白血病细胞

新型抗菌肽MPI对耐药的白血病细胞新的作用方式

刘立伟摘要：

根据在治疗抗肿瘤细胞的最近的报告中，新药物新的作用方式引起了人们广泛的兴趣。MPI是一个较短的阳离子抗菌肽对肿瘤细胞具有选择毒性但是不具有溶血活性。他作用目标的选择性主要是基于通过静电作用对包括阴离子磷脂的膜的黏附。P1和台盼蓝能够渗透进到肿瘤细胞，表明这这个杀菌机制涉及到对质膜的干扰。SEM和共焦显微镜试验证明细胞的死亡是由于剧烈的损伤和破裂，也就是坏死。与常规的化学疗法相比，MPI的目标是细胞膜而不是进入细胞施加其作用。所以在治疗中，肿瘤细胞对MPI形成耐药性是很难的并且它的作用不受常规耐药机制的影响。尽管这是个初步的研究，主要是观察它在体外的活性而不是体内的活性，随着对常规的化学疗法的耐药性的增加，MPI在治疗癌症耐药性上提供了一个新的治疗策略。

1.简介

常规化学疗法的广泛使用导致在治疗中抗肿瘤细胞频繁出现。由于癌症治疗的失败抗性已经变成一个主要的问题。对抗癌药的抗性主要涉及两方面：首先，抗性是癌症的本质，住院病人个体的不同和体细胞瘤基因的不同；其次，获得抗性变得越来越普通。大范围抗癌药获得抗性最普通的原因是一个或是更多的转运蛋白的表达。再如，这些细胞通常对其他抗癌药展示出交叉抵抗力，我们付出更大的努力主要是用于寻找有效的治疗耐药性的方法并且验证和寻找新的作用方式。

阳离子抗菌肽在不同的生物体的先天免疫系统中起主要的作用，包括昆虫，两栖动物和哺乳动物。最初，这些肽作为抗菌剂引起了人们的注意，其次，对肿瘤细胞的选择性也引起了人们的注意。大多数这些肽具有两亲结构，他们优先的黏附并插入到带负电的膜上。由于原核生物和癌细胞的外膜具有较高的磷脂含量，所以与真核生物的膜相比，许多这些肽优先干扰原核生物和癌细胞膜。

MPI属于阳离子抗菌肽家族并且最初是从群居黄蜂Polybia paulista.的毒液中分离出来的。它对革兰氏阳性菌和阴性菌有杀菌活性但是对小鼠的红细胞没有溶血活性。最近，报道MPI作为抗癌抗菌素的候选者，有效的的抗一些实体瘤。

这个试验用于评估MPI对抗多聚耐药细胞人骨髓白血病K562的潜能以便寻找MPI的作用机制和为治疗耐药癌症提供新的策略。

2．材料和方法

2.1肽的合成

肽是固相合成法合成的，是按先前所描述的方法纯化的。MPI溶于水中形成的浓度为1mM的母液，用之前用PBS稀释。

2.2细胞培养

K562，K562/ADM,HL60,L1210在试验中所使用的细胞是从兰州大学医学研究中心获得的。小鼠成纤维细胞株NIH3T3是从中科院生物物理研究所获得的。细胞培养在1640并添加10%的加热灭活的胎牛血清培养液中，在37℃，5%的CO2的潮湿的空气中培养。为了保持K562/ADM的耐药性，周期性的添加ADM。这样获得K562/ADM细胞，去掉ADM一周后将细胞用于试验。分别在指明密度的缓冲液中通过离心，清洗，再悬浮获得细胞。

2.3细胞增殖和活性测定

MP1的抗癌活性是按照先前报道的MTT试验测定方法的测定的。细胞按照每个孔5×103的密度种在96孔板子中，24小时后加药。细胞或者用不同浓度的肽处理或者不加药，培养24小时，每孔加入5mg/ml的MTT，培养4小时。离心，去掉上清液，加入DMSO150ul溶解每孔中的甲瓒结晶。每孔的吸光度值在570nm下用酶免检测仪测定，没有加药的孔作为对照，代表的是细胞存活率是100%，没有细胞的孔作为空白对照。每个细胞的IC50值是通过与未经过药物处理的相比导致50%的吸光度值减少的药物剂量计算的。

2.4细胞毒性测定

LDH测定是按照厂商的制定的说明进行的。简单的说是，细胞培养在微板中，加入不同浓度的MPI，37℃中培养3小时。空白是LDH最大释放，细胞培养在加入2%triton-X-100培养液中。为了测定LDH正常的释放，细胞培养在含有血清的1640培养液中。微板离心后，100ul的上清液移到新的EP试管中。用酶免检测仪在450nm的波长下测定有颜色的甲瓒结晶物的吸光度值。细胞毒性测定的试验重复三次。

2.5流式细胞计数分析

为了测定用肽处理后细胞的完整性，在对数期首次获得敏感细胞和耐药细胞，与15uM的MPI混合，在37℃中培养5分钟，然后，加入PIi，悬浮液在黑暗的室温下再培养10分钟。混合物用流式细胞计数法分析，并用计算机辅助测定数据。

2.6台盼蓝吸收的测定

在10mM的羟乙基哌嗪乙磺酸中将肽的各种稀释浓度或缓冲液加到细胞悬浮液中，混合液在室温下培养5分钟，然后加入台盼蓝，悬浮液室温下再培养2分钟。然后细胞通过血细胞计数板在光学显微镜下计数。细胞膜的破坏率的计算作为台盼蓝阳性细胞与全部细胞的比率。

2.7 共焦荧光显微镜分析

K562和K562/ADM细胞培孵育在MPI或是缓冲液中。混合液在室温下培养5分钟，然后加入PI，悬浮液在黑暗的室温下再培养5分钟。显微和激光共焦荧光显微镜分析。

2.8扫描电子显微镜检查

每个培养瓶至少种5×104个细胞，培养过夜。第二天添加终浓度为15uM的MPI 。孵育5分钟。包括有MPI的培养液通过离心去掉，随后每管中加入1ml3%的戊二醛。被戊二醛立即固定后，所有的细胞浸泡在 2.5%的单宁酸中两天。Counter-fixation在2%四氧化锇中两小时后计数固定，用乙醇脱水，并在临界点用干燥剂干燥。细胞用金覆盖，并用扫描电子显微镜分析。

2.9钙磷脂结合蛋白Ⅴ的结合试验

在黑暗的4℃下，细胞悬浮在10mMHEPES中，

5mMKcl,150mMNacl,1mMMgcl

2,1.8mMCacl

2

,pH77.4，与荧光标记的钙磷脂结合蛋白

Ⅴ培养15分钟。混合物在冰冷的缓冲液被稀释，并用计算机辅助的流式计数仪分析数据。

3结果

3.1MPI对敏感抗药的人白血病细胞的抑制作用

我们使用MTT试验评估了MPI对敏感的抗药的人白血病细胞的抗增殖作用。这主要是基于MTT对活细胞中线粒体脱氢酶作用。为了评估MPI对细胞增殖的效应，各种不同剂量的MPI加到K562,562/ADM的细胞培养液中。正如数据1

所示，把细胞置于增加浓度的MPI中24小时将剂量依赖的抑制敏感的抗药细胞。MPI对其它两种人白血病细胞和NIH3T3的抗增殖效应我们也进行了测定。MPI 对敏感抗药的人白血病细胞表现出相同的敏感性，但是对于非致瘤细胞的抗增殖效应比较低。

我们比较了MPI与传统的化学药ADM和AMD对细胞的抗增殖效应。K562,562/ADM对MPI变现出相同的敏感性，但是对ADM的抗性是201倍，对AMD是14.7倍。这些数据证明了MPI对耐药肿瘤细胞是有效的。

3．2 MPI对各种细胞的毒性

细胞毒性实验通过检测坏死细胞LDH的释放来检测细胞溶解。细胞膜对LDH的渗透是只要是基于细胞内高的LDH值和穿膜孔的改变或是孔道的形成或是细胞程序性死亡。尽管LDH的释放可能包括分泌物的增加和LDH分子从细胞质到细胞表面膜的降解，LDH 作为细胞内的酶当细胞膜被MPI破坏时被释放。

在MPI处理的所有的白血病细胞LDH的释放增加。当MPI的浓度为50UM时，LDH 的释放达到最大。值得注意的是LDH从敏感和抗药的人白血病细胞的释放的趋势是一样的。相反正常的成纤维细胞没有表现出明显的细胞溶解作用。这些结果表明MPI 可以村坏细胞膜并导致目标细胞的死亡。

3．3 MPI诱导的敏感抗药的K562细胞膜的剧烈变化

与MPI共培养后敏感和抗药的细胞的形态用扫描式电子显微镜和显微镜来分析。同样，细胞膜的完整性是由DNA吸收的嵌入的荧光颜料PI决定的。染料通过被MPI破坏的膜进入并嵌入DNA。这可通过荧光显微镜观察。

正如图3所示，对照组的膜是完整的，是光滑的，没有PI。然而，与MPI 共培养的细胞膜是破坏的，细胞里大部分都有PI。在扫描式电子显微镜下对照细胞上有微绒毛，与MPI共培养的细胞膜上有孔道，PI通过孔进入并且引起细胞质泄漏并导致细胞的坏死。更令人注意的是，正如图5所示，敏感的K562细胞的敏感性和耐药K562/ADM对MPI的作用基本相同，对PI的阳性K562是K562/ADM的1.3倍，对PI的荧光强度K562/ADM是K562的1.46倍。

台盼蓝的吸收实验用来检测细胞膜的完整性。台盼蓝被活被细胞膜所排斥，能穿过坏的外胞浆，当细胞与各种浓度的MPI共培养时，台盼蓝通过外胞浆进入细胞质，因而细胞能存留台盼蓝。也就是说，台盼蓝仅能存在于有渗透功能的非

活性细胞中。用MPI处理的肿瘤细胞，渗透百分率通过检测活细胞的数量来寻找渗透作用和细胞失活之间的可能的浓度的关系。正如图6所示，MPI对K562和K562/ADM能浓度依赖性的诱导相同的对台盼蓝的可渗透性。

3.4 MPI对所有细胞的选择性作用机制

为了检测MPI对致瘤和非致瘤细胞的选择性作用机制，细胞表面PS的相对数量是由黏附的荧光标记的锚定蛋白V和后来的FACS分析。经过处理的细胞和对照细胞荧光强度的改变可看作是PS含量的一个标记。在敏感和抗药的人白血病细胞上获得的荧光强度是表面裸露的PS锚定蛋白的数量，然而，正常的淋巴细胞和成纤维细胞比K562和K562/ADM表现出较小的荧光强度的改变，这表明较少的PS暴露在这些细胞上。

4 讨论

随着癌症治疗的进步，癌症依然是发病和致死的主要疾病，然而，传统的化学疗法有一定的负作用，并且癌症对化学药剂有一定的耐药性，改变药物和目标的相互作用，增加对破坏的DNA的修复。两性a-螺旋阳离子肽，俞常规的化学药剂相比，对细胞没有毒性，将在癌症的治疗上是一个很大的进步。

在这个研究中，在使用的浓度范围内MPI明显的抑制敏感和抗药细胞的增值，但对正常的细胞的抗增值作用的影响较小。从破损的细胞中释放的较高的LDH 活性，在用MPI处理的敏感和抗药和人白血病细胞中也发现。值的注意的是成纤维细胞中LDH的释放比致瘤细胞少很多。这些数据表明，化学疗法的普通机制不影响MPI的作用。因而，MPI与普通的化学疗法相比有很大的优越性。

对MPI选择的杀死肿瘤细胞的机制还不能清楚的解释。然而，在我们的研究中，处理细胞中荧光强度的改变比正常的细胞要明显。也就是说，敏感和抗药的K562细胞比淋巴细胞上有较多的锚定蛋白。锚定蛋白是分子量为25–36 KDa其上粘有蛋白的磷脂属于锚定蛋白V家族。这表明MPI的选择性是粘附选择性的结果。所以我们得出MPI诱导细胞死亡，其细胞上有大量的PS。选择性作用可能归于肿瘤细胞和正常细胞膜上不同的PS数量。总之，真核生物的细胞质膜主要是胆磷脂，选择性定位表明质膜是不对称的并且他们被特殊的机制所保护。生理学和病理学现象与质膜的定位相联系，尤其是细胞表面PS的出现。致瘤细胞外膜上表达相对较多的PS，作为巨噬细胞识别和和推动吞噬作用的触发器。事实上，在肿瘤

细胞上除了PS的定位上的改变，在膜上也发生一些改变。肿瘤细胞和正常细胞的细胞膜的不同主要有以下几方面：（1）癌细胞膜上富集负电荷由于阴离子的表达比正常细胞要高，比如O-糖基化的粘蛋白（2）膜的流动性比非转移的细胞快，溶解作用能够被MPI加强（3）癌细胞比正常的细胞有较大的细胞表面，这可以允许较多的MPI分子黏附到膜上。我们假设这三个不同点是相互联系的，建立了下列联系：首先当细胞具有癌性时，有更多的microcilli出现在膜上，使外面的阳离子更多的与细胞接触。其次是，作为与膜连接的阳离子肽达到极限的数量，阳离子肽能插入到膜中并能形成孔道。因而肿瘤细胞和正常细胞膜组成，流动性和表面的不同，可以解释他们对MPI和其他阳离子抗菌肽的反应的不同。

在研究中我们中我们还发现，用MPI处理较短时间后细胞用于剧烈损伤，而溶胀并裂解，表明细胞死亡，这可用阳离子抗菌肽杀死肿瘤细胞的模型来解释。敏感和抗药的K562与MPI一起培养后在形态上的剧烈变化，表明这个杀死细胞的机制涉及到对质膜的干扰。用CD对结构的研究表明,MPI在PBS中是无序的结构。然而，在模拟膜的环境中，肽优先形成螺旋结构，这表明膜的黏附促进肽形成a-螺旋结构，这种结构能使膜的结果不稳定。更特别的是，CD研究表明，肽在溶液中是无序结构，然后黏附到细胞膜的表面形成a-螺旋结构，最终插入到膜中破坏膜。换句话说就是，最初的选择性相互作用和识别作用都是在静电的驱动下完成的，但是黏附到膜上后，由于部分肽的两性结构疏水作用起重要的作用。所以我们假设MPI通过毯式模型破坏质膜,通过毯式机制，带正电荷的肽MPI通过静电驱动作用与膜相连，像毯一样覆盖在膜上。因而，当达到阈浓度后， MPI 插入并渗透到膜中。连续的膜的渗透能够导致膜上孔道的形成并最终细胞质的泄露。

耐药现象的出现经常与转运蛋白的过度表达相联系。而且耐药细胞的质膜在脂质阶段高水平的结构序列和他们细胞内大的脂质成分可以解释常规药物在抗性细胞中的堆积。常规的化学疗法能够渗透到细胞中，所以细胞形成了抗性。阳离子抗菌肽比如MPI的优势是他们对准细胞膜，这使得癌细胞形成耐药性是很难得。阳离子抗菌肽不受常规化学疗法的影响。在研究中我们发现，敏感耐药的细胞对MPI的反映是不同的，这不是由于常规的耐药机制，而是由于细胞间膜脂质流动性的不同。与常规的化学疗法相比，对MPI来说这一点是可以忽略的。

结论，我们的研究结果表明MPI通过在膜上形成孔道导致不同的白血病细胞的坏死，并且MPI不受常规的耐药机制的影响。我们还比较了由于膜上阴离子成分的不同MPI 对致瘤细胞和正常细胞选择性的不同。而且，MPI快速的影响肿瘤细胞以及他的次级代谢产物是游离的氨基酸，表明与常规的化学疗法相比，MPI 负作用很小。随着对常规化学药剂耐药性的增长，无疑MPI和其他的阳离子抗菌肽是令人满意的抗癌药。

血癌细胞株和正常细胞在Wnt讯息传递途径上差之探讨

血癌細胞株和正常細胞在Wnt訊息傳遞途徑上差異之探討The study of differences between leukaemic cell line and normal cell in Wnt signaling pathway 研究生：滕芷儀 (Jhih-Yi Teng) 指導教授：呂健惠(Chien-Hui Lieu, Ph.D.) 國立陽明大學 醫學生物技術研究所 碩士論文 National Yang-Ming University Institute of Biotechnology in Medicine Master Thesis 中華民國九十四年七月 July 2005

致謝 考上陽明、選指導教授、進入實驗室、上課、考試、趕報告、熬夜做實驗、寫論文，這一切都在這兩年中完成了，心中有一種無法言語的感動、有一種深深的不捨，那個感動是因為在這裡的每一件事情都讓我學到更深的意義，那個不捨是因為在這裡的每一個人就像家人般互相照顧互相幫忙。在這裡想感謝的人太多了，因為，可能對你們來說只是一個小小的動作或是一句話，但是對我而言卻是收穫良多以及溫暖許久，在此謝謝大家。 在這裡仍要感謝的是呂健惠老師對我的教導及包容，讓我在這短短的兩年中學到許多寶貴的知識和經驗，也要感謝老師在論文上的費心指導，還有陳賽君老師和徐會棋醫師對於我在研究方向提供的寶貴意見及論文上費心的指正，使我能順利的完成這份論文。十分的感激珮君學姐的大力相挺和鼓勵、榮總血液科王老師在實驗標本的幫忙，以及所上的助教們、同學們和學弟們的“熱血＂相助，還有兩位可愛的學弟幫忙，才能讓實驗得以順利進行。最後，要特別感謝我的家人做為我精神上的支柱，讓我能完成這份研究。以上感謝的話語雖只有短短的幾句，卻包含了我深深的謝意。再一次的謝謝每一個人，謝謝。

急性早幼粒细胞白血病

APL 【机制】 绝大多数APL发病的关键机制为t(15;17)(q22;q21)。15号染色体上PML基因和17号染色体上的RARα基因形成PML-RARα基因,融合蛋白导致早幼粒细胞正常的分化和成熟受阻、抑制肿瘤抑制子和PML的促凋亡功能。 1.5种RARα基因重排： （1）t(15;17)(q22;q21) （2）t(11;17)(q23;q21) （3）t(5;17)(q35;q21) （4）t(11;17)(q13;q21) （5）Statb5- RARα融合基因（基因间染色体DNA缺失所形成） 2.t(15;17) （1）约占98% （2）易位使15q22上的早幼粒细胞锌指(PML)基因与17q21上的维甲酸受体α基因（RARα）发生交互性重排。 （3）wtRARα的功能是转录激活因子，正常情况下能够与转录辅助激活因子(co-activator)或N-CoR/Sin3/HDAC1，即辅助抑制因子复合体(co-repressor)相互作用 （4）生理浓度的RA可以使wtRARα与N-CoR/Sin3/HDAC1解离，进而激活转录。而PML与RARα的融合增强了融合产物的RARα部分与N-CoR/Sin3/HDAC1的相互作用，造成对RARα靶基因的持续抑制。药理浓度的RA能够克服这种相互作用，从而解除对转录的抑制 3.变异型t(11;17) （1）约占0.8%，最多见的变异易位类型 （2）导致PLZF和RARα基因融合，产生的PLZF-RARα融合蛋白的两部分都具有共抑制复合物结合位点。其特殊的结构使它们与抑制因子亲和力升高，在ATRA作用下亦不易解离，从而表现出 对ATRA的耐药 （3）体外试验证实，组蛋白去乙酰化抑制剂能够有效恢复其对ATRA的敏感性 4.剩余的APL患者见于RARα与其他非PML形成不同融合基因，包括极其罕见的核磷蛋白(NPM)、核基质(NuMA)基因、STAT5b基因 流程图 在生理情况下，维甲酸受体（RAR）和维甲酸受体X(RXR)形成异二聚体，与DNA上的维甲酸调控元件结合； ↓ RAR-RXR招募一个蛋白复合体，该复合体使组氨酸去乙酰化，导致染色体构相变化、转录抑制； ↓ 生理浓度的RA可以诱导该复合体的分离、促进基因转录； ↓ 在APL情况下，由于PML-RAR融合蛋白与该复合体结合紧密，导致生理浓度的RA不能使该复合体分离，导致促进髓系分化的基因转录受抑制，从而发生APL； ↓ 必须应用治疗剂量浓度的RA才可以使早幼粒细胞正常分化和成熟，RA同时可以使PML-RARA融合蛋白降解。APL的LSC起源 多数认为APL起源于髓系定向祖细胞，白血病克隆发生在CD34+CD38+祖细胞，而在更早阶段的CD34+CD38-细胞群中不表达。 【临床表现】 1、一般表现：贫血、出血、感染、白血病细胞浸润等。 2、特殊表现，严重而明显的出血倾向，如皮肤瘀斑、鼻衄、牙龈出血、咯血、消化道出血、颅内出血，偶有血栓引起的突然失明和血管栓塞表现。初诊时发生白血病细胞髓外浸润者少见。 3、周血 （1）WBC常为（3.0~15.0）×109/L，大多低于5.0×109/L； （2）外周血白细胞数≥10×109/L称为高白细胞症，治疗风险大，预后较差，主要见于M3v型患者，

CCL2在白血病细胞中的生物学作用的研究

目录 引言 (1) 第一部分CCL2基因慢病毒载体的构建和病毒包装 (3) 材料与方法 (3) 结果 (9) 讨论 (11) 参考文献 (12) 第二部分过度表达CCL2对白血病细胞株THP1的影响 (14) 材料与方法 (14) 结果 (22) 讨论 (26) 参考文献 (28) 第三部分RNAi沉默CCL2基因对白血病细胞HL-60增殖的影响及机制 (30) 材料与方法 (30) 结果 (34) 讨论 (39) 参考文献 (40) 第四部分CCL2基因在儿童急性白血病中的表达及其临床意义 (42) 材料与方法 (42) 结果 (46) 讨论 (51) 参考文献 (52) 结论 (54) 综述 (55) 英文缩略词表 (64) 攻读学位期间发表的论文 (65) 致谢 (66)

CCL2在白血病细胞中的生物学作用的研究引言 引言 急性白血病是造血系统的一种恶性克隆性疾病，其特征为白血病细胞在骨髓及其它造血组织中无限增殖，进而引起外周血细胞质和量的异常改变。其发病基础包括白血病细胞增殖、凋亡及分化的异常[1]。急性白血病包括急性淋巴细胞白血病(Acute lymphoblastic leukemia，ALL）和急性髓细胞性白血病（Acute myeloid leukemia，AML）两类。ALL是儿童恶性肿瘤中最常见的疾病，占恶性肿瘤的25%。在过去的五十年里，随着诊断方法的改进及联合化疗和造血干细胞移植的应用，儿童ALL的治愈率由10%提高至90%以上[2]。AML占儿童急性白血病的25%-30%，但儿童AML的治愈率明显低于ALL，仅65%左右，治疗过程中发生的原发或继发多重耐药是化疗失败的主要原因[3]。同时，髓内浸润的白血病细胞迁移至髓外其他部位，进而引起白血病复发也是治疗的一大障碍。因此，认识并探究白血病细胞髓外浸润及耐药的机制，特别是寻找一些能预测髓外浸润的的生物学指标，将为临床治疗和预后的判断具有重要意义。 CCL2（chemokine C-C motif ligand 2），即细胞因子CC配体2，又称为人单核细胞趋化蛋白1（MCP-1），是最早发现的CC趋化因子家族的成员。1983年，有学者发现血小板源性生长因子PDGF能诱导小鼠成纤维细胞产生JE基因，后证实人类JE 基因的表达产物即CCL2。CCL2是一种分泌性蛋白，主要通过与靶细胞膜上的CCR2的N端结合，介导受体蛋白胞内C端丝氨酸／苏氨酸磷酸化，通过不同的跨膜信号转导通路，参与细胞的多种生理和病理活动。CCL2在前列腺癌、乳腺癌、肝癌、肾癌、多发性骨髓瘤及白血病等多种肿瘤性疾病中高表达[4]。研究发现，在前列腺癌中CCL2可以活化PI3K/AKT途径促进癌细胞增殖[5]，通过上调survivin的表达对抗前列腺癌细胞株PC3细胞发生自噬性死亡[6]。另外，CCL2可显著增强前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力，与癌细胞的远处转移密切相关[7，8]。乳腺癌的不良预后及远处转移与CCL2的高表达和巨噬细胞的浸润相关[9]。基于CCL2在肿瘤中的重要作用，CCL2特异性抗体（CNTO 888)已开始在实体肿瘤中进行临床试验[10，11]。Francois等学者发现对紫杉醇耐药的卵巢癌细胞株CCL2的表达水平明显高于亲本株，在建立的耐紫杉 1

急性髓细胞白血病分型

3、分类及诊断标准 ⑴、M1 急性髓细胞白血病未成熟型 1.血象:贫血显著，外周血可见幼红细胞，白细胞总数升高。血片中以原始粒细胞为主，少数患者可无或极少幼稚粒细胞出现。血小板中度到重度减少。 2.骨髓象:骨髓增生极度活跃或明显活跃，少数病例可增生活跃甚至减低。骨髓中原始粒细胞大于90%(NEC)，白血病细胞内可见Auer小体，幼红细胞及巨核细胞明显减少，淋巴细胞也减少。 3.细胞化学染色:POX染色至少有3%原粒细胞POX阳性。 ⑵、M2 急性髓细胞白血病部分成熟型 1.血象:贫血显著，白细胞中度升高和M1相似，以原始粒细胞及早幼粒细胞为主。血小板中度到重度减少。 2.骨髓象:骨髓增生极度活跃或明显活跃，骨髓中原始粒细胞占30%~89%(非红系)，早幼粒、中幼粒和成熟粒细胞大于10%，白血病细胞内可见Auer小体，幼红细胞及巨核细胞明显减少，此型白血病细胞的特征是形态变异及核质发育不平衡。 3.细胞化学染色 (1)P0X与SB染色: 均呈阳性反应。 (2)PAS染色:原粒呈阴性反应，早幼粒细胞为弱阳性反应。 (3)中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP):成熟中性粒细胞的NAP活性明显降低，甚至消失。 (4)特异性和非特异性酯酶染色:氯醋酸AS-D萘酚酯酶染色呈阳性反应。醋酸AS-D萘酚酯酶染色(AS-D-NAE)可呈阳性反应，但强度较弱，且不被氟化钠抑制。 (5)Phi(ф)小体染色:原始和幼稚粒细胞内出现Phi(ф)小体。 (6)染色体及分子生物学检验:特异性染色体重排t(6;9)约见于1%的AML，主要为本型。 4.免疫学检验:表达髓系抗原，可有原始细胞和干细胞相关抗原，CD34、HLA- DR、CD13、CD33和CD57阳性。 5.染色体和分子生物学检验:t(8;21)(q22;q22)易位是M2b的一种常见非随机染色体重排，其检出率高达90%。AML1基因重排可作为本病基因诊断的标志。 ⑶、M3急性早幼粒细胞白血病

急性粒细胞白血病病历

入院记录 姓名: 工作单位:无 性别:女?职业:农民 年龄:４５岁入院日期:20１０年0４月２6日09时09分 民族:汉族记录日期:2010年04月26日 籍贯: 病史陈述者:患者本人 婚姻:已婚?可靠程度:可靠 家庭地址: 主诉:反复乏力、头晕5月余、 现病史:患者于入院前5月无明显诱因出现乏力、头晕,恶心,食欲下降,全身不适症状,伴有高热,最高体温达400C,咳嗽,无咳痰,腹胀,无明显腹痛,无鼻衄、牙龈出血,无便血、血尿。患者就诊,血常规检查回示:WＢC ４9。5×１09/Ｌ,RBC 1、46×10１2/Ｌ, HGB 53g/L,PLT 5×１09／Ｌ;诊断为:贫血;给予输注浓缩红细胞改善贫血,血浆预防出血,血小板增加血小板计数,预防出血,清开灵、头孢呋辛钠联合左氧氟沙星抗感染,未进行任何特殊检查及明确诊断,给予输注青霉素注射液等药物治疗,乏力、高热症状未明显好转,并呈进行性加重,出现乏力、头晕加重,体温40OC,经患者家属要求,转我院诊断治疗,我院急诊科以”重度贫血"收住我科,患者入院后,急查血常规回示:WＢC ４7。6×１０9/Ｌ,RBC １。25×１012/L, HＧB 46g／L,PLT 4×１09/L;骨髓细胞形态学检查回示:急性粒细胞白血病未分化型(M１);给予第一周期ＤA方案(DＮR 40ｍg d1－3 ,Ａra－ｃ200ｍｇｄ１-7)静脉化疗;预防化疗副作用,抗感染及对症、支持治疗;2010年0１月０4日复查骨髓细胞形态学检查回示:急性粒细胞白血病未分化型(Ｍ1-PR);第二周期Ｄ

A方案(ＤNＲ４0mg d1－3 ,Aｒa—c 20０mg d1－7)静脉化疗,积极预防骨髓抑制等治疗,定期腰椎穿刺术及鞘内注射阿糖胞苷、甲氨碟呤预防中枢神经系统白血病,2010年01月2８日复查骨髓细胞形态学检查回示:急性粒细胞白血病未分化型(Ｍ1—ＣＲ);2０10年０2月0８日给予第三疗程给予大剂量阿糖胞苷化疗(Ara－ｃ2000mg ｄ１-３)+大剂量甲氨碟呤化疗,复查血常规:WＢC 1。１2×109/L,L 0。68×109/L,ＲＢC 2、17×101２/L,HGB 67ｇ/L,PLT ５9×109/Ｌ;病情好转出院;患者于20１0年03月17日再次来我科就诊,骨髓细胞形态学检查回示:急性粒细胞白血病未分化型(M1—CR);给予ＭA方案(MＩT 10mg d １－3,Ara-ｃ２0０ｍg ｄ１-7)静脉化疗,预防化疗副作用,及对症、支持治疗,２０10年０3月2４日给予腰椎穿刺术及鞘内注射阿糖胞苷、甲氨碟呤预防中枢神经系统白血病,复查血常规:WＢC 1、４９×１09/L,L 0。76×109/L, ＲＢＣ2、０2×101２/L,HGＢ６8g/L,ＰＬT １7８×109/Ｌ;患者病情好转出院。目前患者为进一步治疗来我科化疗,我科以＂急性粒细胞白血病未分化型(Ｍ1型)"收住。自发病以来,患者精神差,食欲、睡眠欠佳,大小便正常,体重无明显变化。 既往史:既往体健,否认肝炎、结核、伤寒等传染病史,否认心脏病、糖尿病等慢性病史,否认外伤及手术史、否认输血及血制品史。否认食物及药物过敏史,预防接种史不详。 个人史:生于原籍,无疫区居住史。生活规律,无粉尘、毒物及放射性物质接触史,无特殊不良嗜好、 月经史:14,3—５/2８—30,２010年04月1８日。既往色暗红,量中等,无痛经。 婚育史:已婚,育有１子２女,现爱人与孩子身体健康,家庭关系与睦、

急性髓细胞性白血病【知识科普】

本文极具参考价值，如若有用请打赏支持我们！不胜感激！ 急性髓细胞性白血病(专业知识值得参考借鉴) 一概述急性髓细胞性白血病（Acutemyeloidleukemia，AML）是髓系造血干／祖细胞恶性疾病。以骨髓与外周血中原始和幼稚髓性细胞异常增生为主要特征，临床表现为贫血、出血、感染和发热、脏器浸润、代谢异常等，多数病例病情急重，预后凶险，如不及时治疗常可危及生命。本病占小儿白血病的30%。在分子生物学改变及化疗反应方面儿童AML与成人（＜50岁）相似。婴幼儿的AML比成人易发生髓外白血病。 二病因根据目前的认识，白血病的确切病因尚不明，但与地域环境因素、电离辐射、化学接触、酗酒与吸烟，以及与机体对某些病毒感染所致的特殊反应有关。此外，近年来通过基因突变频率和一些易患生物标记研究发现，它可能是遗传学和环境因素共同作用的结果。 三分型（一）形态学分型 1.M0-M7 根据FAB的AML形态学分型，将它分为M0、M1、M2、M3、M4、M5、M6和M7型： （1）原粒细胞微分化型（M0）原粒细胞胞体大，核仁明显，无嗜天青颗粒和奥氏小体，MPOSPB 阳性＜3%。M0型在儿童很少见。 （2）原粒细胞白血病未分化型（M1）骨髓中原粒细胞（Ⅰ+Ⅱ型）≥90%（非红系细胞），早幼粒细胞很少，中性中幼粒细胞以下阶段不见或罕见。 （3）原粒细胞白血病部分分化型（M2）分以下两个亚型：①M2a骨髓中原粒细胞（Ⅰ+Ⅱ型）＞30%～＜90%，单核细胞＜20%，早幼粒细胞以下阶段＞10%。②M2b骨髓中原始及早幼粒细胞明显增多，以异常的中性中幼粒细胞增生为主，其胞核常有核仁，有明显的核浆发育不平衡，此类细胞＞30%。 （4）颗粒增多的早幼粒细胞白血病（M3）骨髓中以颗粒增多的异常早幼粒细胞增生为主，＞30%（占非红系有核细胞），其胞核大小不一，胞浆中有大小不等的颗粒。可分2个亚型：①粗颗粒型（M3a）嗜苯胺蓝颗粒粗大，密集甚或融合。②细颗粒型（M3b）嗜苯胺蓝颗粒密集而细小。（5）粒-单核细胞白血病（M4）占15%～20%。按原粒和单核细胞系形态不同，可包括下列4种亚型：①M4a原始和早幼粒细胞增生为主，原、幼单和单核细胞＞20%（占非红系有核细胞）。 ②M4b原、幼单核细胞增生为主，原始和早幼粒细胞＞20%（占非红系有核细胞）。③M4c原始细胞

白血病细胞株名

3115CNCB00280 人急性T淋巴细胞白血... Jurkat, Clone E6-1 TCHu71 人红白细胞白血病细胞HEL TCHu23 人原髓细胞白血病细胞HL-60 TCHu27 人T淋巴细胞白血病细胞HuT 78 TCHU123 人T淋巴细胞白血病细胞Jurkat, Clone E6-1 TCHu191 人慢性髓原白血病细胞K-562 TCHu202 人红白血病细胞Kasumi-1 暂不供应 TCHu189 人外周血嗜碱性白血病... KU812 TCM6 小鼠白血病克隆细胞系L6565 3115CNCB00227 人早幼粒急性白血病细... HL－60 TCHu57 人单核细胞白血病THP-1 TCHu147 人急性淋巴细胞白血病... CCRF-CEM [CCRF CEM] TCHu68 人巨核细胞白血病细胞Dami TCHu140 人成巨核细胞白血病细胞Daudi TCHu197 人成巨核细胞白血病细胞MEG-01 TCHu37 人急性淋巴母细胞白血... MOLT-4 TCHu131 人急性非B非T淋巴细... Reh 3115CNCB00237 人慢性骨髓性白血病细... K562 3115CNCB00294 急性骨髓细胞白血病细... KG-1 TCHu190 人Ph+急淋白血病细... SUP-B15 3115CNCB00228 人早幼粒急性白血病细... HL-60 TCHu2 人T细胞白血病细胞6T-CEM TCHu96 人T淋巴细胞白血病细胞A3 3115CNCB00279 淋巴母细胞性白血病细... MOLT-4 KCB94007YJ 人B淋巴细胞急性白血... BALL-1 KCB94019YJ 人T细胞性白血病细胞C8166-CD4 KCB200782YJ 人巨核细胞白血病细胞Dami KCB200418YJ 人急性淋巴母细胞白血... H9 KCB94011YJ 人急性混合型白血病细胞HAL-01 KCB200808YJ 人红白血病细胞HEL KCB94018YJ 人急性T淋巴细胞白血... JM KCB90029YJ 人慢性骨髓性白血病细胞K562 KCB200552YJ 人髓性红白血病细胞KG-1 KCB200308YJ 人急性淋巴母细胞白血... MT-4 KCB200549YJ 人单核细胞白血病细胞THP-1 3111C0001CCC000037 人早幼粒急性白血病细胞HL-60

急性粒细胞白血病病历

入院记录 姓名：工作单位：无 性别：女职业：农民 年龄：45岁入院日期：2010年04月26日09时09分 民族：汉族记录日期：2010年04月26日 籍贯：病史陈述者：患者本人 婚姻：已婚可靠程度：可靠 家庭地址： 诉：反复乏力、头晕5月余。 5月无明显诱因出现乏力、头晕，恶心，食欲下降，全身不适症状，伴有高热，最高体温达400C，咳嗽，无咳痰，腹胀，无明显腹痛，无鼻衄、牙龈出血，无便血、血尿。患者就诊，血常规检查回示：WBC 49.5×109/L，RBC 1.46×1012/L, HGB 53g/L，PLT 5×109/L；诊断为：贫血；给予输注浓缩红细胞改善贫血，血浆预防出血，血小板增加血小板计数，预防出血，清开灵、头孢呋辛钠联合左氧氟沙星抗感染，未进行任何特殊检查及明确诊断，给予输注青霉素注射液等药物治疗，乏力、高热症状未明显好转，并呈进行性加重，出现乏力、头晕加重，体温40OC，经患者家属要求，转我院诊断治疗，我院急诊科以"重度贫血"收住我科，患者入院后，急查血常规回示：WBC 47.6×109/L，RBC 1.25×1012/L, HGB 46g/L，PLT 4×109/L；骨髓细胞形态学检查回示：急性粒细胞白血病未分化型（M1）；给予第一周期DA方案（DNR 40mg d1-3 ，Ara-c 200mg d1-7）静脉化疗；预防化疗副作用，抗感染及对症、支持治疗；2010年01月04日复查骨髓细胞形态学检查回示：急性粒细胞白血病

未分化型（M1-PR）；第二周期DA方案（DNR 40mg d1-3 ，Ara-c 200mg d1-7）静脉化疗，积极预防骨髓抑制等治疗，定期腰椎穿刺术及鞘内注射阿糖胞苷、甲氨碟呤预防中枢神经系统白血病，2010年01月28日复查骨髓细胞形态学检查回示：急性粒细胞白血病未分化型（M1-CR）；2010年02月08日给予第三疗程给予大剂量阿糖胞苷化疗（Ara-c 2000mg d1-3）+大剂量甲氨碟呤化疗，复查血常规：WBC 1.12×109/L，L 0.68×109/L,RBC 2.17×1012/L，HGB 67g/L，PLT 59×109/L；病情好转出院；患者于2010年03月17日再次来我科就诊，骨髓细胞形态学检查回示：急性粒细胞白血病未分化型（M1-CR）；给予MA方案（MIT 10mg d1-3，Ara-c 200mg d1-7）静脉化疗，预防化疗副作用，及对症、支持治疗,2010年03月24日给予腰椎穿刺术及鞘内注射阿糖胞苷、甲氨碟呤预防中枢神经系统白血病，复查血常规：WBC 1.49×109/L，L 0.76×109/L, RBC 2.02×1012/L，HGB 68g/L，PLT 178×109/L；患者病情好转出院。目前患者为进一步治疗来我科化疗，我科以"急性粒细胞白血病未分化型（M1型）"收住。自发病以来，患者精神差，食欲、睡眠欠佳，大小便正常，体重无明显变化。 病等慢性病史，否认外伤及手术史。否认输血及血制品史。否认食物及药物过敏史，预防接种史不详。 个人史：生于原籍，无疫区居住史。生活规律，无粉尘、毒物及放射性物质接触史，无特殊不良嗜好。 月经史：14,3-5/28-30,2010年04月18日。既往色暗红,量中等,无痛经。 婚育史：已婚，育有1子2女，现爱人和孩子身体健康，家庭关系和睦。

慢性粒细胞白血病(CML)考试重点

慢性粒细胞白血病（CML） ※持续性、进行性白细胞增高，不同分化阶段的粒细胞 ※脾大 ※特征：Ph染色体或bcr/abl融合基因 一、临床表现 最典型和突出的症状：进行性脾肿大或巨脾。 二、临床分期——分3期 1.慢性期：原始细胞＜10%。 2.加速期：发热，脾大，药物失效，嗜碱性粒细胞＞20%，原始细胞＞10%。 3.急变期：外周血中原始细胞＞30%，骨髓中原始细胞＞20%，跟急性接近。 实验室检查 1.血象：白细胞显著升高 典型：白细胞升高的同时嗜酸、嗜碱性粒细胞↑ 2.骨髓象： 骨髓增生活跃 原始粒细胞＋早幼粒细胞 慢性期：<10% 急变期：>20% 3.中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP） 减低或阴性（阳性再障） 4.Ph染色体阳性t（9；22）（q34；q11），或者bcr/abl融合基因阳性。——诊断慢粒。 鉴别诊断 （一）分子靶向治疗首选甲磺酸伊马替尼。 （二）化学治疗 1.羟基脲周期特异性抑制DNA合成，起效快，但维持时间短。

2.α-干扰素（INF-α） （三）异基因造血干细胞移植最有效的方法。 45岁以下病人有HLA相合同胞供髓者慢性期缓解后尽早进行。加速期、急变期或第二次缓解期疗效差。 考点汇集 1.化疗首选：甲磺酸伊马替尼 2.α-干扰素：次之 3.羟基脲：TKI和IFN-α均不耐受 4.骨髓移植——根治 男，25岁。乏力、消瘦、腹胀2个月。查体：心肺未见异常，肝肋下1cm，脾肋下 8cm。化验：Hb 138g/L，WBC 96×109/L，Plt 385×109/L。分子生物学检查可见bcr/abl 融合基因。 1.该患者的诊断是 A.急性粒细胞白血病 B.慢性淋巴细胞白血病 C.慢性粒细胞白血病 D.肝硬化，门静脉高压症 E.急性淋巴细胞白血病 『正确答案』C 2.该患者应出现的染色体异常是 A.t（9；22） B.t（8；21） C.t（9；11） D.inv（16） E.t（5；17） 『正确答案』A 3.该患者最有效的治疗是 A.口服伊马替尼 B.DA方案化疗 C.口服苯丁酸氮芥 D.脾切除 E.VLDP方案化疗 『正确答案』A

急性单核细胞白血病细胞系_THP-1

急性单核细胞白血病细胞系_THP-1 THP-1细胞系是从一名患有急性单核细胞白血病的1岁小男孩的外周血中分离得到的，自1980年建系以来，THP-1细胞被广泛用于单核细胞和巨噬细胞相关的机制、信号通路以及营养和药物运输等研究中。相对于U937、HL-60、ML-2等白血病细胞系，THP-1更有类似人原代单核细胞的形态和功能特征（包括细胞分化标记）。相对于人外周血单核细胞（PBMC），THP-1更易在实验室中培养和扩增，且具有更稳定的基因背景，不存在PBMC的个体差异性问题，利于实验结果的重现。因此，THP-1是各大实验室常用的急性单核细胞白血病细胞系，是研究免疫和炎症的理想工具。 基因敲入： CRISPR-U?基因敲入THP-1细胞： 通过核转染法将gRNA、Cas9和Donor共转入细胞中，gRNA和Cas9复合物造成靶位点DNA双链断裂后，细胞以携带敲入片段的Donor作为模板进行同源重组修复（HDR），将敲入片段重组到基因组靶位点。 CRISPR-U?可以通过核转染法高效地将CRISPR/Cas9以及Donor载体共转入THP-1细胞中，筛选后挑选单克隆培养。选择不同的克隆分别进行靶位点扩增及测序，筛选出成功敲入的阳性克隆。若敲入的是荧光蛋白等报告基因，也可以通过直接观察荧光进行初步筛选。 应用案例：

通过建立基因敲除和敲入的THP-1细胞模型，明确胞内抗病毒反应的信号通路DNA通常定位于细胞核中，而异常定位在胞浆中的DNA与通常与病毒感染或肿 瘤发生有关。cGAS-cGAMP-STING信号通路可检测胞浆dsDNA的存在，并诱导强效的免疫反应，产生干扰素和激活其他免疫应答基因。与之对应的，RIG1-MAVS 可以检测胞浆内的pppRNA（一类dsRNA，某些病毒的基因组），并诱导免疫应答。有时候胞浆内会出现RNA和DNA的杂交复合物，这种分子通常在某些病毒感染的情况下出现。为了研究这种RNA-DNA复合物是通过哪个通路激活免疫应答，研究者分别构建了MAVS、cGAS、STING敲除的THP-1细胞，分别将dsDNA、pppRNA、RNA-DNA复合物导入细胞，发现RNA-DNA复合物是通过 cGAS-cGAMP-STING通路进行免疫激活。 随后，研究者通过CRISPR/Cas9技术将2A-GLuc敲入到IFIT1基因座，使其受IFIT1的启动子驱动表达，IFIT1是一个典型的干扰素激活表达的基因。后续实验显示，导入RNA-DNA复合物后，由于干扰素的表达，激活了IFIT1启动子驱动GLuc的

慢性粒细胞性白血病

慢性粒细胞白血病 【概述】： 1.造血干细胞恶性增殖性疾病, 以粒系增生为主，无病态造血 2.Ph 染色体t(9;22)(q34;q11)是其特征性的细胞遗传学标志，p210BCR-ABL是其分子发病基础 3.p210BCR-ABL具有很强的酪氨酸激酶活性, 它导致下游一系列信号持续磷酸化，致使发生造血干细胞增殖 失控、抗凋亡和黏附功能缺陷等病理生理变化。 4.慢性期NAP积分低于正常或阴性，急变时NAP积分可能转变至正常或升高 5.发展史 （1）19世纪中叶第一个被命名为白血病。 （2）20世纪60年代初证明CML患者有特殊的Ph 染色体---是肿瘤病中发现的第一个标志染色体。 （后确定为t(9;22)(q34;q21)） （3）20世纪80年代证明了BCR-ABL融合基因是CML的发病基础。 （4）20世纪末酪氨酸激酶抑制剂成功应用于治疗CML。从而开创了研发小分子化合物靶向治疗肿瘤的时代。 6. 【临床】 1.可发生于任何年龄 2.进入加速期或急变期可出现骨痛 【骨髓】 1.形态学、注意blast、basophils的比例 【遗传学检测技术】 1.染色体 (1)敏感性：5％（分析20个细胞） 2.FISH (1)假阳性：1％～10％ (2)Interphase FISH:不需要处于分裂期细胞，PB和BM均可 Hyperphase FISH：需处于分裂期细胞，需BM Double FISH：可监测到所有变型的Ph (3)敏感性：1-5％ 3.分子生物学 (1)敏感性：1/105 4.突变分析 【Ph染色体】 1.9号染色体上c-abl原癌基因易位到22号染色体BCR基因区域，而形成bcr／abl融合基因。 2.常见3个断裂点区： （1) M-bcr：含有5．8 Kb核苷酸，可产生2种形式的bcr／abl融合转录本b2a2、b3a2。蛋白产物皆为P210

国内外急性早幼粒细胞白血病指南解读

·标准与讨论·国内外急性早幼粒细胞白血病指南解读 杨晓阳万梦婕陈方平 570208 中南大学湘雅医学院附属海口医院海口市人民医院血液科（杨晓阳、万梦婕）； 410008 长沙，中南大学湘雅医院血液科（杨晓阳、陈方平）；410008 长沙，中南大学湘雅三 医院血液科（陈方平） 通信作者：杨晓阳，Email：y108108@https://www.wendangku.net/doc/1f14909491.html, DOI：10.3760/cma.j.issn.1009-9921.2016.10.013 【摘要】全反式维甲酸和三氧化二砷在急性早幼粒细胞白血（APL）治疗中的作用均为我国最早发 现，我国对于APL的治疗做出了举世瞩目的贡献。但国外有关APL的指南中仍无我国的治疗方案，并且 我国的治疗方案与国外亦不一致。文章对国内外APL指南进行了解读，以探寻APL的规范诊疗。通过分 析我国及欧美国家的APL指南，展示APL的研究现状，探讨APL的研究方向。目前国内外APL指南仍有 一定差异，建议根据循证医学尽快统一APL的诊疗规范。希望我国的治疗指南更多地依据循证医学，更 能被世界接受。 【关键词】白血病，早幼粒细胞，急性；指南；欧洲临床肿瘤学会；美国国立综合癌症网络 Interpretation of Chinese and international guidelines of acute promyelocytic leukemia Yang Xiaoyang, Wan Mengjie,Chen Fangping Department of Hematology,Haikou People's Hospital,Affiliated Haikou Hospital of Central South University Xiangya School of Medicine,Haikou570208,China(Yang XY,Wan MJ);Department of Hematology,Xiangya Hospital Central South University,Changsha410008,China(Yang XY,Chen FP);Department of Hematology, the Third Xiangya Hospital of Central South University,Changsha410008,China(Chen FP) Corresponding author:Yang Xiaoyang,Email:y108108@https://www.wendangku.net/doc/1f14909491.html, 【Abstract】The therapy of acute promyelocytic leukemia(APL)with all-trans retinoic acid and arsenic trioxide was first discovered in China,which made a great contribution worldwide to APL treatment.However, foreign guidelines did not include the Chinese chemotherapy regimens,and our regimens were inconsistent with foreign guidelines.Therefore,it is necessary to interpret the home and international guidelines and to explore standard treatment of APL by analyzing APL guidelines of the China,Europe and the United States. Owing to several discrepancies between domestic and foreign APL guidelines,unifying the APL's diagnosis and treatment standard is desperately needed at present according to the evidence-based medicine.It is hoped that Chinese chemotherapy regimens will be more acceptable to other countries of the world,and would benefit the diagnosis and treatment of human APL. 【Key words】Leukemia,promyelocytic,acute;Guideline;European Society for Medical Oncology; National Comprehensive Cancer Network 急性早幼粒细胞白血病（APL）年龄调整后的年发病率为0.23／10万，中位年龄为44岁，比其他类型的白血病中位发病年龄早［1 ］。与其他类型白血病不同的是，APL可以在各个年龄组中发病［2 ］，年轻患者的治愈率高于年长患者［3 ］。APL主要表现为以血小板数降低和凝血紊乱为主的出血，典型体征为皮肤黏膜出血。早在1949年，法国血液病学家首先描述了某些类型白血病会有严重的出血综合征。1957年，Hillstad从临床和形态学角度命名了该病。由法、美、英协作组（FAB）分型的M3转变为目前世界卫生组织（WHO）分类的APL。在没有应用全反式维甲酸（ATRA）和三氧化二砷（ATO）治疗前，APL是最凶险的急性髓系白血病。我国最早将ATRA和ATO用于APL的治疗，但目前国际上与国内的治疗方案不统一，关于哪种治疗方案长期生存率更高、治疗相关死亡率更低、患者长期生存质量更好、是否长时间应用ATO会有砷剂重金属残留，目前国内外APL 的治疗指南仍有一定差异，涉及APL的指南主要有中华医学会2014年版［4 ］、欧洲临床肿瘤学会（ESMO）2013年版［5 ］及美国国立综合癌症网络（NCCN）的指南［4 ］。我们主要以我国APL指南为基础，对国内外指南进行分析解读，以探讨APL的规范诊疗。 万方数据

慢性粒细胞白血病白皮书

慢 性 粒 细 胞 白 血 病 白 皮 书 2015.06

前言 白血病在很多人看来，俨然是一种“绝症”，频频见诸报端的白血病患者的故事，更让人谈虎色变。什么是白血病？白血病是造血系统的恶性肿瘤；我国的发病率为5.76/10万，在0-16岁的儿童群体中，发病率最高的癌症就是白血病。 白血病主要可分为四种类型：急性粒细胞性白血病(AML)、慢性粒细胞性白血病(CML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)。除了这主要的四种类型之外，还有一些较为罕见的白血病如慢性粒单核细胞白血病(CMML)等。在儿童与青少年患者中，急性淋巴细胞白血病较为多见。 慢性髓细胞白血病（CML），又称慢性粒细胞性白血病，是骨髓造血干细胞异常增殖形成的恶性肿瘤，是慢性白血病中最常见的一种类型，约占成人白血病的15%；可在任何年龄发生，发病率随年龄的增长而提高。在全球范围内，慢性粒细胞性白血病的发病率为1.6-2.0/10万[1]；在中国约为0.36~1/10万，以中老年人为主。慢性粒细胞白血病是第一个被证明与染色体异常有关人体肿瘤，但其发病的确切病因至今尚未明确。 慢性粒细胞性白血病的治疗经历了20世纪初的放疗，核素治疗，20世纪50年代的白消安治疗，60年代的羟基脲，再到80年代的甲异酸，联合化疗，异基因造血干细胞移植，以及首个能达到完全细胞遗传学缓解的药物治疗——干扰素治疗。20世纪末，酪氨酸激酶抑制剂（TKI）甲磺酸伊马替尼的出现，使得慢性粒细胞性白血病的治疗发生了翻天覆地的变化。这种革命性的治疗方法使得超过80%的首次发病的慢性期CML患者生存时间提高到8年；慢性粒细胞性白血病患者的10年生存率提高到85-90%。然而，由于耐药和

慢性粒细胞白血病

一、什么是慢性粒细胞白血病？ 慢性骨髓性白血病（chronic myelogenous (or myeloid) leukemia (CML)），又称为慢性粒细胞白血病（chronic granulocytic leukemia (CGL)），是一种造血干细胞克隆增生性疾病。临床上根据其症状可分为慢性期、加速期和急变期。其特点为由于骨髓干细胞失常而导致的，髓细胞的加速且失控地增长，以及髓细胞在血液中的过度积累。其主要临床表现为粒细胞（嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞）及其前体过量。 慢性粒细胞白血病在所有年龄阶段都有发生，但在20～50岁人群中发病率较高。其年发病率为0.1~0.2%，男性发病率略高于女性，占成年白血病患者的15~20%。我国每年新增病例高达30000例。使用传统治疗，病人患病后1~1.5年内由慢性期进入加速期，3~6个月后，进入急变期并死亡，另外有20~25%的病人不经过加速期而直接进入急变期。病人平均存活时间为三年，少于20%的病人能存活五年以上。 二、Bcr-Abl癌基因是慢性粒细胞白血病的元凶 慢性粒细胞白血病的发病机制是9号染色体长臂与22号染色体长臂的异位。临床上以费城染色体，即由于染色体异位而异常短小的9号染色体，为特征。由于此种异位，Bcr基因与Abl基因并置在一条染色体上形成Bcr-Abl（Breakpoint cluster region-Abelson leukemia）癌基因，其编码产生了致癌的Bcr-Abl融合蛋白。这种Bcr-Abl融合蛋白是一种构成性激活的酪氨酸激酶，能导致细胞癌变。而Bcr-Abl激酶也成为了治疗慢性粒细胞白血病小分子药物的主要靶点，通过抑制其活性，可达到控制及改善慢性粒细胞白血病的目的。 三、人类发明治疗慢性粒细胞白血病药物的过程 由于只作用于Bcr-Abl相关蛋白，Bcr-Abl激酶抑制剂以其疗效显著，副作用小的优点，成为慢性粒细胞性白血病的主要治疗手段。目前已有伊马替尼、尼罗替尼、达沙替尼、博舒替尼和普纳替尼等五种Bcr-Abl激酶抑制剂上市。然而，随着临床应用的增加，部分患者对伊马替尼产生了耐药性。伊马替尼耐药的产生主要与BCR-Abl激酶的突变有关，目前已证实的BCR-Abl突变有15种，包括Y253H、E255V、F359V、T315I等在内，其中T315I 在突变中占的比重最大，达20%的耐药程度，且耐药程度最高。随后开发的一系列药物如博舒替尼、巴菲替尼、塞卡替尼等也都对该突变束手无策。更糟糕的是，如果患者反复使用达沙替尼和尼罗替尼等二代激酶抑制剂（TKI），T315I突变的比例会进一步增加。因此，开发针对T315I突变有效的TKI已迫在眉睫，为克服耐药性以及毒副作用问题，多种新型Bcr-Abl选择性抑制剂正在开发中。 本报告所依托的课题就是通过分析已上市的以及开发中的Bcr-Abl抑制剂的化学结构及其与蛋白的结合模式，通过生物电子等排，计算机辅助药物设计等合理设计方法，设计并合成一系列新型抗T315I突变的Bcr-Abl抑制剂，并与生物学家和药理学家合作，进行结构优化，构效关系研究，以及药理、药代性质等成药性评价。

成人与儿童急性粒细胞性白血病区别

成人与儿童急性粒细胞性白血病区别 从临床表现上看没有什么区别。需要及早治疗。 以下来源于百度百科，可供参考。 概述 1. 按白细胞发育成熟的程度区分，可将白血病分为急性、慢性两种。急性白血病， 病人体内的白血病细胞几乎都是很不成熟的、幼稚的，以粒细胞为例，大多为原 性粒和早幼粒细胞，晚幼粒等细胞为主。在这里应说明，慢性白血病不是从急性 白血病衍变而来的。如按白细胞的不同类型来区分，可分为淋巴细胞型、粒细胞 型、单核细胞型、浆细胞型、巨核细胞型白血病，有时也可由两种细胞混合而成， 如粒一单细胞性白血病。 病因 白血病的急性、慢性两种比较复杂，迄今未被完全认识，许多因素与白血胞的发病有关，如病毒感染、放射性核素的照射、化学因素、药物及遗传因素等。白血病的儿童及35岁以下成人中居第一位，病情发展较快，断病程仅数月。白血病的病因和发病机制比较复杂，化疗药物难以彻底清除体内的白血病细胞，故预后极差。 急性白血病的病因与病毒感染、化学因素、电离辐射等因素有关： 1、病毒感染近十年来的研究提示白血病很可能是病毒引起的。病毒引起禽类、小鼠、大鼠、豚鼠、猫、狗、牛、猪、猴的白血病，此外，目前认为C型RNA肿瘤病毒与人类白血病的病因有关。 2、电离辐射日本广岛、长畸原子弹爆炸后的白血病发病率明显增高。离爆炸中心越近，发病率越高。此外，大剂量放射线局部治疗类风湿性强直性脊椎炎，白血病发生率在治疗组中比对照组高10倍，而其发病机会与照射剂量密切相关。某些国家报道放射科医师患白血病较多。 3、化学因素某些化学物质如苯和氯霉素等通过对骨髓损害，也可诱发白血病。急性白血病与口服氯(合)霉素可能有关。其它尚有氨基比林、磺胺药、保泰松、223、乐果等。 4、遗传因素文献报道先天性痴呆样愚型者发生白血病较正常儿童高15－20倍；其它伴有染色体异常的先天性疾病如Bloom综合征、Fanconi综合征、Klinefelter综合征等患者中白血病的发病率也均较高。有少数家族性和先天性的白血病。 临床表现 编辑 白血症是造血系统的一种恶性肿瘤，可能由病毒感染、遗传、放射、化学品和药物等引起（均与再生障碍性贫血相似）。临床上分为急性和慢性两型，以急性白血病为多。急性白血病多见于儿童及青少年，其起病急，不治疗一般病程不超过6个月。（1）临床表现急性白细胞病又可分为急性淋巴细胞性白血病（简称急淋，包含1、2、3型）和急性非淋巴细胞性白血病（简称急非淋，又可分为1-7型），临床上常见的类型是急非淋1型（粒细胞

成人慢性粒细胞白血病诊疗规范(2018版)

成人慢性粒细胞白血病诊疗规范(2018年版) 一、概述 慢性髓性白血病（CML，常称为慢性粒细胞白血病）是骨髓造血干细胞克隆性增殖形成的恶性肿瘤，常以外周血白细胞异常升高及中性中、晚幼粒及成熟粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞增多为其特征。９５％以上的患者具有Ph 染色体，所有的CML都有BCR和ABL1基因重排。 以伊马替尼为代表的酪氨酸激酶抑制剂(TKI)作为一线治疗药物使CML患者的10年生存率达85%～90%,尼洛替尼、达沙替尼等二代TKI一线治疗CML能够获得更快更深的分子学反应，亦成为CML患者的一线治疗药物选择。TKI 治疗获得持续稳定的深度分子学反应超过2年以上的患者，部分能够获得长期的无治疗缓解（TFR，treatment free remission,），即功能性治愈。异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）曾经是CML的一线治疗方案，但供者来源、患者年龄、移植相关风险等多种因素限制其应用,逐步成为TKI治疗失败或不耐受后的二线甚至三线治疗选择。在CML 的治疗中应该在详细评估患者的全面情况后，向其推荐优先治疗药物选择，参考患者的治疗意愿，进行下一步治疗。 二、诊断技术和应用 （一）高危人群的监测筛查

CML约占成人白血病的15%，全球年发病率约为（1.6~2）/10万人。我国年发病率为（0.36～0.55）/10万人。随着年龄增加，CML发病率有逐步升高的趋势。美国低于20岁人群年发病率大约0.2/10万，80~90岁人群年发生率增加至10/10万，中位发病年龄67岁；欧洲患者中位年龄为60岁。中国CML患者较西方更为年轻化，国内几个地区的流行病学调查显示CML中位发病年龄45～50岁。CML致病的病因比较复杂，较为公认的因素是电离辐射，暴露于辐射的人群有较高的CML发病率。没有证据表明其他因素与CML的相关性。 （二）临床表现 1.症状 CML起病缓慢，其自然病程包括慢性期、加速期及急变期。70%患者是在症状出现之后方去就诊并得以诊断。部分患者在体检或其他原因检验血细胞计数时才发现血液异常。90-95%的患者初诊时为慢性期。 慢性期患者主要临床表现为贫血和脾脏肿大相关的症状。包括疲乏无力、消瘦、萎靡不适、纳差、早饱感、左上腹或腹部的疼痛不适等。早期一般无出血症状，后期约有３０％患者表现不同程度的出血，如鼻出血、齿龈出血、皮肤瘀斑、消化道出血、视网膜出血等。女性可有月经过多。颅内出血少见。出血原因与血小板减低（少见）或血小板功能