Waters HILIC Atlantis BEH XBridge色谱柱特性与方法建立

气相色谱仪原理(图文详解)

气相色谱仪原理（图文详解） 什么是气相色谱 本章介绍气相色谱的功能和用途，以及色谱仪的基本结构。 气相色谱（GC)是一种把混合物分离成单个组分的实验技术。它被用来对样品组分进行鉴定和定量测定： 基子时间的差别进行分离 和物理分离（比如蒸馏和类似的技术）不同，气相色谱（GC)是基于时间差别的分离技术。 将气化的混合物或气体通过含有某种物质的管，基于管中物质对不同化合物的保留性能不同而得到分离。这样，就是基于时间的差别对化合物进行分离。样品经过检测器以后，被记录的就是色谱图（图1),每一个峰代表最初混合样品中不同的组分。 峰出现的时间称为保留时间，可以用来对每个组分进行定性，而峰的大小（峰高或峰面积）则是组分含量大小的度量。 图1典型色谱图

系统 一个气相色谱系统包括 可控而纯净的载气源.它能将样品带入GC系统进样口，它同时还作为液体样品的气化室色谱柱，实现随时间的分离 检测器，当组分通过时，检测器电信号的输出值改变，从而对组分做出响应 某种数据处理装置图2是对此作出的一个总结。 样品 载气源一^ 进样口一^ 色谱柱一^ 检测器一_ 数据处理」 图2色谱系统 气源 载气必须是纯净的。污染物可能与样品或色谱柱反应，产生假峰进入检测器使基线噪音增大等。推荐使用配备有水分、烃类化合物和氧气捕集阱的高纯载气。见图

钢瓶阀 若使用气体发生器而不是气体钢瓶时，应对每一台GC都装配净化器，并且使气源尽可能靠近仪器的背面。 进样口 进样口就是将挥发后的样品引入载气流。最常用的进样装置是注射进样口和进样阀。注射进样口 用于气体和液体样品进样。常用来加热使液体样品蒸发。用气体或液体注射器穿透隔垫将样品注入载气流。其原理（非实际设计尺寸）如图4所示。

高效液相色谱仪Waters 工作站 Empower2_现场培训教材

Empower 2 软件现场培训教材 (第三版) 沃特世科技（上海）有限公司 沈晓峰 2008年11月

目录 EMPOWER软件概述1 一．登录1二．P RO 界面主要组件的介绍3三．新建项目6 EMPOWER软件数据采集与处理11 一．概述11（一）方法组11（二）数据采集与处理的流程12二．数据的采集14（一）平衡系统样14（二）单个运行样品19（三）样品组运行样品20三．数据的处理24（一）利用处理方法向导建立处理方法24（二）修改样品信息30（三）定量计算34四．数据报告的打印39 系统管理43 一．系统配置43（一）查看色谱系统43（二）色谱系统管理43二．数据管理48（一）项目的备份48（二）项目的还原51 附录3D数据的处理55 （一）建立处理方法55（二）修改样品信息62（三）定量计算67

Empower软件概述一．登录 1.双击电脑桌面上的Empower图标

选择用户类型（提示：Empower 2 可以为一个用户分配多种身份，如果为您在建立用户的时候为该用户分配了多个身份，在每次登录的时候可以选择进行本次任务所使用的用户类型。系统默认的用户System只有一个“管理员”的身份。），首次登录时请选择您所在的时区（中国的时区为“PRC”），并选择所需的登录界面，然后单击确定。 关于不同的用户界面，请参阅下面的说明： l QuickStart 为单一窗口界面，它将用户需要使用的所有功能置于同一个单一界面中，以简洁明确的方式提供了进行色谱分析需要的所有功能。用户甚至可以用QuickStart 界面进行包括PDA和质谱数据提取在内的分析方法开发工作，还能灵活地定制报告和管理数据。 l Pro 界面是进行系统管理的完美界面，可以控制所有软件功能。 l Open Access 界面适合没有任何色谱经验的初学者使用，使用者只需要选择方法、样品数，然后点击鼠标运行即可。 l Web 界面可以使远程用户或移动用户通过互联网或企业内部网方便地访问色谱系统中的信息。 本教程使用Pro 界面，请选择登录”Pro 界面”完成随后的操作。

色谱纯化系统验证方案

?KTA Pilot凝胶色谱纯化系统验证方案起草、审核、批准： 1.概述6 1.1.设备简介6 1.2.?KTA PILOT凝胶色谱纯化系统示意图6 2.验证目的：7 3.验证范围7 4.验证标准7 4.1.安装确认判断标准7

4.2.运行确认判断标准7 5.验证人员及职责8 5.1.验证小组8 5.1.1.组长8 5.1.2.组员8 5.2.质量管理部8 5.2.1.QA8 5.2.2.QC8 5.3.生产部8 5.4.工程维修部8 5.5.物流采购部9 5.6.人员表9 6.验证计划进度9 7.操作标准10 8.安装确认10 8.1.相关文件确认10 8.2.公用系统安装确认10 8.3.控制电脑安装确认10 8.3.1.控制电脑安装方法10 8.3.2.控制电脑安装确认方法11 8.3.3.可接受标准11 8.4.UNICORN数据存储器CU-950安装确认11 8.4.1.CU-950安装安装方法11 8.4.2.可接受标准11 8.5.UNICORN数据存储器安装确认11 8.5.1.UNICORN数据存储器安装方法11 8.5.2.UNICORN数据存储器确认方法11 8.5.3.可接受标准11 8.6.UNICORN色谱控制软件安装确认12 8.6.1.UNICORN色谱控制软件安装方法12 8.6.2.UNICORN色谱控制软件安装确认方法12 8.6.3.可接受标准12 8.7.设备主件确认12 8.7.1.设备主件确认方法12

8.7.2.可接收标准12 8.8.设备管道连接配件确认13 8.8.1.设备管道连接配件确认方法13 8.8.2.可接收标准13 8.9.常规系统确认13 8.9.1.系统代码及序列号确认13 8.9.1.1系统代码及序列号确认方法13 8.9.1.2可接收标准13 8.9.2.系统测试确认13 8.9.2.1系统测试方法13 8.9.2.2可接受标准14 8.9.3.设备组件安装确认14 8.9.3.1设备组件安装确认方法14 8.9.3.2可接受标准14 8.9.4.设备组件连接确认14 8.9.4.1设备组件连接确认方法14 8.9.4.2可接受标准15 8.9.5.液体流路管道安装确认15 8.9.5.1液体流路管道安装确认方法15 8.9.5.2可接受标准15 8.9.6.混合池响应确认16 8.9.6.1混合池响应确认方法16 8.9.6.2可接受标准16 8.9.7.空气感应器响应确认16 8.9.7.1空气感应器响应确认方法16 8.9.7.2可接受标准17 8.9.8.混合检测器响应确认17 8.9.8.1混合检测器响应确认方法17 8.9.8.2可接受标准17 8.9.9.电子元件连接安装确认17 8.9.9.1电子元件连接安装确认方法17 8.9.9.2可接收标准17 9.运行确认17 9.1.PC运行确认18 9.1.1.PC运行确认方法18 9.1.2.可接收标准18 9.2.警报运行确认18 9.2.1.警报运行确认方法18 9.2.2.可接收标准19 9.2.3.验证频次19 9.3.观察功能运行确认19 9.3.1.观察功能运行确认方法19

HILIC色谱柱介绍[优质材料]

亲水作用色谱（HILIC）是近年来色谱领域研究的热点之一。本文简介了HILIC的起源、定义、分离特点；比较了HILIC和反相色谱（RPLC）的选择特性，讨论了HILIC与质谱联用技术的特点，并对其使用中的注意事项进行了总结。 1. HILIC的概念 亲水色谱（HILIC）是一种用来改善在反相色谱中保留较差的强极性物质保留行为的色谱技术。它通过采用强极性固定性，并且结合高比例有机相/低比例水相组成的流动相来实现这一目的。而这样的流动相组成尤其有利于提高电喷雾离子化质谱（ESI-MS）的灵敏度。2. HILIC的分离机制 HILIC的分离机理在目前还存在着争议，主要包括以下三个方面：（1）分配机理（2）离子交换（3）偶极-偶极相互作用。更多的试验现象则表明HILIC的保留机理包含氢键作用、偶极作用和静电作用等多种次级效应，很难将其区分开来。 3.HILIC影响保留的主要因素 普遍认为HILIC保留行为受到多种参数的影响，如固定相的官能团、有机改性剂的含量、流速、柱温、流动相缓冲体系的pH值、缓冲盐的种类和浓度。 影响样品在固定相上的保留行为的最主要因素都是流动相中有机相的比例，例如乙腈的含量的增加会显著增加样品的保留因子。在HILIC分离模式中，溶剂洗脱能力由弱到强为：四氢呋喃<丙酮<乙腈<异丙醇<乙醇<甲醇<水, 流动相中水是最强的洗脱溶剂。一般采用乙腈-水体系作为流动相，其中水相的比例为5%-40%以保证其显著的亲水作用。如图1所示，将流动相中的水相用甲醇、乙醇、异丙醇代替，随着流动相极性的减小，待测物在柱上的保留就会增强。 Figure 1. HILIC retention as a function of polar modifier. 100 mm length ACQUITY UPLC BEH HILIC column. Peaks: 1 = methacrylic acid, 2 = cytosine, 3 = nortriptyline, 4 = nicotinic acid. 4. HILIC与RP-HPLC的比较 传统的反相色谱（RPLC）对强极性和亲水性的小分子物质的保留和分离能力较弱，通常流动相需要采用高比例的水相才能实现其保留，然而高比例的水相会导致一系列问题，比如固

安捷伦气相色谱仪系统简介

气相色谱系统 7890 A 气相色谱系统 6890N 气相色谱系统 6850 气相色谱仪 6820 气相色谱系统 7820 A 气相色谱仪（厂家推荐， 全中文操作界面） 新！7000A 三重串联四级杆质谱系统 5975C 系列质谱系统 3000 微型气相色谱仪 1 Agilent 7890A GC 系统 优异仪器性能 成就化学理想 安捷伦7890A GC 为安捷伦公司40年领导GC 技术的历史谱写了激动人心的新篇章。它为您提供了所需的一切，包括先进的分离能力, 强效的新功能和仪器智能化实时自监测，从而将您实验室的GC 和GC/MS 性能提升到一个新水平。更快的柱箱降温速率和反吹功能,使您的分析时间更短, 样品的分析成本更低。第五代电子气路控制 (EPC)和数字电路为压力设定和保留时间锁定(RTL)的精度 （0.001psi ） 设置了新的标准，使安捷伦7890GC 具有前所未有的可靠性。 特点 多模式进样口包括分流/不分流， 升温，以及大容量进样器功能。 每个分流/不分流 （SSL 进样口）都采用了新的方便的扳转式顶盖设计，使您能在30秒内更换进样口衬管 - 无需特殊的工具或培训 突破性的微板流路控制技术实现了柱箱内可靠的无泄漏连接，提高了工作效率和数据完整性，为复杂的GC 分析提供了通用、可靠的解决方案 。 低热容技术为极速分析周期和高效生产提供了迅速加热以及冷却的毛细管色谱柱 Blos NPD 可提供更稳定的运行和更长的使用寿命。 安捷伦7693自动液相进样器具备对所有气相自动进样品的极快进样时间，附带对150-via 容器的同时注射， 并且加强了样品制备功能。

(完整)Waters高效液相色谱仪标准操作规程

1.目的 描述 Waters 高效液相色谱仪标准操作规程。 2.适用范围 化验室 3.责任者 化验员应严格遵照该操作规程 , QC 主管负责监督本规程的实施。 4.定义 HPLC High Performance Liquid Chromatography , 高效液相色谱仪。 5.安全注意事项 5.1有机溶媒有害健康，各溶剂瓶口应封严。 5.2注意检查废液桶中废液应避光，防止废液桶满外溢。 6.规程 6.1.Waters HPLC的组成：贮液器输液泵自动进样器分离柱 (柱温箱 ) 紫外检测器控制及数据处理系统 (Millennium 32化学工作站 )。 6.2. HPLC系统的打开及关闭顺序 6.2.1打开顺序 ?对于分体式：请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关，待各部分分别显示初始化完毕后，最后 打开M i l l e nn i um32化学工作站。 泵与色谱工作站的连接：对于 510 泵，因为此泵与色谱工作站是 单向联系，如要使泵在 Remote 状态下由工作站控制，首先要在泵 的键盘上按 Menu 键，待显示屏切换至 Mode 状态下，其状态是 Loca ，按 Edit/Enter 键，在 Local 的L 前有闪动的光标显示，按键， Local 转换成Rem，再按Edit/Enter 键，此命令已输入进去, 最后按 Stop/Run 键，使泵处于Run 状态这时泵和工作站的连接即告成功。泵 的任何动作都可由工作站来控制。还应注意这一步工作在每次开机 时都要进行。

对于 Alliance 2690 系统：先打开 Alliance 2690 主机、检测器电源开关， 待初始化完毕后，再进入 Millennium 32化学工作站。 对于流动相的要求：对于液体试剂应尽量采用色谱纯试剂；对于所 用到的固体试剂应采用分析纯试剂；对于水，应采用经纯水机处 理过的超纯水；流动相在使用前一定要经 0.45m 的滤膜（滤膜分 为水相膜与有机相膜，确保使用正确的滤膜，参见附表 ) 过滤、超声 真空脱气方可使用，严禁含盐的流动相未经过滤直接使用。 应养成良好操作习惯： 规范操作，树立保护 HPLC 整套系统的概念，尤其对于输液泵、色 谱柱、检测器，在使用后应及时冲洗，以免污染而使其寿命缩短或 损坏，尤其如操作者使用了含盐的流动相，更应注意清洗的步骤： 首先用脱过气的纯水在流速为1ml/min 左右冲洗 30～60 分钟，再用 含 50％以上甲醇或乙腈的水溶液以相同的流速冲洗 20～30 分钟左 右。 如要卸下柱子，在经过上述冲洗过程之后，再经纯甲醇或乙腈以 1ml/min 的流速冲洗 20~ 30 分钟，柱子卸下后应马上拧紧柱堵。 流速的变化应采用阶梯式递增或递减的方式，启动泵时，应在 2 分 钟之内由小流速慢慢增大到所需的流速，泵关闭时亦然( 流速递 减)。切忌流速的骤变。 6.2.2关闭顺序 首先退出 Millennium 32化学工作站，再关闭系统的其他部分。 https://www.wendangku.net/doc/1d1468088.html,lennium 32化学工作站 Millennium 32色谱管理系统是集数据采集、处理、 HPLC系统的控制、结果的管理、报告的打印为一体的综合系统。下面就着重介绍该系统的基本操作知识。 6.3.1Millennium 32化学工作站的进入 打开化学工作站，系统自动进入Program Manager界面，双击 Millennium 肖像，这时进入Millennium界面，双击 Session Manager 图 标，系统将自动初始化，以使工作站和 HPLC整套系统进行联 接。初始化后，按系统要求键入你的 User Name和 Password，这时 你已进入该系统。 6.3.2Project的进入和建立

色谱柱的分类及特点

3-1 柱的结构 1、堵棒（或导管） 2、接头 3、接头 4、密封圈 5、螺帽 6、柱密封圈 7、柱管 8、柱填料9 10、过滤片 3-2 柱的分类： 根据所有的担体材料分为三种： a.硅胶型：机械强度高，易制成小颗粒，理论塔板数高。 b.聚全物型：在广泛的PH值范围内稳定 c.羟基磷灰石型：对蛋白质等生物高分子样品有特殊的选择性。 根据分离方式分类： a.硅胶型

1）正相：SIL－－磷脂、NH －－糖、维生素E，CN－－甾类激素。 2）反相：ODS（C18）、（C8 CN TMS Pheny1）低分子量化全物。 3）离子交换： WAX（弱碱阴离子交换）－－核苷酸、蛋白质 WCX（弱酸阳离子交换）－－蛋白质 SAX（强碱阴离子交换）－－核苷酸 SCX（强酸阳离子交换）－－儿茶酚胶 4）凝胶过滤： Diol－－蛋白质GF－－

蛋白质 b.聚合物型： 1）反相：ODP－－50－－肽，蛋白质，低分化合物。 2）离子交换：ISC－－氨基酸，胍类化合物，ISA－－糖，IC－－无机离子，PA－－蛋白质，ES－－蛋白质。 3）配位交换：SCR（磺化聚苯乙烯）－－糖。 4）离子排阻：SCR-101H 102H －－有机酸 5）凝胶过滤：ION－－多糖GS－－水溶性分子 6）凝胶渗透色谱（GPC）：GPD

－－合成分子、橡胶。 7）羟基磷灰石型：HPC－－蛋白质、核苷酸 按尺寸分类： 1.制备：30mm 50mm 内径，半制备：20mm内径。 2.分析：标准型柱：4_8mm内径。 快速色谱柱：3mm内径、5cm长、4.6mm内径。 小孔径柱：2.5mm内径，微孔径柱1mm内径。 3-3柱的技术指标 *耐压：不小于40Mpa。 *渗透性：反相－－流动相甲醇1ml/min，压力3Mpa。

Waters高效液相色谱仪仪器校验报告

* Waters自动进样系列高效液相色谱仪 仪器校验报告 型号: 编号: 校验报告编号: 目录 1校验报告的起草说明.................................... ?............... (2) 1.1起草说明及目的................................. ?.......... ? .. (2) 1.2认可范围 (2) 1.3运行项目及认可标准 (2)

2校验报告的起草与批准 (3) 2.1校验报告的归属.................................................... . 3 2.2江苏恒瑞医药股份有限公司研究所分析高效液相色谱仪信息一览表 (3) 2.3待校验色谱仪各部件序列号......................................... .. (4) 3 .运行确认-------------------------------------------------------------------------------- 4 3.1目的--------------------------------------------------------------------------------- 4 3.2认可范围----------------------------------------------------------------------------- 4 3.3运行前准备--------------------------------------------------------------------------- 4 3.3.1 环境条件----------------------------------------------------------- ------ 4 3.3.2标准样准备--------------------------------------------------------- ------ 4 3.4运行测试项目及认可质量标准---------------------------------------------------------- 4 3.5试验方法及结果：--------------------------------------------------------------------- 5 3.5.1泵流量设定值误差及流量稳定性检查 -------------------- ------------------------ 5 3.5.2柱温箱的检定------------------------------------------------------- ——6 3.5.3进样精密度检测--------------------------------------------------------------------- 7 3.5.4最小检测浓度----------------------------------------------------------------------- 8 3.5.5检测器噪声稳定性检查 -------------------------------------------------------------- 8 3.5.6检测器样品浓度响应线性检测 ------------------- --------------------- ------- 9 3.5.7进样体积线性检测 ------------------------------------------------------------------- 10 3.5.8检测器波长准确度 ------------------------------------------------------ 10 3.5.8.1重铬酸钾溶液检定----------------------------------------------------------------- 10 3.5.8.2咖啡因测试 ---------------------------------------------------------------------- 10 3.5.9 A/B通道梯度测试------------------------------------------------------------------- 11 3.5.10C/D通道梯度测试 ------------------------------------------------------------------ 12 3.6运行确认结论-------------------------------------------------------------------------- 14 Waters高效液相色谱仪仪器校验报告 1校验报告的起草说明 1.1起草说明及目的 根据国家《高效液相色谱仪检定规程》、根据仪器的不同配置要求，为了确保仪器使用正常，确保产品检测的准确性，对仪器的不同配置进行相应部件的确认

Waters_2695_型高效液相色谱仪操作方法

Waters 2695 型高效液相色谱仪操作方法 1 仪器组成及开机 1.1 仪器组成本仪器由Waters 2695 分离单元、2996型二极管阵列检测器、2420蒸发光散射检测器、色谱管理工作站和打印机组成。 2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机（或氦气脱气机），可容纳120 个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。 1.2 开机依次接通2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。接通2695 分离单元后，约20s 仪器开始自检，约1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“Idle ”时，仪器进入待命状态。 2 溶剂管理系统的准备 2.1 流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按【Menu/Status 】，进入“Status （1 ）”屏幕，光标选“Degasser ”，按【Enter 】，显示选项屏幕，光标下移选“Continuous ”，按【Enter 】。 2.2 启动溶剂管理系统 2.2.1 干启动，当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“Status （1 ）”屏幕下，按【Direct Function 】，光标选“Dry Prime ”，按【Enter 】，显示“Dry Prime ”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如【OpenA 】，光标选“Duration ”，按数字键输入5min ，按【Continue 】，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。 2.2.2 湿启动在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Compomtion ”中欲使用的流动相，输入10 0％，按【Direct Function 】，光标选“Wet Prime ”，按【Enter 】，显示“Wet Prime ”屏幕，输入7.5Ml/min 和6min ，按【OK 】，待限定时间结束后，对每种流动相重复操作。 2.2.3 平衡真空脱气机在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Composition ”，输入流动相的组成，按【Enter 】再用光标选“Degasser ”中的“Normal ”，按【Enter 】，按【Direct Function 】，光标选“Wet Prime ”，输入0.000mL/min 和10min. ，按【OK 】。待限定时间结束后，按【Abort Prime 】。 3 样品管理系统的准备 3.1 冲洗自动进样器在“Status （1 ）”屏幕下，光标选“Composition ”，输入流动相的组成。按【Direct Function 】，光标选“PurgeInjector ”，按【Enter 】，显示“Purge Injector ”屏幕，输入“Sample Loop Volumes 6.0 ”，光标下移“Compression Check ”，按任意数字键，按【OK 】。 3.2 冲洗进样针在主屏幕下，按【Diag 】，显示“Diagnositcs ”屏幕，按【Prime Ndl Wash 】，显示“Prime Needle Wash ”屏幕，按【Start 】，30s 内应见溶剂从废液排放口流出。按【Close】、【Exit 】。 3.3 冲洗柱塞杆密封垫在主屏幕下，按【Diag 】，显示“Diagnosities ”屏幕，按Prime Seal Wash ，显示“Prime Seal Wash ”屏幕，按【Start 】，待排放口有水流出，按【Halt 】、【Close】、【Exit 】。 3.4 装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置，打开样品仓门，显示“Door is Open ”屏幕，装入样品盘，按【Next 】，直至所有样品盘装毕，关仓门。 4 编辑分析方法及执行样品分析表 在主屏幕下，按【Develop Methods 】，显示“Methods ”屏幕。 4.1 编辑分析方法 4.1.1 建立新的分离方法在“Method ”屏幕下，按【New 】、【Separation Methods 】，输入方法名，按【Enter 】，显示分离方法屏幕，该屏幕共有6 页，通过按【Next 】或【Prev 】切换。如需设定梯度，在第（ 1 ）页按【Gradient 】，输入后按【Exit 】；如需设定色谱柱的温度，在第（ 4 ）页输入后按【Exit 】；在第（6 ）页设定检测器的种类，光标选“Absorbance Detector ”，按【Enter 】，光标选“48 6﹨2487 ”，按Abs （1 ）图标，设定检测波长，按【OK 】、【Exit 】、【Save 】。 4.1.2 编辑已建立的分离方法在“Methods ”屏幕下，光标选欲编辑﹨修改的分离方法的图标，按【Edit 】，编辑\ 改各种分析参数，按【Exit 】、【Save 】。 4.2 编辑执行样品分析表 4.2.1 建立新的样品组在“Methods ”屏幕下，按【New 】、【Sample Set 】，输入样品组名，按【Enter 】，显示方法组屏幕，在样品组表中输入待分析样品的信息。在“Vial ”中输入样品放置的位

色谱柱基本知识

色谱柱 色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。目录 1简介 2构造 3填料 4分类 1. 4.1 安装 2. 4.2 流动相 3. 4.3 样品制备 4. 4.4 保存操作 5发展方向 6性能评价 7注意事项 8新进展

柱效；对于同系物分析，只要500即可；对于较难分离物质对则可采用高达2万的柱子，因此一般 10~30cm左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。 柱效受柱内外因素影响，为使色谱柱达到最佳效率，除柱外死体积要小外，还要有合理的柱结构（尽可能减少填充床以外的死体积）及装填技术。即使最好的装填技术，在柱中心部位和沿管壁部位的填充情况总是不一样的，靠近管壁的部位比较疏松，易产生沟流，流速较快，影响冲洗剂的流形，使谱带加宽，这就是管壁效应。这种管壁区大约是从管壁向内算起30倍粒径的厚度。在一般的液相色谱系统中，柱外效应对柱效的影响远远大于管壁效应。 2构造 色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成，压力不高于70 kg/cm2 时，也可采用厚壁玻璃或石英管，管内壁要求有很高的光洁度。为提高柱效，减小管壁效应，不锈钢柱内壁多经过抛光。也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度，其效果与抛光相同。还有使用熔融硅或玻璃衬里的，用于细管柱。色谱柱两端的柱接头内装有筛板，是烧结不锈钢或钛合金，孔径0.2~20µm(5~10µm)，取决于填料粒度，目的是防止填料漏出。 色谱柱按用途可分为分析型和制备型两类，尺寸规格也不同：①常规分析柱（常量柱），内径 2~5mm（常用4.6mm，国内有4mm和5mm），柱长10~30cm；②窄径柱（narrow bore，又称细管径柱、半微柱semi-microcolumn），内径1~2mm，柱长10~20cm；③毛细管柱（又称微柱microcolumn），内径0.2~0.5mm；④半制备柱，内径>5mm；⑤实验室制备柱，内径20~40mm，柱长10~30cm；⑥生产制备柱内径可达几十厘米。柱内径一般是根据柱长、填料粒径和折合流速来确定，目的是为了避免管壁效应。 3填料 常见的分配柱填料：碳十八柱[1]（ODS/C18)、碳八柱（MOS/C8）、碳六柱（Hexyl/C6）、 碳四柱（Butyl/C4）、碳一柱（Methyl/C1）、阴离子交换柱（SAX)、 阳离子交换柱（SCX）、苯基柱（Phenyl）、氨基柱（Amino/NH2）、 氰基柱（Cyano/CN/Nitrile） 常见的吸附柱填料：硅胶柱 4安装 1、首先应确认柱和仪器的接头以及管路是否匹配。为减少死体积，进样阀、柱子、检测器之间

Waters 515高效液相色谱仪使用方法

Waters 515高效液相色谱仪使用方法 一、打开仪器与工作站： 1.按要求配制流动相，经过滤、超声波脱气后装入贮液瓶中，然后将恒流泵上末端带有过滤器的输 液管分别插入对应贮液瓶中。 2.打开电脑及色谱输液泵、二极管阵列检测器电源开关，在输液泵控制面板中，按向上或向下箭头， 找到“Local”，按“Edit”进入可编辑状态，再按向上或向下箭头，调至“Rem.”状态，按“Edit/Enter” 确认，按下面板左面的“Run/Stop”，此时屏幕右上角“Local”与“Run”相继闪动。（接通电源前，应先用专用注射器从排液阀抽去泵前管路中可能存在的气泡）。 3.双击电脑桌面上“Empower”图标，输入用户名“system”与密码“manager”，确定，进入工作站主窗 口。 二、运行样品： 1.在主窗口中点击运行样品，选择采集数据的项目与色谱系统后，点击“确定”打开运行样品窗口。 2.运行样品窗口中，在左面写入样品名称与合适的运行时间，左下部分上下两个按钮分别为“改变流 速”与“停止流液”，右下部分的“仪器方法”的下拉框中可以选定仪器方法，“编辑”可以对选定仪器参数进行编辑，“设置”用于将编辑好的仪器参数下载到色谱主机，“监视器”用于察看色谱基线情况，色谱图在窗口右侧显示。 3.分析样品之前应设定压力上限，以保护色谱柱。 4.设置各参数后，待基线平直才可进样。 5.将进样阀手柄置于“Load”(右上)位置，用微量注射器吸取一定量的试样溶液，插入进样口(插到底) 并将试样溶液缓慢推入。 6.点击运行窗口左半部分中右侧的按钮“进样”，待窗口下面的状态栏中出现“等待进样”时，扳下进 样阀手柄，进样运行即开始。 7.运行时间结束后自动停止运行，或可以单击上面的红色快捷按钮“停止运行”用以手动停止。 三、测定数据的察看 1.在工作站主窗口中点击浏览项目，在右侧窗口选定相应方法组后确定，打开数据列表，在表中第 一行选定“进样”，在表中找到相应数据，双击打开。 2.在数据显示窗口中，中间上半部分为等高图区，中间下半部分为色谱图区，右上部分为光谱图区； 点菜单“处理”－“提取色谱”后，等色谱图区中出现一白色数据框，上下拖动或双击－输入相应波长值－回车后，在色谱图区出现相应色谱图；点菜单“处理”－“提取光谱”，可以在窗口色谱图区中出现一白色数据框，左右拖动或双击－输入相应波长值→回车后，光谱图区出现相应光谱图； 中间最下面的部分是峰表，表中有峰号、保留时间、峰面积、峰高等项目。 四、关机： 1.在运行样品窗口中，点击左下方两个按钮中的“停止流液”钮，退出工作站。 2.依次关闭检测器与输液泵电源，关闭电脑及其它相关电源。 3.冷却10min后，盖上仪器罩。

AgilentInfinityLab液相色谱纯化解决方案

选择指南

2 Agilent InfinityLab 液相色谱纯化解决方案是您从分析型到制备型工作流程的高性能仪器、色谱柱、软件，以及服务的不二之选。您可以选择基于单一平台的可扩展全套 产品组合定制系统，以满足实验室当前和未来的需求。 从分析型到制备型的高效液相色谱纯化解决方案 1290 Infinity II 制备型液相色谱系统 ― 纯化效率的新标杆追求纯化工作流程的最高效率。具有最大灵活性，能够以 最高纯度、回收率和最快速度解决您的所有纯化难题。 1260 Infinity II 制备型液相色谱系统 ― 随时体验高效纯化 最经济实惠的馏分收集器能够帮助您获得最高纯度和回收率。可实现适合不同馏分体积的最高灵活性，同时保持极高精度的回收率。 1220/1260/1290 Infinity II 分析型液相色谱纯化系统 ― 体验分析型化合物分离的强大功能 通过高效分离和低扩散馏分收集分离目标化合物。选择用于蛋白质或敏感样品纯化的生物惰性选件。

3 1290 Infinity II 自动制备型液相色谱系统 实时计算每种目标化合物的聚焦梯度，确保所收集的馏分具有最高纯度。 1290 Infinity II 制备型液相色谱 系统 结合自动进样器，可灵活操作四根分析柱和六根制备柱。 1260 Infinity II 制备型液相色谱 系统 非常适用于需要梯度洗脱的分离。钛泵头具有耐腐蚀性和生物兼容性。 1260 Infinity II 手动制备型液相色谱系统 超值的二元梯度输送和手动进样毫克级纯化解决方案。 1220/1260/1290 Infinity II 分析型液相色谱纯化系统在分析型工作流程中体验化合 物分离的强大功能。 1260 Infinity II 制备型 LC/MSD 系统 配置紫外和质谱检测器、自动进样器以及多馏分收集器，可满足自动化和高通量需求。 1290 Infinity II 制备型 LC/MSD 系统 优化的台面空间利用和准确的质量选择性馏分触发实现应用灵活性。 1290 Infinity II 自动制备型 LC/MSD 系统 可从方法筛选直接放大到化合物克级纯化的理想系统。 最大程度提高液相色谱纯化系统和工作流程解决方案效率 InfinityLab 液相色谱纯化产品系列可灵活用于定制系统，满足您对纯度和回收率的需求，同时确保不超出预算。无论进行何种规模的纯化，安捷伦都能为您的工作流程提供高效的纯化解决方案，适用于从分析型化合物分离到几毫克至几克材料的制备型纯化。

色谱柱的极性

柱子的极性取决于固定相的极性 我们常用柱子的极性如下: 一、非极性 1、100%Dimethyl polysiloxane，100%聚二甲基硅氧烷，商品名：AC1，OV-101，OV-1，DB-1，SE-30，HP-1，RTX-1，BP-1 二、弱极性 2、5%Phenyl dimethyl polysiloxane, 5%二苯基(95%)二甲基聚硅氧烷，商品名：AC5，SE-52， 3、5% Phenyl 1%vinyl dimethyl polysiloxane，5%二苯基1%乙烯基(94%)二甲基聚硅氧烷，商品名：OV-5，DB-5，SE-54，HP-5，RTX-5，BP-5 注：2、3常无严格区分，通常混称。 三、中等极性 4、50%Phenyl dimethyl polysiloxane, 50%二苯基(50%)二甲基聚硅氧烷，商品名：OV-17，HP-50，RTX-50 5、14%Cyanopropyl phenyl polysiloxane, 14%氰丙基苯基(其中7%氰丙基7%苯基)(86%)二甲基聚硅氧烷，商品名：AC10，OV-1701，DB-1701，RTX-1701 6、50% Cyanopropyl phenyl polysiloxane，50%氰丙基苯基(其中25%氰丙基25%苯基)(50%)二甲基聚硅氧烷，商品名：AC225，OV-225，BP-225，DB-225，HP-225，RTX-225 四、强极性 7、polyethylene glycol,聚乙二醇，商品名：AC20，PEG20M，HP-INNOWAX(FFAP是其与2-硝基对苯二甲酸的反应产物)

Waterse2695高效液相色谱仪操作规程.docx

WaterS e2695高效液相色谱仪操作规程 1 目的 指导和规范WaterS e 2695 高效液相色谱仪的操作。 2 适用范围 该操作规程适用于Water e 2695 高效液相色谱仪的操作。 3 职责检验员应按操作规程进行仪器操作，质量监督员负责监督该操作规程的正确执行。 4 操作 4.1 仪器组成和开机 4.1.1 仪器组成 本仪器由WaterS e 2695 分离单元、WaterS 2998 二极管阵列检测器、WaterS ELSD 2424 蒸发光散射检测器、Empower3 色谱工作站和打印机组成。 WaterS e2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气，可容纳120 个样品瓶的自动分离单元，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘；显示器，键盘用户界面。 4.1.2 开机 4.1.2.1 依次接通WaterS e 2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。 4.1.2.2接通WaterS e2695分离单元后，约20s仪器开始自检，约3mn内各部件的初始化完成，待主屏幕上方标题区出现“Idle ”时，仪器进入待命状态。 4.2溶剂管路系统的准备 4.2.1 流动相脱气 确认所有溶剂管路都充满溶剂，按［Menu/StatUS l,进入"Status(I)"屏幕，光标选“DegaSSer”，按［Enter】。 4.2.2 灌注 当色谱仪流路没有溶剂或系统中有空气时，需进行干灌注(DryPrime),注入流动相。 否则，进行湿灌注(Wet Prime)以驱除气泡。干灌注：按主机面板上［Menu / Status l,进入“StatUS(1)”显示，按［Direct FUnction l,选择"Dry Prime”，选溶剂通道，如OPen A,选“DUratiOnlli按数字键输入5分钟，按” COntinue”，待限定时间结束后，重复操作，使所需的 溶剂通道注满流动相。湿灌注：进入αStatUS(1)"显示，选溶剂通道，输入100%,按［Direct FUnction］,选“ Wet Prime ”，按【OK l,根据面板提示设置流速及时间(默认流速为7. 5ml Z min ,一般不用更改，时间可设置为5min),按【0K1。 4.3 样品管理系统的准备 4.3.1 冲洗自动进样器 在“ StatUS(1)”，屏幕下，光标选“ Composition ”，输入流动相的组成。按【DireCt FUnCtion］, 光标选“ PUrge InjeCtOr ”，按【Enter］,显示“ PUrge InjeCtOr” 屏幕，输入“ SamPIe Loop Volumes 6. 0”，光标下移“ COmPreSSiOn Check”，按任意数字键，按【OK］。 4.3.2 冲洗进样针 在主屏幕下，按【Diag］，显示“ Diagnostics ”屏幕，按【Prime Ndl WaSh l，显示“ Prime NeedIe WaSh”屏幕，按［Start］，30s内应见溶剂从废液排放口流出。按【Close】、【Exit】。 4.3.3 冲洗柱塞杆密封垫

Waters高效液相色谱仪标准操作规程

XXXXXXXXXX部仪器设备标准操作规程 1 目的：建立Waters高效液相色谱仪标准操作规程。 2 范围：Waters高效液相色谱仪。 3 责任：化验室操作者。 4 规程： 4.1 型号与主要性能指标 4.1.1 型号 4.1.1.1 主机Waters2695分离单元、Waters2489紫外/可见光检测器。 4.1.1.2 工作站Empower2。 4.2 主要技术指标: 4.2.1 泵流量设定：0.000和0.010到10.000毫升/分，增量为0.001毫升/分。 流量准确度：±1%或10μL/分，取其中的较大值（0.200到5.000毫升/分），反压为600psi下的脱气甲醇。 ４.2.2 检测器：光源：氘灯。 波长范围：190～700nm 波长精度：±1nm 4.2.3 柱温箱：温度设定范围：20～60℃，间隔：1℃ 控温精度：±5℃ 4.2.4 工作站计算机：Dell OPTIPLEX330（操作系统Windows XP）。 4.2.5 打印机：HP LaserJet P1008打印机。

5 操作条件： 5.1 电源要求：950VA（最大值） 线电压：85到132Vac或180到250Vac 频率：47到63Hz 5.2 环境条件：温度：4～40℃，相对湿度：20～80%。 5.3 机房内应清洁无尘，无易燃、易爆和腐蚀性气体，室内排风良好。 5.4 仪器应平稳放置在工作台面上，便于操作，周围无强烈的机械震动和电磁干扰，仪器接地应良好。 6 操作前准备: 6.1 配制所需流动相。 6.2 配制和制备所需的对照品溶液和供试品溶液。 6.3 将色谱柱连接到色谱仪管路系统上。 7 操作步骤： 7.1 打开交流稳压电源开关，稳压电源上电压表指示并稳定至220V。 7.2 将“2695分离单元”电源开关（位于左侧面板的面板顶部）推到（开）I 位置即可启动“2695分离单元”, 启动诊断程序将启动。启动诊断程序的初始部分成功后，前面板上将显示Main（主）屏幕。启动诊断程序将继续执行，将初始化：针头、注射器和阀门；样品转盘托架；溶剂管理系统。诊断运行时，Main（主）屏幕的标题区内将显示这些机械诊断测试的状态。如果启动诊断程序不成功，则排除故障。当启动诊断程序完成后，“分离单元”将进入“空闲”模式。仪器开始自检（4-5分钟），待屏幕上方出现“idle”字样表示自检成功。 7.3 将输液泵上的烧结不锈钢过滤器及吸液管放入流动相中，使导管内充满溶剂。打开在线脱气，使其伪on,设定柱温，一般为35℃，清洗柱塞杆1～2分钟（Prime seal wash），将每一个会用到的管道进行排气一次（Wet prime），注射器排气泡及清洗（Purge injector）,清洗注射针（Prime needle wash）。