不同培养基对辣椒疫霉致病力的影响
辣椒疫霉纤维素合酶蛋白及其编码基因与应用的制作方法
本技术介绍了一种来自辣椒疫霉菌的纤维素合酶蛋白PcCesA2和PcCesA4及其编码基因与应用。本技术的纤维素合酶蛋白序列为如序列3或序列4。PcCesA2蛋白缺失后辣椒疫霉菌丝生长减慢、休止孢畸形膨大且萌发率降低、细胞壁结构变化、菌落形态改变、致病力降低等；PcCesA4蛋白缺失后辣椒疫霉菌丝生长减慢、游动孢子数量减少、致病力降低等；PcCesA2和PcCesA4蛋白同时缺失后辣椒疫霉菌丝生长减慢、游动孢子数量减少、休止孢畸形膨大且萌发率降低、细胞壁结构变化、菌落形态改变、致病力降低等。以上结论均为探究辣椒疫霉发育及致病分子机制提供了技术基础，为未来新型杀菌剂的研发提供了分子靶标。 技术要求 1.一类辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)纤维素合酶蛋白，是如下A1)或A2)或A3)或A4)的蛋白质： A1)氨基酸序列是如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的蛋白质； A2)在如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质； A3)将如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能由SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的蛋白衍生的蛋白质； A4)与如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列相似性在75％以上，优选在85％以上，更优选在95％以上且具有与如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列相同功能的氨基酸序列。 2.编码权利要求1所示的纤维素合酶蛋白的编码基因；优选的，所述编码基因为如下B1)或B2)或B3)： B1)序列表中SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.9所述的核苷酸序列所示的DNA分子； B2)与B1)所示的核苷酸序列的具有75％以上或85％以上或95％以上同一性，且编码权利要求1中所述纤维素合酶蛋白的cDNA分子或DNA分子； B3)在严格条件下与B1)或B2)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1中所述纤维素合酶蛋白的cDNA 分子或DNA分子。 3.权利要求2所述的编码基因转录得到的RNA分子； 优选的，所述RNA分子的序列为如下C1)或C2)： C1)与如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的DNA序列转录的RNA序列的相似性在75％以上，进一步优选在85％以上，更优选在95％以上且具有与如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的DNA序列转录的RNA序列相同功能的RNA序列； C2)如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的DNA序列转录的RNA序列。
枯茗酸药效分析及对辣椒疫霉病菌的抑制
龙源期刊网 https://www.wendangku.net/doc/1014572480.html, 枯茗酸药效分析及对辣椒疫霉病菌的抑制 作者：张娟王博 来源：《当代化工》2020年第03期 Pharmacodynamic Analysis of Cumin Acid and Its Inhibition on Phytophthora Capsici ZHANG Juan， WANG Bo （Xianyang Vocational Technical College， Shaanxi Xianyang 712000， China） 植物次生代谢产物较多，其中代谢的部分生物活性化合物具有一定的杀虫及杀菌作用，通过多年以来的研究，将此类生物活性化合物进行提取合成，已被当作植物性农药来利用。随着化学合成技术的不断提高，每年都有类似植物性化学合成抗菌药物研制成果诞生，天然植物性抗菌化合物种类及数量不断变多。但总体来看，能够大规模应用于农作物种植及病虫害防治上的仍然较少，研究成果的实际应用性仍然需要进一步加深。 目前研究成果侧重于对植物提取生物性化合物的合成以及对细菌的抑制、对病毒毒株钝化效果等方面。例如胡林峰等（2008）利用离体于活体相结合的方法，通过实验分析了枯茗醛和枯茗酸对各类农作物病菌的抑菌活性[1];高艳清等（2011）利用碱性高锰酸钾作为氧化剂合成了诺蒎酸，再通过酸性脱水过程并重排开环合成了二氢枯茗酸，最后与各类醇反应生成了7种酯衍生物[2];熊李波等（2018）利用水蒸馏法提取出了从孜然、花椒和芥子精油，并分析了提取物的化学成分，通过实验对3种提取物进行不同比例混合，测定对真菌的抑制效果，选择了最佳合成比例[3];高艳清等（2012）利用抑菌环法分析了二氢枯茗酸对大肠杆菌的抑制作用及抑制效果[4];胡林峰等（2007）分析了枯茗酸和枯茗醛对油菜菌核病菌和辣椒疫霉的抑制效果[5];冯俊涛等（2012）提取了孜然种子中的枯茗酸，通过室内盆栽和滴定方法，分析了对辣椒疫霉病菌的抑制作用[6]。 孜然种子作为烧烤食品重要的调味品被人们广泛喜爱，其提取物具有杀菌、杀虫和抗氧化等生物活性[7]。提取物中的枯茗酸和枯茗醛能对小麦纹枯病菌、油菜菌核病菌和辣椒疫霉病菌产生较好的抑制作用，其中枯茗酸的效果更好[8-10]。针对枯茗酸具有较好的抑菌作用，通过枯茗酸于其他病害药品进行药效分析对比，更进一步明确枯茗酸的抑菌效果，并详细地研究了枯茗酸对辣椒疫霉病菌抑菌作用方式及机理，为枯茗酸作为生物活性杀菌剂的推广应用提供理论指导。 1.1.1 ;实验药品
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告 （文章一）：培养基的制备与灭菌实验报告xx师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌 （一）、目的要求 1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2. 掌握培养基的配置原则和方法。 3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 （二）、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 （三）、实验材料 1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 （四）、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~ 1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。（二）液体及固体培养基的配制过程1．液体培养基配制（1）称量（假定配制1000ml 培养基）按培养基配方比例依次准确地称取
辣椒各种病害用药
辣椒各种病害用药 余方志2013-04-17 20:02蔬菜医余方志2013-04-17 20:03 1、问：辣椒定植后4天，才长出3叶1心，茎基部发生褐色病斑，缢缩，植株已出现10%左右的死棵，是什么病，怎样防治？答：这是辣椒茎基腐病，也不排除丝核菌立枯病的可能性。根据你说的情况，发病是相当严重的，应立即采取措施灌根防治。方法是：30斤水加金雷50克+阿米妙收1包，每棵灌1-2两水。可以在10天左右再灌根一次。2、问：辣椒的果柄上一开始萎蔫，无病斑，不失绿，果实逐渐失水，这是什么病害？怎样防治？答：辣椒该病不常见，也无法确定病原和名称。是否折断果柄看一下木质部，如果变颜色应为真菌性病害，不变颜色为细菌性病害。若为细菌性病害。建议喷施铜制剂或者抗生素类药物，如铜高尚600倍或春王铜800倍，链霉素和中生菌素也是可以的。3、问：辣椒秸秆上变色腐烂是什么病？答：秸秆腐烂色较浅，灰黄色，不生霉毛，软腐状的是细菌性软腐病，应该用链霉素或铜制剂防治。色较浅生白毛的是菌核病，可喷用农利灵或多霉清或异菌脲防治。色黑褐色不生霉毛的是疫病，可用霜霉威或安克锰锌防治。4、问：我的辣椒叶片上出现一些黑褐色斑点，有的近圆形或不规则形。这是什么病？怎样防治？答：这是辣椒细菌性
叶斑病。浇水后遇到阴雨天，温度低，湿度大，易发病。请注意保温，排湿，发病初期可用30%王铜500倍液，或27%铜高尚500倍液，或77%可杀得500倍液等防治。注意铜 制剂最好单用，不能与多菌灵和托布津混用，以免失效或药害。5、问：我的辣椒死棵子，从茎基部近地面处烂表皮，只剩下茎秆。这是什么病？用什么药防治好？答：这是菌核病。病菌在土壤中随流水传播。浇水后地湿发病重。此病一般不连片，个别植株死棵。发病后可用倍克+霉唑定500倍液，或其它防治灰霉病的药兼治菌核病，直接喷洒根部。6、问：我种的辣椒前一段时间发现秆上有烂斑， 有小有大，多从分杈处从、叶痕处发生。一种是黑色，不生毛，也不湿，上边叶子枯干了。再一种色浅，病斑湿像脓一样。当病斑持续一周后枝枯干怎么治？答：有两种病，一种是疫病，多从叶痕处、“节”上发生，色深褐色斑，不长 霉毛，病斑较干燥，可发生快，传播快，可喷用普立克600倍或灭克900倍防治。另一种是软腐病，属于细菌性病害，显脓状。可喷用铜制剂，配合链霉素防治。您可把普立克600倍混加DT600倍液防治两种病。5-7天一次，连喷2次。7、问：辣椒得了疫病，该用什么药治疗？答：辣椒疫病的典型症状是茎杆水烂，变为黑色，个别叶片以叶边向内水烂，湿度大时产生稀疏白毛。辣椒疫病可用精甲霜灵锰锌（金霉）600倍，恶霉灵锰锌（杀毒矾）600倍，烯先吗啉（交克）
培养基的配置和灭菌
培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2.掌握培养基的配置原则和方法。 3.掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1.药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。 2.仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3.其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 （2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。 （二）液体及固体培养基的配制过程1．液体培养基配制 （1）称量（假定配制1000ml培养基） 按培养基配方比例依次准确地称取3.0g牛肉膏、10.0 g蛋白胨、5.0gNaCl放入烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）中．牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯。 （2）溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量（如约700ml），用玻棒搅匀，然后，在石棉网上
一株拮抗辣椒疫霉的假单胞菌的分离与鉴定
46卷 4期 2006年8月4日 微生物学报Acta Microbio logica Sinica 46(4):516~5214August 2006 基金项目:上海市科技兴农重点攻关项目(3_3_1) * 通讯作者。Tel:86_21_34204854;Fax:86_21_34204051;E_mail:xuehzhang@sj https://www.wendangku.net/doc/1014572480.html, 作者简介:何延静(1982-),女,河南南阳人,硕士研究生,主要从事微生物系统分类学研究。E_mail:yanjinghe106@https://www.wendangku.net/doc/1014572480.html, 其他作者:蒋海霞 收稿日期:2005_10_08;接受日期:2006_02_07;修回日期:2005_12_21 一株拮抗辣椒疫霉的假单胞菌的分离与鉴定 何延静,刘海明,胡洪波,许煜泉,张雪洪 * (上海交通大学生命科学技术学院微生物代谢教育部重点实验室 上海 200240) 摘 要:从甜椒根际土壤中分离到一株对辣椒疫霉(Phytop hthora capsici )具有强拮抗作用的假单胞属(Pseudomonas spp.)菌株GP72,研究其拮抗性表明,对多种植物病原真菌均有很强的抑制作用。对该菌株进行形态特征、生理生化、Biolog GN 、(G+C)mol%含量测定及16S rDNA 序列分析,鉴定为绿针假单胞菌(Pseu domonas chlorora p his )。特征为单细胞,极生单个鞭毛,不能利用聚B -羟基丁酸盐,能够较强地利用Biolog 系统95种碳源中的45种作为底物生长,较弱利用其中的6种底物,与绿针假单胞菌(Pseudomonas chlorora phis )的相似性达到98%,相似指数为0172。用热解链方法测得基因组DNA 的(G+C)mol %含量为6511mol%。以16S rDNA 序列为基础构建了包括13株邻近种属细菌在内的系统发育树,其中与模式致金色假单胞菌的同源性最近。关键词:绿针假单胞菌;GP72;鉴定;Biolog GN;16S rDNA 中图分类号:Q939 文献标识码:A 文章编号:0001-6209(2006)04-0516-06 伴随着现代农业的飞速发展,大面积作物病虫害的防治越来越依赖于化学杀虫剂的应用,但随之而来的环境污染和病虫害抗药性的产生使得人们对现代农业的可持续性发展提出了新的要求。近年来生物防治的观点得到了世界各国的广泛关注,寻找有效的生防菌以及研究它们相关的防治机制也就成为了当今人们关注的热点。 假单胞菌(Pseudomonas spp.)是活跃在植物根际的一类微生物。许多菌株有抑制植物病害、促进植株生长的作用,属植物促生菌(Plant Growth_Promoting Rhizobacteria,PGPR)类。大量研究 [1~5] 表 明,这些具有生防作用的菌株尤以荧光性假单胞菌(Fluorescent Pseudomonads spp.)为主,包括铜绿假单胞菌[6,7] (Pseudomonas aeruginosa )、致金色假单胞 菌 [8,9] (Pseudomonas aureo faciens )、绿针假单胞菌 [10,11](Pseudomonas chlororaphis )、荧光假单胞菌 [12,13] (Pseudomonas fluorescens )等。有的已成为商业用生防产品,如瑞士BioAgri AB 公司研制的基于绿针假单胞菌的生防药剂Cedomon,用于大麦和燕麦种期 处理可防治苗期病害[4] 。其它绿针假单胞菌如SPR044 [10] ,MA 342 [11] ,SPB1217 [14] 都经初步试验证 明可作为有效的生防菌株。 我国华东地区经济作物甜椒的种植比较广泛,并且较易受到一些植物病原菌的侵害,特别是一些 真菌如辣椒疫霉、终极腐霉、瓜果腐霉等的,因而从甜椒的根际土壤中筛选新的具有潜在生防效果的生防细菌具有非常重要的意义。本文报道从甜椒根际 土中分离筛选到一株对植物病原菌有拮抗作用的假单胞菌属菌株GP72,并对其进行了形态特征、生理生化鉴定、Biolog GN 、(G +C)mol%含量测定和16S rDNA 序列分析,鉴定为绿针假单胞菌(Pseudomonas chlororaphis )。 1 材料和方法 111 材料 11111 菌种来源:假单胞属菌株(Pseudomonas spp.)GP72系土壤中分离得到。假单胞菌(Pseudomonas spp.)M18及供试植物病原菌株系本实验室所保存菌株。甜椒疫霉(Phytophthora capsici )由上海交通大学农学院提供。致金色假单胞菌(P .aureo faciens )30_84,荧光假单胞菌(P .fluorescens )Q2_87,铜绿假单胞菌(P .aeruginosa )PAO1由美国农业部Linda S Thomashow 教授赠送。 11112 培养基:King .s B 培养基(KMB):蛋白胨20g,甘油15g,K 2PO 401392g,无水MgSO 401732g;琼脂16g ,pH715,定容至1L 。1P 3KMB:配方与KMB 相同,但最后定容至3L(无琼脂)。马铃薯葡萄糖培养基(PDA):马铃薯200g,葡萄糖20g,琼脂20g,定容至
番茄绵疫病
（Phytophthora parasitica Dast.） 简介 绵疫病是番茄的重要病害，我国南北菜区均普遍分布，遇连阴雨天气，气温较高时病 害流行，常造成毁灭性的灾害（图1）。 （图1 植株受害状） 症状 绵疫病主要为害果实，但茎、叶等全株各个部位亦可受害。只要条件适于发病，任何 生长期的果实（即不论幼嫩果实或成熟期果实）均可受害。果实的任何部位均可染病，先出现污褐色湿润状、不定形的病斑，迅速向四周扩展，显出深污褐和浅污褐色的轮纹，最后病斑可复盖大部分至整个果实表面，果肉腐烂变软。病斑上长出许多白色絮状的霉层，为病菌的菌丝、孢囊梗和孢子囊（图2）。叶片染病亦可产生污褐色不定形病斑，多从叶缘先发病，迅速扩展至全叶变黑枯死、腐烂（图1），潮湿时亦长出白色霉层。 （图2 果实受害状） 病原 番茄绵疫病的病原主要是寄生疫霉菌（Phytophthora parasitica Dast.）以及辣椒疫霉（P. capsici Leonian）和茄疫霉(P. melongenae Sawada)，均属于鞭毛菌的真菌。菌丝体丝状、无隔膜。孢囊梗简单、丝状、无色，长度35~500微米。孢子囊顶生、单胞、卵圆形， 顶端有乳头状突起，大小28~59×24.8~43.5微米，孢子囊萌发长出有双鞭毛的游动孢子。 厚壁孢子球形、单胞、淡黄色。卵孢子圆球形，直径约30微米（图3）。 （图3 病原真菌）
发生规律和发病条件 绵疫病菌主要以卵孢子、厚壁孢子或菌丝体在病残体和土壤中越冬，为来年的初侵染菌源。南方温暖地区几乎一年四季都种植番茄，病株上的孢子囊也可以成为下季番茄发病的初侵染菌源。在温度适宜、有雨、湿度大的条件下，孢子囊即可萌发释放出游动孢子，游动片刻后成休止孢，然后萌发长出芽管进行侵染。初侵染发病后又长出大量新的孢子囊，通过气流或风雨传播，在同一生长季可进行频频的再侵染。 阴雨连绵、相对湿度在85%以上，平均气温在25~30℃的天气条件，特别是雨后转晴天，气温骤升，最有利于绵疫病的流行。我省的春番茄在四、五月份常发生绵疫病流行。菜田低洼、土质粘重、整地和管理粗放，种植过密，田间通风透光性差等情况均有利于绵疫病流行。 防治方法 番茄绵疫病的防治可采取下列综合措施。 1. 轮作：避免与茄子、辣椒等茄科蔬菜连作或邻作。与葱蒜类或水稻轮作效果较好。 2. 加强栽培控病管理：（1）采收后彻底清洁田园，病残体带出田外集中销毁。（2）种植前深翻晒土，高畦深沟，整平畦面以利雨后迅速排水。（3）勿过度密植，勤除畦面杂草，及时整枝打杈，开花结果后可适当剪除底部老叶以利田间通风透光。 3. 药剂防治。植株进入开花结果阶段，又值潮湿多雨高温季节，应作一次预防性喷药，一旦发现病害应立即加强喷药防治。可选喷下列药剂：（1）58%雷多米尔（瑞毒霉锰锌）可湿性粉剂500~600倍液。（2）64%杀毒矾可湿性粉剂500倍液。（3）30%氧氯化铜悬浮剂500倍液。（4）40%乙膦铝可湿性粉剂300~400倍液。隔7~10天喷一次，上述药剂轮换使用，连续喷3~4次。
辣椒常见病害及用药
宏绿辣椒常见病虫害及用药 一、病毒性病害：病毒性病害易随虫传播，尤其是蚜虫，应病虫同治。 1、花叶病：由黄瓜花叶病毒、烟草花叶病毒、豇豆花叶病毒等引起的病毒性病害。 病株上部叶先现浓绿淡绿相间花叶，严重的邹缩畸形黄花，病株长势弱、节间 短、开花畸形稀少。 用乐果、生物碱、氰戊菌酯、吡虫啉等杀虫，甾烯醇、葡聚烯糖、吗胍?硫酸锌、苦参·硫磺（病毒克星）杀毒。 2、病毒病：由烟草花叶病毒、黄瓜花叶病毒等引起的病毒性病害。花叶型病部不 规则退绿，病果畸形小邹。黄化型病叶变黄（上部全黄），矮化落叶。坏死型 斑驳状、条纹状病死，顶枯等。畸形型病叶增厚、变小、邹缩、厥叶，节间缩 短矮化、枝叶丝生丛簇状,病果畸形凹凸不平易脱落。 种子消毒：清水浸种4h转入10%磷酸三钠中20min后催种。用葡聚烯糖/氨基寡糖素防治。用植病灵、32%核苷·溴·吗啉胍(全新配方)、抗病威（病毒 K）、病毒立克、病毒A、病毒B、病毒杀星等混杀，拌药时加些许尿素松弛角 质层。 氯溴异氰尿酸、烷醇?硫酸铜、烯?烃?硫酸铜、混脂·硫酸铜、吗胍·乙酸铜、氨基寡糖素、香菇多糖、宁南霉素、辛菌胺醋酸盐等喷雾。 二核苷三氮唑、十三烷胍、松脂酸铜、生物碱杀菌剂与芸苔素。 二、细菌性病害： 1、青枯病：由茄科劳尔氏菌引起的细菌性病害。病株细根褐变后腐烂消失，横切 近地面病茎可发现维管束微褐变，并分泌出乳白色菌液，后期病株迅速萎蔫、 枯死，茎叶仍保持绿色。 定值时用农用硫酸链霉素、甲霜噁霉灵浸根，杀菌药（可杀得、中生菌素、络氨铜）灌根。无病前注入非致病性青枯菌占据生态位防治。 新植霉素、硫酸链霉素、青枯特效灵（中生噻枯唑）、多福锌菌胺、七小福根康、喷灌。 2、软腐病：由胡萝卜软腐欧式杆菌、根霉属真菌引起的细菌性病害。主要危害果 实，初期现水渍状暗绿斑，后变褐变黄腐烂，遇外力易脱落，破后流出溃液， 不掉则挂干剩白皮。 琥胶肥酸酮、噁酮菌酯喷雾。 用棉铃虫防治棉铃虫，用多福·福锌、多福·噻菌铜、多福辛·菌胺、根康喷灌。 3、黑斑病：由蔷薇双壳菌、多腔菌等真菌及假单孢属细菌等引起的病害。主害果 实，先现不规则淡褐色凹陷病斑（一果一斑），后成大病斑。 百菌清、杀毒矾、甲霜灵·锰锌喷雾。
培养基的配制和灭菌
培养基的配制和灭菌 姓名 摘要：培养基是人工配制的供给细菌或其他微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。培养基须经灭菌后方可使用。培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。此次实验我们配制LB（Luria Broth）培养基和麦康凯（MacConkey）培养基并进行高压蒸汽灭菌，目的是掌握LB培养基和麦康凯培养基的配制方法，了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围，并且熟悉培养基的灭菌方法。通过此次实验，我们成功地进行了LB培养基和麦康凯培养基的配制，熟悉了培养基的灭菌方法，达到了预期目的。 关键词：LB培养基麦康凯培养基高压蒸汽灭菌 培养基是人工配制的供给细菌或其他微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。培养基必须具备下列条件：碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子、水分和合适的pH。培养基种类较多，按其营养物来源不同，可分为天然培养基和合成培养基；按其物理状态分为液体、固体、半固体三种类型。在一定的条件下，培养繁殖得到的微生物群体叫做培养物。培养物分为纯培养物和混合培养物。只有一种微生物的培养物叫做纯培养物，含有多种微生物的培养物叫做混合培养物。通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果，自然环境中极少存在纯培养物，纯培养物通常是由人工方法获得的。获得纯培养的关键一是所有的相关物品必须无菌，二是分离出单个的微生物细胞并将其培养成一个群体。因此，无菌技术是保证微生物学研究正常进行的关键。 在分离、转接和培养纯培养时，防止其被其他微生物污染的技术称为无菌技术。无菌技术包括灭菌和无菌操作。灭菌是杀死包括芽孢在内的所有微生物。灭菌的目的是让用于分离、培养微生物的器具和基质事先不含任何微生物。微生物培养的常用器具（例如试管、三角瓶、培养皿等）和培养基都需要灭菌。无菌操作要在火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行，并且接种工具（接种环、接种针等）需要灼烧灭菌。 培养基一般采用高压蒸汽灭菌法灭菌。高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。高温使蛋白质、核酸等重要生物大分子发生变性、破坏，以及破坏细胞膜上的类脂成分，导致微生物死亡。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。 1.材料和方法 1.1材料和试剂 实验试剂：蛋白胨、酵母粉、NaCl、NaOH、琼脂、麦康凯培养基、去离子水 实验器材：2个300mL三角瓶、2个100mL三角瓶、1个500mL三角瓶、量筒、电子天平、称量纸、称量匙、500mL烧杯或搪瓷缸、试管、pH试纸、电炉、高压蒸汽灭菌锅 1.2方法 1.2.1 LB培养基的配制方法 ①清洗三角瓶。需要清洗2个300mL三角瓶和2个100mL三角瓶。三角瓶用自来水洗净， 然后蒸馏水冲洗2遍，最后沥干。
实验一培养基的配制及灭菌
实验一培养基的配制及灭菌 培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。各类微生物对营养的要求不尽相同，因而培养基的种类繁多。在这些培养基中，就营养物质而言，一般不外乎碳源、氮源、无机盐、生长因子及水等几大类。培养基的配制，一是要求在营养成分上能满足所培养微生物生长发育的需要，二是培养基在使用前不带菌，三是以灭菌后和保存过程中营养成分不发生变化。培养基的灭菌通常在培养基配制后进行，其目的是杀灭培养基中残存的微生物或活的生物残体，保证培养基在贮存过程中不变质，也防止其他生物对培养的污染。 一、实验目的 1．掌握实验室常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎方法。 2．明确培养基的配制原理。 3．掌握配制培养基的一般方法和步骤。 4．了解湿热和干热灭菌的原理，并掌握有关的操作技术。 二、实验原理 灭菌是指杀灭物体中所有微生物的繁殖体和芽孢的过程。消毒是指用物理、化学或生物的方法杀死病原微生物的过程。灭菌的原理就是使蛋白质和核酸等生物大分子发生变性，从而达到灭菌的作用，实验室中最常用的就是干热灭菌和湿热灭菌。 干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160～170℃），时间长（1～2h）。但干热灭菌温度不能超过 180℃。否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦，甚至引起燃烧。 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大。其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低，二是湿热的穿透力比干热大，三是湿热的蒸气有潜热存在。这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。
植物病原真菌统计
21个植物病原真菌： 水稻稻瘟病菌(Magnaporthe grisea) 玉米小斑病菌(Bipolarismaydis) 玉米干腐病菌(Diplodia zeae) 玉米弯孢弯霉叶斑病菌(Curvularia lunata) 魔芋基腐病菌(Fusarium solani) 玉米茎腐病菌(Fusarium graminearum) 康乃馨枯萎病菌(Fusarium oxysporum.f sp.dianthi) 烟草枯萎病菌(Fusarium oxysporum.f sp.nicotianae ) 棉花红腐病菌(Fusarium moniliforme) 棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum.f sp. vasinfectum) 小麦根腐病菌(Bipolaris sorokiniana) 小麦雪腐病菌(Gerlachia nivalis) 小麦纹枯病菌(Rhizoctonia cerealis) 马铃薯晚疫病菌(Phytophthora infestans) 番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea) 烟草立枯丝核病菌(Rhizoctonia solani) 甘蔗黑腐病菌(Ceratocystis adiposum ) 苹果斑点病菌(Alternaria alternate.f sp. mali) 烟草赤星病菌(Alternaria alternate) 烟草疫霉病菌(Phytophthora parasitica) 辣椒疫霉病菌(Phytophthora capsici)。 所有菌株均来自云南农业大学植物病理重点实验室。 李干腐病病菌Polvporus hirsutus 灰霉病病菌Botrytiscinerea 茄褐纹拟茎点霉Phomopsis vexans 黑根霉Rhizopus nigricans 马铃薯干腐病病菌Fusarium caerulem(Libert) Sacc. 白菜黑斑病菌Alternaria brassicae 大丽轮枝菌Verticillium dahlia 银杏叶枯病病菌Alternaria tenuis Ness 胶孢炭疽菌Colletotrichum gloeosporioides Penz. 金银木假尾孢叶斑病菌Pseudocercospora lonicericola (Yamam.) Deighton 桃褐腐病菌Monilinia fructicola 棉花红点病病菌Fusarium monihforme 葡萄痂圆孢菌Sphaceloma ampelinum de Bary 菜豆炭疽病病菌Colletotrichum lindemuthianum 尖孢镰刀菌Fusarium oxysporium 巴西毛壳菌Chaetomium brasiliense 枝孢芽枝菌Cladosporium cladosporioides 供试植物病原真菌： 尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum 、茄腐镰刀菌(Fusarium solani) 半裸镰刀菌(Fusarium semitectum) 燕麦镰刀菌(Fusarium avenaoeum) 黄瓜猝倒病菌(Phthium aphanidermatum) 大豆猝死病菌(Fusarium virguliforme) 大豆紫斑病菌(Cercospora kikuchii) 大豆灰斑病菌(Cercospora sojina) 番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea) 番茄叶霉病(Fulviafulva) 番茄早疫病菌(Alternaria solani) 玉米大斑病菌(Exserohilum turcicum) 玉米小斑病菌(Bipolar is maydis) 烟草赤星病菌(Alternaria alternata) 大豆菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum) 立枯丝核菌(Rhizoctonia solani) 由中国科学院东北地理与农业生态研究所作物生理生态实验室保存。 供试病原菌： 辣椒疫病菌 番茄晚疫病菌（Phytophthora infestans） 黄瓜蔓枯病菌（Mycosphaerella melonis）甜瓜蔓枯病菌（Didymella bryoniae） 黄瓜炭疽病菌（Colletotrichum orbiculare）葡萄炭疽病菌（Colletotrichum gloeosporioides） 葡萄灰霉病菌（Botrytis cinerea Pers.） 梨轮纹病菌（Physalospora piricola Nose）小麦赤霉病菌（Fusarium graminearum）茄子根腐病菌（Fusarium solani） 均由辽宁省农业科学院植物保护研究所园艺作物病害研究室提供。
5种新型化学杀菌剂对辣椒疫霉病菌的毒力与药效
第44卷 第6期河南农业大学学报V o.l 44 N o .62010年 12月 Journa l of H enan A gricultural Un iversity D ec . 2010 收稿日期:2010-08-12 基金项目:河南省重点科技攻关资助项目(082102350006) 作者简介:宋天有,1983年生,男,河南方城人,硕士研究生,主要从事生物农药与植物保护研究.通讯作者:周 琳,1971年生,女,河南南阳人,博士,副教授,硕士生导师. 文章编号:1000-2340(2010)06-0675-04 5种新型化学杀菌剂对辣椒疫霉病菌的毒力与药效 宋天有1 ,周 璞2 ,万红娟1 ,高 飞1 ,程永战1 ,周 琳 1 (1.河南农业大学植物保护学院,河南郑州450002;2.河南省舞钢市畜牧局,河南舞钢462500) 摘要:为筛选辣椒疫霉病的有效防治药剂,采用菌丝生长速率法、游动孢子释放抑制法和室内盆栽,对5种新型化学杀菌剂(双炔酰菌胺、银法利、普力克、安博和阿米西达)进行了室内毒力测定和盆栽防效试验.室内毒力测定结果表明,双炔酰菌胺对辣椒疫霉病菌菌丝生长抑制作用最强,其EC 50值为0.06mg L -1;银法利次之,其EC 50值为1.41mg L -1.银法利对辣椒疫霉病菌游动孢子释放抑制作用最强,其EC 50值为11.73m g L -1;双炔酰菌胺次之,EC 50值为30.78mg L -1.盆栽试验结果表明,稀释1000倍液的5种杀菌剂中,687.5g L -1银法利悬浮剂对辣椒疫霉病的盆栽防效最好,平均防效为76.92%;其次为25%双炔酰菌胺悬浮剂和50%安博可湿性粉剂,平均防效均为69.23%. 关键词:辣椒疫霉病菌;杀菌剂;杀菌活性;防治效果中图分类号:S482.2 文献标志码:A The toxicities and effects of five fungici des on Phytopht hor a capsici Leoni an SONG T ian you 1 ,Z HOU Pu 2 ,WAN H ong j u an 1 ,GAO Fe i 1 ,C HENG Yong zhan 1 ,Z HOU Lin 1 (1.Co llege of Plan t Pr o tection ,H enan A griculturalUn i v ersity ,Zhengzhou 450002,Ch i n a ; 2.L i v estock Bureau o fW ugang C ity ,W ugang 462500,Ch i n a ) Abst ract :W ith the purpose o f screening fung icides to contro l effecti v e l y Phy tophthora cap sici Leon i a n,the m ycelial li n ear gro w t h rate m ethod ,release i n h i b iti n g m ethod of the zoospo res ,and potted plants testw ere adopted to test the contr o l effect o f fi v e f u ng ici d es on P.cap sici .The results indicated t h at m andipropa m id had the best i n hibiti n g effect on the hypha gro w th o f pathogen w it h the EC 50value of 0.06m g L -1 .The effect of Y i n fali(Prev icur-N +F l u opicolide)fo ll o w ed w ith the EC 50va l u e of 1.41m g L -1.W h ile i n the re l e ase i n h i b iting experi m ent o f the zoospores of P.capsici sporang i u m,Y i n fali exh i b ited the strongest fung icida l activitiesw it h the EC 50va l u e o f 11.73m g L -1 .The second w as m and i p ropa m i d w ith the EC 50value o f 30.78m g L -1 .The resu lts i n po t experi m ents show ed 687.5g L -1 Y i n fali SC w it h 1000-fold d il u tion had the best control effect be i n g 76.92%,fo ll o w ed by 25%m and i p ropa m i d SC and 50%th ira m W P w ith 69.23%con tro l e ffec.t K ey w ords :Phy tophthora cap sici Leon i a n ;fung ic i d es ;antif u ngal acti v ity ;con tro l e ffect 辣椒疫病是一种重要的毁灭性土传卵菌病害,现已在全世界普遍发生 [1] .其病原菌(Phy toph t h ora capsici Leonian.)除危害辣椒外,也可侵染番茄、茄子、黄瓜、西瓜、南瓜等作物.近年来,随着辣椒在各
卵菌病害
谈谈卵菌病害 卵菌是引起蔬菜病害的重要病原菌之一，因有性阶段产生卵孢子而得名。卵菌的寄生范围很广，几乎所有蔬菜上都有卵菌病害。卵菌破坏性强、为害性大、发展迅速，由卵菌引起的蔬菜病害大多较难防治。引起蔬菜病害的主要是腐霉属、疫霉属、霜霉菌和白绣属，霜霉菌又包括假霜霉属、霜霉属、盘梗霉属等。其中，霜霉菌和疫霉属引起的病害潜育期短、再浸染次数多、发病迅速，易造成病害流行，导致蔬菜生产的严重损失。 主要卵菌病害分析 近些年来，我国棚室蔬菜种植面积不断增大，卵菌病害对蔬菜生产的为害也日趋严重。为害棚室蔬菜生产的主要是卵菌中的腐霉属、疫霉属、霜霉菌。由卵菌引起的各中病害都是危害性很强的种类，虽种类不多，但发病迅速、传播快、为害重。 1.猝倒病 主要为害幼苗，多从茎基部感病。初为水渍状，并很快扩展、溢缩变细如“线”，病部不变色或呈黄褐色，病势发展迅速，成“由点到面”方式扩展。也能引起烂种或烂芽。 该病多数由瓜果腐霉引起，少部分为刺盘腐霉和疫霉。病菌以卵孢子或菌丝在土壤中及病残体上越冬。主要靠雨水、灌溉传播。病菌在土温15-16℃时繁殖最快，适宜发病地温10℃，故早春发病重。浇水后积水处或薄膜滴水处，最易发病而成为发病中心。 2.绵腐病 主要为害成熟期的瓜果，病部初呈褐色水浸状，后迅速变褐软腐。湿度大时，病部长出厚的白色绵毛。 病原菌主要是瓜果腐霉、终极腐霉等。病菌以卵孢子在表土层越冬。病菌主要通过雨水、灌溉水和土壤耕作传播。病菌生长适宜地温15-16℃，温度高于30℃受到抑制；适宜发病地温10℃，低温对寄主生长不利，但利于发病。 3.疫病 疫病危害性很强。可侵染叶、茎、根及果实，受害部位产生黑褐色水渍状腐烂斑。 疫病病原种类很多，卵菌、真菌、细菌引起的病害都有称为疫病的，以卵菌为主。由卵菌引起的疫病主要有茄果类晚疫、瓜类疫病等。病原菌以菌丝或卵孢子随病残体在土壤中或粪肥里越冬，翌年产生分生孢子借气流、雨水或灌溉水传播。发病温度范围为5-37℃，最适20-30℃。雨季及高温高湿发病迅速。 4.疫霉根腐病 由疫霉菌引起，侵染茎基部或根部，产生水浸状褐斑，逐步扩大凹陷。病原菌特点与卵菌疫病基本相同。 5.绵疫病 主要为害果实。近地面果实先发病，受害果初为水浸状圆斑，稍凹陷，果肉变褐腐烂，易脱落，如茄子“掉蛋”。湿度大时，病部表面长出茂密的“白毛”，病果落地很快腐烂。 该病主要由辣椒疫霉、烟草疫霉、茄疫霉引起。该病原菌喜高温高湿，发育适温30℃，空气相对湿度95%以上。病菌主要以卵孢子随病残体在土壤中越冬，通过风雨传播。重茬地、地下水位高、排水不良、密植、通风不良或棚膜滴水，易诱发本病。 6.霜霉病 主要为害叶片。初期叶片染病，在太阳下可看到透明水浸状斑。后病斑变黄扩展，受叶脉限制成明显的多角形病斑。天气潮湿时在病斑的反面会长出较茂密的灰黑至紫灰色的霉层，是识别霜霉病的重要特征。 霜霉菌包括假霜霉属、霜霉属等，假霜霉属引起瓜类霜霉病，霜霉属侵染十字花科。春末和秋季该病发生最普遍。病菌以菌丝在种子或秋冬季蔬菜上越冬，也可以卵孢子在病残体上越冬。主要通过气流、浇水、农事及昆虫传播。病原菌适宜侵染温度15～17℃，田间种植过密、定植
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告 篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细) 一、实验题目：培养基的制备与灭菌 二、实验目的： 1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。 2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。 三、实验器材： 1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。 2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。 四、实验原理： 1、培养基的制备 包括一下几种成分： （1）水分：主要成分。 （2）n源：包括无机氮和有机氮。 （3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。 （4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。 有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些 氨基酸或核酸等。 2、培养基配置的原则 根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。 培养基有以下分类： 按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基 按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基 按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基 培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。 3、灭菌： 用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。 （1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器， 加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。若 是含糖培养基，110℃、30min。