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胡萝卜的组织培养过程

摘要:

植物组织培养作为一个生物技术中最核心、最基础的技术。20世纪50年代末期胡萝卜第一次成功的通过组织培养得到完整的胡萝卜试管植株。半个世纪后依然很有研究价值。本文对胡萝卜的组织培养的简史、基本概念、基本操作、应用和前景进行了简单的介绍。

Abstract:

Plant tissue culture as a biological technology at the core, in the most basic of the technology. The 1950s carrots first successful through the tissue culture get complete carrot tube plant. After half a century, it is still very value. In this paper, the carrot tissue culture of a brief history, the basic concept, the basic operation, application and prospects are briefly introduced.

关键词:愈伤组织、细胞全能性、脱分化、再分化、快繁、培养基、分生组织、消毒

一、植物组织培养的历史和基本概念

(一)、植物组织培养的简史

植物组织培养是20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。它是在人工配制的培养基上,在无菌状态下培养植物器官、组织、细胞、原生质体等材料的方法。20世纪50年代末Seward等人从胡萝卜根的韧皮部取下一块组织,并将它置于培养基中进行培养,使它分化处愈伤组织,然后把从愈伤组织所得到的胚状体转移到固定基上继续培养,获得了完整的胡萝卜试管植株。

(二)植物组织培养的基本概念介绍

1、植物组织培养

是通过无菌操作分离植物体得一部分,接种到培养基上,在人工控制的条件下进行培养,使其产生完整植株的过程。

2、愈伤组织

原指植物在受伤之后伤口表面形成的一团薄壁细胞,在组培中则指人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。

3、脱分化

在组织培养中,不分裂的静止细胞,放在一定的培养基上后,细胞重新进入分裂状态。一个成熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化。

4、再分化

一个成熟的植物细胞经历了脱分化后,能再分化而形成完整植株的过程。

5、细胞全能性

只要有一个完整的有生命力的细胞,即使这个细胞已经是高度成熟和分化的细胞,也还保持着恢复到分生状态的能力。

(三)、培养基的成分

化学合成培养基大致由6种成分组成:无机营养、氨基酸、有机附加物、维生素类、糖类、琼脂。

另外,有些培养基还可添加天然的汁液,如椰子汁、酵母提取液、水解酪蛋白等,在培养基中如加入0.5~1%的琼脂即为静止培养的固体培养基,否则为悬浮培养基的液体培养基。

不同植物材料常需要改变配方,如维持生长和诱导细胞分裂和分化的培养配方就不同,

但目前以Ms培养基配方为最常见的一种培养基,它有利于一般植物组织和细胞的快速生长。(1)无机营养:无机营养又分大量元素和微量元素

(2)氨基酸:氨基酸是蛋白质的组成成分

(3)有机附加物:如椰乳、香蕉汁、西红柿汁、酵母提取液、麦芽糖等、

(4)维生素:它能明显的促进离体组织的生长。

(5)糖类:糖在植物组织培养中是不可缺少的,一般多用蔗糖。

(6)琼脂:在固体培养时,琼脂是使用最方便、最好的凝固剂和支持物。

(四)、植物组织培养的实验操作

1、制备Ms培养基

(1)配制各种母液

(2)配制培养基

(3)灭菌

2、外植体消毒

3、接种

4、培养

5、移培

6、栽培

二、胡萝卜的植物组织培养

在胡萝卜根的横切面上取单个细胞,培养在含有椰子汁的无菌培养基中,此时该细胞呈异养状态,细胞接下来会脱分化并分裂产生大量的未分化细胞,将这些细胞继续悬浮培养最终形成胚状体发生初期的细胞分子与合子胚不同,但分化后的发育过程与合子胚类似,即球形胚—>心兴胚—>鱼雷形胚—>成熟胚。这种胚状体,再在适宜的植物生长调节物质的作用下,可以分化出芽与根,最终长成小植株。实现再生植株。

(一)基本操作

1、材料用具

胡萝卜根、锥形瓶或大试管,盛有酒精棉球的广口瓶,带螺口盖的玻璃瓶,培养皿,解剖刀,镊子,滤纸,烧杯,酒精灯,火柴,线绳,硫酸纸和薄牛皮纸,标签,铅笔,紫外灯,喷雾器,恒温箱,接种箱。已灭菌的培养基,质量分数为2%的次氯酸钠溶液,体积分数为70%的酒精溶液,无菌水,质量分数为2%的甲醛溶液,高锰酸钾,来苏水。

2、操作的消毒

接种前,操作者要用香皂清洗双手,擦干,再用酒精棉球擦拭双手。

3、外植体消毒

向带螺口的玻璃瓶中倒入适量的次氯酸钠溶液。取一小段洗净去皮的胡萝卜根,浸入次氯酸钠的溶液中,拧上瓶盖,放在接种箱内消毒10~14min。消毒期间,要将玻璃瓶摇动2~3次,消毒后,打开瓶盖,将消毒液倒入烧杯中。在玻璃瓶中加入适量饿无菌水,盖上瓶盖,将消毒液倒入烧杯中。在玻璃瓶中加入适量的无菌水,盖上瓶上,摇动数次,将水倒去,重复3~4次。用无菌滤纸将胡萝卜表面的水吸水。

4、接种

接种时,应在接种箱内的酒精旁操作,接种用的工具要在酒精灯火上烧灼,然后离开火焰,待工具的温度下降至常后再后进行操作。注意:手和衣袖要酒精火焰保持适当距离,以免烧伤。在培养皿中用解剖刀将胡萝卜切成薄片,选取有形成的部分,切成1cm*1cm 的小块作为外植体,用镊子夹取切好的外植体,迅速接种于锥形瓶的培养基中,尽量使切口接触培养基。每个锥形瓶可接种3~4块外植体,注意锥形瓶口应该斜向火焰,在酒精灯火焰附近操作。材料接好后,将锥形瓶的瓶口在酒精灯火焰上转动烧灼一遍,用三

纸封口,然后用线绳将瓶口困紧,以免微生物进入、造成污染,导致培养失败。最后在瓶壁上贴标签,注明接种材料的名称、编号和接种日期。

(二)培养(条件)

1、关照

组织培养中光照也是重要的条件之一,主要表现在光强、光质、以及光照时间方面。(1)光照强度

光照强度对培养细胞的增殖和器官的分化有重要影响,光照强度对外植物体,细胞的最初分裂有明显的影响。一般来说,光照强度较强,幼苗生长的粗壮,而光照强度较弱幼苗容易徒长。

(2)光质

光质对愈伤组织诱导,培养组织的增殖以及器官的分化有明显的影响。

(3)光周期

试管苗培养时要选用一定的光暗周期来进行组织培养,最常用的周期是16h的光照,8h的黑暗。研究表明,对短日照敏感的品种的器官组织,在短日照下易分化,而在长日照下产生愈伤组织。

2、温度

因为温度是植物组织培养中重要因素,所以植物组织培养在最适宜的温度下生长分化才能表现良好,大多数植物组织培养都是在23~27度之间进行。低于15度时培养,植物组织会表现生长停止,高于35度时对植物生长不利。温度不仅影响植物培养育苗的生长速度,也影响它分化增殖以及器官建成等发育进行。

3、湿度

湿度的影响包括培养容器保持和环境的湿度条件,容器内主要受培养基水分含量和封口材料的影响。前者又受琼脂含量的影响。在冬季应当适当减少琼脂用量,否则,将使培养基干硬,一致不利于外植体接触或插进培养基,导致生长受阻。封口材料直接影响容器内湿度情况,但封闭性较高的封口材料透气性不佳,也会导致植物生长发育受影响。

环境的相对湿度可以影响培养基的水分蒸发,一般要求70%—80%的相对湿度,常用加湿度,常用加湿器或经常洒水的方法来调节湿度。湿度过低会使培养基丧失大量水分,导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高,影响组织培养的正常进行。湿度过高时,容易引起棉塞长霉,造成污染。

4、ph值

不同的植物对培养基最适当ph值得要求也是不同的,大多在5-6.5左右,一般培养皆要求5.8,这基本能适当大多数植物培养的需要。

Ph值适度因材料而异,也因培养基的组成而不同。一般来说ph值高于6.5时,培养基变硬;低于5时,琼脂不能很好的凝固。因为高温灭菌会降低ph值,因此在配制时常提取ph值0.2-0.3单位。Ph值大小调节可用0.1M的HCl来调整。1ml的NaOH可使ph值升高0.2单位,1ml的HCl可使ph值降低0.2单位。调节时充分搅拌均匀。

5、气体

氧气是组织培养中必须的因素,瓶盖封闭时考虑通气问题,可用妇幼滤气膜的封口材料。通气最好的是棉塞封闭瓶口,但棉塞容易使培养基干燥,夏季容易引起污染。固体培养基可加进活性碳来增加通气度。液体振荡培养时,考虑振荡的次数、振幅等,同时考虑容器的类型、培养基、

组织培养的应用、前景和问题

1、应用:植物组织培养已经变成了一种常规的实验技术,广泛应用于植物的脱毒、快繁、

基因工程、细胞工程、遗传研究、次生代谢物质的生产、工厂化育苗多个方面;从高级的研究培养工作。

2、前景和问题:它在创新植物类型上有很好的前景,它可以增加遗传变异,改良作物,繁殖植物。这对于农业生产有重大意义。

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胡萝卜的组织培养过程

化学系098班30号杨晓帆

组培苗的炼苗方法

试管苗的炼苗和移栽 一、目的要求 熟练掌握组培苗移栽驯化技术。 二、用品 1、材料:生根组培苗; 2、器具用品:镊子;水盆;蛭石、珍珠岩、草木灰;育苗盘;喷雾器;竹签等。 三、方法与步骤 (一)练苗将生根的组培苗从培养室取出,将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右,遮阴度宜为50%~70%。然后打开瓶口,再放置3~7天。 (二)基质灭菌将蛭石、珍珠岩和草木灰分别用聚丙烯塑料袋装好,在高压灭菌锅中灭菌20分钟,或者采用高温干热灭菌法灭菌,灭菌后冷却备用。 (三)育苗盘准备取干净的育苗盘,将蛭石和珍珠岩按1:1混合,然后倒入育苗盘中,用木板刮平。将育苗盘放入1-2cm深的水槽中,使水分浸透基质,然后取出备用。(四)试管苗脱瓶用镊子将试管苗轻轻取出,放入清水盆中,小心洗去根部琼脂,然后涝出,放入干净的小盆中。 (五)移栽用竹签在基质上打孔,将小苗栽入育苗穴盘中,轻轻覆盖、压实。待整个穴盘栽满后用喷雾器喷水浇平。最后将育苗盘摆入到驯化室中,正常管理。 四、作业 记录试管苗移栽驯化步骤,统计移栽成活率。 解释: 1、闭瓶强光练苗。当生根后或根系得到基本发育后,将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右,遮阴度宜为50%~70%。 2、开瓶强光练苗。将培养容器的盖子或塞打开,在自然光下进行开瓶练苗3~7天,正午强光或南方光照较强地区要注意采取措施如用阴蓬或温室避免灼伤小苗。如果在开盖容器中培养不超过1周,一般不会引起含蔗糖培养基的污染问题。开瓶炼苗可以分阶段进行,即首先松盖(或塞)一两天,然后部分开盖一两天,最后完全揭去盖。这种方法在相对湿度十分低的屋内特别有好处。培养容器的开口大小也影响开盖的速度,开口大的瓶盖应比开口小的瓶盖除去的速度慢一些。 3、试管苗的移栽。试管苗移栽是组织培养过程的重要环节,这个工作环节做不好,就会造成前功尽弃。试管苗从琼脂培养基中移出时要用长镊子小心取出,彻底清洗干净根部

植物组培实验室配置清单

植物组培实验室建设 目录 1、功能简述 (1) 1)准备室 (1) 2)灭菌室 (1) 3)缓冲间 (2) 4)无菌操作室 (2) 5)培养室 (2) 6)驯化室 (3) 7)温室 (3) 8)辅助实验室(非必要) (3) ①细胞学实验室 (3) ②生理生化分析室 (4) 2、设备及耗材清单 (4) 1)试验设备清单 (4) 2)常备试剂清单 (6) ①MS培养基必备试剂 (7) ②常备激素及辅助试剂 (7)

植物组培实验室建设 1、功能简述 植物组织培养实验室一般应包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间,这也是组织培养实验所必须具备的基本条件。要培养成大田苗还要有相应的驯化室、温室。 1)准备室 用途:又叫化学实验室,进行一切与实验有关的准备工作。完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、晾置、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。 设备:准备室应具备实验台、药品柜、水池、落水架、仪器、药品、防尘橱(放置培养容器)、冰箱、天平(0.1g、0.0001g分度各一台)、干热消毒柜(可省去)、蒸馏水器(可省去)、酸度计(又称pH计,为节约成本和减少维护可用pH试纸代替)、过滤灭菌器、培养皿、培养瓶、三角瓶、试管、电磁炉、水浴锅、漏斗、量筒、刻度移液管(为操作简便起见可购买移液枪1ml、5ml各一个代替)、玻璃棒、酒精灯、镊子、试管架、琼脂、纱布、棉塞、封口膜、大量元素、微量元素、蔗糖、有机物和植物激素的母液(详细内容见附表)、NaOH、盐酸、滤纸、脱脂棉、橡皮筋、牛皮纸等。 图1 准备室图2 灭菌室 2)灭菌室 用途:完成各种器具的保存、培养基的灭菌等。 1

植物组织培养

1.植物组织培养(离体培养):是指在无菌条件下,将植物体的任何一部分,培养在人工配制的培养基上,并给予合适的培养条件,使之发育形成完整植物体的过程。 2、植物组织培养的类型 (1)根据培养基的类型分为: 固体培养液体培养半液半固体培养 (2)根据培养材料(外植体类型)分为: 植株培养器官培养组织培养原生质体培养胚胎培养细胞培养 (3)按培养过程分: 初代培养继代培养生根培养 3、植物组织培养的一般工作流程 1.准备阶段:(1)查阅资料,制定培养方案;(2)清洗组培用器皿、工具; (3)配制所需试剂和培养基;(4)试剂、培养基及器皿、工具的灭菌。 2.外植体的选择与消毒; 3.初代培养; 4.继代培养; 5.生根培养; 6.炼苗移栽 4、植物细胞的全能性概念:指植物体的每个活细胞都携带有该物种的全套遗传信息,在适宜条件下,离体细胞都具有发育为一个完整植株的潜在能力。 注意:(1)活细胞(2)离体细胞(3)细胞全能性表达的难易程度取决于细胞的分化程度 5、细胞全能性的强弱表现: (1)植物细胞全能性根据细胞的性质不同由强到弱:营养生长中心>形成层>薄壁细胞>厚壁细胞(木质化细胞)>特化细胞(导管等) (2)植物细胞全能性根据所处的组织不同由强到弱:顶端分生组织>侧生分生组织>居间分生组织>薄壁组织>厚角组织>输导组织>厚壁组织 6、植物组织培养中全能性表达的条件: 1.无菌条件; 2.离体条件; 3.一定的营养物质; 4.植物生长调节物质; 5.适宜的外界条件。 7、胚性细胞的特点:未分化状态;细胞具有旺盛分裂能力;具有两极性 8、脱分化:指在一定条件下,已分化成熟的细胞、组织或器官恢复到未分化的分生状态,并进行细胞分裂形成未分化的细胞团,如愈伤组织的形成过程。 9、愈伤组织形成的三个时期: (1)诱导期又称启动期(最难)。(2)分裂期(3)分化期 10、优良愈伤组织的特征: (1)具有旺盛的增殖能力;(2)容易散碎;(3)具有高度的胚性或再分化能力,便于植株再生;(4)经过长期的继代保存而不丧失胚性。 11、再分化:指一定条件下,脱分化的细胞或组织转变为具有一定结构、执行一定功能的细胞团和组织,并进一步形成完整植株的过程,即由愈伤组织再生形成完整植株的过程。 12、植物形态建成的途径——全能性的实现途径——植物分化成苗的类型 (1)器官发生型(2)胚状体发生型(3)原球茎发生型(4)芽再生型 13、高压蒸汽灭菌锅——湿热灭菌灭菌要求:0.105 MPa的压力下,锅内温度达121℃,保持20~30min 干热灭菌:要求:160~170℃,1~2h,如有玻璃器皿则必须待温度降至50℃时,才能打开烘箱门,以防温度骤降玻璃破碎。 过滤灭菌:细菌过滤器、注射器,适用于高温高压下易分解的试剂,主要是植物生长调节物质,如IAA、GA3、ZT的灭菌。 14、培养基成分(1).大量元素:包括:N、P、K、Ca、Mg、S、Cl等。 (2)微量元素:包括Fe,B,Mn,Cu,Zn,Mo,Co等。 15、植物生长调节剂: (1)生长素类:常用吲哚乙酸(IAA)、吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)、 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D) (2)组培中的作用:①促进细胞伸长;②促进生根;③诱导愈伤组织的形成;

植物组培作业2

姓名:宋亚飞学号:159310006 专业:养殖(专硕) 1 通常植物组织培养所用培养基构成要素包括哪些? 2 植物组织培养中常用的消毒剂,请列举4个以上。 3 植物组织培养一般需要注意哪些培养条件。 1答:1.无机营养物无机营养物主要由大量元素和微量元素两部分组成大量元素主要包括氮、磷、钾、钙、镁和硫六种氮源通常有硝态氮或铵态氮但在培养基中用硝态氮的较多也有将硝态氮和铵态氮混合使用的。磷和硫则常用磷酸盐和硫酸盐来提供。钾是培养基中主要的阳离子在近代的培养基中其数量有逐渐提高的趋势。而钙、钠、镁的需要则较少。培养基所需的钠和氯化物由钙盐、磷酸盐或微量营养物提供。微量元素包括碘、锰、锌、钼、铜、钴和铁这些元素有的对生命活动的某个过程十分有用有的对蛋白质或酶的生物活性十分重要有的是参与某些生物过程的调节。培养基中的铁离子大多以螯合铁的形式存在即FeSO4与Na2—EDTA螯合剂的混合。 2.碳源培养的植物组织或细胞它们的光合作用较弱。因此需要在培养基中附加一些碳水化合物以供需要。培养基中的碳水化合物通常是蔗糖或D-葡萄糖用量通常为2-4高者可达5亦可用市售的白糖所代替但一般应增加用量而且最好用比较固定的厂家生产的产品以保证实验的稳定性。 3.有机营养成分包括人工合成或天然的有机附加物包括维生素氨基酸及其它有机物质等。最常用的有酪朊水解物水解乳蛋白、水解酪蛋白CH、酵母提取物、玉米胚乳、麦芽浸出物、西红柿汁、椰子汁CM及各种氨基酸如甘氨酸氨基乙酸等。维生素在培养基中加入维生素常有利于外植体的发育。培养基中的维生素属于B族维生素其中效果最佳的有硫氨素组织培养中使用的赤霉素只有一种即赤霉酸GA3。虽然已经用于顶端分生组织的培养和维管分化的研究但在培养基中很少添加因为它的作用往往是负面的。乙烯等。 5.琼脂或其他支持物除液体悬浮培养外就目前情况而言琼脂是一种极为理想的支持物。一般浓度0.4-1质量越差的琼脂用量越大。琼脂作为培养基的支持物使培养基呈固体状态以利于各种外植体的培养。 6.其他添加剂含天然提取物、抗生素等活性炭渗透调节剂抗生素抗氧化剂等。活性炭加入培养基中的目的主要是利用其吸附能力减少一些有害物质的影响例如防止酚类物质污染而引起组织褐化死亡。这在兰花组织培养中效果更明显。另外活性炭使培养基变黑有利于某些植物生根。但活性炭对物质吸附无选择性既吸附有害物质也吸附有利物质因此使用时应慎重考虑不能过量一般用量为1—5。活性炭对形态发生和器官形成有良好的效应。在失去胚状体发生能力的胡萝卜悬浮培养细胞中加入1一4活性炭可使胚状体的发生能力得以恢复。 7.水水是植物原生质体的组成成分也是一切代谢过程的介质和溶媒。配制培养基母液时要用蒸馏水以保持母液及培养基成分的精确性防止储藏过程发霉变质。大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水以防成分的变化引起不良效果。 8.pH 培养基的pH因培养材料不同而异大多数植物都要求在pH5.6—5.8的条件下进行组织培养。常用0.1mol/L的Na0H和0.1mol/L的HCl来调节培养基的PH。 2答:外植体在接种之前, 须经严格地灭菌.由于灭菌剂的种类不同, 杀菌力不同, 因此选择消毒剂, 既要考虑具有良好的消毒杀菌作用, 同时又易被蒸馏水冲洗掉或能自行分解的物质, 且不会损伤或只轻微损伤组织材料而不影响生长.在使用不同的药剂时, 需要考虑使用浓度和处理时间.现将常用的消毒剂列于下表中. 常用消毒剂 其中70%~75%酒精具有较强的杀菌力、穿透力和湿润作用,可排除材料上的空气,利于其他消毒剂的渗入, 因此常与其他消毒剂配合使用.由于酒精穿透力强,应严格掌握好处理时间,时间太长会引起处理材料的损伤.

组培室建设

简易组培室 1 基本实验室 1.1 准备室 主要用于配制药品、洗涤烧杯、器具以及灭菌,大小视实际情况,主要放电子天平、PH计、自动灭菌锅、烧杯、组培瓶、冰箱、蒸馏水、电炉或电磁炉等。 设备:准备室应具备实验台、药品柜、水池、仪器、药品、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器等。 1.2接种室 主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序. 接种室宜小不宜大(空间大易污染),能放下一个超净工作台和一张桌子即可,当然人还要操作。要求在适当位置吊装1~2盏紫外线灭菌灯,用以照射灭菌。 设备:紫外灯、酒精灯、接种器械(接种镊子、剪刀、解剖刀),桌子,超净工作台。 1.3培养室 主要就是培养架和空调。必须有空调,植物的最适宜温度在24摄氏度左右。培养架一般有5层,最低一层离地高约lOcm,其他每层间隔30cm左右,培养架即高1.7m 左右。日光灯一般用40W,固定在培养架搁板的下面,每层有两支日光灯,距离在20cm,光照强度为2000-3000lx。这个一般的组培公司都有卖,看你的需要定量了。 另外如果你们做的量不是很多,买一个人工气候箱就可以了,可控光照,温度的,这个你上网问一下价格。 植物组织培养实验室(组培室)规划设计 一、实验室要求 理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方,最好在常年主风向的上风方向,尽量减少污染。规模化生产的组织培养实验室最好建在交通方便的地方,便于培养产品的运送。 实验室的建设均需考虑两个方面的问题:一是所从事的实验的性质,即是生产性的还是研究性的,是基本层次的还是较高层次的;二是实验室的规模,规模主要取决于经费和实验性质。 无论实验室的性质和规模如何,实验室设置的基本原则是:科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足3个基本的需要:实验准备(培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌)、无菌操作和控制培养。此外,还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施,使实验室更加完善。 在进行植物组织培养工作之前,首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解,以便因地制宜地利用现有房屋,或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的,实验室规模太小,则会限制生产,影响效率。在设计组织培养实验室时,应按组织培养程序来没计,避免某些环节倒排,引起日后工作混乱。植物组织

大樱桃组培苗炼苗技术

大樱桃组培苗炼苗技术 摘要:根据大樱桃的生物学特性,通过多年大樱桃组培试管苗炼苗的试验,总结出了大樱桃组培试管苗炼苗前后的一系列管理技术。结果表明,试管苗炼苗基质的选择、试管苗温室驯化生根壮苗与开瓶炼苗这3个阶段的工作非常重要。基质选用细沙与蛭石6:4混合为宜,试管苗温室训化生根壮苗与开瓶炼苗时间以10~15d为宜,移入沙床后定期喷洒营养液和杀菌液,按照此方法进行试管苗炼苗可获得很高的成活率。 关键词:大樱桃;组培;炼苗;技术方法 试管苗的炼苗移栽是组织培养过程中重要的环节,这个环节最需要的是操心和细心,即对大棚温湿度操心,对瓶苗移栽各管理环节的细心,若稍有疏忽,则会造成大批幼苗死亡,使整个组培工作前功尽弃,造成巨大的损失。通过几年的实践,总结出了大樱桃试管苗炼苗的关键技术,从试管苗炼苗基质的选择、试管苗温室驯化生根壮苗与开瓶炼苗这3个阶段进行了详细介绍,为天水市优良大樱桃品种的工厂化生产提供了科学依据和技术支持。 1苗床及基质的选择 1.1苗床的制作 苗床在日光温室内要做成凹畦,长6m,宽2m,畦深15~20cm为宜,将畦整平拍实后,喷洒杀虫剂500倍液,在畦内将细砂、蛭石混匀后用木板刮平,并用800倍液多菌灵液将沙床洒透,在畦上搭建小拱棚,可用扁竹或圆竹搭建,高度保持在1.50m 左右,上遮盖遮阳网。 1.2栽种试管苗的基质 栽种试管苗的基质要具备透气、保湿、容易灭菌处理、不利于杂菌滋生的特点,选用珍珠岩、炉渣、蛭石、锯末、草炭土等多种基质进行试验,结果表明,最适合大樱桃组培苗生长的基质为:细沙与蛭石6:4混合,细砂为颗粒为0.10~0.20mm 的面砂。 2试管苗的移栽方法 2.1试管苗的驯化 试管苗从培养架上长好后,将试管苗小心从培养架上取下,要轻取轻放,迅速转移到日光温室中,在日光温室中将瓶苗均匀地摆在地上,温度控制在15~25℃,光照强度为3 000Lx,每天中午在瓶苗周围喷洒多次雾水,达到保湿降温的效果,移到

组培实验室管理制度

组培实验室管理制度 组培实验室是重要的研发场所,为了让实验室更好的运转,提高研发能力,加强实验室科学化管理和规范实验室工作人员行为规范,特制定本规章制度。 研发人员的管理制度: 一、工作人员必须严格遵守公司规章制度,按时上下班,如需请假应按照公司请假流程上报经上级领导同意后方可,未经上级领导同意私自离岗或不到岗的,视为旷工。不得在工作时间早退、迟到、串岗、脱岗等,违反者按公司的奖罚条例处理。 二、研发技术人员是公司宝贵的人才,在完成工作任务的同时,不断努力学习,查阅专业文献,了解业内最新研究进展,部门会定期组织专业技术交流会, 提高自己的业务水平和专业技术水平。 三、工作人员应树立严谨的科学发展观,养成实事求是、戒骄戒躁和严肃认真的科学态度和培养良好的工作态度。 四、工作人员进接种室之前,要在缓冲室换拖鞋,在接种室里面,要更换实验 服,配戴一次性帽子、口罩以及手套,以免造成污染。接种的时候注意酒 精灯,以免造成烫伤或者严重的着火。五、工作中应养成细心观察和及时记录的良好学习精神和习惯,在公司指定的实验记录本上记录每天实验内容和问题,并及时整理项目资料,完善公司数据库。 六、定期进行工作总结和汇报,同事之间,上下级之间及时了解实验进展, 对遇到问题及时处理和解决 七、实验室内一切用具和物品不得擅自带出实验室,建立健全设备仪器登记建档和领用手续,工作人员不得将个人物品以及食物带入接种室。

八、作为研发人员,谨记保密条例,工作笔记一律不得带出公司。 九、实验室不得私自接待参观学习的人员。非实验室工作人员不得随意进出实验室。 十、实验室担负着苗木科学研发的科研工作,工作人员开展工作时应本着严谨、严肃和专注的工作态度与敬业精神,上班时间不做与工作无关的事情,如闲聊、听音乐、刷微信、看微博、打游戏等。 实验室的管理制度: 一、随时保持工作场所清洁和干燥,贵重仪器专人看护,责任到人,使用后及时清理、擦拭,定期维护和保养,做到台面、桌面、地面、水槽、仪器五净。 二、仪器、药品、工具等用后要立即归还原位,随时保持工作场所的整洁,节约用水,用电及消耗性药品、试剂,定期盘查常用药品及试剂,定期申购。 三、定期整理培养架,每个培养架的擦拭,根据植物不同、每个阶段不同而适当的开灯管。不用的灯管及时关掉,以免浪费并且造成培养室温度增高。一旦发现污染瓶苗应及时清理,严令禁止在培养室内打开污染器皿。注意培养室的清扫以及消毒, 四、凡属技术文件、药剂配方资料、技术专项辅导资料、新技术新品种创新研发等相关资料,按公司保密条例统一交由指定人员负责管理,未经批准,任何个人不得泄露、篡改和与其他人员或部门传阅,对于各自使用的实验记录本,定期由上一级领导批示,签名,用完后交由指定人员保管并领取下一本,严格做好保密工作,如有违规,公司将追究行政及经济责任。 五、高压灭菌器等危险仪器,正常工作时间外不得使用,若实验任务紧急确需使用时,应事先得到实验室负责人批准方可。当高压灭菌器处在高压工作时,工作人员不

组培复习重点

名词解释 1、微绒毛:是上皮细胞游离面的细胞膜和细胞质共同形成的细小 指状突起,电镜下可见。 2、同源细胞群:在软骨组织深部,软骨细胞逐渐长大成熟,变为 椭圆形,多成群分布,每群2~8个细胞,这些细胞是由一个软骨细胞分裂增殖而来的,故称同源细胞群。 3、软骨囊:软骨陷窝周围的基质因富含硫酸软骨素,呈强嗜碱性, 染色深,称为软骨囊。 4、结间体:相邻两个朗飞结之间的一段有髓神经纤维称结间体, 一个结间体的髓鞘由一个胶质细胞形成。 5、动脉周围淋巴鞘:位于脾的白髓中,是环绕在中央动脉周围的 弥散淋巴组织,主要是T淋巴细胞和一些巨噬细胞。在细胞免疫应答时可增大变厚。 6、浆膜:浆膜由疏松结缔组织和外表面被覆的间皮构成。 7、皱壁:皱壁是小肠粘膜层和粘膜下层共同向肠腔突出所形成的 突起。 8、泡心细胞:位于胰腺外分泌部腺泡腔内的一些扁平或立方形细 胞,是闰管上皮伸入腺泡腔内形成的。 9、门管区:在相邻肝小叶之间的结缔组织内,常伴行小叶间动脉 和静脉及小叶间胆管3种管道,该区域称为门管区。 10、肺小叶:每一细支气管连同它的各级分支和肺泡,组成了肺小 叶。 11、气血屏障:肺泡腔内O2与肺泡隔毛细血管内血液携带的CO2间 进行气体交换所通过的结构,即肺泡表面液体层,Ⅰ型肺泡细胞及基膜,薄层结缔组织,毛细血管基膜与连续内皮。

12、滤过屏障(滤过膜):当血液流过血管球毛细血管时,管内血压 较高,血浆内的某些物质,经有孔内皮、基膜、裂孔膜滤过到 肾小囊腔,这三层结构称为滤过屏障。 13、分泌类固醇激素细胞:分泌类固醇激素,胞质内有丰富的滑面 内质网,管泡状嵴线粒体和大量脂滴,无分泌颗粒。 14、分泌含氮激素细胞:分泌含氮素激素,细胞内有丰富的粗面内 质网,高尔基体和膜包颗粒。 15、精子形成:精子细胞不再分裂,经过复杂的形态变化演变成精 子,这一过程称为精子形成。 16、黄体:排卵后,残留于卵巢内的卵泡壁随同血管一起向卵泡腔 塌陷,在促黄体生成素的作用下,逐渐发育成一个体积较大又 富有血管的内分泌细胞团,新鲜时呈黄色,故称黄体。 17、受精:成熟获能后的精子与发育正常的卵子结合形成受精卵的 过程。 18、卵裂:受精卵进行的有丝分裂。 19、胚泡:桑椹胚进入子宫腔后,细胞继续分裂,卵裂球数目增加 到100个左右时,细胞按一定规律排列,形似泡状。由滋养层、胚泡腔和内细胞群构成。 20、植入(着床):胚泡逐渐埋入子宫内膜功能层的过程称为植入或 着床。 21、蜕膜:胚泡植入后,子宫内膜的功能层称蜕膜。 22、原条:胚胎第三周初,胚盘的上胚层细胞增殖,并由胚盘两侧 向尾侧中轴线迁移,形成一条细胞增厚区,称原条。 简答题 1、结合功能简述成纤维细胞的微细结构。

植物组织培养实验室(组培室)规划设计

植物组织培养实验室 (组培室规划设计 2009年 05月 31日星期日 10:18一、实验室要求 理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方, 最好在常年主风向的上风方向, 尽量减少污染。规模化生产的组织培养实验室最好建在交通方便的地方, 便于培养产品的运送。 实验室的建设均需考虑两个方面的问题:一是所从事的实验的性质, 即是生产性的还是研究性的, 是基本层次的还是较高层次的; 二是实验室的规模, 规模主要取决于经费和实验性质。 无论实验室的性质和规模如何,实验室设置的基本原则是:科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足 3个基本的需要:实验准备 (培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌、无菌操作和控制培养。此外,还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施,使实验室更加完善。 在进行植物组织培养工作之前,首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解, 以便因地制宜地利用现有房屋, 或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的,实验室规模太小,则会限制生产,影响效率。在设计组织培养实验室时, 应按组织培养程序来没计, 避免某些环节倒排, 引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件, 需要一定的设备、器材和用具, 同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。 二、实验室组成 (一基本实验室 基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间,是组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产,年产 4万 -20万, 需 3-4间实验用房,总面积 60平方米。

植物组培室设计

植物组织培养实验室设计 一、实验室基本组成 (一)基本实验室 1.准备室: 进行一切与实验有关的准备工作,完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。 要求:最好有25平方米左右。要求宽敞明亮、以便于放置多个实验台和相关设备,方便多人同时工作;同时要求通风条件好,便于气体交换;实验室地面应便于清洁,并应进行防滑处理。 设备:准备室应具备实验台、药品柜、水池、仪器、药品、防尘橱(放置培养容器)、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器等。 2、洗涤灭菌室 完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。 要求:洗涤灭菌室根据工作量的大小决定其大小,一般面积控制在25平方米。在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽,用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置2个水槽,用于清洗小型玻璃器皿,地面应耐湿并排水良好。 设备:水池、落水架、中央实验台、高压灭菌锅、超声波清洗器、干燥灭菌器等。 3、缓冲间 是进入无菌室前的一个缓冲场地,减少人体从外界带入的尘埃等污染物。工作人员在此换上工作服、拖鞋,戴上口罩,才能进入无菌室和培养室。进入无菌操作室前在此更衣换鞋,以减少进出时带入接种室杂菌。 要求:缓冲间需5-10平方米,可建在准备室外或无菌操作室外,应保持清洁无菌;备有鞋架和衣帽挂钩,并有清洁的实验用拖鞋、已灭菌过的工作服;墙顶用1-2盏紫外灯定时照射,对衣物进行灭菌。缓冲间最好也安一盏紫外线灭菌灯,用以照射灭菌。缓冲间的门应该与接种室的门错开,两个门也不要同时开启,以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。 设备:1-2盏紫外灯、水槽、实验台、鞋帽架、柜子、灭菌后的工作服、拖鞋、口罩。

组培室管理制度

组培室管理制度 为了严格管理,预防污染,使组培室生产正规化、标准化和制度化,特制作本规定。本章程是试行方案,部分内容将根据执行情况作进一步调整。本章程于公布之日起开始试行。 1、组培室工作人员必须严肃认真、求真务实、努力提高操作水平。 2、服从负责人管理,坚持按时上下班制度,不得随便请假。 3、各无菌室及组培室不准随意领闲杂人员出入,如工作需要、务必做好消毒工作。参观时有专门人员负责陪同,为防止污染,请按指定的路线行走,不可进入工作间。维修和安装人员请在指定的地点工作,不要随意走动,以防污染。 4、工作人员出入必须严格做好消毒工作,各无菌室和组培室及时严格做好消毒。工作人员进入组培室和工作区时必须穿好工作服。 5、各无菌室和组培室等地严禁吸烟,严禁使用通讯设备。上班期间不得接待与工作无关的来人。组培室内不可高声喧哗、更不许吵闹,不准吃零食。不得随意串岗和闲谈。 6、各无菌室和组培室及时严格消毒,镊子、剪刀、手术刀、接种盆、工作服、口罩等器具必须定期高压消毒。 7、准备室必须严格按照技术人员要求进行培养基生产。

培养瓶洗刷要求干净彻底,瓶内、瓶外无残留物。母液配制必须由技术人员统一配制并做好记录。培养基配制,必须严格按照操作规程进行。 8、培养基制备严格按操程序进行,做到安全、及时、有效,药品的称量,必须准确、及时登记。 9、接种室:必须在上班半小时内做好各项准备工作,接种人员必须严格按着技术人员的要求进行操作,标好名称、代号、时间、接种人员信息等,并及时清点计数。瓶苗接种数量要足够,大瓶25--30株,小广口瓶20--25株。接种十天之内污染控制3%以内。 10、培养室:注意保持培养室内无菌环境,要定期及时的进行污染清查,并做好记录,技术人员要做好培养室光照、温度等调控工作并每周对培养室进行消毒一次。 11、炼苗室必须严格按照炼苗操作规程进行操作。 12、保持各室卫生,要坚决杜绝脏、乱、差,要做到物品摆放有序,地面整洁,各台面无灰尘,各室做到无蚊无蝇。打碎的瓶子及培养基必须及时清理。下班后必须将各仪器物品摆放到原位。此外,组培室外环境要清洁干净,拉圾当日清理,以免细菌滋生。 13、一切从效益出发,不浪费材料(包括接种材料),下班时及时切断电源、水源,关锁好门窗,如发现问题要追究当班人员责任。

组培苗的炼苗方法图文稿

组培苗的炼苗方法集团文件发布号:(9816-UATWW-MWUB-WUNN-INNUL-DQQTY-

试管苗的炼苗和移栽 一、目的要求 熟练掌握组培苗移栽驯化技术。 二、用品 1、材料:生根组培苗; 2、器具用品:镊子;水盆;蛭石、珍珠岩、草木灰;育苗盘;喷雾器;竹签等。 三、方法与步骤 (一)练苗将生根的组培苗从培养室取出,将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右,遮阴度宜为50%~70%。然后打开瓶口,再放置3~7天。 (二)基质灭菌将蛭石、珍珠岩和草木灰分别用聚丙烯塑料袋装好,在高压灭菌锅中灭菌20分钟,或者采用高温干热灭菌法灭菌,灭菌后冷却备用。 (三)育苗盘准备取干净的育苗盘,将蛭石和珍珠岩按1:1混合,然后倒入育苗盘中,用木板刮平。将育苗盘放入1-2cm深的水槽中,使水分浸透基质,然后取出备用。 (四)试管苗脱瓶用镊子将试管苗轻轻取出,放入清水盆中,小心洗去根部琼脂,然后涝出,放入干净的小盆中。 (五)移栽用竹签在基质上打孔,将小苗栽入育苗穴盘中,轻轻覆盖、压实。待整个穴盘栽满后用喷雾器喷水浇平。最后将育苗盘摆入到驯化室中,正常管理。 四、作业 记录试管苗移栽驯化步骤,统计移栽成活率。 解释: 1、闭瓶强光练苗。当生根后或根系得到基本发育后,将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右,遮阴度宜为 50%~70%。 2、开瓶强光练苗。将培养容器的盖子或塞打开,在自然光下进行开瓶练苗3~7天,正午强光或南方光照较强地区要注意采取措施如用阴蓬

或温室避免灼伤小苗。如果在开盖容器中培养不超过1周,一般不会引起含蔗糖培养基的污染问题。开瓶炼苗可以分阶段进行,即首先松盖(或塞)一两天,然后部分开盖一两天,最后完全揭去盖。这种方法在相对湿度十分低的屋内特别有好处。培养容器的开口大小也影响开盖的速度,开口大的瓶盖应比开口小的瓶盖除去的速度慢一些。 3、试管苗的移栽。试管苗移栽是组织培养过程的重要环节,这个工作环节做不好,就会造成前功尽弃。试管苗从琼脂培养基中移出时要用长镊子小心取出,彻底清洗干净根部(因为残留的蔗糖和营养会成为潜在的致病微生物的生长培养基,洗不净容易引起移栽苗烂根死亡),并且避免损坏根系。之后直接移栽或使用0.1%~0.3%的高锰酸钾或多菌灵等杀菌剂溶液中清洗,然后用清水清洗后移入苗床或盆钵,也可用水清洗后用多菌灵溶液浸泡10~30分钟后移栽,栽后淋足定根水。炼苗在塑料薄膜(或玻璃)温室内或遮阴网室内进行,使用温室或温棚时应注意设置通风口,防止浇水后高温引起萎蔫及高湿引起烂苗。生长基质应当具有适合的pH值、多空隙、良好的排水和通气性能,如一般用珍珠岩、蛭石、草炭土或腐殖土比例为1:1:0.5。也可用砂子:草炭土或腐殖土为1:1。这些基质在使用前应高压灭菌,或用至少小时烘烤来消灭其中的微生物。由于移出的试管小植株极容易感染病,所以生长环境的卫生状况和病害防治对移栽能否成功十分关键。通常对生长基质、培养容器和苗床进行消毒处理,采用新的培养容器或聚乙烯薄膜效果都很好,必要时可喷施稀的杀菌剂。 4、移栽后的管理。移出的试管苗一般在炼苗前4周遮阴要达到50%~90%,并采用喷雾洒水保持一定的湿度(85%左右),之后逐渐降低湿度和增强光照。湿度降低幅度及光照增加量依不同植物而定,总体上应促使老叶缓慢衰退并同时产生新叶。如果降低或增加过快,会使叶片褪绿和灼伤,缓苗期延长,甚至导致移栽苗死亡。但是,只要小植株能够忍受,尽可能高的光照水平是有利的。温度不应低于20℃,最好达到25~30℃。但温度湿度过高易于滋生杂菌,造成苗霉烂或根茎处腐烂,因此应对温度加以控制。遮阴和调节湿度(喷雾或塑料薄膜覆盖)也有助于控制温度。在炼苗时可适当施用大量和微量元素,如采用1/4或

植物组织培养名词解释

主要概念名词解释 细胞全能性:指细胞经分裂和分化后仍具有形成完整有机体的潜能或特性。 分化:指做工作使之瓦解;非特化的早期胚胎细胞获得特化细胞(如心脏、肝脏或肌肉细胞)特性的过程。 脱分化:已分化的细胞在一定因素作用下恢复细胞分裂能力,失去原有分化状态的过程。 再分化:已经脱分化的愈伤组织在一定条件下,再分化出胚状体,形成完整植株。 外植体:植物组织培养中作为离体培养材料的器官或组织的片段。 组织培养:植物组织培养概念(广义)又叫离体培养,指从植物体分离出符合需要的组织。器官或细胞,原生质体等,通过无菌 操作,在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或 生产具有经济价值的其他产品的技术。植物组织培养概念 再生植物。 愈伤组织:指植物体的局部受到创伤刺激后,在伤口表面新生的组织。 它由活的薄壁细胞组成,可起源于植物体任何器官内各种组 织的活细胞。 定芽:生长在枝上有一定位置的芽称为定芽。象顶芽、腋芽、副芽等

均在一定部位生出的芽,称为定芽. 不定芽:从叶、根、或茎节间或是离体培养的愈伤组织上等通常不形成芽的部位生出的芽,则统称为不定芽。 继代培养:指愈伤组织在培养基上生长一段时间后,营养物枯竭,水分散失,并已经积累了一些代谢产物,此时需要将这些组织 转移到新的培养基上,这种转移称为继代培养或传代培养。消毒:指杀死病原微生物、但不一定能杀死细菌芽孢的方法。 人工种子:将组织培养产生的体细胞胚和性细胞胚包裹在能提供养分的胶囊里,再在胶囊外包上一层具有保护功能和防止机械损 伤的外膜,形成一种类似于种子的结构。 褐变:饲料在加工过程中或长期贮存于湿热环境下,其所含的氨基化合物如蛋白质、氨基酸及醛、酮等与还原糖相遇,经过一系列 反应生成褐色聚合物的现象称为褐变反应,简称褐变。 污染:指自然环境中混入了对人类或其他生物有害的物质,其数量或程度达到或超出环境承载力,从而改变环境正常状态的现象。玻璃化:将某种物质转变成玻璃样无定形体(玻璃态)的过程,是一种介于液态与固态之间的状态,在此形态中没有任何的晶体结 构存在。 体胚:由体细胞发育成的胚。又称体细胞胚。 茎尖培养:把茎尖的分生组织或包括有此分生组织的茎尖分离进行无菌培养的方法。 单细胞培养:亦称游离细胞培养。是指酵母菌、细菌等单细胞生物的

组培

一、名词解释 1.植物组织培养:指在无菌和人工控制的环境条件下,利用值当的培养基,对离体的植物 器官、组织、细胞及原生质体进行培养,使其再生细胞或完整植株的技术。 2.胚胎培养:对植物体的成熟和未成熟胚以及具胚器官进行离体培养的方法。 3.愈伤组织:指外植体因受伤或在离体培养时,其未分化的细胞和已分化的细胞进行活跃 的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织。 4.植物细胞的全能性:指植物的体细胞在适当条件下,具有不断分裂、繁殖和发育成完整 植株的能力。 5.人工种子:指植物离体培养中产生的胚状体或不定芽,被包裹在含有养分和保护功能的 人工胚乳和人工种皮中,从而形成能发芽出苗的颗粒体。 6.细胞分化:是指导致细胞形成不同结构,引起功能改变或潜在的发育方式改变的过程。 7.原生质体培养:对分离出的原生质体进行培养,使其分裂分化直至形成完整植株的技术。 8.植物分生组织培养:是指对植物的分生组织进行离体培养的技术,包括植物根尖、茎尖 等顶端分生组织和形成层组织的培养。 9.初代培养: 10.植物细胞培养:对植物器官或愈伤组织上分离出的单细胞或小细胞团进行培养,形成单 细胞无性系或再生植株的技术。 11.外植体: 12.脱分化:是指离体培养条件下生长的细胞、组织或器官经过细胞分裂或不分裂逐渐失去 原来的结构和功能而恢复分生状态,形成无组织结构的细胞团或愈伤组织或成为未分化细胞特性的细胞的过程。 13.再分化:离体培养的植物细胞和组织可以由脱分化状态重新进行分化,形成另一种或几 种类型的细胞、组织、器官,甚至形成完整植株的过程。

二、简答题 1、简述无菌操作的具体步骤? 1)实验前20min将超净工作台的紫外灯打开,进行灭菌。试验时关闭紫外灯,避免人员被 紫外线照射。 2)用酒精喷壶或酒精棉将超净工作台消毒,然后实验操作者的手和小臂也用70%酒精消毒。 实验器具用酒精喷壶消毒之后,放入装有95%酒精的广口瓶中。 3)点燃超净工作台上的酒精灯,将广口瓶中的镊子和剪刀等器械取出,在酒精灯上灼烧, 放置在灭菌支架上冷却后使用;镊子和剪刀等器械也可以用灭菌器灭菌,由于灭菌器温度为300℃,故器械在灭菌器中灭菌1-2min,然后放在灭菌支架上冷却后使用。 4)需要接转的培养瓶或新培养瓶均应在酒精灯下方处打开瓶盖,且培养瓶的瓶口须在酒精 灯上灼烧,然后用冷却的无菌器械将材料切割后,植入新培养基上,快速将瓶盖等封口材料在酒精灯上燎烧,盖上瓶盖等封口材料。记录材料类型和接种日期,放置培养架上 2、简述茎尖作为外植体进行初代培养的培养基配方和培养环境特点? 3、简述胚胎培养的应用领域? (一)克服远缘杂交不亲和性 远缘杂交中由于胚乳发育不正常或杂种胚与胚乳之间生理上的不协调,造成杂种胚早期夭折。将早期幼胚进行离体培养进行胚挽救,可克服这种受精后障碍,产生远缘杂种。, (二)打破种子休眠。缩短育种周期 许多植物的种子发育不完全或有抑制物存在而影响种胚发芽。通过幼胚培养,可促使这些植物的幼胚达到生理和形态上的成熟而提早萌发形成植株。 (三)提高种子萌发率 长期营养繁殖的植物,虽具有形成种子的能力,但其生活力较低,萌发成苗率低下,胚培养可促进这类种子萌发和形成幼苗。 4、简述生长素的种类及其在组培中的主要生理作用? 吲哚乙酸、萘乙酸、2,4-氯苯氧乙酸。 作用:植物组织培养中,生长素在诱导愈伤组织形成和生根方面起着重要的作用。2,4-D在某些植物的组织培养中,还会诱导不定根的形成。生长素与细胞分裂素的配合使用,对于器官形成和植株再生可以起到调控作用。高浓度的生长素对芽的形成往往有抑制作用。 5、简述细胞分裂素的种类及其在组培中的主要生理作用?

组培室无菌化操作规程

无菌操作 一、接种室的消毒 1、每天开始工作前用75%酒精喷雾自己周围环境。 2、一天的工作结束后,值日、值班人员要对培养基储存间、三个接种室、两个培养室及风淋室进行紫外灯及臭氧灭菌20~30min。 3、风淋室两个门随时关紧,灭菌间和储存间之间的门除了放培养基外不得随意开门。风淋室与接种间之间的门要随时关闭!接种四人间对着的门绝对不允许开! 二、无菌操作要求 1、在一楼换各自的护士鞋。 1、进实验室首先要穿过风淋室吹风,换工作服,换拖鞋,戴好帽子、把头发全部包进去、不许有头发留在外面,之后进入实验室。 2、自己的工作服、帽子一周清洗一次。口罩要保持干净。 4、必须剪除长指甲,接种时用75%酒精擦洗。 5、接种时禁止谈话并戴上口罩。 6、接种过程尽量减少工作人员在接种室的走动。 三、接种前应做好相应的准备工作 1、超净台紫外灯灭菌20min,值日值班人员提前10min 开台子。 2、打开高温灭菌消毒器,温度达到200℃左右时可以使用。 3、此时将当天或某时间段所需要的原瓶苗、培养基、盘子、一瓶无菌水及放置瓶盖的空框子准备好,待紫外灯关闭5min后进入接种室, 4、将事先准备好的原瓶苗及其他物品放到医用小推车上(有条理的

摆放,便于在操作时使用)。 5、于8:20之前和14:50之前进入操作室超净台前进行接种工作。 四、具体的无菌操作步骤如下: 1、首先要拉下超净台挡风板,隔离人体和无菌苗,减少菌的发生。 2、操作前要用酒精喷壶喷洒超净台并用抹布擦干净。 3、将两把解剖刀和镊子放入灭菌消毒器内进行2~3min灭菌,之后放在灭菌支架上,冷却或不烫手的情况下使用。每做完一瓶无菌分化材料,都应将刀子镊子进行灭菌,否则会引起交叉污染。 3、器具及用品(盘子、培养基、原瓶苗)用酒精喷壶消毒之后,放在超净工作台面上待用(台内只放无菌器具和用品)。盘子在酒精消毒后,小心地打开报纸,反扣在台面上,手不要触碰碟子,否则碟子会积聚菌,导致瓶苗污染。 4、操作前要检查好所取苗子是否为无菌苗,在发生真菌性污染(在培养基表面有粉状、毛状菌)、细菌性污染(在培养基表面有油状、浓状菌斑)时要将瓶苗放在一边,不可以打开瓶盖,以免发生超净台环境污染。 5、用镊子夹无菌碟并小心放到酒精灯右前方(忌用手拿碟子)。 6、将消毒后的镊子(左)和刀子(右)架在无菌碟上 7、打开瓶盖对无菌分化苗瓶口进行火焰灭菌(打开的瓶盖右手扔进空框里),左手托着瓶身,瓶口斜对着酒精灯火焰,瓶身由里向外旋转2~3圈即可。 8、用镊子夹分化苗放入无菌碟中。分化苗多的情况下可以分两次放

植物组织培养实验室(组培室)规划设计 #组培技术#

植物组织培养实验室(组培室)规划设计 #组培技术# 一、实验室要求 理想的组织培养实验室应该建立在安静、清洁、远离污染源的地方,最好在常年主风向的上风方向,尽量减少污染。规模化生产的组织培养实验室最好建在交通方便的地方,便于培养产品的运送。 实验室的建设均需考虑两个方面的问题:一是所从事的实验的性质,即是生产性的还是研究性的,是基本层次的还是较高层次的;二是实验室的规模,规模主要取决于经费和实验性质。 无论实验室的性质和规模如何,实验室设置的基本原则是:科学、高效、经济和实用。一个组织培养实验室必须满足3个基本的需要:实验准备(培养基制备、器皿洗涤、培养基和培养器皿灭菌)、无菌操作和控制培养。此外,还可根据从事的实验要求来考虑辅助实验室及其各种附加设施,使实验室更加完善。 在进行植物组织培养工作之前,首先应对工作中需要哪些最基本的设备条件有个全面的了解,以便因地制宜地利用现有房屋,或新建、改建实验室。实验室的大小取决于工作的目的和规模。以工厂化生产为目的,实验室规模太小,则会限制生产,影响效率。在设计组织培养实验室时,应按组织培养程序来没计,避免某些环节倒排,引起日后工作混乱。植物组织培养是在严格无菌的条件下进行的。要做到无菌的条件,需要一定的设备、器材和用具,同时还需要人工控制温度、光照、湿度等培养条件。 二、实验室组成 (一)基本实验室 基本实验室包括准备室、洗涤灭菌室、无菌操作室、培养室、缓冲间,是组织培养实验所必须具备的基本条件。如进行工厂化生产,年产4万-20万,需3-4间实验用房,总面积60平方米。 1、准备室(化学实验室) 功能:又叫化学实验室,进行一切与实验有关的准备工作:完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器皿洗涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。 要求:最好有20平方米左右。要求宽敞明亮、以便于放置多个实验台和相关设备,方便多人同时工作;同时要求通风条件好,便于气体交换;实验室地面应便于清洁,并应进行防滑处理。

组培苗的炼苗方法

组培苗的炼苗方法 Document serial number【KK89K-LLS98YT-SS8CB-SSUT-SST108】

试管苗的炼苗和移栽 一、目的要求 熟练掌握组培苗移栽驯化技术。 二、用品 1、材料:生根组培苗; 2、器具用品:镊子;水盆;蛭石、珍珠岩、草木灰;育苗盘;喷雾器;竹签等。 三、方法与步骤 (一)练苗将生根的组培苗从培养室取出,将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右,遮阴度宜为50%~70%。然后打开瓶口,再放置3~7天。 (二)基质灭菌将蛭石、珍珠岩和草木灰分别用聚丙烯塑料袋装好,在高压灭菌锅中灭菌20分钟,或者采用高温干热灭菌法灭菌,灭菌后冷却备用。 (三)育苗盘准备取干净的育苗盘,将蛭石和珍珠岩按1:1混合,然后倒入育苗盘中,用木板刮平。将育苗盘放入1-2cm深的水槽中,使水分浸透基质,然后取出备用。 (四)试管苗脱瓶用镊子将试管苗轻轻取出,放入清水盆中,小心洗去根部琼脂,然后涝出,放入干净的小盆中。 (五)移栽用竹签在基质上打孔,将小苗栽入育苗穴盘中,轻轻覆盖、压实。待整个穴盘栽满后用喷雾器喷水浇平。最后将育苗盘摆入到驯化室中,正常管理。 四、作业 记录试管苗移栽驯化步骤,统计移栽成活率。 解释: 1、闭瓶强光练苗。当生根后或根系得到基本发育后,将培养瓶移到室外遮阴蓬或温室中进行强光闭瓶练苗5~20天左右,遮阴度宜为50%~70%。 2、开瓶强光练苗。将培养容器的盖子或塞打开,在自然光下进行开瓶练苗3~7天,正午强光或南方光照较强地区要注意采取措施如用阴蓬或温室避免灼伤小苗。如果在开盖容器中培养不超过1周,一般不会引起含蔗糖培养基的污染问题。开瓶炼苗可以分阶段进行,即首先松盖(或塞)一两天,然后部分开盖一两天,最后完全揭去盖。这种方法在相对湿度十分低的屋内特别有好处。培养容器的开口大小也影响开盖的速度,开口大的瓶盖应比开口小的瓶盖除去的速度慢一些。 3、试管苗的移栽。试管苗移栽是组织培养过程的重要环节,这个工作环节做不好,就会造成前功尽弃。试管苗从琼脂培养基中移出时要用长镊子小心取出,彻底清洗干净根部(因为残留的蔗糖和营养会成为潜在的致病微生物的生长培养基,洗不净容易引起移栽苗烂根死亡),并且避免损坏根系。之后直接移栽或使用0.1%~0.3%的高锰酸钾或多菌灵等杀菌剂溶液中清洗,然后用清水清洗后移入苗床或盆钵,也可用水清洗后用多菌灵溶液浸泡10~30分钟后移栽,栽后淋足定

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