ELISA精密度的评价
实验设计
ELISA 检测AFP 试验精密度的评价
一、原理：
采用双抗体夹心一步半法：用纯化的甲胎蛋白（AFP ）抗体包被微孔板，制成固相抗体，在向微孔中加入AFP ，让其特异性反应，再用与HRP 标记的AFP 抗体特异性反应，形成AFP 抗体-AFP-酶标AFP 抗体复合物，经过彻底洗涤，加入底物TMB 并避光显色，TMB 底物经HRP 催化反应为蓝色物质，使溶液呈现蓝色，加入强酸（H 2SO 4）终止剂后，溶液呈黄色，其颜色（黄色）的深浅与AFP 浓度呈正相关。用酶标仪在主波长为450nm ，次波长为630nm 下，10min 内测定各孔吸光度A 。ELISA 的精密度可用标准差（S ）和变异系数（CV ）间接反映：
二、仪器和试剂：
试剂：高浓度的（400ng/ml ）AFP 血清1.5ml ，低浓度（20ng/ml ）1.5ml ，新鲜蒸馏水， （AFP ）ELISA 试剂盒(酶
联板、HRP 标记的抗AFP 抗体、AFP 阴性对照试剂、AFP 阳性对照试剂、TMB 显色液、浓缩洗涤液、终止液、封板膜)。 仪器：酶标仪、加样枪及配套吸管、刻度吸管（2ml ）、恒温水浴箱、洗板机、吸水纸、 消毒缸、剪刀、洗瓶、记号笔。
三、试验方法：
1、微孔编号：阳性对照孔：A1、A2，阴性对照孔：A3、A4、A5和空白孔A6，高浓 度血清加样孔为：A7-C2，稀释血清稀释液加样孔为：C3-D10。
2、加样：向阳性对照孔、阴性对照孔分别加入阳性对照试剂、阴性对照试剂各50ul ， 空白孔不加任何试剂，向A7-C2中各加入高浓度血清各50ul 、向C3-D10加入低浓 度血清液各加入50ul ，并向每孔中加入酶标AFP 抗体50ul ，空白孔不加，轻轻震荡 混匀。
4、温育：用封板膜进行封板，将微孔板置于37℃恒温水箱温育30min.
5、洗涤液的稀释：将浓缩洗涤液用蒸馏水进行20倍稀释后备用。
6、洗涤：取出微孔板，揭去封板膜弃去液体，向每孔中加满稀释洗涤液然后浸泡30-60s ， 弃去洗涤液，如此重复5次后拍干。
7、显色：每孔中依次加入显色剂A 、显色剂B 各50ul ，室温避光显色5min 。
8、比色测定：每孔中加入终止液50ul ，轻轻震荡混匀，在阴性对照孔为无色，阳性对 照孔为黄色，空白孔为无色的情况下，设定酶标仪主波长为450nm 、次波长为630nm 对每孔进行吸光度A 的测定，并进行记录。
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吸光度值
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2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A B C
D
四、结果判断：
阴阳性对照孔可用，则阳性为黄色，空白对照孔、阴性为无色，样品孔呈黄色。此 时可利用样品孔对ELISA 进行精密度的评价。 五、实验结果计算和统计学处理：
分别计算出平均值、标准差和变异系数并进行精密度的评价。 六、质量控制：
1、实验必须设置阴阳性对照和空白对照从而保证实验的可信性和质量。
2、试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后
如未用完，板条应装入密封袋中保存。
3、样品：样品应用已知的浓度的样品，避免AFP 浓度过高而超出ELISA 最高检测限、 血清稀释时要足够稀释。
4、加样：要使用正确的加样技术，使加样枪的洗头稍高于微孔的平面，不能触及微孔 板和微孔中的液体，而且不能将液体溅出微孔外、加样枪必须是校准过的，并且所 有加样时间最好控制在5min 之内。
5、温育：温育时要进行膜封，封板膜应限制一次性使用；温育时应将微孔板置于 湿盒内，进行温育。温育时间不能过短，避免特异性结合不够，测得值偏低，时间
也不能过长，非特异性结合物紧附于微孔上，难以洗干净，使测得值偏高。
6、洗板：微孔板的清洗是实验的关键，应进行彻底的洗净，并拍干，但不能完全干燥。 并且每个微孔的洗涤液不能溢出到另外的微孔。
7、显色：显色剂必须保证没有过期，在加显色剂时要准确，避免溅出孔外，要用一次 性吸头，加显色剂时间要越快越好，从第一孔到最后一孔不能超过10min 。 8、终止：在加终止液是不能产生气泡，剂量要准确。 9、数据处理时，应去掉离散值，然后进行计算。 七、注意事项和影响因素：
1、所用ELISA 试剂必须为同一厂家、同一批次，不同厂家和不同批次的试剂不能混合 使用。
2、ELISA 试剂盒试剂没有变质。阴阳性对照试剂和酶标抗体可用。
3、加样时不能将样品混合，每个微孔的样品试剂不能溅出到其他微孔。
4、加样品时，每个孔的剂量必须一致，避免测量结果的大幅度波动。
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5、每加一个微孔应换一次吸头，避免交叉污染和剂量的不一致。
6、显色剂的量必须准确，并且次序为先加显色剂A，再加显色剂B。
7、洗涤时，必须是彻底洗净，特别是加入酶标抗体后的洗涤，那是本实验的关键步骤。
8、在最后结果判断和A的测定时，前提条件是阴阳性对照可用的情况，如果阴阳性不
可用，级阴阳性对照无效，则本实验无效，不能用于ELISA精密度的评价。应另外
选用ELISA试剂盒。
9、显色时应避光显色。显色后加入终止剂后最好立即（最好10min内）测定A值。
10、每步加试剂后都应轻轻混匀，并且温育时间要适当，保证试剂之间的充分反映。
2010级医学检验1班----第五组
组长：罗小镒
成员：赵凤霞
王念
杨娟
杨蓉
陈曼
倪萍
徐巍
肖程方
周涛
临床化学设备的精密度评价
临床化学设备的精密度评价 前言 目前临床化学文献包含了大量产品评估的实例。这些评估使用了多种不同的实验和统计方法，而其中有些使用是不恰当或错误的。目前几乎没有用于体外诊断设备的评估的指导原则。有时由于文献中的评估缺乏足够的数据和描述而无法重现结果。 针对这一需求，委员会按照用户、厂商代表、统计学家、化学家、实验室人员和医务人员的体会编写了这一指导原则。由于目前可用的体外诊断设备种类繁多，单一的实验设计明显不适于所有的设备。因此，我们提出了指导原则这一框架，对可广泛适用于不同分析物和设备的时刻、程序、材料、数据总结及讲明技术提供了要紧的概念性指导。我们用一个典型实验设计的例子力图阐明评估的每个步骤。 在编写那个草案的每一步中，我们在许多举荐的时刻，质控的内容和确定周密度组分的方法中认真选择。我们力求在实验及公式的复杂性和操作的简便性之间建立平稳。我们提供了附录（附录C），它可为修改设计和运算提供指导。 EP5早期的版本被实验室社团广泛的评论，并产生了不同的评论。委员会感谢所有评论者的建议。我们认真回忆了每一种意见并在文件中做了适当的修改。但并非采纳了所有的意见。对EP5-T的意见和小组委员会的回答都包含在附录D中。欢迎对本版批判指正。 关键词：评判草案，实验设计，医学设备，离群点，周密度，质量操纵。 1.0序言 1目的 本文件是为评判临床化学设备的周密度而提供的指导原则。在专门多情形下，这些技术可用于化学以外的其他领域。
当设备被修整后再与要求的周密度性能比较是无效的。典型修整的例子有，不同试剂，校准液，操纵品的使用，或操作程序与制造商标示的不同。 2一样周密度评判实验的概述 1.2.1一样指导原则 有足够的时刻熟悉设备的操作和保养的原理。 有足够的时刻熟悉评判草案的步骤。 整个评判期间设备需保养及做质控。 应选择适当的样品进行适当长时刻的实验，以得到足够的数据，来反应仪器在日常工作中长期真实的性能。 1.2.2设备熟悉期 对设备的全面熟悉，包括原理、操作、设定、保养、故障处理等内容。 1.2.3草案熟悉期 周密度实验的前5个操作日用于熟悉草案本身。在实验实践过程中，应发觉设备的任何严峻咨询题，收集在实验终止时有用的数据，进行周密度和在本指导原则中未提到的其他工作特性如线性，漂移等的初步可同意性测试。 1.2.4周密度评判实验 周密度评估实验举荐最少20个操作日。因为日间周密度是分析中最常见的变异源，对性能的评判应连续足够长的时刻，以确保总周密度得到适当的评判。 实验中的每一天应分不进行两批分析，每批应有两种样本，每种样本至少两个浓度水平。除测试样本外，每批还应至少分析一个质控品。举荐在评判期间仪器使用常规的质量操纵程序和质控品（如果适当）。 1.2.5完成周密度实验 草案熟悉期之后，实验应连续15天或以上。每5个操作日终止后，应在质控图上重新运算操纵限，并检查所有数据的可同意性。周密度实验完成后，应对数据进行适当的统计运算。
性能评估--精密度
精密度评估指导原则 1概述 精密度是考察体外诊断试剂对同一样本重复测定时能否得到相同实验结果的能力的指标。精密度评价是质量控制的重要内容。同时，精密度评估资料也是是评价拟上市产品有效性的重要依据，是产品注册所需的重要申报资料之一。 本指导原则基于国家食品药品监督管理局《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》的有关要求、参考《体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则（征求意见稿）》、《EP05A2-定量检测方法的精密度评估》和《临床检验质量管理技术基础》，并依据我公司具体情况，对定量检测方法中精密度的评估和数据处理方法进行了要求。其目的是为我公司研发人员和相关技术人员进行定量检测方法中精密度的评估提供原则性指导。同时也为用户验证某种方法和设备的精密度提供实验方案指导。这个过程对于某些无法获得足够的检测材料的方法可能并不适用。2基本概念 精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度，即在规定条件下，独立测试结果表现的一致程度。一般用标准偏差(Standard Deviation，SD)或变异系数（Coefficient of Variation，CV）表示。给定检测程序的“精密度”可以根据特定的精密度条件进行分类。“重复性”的检测条件基本不变，常被称为“批内精密度”。“重现性”与条件改变有关，如：不同的时间、实验室、操作者和检测系统（不同校准品和试剂批号）下的精密度。 2.1批内精密度 指在同一实验室，由同一（组）操作员在同一仪器上，使用同一方法和同批号试剂，在一个批次实验中对同一测试样品（常用校准品）重复测定10次或以上测量结果的精密度。表现为“重复性”，也被称为“序列内精密度”和“分析内精密度” 2.2批间精密度 指在同一实验室，由同一（组）操作员在同一仪器上，使用同一方法和同一批号试剂，在一段时间内（一般不超过一天）对同一测试样品（常用校准品）分别做10个或以上试验批次的测量结果的精密度。也被称为“分析间精密度”
精密度
分析方法的性能指标的讨论 摘要：化学分析方法中的性能指标主要包括准确度，精密度，灵敏度，检测限等。本文首先对分析方法中的准确度与精密度，检出限和定量测定下限等易混淆概念进行了探讨和区分。同时认为21世纪分析化学发展的重要方向在于仪器灵敏度的提高。并以波长型表面离子共振仪的灵敏度分析为例，对于分析化学灵敏度提高的研究手段做出了探讨。 关键词：分析方法的性能指标灵敏度 SPR 准确度与精密度检出限和定量测量下限 性能指标是对分析方法评价的重要标准。在化学分析法中，主要需要考量的性能指标为分析系统测定的对象范围，测定的准确度，精密度，灵敏度，检出限，选择范围，动态范围等，以及投资成本，人工消耗，特殊的安全等。 下文将对分析方法的一些性能指标（准确度和精密度，检出限和定量测量下限）的概念进行探讨和区分，同时从灵敏度角度作主要分析，思考分析化学未来的发展方向。 1.准确度与精密度 在分析方法中,准确度和精密度都是是评价定量方法的重要性能指标。、 1.1准确度 准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度。根据该定义可知，由于准确度与真值相联系，与误差相关。国际计量学界现用不确定度作为测量结果的可靠程度的表征。
1.2精密度 精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。 1.3两者关系 在表达一组数据的分析结果时，用准确度和精密度来描述，有助于我们定性了解该组测量结果的质量好坏。在分析方法中，精密度高不代表准确度好； 然而，如果没有较好的精密度，就很少可能获得较高的准确度。可以说精密度是保证准确度的先决条件。 2.检出限和定量测定下限 2.1检出限 对痕量分析而言,分析方法的检测功能是最重要的技术指标。而检测功能的好坏常用检出限( d. L)来表示。ACS (美国化学学会)对这一定义作了更简明的概括:检出限是一个分析方法能够可靠地检测出被分析物的最低浓度。 2.2检测下限 在测定误差能满足预定要求的前提下,用特定方法能准确地定量测定待测物质地最小浓度或量,称为方法的测定下限。 2.3二者关系 定量测定下限与检出限是两个不同的概念,检出限指测定结果与空白值(或噪声)有显著的区别,是一个定性概念;定量测定下限指响应信号强度与被测物质浓度成线性函关系时的最低浓度,是一个定量概念。二者都来自于空白测量的标准偏差。空白测量的3倍标准差为检出限, 10倍标准差为定量测定下限。当测定结果不大于检出限时报告为未检出;当测定结果大于检出限且不大于定量测定下限时,报告为定性检出;当测定结果大于定量测定下限时,报告定量结果。
定性检测质量指标与性能评估
定性检测性能评估方法 中南大学湘雅医院检验科 胡丽涛 2013年6月21日
定性试验（qualitative tests）：只提供两种结果的检测方法（阴性或阳性，是或否，正常或异常）。 根据临床用途可分为： 筛查试验（screening tests）：用来检查被分析物在全部人群或者部分人口亚群中的存在情况，如梅毒血清学试验。 诊断试验（diagnostic tests）：通常用于特殊的疾病或者临床有怀疑的情况，比如各种微生物的培养用于感染的诊断。 确诊试验（confirmatory tests）：对于筛查实验和诊断实验结果进一步确认的实验，荧光梅毒螺旋体抗体吸附试验。
●分析敏感性analytical sensitivity/测定下限detection limits 可重复检测出待测物质的最低浓度水平。 ●临床敏感性clinical sensitivity 当特定疾病存在时，患者标本检测结果为阳性或超过正常值范围的比率。 ●分析特异性analytical specificity 一种检测方法仅对样本中的待测物质反应，而与其它物质不发生反应的能力。 ●临床特异性clinical specificity 当特定疾病不存在时，患者标本检测结果为阴性或者在正常值范围内的比率。 ●C 50处于或接近临界值的分析物浓度，多次重复检测此浓度的单一样本时将获得 50%的阳性结果和50%的阴性结果。 ●C 5检测浓度为C 5 的分析物时将产生5%的阳性结果。用浓度
NCCLS精密度评价方案的实际应用
浙江省宁海县中医医院高振革 临床检验方法学一般提倡美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)制订的方案。检验方法的精密度评价是临床实验室的常做方法学评价之一[1]，相应的NCCLS采用精密度评价方案(EP5-A)[2]。采用EP5-A方案对实验室的一些试验项目作精密度评价时发现，其对实验数据的采集和统计处理有严格的要求，人工计算相当繁杂，尤其当需要复验时更是如此。我们采用电子表格软件EXCEL对低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)直接测定法评价的进行了研究。报告如下。 1、EXCEL EXCEL 是美国微软(Microsoft)公司的办公软件，更新版本兼容性很好。我们采用EXCEL 2003中文版。EXCEL有友好的用户界面，卓越的数据处理和数据分析能力。它预装的各种函数多达245个，单是统计函数就有80个，用户还可以自行编辑各种公式，或将各个函数组合使用，各种图标化的提示与仅用鼠标就可进行的操作使一般人可以很快掌握基本的操作。方便的智能型复制功能，极大地减轻了计算工作量，并使人部分结果可以自动生成。 2、EP5-A 2．1 EP5-A用于评价某种分析方法、试剂、仪器或检测系统测定结果的可重复程度。当实验室更换了新的仪器设备，或更换了新的试剂品牌、测定方法、标准品及操作程序等，都应当根据本方案的指导重做实验确定精密度。一般以变异系数(CV)作为反映(不)精密度的指标，以前习惯批内CV、批间(天间)CV反映。NCCLS的方案是计算出批内、批间、日间和总CV，其中批内CV和总CV 最重要，它代表整个分析体系的可重复程度。 2．2 实验要求(1)熟悉欲评价的对象。如测定方法、试剂或仪器等，仔细订出评价方案，可在EXCEL 上设计好原始数据采集表格。(2)实验用的试剂应是同次配制，商品试剂盒和参考物应为同一批号，仪器应处于良好的工作状态，并一直处于质量控制之下。(3)实验用的标本。一般选择2个或2个以上，其中一个在正常范围或在医学决定水平附近，另一个为异常值。实验标本的介质应与临床标本一致，最好用混合血清，标本应有足够的数量，并应妥善保存，以保证在整个实验过程中稳定。(4)先作一个初步的批内精密度测定，即一个标本重复测定20次，计算出均值，标准差和CV。 3、评价步骤(LDL-C直接法试剂盒的评价) 3．1 实验方案评价3种试验盒，采用2个混合血清标本，每天上、下午各用3种试剂测定1次，每个标本每次测定均作双份，每次测定至少做一个质控，共测定20 d。前5 d 属熟悉阶段，应能检出测定中如有的明显问题：后15 d是主要的实验阶段，每隔5 d要重
精密度
精密度（precision ），通常指在规定条件下相互独立的测试结果之间的一致程度（ISO3534-1:1993，定义 3.14），那么精密度的程度是用统计学方法得到的，是通过测量不精密度的数字形式表示的，例如：偏差d 、标准差SD 和变异系数CV 。 偏差（deviation ）：测量值与平均值之差。若令x 代表一组平行测定的平均值，则单个测量值x i 的偏差d 为： x x d i ?= d 值有正有负。 各单个偏差绝对值得平均值称为平均偏差（average deviation ），平均偏差都是正值。 n x x d n i i ∑=?=1 式中n 表示测量次数。 若以平均值的大小为基础表示偏差，测得到相对平均偏差 %100%1001×?=×∑=x n x x x d n i i 为了突出较大偏差存在的影响，使用标准偏差S （Standard deviation ） ()112 ??=∑=n x x S n i I 及相对标准偏差 ()%1001%10012×??=×∑=x n x x x S n i I 表示精密度更为合理。相对标准偏差又名变异系数（coefficient of variation ），用CV 表示。 一组测量值得精密度高，其平均值的准确度未必也高，这是因为每个测量值中都包含一种恒定的系统误差，使测量值总是偏高或偏低；精密度低的测量值，即使它们的平均值与真实值很接近也是出于偶然，并不可取；只有精密度和准确度都好的测量值才最为可取。精密是保证准确的先决条件；只有在已经消除了系统误差的情况下，才可用精密度同时表达准确度。 测量值的准确度表示测量的正确性，测量值的精密度表示测量的重现性。 综上所述，在统计学中我们使用的更多的专业词汇是：精密度。 那么在生物制品制造领域中，由于其生产过程的不确定性等因素造成的批内的差异，我们称为：批内精密度，同样我们可以通过测量批内的不精密度的数据来反映。 以此类推，生产过程等因素造成的批间的差异，我们称为：批间精密度，同样我们可以通过测量批间的不精密度的数据来反映。 在这个行业中呢，很多人习惯的将上面的批内精密度称为批内差，将批间精密度称为批间差。这实质上没有差异的。
实验室性能验证之-精密度验证
实验室性能验证之-精密度验证 “性能验证”是近年来临床实验室很热门的一个词语，在之前很多年里常常被实验室所忽略，实验室更多的依赖厂家来对仪器进行校准和验证。近年来，随着实验室质量意识的不断提高，管理体系的逐步完善，以及ISO15189管理体系的不断深入推广，性能验证也逐渐被临床实验室重视起来，在ISO15189评审标准以及三级医院考核检查表中都对实验室性能验证提出了明确的要求。 实验室是否真正了解系统的性能？系统是否能达到预期的用途？厂家声明的性能是否真正能在实验室得到重现？以及随着仪器使用年限的增加，仪器性能是否在逐步降低？这种种疑问，都将在我们正确执行了性能验证以后得到答案，真正对实验室的检测质量做到心中有数。本文将依照目前实验室最常用的一些实验方法，对性能验证中最重要的指标之一，精密度验证，做简明阐述。 1. 精密度定义 在规定条件下，对同一类被测对象重复测量所得值或测得值间的一致程度。不能给出被测量的数值，在指定目的下只能以“足够”或“不足”进行描述。其程度通常用不精密度（imprecision）表示，如标准差、方差或变异系数表示，是对随机误差的衡量。 2. 不精密度的来源 标本状态及处理；标本、试剂的运输和贮存条件；操作人员；环境条件；仪器或检测系统；检测程序（加样、温育、洗涤、结果判读时间等）。 3. 精密度验证的步骤 ?仪器，方法，人员的熟悉阶段 在验证开始之前，需要对试验人员进行适当的培训，培训包括对样本准备的方法，对仪器的运行状态进行监测，以及对操作的步骤等方面。 ?建立质量控制程序 建立质量控制程序来确保结果的可靠。 ?评价样本的准备 可以选用参考范围上下限浓度的样本，接近厂家建立声明精密度所用浓度的样本，可接受样本包含质控品、标准品、已测量的样本或其他已知结果的样本，评价物应具有和患者样本相同的基质，每个项目至少选择低值和高值两个浓度水平的验证材料进行验证，样品中的分析物含量应在该项目的医学决定水平附近。
性能评估 精密度
精密度评估指导原则1概述 精密度是考察体外诊断试剂对同一样本重复测定时能否得到相同实验结果的能力的指标。精密度评价是质量控制的重要内容。同时，精密度评估资料也是是评价拟上市产品有效性的重要依据，是产品注册所需的重要申报资料之一。 本指导原则基于国家食品药品监督管理局《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》的有关要求、参考《体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则（征求意见稿）》、《EP05A2-定量检测方法的精密度评估》和《临床检验质量管理技术基础》，并依据我公司具体情况，对定量检测方法中精密度的评估和数据处理方法进行了要求。其目的是为我公司研发人员和相关技术人员进行定量检测方法中精密度的评估提供原则性指导。同时也为用户验证某种方法和设备的精密度提供实验方案指导。这个过程对于某些无法获得足够的检测材料的方法可能并不适用。 2基本概念 精密度是指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度，即在规定条件下，独立测试结果表现的一致程度。一般用标准偏差(Standard Deviation，SD)或变异系数（Coefficient of Variation，CV）表示。给定检测程序的“精密度”可以根据特定的精密度条件进行分类。“重复性”的检测条件基本不变，常被称为“批内精密度”。“重现性”与条件改变有关，如：不同的时间、实验室、操作者和检测系统（不同校准品和试剂批号）下的精密度。 2.1批内精密度 指在同一实验室，由同一（组）操作员在同一仪器上，使用同一方法和同批号试剂，在一个批次实验中对同一测试样品（常用校准品）重复测定10次或以上测量结果的精密度。表现为“重复性”，也被称为“序列内精密度”和“分析内精密度” 2.2批间精密度 指在同一实验室，由同一（组）操作员在同一仪器上，使用同一方法和同一批号试剂，在一段时间内（一般不超过一天）对同一测试样品（常用校准品）分别做10个或以上试验批次的测量结果的精密度。也被称为“分析间精密度” 2.3天间精密度
测量精密度评价
测量精密度评价 南通大学附属医院景蓉蓉 精密度性能是检测系统的基本分析性能之一，它也是其他方法学评价的基础，如果精密度差，其他性能评价实验则无法进行。对临床实验室而言，一般样本只作单次测量便发出报告，这种情况下精密度性能更是至关重要。国家《医疗机构临床实验室管理办法》也要求临床实验室能够开展精密度的方法学评价；对参考实验室而言，精密度是测量不确定度评定的一个重要分量。因此，有必要了解和掌握测量精密度评价的相关知识。 一、有关术语和定义 1. 测量精密度 测量精密度（measurement precision）简称精密度，指在规定条件下，对同一或类似被测对象重复测量所得示值或被测量的值间的一致程度。 精密度是个抽象概念，只能将精密度描述为“高”或“低”，其反义概念“不精密度”可用数量形式表示，如极差（R）、标准差（s）、方差（s2）或变异系数（CV）。 所谓“规定条件”可以是重复性条件、期间精密度条件或复现性条件，相对应的精密度为重复性、期间精密度和复现性。 2. 测量重复性 测量重复性（measurement repeatability）简称重复性，指在重复性测量条件下的精密度。 重复性测量条件指相同测量程序、相同操作者、相同测量系统、相同操作条件和相同地点，在短时间内对同一被测对象重复测量的一组测量条件。 日常工作中将“一批”内的测量条件视为“短时间内”，因此重复性又常称为批内精密度。 3. 期间测量精密度 期间测量精密度（intermediate measurement precision）简称期间精密度，指一段时期内在期间精密度条件下的精密度，类似于日常工作中常说的“批间精密度”。 期间精密度条件指相同测量程序、相同地点，在一个长时期内重复测量同一
定量测定方法的不精密度性能评估
定量测量方法的不精密度性能评估方案 1.适用范围 参照EP5A2（Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline —Second Edition ），本方案给出了本次临床验证对定量测量方法的精密度性能进行系统评估的方法。 2.实验操作 2.1.质控血清样品的制备 复溶两个浓度水平的质控血清，血清量足够实验评价用。分装于1ml Eppendorf 管里，-20℃贮存。每次实验前1小时取出，置于室温，待其融化。反复倒置Eppendorf 管后，将质控血清吸出，加入到样品杯中，进行测定。 2.2.测定系统 测定系统由中生试剂、试剂配套校准品和临床全自动生化分析仪HITACHI 机器，或中生试剂、试剂配套校准品和临床全自动生化分析仪OLYMPUS AU 机器组成。 2.3.系统的质量控制 在正式评价实验之前，使操作人员熟悉方案操作及试剂的操作，整个系统在质量控制内。 2.4.操作 2.4.1.批内不精密度评价的操作 对两个浓度水平血清样品进行测定，连续测定21次。计算测定值的平均值（x ）和标准差（S 批内）。按以下公式计算变异系数(CV 批内)，应CV 批内≤10%。在CV 批内≤10%得到满足的条件下，再进行2.4.2的操作。 %100?=X S CV 批内 批内 2.4.2.室内不精密度评价的操作 选择两个浓度水平的质控血清，每天测定两批（run ），一批平行测定两次(replicate)，持续20天（day ），实验结束时，每个浓度水平，应收集80个数据。进行数据处理，进行以下计算步骤。 3.收集数据 每个浓度水平收集到足够有效数据(至少为80个数据)。除补充由于质控失控而增加的测试外，应在进行数据分析前，检查数据中有无由于偶然差错引起的离群值(outlier)，可用下述剔除值的标准： 从实施段已收集的40对均值的数据计算出总均值和标准差，出现下列任何一种情况都可认为是离群值： 1) 任何一对均值和总均值的差超过4倍标准差； 2) 任何一对中二个结果的绝对差值超过4倍标准差。 离群值不用于精密度的计算。在剔除后应再增加检验次数，以保证至少有40批次，80个数据进行计算。任何一次实验的剔除值不能超过总测量数的2.5%。当超过时，应怀疑是否为方法不稳定或操作者不熟悉所致。此时应不用此次试验数据，重新开始新的试验。 必须保留任何剔除者和室内质控失控的记录。 4.数据处理 收集到符合要求的数据后，按照下面步骤，依次进行计算。
ELISA精密度的评价
实验设计 ELISA 检测AFP 试验精密度的评价 一、原理： ① 采用双抗体夹心一步法：用纯化的甲胎蛋白（AFP ）抗体包被微孔板，制成固相抗 体，在向微孔中同时加入AFP 与酶标抗体，经过一次温育，然后彻底洗涤，加入底物TMB 并避光显色，TMB 底物经HRP 催化反应为蓝色物质，使溶液呈现蓝色，加入强酸（H 2SO 4）终止剂后，溶液呈黄色，其颜色（黄色）的深浅与AFP 浓度呈正相关。 ② 用酶标仪在主波长为450nm ，次波长为630nm 下，10min 内测定各孔吸光度A 。ELISA 的精密度可用其反义概念不精密度来表示，不精密度可用标准差（S ）和变异系数（CV ）反映： 二、仪器和试剂： 试剂：高浓度的（400ng/ml ）AFP 血清1.5ml ，低浓度（20ng/ml ）AFP 血清1.5ml ，蒸 馏水，（AFP ）ELISA 试剂盒(酶联板、HRP 标记的抗AFP 抗体、AFP 阴性对照试剂、AFP 阳性对照试剂、TMB 显色液、浓缩洗涤液、终止液、封板膜)。 仪器：酶标仪、微量加样枪及配套吸管、刻度吸管（2ml ）、恒温水浴箱、洗板机、吸 水纸、消毒缸、剪刀、洗瓶、记号笔、洗耳球。 三、试验方法： 1、微孔编号：阳性对照孔：A1、A2，阴性对照孔：A3、A4、A5和空白孔A6，高浓 度血清加样孔为：A7-C2，稀释血清稀释液加样孔为：C3-D10。 2、加样：向阳性对照孔、阴性对照孔分别加入阳性对照试剂、阴性对照试剂各50ul ， 空白孔不加任何试剂，向A7-C2中各加入高浓度血清各50ul 、向C3-D10加入低浓 度血清液各加入50ul ，并向每孔中加入酶标AFP 抗体50ul ，空白孔不加，轻轻震荡 混匀。 4、温育：用封板膜进行封板，将微孔板置于37℃恒温水箱温育30min. 5、洗涤液的稀释：将浓缩洗涤液用蒸馏水进行20倍稀释后备用。 6、 洗涤：取出微孔板，揭去封板膜弃去液体，向每孔中加满稀释洗涤液然后浸泡30-60s ， 弃去洗涤液，如此重复5次后拍干。 7、显色：每孔中依次加入显色剂A 、显色剂B 各50ul ，室温避光显色5min 。 8、比色测定：每孔中加入终止液50ul ，轻轻震荡混匀，在阴性对照孔为无色，阳性对 照孔为黄色，空白孔为无色的情况下，设定酶标仪主波长为450nm 、次波长为630nm 对每孔进行吸光度A 的测定，并进行记录。 () ()1 /1 1 i 1i 2 i 2i 1 i 2 i -??? ??-=--= ∑∑∑===n n A A n A A S n n n
EP5-A2定量测量方法的精密度性能评价翻译稿
定量测量方法的精密度性能评价；批准指南－ 第二版 Evaluation of Precision Performance of Quantitative Measurement Methods; Approved Guideline—Second Edition This document provides guidance for designing an experiment to evaluate the precision performance of quantitative measurement methods; recommendations on comparing the resulting precision estimates with manufacturers’ precision performance claims and determining when such comparisons are valid; as well as manufacturers’ guidelines for establishing claims. A guideline for global application developed through the NCCLS consensus process.
美国临床实验室标准化委员会… 通过自愿一致化的方式为世界医学科学团体服务 NCCLS是一个非赢利的教育组织，她为国家和国际标准的编制、宣传和应用提供交流论坛。 NCCLS创建于1968年并获得美国国家标准研究院的认可。NCCLS所依据的原则是，对病人高质量服务所需的临床实验室检测，自愿一致的标准是必不可少的。NCCLS通过各临床实验室、检验团体学会、工厂和政府机构的参与而代表临床检验界。 叙述了文件叙述了实验室的程序、常规和参考方法以及评估方案可应用于所有检验学科。文件审核的一致化过程由一些正式的步骤组成，叙述了NCCLS文件和规范的编制如何发展到以及被接受为临床实验室标准。 出版物 NCCLS文件以标准、指南、委员会报告出版。 标准通过一致化过程形成的文件，并对材料、方法、或实践以不能修改方式明确规定其特定的基本要求。此外，标准也可以包含明确规定的选定要素。 指南通过一致化过程形成的文件，叙述了用于临床检验界的一般实验操作、方法或材料的规范。使用者可以使用成文文件或修改指南以适应特定的需要。 报告未经过一致化审定过程的文件，由理事会颁布。 一致化过程 NCCLS的自愿一致化审定程序是一个为以下方面建立正式规范的方案： 标准项目的权威性 文件的编制和公开评审 根据实验室使用者反馈的评论修改文件 文件被接受为临床实验室标准 大多数NCCLS文件必须有“建议”和“批准”两种层次的一致化文件，根据特定的一致化过程，文件也可以有一个中间（“试行”）一致化的水平层次。 建议 NCCLS文件作为建议标准或指南处在被临床检验界评审的第一阶段。此文件需要接受广泛彻底的技术审核，包括对范围、方法、用途和逐字逐行对技术和行文内容的全面评审。 试行只有当一种推荐方法对某一领域的评审有明确的需要，或者当某一建议性方案需要
体外诊断试剂分析性能评估(准确度-方法学比对)技术审查指导原则
附件5： 体外诊断试剂分析性能评估（准确度-方法学比对） 技术审查指导原则 一、前言 准确度评估资料是评价拟上市产品有效性的重要依据，也是产品注册所需的重要申报资料之一。定量检测方法的方法学比对试验是评估准确度的方法之一，可以与参考方法或临床公认质量较好的已上市产品进行比对。 本指导原则基于国家食品药品监督管理局《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》的有关要求，参考CLSI有关标准，对采用方法学比对进行准确度评估的实验方法和数据处理方法进行了原则性要求。其目的是为生产企业采用方法学比对进行准确度评估并准备准确度评 估资料提供原则性指导，也为注册管理部门审核该部分分析性能评估资料提供技术参考。 由于体外诊断试剂产品发展速度快、专业跨度大，国家食品药品监督管理局将根据体外诊断试剂发展的需要，适时对本指导原则进行修订。 二、适用围 本指导原则适用于首次申请注册、申请许可事项变更的用于定量检测的体外诊断产品。因体外诊断产品评价是将仪器、试剂、质控品、校准品等作为一个系统进行评价，因此方法学比对的评价采用系统的概念进行描述。如特殊产品不适用于本指导原则，可进行详细说明并
采用适当的方法进行准确度评价。 三、基本要求 （一）方法学比对实验的基本要求 1.操作者应熟悉待评价系统和比对系统的操作。 2.编写系统标准操作规程，其中包括校准程序和室质控程序，采用合适的校准品、质控品并保持仪器处于正常状态。 3.比对系统的选择 比对系统应具有以下条件： （1）具有比待评价系统更好的精密度； （2）同待评价系统检测结果具有相同的单位； （3）如有参考方法应具有与参考方法已知的偏差。 比对系统应该选择正确性经过验证的系统，根据实际条件，选择的顺序如下：参考方法、原装系统、配套系统、经过验证的非配套系统。 4.待评价系统的处理 进行方法学对比实验前，应该对待评价系统进行初步评价，并且对待评价系统进行精密度及线性的评价（参考相关标准），只有在以上评价完成并且符合相关标准要求后，才可进行方法学对比实验。 （二）方法学比对实验的评估及数据处理方法 1.实验样本的基本要求 （1）按照实验对样本的要求收集处理病人样本，样本贮存时间及条件由被测组分的稳定性而定，尽可能避免使用贮存的样本。 （2）样本应来自于不同患者，并且此患者所患疾病对于被测组分的影响应该是已知的，样本不应含有干扰此方法的组分。
精密度
附件7： 体外诊断试剂分析性能评估指导原则 ——精密度（征求意见稿） 一、概述 精密度是衡量体外诊断试剂批内和批间变异的重要指标，通常包括批内和批间不精密度。精密度评估资料是评价拟上市产品有效性的重要依据，也是产品注册所需的重要申报资料之一。 本指南基于国家食品药品监督管理局《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》（以下简称《办法》）的有关要求，参考CLSI有关标准，对定量检测方法中精密度的评估和数据处理方法进行了要求。其目的是为生产企业进行定量检测方法中精密度的评估提供原则性指导，也为注册管理部门审核该部分分析性能评估资料提供技术参考。同时，本指南亦可指导临床实验室进行定量检测方法的精密度评估。 由于体外诊断试剂产品发展速度快、专业跨度大，国家食品药品监督管理局将根据体外诊断试剂发展的需要，适时对本指南进行修订。 二、定义 1.批内精密度 是众多种类精密度中最基本的一个，它是在严格的相似条件下，所得到的最佳的精密度。 2.批间精密度 指在同一实验室，由同一（组）操作员在同一仪器上，使用同一方法和同种、同一批号试剂，在一段时间内(一般为一个月或20个工作日)对同一测试样品（常用质控品）测量结果的精密度。 三、精密度评估的基本原则 1.操作者必须熟悉方法和/或仪器工作原理，了解并掌握仪器的操作步骤和各项注意事项，能在评估阶段维持仪器的可靠和稳定。 2.用于评估试验的样品一般常采用临床实验室收集的稳定和冷冻贮存的血清(浆)库；当实验室收集的样品不稳定或不易得到时，也可考虑使用稳定的、以蛋白质为基质的商品物质，如校准品或质控品。 3.评估精密度时，应至少评估二个浓度水平样本的精密度。当二个浓度的精密度有显著差异时，建议增加为三个浓度。所选样本浓度应在测量范围内有医学意义，即至少有一个浓度在医学决定水平(medical decision levels)左右。不要为了得到较小的精密度，都选用较高值的样品，甚至超出测量范围。也不应选用靠近最低检出限的样品，此时所得的精密度往往偏大。相当多的检验项目低值常无实际临床意义，但有少数检验项目，其低值也有临床价值，此时就需要评估有判断价值的低值精密度，适用时，可进行功能灵敏度的评估。如没有医学决定水平，可在参考区间上限左右选一个浓度。此外，再根据检验项目的性质在线性区间内选择另一个值。如与厂商或文献报导的精密度进行比较，所选浓度应与被比较精密度的浓度相接近。否则，有可能得出不恰当的结论。 四、精密度评估的方法和数据处理 1.只评估批内不精密度 1.1 试剂和校准品：应使用同一种类、同一批号的试剂和校准物,如可能,只进行一次校准。使用不同批号试剂和多次校准都会增加检验结果的变异程度。 1.2 评估方法：在以上条件满足的情况下，在一批内对样本进行重复测定，至少进行
《体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则(征求意见稿)
附件： 《体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则（征求意见稿）》
目录 １。体外诊断试剂分析性能评估指导原则――编制说明 2.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——检测限 3.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——线性范围 4。体外诊断试剂分析性能评估指导原则-—可报告范围５．体外诊断试剂分析性能评估指导原则——准确度（回收实验） ６.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——准确度(方法学比对） 7．体外诊断试剂分析性能评估指导原则-—精密度 ８。体外诊断试剂分析性能评估指导原则—-干扰实验９.体外诊断试剂分析性能评估指导原则——稳定性 10。体外诊断试剂分析性能评估指导原则-—参考值（参考区间）
附件１: 体外诊断试剂分析性能评估指导原则 编制说明 《体外诊断试剂注册管理办法（试行)》颁布后，体外诊断试剂产品的注册过程中要求提供申报产品的分析性能评估资料，产品性能评估是产品研发、制定产品标准等过程的重要技术支持研究过程，并可能对产品的质量造成一定的影响。 目前国际上对体外诊断试剂的性能评估通常是以美国临床实验室标准化组织（CｌinicaｌanｄLaboratoｒｙStanｄards Institudｅ以下称为CＬＳI)的相关标准为依据，也是美国FＤA推荐采用的评价标准,但我国还没有相关的标准及指导原则的要求。 为进一步明确体外诊断试剂分析性能评估的技术要求，我中心组织有关专家起草产品分析性能评估指导原则，以明确体外诊断试剂产品性能评估的技术要求。体外诊断试剂产品性能评估包括检测限、线性范围、可报告范围、准确度(回收实验）、准确度（方法学比较)、精密度、干扰实验、稳定性、参考区间共九个项目。起草的主要依据CＬＳI发布的以下标准: 1.C28-A2：Ｈow ｔo defiｎe and detｅrｍinｅrｅfｅrence intervalｓin the clinical ｌabｏｒaｔory；Aｐｐrｏ
体外诊断试剂分析性能评估指导原则
体外诊断试剂分析性能评估（准确度-方法学比对） 指导原则 一、前言 准确度评估资料是评价拟上市产品有效性的重要依据，也是产品注册所需的重要申报资料之一。定量检测方法的方法学比对试验是评估准确度的方法之一，可以与参考方法或临床公认质量较好的已上市产品进行比对。 本指导原则基于国家食品药品监督管理局《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》的有关要求，参考CLSI有关标准，对采用方法学比对进行准确度评估的实验方法和数据处理 方法进行了原则性要求。其目的是为生产企业采用方法学比对进行准确度评估并准备准确度评估资料提供原则性指导，也为注册管理部门审核该部分分析性能评估资料提供技术 参考。 由于体外诊断试剂产品发展速度快、专业跨度大，国家食品药品监督管理局将根据体外诊断试剂发展的需要，适时对本指导原则进行修订。 二、适用范围 本指导原则适用于首次申请注册、申请许可事项变更的用于定量检测的体外诊断产品。因体外诊断产品评价是将仪器、试剂、质控品、校准品等作为一个系统进行评价，因此
方法学比对的评价采用系统的概念进行描述。如特殊产品不适用于本指导原则，可进行详细说明并采用适当的方法进行准确度评价。 三、基本要求 （一）方法学比对实验的基本要求 1.操作者应熟悉待评价系统和比对系统的操作。 2.编写系统标准操作规程，其中包括校准程序和室内质控程序，采用合适的校准品、质控品并保持仪器处于正常状态。 3.比对系统的选择 比对系统应具有以下条件： （1）具有比待评价系统更好的精密度。 （2）同待评价系统检测结果具有相同的单位。 （3）如有参考方法应具有与参考方法已知的偏差。 比对系统应该选择正确性经过验证的系统，根据实际条件，选择的顺序如下：参考方法、原装系统、配套系统、经过验证的非配套系统。 4.待评价系统的处理 进行方法学对比实验前，应该对待评价系统进行初步评价，并且对待评价系统进行精密度及线性的评价（参考相关标准），只有在以上评价完成并且符合相关标准要求后，才可进行方法学对比实验。
精密度的应用实例
橡胶与橡胶制品试验方法标准精密度的确定与应用 ——应用实例 沈阳橡胶研究设计院张艳芬刘惠春 摘要：本文主要介绍了如何安排设计ITP试验和硫化橡胶拉伸强度精密度确定实例，对撑握和运用GB/T 14838有重要意义 精密度作为衡量一个试验方法好与坏的一种度量被广泛应用着，人们为确定精密度已建立了许多统计学方法，其中一些因被普遍采用而确立为标准。如GB/T 6379《测量方法与结果的准确度(正确度与精密度)》系列标准中关于精密度所推荐使用的是柯克伦与格拉布斯检验法。但是，一种数学模型或一种方法并不是对所有条件下都适用的。如GB/T 6379所确立的确定精密度的方法之用于橡胶制造业和炭黑工业，就存在不满足橡胶与炭黑试验所特有的一些要求。于是就有了修订的GB/T 14838（IDT ISO/TR 9272:2005）1)《橡胶与橡胶制品---试验方法标准精密度的确定》。该标准采用消除或大幅度降低离群值影响的另一种“稳健”分析方法——曼德尔h和k统计法。 本文将在《橡胶与橡胶制品试验方法标准精密度的确定与应用——概念与用途》的基础上对如何应用GB/T 14838安排设计ITP试验及确定精密度加以介绍。 一、精密度试验的要求 确定精密度，首先要安排设计ITP试验，GB/T14838（idt ISO/TR 9272：2005）第6章给出了有关要求，但由于其所述内容没有归类细化，现将其具体要求分类叙述如下： （一）试验安排 进行试验安排时，取自q批物料的样本分别代表q个不同测试水平，被分到p个实验室，在重复性条件下每个实验室都对每个测试水平测得同样n个试验结果，这种试验称为平衡均匀水平试验。大多数精密度确定程序的实验室间试验方案根据平衡均匀水平设计进行组织。更先进的设计，参看GB/T 6379。 应在如下规则下组织试验： a) 同一水平中一组n次试验应在重复性条件下进行，即在短暂的时间间隔内，由同一操作员试验，试验过程中间不允许对设备进行任何的重新校准； b)一组n次试验要求在重复性条件下独立地进行是十分重要的，就像是在对n种不同的物料进行的n次试验。然而，事实上，操作员会知道他是对同一物料进行测试。应在说明书中强调的是，测试的整个意图就是要考察在实际测试中测试结果能发生多大的的变化； c) 所有q个水平的试验都将由同一个操作员做出，此外，在给定水平上做出的n次试验要自始至终使用同一设备； d) 如果在试验过程中一个操作员因故不能完成全部试验，那么可以由另一个操作员继续剩下的试验，只要这个人员变更不是发生在同一水平同一组的n 次试验上，而是发生在q 组中的两个不同组上。任何这样的人员变更都要随试验结果一起上报； e) 应该给出一个时间限制，所有的试验应该在该时间区间内完成。把该时间限制在收到样本的日期和试验完成的日期之间。 （二）参加精密度试验的人员 对参加精密度试验的人员GB/T14838（idt ISO/TR 9272：2005）有明确要求，但对各个1) GB/T 14838等同采用ISO/TR 9272:2005, 待发布。
试剂分析性能评估模板
胆固醇测定试剂盒分析性能评估资料 山东高密彩虹分析仪器有限公司
目录 1 概述 2 胆固醇测定试剂盒及相关信息 3 性能评估资料 检测限评估资料 线性范围评估资料 可报告范围评估资料 准确性（回收实验）评估资料 准确性（方法学比对）评估资料 精密度评估资料 干扰实验评估资料 配对差异检验 剂量效应实验 以病人标本评价干扰效果实验 稳定性评估资料 参考值（参考区间）评估资料 4. 结论
胆固醇测定试剂盒分析性能评估资料 1 概述 本报告是根据《体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则（征求意见稿）》的要求，提交了胆固醇测定试剂盒的分析性能评估资料，对试剂盒涉及的性能指标分别进行检测，评估其是否符合设计研究的要求。本报告对所有的实验进行了总结，具体数据及结论如下： 2 胆固醇测定试剂盒及相关信息 胆固醇测定试剂盒批号和规格 用于性能评估的胆固醇测定试剂盒批号分别为******，******，******。本产品设计了两种包装规格，只是大小包装不同，对性能评估结果没有影响。因此只对其中一种规格进行了测定，规格为：********。 校准品和质控品 用于性能评估的校准品为***；质控品为***。 试验仪器 用于性能评估的仪器为******生化分析仪。 3 性能评估资料 检测限评估资料 实验要求 实验人员应熟悉检测方法与仪器操作；采用合适的校准品、质控品并保持仪器处于正常状态；用于实验的试剂应为同一批号，且在有效期内。 实验材料和方法 采用5%牛血清白蛋白溶液作为空白样本，空白样本应不含被测物。在生化分析仪上连续检测20次，记录检测结果。 实验结果 ***生化分析仪测定值： 结果： 计算20次结果的均值X与标准差SD。以空白均值加两倍标准差作为报告方法的检测限。（X+ 2SD）