王镜岩核酸的物理化学性质

核酸的物理化学性质

7-3 核酸的物理化学性质上册P502 （一）核酸的水解： 所有糖苷键和磷酸酯键都能被水解。 （1）酸水解： 糖苷键比磷酸二酯键易被水解，嘌呤碱糖苷键比嘧啶碱更易水解。 （2）碱水解： 磷酸酯键易水解，RNA比DNA易水解，因为RNA核糖上有2‘-OH，水解过 程见P502。 （3）酶水解： 为水解磷酸二酯键的酶，专一水解核酸的为核酸酶。 1.核酸酶的分类： 按底物专一性分为RNase（核糖核酸酶）和DNase（脱氧核糖核酸酶）。 按对底物作用方式分为内切酶（作用点在核糖核酸酶内部）和外切酶（作用 点在末端）。 2.RNase：如牛胰核糖核酸酶（EC 2.7.7.16），内切酶，作用位点为嘧啶核苷（Py） -3‘-磷酸与其他核苷酸之间的连键。 3.限制性内切酶：为DNase。 剪裁DNA的工具，可用于核酸测序和基因工程。 在细菌中发现，目前已找到限制性内切酶数千种。限制性内切酶往往与甲基 化酶成对存在，自身酶作用位点的碱基被甲基化，内切酶不再降解，因而可 识别和降解外源DNA。 断裂位点处常有二重旋转（轴）对称性（回文结构，正读反读相同），在特定 位点两条链切断后形成粘末端或平末端。 限制性内切酶命名：如E. coR Ⅰ，第1个字母E(大写)，为大肠杆菌(E.coli) 属名的第一个字母，第2、3两个字母co（小写）为种名头两个字母，第4 个字母R，表示菌株，最后一个罗马字为该细菌中已分离这一类酶的编号。（二）核酸的酸碱性质： 核苷和核苷酸都是兼性离子，碱基和磷酸基均能解离，见P505，具有酸碱性。 由于DNA酸碱变性，使酸碱滴定曲线不可逆。 （三）核酸的紫外吸收： 嘌呤环与嘧啶环具有共轭双键，核苷和核酸的吸收波段在240~290nm，最大吸收值在260nm附近（蛋白质最大吸收值280nm）。 （1）可用于测样品纯度（测吸光度A）： A260/A280比值，纯DNA应大于1.8，纯RNA应达到2.0，若样品混有杂蛋白，比值明显降低。 对于纯样品，从260nm的A值即可算出含量。A值为1，相当于50μg/mL DNA双螺旋，或40μg/mL单链DNA（或RNA），或20μg/mL寡核苷酸。 （2）核酸的摩尔磷吸光系数ε（P）：为含有1克原子磷（30.98g）的核酸在260nm 处的吸光系数。 ε（P）= A / CL. = 30.98 A / W L A：吸收值，C：每升溶液的磷摩尔数，C=W/30.98，L：比色杯内径。 一般天然DNA ε（P）为6600，RNA为7700~7800 由于双螺旋结构使碱基对的π电子云发生重叠，使紫外吸收比单链减少，由此可判断DNA是否变性。

第十五章 核酸的物理化学性质和研究方法答案法答案

第十五章核酸的物理化学性质和研究方法答案 一．选择题 1-7 ③③②④①④ 二．判断题 1-4是否否否 5-9 是是是是是 三．名词解释 cot：是DNA复性的动力学常数，数值上等于单链DNA初始浓度Co和复性完成一1. 1 2 半所需时间的乘积，其大小代表DNA顺序的复杂程度。 2 增色效应：由于DNA变性引起的光吸收增加称增色效应,也就是变性后DNA 溶液的紫外吸收作用增强的效应。 四．问答题 1、RNA比DNA更不稳定，为什么？ RNA的磷酸酯键易被碱水解，因为RNA的核糖上有2 ’-OH,在碱作用下形成磷酸三酯，磷酸三酯极不稳定，随即水解产生核苷2’，3’-环磷酸酯。该环磷酸酯继续水解产生2’-核苷酸和3’-核苷酸。DNA的脱氧核糖没有2 ’-OH，不能形成碱水解的中间产物，故对碱有一定抗性。 2、何谓变性？是否所有能引起蛋白质变性的因素都能引起核酸变性，或者引起核酸变性的因素都能引起蛋白质变性？ 变性作用是指核酸双螺旋结构被破坏，双链解开，从而核酸的天然构象和性质发生改变，但共价键并未断裂。 3、何谓Southern杂交？何谓Northern杂交？它们的原理和用途是什么？ Southern杂交是将凝胶电泳分开的DNA限制片段转移到硝酸纤维膜上进行杂交。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上，与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号。该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA 指纹分析和PCR产物判断等研究中。 Northern杂交将变性的RNA转移到硝酸纤维膜上，通过分子杂交以检测特异的RNA。原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。 4、琼脂糖凝胶电泳对核酸研究有何用途？ 分离DNA分子大小从上百kb到数百bp, 凝胶电泳后可以用嵌合荧光染料显色，凝胶电泳后核酸样品可用多种方法自凝胶上回收。 5、为制备变性胶，常在琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中添加什么变性剂？它们有何用途。 为制备变性胶，常在琼脂糖凝胶中添加氢氧化甲基汞或甲醛，RNA在变性凝胶中电泳时，相对分子质量的对数才与迁移率成反比。 在聚丙烯酰胺凝胶中添加8mol/L尿素或98%甲酰胺，DNA和RNA的二级结构已被破

核酸的理化性质

第15章、核酸的物理化学性质（上册P502） 本章重点：1、核酸的水解，2、核酸的紫外吸收，3、核酸的变性和复性 本章的主要内容： （一）核酸的水解： 所有糖苷键和磷酸酯键都能被水解。 （1）酸水解： 糖苷键比磷酸二酯键易被水解，嘌呤碱糖苷键比嘧啶碱更易水解。 （2）碱水解： 磷酸酯键易水解，RNA比DNA易水解，因为RNA核糖上有2‘-OH，水解过 程见P502。 （3）酶水解： 为水解磷酸二酯键的酶，专一水解核酸的为核酸酶。 1.核酸酶的分类： 按底物专一性分为RNase（核糖核酸酶）和DNase（脱氧核糖核酸酶）。 按对底物作用方式分为内切酶（作用点在核糖核酸酶内部）和外切酶（作用 点在末端）。 2.RNase：如牛胰核糖核酸酶（EC 2.7.7.16），内切酶，作用位点为嘧啶核苷（Py） -3‘-磷酸与其他核苷酸之间的连键。 3.限制性内切酶：为DNase。 剪裁DNA的工具，可用于核酸测序和基因工程。 在细菌中发现，目前已找到限制性内切酶数千种。限制性内切酶往往与甲基 化酶成对存在，自身酶作用位点的碱基被甲基化，内切酶不再降解，因而可 识别和降解外源DNA。 断裂位点处常有二重旋转（轴）对称性（回文结构，正读反读相同），在特定 位点两条链切断后形成粘末端或平末端。 限制性内切酶命名：如E. coR Ⅰ，第1个字母E(大写)，为大肠杆菌(E.coli) 属名的第一个字母，第2、3两个字母co（小写）为种名头两个字母，第4 个字母R，表示菌株，最后一个罗马字为该细菌中已分离这一类酶的编号。（二）核酸的酸碱性质： 核苷和核苷酸都是兼性离子，碱基和磷酸基均能解离，见P505，具有酸碱性。 由于DNA酸碱变性，使酸碱滴定曲线不可逆。 （三）核酸的紫外吸收： 嘌呤环与嘧啶环具有共轭双键，核苷和核酸的吸收波段在240~290nm，最大吸收值在260nm附近（蛋白质最大吸收值280nm）。 （1）可用于测样品纯度（测吸光度A）： A260/A280比值，纯DNA应大于1.8，纯RNA应达到2.0，若样品混有杂蛋白，比值明显降低。 对于纯样品，从260nm的A值即可算出含量。A值为1，相当于50μg/mL DNA双螺旋，或40μg/mL单链DNA（或RNA），或20μg/mL寡核苷酸。 （2）核酸的摩尔磷吸光系数ε（P）：为含有1克原子磷（30.98g）的核酸在260nm 处的吸光系数。 ε（P）= A / CL. = 30.98 A / W L

生物化学-生化知识点_核酸的物理化学性质

7-3 核酸的物理化学性质上册P502 一一一核酸的水解： 所有糖苷键和磷酸酯键都能被水解。 一1一酸水解： 糖苷键比磷酸二酯键易被水解，嘌呤碱糖苷键比嘧啶碱更易水解。 一2一碱水解： 磷酸酯键易水解，RNA比DNA易水解，因为RNA核糖上有2‘- OH，水解过程见P502。 一3一酶水解： 为水解磷酸二酯键的酶，专一水解核酸的为核酸酶。 1.核酸酶的分类： 按底物专一性分为RNase（核糖核酸酶）和DNase（脱氧核糖核酸酶）。 按对底物作用方式分为内切酶（作用点在核糖核酸酶内部）和外切酶（作用点 在末端）。 2.RNase：如牛胰核糖核酸酶（EC 2.7.7.16），内切酶，作用位点为嘧啶核苷（Py）- 3‘-磷酸与其他核苷酸之间的连键。 3.限制性内切酶：为DNase。 剪裁DNA的工具，可用于核酸测序和基因工程。 在细菌中发现，目前已找到限制性内切酶数千种。限制性内切酶往往与甲基 化酶成对存在，自身酶作用位点的碱基被甲基化，内切酶不再降解，因而可识 别和降解外源DNA。 断裂位点处常有二重旋转（轴）对称性（回文结构，正读反读相同），在特定位 点两条链切断后形成粘末端或平末端。 限制性内切酶命名：如E. coR Ⅰ，第1个字母E(大写)，为大肠杆菌(E.coli)属名的第一个字母，第2、3两个字 母co（小写）为种名头两个字母，第4个字母 R，表示菌株，最后一个罗马字为该细菌中已分离这一类酶的编号。 一一一核酸的酸碱性质： 核苷和核苷酸都是兼性离子，碱基和磷酸基均能解离，见P505，具有酸碱性。 由于DNA酸碱变性，使酸碱滴定曲线不可逆。 一一一核酸的紫外吸收： 嘌呤环与嘧啶环具有共轭双键，核苷和核酸的吸收波段在240~290nm，最大吸收值在260nm附近（蛋白质最大吸收值280nm）。 一1一可用于测样品纯度（测吸光度A）： A260/A280比值，纯DNA应大于1.8，纯RNA应达到2.0，若样品混有杂蛋白，比值明显降低。 对于纯样品，从260nm的A值即可算出含量。A值为1，相当于50μg/mL DNA双螺旋，或40μg/mL单链DNA（或RNA），或20μg/mL寡核苷酸。 一2一核酸的摩尔磷吸光系数ε（P）：为含有1克原子磷（30.98g）的核酸在260nm处的吸光系数。 ε（P）= A / CL. = 30.98 A / W L A：吸收值， C：每升溶液的磷摩尔数，C=W/30.98， L：比色杯内径。 一般天然DNA ε（P）为6600，RNA为7700~7800