-ERK、Ets-1蛋白质表达及其苏氨酸残基磷酸化。首次在鼻咽癌细胞中发现ERK 可部分介导LMP1激活Ets1表达和磷酸化，用MEK/ERK特异性小分子阻断剂PD98059作用，可明显阻断LMP1诱导后p-ERK的表达，但仅可部分阻断LMP1诱导Ets1的表达和苏氨酸磷酸化水平，提示苏氨酸磷酸化的ERK介导了LMP1促进Ets1的表达和活化的过程，而Ets1仅被部分阻断的现象提示Ets1表达可能受到多条信号通路的影响，而ERK也可能活
抗病毒药在兽药领域的应用
抗病毒药在兽药领域的应用 邢勇(包头轻工学院 ) 由于病毒结构简单，需借助寄主细胞的功能而繁殖。抗病毒药物必须通过细胞膜，进入细胞，始可作用于病毒。不少抗病毒物质对细胞或机体有毒而不能应用，大大限制了抗病毒药物 的发展。理想的药物应当不影响细胞的代谢。然而，由于许多代谢步骤为病毒细胞的功能所共有，所以很难研制出一种无毒的抗病毒药物。许多抗病毒药物在体外细胞培养中虽然是病毒复 制的强抑制剂，但在动物体内却有毒性。 一、抗病毒药物的作用机制 不同的抗病毒药物其作用机制不尽一致。一般情况下，通过以下九种方式：抑制病毒吸附；抑制病毒穿入；抑制病毒脱壳；抑制病毒核酸复制；抑制病毒核酸转录；抑制病毒蛋白合成；促进机体抵抗力、诱生干扰素；抑制病毒装配；阻断细胞受体。其中，抗病毒药物抑制病 毒核酸复制时，通过下列形式体现：抑制病毒DNA合成；掺入病毒核酸：抑制 病毒DNA或RNA多聚酶活性；抑制病毒逆转录酶活性；抑制病毒胸苷激酶活性；抑制病毒肌苷磷酸脱氢酶；改变病毒m NA5端帽子结构。 二、抗病毒的化学药物 1.金刚胺及其衍生物：金刚胺类药物主要包括金刚烷胺( amentadine )和甲基金刚胺(rimengtadine )两种。它们作用于细胞和病毒膜蛋白的融合，防止病毒入侵寄主细胞，或阻 断其脱壳过程，但不能抑制病毒吸附过穿入细胞。金刚烷胺对细胞内膜有缓冲作用，使其PH不降低，兽医临床上常用于禽流感、牛副流感3型、牛病毒性腹泻及猪流感的防治。但据报道用 金刚烷胺防治产蛋鸡流感时，易致鸡产蛋率下降。在人医上常用其防治人的流行性感冒
2.病毒唑：病毒唑为核苷类似物，又称利巴韦林，类似鸟苷，为细胞激酶磷酸化。该药物对流感病毒效果较强。在兽医临床上，病毒唑常用于腺病毒、疱疹病毒、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、痘病毒等的感染性疾病的防治，但其对机体细胞有一定毒性，不可长期使用。 3.焦磷酸化合物：鳞甲酸钠( fos-carnet )是焦磷酸类似物，它主要抑制疱疹病毒、嗜 肝DNA病毒及逆转录病毒，兽医临床上常用于防治鸡马立克氏病、猪伪狂犬病、牛乳房炎、 牛传染性鼻气管炎、鸡传染性喉气管炎病等。 4.缩氨硫脲：靛红-?-缩氨硫脲(IBT)是痘病毒的一种强抑制剂，也对某些腺病毒有效，只要干扰晚期的病毒mRN转译，另外对犬传染性肝炎、鸡包涵体肝炎、火鸡出血性肠炎等疾病亦有作用。 5.2—脱氧一D —葡萄糖(2 —dG及葡萄胺：2 —dG抑制许多在细胞膜上成熟的病毒的增殖。有人认为它能干扰病毒特异性糖蛋白的合成，这种物质正是粘病毒、副粘病毒并且还 可能是疱疹病毒囊膜的重要组成部分。在兽医临床上，只要用于防治兔的疱疹性角膜炎以及由牛传染性鼻气管炎病毒引起的犊牛角膜结膜炎。 6.其他抗毒药的化学药物：利福霉素、托利普霉素、曲张链丝菌素对某些痘病毒及肿瘤病毒显示有抗病毒活性，但对机体细胞有毒。嘌呤霉素、放线菌酮、对已氟苯丙氨酸等能抑制病毒及细胞蛋白质的合成，也能够易致细胞培养中的病毒复制，但因毒性较大而失去实用价值。左旋咪唑作为宿主抵抗力的调节剂特别是为细胞介导免疫的刺激剂而在抗病毒的作用上大有希望。 三、干扰素( interferon,IFN ) IFN 是一组由病毒或其它诱生剂使生物体细胞产生的分泌性糖蛋白，具有抗病毒、免 疫调节及抗增殖作用，因而抑制病毒的生长，它的作用反映于机体非特异性和特异性防御机制。干扰素有天然干扰素及基因工程干扰素两种。干扰素不能直接灭活病毒，它主要作用于细胞受
小儿潜伏结核感染的临床诊治
小儿潜伏结核感染的临床诊治 发表时间：2012-03-21T14:19:41.247Z 来源：《中外健康文摘》2012年第3期供稿作者：姜常涛[导读] 成人结核感染后，1年内约3％～5％发展成结核病，而儿童由于免疫系统尚不成熟，1年内发展成结核病约为15％～43％。 姜常涛（内蒙古莫力达瓦旗人民医院感控科 162850） 【关键词】小儿潜伏结核感染诊治 成人结核感染后，1年内约3％～5％发展成结核病，而儿童由于免疫系统尚不成熟，1年内发展成结核病约为15％～43％。因此，儿童潜伏结核感染的诊治是儿科医生不可忽视的问题。结核菌不同于其他传染病原体，一旦人体被感染，免疫状态健康者也不能将其完全清除，细菌长期在人体内共存，从而构成慢性持续性潜伏结核感染状态。儿童结核感染后演变成结核病的过程与成人存在差异，儿童结核感染后可于短期内进展恶化，迅速演变成原发空洞、急性粟粒型结核伴结核性脑膜炎，可短期内死亡。目前认为，结核病最好的预防措施是对潜伏结核感染进行及时诊断和治疗。潜伏结核患者的数量巨大，远远多于活动性肺结核病人，早期治疗是防止其演变成活动性肺结核的最有效的措施。 1 诊断 迄今为止，公认的确定潜伏结核感染的方法只有结核菌素皮肤试验(简称结素试验)。但是，结素试验的敏感性和特异性受诸多因素影响，应用结素试验诊断潜伏结核感染尚存在一些缺点，故近年来又有几种新的诊断方法开始应用于诊断潜伏结核感染。 1.1 结核菌素试验 (1)结核菌素试验的受试对象国外近年提出“针对性结核菌素试验来诊断潜伏结核感染的方案，旨在检出潜伏结核感染的高危人群使之得到及时治疗。其针对的对象包括：①可能新近感染结核菌的人群(如与传染性肺结核密切接触者、结核菌素试验由阴转阳性者、过去5年内出生于结核病高发地区者以及未接种卡介苗的儿童)；②患有促使结核病恶化的相关疾病者，如：接受糖皮质激素和其他免疫抑制剂的治疗、患恶性肿瘤、终末期肾病、糖尿病、营养不良、HIV感染、胸片见纤维化病灶等；③属于结核病高发地区的人群。 (2)结核菌素试验诊断潜伏结核感染的局限性结核菌素试验敏感性和特异性受诸多因素影响，例如：与BCG接种后和非结核菌抗酸杆菌感染存在着交叉阳性反应。BCG接种后结核菌素试验呈阳性反应，目前尚无可靠标准区别出自然结核菌感染与卡介苗接种后的结素反应，主要根据阳性反应的强度和持久情况，结核感染多为较强反应：表现为硬结显著，面积较大，边缘锐利，超过1周不消失，留有色素沉着。BCG接种后多弱阳性反应：表现为硬结不显著，面积小，边缘不清，多于2～3天后，一般不超过1周消失。有作者认为BCG接种者一般阳性反应≤10mm，而≥20mm则非BCG接种引起。根据BCG的免疫机制和文献的观点以及我们的经验，认为硬结平均直径超过15mm或硬结明显、边缘清楚、持续1周以上、留有色素沉着者，为自然结核菌感染的结素反应，故有人认为l周后获得的硬结读数才是准确可靠的。另外BCG接种后PPD阳性随年岁而减弱，有研究观察出生时接种BCG至15岁时仅有8％仍维持PPD阳性。另外结核病人约10%～20％结素试验为阴性反应。因此应用结素试验诊断潜伏结核感染存在以下缺点：①并非所有结核病人结素试验均为阳性；②HIV感染者，重症病人如急性粟粒性结核、结核性脑膜炎、大量胸、腹水病人均可为阴性反应；③结核感染后出现结素阳性时间一般为3～8周，但最近观察家庭结核病接触之儿童出现结素阳性之潜伏期可长达3个月，在此潜伏期的结核感染患儿，随时可发展成致命的结核病；④与BCG接种后和非结核菌抗酸杆菌感染存在着交叉阳性反应。因有以上缺点，单靠结素试验诊断结核感染实非理想，因此需更敏感和特异的诊断方法。 1.2 酶联免疫斑点试验新近研究发现，结核杆菌菌体中含有2种不同抗原成分，即早期分泌抗原靶蛋白6(ESAT-6)和培养滤过蛋白(CFP10)，而BCG不含有以上成分。潜伏结核感染儿童可以产生较强的细胞免疫反应，感染者机体的T细胞对此2种抗原引起反应。结核感染后引起的血内特异性敏感T细胞，遇到此2种结核杆菌抗原后，其所释放的IFN-α使T细胞出现黑点，通过观察T细胞带黑点的数量，作为结核感染的特异性诊断。此试验从结核杆菌提取的早期分泌抗原靶蛋白ESAT抗原成分不存在于BCG中，故用它在体外刺激全血，测定T细胞释放干扰素丁的水平，能够区别自然结核菌感染与卡介苗接种后反应。其特异性高，敏感性为96％，而结核菌素试验敏感性为69％。一个多中心大样本(7个国家，3000例)试验显示，此法诊断结核感染较PPD更为快速和准确，且可与BCG接种引起的结素阳性相鉴别。 2 治疗 尽管对活动性结核患者进行治疗是控制结核病的首要措施，但在大多数人，结核分枝杆菌感染最初时为宿主防御机制所控制，感染一直保持潜伏状态。潜伏结核感染儿童虽无传染性，但在任何时候都有可能发展为活动性结核病，尤其是结核性脑膜炎。一项研究纳入了159名15岁以下儿童，观察结核菌素皮试阳性、未经治疗发展为活动性肺结核的危险性，结果提示43％的1～12月婴儿、24％的l～5岁儿童、16％的青少年发展为活动性肺结核。对潜伏结核感染进行治疗可大大降低发生活动性结核病的可能性，是结核病防治的第二项有效措施。从美国公共卫生分析和统计，7万名结核感染者应用INH 300mg／d治疗1年(随机对照)，可以降低活动性肺结核发生率60％。为了防止潜伏结核感染的儿童发展成活动性结核病，应给予抗结核治疗。一般认为，下列情况应按潜伏结核感染治疗：①接种过卡介苗，但结核菌素试验最近2年内硬结直径增大≥10mm者；②结核菌素试验反应新近由阴性转为阳性者；③结核菌素试验呈强阳性反应的婴幼儿和少年；④结核菌素试验阳性并有早期结核中毒症状者；⑤结核菌素试验阳性而同时因其他疾病需用糖皮质激素或其他免疫抑制剂者；⑥结核菌素试验阳性，新患麻疹或百日咳小儿；⑦结核菌素试验阳性的艾滋病毒感染者及艾滋病患儿。 儿童潜伏结核感染的治疗方案 2.1 单用INH 由于潜伏结核感染菌量小，允许单用1种INH抗感染。成人6～9个月，儿童9个月。目前公认此为首选方案。治疗后可使发生活动性结核病的危险性下降70％～90％。剂量为10～20mg／(kg·d)，最大剂量为300mg／d，每日晨起顿服。2000年美国胸科协会有关成人和儿童结核诊断和分类指南中建议：对于HIV阴性的潜伏结核感染儿童，最佳疗程为9个月，每日顿服或在直接督导下每周2次服用。 2.2 单用RFP 单用RFP 4个月是次选方案。对于不能耐受INH或推测对INH耐药，而对RFP敏感的结核感染的儿童或服INH有肝或神经反应时可采用这种方案。剂量为10～20mg／(kg·d)，最大剂量为450mg／d，每日晨起顿服。利福平的不良反应为药物性肝炎、过敏反应、流感样症候群、溶血性贫血、急性肾衰竭。RFP引起的肝脏损害较INH严重，应用时注意观察。