倒置生物显微镜及成像系统技术参数

倒置显微镜技术要求

一、主要技术要求：

★1、研究型主机

1）主机带左、右侧端口,端口成像视场数大成像视场数可达25mm；

2)长寿命LED透射光照明，灯泡使用寿命5万小时;

3)主机标配1.5X中间变倍,可选配2X;

4)可以实现明场\荧光\相差\微分干涉观察.

2、双目镜筒及机械载物台

10X/22mm目镜，双目屈光度均独立可调, 双目头基座带照相端口；人机学，黑色硬铝防蚀涂层，载物台表面经超硬防滑处理，确保经久耐用，配置通用标本夹,载物台行程X\Y 114X73mm.

3、超长工作距离系统聚光器

65mm的工作距离满足培养瓶、培养皿、多孔板等镜下的直接观察，内置相差模块、明视场孔位和关闭位，方便转换和光路的切换，减光片、隔热片，日光平衡片、绿色滤光片齐备；

★4、切趾超级荧光相差物镜（要求每个物镜均可以观测微分干涉）：4X N.A≥0.13 , W.D≥16.4mm, PhL

10X N.A≥0.30, W.D≥15.2 mm, Ph1

20XC N.A≥0.45, W.D≥8.2-6.9mm

40XC N.A≥0.60, W.D≥3.6-2.8mm, PH-2

5、载物台：

大面积长行程手动载物台，行程X≥±57mm、行程Y≥±36.5mm，不需要

移动多孔板只需移动载物台就可观察整个多孔板，移动行程可3级调节，多种标本夹可选、载物台移动手柄长/中/短可选。

★6、落射荧光装置：

1）L型荧光主体具备消杂光设计的高质量滤光块，可对中的视场光阑，圆形，方形，长方形三种可任意选；

2）单层六工位荧光转盘，可以扩展至12工位滤光块，配紫外，蓝色，绿色激发滤块, 三色窄带滤光片。

7、数码摄像头：

★1）芯*8.1真实1625万像素（非插值）；

★2）芯片尺寸36.0×23.9 mm（1.7英寸）；

3）单次拍摄其像素4908×3264像素（全像素）下实现6fps的拍摄速度，1636×1088像素（3×3平均）可获得45fps的拍摄速度；帧率：6fps(满幅)；

★4）2.5倍F接口；

5）曝光时间:100usec-120sec。

8、显微图像采集及分析软件

1）可图像采集。可测量直线长度、曲线长度、矩形面积、圆面积、周长、角度等多个参数，并把测量结果输出到EXcel, 并于后期分析处理；

2）可以对多幅视野相邻的图像做大图拼接；

3）对荧光图片背景处理，多通道图片做色彩合成，方便显示多染标本的图像及荧光共定位分析；在图像上添加注释、箭头等功能，可以方便的表示图像中的重点关注部位；

4）调节亮度、对比度、伽玛值以及灰度显示范围，并可以单独调节RGB

各通道的亮度，方便地对图像添加伪彩色；

5）在图像上添加注释、箭头等功能，可以方便的表示图像中的重点关注部位。

二、人员培训：

至少3人次。

三、售后服务：

质保2年，报修2小时之内响应。

细胞室无菌技术标准操作规程

细胞室无菌技术标准操作规程 一、无菌室的灭菌 1. 定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然 后用3%。来苏尔或者新洁尔灭或者0.5 %过氧乙酸擦拭。超净台上滤网需每月清洗 1 次。 2. CO孵箱（培养箱）灭菌：用75%酒精擦拭或者0.5 %过氧乙酸，再用紫外灯照 射。 3. 实验前灭菌：打开紫外灯、超净台各20-30 分钟。在开紫外灯杀菌前，应确认无 菌室无人后方可开紫外灯杀菌。 4. 实验后灭菌：用75%酒精（3%新洁尔灭）擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物 台。 5 ?定期检测下列项目：钢瓶之CO压力；CO培养箱之CO浓度、温度、及水盘是 否有污染（水盘的水用无菌水，每周更换）；无菌操作台内之气流压力，定期更换紫外线灯管及HEPAi滤膜，预滤网（300小时/预滤网，3000小时/HEPA。 6. 水槽可添加消毒剂（Zephrin 1:750 ），定期更换水槽的水。 二、实验人员的无菌准备 1. 肥皂洗手； 2. 穿好隔离衣，放好拖鞋； 3. 用75%酒精棉球擦净双手； 三、无菌操作的要点 1. 凡是带入超净工作台内的酒精、PBS培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦 拭瓶子的外表面； 2. 靠近酒精灯火焰操作； 3. 器皿使用前必须过火灭菌； 4. 继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火； 5. 各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液

6. 吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。 细胞传代培养（消化法）标准操作规程 一、原理 细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，就必须进行传代（再培养）。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分 瓶。 二、材料和试剂 1. 无菌磷酸生理缓冲液（PBS） 2. 胰酶-EDTA溶液（0.05%胰酶-0.53mM EDTA-4Na）:以10ml 分装于15 ml 无菌离心管中，保存于-0C，使用前放在37C水槽回温。 3. 新鲜培养基 4. 无菌吸管/离心管/培养瓶 三、操作步骤 1. 传代前准备 （1）预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37 r水浴锅内预热。 （2）用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 （3）正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。 （4）点燃酒精灯：注意火焰不能太小。 （5）准备好将要使用的消毒后的空培养瓶。 （6）取出预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。 （7）从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。 (8)打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。

倒置生物显微镜及成像系统技术参数

倒置显微镜技术要求 一、主要技术要求： ★1、研究型主机 1）主机带左、右侧端口,端口成像视场数大成像视场数可达25mm； 2)长寿命LED透射光照明，灯泡使用寿命5万小时; 3)主机标配1.5X中间变倍,可选配2X; 4)可以实现明场\荧光\相差\微分干涉观察. 2、双目镜筒及机械载物台 10X/22mm目镜，双目屈光度均独立可调, 双目头基座带照相端口；人机学，黑色硬铝防蚀涂层，载物台表面经超硬防滑处理，确保经久耐用，配置通用标本夹,载物台行程X\Y 114X73mm. 3、超长工作距离系统聚光器 65mm的工作距离满足培养瓶、培养皿、多孔板等镜下的直接观察，内置相差模块、明视场孔位和关闭位，方便转换和光路的切换，减光片、隔热片，日光平衡片、绿色滤光片齐备； ★4、切趾超级荧光相差物镜（要求每个物镜均可以观测微分干涉）：4X N.A≥0.13 , W.D≥16.4mm, PhL 10X N.A≥0.30, W.D≥15.2 mm, Ph1 20XC N.A≥0.45, W.D≥8.2-6.9mm 40XC N.A≥0.60, W.D≥3.6-2.8mm, PH-2 5、载物台： 大面积长行程手动载物台，行程X≥±57mm、行程Y≥±36.5mm，不需要

移动多孔板只需移动载物台就可观察整个多孔板，移动行程可3级调节，多种标本夹可选、载物台移动手柄长/中/短可选。 ★6、落射荧光装置： 1）L型荧光主体具备消杂光设计的高质量滤光块，可对中的视场光阑，圆形，方形，长方形三种可任意选； 2）单层六工位荧光转盘，可以扩展至12工位滤光块，配紫外，蓝色，绿色激发滤块, 三色窄带滤光片。 7、数码摄像头： ★1）芯*8.1真实1625万像素（非插值）； ★2）芯片尺寸36.0×23.9 mm（1.7英寸）； 3）单次拍摄其像素4908×3264像素（全像素）下实现6fps的拍摄速度，1636×1088像素（3×3平均）可获得45fps的拍摄速度；帧率：6fps(满幅)； ★4）2.5倍F接口； 5）曝光时间:100usec-120sec。 8、显微图像采集及分析软件 1）可图像采集。可测量直线长度、曲线长度、矩形面积、圆面积、周长、角度等多个参数，并把测量结果输出到EXcel, 并于后期分析处理； 2）可以对多幅视野相邻的图像做大图拼接； 3）对荧光图片背景处理，多通道图片做色彩合成，方便显示多染标本的图像及荧光共定位分析；在图像上添加注释、箭头等功能，可以方便的表示图像中的重点关注部位； 4）调节亮度、对比度、伽玛值以及灰度显示范围，并可以单独调节RGB

Nikon ECLIPSE Ti倒置荧光显微镜使用说明

Nikon ECLIPSE Ti倒置荧光显微镜使用说明 操作步骤： 本显微镜的荧光光路与明视场（相差、DIC也属明视场）光路相对独立。当使用明视场时，无需打开荧光光源，进打开总电源即可。当使用荧光观察时，可同时打开总电源和荧光电源。 明视场观察： 1.开机：按动总电源开关“1”处接通电源，此时开关和指示灯点亮，打开显微镜底座左侧的透射照明器开关，从小到大调节照明器开关下方的亮度调节旋钮，使照明亮度适当。 2.首先将聚光器模板A放入光路，用10×物镜对样品进行对焦，调节目镜的屈光度调节环，然后换用40×物镜观察样品。 3.关机：将亮度调节旋钮旋至亮度最暗位置，关掉显微镜底座左侧的透射照明器开关，然后按动总电源开关“0”处关闭电源。 DIC微分干涉观察： 开机、关机等与明视场观察相同，区别是要使用聚光器相对应的DIC模板N1及起偏器、检偏器，将其放入光路后，再使用专用的银白色DIC物镜对焦观察。在观察过程中可旋转起偏器，达到最佳的观察效果。 相差观察： 开机、关机等与明视场观察相同，区别是要使用聚光器相对应的相差模板PH1。 荧光观察： 1.开机：先打开荧光灯电源开关，然后按住电源开关上方的荧光灯激发按钮3秒钟后松开，即可见荧光灯点亮。 2.打开荧光转盘上的荧光拨杆至“0”位置，此时荧光光路打开。旋转荧光转盘，转入所对应的滤光片位置即可进行荧光观察；在观察过程中可插入位于荧光灯源前方的减光片，以改变荧光强度，减弱对活细胞样品的损伤。 3.关机：直接关掉荧光灯电源开关即可。 注意事项： 1.短时间内频繁开关荧光灯电源，将极大的缩短荧光灯寿命。 2.荧光光源打开后即可使用，但必须使用20分钟才可以关闭；关闭30分钟以后才可以再次打开，否则会导致荧光灯损坏。 3.不要同时反方向转动显微镜左右两侧的调焦钮，否则会导致显微镜损坏。 4.粗动调焦钮达到限定位置后，如果继续向同一方向旋转会引起显微镜故障。请不要旋转过度。 5.显微镜光源在工作时会产生高温，因此小心不要接触光源以防烫伤，也不要将易燃品如纸张、布、塑料和酒精等放置于光源附近。

OLYMPUSIX51倒置显微镜操作规程-厦门大学医学院中心试验室

倒置荧光显微镜 操作规程 Olympus IX5 厦门大学医学院中心实验室 黄静茹 2017年3月

说明： ①透射光主开关；②汞灯高压电源开关；③透射光光强控制钮；④滤色片架； ⑤光路选择杆；⑥X轴和Y轴调节钮；⑦物镜转盘；⑧粗/微调焦旋钮； ⑨双目观察筒；⑩屈光度调节环；?聚光镜高度调节钮；?聚光镜对中旋钮；?视场光阑调节杆；?孔径光阑调节杆；?聚光镜转盘；?荧光光闸（SHUTTER）；?荧光激发块转盘；?荧光减光阀

正式操作仪器之前请注意如下事项： 首先要在仪器预约保护时间内及时使用本人注册的校园卡刷卡开始实验。 1.查看仪器使用记录本，如之前使用者有记录仪器异常情况，请不要开机使用。 2.查看仪器整体有无异常，周围环境是否正常，需要时要开启室内空调，检查 并清空除湿机水箱。 3.查看仪器使用记录本及刷卡机“日历”，如之前使用者刚刚关机，请等候30 分钟以上再开机使用。 一、开机 1、打开透射光源（白光）主开关①； 2、打开荧光光源（汞灯高压电源）②； 3、打开电脑，进入cellSens Standard工作站； 备注：标本为HE染色、免疫组化时，不需要打开荧光光源；标本为荧光染料染色时，一般也不需要打开白光光源。 二、明场观察（Bright Field BF） 1、正确放置标本，BF主要用于HE染色、免疫组化标本； 2、转动荧光激发块转盘?到“6”的位置； 3、转动聚光镜转盘?到“BF”位置，直到听到咔嗒声； 4、将光路选择杆⑤推进去（选择目镜观察光路）； 5、转动物镜转盘⑦，选用合适的物镜，调节白光光强控制钮③至合适的强度，调节粗/细调焦旋钮⑧聚焦观察,根据需要调节瞳间距⑨和屈光度⑩； 三、相衬观察（Phase contrast PH) 1、正确放置标本，PH主要用于没有任何染色的、较透明的标本； 2、转动荧光激发块转盘?到“6”的位置； 3、转动物镜转盘⑦，选用合适的物镜； 4、转动聚光镜转盘?，使相衬光学元件与所用物镜相匹配（见表1）； 5、将光路选择杆⑤推进去（选择目镜观察光路）； 6、调节光强控制钮③直至合适的强度，调节粗/细调焦旋钮⑧进行聚焦观察,根

倒置显微镜URS

倒置显微镜URS 目录 1.目的 (2) 2.范围 (2)

3.职责 (3) 4.内容 (3) 4.1概述 (3) 4.2法规要求 (3) 4.3安装要求 (3) 4.4运行要求 (5) 4.5电气、自动控制要求 (6) 4.6安全要求 (6) 4.7文件要求 (6) 4.8服务要求 (7) 5.附件 (7) 1.目的 本URS是一份用于从用户的角度定义抗体研究室倒置显微镜的法规要求、安全要求及文件要求等各方面要求的关键文件。用于指导选型，单位按照我公司的相关要求并结合相关规范进行设计、安装及后期验证等一系列工作。使所购买的倒置显微镜满足本URS的要求。 2.范围 本URS仅用于武汉生物制品研究所有限责任公司抗体研究室倒置显微镜的购买。

3.职责 4.内容 4.1概述 抗体研究室需购买1台具有照相功能的倒置显微镜，用于在细胞培养相关实验中进行相关显微观察和研究。 4.2法规要求 4.2.1 GMP要求 《药品生产质量管理规范》（现行版） 《药品GMP指南》无菌药品（现行版） 4.2.2安全及环保要求 N/A 4.2.3其他法规要求 《良好自动化生产实践指南第五版》GAMP5 21CFR Part 11《电子记录和电子签名》 符合数据完整性相关法规要求 4.3安装要求 4.3.1 安装位置 显微镜需安装在抗体研究室细胞培养实验室。 4.3.2安装尺寸 4.3.2.1 显微镜的形式尺寸应符合制造商说明书及技术文件规定的要求。

4.3.2.2供应商必须给出显微镜设计选型方案及相应附件设计选型方案，并交给我公司使用部门及工程类部门审核。 4.3.3地面承重 重量（kg）其重量不超出工作台面承重要求。 4.3.4可用的公用系统 N/A 4.3.5洁净级别及房间环境条件 4.3. 5.1 工作环境温度：能适应5℃～40℃环境。 4.3. 5.2 工作环境湿度：至少包括45%～65%。 4.3. 5.3 工作环境洁净级别：普通区。 4.3.6 可用的能源配置 4.3.6.1交流电电源：～220V，50Hz。 4.3.7外观及材质要求 4.3.7.1倒置显微镜外观应端正、整齐，不得有明显的偏歪、毛刺和锈蚀等缺陷。表面易于清洁，能耐受VHP消毒。 4.3.7.2倒置显微镜内部表面不得有凹陷、毛刺和锈蚀等缺陷。 4.3.7.3标记：至少应有以下永久贴牢和清楚易认的标记： （1）制造/供应单位； （2）产品注册号及序列号； （3）型号标记； （4）生产日期或编号。 4.4运行要求 4.4.1原辅料、包装材料、产品的规格标准 N/A 4.4.2设备效率、产能 N/A 4.4.3工艺参数范围 4.4.3.1基本运行参数： 4.4.3.1.1目镜：三目镜筒，瞳距50-75mm。可同时观察和照相。 *4.4.3.1.2摄像头：真实物理像素不低于2560×1920（500万像素），具有三种以上输出方式：网络输出；DVI数字输出；USB数字输出。具有自动白平衡和拍摄按钮。

倒置荧光显微镜操作说明

显微镜及数码成像系统操作简要 第一部分观察方法步骤 1、明场观察方法步骤 2、相差观察方法步骤 3、荧光观察方法步骤 第二部分使用IPP拍摄图像流程(相差观察、荧光观察) 第三部分使用BX2-BSW拍摄图像流程(明场观察)

1、明场观察方法步骤 步骤 涉及部件 主开关拨到“I ” 准备工作：柯勒照明光轴中心调节 第一次观察须完成此调试，完成后不需要再调节，直至装卸过部件后，使用过程中请不要扭动聚光镜中心调节旋钮。 ① 聚光镜升高到最高位置 聚光镜高度升降旋钮 ② 用10X 物镜聚焦至清晰 ③ 视场光阑打至最小 视场光阑 ④ 逐步下降聚光镜，使视场中出现清晰正多边形图像 聚光镜升降旋钮 ⑤ 调节聚光镜中心调节旋钮，使正多边形移至视场中心 聚光镜中心调节旋钮 ⑥ 逐步打开视场光阑，使正多边形与视场边缘内切 视场光阑 ⑦ 稍加大视场光阑，使它的图象刚好与视场外切即可 视场光阑

步骤 涉及部件 I ” 载物台、标本夹 3、荧光观察方法步骤 准备工作：高压汞灯对中（第一次观察时调整，以后观察时不需调整，除非更换汞灯） 步骤 涉及部件 主开关拨到“I ” CD+或CD-钮

主开关拨到“I ” ND 片插槽 /孔径光阑 准备工作： 高压汞灯对中（第一次观察时调整，以后观察时不需调整，除非更换汞灯） 调整完成后，请不要触动对中部件，如汞灯对中旋钮，视场光阑对中钮等。 ，待弧 载物台

观察筒 视场光阑中心调节钮 第二部分使用IPP 拍摄图像流程 1. 在桌面点击以下图标打开IPP。 2. 在菜单栏中，（采集）Acquire 菜单下点击（视频/数字图像采集）Video/Digital Capture，或点击工具栏中，即出现控制CCD 拍照的对话框。

倒置式金相显微镜的操作规程

倒置式金相显微镜的操作规程 摘要:倒置式金相显微镜的实用操作规范, 可以保证金相显微观察的效果, 也利于设备保护。但是,更重要的是规程背后包含更加丰富的内容, 这才是金相显微镜操作过程中需要深入了解的。本文介绍了倒置式金相显微镜的操作规程, 规程细节的详细分析, 以及在实践教学中应用、维护。 关键词: 倒置式; 金相显微镜; 操作规范; 日常维护; 在有些专业显微镜的使用频率非常高的, 有必要全面提高学生的显微镜技术。生物显微镜的操作, 可参考的文献比较多, 但是文献中介绍金相显微镜操作的比较少, 特别是倒置式金相显微镜。由于对样品观察面与背面平行度没有要求, 制样困难小,倒置式金相显微镜的实际应用非常多; 但现在还看不到一个比较适用、完整的。我们根据实际操作经验, 在正确使用、维护显微镜方面介绍一些经验, 供大家参考。 1. 现有文献的不足 随着技术的提高显微镜在不断地更新换代, 显微镜使用方法也要不断地调整。生物显微镜如此, 金相显微镜也是如此。而所能见到的有关金相显微镜操作方面的国内文献在这方面动作比较慢,不适应现在的要求。 1. 1. 关于变压器 近十几年来, 金相显微镜的变压器都已经实现了内置, 操作者从一般的角度出发, 不用再关心是否要连接到一个变压器上, 是否处于安全电压伏数的问题。国外在80年代初, 国内在80年代末, 基本实现了这一设计。不过, 很多最新出版的有关这方面的专业书籍, 还是沿用陈旧的说明: 注意不要直接插到220伏的电源上, 这就太落伍了。当然, 对于早期的显微镜还是需要考虑的。不过只应在操作说明的特别关注部分注明即可, 基本操作规范还是应该跟上技术、设计的发展。 1. 2. 偏重于正置式金相显微镜 在较早的文献中, 关于金相显微镜的操作类似如下的说明是主流, 为保证在聚焦过程中使物镜触及试样, 操作的次序应该是先调节粗动螺丝, 使物镜接近试样的表面, 再通过目镜观察试样, 调整粗动旋钮, 使物镜朝着离开试样的方向移动。必须养成这种操作习惯。有关金属显微组织检验方法的国家标准中也是这样的叙述: 聚焦调节时, 物镜头部不能与试样接触, 应先转动粗调旋钮使物镜尽量接近试样(目测), 然后从目镜中观察的同时调节粗调旋钮, 使物镜渐渐离开样品直到看到显微组织映像时, 再使用微调旋钮调至映像清晰为止。这样的描述, 适用于正置式金相显微镜, 而不太适用于倒置式金相显微镜, 因为使用者根本无法实现这样的操作, 尤其是在采用高倍物镜时, 根本无法观察到物镜与样品表面的距离变化。 1. 3. 操作、维护混杂在一起 这是最常见的。维护工作对一般操作者来讲不必一定了解, 混杂在一起, 容易干扰重点关注的地方。应单独列出管理者、维护者关注的部分。 1. 4. 没考虑不同厂家的金相显微镜在机械构造上的差异

倒置生物显微镜

XSP-20C 系列 倒置生物显微镜 一、用 途：XSP-20C 系列倒置生物显微镜是配有长工作距离平场消色差物镜、大视野目镜、双目观察。倒置生物显微镜还配有特长工作距离聚光镜、同时配有相衬装置及长工作距离平场相衬物镜，具有在培养瓶或培养皿内进行显微观察的特点。倒置生物显微镜可以观察不经染色的透明活体。倒置生物显微镜特别适用于对活体细胞和组织、流质、沉淀物等进行显微研究，是生物学、细胞学、肿瘤学、遗传学、免疫学等研究工作的理想仪器。可供科研、高校、医疗、防疫质检和农牧等部门使用。 二、成像系统简介：XSP-20CS/数码型研究级倒置生物显微镜系统是将精密的光学显微镜技术、先进的光电转换技术与尖端的计算机图像处理技术完美地结合在一起而开发研制成功的一项高科技产品。可以在显示屏上很方便地观察实时动态图像,并能将所需要的图片进行编辑、保存和打印。 三、技术参数： 1.目镜 类 别 放大倍数（X ） 视场直径(mm) 平场目镜 10X φ20 2.物镜 类别 放大倍数（X ） 数值孔径（mm ） 工作距离（mm ） 盖玻片厚度（mm ） 长工作距离平 场消色差物镜 PLL10X 0.25 8.1 - PLL25X 0.40 4.8 1.2 PLL40X 0.60 3.3 1.2 长工作距离平 场相衬物镜 PLL10X 0.25 8.1 - PLL25X 0.40 4.3 1.2 PLL40X 0.60 3.3 1.2 3.光学放大倍数：100X 250X 400X 4.系统参考放大倍数：50X-2600X 5.瞳距调节范围：53-75mm 6.大台面载物台：可拆卸载物方板：85mm×128mm 移动范围：79mm×112mm 7.带限位和调节松紧装置的同轴粗微动调焦系统，微动手轮格值为：0.002mm 8.聚光镜：特长工作距离聚光镜（带相衬装置）：工作距离：50mm 9.光源：6V/30W 卤素灯(亮度可调)；220V/50Hz 10.防霉：特有的防霉系统 11.数码相接专业适配镜接口 12．1600万像素佳能专业数码相机 四、成像系统配套件： 数码相机型倒置式生物显微镜（XSP-20CS ）：1、显微镜 2、适配镜 3、专用数码相机（标配）

细胞传代标准操作规程版

细胞传代培养SOP（消化法） 具体步骤如下： 1. 传代前准备： 1.1预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37C水浴锅内预热。 1.2 用75％酒精擦拭经过紫外线照射的超净工作台和双手。 1.3 正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。 1.4 点燃酒精灯：注意火焰不能太小。 1.5 准备好将要使用的消毒后的空培养瓶，放入微波炉内高火，8 分钟再次消毒。 1.6 取出预热好的培养用液：取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超净台内。 1.7 从培养箱内取出细胞：注意取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。 1.8 打开瓶口：将各瓶口一一打开，同时要在酒精灯上烧口消毒。 2. 胰蛋白酶-EDTA消化： 2.1加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶-EDTA液）,注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37T < 2.2 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。 2.3 吸弃消化液加入培养液：弃去胰蛋白酶液，注意更换吸管，加入新鲜的培养液。 3. 吹打分散细胞： 3.1 吹打制悬：用滴管将已经消化细胞吹打成细胞悬液。 3.2吸细胞悬液入离心管：将细胞悬液吸入10ml离心管中。 3.3 平衡离心：平衡后将离心管放入台式离心机中，以1000转/分钟离心6-8 分钟。 3.4弃上清液，加入新培养液：弃去上清液，加入2ml培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。 4. 分装稀释细胞： 4.1 分装：将细胞悬液吸出分装至2-3 个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。 4.1 显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要是计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5X 105/ml。最后要做好标记。 5. 继续培养： 用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO培养箱中继续培养。传代细胞 2 小时后开始贴附在瓶壁上。当生长细胞铺展面积占培养瓶底面积25％时

生物倒置光学显微镜实验

实验十八生物倒置光学显微镜实验 【引言】 光学显微镜是利用光学原理，把人眼所不能分辨的微小物体放大成像，以供人们提取微细结构信息的光学仪器，已有300多年的发展史。 1590年，荷兰和意大利的眼镜制造者已经造出类似显微镜的放大仪器。1610年前后，意大利的伽利略和德国的开普勒在研究望远镜的同时，改变物镜和目镜之间的距离，得出合理的显微镜光路结构，当时的光学工匠遂纷纷从事显微镜的制造、推广和改进。 17世纪中叶，英国的胡克和荷兰的列文胡克，都对显微镜的发展作出了卓越的贡献。1665年前后，胡克在显微镜中加入粗动和微动调焦机构、照明系统和承载标本片的工作台。这些部件经过不断改进，成为现代显微镜的基本组成部分。 1673～1677年期间，列文胡克制成单组元放大镜式的高倍显微镜，其中九台保存至今。胡克和列文胡克利用自制的显微镜，在动、植物机体微观结构的研究方面取得了杰出的成就。 19世纪，高质量消色差浸液物镜的出现，使显微镜观察微细结构的能力大为提高。1827年阿米奇第一个采用了浸液物镜。19世纪70年代，德国人阿贝奠定了显微镜成像的古典理论基础。这些都促进了显微镜制造和显微观察技术的迅速发展，并为19世纪后半叶包括科赫、巴斯德等在内的生物学家和医学家发现细菌和微生物提供了有力的工具。 在显微镜本身结构发展的同时，显微观察技术也在不断创新：1850年出现了偏光显微术；1893年出现了干涉显微术；1935年荷兰物理学家泽尔尼克创造了相衬显微术，他为此在1953年获得了诺贝尔物理学奖。 古典的光学显微镜只是光学元件和精密机械元件的组合，它以人眼作为接收器来观察放大的像。后来在显微镜中加入了摄影装置，以感光胶片作为可以记录和存储的接收器。现代又普遍采用光电元件、电视摄象管和电荷耦合器等作为显微镜的接收器，配以微型电子计算机后构成完整的图象信息采集和处理系统。

尼康Ti倒置显微镜简易操作流程

尼康Ti倒置显微镜简易操作流程 明场观察方法： 1．开机程序：打开电源控制器上开关至1位置接通电源，此时开关指示灯（绿灯亮），按下机身左前方的照明器开关下方的亮度调节旋钮，使照明亮度达到适当位置。 2．先将聚光器转盘转至A位置 3．根据需要再将10X物镜放入光路，旋转粗微调节旋钮对样品进行对焦，可根据各自情况将目镜调整至适合自己的焦距。另外，可根据每人不同视力调节目镜上的屈光度调节环，以调节最清楚状态。 4．之后便可根据样品要求选择合适的物镜进行观察。 5．关机程序：先将亮度调节旋钮旋到最暗处，然后关闭机身左前方的照明器开关（白色），最后关闭控制器上开关至0处，绿色指示灯即可。 微分干涉（DIC）观察法： 6．先将聚光器上的DIC起偏器和荧光转盘下的DIC检偏器同时插入光路。 7．同时将聚光器转盘上对应DIC摸块转至光路。 8．对焦步骤与明场观察相同 9．使用DIC方式观察时，需将物镜上所标注的DIC标识（如N1或N2）和聚光器上DIC标识模块对应使用即可。本机使用10X，20X物镜时将聚光器转盘旋至N1位置。 霍夫曼观察法： 1．先取下聚光器上方的DIC起偏器，然后装上霍夫曼（HMC）专用起偏器。 2．拔出荧光转盘下的DIC检偏器，同时将聚光器转盘上对应的霍夫曼模块转至光路 3．对焦步骤与明场观察相同。 4．使用霍夫曼方式观察时，需将物镜上所标注的霍夫曼标示和聚光器上的霍夫曼标识模块对应使用即可。 荧光观察法： 1.开机程序：先打开汞灯开关1位置接通电源，此时面板上绿色开关指示灯亮，然后按住 汞灯触发按钮2至3秒，待黄色指示灯亮了即可使用汞灯进行荧光观察。 2.旋转荧光滤色块转盘将所需的荧光块放入光路，然后将荧光滤色块转盘上的荧光闸拨至 0位置即可进行荧光观察。 3.在观察过程中入需要，可根据荧光强度插入相应的减光片 4.关机程序：直接关掉汞灯电源开关即可。 CCD使用时（软件）开机顺序： 1.先将计算机打开，然后打开CCD U2控制器待绿色指示灯不再闪烁，再双击软件图标打 开软件。 2.关机则相反，先关软件，再关CCD U2控制器，最后关闭电源。 汞灯使用特别注意事项： 使用荧光进行观察时，开机后必须运行或工作半小时后方可关机（汞灯电源），关机后必须间隔半小时后才可再次开机使用。

细胞冻存与细胞复苏标准操作规程(SOP)

背景知识： 细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；细胞储存在液氮中，温度达-196℃，理论上储存时间是无限的。 原理： 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。 主体内容（操作步骤）： 一、材料 （一）仪器 1. 净化工作台 2. 离心机 3. 恒温水浴箱 4. 冰箱（4℃、-20℃、-70℃） 5. 倒置相差显微镜 6. 培养箱 7. 液氮冰箱 易生物仪器库：https://www.wendangku.net/doc/184138399.html,/yp/product-list-42.html （二）玻璃器皿 1. 吸管（弯头、直头） 2. 培养瓶 3. 玻璃瓶（250ml、100ml） 4. 废液缸 （三）塑料器皿 1. 吸头 2. 枪头 3. 胶塞 4. 移液管（10ml） 5. 15ml离心管 6. 冻存管（1～2ml） （四）其他物品 1. 微量加样枪 2. 红血球计数板 3. 记号笔 4. 医用橡皮膏 5. 移液枪 （五）试剂 1. D-Hanks液 2. 小牛血清

倒置荧光显微镜技术参数

倒置荧光显微镜技术参数 用途：可观察细胞培养，用于研究工作。 1．工作条件 1.1 适于在气温为摄氏-40℃～＋50℃的环境条件下运输和贮存，在电源220V（ 10%）/50Hz、气温摄氏 -5℃～40℃和相对湿度85%的环境条件下运行。 1.2 配置符合中国有关标准要求的插头，或提供适当的转换插座。 2．主要技术指标 2.1 研究级倒置显微镜 2.1.1 显微镜镜体，优先选择U型光路 2.1.1.1 物镜转换器：6孔式物镜转换器 2.1.1.2 光学系统：无限远校正光学系统，齐焦距离≤45mm 2.1.2 透射光照明装置 2.1.2.1 100W卤素灯透射光照明装置，视场可变光阑可调 2.1.3 聚光镜：超长工作距离聚光镜：4孔转盘，孔径光阑可调，N.A.0.3 W.D.73mm 2.1.4 物镜 2.1.4.1 万能平场半复消色差相差物镜4X（N.A.0.13, W.D. 17.0mm） 2.1.4.2 平场消色差相差物镜10X（N.A.0.25, W.D. 10mm） 2.1.4.3 长工作距离消色差相差物镜20X（N.A.0.40, W.D. 3.2mm） 2.1.4.4 长工作距离消色差相差物镜40X（N.A.0.55, W.D. 2.2mm） 2.1.5 反射荧光系统 *2.1.5.1 荧光滤色镜盒：备有可装入8个滤色镜立体镜套的转盘式滤色镜盒 2.1.5.2 荧光激发块：蓝色（B）、绿色（G）、紫外（U） 2.1.5.3 光源：备有带聚光透镜和超高压汞灯变压器的100W超高压汞灯 2.2 高分辨率显微专用数码相机 *2.2.1 像素：≥1728万像素 2.2.2 制冷系统：低于环境温度10度 *2.2.3 测光方式：可达0.1% 2.2.4 图像采集速度：≥15 幅/秒（1360 X 1024） 2.2.5 提供2x2、4x4的像素混合模式（binning） 2.2.6 图像传输速度：3秒（最高分辨率） 注：*表示为重要的必须满足指标

olympus_i71倒置显微镜操作规程

OLYMPUS IX71倒置显微镜操作规程 编写人：於锋时间 一、目的 正确使用倒置显微镜对细胞标本的形态特征进行观察，为生命科学的研究提供更多可靠的实验数据。 二、原理 倒置显微镜系统（IX71系列）是在透镜成像原理基础上发展起来的显微观察系统，利用卤素灯为光源，光线经过聚光镜汇聚后透过标本，通过物镜对标本进行聚焦放大成像，最后通过目镜把物镜所成的像再次放大，从而使实验者能够清晰的分辨体外培养的细胞的形态以及内部结构，主要用于体外活细胞培养形态观察，根据实验需求配置了明场、暗场、相差、荧光等技术模块。 三、主要操作规程 相差观察： 1.打开主开关 2.转动光路选择盘到“眼睛”位置。 3.装上观察样本。使用10X物镜，将聚光镜转盘转到“BF”位置。 4.瞳距调节 5.屈光度调节：通过螺旋目镜屈光度调节环。 6. 通过粗微调对样本准确调焦。选择所用物镜，10X，20X，40X。 相差观察时转动聚光镜转盘到“PH”位置。相差只能用10X，20X物镜观察和摄影。 7. 调节光线强度：明场观察时，调节孔径光栏。相差观察时，打开孔径光栏 8. 观察。 荧光观察步骤： 1.打开荧光供电装置开关，关掉显微镜主开关。等大约10分钟后电弧稳定。 2.连接UV防护板 3.把光路选择转盘和选择杆转到“眼睛”位置。 4.使相应的荧光激发滤色镜进入光路 5.根据标本不同，选择U，B，G激发。

6.打开激发光光闸使光通过把所用物镜推入光路10X，20X，40X。 7.把标本放在载物台上，对标本进行调焦，如果荧光衰退快，请将激发光光闸推入光路 使用1小时后关掉电源开关。 普通明场观察： 1.打开明场电源开关（“︱”为开，“○”为关） 2.将样品置于载物台上 3.将光路选择旋钮调至观察位置 4.从低倍镜开始观察，相差环拨到明场（BF）位置，荧光滤色块转盘拨到“1”的位置 5.调节透射光光强，调焦，找到预观察视野 6.依次换到高倍镜，观察样品 7.拍照时将光路选择旋钮调至相机位置 关机： 1. 关闭汞灯电源（注意：汞灯需使用半小时以上方可关闭，关闭半小时以后方可再次开启） 2. 将透射光强调到最小，透射光选择按钮按出 3. 关闭明场电源开关 4. 将镜头转到低倍镜，取出样品，若使用过油镜用干净的擦镜纸擦拭镜头 5. 确认数据已经保存，关闭软件 6. 使用光盘拷贝数据（禁止使用移动储存设备拷贝数据） 7. 关闭电脑，登记使用时间、荧光数字等使用情况

倒置金相显微镜安全操作规程

倒置金相显微镜安全操作规程 1内容 本操作规程规定了本公司用于观察金相组织的徕卡倒置式金相显微镜DMILM的相关使用及保养方法，使相关员工能正确使用和维护本公司显微镜。 2范围 本操作规程适用于本公司检验员的操作。 3细则 3.1准备工作 1)检查倒置金相显微镜是否良好。 2)把显微镜放在平整的桌子上。 3)倒置金相显微镜构造如图1所示。 图1倒置金相显微镜 3.2使用 1)被测试样应干燥洁净，其观察面应平整光洁，不得有杂物、凹坑及明显的加工痕迹。 2)取下显微镜防尘罩，打开照明系统电源后，显微镜后部光源灯亮。取下显微镜载物台上的物镜保护盖，将试样平稳放在载物台上。 3)用显微镜直接观察时，调整双目镜的宽度，使双眼能看到同一视场。转动显微镜右侧与载物台相连的手柄，将试样被观察部位移动到视场下，缓慢转动粗调旋钮，当视场内出现模糊的图像时，停止粗调旋钮，改为转动微调旋钮，直到整个视场内出现清晰的图像。 4)转动显微镜底座右侧的照明系统电压调节旋钮，调整光源到适宜亮度。 5)如果要用不同放大倍数进行观察，可转动换物镜旋座到所需要的放大倍数的物镜。 6)如需要对试样组织尺寸进行测量，可通过左侧目镜的目镜测微尺进行尺寸测量。可通过旋转目镜调整微尺方向。 7)如要对试样组织拍照，可通过显微镜与电脑相连的数字摄像头进行拍摄取像，所使用的软件为Profound Iron & Steel 金相图像分析系统软件。 8)使用完毕，盖上物镜保护盖，关闭电源。长时间不使用，则盖上防尘罩。

3.3 Profound Iron & Steel 金相图像分析系统 3.3.1定标 第一次使用，需进行定标。定标就是得到图像像素和常用度量单位间的对应关系，步骤如下： a)打开显微镜。 b)将物台测微尺放于载物台上，打开Profound Iron & Steel 金相图像分析软件，点击图像快速采集按钮，即可观察到显微镜下的图像，使用显微镜调焦系统对图像进行调节，调整好后，点击“抓拍F8”按钮可摄取带有标尺的清晰图像。 c)单击关闭按钮关闭图像摄取窗口，单击“标定标尺”，出现对话框。 d)标尺方式选定“x向线段”，在对话框中输入标尺名称和标尺长度（比如在50×放大倍数下摄取的标尺图像，输入标尺名称为50×，以便于记忆），单位为“公制”。然后在所摄取标尺图像起始处按下鼠标左键，向标尺另一边移动鼠标，直到结束。然后输入选定的测微尺的实际长度，点击“保存标尺”按钮。则50倍放大倍数下的标尺就定好了。 e)如果再定其他倍数下的标尺，重复上述操作。 3.3.2图像处理 a)反色：以图像相反的颜色显示图像，即是对每个像素的像素值都发生变化，灰白图像黑白反转，以突出显示物体。 b)彩色灰度化：将彩色转变为灰色，显示成256级灰度图像。 c)对比度增强：单击该按钮弹出对话框，拖动滑块可调整图像的亮度和对比度。 d)直方图均衡：增强当前图像的对比度和显示动态的边界。 e)二值化：进行阀值分割，将灰度图像转化为二值图像，变成只有两个灰度级的图像，即0和1，1代表物体，0代表背景。 f)二值图像处理：如果初始的阀值分割不能够令人满意，对二值图像的某些形式的出来通常能提高其质量，以便更准确的测量和观察。本软件包括腐蚀、碰撞、开运算、闭运算、收缩、细化、抽骨架、剪枝、粗化、No Touch、填内孔、去孤点、取碎屑、去毛刺等二值图像处理功能。 g)编辑图像：编辑当前图像，对图像像素值直接进行修改，主要作用是孔洞填充、断点连接、分割物体。 h)标注：使用该功能对图像作标注，标注图像的文本信息或迭加标尺等（常用尺寸标注结果已储存，可在对话框“文件”直接打开）。 i)景深扩展：试样不平坦时，景深范围内的图像是清晰的，景深外是模糊的，这是光学系统的物理特征，不能通过调整显微镜来解决。景深扩展功能通过将同一视场不同聚焦面的图像序列进行合成，最终可得到该视场完整清晰的图像。 j)图像拼接：显微镜视野较小，为了得到较大区域的全貌图像，图像拼接功能可以把试样上数幅有关系的图像，通过自动搜索重合区域，拼接成一幅高分辨率的全貌图像。 3.3.3图像变换 a)裁剪：单击“专用”菜单下的“视场设置”，弹出对话框，选择矩形、圆形、椭圆形工具的一种，在图像上单击左键，图像上出现视场，按住左键任意移动视场，选择完毕后，单击“裁剪”按钮。 b)任意角旋转：单击该菜单，弹出对话框，在对话框中输入角度，点击确定，图像可旋转任意角度。 c)水平翻转：将图像水平翻转。

倒置生物显微镜使用操作规程 1、倒置显微镜中最常用的观察方法就是

倒置生物显微镜使用操作规程 1、倒置显微镜中最常用的观察方法就是相差。由于这种方法不要求染色，是观察活细胞和微生物的理想方法。在此提供各种聚光器来满足需要，这种方法提供带有自然背景色的、高对比度的、高清晰度的图像。 2、开机 2.1 接连电源。 2.2 打开镜体下端的电控开关。 3、使用 3.1 准备 3.1.1 将待观察对象置于载物台上。旋转三孔转换器，选择较小的物镜。 3.1.2 观察，并调节铰链式双目目镜，舒适为宜。 3.2 调节光源 3.2.1 推拉调节镜体下端的亮度调节器至适宜。 3.2.2 通过调节聚光镜下面的光栅来调节光源的大小。 3.3 调节像距 转三孔转换器，选择合适倍数的物镜；更换并选择合适的目镜；同时调节升降，以消除或减小图像周围的光晕，提高了图像的衬度。 3.4 观察 通过目镜进行观察结果；调整载物台，选择观察视野。 4、关机 4.1 取下观察对象，推拉光源亮度调节器至最暗。 4.2 关闭镜体下端的开关，并断开电源。 4.3 旋转三孔转换器，使物镜镜片置于载物台下侧，防止灰尘的沉降。 5、日常维护及注意事项

5.1 所有镜头表面必须保持清洁，落在镜头表面的灰尘，可用吸耳球吹去，也可用 软毛刷轻轻的掸去掉。 5.2 当镜头表面沾有油污或指纹时，可用脱脂棉蘸少许无水乙醇和乙醚的混合液（3：7）轻轻擦拭。 5.3 不能用有机溶液清擦其它部件表面，特别是塑料零件，可用软布蘸少量中性洗涤剂清擦。 5.4 在任何情况下操作人员不能用棉团、干布块或干镜头纸擦试镜头表面，否则会刮伤镜头表面，严重损坏镜头，也不要用水擦试镜头，这样会在镜头表面残留一些水迹，因而可能滋生霉菌，严重损坏显微镜。 5.5 仪器工作的间歇期间，为了防止灰尘进入镜筒或透镜表面，可将目镜留在镜筒上，或盖上防尘塞，或用防尘罩将仪器罩住。 5.6 微镜尽可能不移动，若需移动应轻拿轻放，避免碰撞。 5.7 不允许随意拆卸仪器，特别是中间光学系统或重要的机械部件，以免降低仪器的使用性能。

细胞培养传代冻存复苏操作规程(自编)

细胞培养程序 材料 A、仪器 1. 净化工作台， 2. 离心机， 3. 恒温水浴箱， 4. 冰箱（4℃） 5. 倒置相差显微镜， 6. CO2培养箱， 7. 振荡混合仪 8. 酶联免疫检测仪，9. 移液枪，10. 电磁力搅拌机，11. 微孔滤器 B、玻璃器皿 1. 吸管， 2. 小烧杯（100ml）， 3. 废液缸， C、塑料器皿 1. 吸头， 2. 枪头， 3. 96孔培养板， 4. 15ml离心管， 5. 50ml离心管， 6. 胶塞， D、其他物品 1. 微量加样枪， 2. 红血球计数板， F、试剂 1. D-Hanks液， 2. 小牛血清， 3. RPMI1640， 4. 双抗（青霉素、链霉素）， 5. 0.25%胰酶， 6.0.025% EDTA 7. 二甲基亚砜（DMSO）， 8. MTT溶液：称取250mgMTT，放入小烧杯中，加50ml培养液或平衡盐溶液在电磁力搅拌机上搅拌30min，用0.22um的微孔滤器除菌，分装，4℃保存备用，两周内有效。 一、原代细胞培养或细胞株（系）复苏培养： （一）细胞原代培养 1.贴壁细胞培养法： 1）、组织块培养法 将所取得的组织用含青霉素、链霉素400U/ml和400ug/ml的生理盐水漂洗2此，5分钟/次。取出组织尽可能的取出液滴，置青霉素小瓶中，加两滴小牛血清，用剪刀尽可能将其剪碎，用吸管将其泥状的组织点种在培养瓶壁，倒置于37°、5%CO2条件下30分钟后将培养瓶正置，从培养瓶的一端缓缓加入完全培养液（小

牛血清15%、青霉素、链霉素各100U、100ug/ml），使组织块有培养液与其接触为准，轻轻放置于37°培养。待24小时候补液。 或小块放置后,轻轻翻转培养瓶,使瓶底朝上,然后于瓶内加入适量培养基盖好瓶塞,将瓶倾斜放置在37℃温箱内。培养2~4小时，待小块贴附后，将培养瓶缓慢翻转平放，静置培养，动作要轻，严禁摇动和来回振荡，以防由于冲动而使小块漂起而造成培养失败，若组织块不易贴壁可预先在瓶壁涂一薄层血清、胎汁或鼠尾胶原等。开始培养时培养基不宜多，以保持组织块湿润即可，培养24小时后再补液，培养3~5天时可换液，一方面补充营养，一方面去除代谢产物和漂浮小块所产生的毒性作用。 其他方法：消化分离法、器官培养略 2.悬浮细胞培养法 对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、淋巴细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和免疫细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经淋巴细胞分层液分离后接种培养。 （二）细胞株(系)细胞复苏培养 细胞复苏的主要操作步骤 (1)佩戴眼镜和手套，从液氮罐中取出安瓿或冷冻管。 (2)迅速放入38℃水浴中，并不时摇动，在1分钟内使其完全融化。 (3) 然后在无菌下取出细胞。冻存管用75%酒精擦拭消毒后，打开盖子，用吸管将细胞悬液注入离心管中，再滴加10ml培养液。 (4)在1000r/min速度下离心5～10分钟，弃去上层液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，接种浓度1×109/L，置37℃温箱静置培养，次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代。或无需离心直接将细胞加入瓶中，并加入培养基贴壁培养12～24小时后，充去上清，换入新鲜培养基继续培养。加入的培养液的量依冻存的细胞数量，如果冻存数量为106，则稀释10倍使细胞达到105即可。 注意事项 在细胞复苏操作时，应注意融化冻存细胞速度要快，可不时摇动安瓿或冷冻管，使之尽快通过最易受损的温度段(-5～0℃)。这样复苏的冻存细胞存活率高，生

倒置相差显微镜及荧光显微镜原理、使用与注意事项

倒置相差显微镜及荧光显微镜的使用 XXX,YYY,ZZZ (版权所有，仅限个人) 1倒置相差显微镜 倒置相差显微镜，是将相差显微镜和倒置显微镜相结合的产物，倒置相差显微镜既具有倒置显微镜的倒置观察方式，同时又具有与相差显微镜相一致的成像原理。 因此，研究倒置相差显微镜的工作原理就需分别研究倒置显微镜和相差显微镜的工作原理。 1.1倒置显微镜的工作原理： 倒置显微镜组成和普通显微镜一样，主要包括三部分：机械部分、照明部分、光学部分。其中与普通显微镜有明显区别的是：物镜与照明聚光系统的相对位置。相比于普通显微镜，倒置显微镜的物镜与照明聚光系统以载物台为轴颠倒位置，物镜在载物台之下，照明系统在在载物台之上。这样的构造使得照明聚光系统与载物台的有效距离可以显著扩大，便于放置培养皿、细胞培养瓶等较厚的待观察器具，而同时物镜与材料之间的工作距离不必很大。 图1.1倒置显微镜 由于倒置显微镜观察的材料一般都是培养的细胞，透明性大，结构对比不明显，故倒置显微镜常配备相差物镜，实际上也就构成了倒置相差显微镜（图1.1）。 1.2相差显微镜的工作原理： 1.2.1光学知识 镜检时，视场中的样品只有在其透射光的波长（颜色）和振幅（亮度）与周围介质有明显变化时，才能被眼睛所分辨。照明光线通过无色透明的物体时，透射光的波长和振幅都不发生明显改变，尤其是振幅，几乎无变化。所以用普通光学显微镜观察时，难以辨清这样物体的结构，必须借助于固定和染色等理化方法，使样品和背景的透射光在波长或振幅上发生变化，即在颜色和亮度上有所

差异，以供识别。 一束光线在透过折射率n不同的透明介质后，产生的衍射光和透过的直射光的波长没有明显变化，只是衍射光的振幅稍小于直射光，这也是透明不均质物质产生些许明暗变化的原因，但这一点变化很小，并不能有效分辨。变化明显的是衍射光相对透射光在相位上有1/4λ的滞后，虽然人眼不能分辨相位的差别，但可以分辨振幅和波长的变化。相差显微镜就是利用这一点，将相位的差别转变成振幅的变化，也就是将本来均为透明但折射率不同的各个结构显现出明暗差距，从而可以被清楚地分辨。 可见光光线通过介质水或其他小分子匀质物质时，由于介质分子远小于可见光波长，故而光的衍射现象并不明显，可以说透射光是直射光。但当可将光透过细胞结构或其他粒径与入射光波长相近的物质结构时，就会产生明显的衍射现象，透射光转化为衍射光。也就是说，细胞等常见观察物的结构大小刚好可以使可将光产生衍射现象。相差显微镜就是利用这一点。光波通过小颗粒的物体后产生直射光和衍射光，衍射光的光波振幅小，相位滞后。在光学系统中，这种直射光和衍射光相遇或光的叠加，振幅发生变化，光线或明或暗，就是光的干涉现象。 1.2.2相差显微镜结构 相差显微镜不同于普通光学显微镜，在装置上有四种必不可缺的部件：相差物镜（内有相板）、具有环状光阑的转盘聚光器、合轴调中望远镜和绿色的滤色镜。 1.2.2.1相差物镜（phase contrast objective） 相差物镜与普通物镜的主要区别在于具有相板结构（图1.2），相板（phase plate）是由光学玻璃制成的，利用光的衍射和干涉现象，将直射光和衍射光的相位差转变为振幅差。 图1.2相差物镜（示相板） 在圆形相板的平面上，有一圈与周围（里外）相板厚度不同的或凸凹的圆环（图1.3）。相板分两部分： （1）共轭面（conjugate area）：通常为环状，是通过直射光的部分。其环是凸起的，也可能是凹陷的。 （2）补偿面（complemetary area）：共轭面内外两侧部分，是通过衍射光的部分。 在相板的共轭面或补偿面上，涂有改变光波相位或吸收光线的物质，通常为氟化镁。当光线通过时，使光波的相位或振幅改变，从而达到不同的目的与观察效果。