可溶性糖测定
引言
可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的植物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。因此，可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中，是人体热量的最最主要来源，具有较高的营养价值。本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法，及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。
1 蒽酮比色法
1.1 原理
糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物，颜色的深浅与糖含量有关。在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。
1.2 仪器与材料
1.2.1实验仪器
分光光度计，电炉，铝锅，电子天平，20ml刻度试管，刻度吸管5ml 1支、1ml 2支，漏斗。1.2.2实验试剂
（1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。
（2）浓硫酸（比重1.84）。
1.2.3实验材料
植物叶片。
1.3 实验方法
1.3.1标准曲线的制作
取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。
表1 各试管加溶液和水的量
管号 0 1、2 3、4 5、6 7、8 9、10 100μg/ml蔗糖液
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
(ml)
水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0
蔗糖量(μg) 0 20 40 60 80 100
然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。然后以空白为参比，在485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
1.3.2可溶性糖的提取
取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，或干材料。
分别放入3支刻度试管中，加入5～10ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min （提取2次），提取液过滤入25ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
1.3.3显色测定
吸取样品提取液0.5ml于20ml刻度试管中（重复2次），加蒸馏水1.5ml，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。
1.3.4结果计算
可溶性糖含量(mg/g) = （从回归方程求得糖量/吸取样品液的体积）×提取液量×稀释倍数÷样品干重×10-6
2 铜还原碘量法
2.1 原理
试剂中的Cu2+与还原糖作用，生成氧化亚铜(Cu2O)沉淀。加入H2SO4后，氧化亚铜溶解生成Cu+,试剂中的KIO3与KI在酸化的同是生成I2。
KIO3+5KI+3H2SO4→3K2SO4+3H2O+3I2，然后Cu+被I2氧化，2Cu++I2→2Cu+ + 2I-溶液中剩余的碘以淀粉为指示剂，用Na2S2O3标准溶液滴定：Na2S2O3+ I2→Na2S2O6 + 2NaI
同时以水代替样试液做空白滴定，将空白与样品的滴定差值带入由滴定标准系列糖液计算的回归方程中，即可求得所求试样中还原糖的含量。
2.2 仪器与试剂
2.2.1实验试剂
除非另有说明，在分析中仅使用分析纯试剂和GB∕T 6682 规定的至少三级水。
氢氧化钠溶液碱性铜试剂，盐酸溶液[c（HCl）=1mol∕L]，亚铁氰化钾溶液{w[K4Fe （CN）6·H2O=15％]}，硫酸锌溶液[w(ZnSO4·7H2O）6·H2O=30％]，硫酸+草酸混合液，硫代硫酸钠溶液，硫代硫酸钠工作溶液[c（Na2S2O3）=0.005mol∕L]，淀粉指示剂，酚酞指示剂，氢氧化钠溶液[c（NaOH）=0.5mol∕L]，葡萄糖标准液。
2.2.2仪器和设备
分析天平，高速组织捣碎机，电磁炉、可调温电炉或恒温水浴锅，25mL滴定管，（酸式、减式皆可），鼓风干燥箱。
2.3 实验方法
2.3.1样品制备
（1）新鲜样品：取有代表性的样品，洗净，把水吸干，用四分法取样，切碎，混匀，用组织捣碎机匀浆。黄瓜，番茄等多汁蔬菜可直接制成匀浆。其他样品蔬菜可称取切碎混匀的样品100.0g，加入100mL水制成匀浆，韭菜等水分较少的蔬菜可称取切碎混匀的样品100.0g，加入200mL水制成匀浆。去相当于10g样品的匀浆，精确到0.01g，用水洗入100mL容量瓶（V1）中，加入亚铁氰化钾溶液和硫酸锌溶液各1mL（如菜豆累高蛋白蔬菜可加入2mL）。摇匀后定容，放置片刻，等沉淀分离后过滤备用。
（2）干制品：将样品至于63℃~67℃鼓风干燥后，用粉碎机粉碎，过0.5mm筛。去1.00g~2.00g粉碎的样品防雨烧杯中，加入少量水湿润，用水洗入100mL容量瓶中，用沸水浴加热10min，冷却后，加入亚铁氰化钾溶液和硫酸锌溶液各1mL，摇匀后定容，过滤后备用。
（3）制品各种酱腌菜：去切碎混匀的样品100.0g，加入100mL水制成匀浆。蔬菜罐头可直接制取匀浆，操作步骤同5.1。番茄酱混匀后，可直接制取5.00g样品用水洗入100mL容量瓶同5.1操作。蔬菜汁称取混匀的样品20.00g用水洗入100mL容量瓶同5.1操作。
2.3.2还原糖的鉴定
（1）标准曲线的制作：用移液管吸取0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL的葡萄糖标准液与100mL锥形瓶中，或200mm×25mm的试管中，各加水至5.0mL，加入5mL的铜试剂，锥形瓶或试管口上加小漏斗，用相应的架子固定，置于沸水浴中加热15min。取出后立即置于冷水中，冷却至25℃到30℃。将加盖小漏斗更换为表面皿（不可摇动）。加入2mL硫酸+草酸的混合液，立即摇动，使氢氧化亚铜完全溶解。用硫代硫酸钠工作溶液滴定至浅黄绿色时，加入约0.5mL的淀粉指示剂，滴定至蓝色消失为终点。以糖的含量（mg）为y，空白与糖液滴定差值为x，计算回归方程y=bx+a并计算出a和b的值。标准曲线于没新配一次铜试剂和硫代硫酸钠储备液制备一次即可。
（2）试样还原糖的测定：根据不同样品中糖的含量，用移液管吸取5mL～10mL(V2)与50mL或100mL(V3)于容量瓶中.用水定容(含糖量低的样品不作次稀释处理)。从容量瓶中吸取5.00mL（V5）与锥形瓶或试管中，加入5.00mL的铜试剂。以下按6.1.1标准曲线的制作步骤操作。记录滴定值（V4）。同时以水代替试样作空白（可不加热）。将试样与空白滴定差值带入回归方程即可算出试样中还原糖的含量。如试样与铜试剂加热反应后，砖红色氧化亚铜的含量较多看不到蓝色，则样品含糖量偏高，可酌情吸取1mL～4mL样液，加水至5.00mL测定。滴定值应不少于标准曲线的最高点。
（3）试样可溶性总糖测定：用移液管吸取5mL～10mL与50mL或100mL于容量瓶中，加入1mL的盐酸溶液，置于沸水浴中加热10min，冷却，加入酚酞试剂1～2滴，用约0.5mol∕L氢氧化钠溶液中和至红色，再用稀盐酸调定红色刚刚消失，定容。以下按还原糖步骤操作[1]。
2.3.3结果计算
试样中可溶性总糖的的含量以质量分数w1计，单位以百分率（％）表示，计算式如下：
W1=[a+b(V0-V4)×V1×V3]/V2×V5×m×1000
3 费林试剂法
3.1 原理
在沸热条件下,用还原糖溶液滴定一定量的费林试剂时将费林试剂中的二价铜还原
为一价铜,以亚甲基蓝为指示剂,稍过量的还原糖立即使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型亚甲基蓝。
3.2 仪器与试剂
3.2.1仪器设备
高速组织捣碎机，电热恒温水浴，1000W调温电炉，200ml,250ml容量瓶，250ml 锥形瓶，50ml碱式滴定管。
3.2.2实验试剂
（1）费林试剂甲：称取硫酸铜(CuSO4·5H2O，分析纯)34.6g溶于水中，稀释至500ml，过滤，贮于棕色瓶内。
（2）费林试剂乙：称取氢氧化钠50g和酒石酸钾钠(KNaC4O6H4·4H2O，分析纯)138g 溶于水中，稀释至500ml,用石棉垫漏斗抽滤。
（3）转化糖标准溶液：称取9.5g蔗糖(分析纯)用水溶解后转入1000ml容量瓶中，加入6MHCl(分析纯)10ml,加水至100ml。在20～25℃下放置三天或在25℃保温24h，然后用水定容(此为酸化的1%转化糖液,可保存3～4个月)。测定时，取1%转化糖液25.00ml 放入250ml容量瓶中,加入甲基红指示剂一滴，用1MNaOH溶液中和后用水定容，即为1mg/ml转化糖标准溶液。
（4）亚甲基蓝溶液：称取0.5g亚甲基蓝(分析纯)溶于100ml水中。
（5）乙酸锌溶液：称取21.9g乙酸锌［Zn(OAC)2·2H2O，分析纯］溶于水中，加冰乙酸3ml，稀释至100ml。
（6）亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾［K4Fe(CN)6·3H2O,分析纯］溶于水，稀释至100ml。
3.3 实验方法
3.3.1样品提取液制备
取待测样品适量，洗净，用不锈钢刀将可食部分切成适当小块充分混匀后，按四分法取样。称取100g鲜样加入等重量的水，放入组织捣碎机中捣成1:1匀浆，有些材料匀浆比例可适当调整，多汁果蔬类可直接捣浆。称取匀浆25.0或50.0g(相当于样品12.5或25.0g)放入150ml烧杯中，含有机酸较多的材料加0.5～2.0g粉状CaCO3调至中性(广范试纸检试)。用水将样液全部转入250ml容量瓶中，并调整体积约为200ml。置80±2℃水浴保温30min，其间摇动数次，取出加入乙酸锌溶液及亚铁氰化钾溶液各2～5ml,冷却至室温后，用水定容，过滤备用。
3.3.2可溶性糖测定
（1）费林试剂的标定：取费林试剂甲、乙各 5.00ml或在测定前先等体积混合后取10.00ml混合液于250ml锥形瓶中,放入玻璃珠4～5粒,先加入比预测(按6.2进行预测)仅少0.5ml的1mg/ml转化糖标准液。将此混合液置1000W电炉上加热,使其在2min 左右沸腾,准确煮沸2min,此时不离开电炉,立即加入0.5%亚甲基蓝指示剂6滴,并继续
以每4～5s的滴速滴加标准糖液,直至二价铜离子完全被还原生成砖红色氧化亚铜沉淀,溶液蓝色褪尽为终点。用准确滴定标准糖液的毫升数V1,乘以标准糖液浓度［mg/ml］,即得10ml费林试剂所相当的糖的毫克数。取已经制备的待测液100ml于200ml容量瓶中,加6MHCl10ml。在80±2℃水浴加热10min,放入冷水槽中冷却后,加甲基红指示剂二滴用6M及1MNaOH溶液中和,用水定容。
（2）预测：取费林试剂甲、乙各5.00ml或10.00ml混合液于250ml锥形瓶中,，滴定管加入待测糖液约15ml,在电炉上加热至沸，约沸15s后迅速滴加待测糖液,至呈现极轻微的蓝色为止，此时加入0.5%亚甲基蓝指示剂 6 滴，继续滴加待测糖液，直至溶液蓝色褪尽为止，记下待测糖液的用量V2(毫升数)。
（3）准确测定：取费林试剂甲、乙各5.00ml或10.00ml混合液加入锥形瓶中，由滴定管加入比预测仅少0.5ml的待测糖液，并补加V1－V2 毫升水(标定费林试剂所消耗的标准糖液毫升数V1减去预测消耗的待测糖液毫升数V2,即为应补加水的毫升数)，使其与标定费林试剂时的反应体积一致。以下按费林试剂标定同样操作，继续滴至终点。前后沸热时间须在3min左右。待测糖液消耗量应控制在15～50ml范围内，不能大于标定费林试剂所用标准糖液体积V1。否则应增减称样量重新制备待测液[2]。
3.3.3结果计算
待测液可溶性糖含量(%)=滴定标准糖液的毫升数/待测液滴定的毫升数
4 原子吸收法
4.1 原理
将样液与过量的碱性铜盐反应，使产生沉淀，然后取上层清液用原子吸收分光光谱仪测定剩余铜含量，通过标准曲线计算水果蔬菜中可溶性糖含量[3]。
4.2 仪器与试剂
4.2.1实验仪器
原子吸收分光光谱仪，电热恒温水浴锅，高效自动阻止捣碎机，电子天平。
4.2.2实验试剂
（1）葡萄糖标准贮备液，5g/L
（2）碱性铜盐溶液
（3）10%中性醋酸铅溶液
（4）6mol/L氢氧化钠溶液
（5）6mol/L盐酸溶液
（6）6mol/L硫酸钠溶液
4.3 实验方法
4.3.1工作曲线绘制
分别吸取糖标准贮备液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0ml于50 ml容量瓶中，加入碱性铜盐溶液5.0ml，于沸水浴中反应15min，取出后立即用冷水冷却，定容。静置澄清
后，吸取清液再稀释50倍，用原子吸收分光光谱仪，铜空心阴极灯于324.8nm测吸光度，用吸光度和糖浓度值绘制工作曲线。
4.3.2样品测定
取待测样品适量，洗净，用不锈钢刀将可食部分切成适当小块充分混匀后，按四分法取样，放入高效自动阻止捣碎机捣成匀浆。称取匀浆25g，用约100ml水洗入250ml 容量瓶中，摇匀，放入80摄氏度水浴保温浸提30min，期间摇动数次，取出冷却后滴加中性醋酸铅溶液至不再产生沉淀为止，再加入1-2g硫酸钠溶液以除去溶液中的过剩铅盐，定容，过滤。吸取清液50ml放入100ml容量瓶中。加入6mol/L盐酸溶液5.0ml，于90摄氏度中水解10min。取出冷却后，用6mol/L氢氧化钠溶液中和，用水定容即为待测液。吸取待测液5.0ml，按与工作曲线相同程序测定。
4.3.3结果计算
X=C×V×F×100
式中：X为样品中可溶性糖含量%；
C为查标准曲线获得的糖浓度值；
V为定容体积；
F为稀释倍数。
5气相色谱法
5.1原理
用糖醇衍生化成乙酸酯，用石英毛细管色谱柱对稻子、小麦麸皮样品进行分析测定，得到样品中可溶性NSP各组成单糖的色谱峰，并依据色谱图提供的数据计算样品中可溶性非淀粉各组成单糖的含量及其总含量[4]。
5.2 仪器和试剂
5.2.1实验仪器
气相色谱仪，检测器FID，恒温振荡器。
5.2.2实验试剂
（1）无水乙醇，NaBH4，冰醋酸，乙酸酐，氢氧化钾，乙酸乙酯氨水均为分析纯。
（2）标准单糖：木糖，阿拉伯糖，甘露糖，葡萄糖，岩藻糖，半乳糖，鼠李糖，均为AR级。
（3）实验样品：稻子、小麦麸皮。
5.2.3气相色谱条件
（1）石英毛细管柱，规格为25m×0.3mm；
（2）起始温度195℃，升温速度8℃∕min，最后温度升至225℃；
（3）检测器温度为250℃；
（4）汽化室温度为210℃；
（5）分流比为1:20；
（6）载气N2；
（7）进气量为0.8ul。
5.3 试验方法
5.3.1样品的前处理
将麦子小麦和麸皮分别粉碎后通入0.5mm的筛子，磨细的粉末加入硅胶保干器中24个小时，保持湿度，准称样品100mg分别放入8mL带螺帽玻璃试管中，加入80﹪的乙醇5ml，并加至80℃10min，离心分离，吸出上清液，可除去游离糖，并使内源酶失活。
5.3.2淀粉与NSP的分离
在40℃时用N2吹干样品，加20ml醋酸缓冲液（pH0.5），加热至100℃30min，搅拌使淀粉凝胶，冷却至95℃，加入0.05mlα-淀粉酶，恒温震荡，冷却至55℃，加入0.2ml α-葡萄糖苷酶，使样品酶解。将可溶性NSP与淀粉分离，离心，取上层清夜做可溶性NSP鉴定。
5.3.3可溶性NSP的测定
取上层清夜1ml放入8ml带螺帽试管中，加4ml无水乙醇，充分振荡，离心去掉上层清夜，剩余物用N2吹干，加入1ml 2mol/L三氟乙酸，加热到125℃，使样品全部水解，冷却室温，加入0.1ml内标物（阿洛糖500mg/L）。并在混合液中加入0.2ml的无水乙醇，和一滴3mol/L的NH4OH,再加入新配置的NaBH4,放置于40℃的水浴中，加冰醋酸分解过量的NaBH4，加入0.5ml的1-甲基咪唑和5ml乙酸酐反应10min，然后加入1ml无水乙醇静置10min，分两次加入10ml7.5mol/L KOH，溶液分为两层，用少量乙酸乙酯提取有基层2-3次且合并。有机层用N2吹干，所得糖醇乙酸脂可直接进行气相分析。
5.3.4结果计算
X=（样品峰面积×内标物重量×1000×相应因子/内标物峰面积×样品重量）×聚
合因子
6 液相色谱-蒸发光散射法
6.1 原理
不挥发样品颗粒对光的散射程度与其质量成正比。
6.2 仪器与试剂
6.2.1实验仪器
高效液相色谱仪；低温型蒸发光散射检测器；高速冷冻离心机；匀浆机；电子分析
天平。
6.2.2实验试剂
（1）D-果糖，D-葡萄糖，蔗糖，各种糖标样的纯度均大于99%。
（2）乙腈为色谱纯试剂。
（3）实验用水为二次蒸馏水。
（4）苹果样品。
6.3 实验方法
6.3.1标准溶液的配制
精确称取果糖，葡萄糖，蔗糖各25.0mg置于25ml容量瓶中，用蒸馏水稀释、定容，配制成5mg/ml混合糖标准液。使用前用蒸馏水稀释成所需浓度的标准工作溶液。
6.3.2样品处理
准确称取10g果肉，研磨后加入50ml蒸馏水，于80℃恒温水浴中保温20min，不时搅拌，使可溶性糖充分浸出，然后离心和过滤，将滤液全部收集在100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。待测液用0.45μm的微孔滤膜过滤，滤液供HPLC分析。
6.3.3绘制色谱图
（1）色谱柱：规格为4.6mmID×250mm，5μm；柱温为室温；流动相为V(乙醇)：V（水）=80:20；流速0.8ml/min；进样量5μL。
（2）蒸发光散射检测器（ELSD）的漂移管温度40℃，氮气作载气，流速1.5mL/min。
6.3.4结果计算
将配好的混合糖标准贮备液依次稀释为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0mg/mL 的不同浓度混合糖标准溶液，在测定条件下进样5μL，根据测得的峰面积与相应糖的浓度进行线性回归，得到曲线方程。再将最小浓度的标准溶液逐级稀释，依次进样5μL，计算当信噪比S/N=5时所对应的糖标准溶液的质量浓度以确定检测限[5]。
7 连续流动法
7.1 原理
用盐酸直接水解样品中的可溶性糖，然后用连续流动分析仪测定样品中可溶性糖的含量。
7.2 仪器与试剂
7.2.1实验仪器
连续流动分析仪。
7.2.2实验试剂
（1）试验用水为二级水，其它所用试剂均为分析纯；
（2）盐酸溶液：42.4 mL HC1 37％(GR)用水稀释至1 000 mL，加入1 mL Brij35；
（3）碳酸钠溶液：26.5 g Na2CO (GR)用水稀释至1 000 mL，加入1 mL Brij35。
（4）盐酸新亚铜溶液：0.4 g盐酸新亚铜(C14H 3C1N2；GR)，加0.2 g CuSO 4·
5H20用水稀释至1 000 mL，加入0．5 mL Brij35。
（5）葡萄糖标准储备液50mg/mL：称取50 g葡萄糖，用水稀至1 000 mL。用水稀释配制葡萄糖标准曲线系列：0．05、0．2、0．6、1．0、2．0mg/mL。
7.3 实验方法
7.3.1 样品中可溶性糖的测定
称取试样2.5 g～10 g(m2)，置于250 mL容量瓶中，加入约200mL水充分摇匀，然
后加5 mL乙酸锌溶液(200 g/L)摇匀，加5 mL亚铁氰化钾溶液(100 g/L)，加水稀释至刻度摇匀过滤，滤液上机测定。
7.3.2上机测定
将标准系列及7.3.1的样品滤液放人自动进样器，用试剂盐酸溶液（2）、碳酸钠溶液（3）、盐酸新亚铜溶液（4）引入流动仪测定。
具体的实验参数为：第一热池温度：92℃，第一热池温度：88℃。进样
率：30个样/h，寻峰时段15 s～80 s。标准曲线类型：线性[6]。
7.3.3结果计算
X=c×250/m×1000
式中：X为样品中可溶性糖含量；
c为由回归曲线查得葡萄糖浓度，（mg/ml）；
m 为称样量，g；
250为定容体积，mL。
8 研究进展
费林试剂法虽然处理操作简单，需要的仪器设备少，但滴定条件要求苛刻，由于各种内外因素的影响，即使是熟练的技术人员，在实际的操作过程中，也很难保证一个试样的两次平行测定结果在方法规定的允许误差范围之内。但是原子吸收法弥补了这一不足，该法在处理获得样液之后，不采用滴定法，而是将样液直接与过量的碱性铜盐反应，使产生沉淀，然后取上层清液用原子吸收分光光谱仪测定剩余铜含量，通过标准曲线计算水果蔬菜中可溶性糖含量，该方法简单易行。
随着科学技术的不断进步，人们开始采用气相色谱，液相色谱等精密仪器来定性及定量测定可溶性糖。一般的化学方法只能测定糖的含量，不能测定糖的组分。气相色谱法虽可测定糖的组成，但必须进行对糖进行衍生化才可测定，从而使检测步骤繁琐，且不可避免地引入误差。而使用高效液相色谱法是由于糖本身在紫外区无吸收，通常使用RID进行检测，但RID检测器灵敏度较低，而且受外界影响因素大。蒸发光散射检测器作为一种新型的通用型质量检测器，稳定性好，灵敏度高，无溶剂峰影响，弥补了HPLC 传统检测器的不足。
铜还原碘量法、费林试剂法、色谱法、蒽酮比色法[7-8]等这些方法的前处理耗时耗材，且逐个滴定，耗用很大人工物力，分析操作繁琐冗长，极大地限制了分析速度，批量检测尤其困难。连续流动仪作为新一代的分析仪器提供了较低的检出限，较宽的动态线性范围，进样、检测和数据处理全部自动化[9-10]，具有实验方法简单，耗材少，准确性高，重现性好，速度快，适于大批量检测等优点。
植物组织中可溶性糖含量的测定
九植物组织中可溶性糖含量的测定 一．实验目的 学习可溶性糖测定的蒽酮比色法 二．实验原理 植物在个体发育的各个时期，代谢活动也发生相应的变化，碳水化合物的代谢也不例外其含量也随之发生变化。了解可溶性糖含量的变化，在生理上和实践上都有重要的意义。本实验采用蒽酮比色法测定可溶性糖的含量。糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物.在低浓度时，625nm 的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。 三．实验用品 721型分光光度计分析天平研钵恒温水浴锅烧杯刻度试管大试管活性炭移液管漏斗酒精（80%） 葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成 500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。 蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。四．实验步骤 1.可溶性糖的提取 称取0.5g的新鲜植物（青菜）叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1
次，合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min,定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。 2.显色及比色 吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。 3.绘制标准曲线 取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、5、10、20、40、60、80μg。按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。 试剂（ml) 管号 1 2 3 4 5 6 葡萄糖标准液0 0.05 0.1 0.2 0.3 0.4 80%酒精 1.0 0.95 0.9 0.8 0.7 0.6 蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5 葡萄糖浓度（ug/ml) 0 10 20 40 60 80 4.计算样品中含糖量％ 设V为植物样品稀释后的体积（m L） C为提取液的含糖量(μg/ m L) W为植物组织鲜重(g) 则得计算式如下：
植物可溶性糖测定教案资料
植物可溶性糖测定
精品资料 植物可溶性糖(soluble sugar)测定:蒽酮比色法糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物。在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。 实验用品 721型分光光度计，分析天平，研钵，恒温水浴锅，烧杯，刻度试管，大试管，移液管，漏斗，玻璃棒，试管架，吸耳球，滤纸 试剂：活性炭，酒精（80%） 葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。 蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。 实验步骤 1.可溶性糖的提取：称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精 4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色 30min，定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。 2.显色及比色：吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢2
可溶性总糖、蔗糖和淀粉测定
蔗糖、可溶性总糖和淀粉联合测定 一、原理 CH2O+蒽酮试剂——蓝绿色物质，在含糖5-80μg显色稳定，重现性好，在620nm下测定消光值。稀碱与糖溶液共热时，可破坏还原糖，而蔗糖不被破坏；淀粉经酸水解后与蒽酮试剂显色。 注意：硫酸含水量、反应温度、显色时间均影响显色度，测定时应严格控制反应条件，使显色温度和时间与做标准曲线时一致。 二、仪器与试剂 仪器：分析天平（0.001g）、分光光度计、水浴锅、离心机（4000转/分）、离心管（10ml）、移液管（1、2、5、10ml）、容量瓶（50、100、1000ml）、试管 试剂：（1）蒽酮试剂：84ml浓硫酸+16ml蒸馏水=88%硫酸；0.15g蒽酮溶于100ml 88％硫酸（现配现用，棕色瓶中冷藏室内可存3-5天） （2）30％KOH：称取30g KOH，溶解后定容至100ml （3）9.2N高氯酸：741ml 12.4N的高氯酸定容至1000ml （4）标准蔗糖、葡萄糖溶液（1mg/ml）：取分析纯0.1000g溶于蒸馏水定容至100ml 三、测定步骤 1、茎、叶、柄中的可溶性总糖和淀粉提取 （1）准确称取烘干样品0.1000g置10ml离心管中，加蒸馏水6-7ml，置沸水浴中加热提取20分钟，取出冷却，离心5-10分钟（4000r/min），转移上清液于50ml容量瓶中，同样方法重复提取两次，合并上清液于50ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀（此为A液，供蔗糖和可溶性总糖测定）。 （2）向沉淀中加水4ml，加入2ml 9.2N高氯酸，沸水浴中提取20分钟；取出冷却，离心5-10分钟，其上清液转移于50ml容量瓶。再向沉淀中加水5ml，加入1ml9.2N高氯酸，沸水浴中提取20分钟；取出冷却，离心5-10分钟，其上清液转移于50ml容量瓶。然后用水洗沉淀1-2次，全部转移于容量瓶中，并定容至刻度，摇匀（此为B液，供淀粉测定）。 2、块根中的可溶性总糖和淀粉提取 （1）准确称取烘干样品0.1000g置10ml离心管中，加乙醇（80%）5ml，置80℃水浴中加热提取20分钟，取出冷却，离心5-10分钟（4000r/min），转移上清液于50ml容量瓶中，同样方法重复提取两次，合并上清液于50ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀（此为A液，供蔗糖和可溶性总糖测定）。 （2）向沉淀中加水4ml，加入2ml 9.2N高氯酸，沸水浴中提取20分钟；取出冷却，离心5-10分钟，其上清液转移于50ml容量瓶。再向沉淀中加水5ml，加入1ml9.2N高氯酸，沸水浴中提取20分钟；取出冷却，离心5-10分钟，其上清液转移于50ml容量瓶。然后用水洗沉淀1-2次，全部转移于容量瓶中，并定容至刻度，摇匀（此为B液，供淀粉测定）。
(整理)可溶性糖测定.
引言 可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖，是植物品质的重要构成性状之一，尤其是以果实为目的产品的植物，可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。对于鲜食品种，一般来讲，高糖中酸，风味浓，品质优；低糖中酸，风味淡，品质差。因此，可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中，是人体热量的最最主要来源，具有较高的营养价值。本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱-蒸发光散射法，及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。
1 蒽酮比色法 1.1 原理 糖在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物，颜色的深浅与糖含量有关。在625 nm波长下的OD值与糖含量成正比。由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化，故必须在反应后立即在同一时间内比色。 1.2 仪器与材料 1.2.1实验仪器 分光光度计，电炉，铝锅，电子天平，20ml刻度试管，刻度吸管5ml 1支、1ml 2支，漏斗。1.2.2实验试剂 （1）蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g，溶于50ml乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。 （2）浓硫酸（比重1.84）。 1.2.3实验材料 植物叶片。 1.3 实验方法 1.3.1标准曲线的制作 取20ml刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。 表1 各试管加溶液和水的量 管号 0 1、2 3、4 5、6 7、8 9、10 100μg/ml蔗糖液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 (ml) 水(ml) 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蔗糖量(μg) 0 20 40 60 80 100 然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml，在恒温下放置30min，显色。然后以空白为参比，在485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入0.5ml蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。 1.3.2可溶性糖的提取 取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取0.10～0.30g，共3份，或干材料。
植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定(优选.)
最新文件---------------- 仅供参考--------------------已改成-----------word文本 --------------------- 方便更改 赠人玫瑰，手留余香。 2.2 植物体内可溶性蛋白含量的测定 2.2.1材料 新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片（剪碎后各取0.5—1.0g） 2.2.2试剂 标准蛋白质溶液：用牛血清白蛋白配成含蛋白质100μg/的标准蛋白溶液; 90%乙醇；85%磷酸(W/V)；考马斯亮蓝G－250溶液 2.2.3仪器设备 分光光度计；量筒；研钵；烧杯；量瓶；移液管；具塞刻度试管；分析天平；恒温水浴； 2.2.4测定方法 0～100μg/ml标准曲线的制作：取六支试管，分别按下表数据配制0～100μg/ml血清白蛋白液1ml。准确吸取所配各管溶液0.1ml，分别放入10ml具塞试管中，加入5ml考马斯亮蓝G—250试剂，盖塞，反转混合数次，放置2min后，在595nm下比色，绘制标准曲线。
样品提取液中蛋白质浓度的测定：吸取样品提取液1.0ml，放入具塞试管中(每个样品设置两个重复)，加入5Ml考马斯亮蓝G－250溶液，充分混合，放置2min后在595nm下比色，记录吸光值，并通过标准曲线查得蛋白质含量。 结果计算：样品蛋白质含量(mg/g鲜重）=(C*V/a)/W 式中C－查标准曲线所得每管蛋白质含量（mg）； V－提取液总体积（ml）； a－测定所取提取液体积（ml）； W－取样量（g）。 3 结果分析 3.1 植物体内可溶性糖含量的测定 3.1.1可溶性糖标准曲线 表一：各试管中标准葡萄糖的吸光值 管号0 1 2 3 4 5 葡萄糖含量 0 40 80 120 160 200 （ug） 吸光度0 0.195 0.370 0.518 0.690 0.706
植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮法)
Ⅳ、植物组织中可溶性糖含量的测定（蒽酮法） 一、目的 掌握蒽酮法测定糖的原理和技术。 二、原理 糖类（包括单糖、双糖、寡糖）在浓硫酸存在下，脱水生成糠醛或羟甲基糠醛，然后蒽酮与糠醛或羟甲基糠醛经脱水缩合，生成蓝绿色的糠醛衍生物，颜色深浅与糖浓度成正相关。其反应式如下： 显色反应与反应温度、加热时间、反应系统中水和硫酸比例有关。本实验通过控制反应系统中水和硫酸比例，利用硫酸与水发生水合作用释放的热能，使反应系统自行升温而达到显色效果免去外加热步骤。 蒽酮法具有很高灵敏度，适用于糖的微量测定，且试剂简单，操作简便，因而得到普遍应用。 三、材料、仪器设备及试剂 1.材料：烘干材料粉末（过筛100目）或剪碎混匀鲜样品。 2.仪器设备: 分光光度计；电子分析天平；水浴锅；100ml容量瓶；试管；漏斗；剪刀；移液管；洗耳球等。 3.试剂及配制： 蒽酮试剂：称取蒽酮200mg溶于100ml浓硫酸中。该试剂不能久贮，宜用前配制。 100μg·ml－1 蔗糖标准母液：准确称取蔗糖100mg于烧杯加少量水溶解后，洗入 100ml容量瓶中定容至刻度。 四、实验步骤 1.蔗糖标准曲线制作 1.1取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～100μg蔗糖标准液 加入表中试剂后，向各管沿管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml，并立即摇动使混合均匀，置试管架上室温下显色，冷却后倒入比色杯，以0号管作空白对照，在620nm波长处，以多点校准总量法，制作标准曲线。 2.样品提取 称取干样品粉末100mg或剪碎混匀的鲜样品1g,放入试管中，加入蒸馏水10ml，置于沸水浴中提取20min，冷却后过滤入100ml容量瓶中，以热水冲洗残渣2～3次，一并滤入容量瓶中，待冷至室温，定容至刻度，即为样品待测液。 3.糖含量测定 吸取待测液0.2ml（含糖量30～80μg）,加入试管中，再加蒸馏水2.3ml，摇匀。随后沿试管壁迅速加入蒽酮试剂6.5ml,立刻摇动混合均匀，置于试管架上显色，冷却至室温后，以空白管作对照，在620nm波长处，按多点校准定量法测定待测管中提取液糖含量。 五、结果计算
样品中可溶性糖的测定
样品中可溶性糖的测定 一、目的通过对样品中可溶性糖的测定，初步掌握利用紫外-可见分光光度计进行定量的测定方法和仪器使用技术。 二、原理可溶性糖的测定方法有很多，本实验采用蒽酮比色法。在强酸条件下，蒽酮与可溶性糖（包括还原性糖和 非还原性糖）作用生成蓝绿色糖醛衍生物，该蓝绿色颜色深浅与含糖量成正比，可在625nm下进行比色测定。 三、仪器用具和试剂 仪器用具：分光光度计、试管、移液管、离心机等。 试剂：蒽酮：100mg蒽酮溶于50ml浓H2S04（化学纯）中，当天配制当天使用。 蔗糖标准液（1mg/ml已配制好）：精确称取0.1000g蔗糖（分析纯），在小烧杯中加水溶解，定容至 100ml，加2-3滴浓H2S04，该溶液可长期保存。 四、测定方法 1．样品处理方法： 将水样放入离心管中，10，000rpm离心2min后，准确吸取1ml作为待测样品，每个样品重复一次。 若是植物样品，则取干粉末样品0.05~0.1g左右, 放入塑料小试管中，加6-8ml蒸馏水，在沸水浴中煮沸20分钟，取出冷却，3500转/分离心10分钟，取上清，重复提取2次，收集上清，用蒸馏水定容至50 ml，作为待测样品，每个样品重复一次。 2．标准曲线的配制：准确吸取1mg/ml的蔗糖标准液5ml，加水定容量50ml，得到浓度为0.1mg/ml蔗糖 同时取待测液1.0ml，加蒽酮4.0ml，在40℃水浴中显色10-15分钟。（注：各管在加入蒽酮试剂时要迅速，加完后用力振荡1-2分钟。） 3.1 Cary分光光度计：打开分光光度计，机器预热5-10分钟： 打开计算机，双击Carywin进入Cary软件包主菜单；双击Concentration图标，进入操作界面，单击Setup进行参数设置: 仪器参数：分析波长：625nm; 狭缝：2.0nm; 丫轴读值：Abs 标准曲线参数：浓度单位：mg/ml；个数：6; 浓度值：将计算所得值填入; 待测样品参数：个数：20（多设，预防不够） 设置完毕，单击OK，退出Setup，当右侧出现红色625nm，则表明仪器已准备好。 4．样品测试：将空白加入参比池和样品池，击Setup下方Zero键，出现提示画面，击OK，测试完成后，可发现左侧吸光值变成0，此步为校准调0。然后击Start键，出现提示加入标样1的画面，因为空白即标样1，因此击OK读数，读数完再击Read键，根据提示，依次测完0-5个标样。标准曲线测试完毕后，仪器会自动显示标准曲线，若标准曲线相关系数>95%，则仪器认可该标准曲线，会弹出窗口，要求测试样品，操作同上，按Read键即可，若标准曲线相关系数<95%，则仪器会显示该标准曲线不合格，可通过Recalculate键删除1-2个标准样品，重新校正标准曲线，或者重新配制标准溶液。 5．测试完成后，退出Carywin, window95，关分光光度计，关计算机，取出比色皿清洗干净。 画出标准曲线，求出待测样品中可溶性糖的含量。水样可溶性糖的含量（%）=c * 100/ (水样体积ml*103) 固体可溶性糖的含量（%）=c*v * 100/ (w*103) C 为查标准曲线得到的糖浓度；V为50(总体积)/1.0（反应体积）；w为质量。 注：【1】离心机在使用时，样品需要对称放置，如果加样一致，可以省去配平，否则需要进行平衡样品，尤其是高速离心时。使用步骤：开启电源，将转速调至3500转/分（已设置好，不需要调整），按离心下启动键，启动离心机，然后按住定时下自动键，当分钟显示为10min时松手，离心机将自动于3500转/分下离心10分钟，离心完成后，按电源键即关机。如果中途想终止离心，按离心下停止键即可。【2】：本比色要求含糖在20-80ppm范围内较适宜。若吸取得2ml待测液比色后不在此范围，则可将样品与溶液体积改变，重新测定。【3】：所有比色试管加蒽酮试剂后，最好同时间摇动，然后同时置水浴中加温10分钟，以免产生误差.
实验8-植物组织中可溶性糖含量的测定(蒽酮比色法)
实验方案 一、实验目的 通过实验，掌握测定萝卜品质的方法 （一）萝卜外部形态的测定 1、实验材料 取鲜样3个∕小区 直尺、蒸馏水、笔、记录本、吸水纸 2、实验方法 ．用自来水将各组萝卜洗净后，再用蒸馏水洗涤，擦干表面水分．每个小区取3个重复，用电子天平称量每株的鲜重，用直尺测量植株的茎长、茎粗、叶长，取平均值作为指标值 实验(二) 植物体内可溶性糖含量的测定（蒽酮法） 一、实验目的 了解蒽酮法测定可溶性糖含量的原理；掌握分光光度计的使用二、实验原理 糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。不同载培条件，不同成熟度都可以影响水果、蔬菜中糖类的含量。因此对水果、蔬菜中可溶性糖的测定，可以了解和鉴定水果、蔬菜品质的高低。 蒽酮比色定糖法是一个快速而方便的定糖方法，在强酸性条件下，蒽酮可以与游离的或多糖中存在的己糖、戊糖及己糖醛酸（还原性和非还原性）作用生成蓝绿色的糖醛衍生物，其颜色的深浅与糖的含量在一定范围内成正比。蒽酮也可以和其他一些糖类发生反应，但显现的颜色不同。当存在含有较多色氨酸的蛋白质时，反应不稳定，呈现红色。上述特定的糖类物质，反应较稳定。该法特点：灵敏度高，测定量少，快速方便。 三、材料、仪器及试剂
1.材料：植物种子、白菜叶、柑桔 2.仪器：分光光度计；恒温水箱；20ml具塞刻度试管（3支）漏斗；100ml容量瓶；刻度试管；试管架；剪刀；研钵 3.试剂 （1）200μg/ml标准葡萄糖：AR级葡萄糖100mg，蒸馏水溶解，定容至500ml。 （2）蒽酮试剂：1g蒽酮，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，棕色瓶避光处贮藏； （3）浓硫酸 四、实验方法 1.葡萄糖标准曲线的制作 取6支20ml具寒试管，编号，按下表数据配制一系列不同浓度的标准葡萄糖溶液。在每管中均加入0.5ml蒽酮试剂，再缓慢地加入5ml 浓H2SO4，摇匀后，打开试管塞，置沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却至室温，在620nm波长下比色，测各管溶液的光密度值（OD），以标 2. 称取1克白菜叶，剪碎，置于研钵中，加入少量蒸馏水，研磨成匀浆，然后转入20ml刻度试管中，用10ml蒸馏水分次洗涤研钵，洗液一并转入刻度试管中。置沸水浴中加盖煮沸10分钟，冷却后过滤，滤液收集于100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，摇匀备用。 3.糖含量测定 用移液管吸收1ml提取液于20ml具塞刻度试管中，加1ml水和0.5ml蒽酮试剂。再缓慢加入5ml浓H2SO4（注意：浓硫酸遇水会产生大量的热！），盖上试管塞后，轻轻摇匀，再置沸水浴中10分钟（比色空白用2ml蒸馏水与0.5ml蒽酮试剂混合，并一同于沸水浴保温10分钟）。冷却至室温后，在波长620nm下比色，记录光密度值。查标准曲线上得知对应的葡萄糖含量（μg）。 五、结果计算 样品含糖量（g/100g鲜重）=查表所得糖含量（μg）×稀释倍数×100/样品重（g）×106 六、注意事项
还原糖和可溶性总糖
（1）试剂： 葡萄糖标准液：称取80℃烘至衡重的葡萄糖100mg，用蒸馏水定容至100mL，测定还原糖时不用稀释，测定总糖时再稀释10倍，即100μg/ml。 蒽酮试剂：蒽酮100mg溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸加30ml水中），贮于棕色瓶内冰箱保存，可使用2~3周。 3，5—二硝基水杨酸试剂：1g3，5—二硝基水杨酸，溶于20mL2mol/LNaOH溶液中，加50mL 蒸馏水，再加30g酒石酸甲钠，溶解后用蒸馏水定容至100mL。 盖紧瓶塞，勿使CO2进入。若溶液浑浊可过滤后使用。 （2）样品提取： 称取研碎样品0.5~1g放入刻度试管中，加入5~10mL蒸馏水（用80%乙醇更好），在80℃水浴中30min，3500转离心10min，上清液转入25ml容量瓶，洗净掺杂并定溶至刻度，该提取液用于测定还原糖和可溶性总糖。 （3）还原糖的测定 ○1测定还原糖的标准曲线： 试剂 1 2 3 4 5 6 7 1mg/ml葡萄糖标液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 （ml） 蒸馏水（ml） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0 3，5—二硝基水杨酸 2 2 2 2 2 2 2 （ml） 各试管摇匀，在沸水浴中加热5分钟，取出后立即放入冷水中，加蒸馏水定容至20mL，混匀。以1号管为空白调零，在540nm波长下比色。以吸光度为纵坐标，葡萄糖含量为横坐标，绘制标准曲线。葡萄糖含量按顺序分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2，单位mg。○2样品中还原糖含量的测定 吸取可溶性糖提取液2mL，置刻度试管中，加入2mL3，5—二硝基水杨酸试剂，与标准曲线同法测定。 ○3计算：还原糖含量=CV t/WV s×100%; 式中，C：从标准曲线上查得样品中还原糖含量（mg）；V t：样品中提取液总体积（mL）；V s：测定时取样体积（mL）；W：样品重（mg）。注意样品重是mg （4）可溶性总糖测定 ○1总糖标准曲线： 试剂 1 2 3 4 5 6 100μg/ml葡萄糖标液 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 （ml） 蒸馏水（ml） 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 蒽酮硫酸试剂（ml） 5 5 5 5 5 5 加蒽酮试剂时试管最好放在冷水中，并沿管壁加入，待全部加完后再混匀。将以上试管同时放入100℃水浴中准确加热10min，取出后冷却至室温后在620nm波长下测定吸光度。以吸光度为纵坐标，糖溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。糖溶液浓度按顺序分别为：0、20、40、60、80、100，单位μg ○2样品测定： 取提取液适当稀释（10~50倍）后取2mL测定，方法同标准曲线测定。 ○3计算结果： 可溶性总糖含量= CV t n/WV s1000×100%； 式中，C：从标准曲线上查得样品中葡萄糖含量（μg）；V t：样品中提取液总体积（mL）；n：：测定时取样体积（mL）；W：样品重（mg）；1000是换算系数。注意样品重是稀释倍数；V s mg
可溶性还原糖和总糖的测定
检测技术规范与标准方法 编号：HXSW/QC-001 修订：第 1 版第2次修改 还原糖和总糖的测定—3,5-二硝基水杨酸比色法起草：杨晓君日期：2013.10.27 批准：刘永垒日期：2014年1月17日 1 目的 建立统一的发酵液中还原糖和总糖的定性检测方法，确保检验方法的一致性、科学性和准确性 2 范围 适用于微生物中心实验室实验、生产发酵液中还原糖和总糖的检验 3 责任者 发酵工艺实验员负责检验 4 正文 4.1 原理 还原糖是指含有自由醛基或酮基、具有还原性的糖类。黄色的3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂与还原糖在碱性条件下共热后，自身被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在一定范围内，反应液里棕红色的深浅与还原糖的含量成正比，在波长为540nm处测定溶液的吸光度，查对标准曲线并计算，便可求得样品中还原糖的含量。 不具还原性的部分双糖或多糖经酸水解后可彻底分解为具有还原性的单糖。通过对样品中的总糖进行酸水解，测定水解后还原糖含量，可计算出样品的含量含量。由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以系数0.9。 4.2 仪器和试剂 4.2.1 仪器 分光光度计、电热恒温水浴锅、试管及试管架、容量瓶、移液器、量筒。 4.2.2 试剂 4.2.2.1 1mg/ml葡萄糖标准液 准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100ml容量瓶中，用蒸馏水定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。 4.2.2.2 DNS 试剂（3,5-二硝基水杨酸） 将6.3g DNS和262ml 2mol/LNaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml，贮于棕色瓶中，7-10天后使用。
植物中可溶性糖含量的测定
植物组织中可溶性糖含量的测定 在作物的碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有： 合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖 一、原理 糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。 该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。 糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620 nm，故在此波长下进行比色。 二、实验材料、试剂与仪器设备
植物可溶性糖测定
植物可溶性糖(soluble sugar)测定:蒽酮比色法 糖在硫酸的作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用，形成一种绿色的络合物。在低浓度时，625nm的OD值与糖含量成正相关。该实验方法简便，但没有专一性，对于绝大部分的碳水化合物都能与蒽酮反应，产生颜色。 实验用品 721型分光光度计，分析天平，研钵，恒温水浴锅，烧杯，刻度试管，大试管，移液管，漏斗，玻璃棒，试管架，吸耳球，滤纸 试剂：活性炭，酒精（80%） 葡萄糖标准溶液：称取已在80℃烘箱中烘至恒重葡萄糖100mg,配制成500mL溶液，即得每mL含糖为200μg的标准溶液。 蒽酮试剂：称取1g经过纯化的蒽酮，溶解于1000mL稀硫酸中即得。稀硫酸溶液由760mL 浓硫酸（比重1.84）稀释成1000mL而成。 实验步骤 1.可溶性糖的提取：称取0.5g的新鲜植物叶片，于研钵中加80%酒精4ml，仔细研磨成匀浆，倒入离心管内，置于80℃水浴中不断搅拌30min，离心10分钟(5000转/min)，收集上清液于10ml的刻度试管中，其残渣加2ml80%酒精重复提1次，合并上清液。在上清液中加0.5g活性炭，80℃水浴脱色30min，定容至10ml，过滤后取滤液(稀释10倍或20倍后)测定。 2.显色及比色：吸取上述糖提取液1mL，放入一干洁的试管中，加蒽酮试剂5mL混合之，于沸水浴中煮沸10分钟，取出冷却，然后于分光光度计上进行测定，波长为625nm，测得吸光度。从标准曲线上查得滤液中得糖含量（或经直线回归公式计算），然后再行计算样品中含糖百分数。 3.绘制标准曲线：取标准葡萄糖溶液将其稀释成一系列不同浓度的溶液，浓度分别为每mL含糖0、30、60、90、120、150、180μg。按上述方法分别测得其吸光度，然后绘制A625－糖浓度曲线，或进行直线回归求得直线方程。 试剂（ml) 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液 0 0.15 0.3 0.45 0.6 0.75 0.9 80%酒精 1.0 0.85 0.7 0.55 0.4 0.25 0.1 蒽酮-硫酸试剂 5 5 5 5 5 5 5 葡萄糖浓度（ul/ml) 0 30 60 90 120 150 180 样品中含糖量％：设V为植物样品稀释后的体积（m L）；C为提取液的含糖量(μg/ m L)；W为植物组织鲜重(g) 可溶性糖含量％＝( C×V)/(W×106) ×100% 可溶性糖(SS) 含量的测定: 根据赵世杰[20 ] 的方法。准确称取一定量新鲜叶片置于预冷的研钵内,加入5 mL 10 %三氯乙酸(TCA) ,于冰浴中研磨匀浆以4000 r/ min 离心10 min。吸取上清液2 mL(对照加2 mL 蒸馏水) ,加入2 mL 0.6 % TBA (用10 % TCA 配置) ,混匀物于沸水浴上反应15 min ,迅速冷却后再离心。取上清液于450 nm 波长处测定光密度。可溶性糖的浓度(mmol/ L) = 11.7D450 ,然后进一步换算成叶片可溶性糖含量,单位为μmol/ g ,FW。
实验二十一可溶性总糖的测定(蒽酮比色法)
实验二十一可溶性总糖的测定（蒽酮比色法） 一、目的 掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 二、原理强酸可使糖类脱水生成糠醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色，该物质在620 nm 处有最大吸收. 在10 -100ug 范围内其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30ug 左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 1 . 仪器 （1）分光光度计 （2 ）电子顶载天平 （3 ）三角瓶：50m1 X 1 （4 ）大试管：9 支 （5）试管架，试管夹 （6 ）漏斗，漏斗架 （7 ）容量瓶：50rnl X 2 （8 ）刻度吸管：1m1X3 ，2m1X1 ，5mlX1 （9 ）水浴锅 2 . 试剂 （1）葡萄糖标准液：l00ug/ml （2 ）浓硫酸 （3）蒽酮试剂:0.2g 蒽酮溶于100 ml 浓H2SO4 中当日配制使用。 3 . 材料小麦分蘖节。 四、操作步骤 1. 葡萄糖标准曲线的制作
取7支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液: 在每支试管中立即加入蒽酮试剂 4.0m1 ，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖玻璃球，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸lOmin 取出，用流水冷却，室温放置10min ，在620 nm波长下比色。以标准葡萄糖含量（ug）作横坐标，以吸光值作纵坐标，作岀标准曲线。 2. 植物样品中可溶性糖的提取 将小麦分蘖节剪碎至2mm以下，准确称取lg,放入50m1三角瓶中，加沸水25m1，在水浴中加盖煮沸10min，冷却后过滤，滤液收集在50m1容量瓶中，定容至刻度。吸取提取液2m1，置另一50m1容量瓶 中，以蒸馏水稀释定容，摇匀测定。 3 .测定 吸取lml已稀释的提取液于大试管中，加入 4.0ml蒽酮试剂，以下操作同标准曲线制作。比色波长 620nm，记录吸光度，在标准曲线上查出葡萄糖的含量（ug ）。 查表所得糖含量（ug ）乂稀释倍数 五、结果处理 查表所得糖含量Cug）乂稀释倍数心 植物样品含糖壘（%）=： 样品重（町xm% X10° 六、注意事项 1 .该显色反应非常灵敏，溶液中切勿混入纸屑及尘埃。 2 . H 2 SO 4 要用高纯度的。 3. 不同糖类与蒽酮的显色有差异，稳定性也不同。加热、比色时间应严格掌握。 七、思考题 1.用水提取的糖类有哪些? 2 . 制作标准曲线时应注意哪些问题？
实验一可溶性糖含量的测定——蒽酮法
实验十二胰岛素、肾上腺素对血糖浓度的影响 血糖是指血液中糖，由于正常人血液中糖主要是葡萄糖，所以一般认为，血糖是指血液中的葡萄糖。正常人空腹血糖浓度为4.4～6.7mmol/L（80～ 120mg/100ml）。 血糖是糖在体内的运输形式。全身各组织都从血液中摄取葡萄糖以氧化供能，特别是脑、肾、红细胞、视网膜等组织合成糖原能力极低，几乎没有糖原贮存，必须不断由血液供应葡萄糖。当血糖下降到一定程度时，就会严重妨碍脑等组织的能量代射，从而影响它们的功能。所以维持血糖浓度的相对恒定有着重要的临床意义。 血糖浓度的调节 血糖浓度能维持相对恒定是由于机体内存在一整套高效率的调节机制，精细地控制着血糖的来源与去路，使之达到动态平衡。 神经系统的调节作用 神经系统对血糖浓度的调节作用主要通过下丘脑和自主神经系统对所控制激素的分泌，后者再通过影响血糖来源与去路关键酶的活性来实现。神经系统的调节最终通过细胞水平的调节来达到目的。 下丘脑一方面通过内脏神经作用于肾上腺髓质，刺激肾上腺素的分泌；另
一方面也作用于胰岛α-细胞，使其分泌胰高血糖素；同时还可以直接作用于肝。三方面共同作用的结果是使肝细胞的磷酸化酶活化，使糖原分解加速；糖异生关键酶的活性增加，糖异生作用增加，从而使血糖浓度升高。 下丘脑还可通过兴奋迷走神经，使胰腺β-细胞分泌胰岛素，同时还可直接作用于肝，使肝细胞内糖原合成酶活化，促进肝糖原的合成；此外还抑制糖异生途径，促进糖的氧化和转化，总体上使血糖的去路增加，来源减少，最终达到使血糖浓度降低的目的。 激素 使血糖浓度降低的激素 :胰岛素 使血糖浓度升高的激素:胰高血糖素、肾上腺素、肾上腺皮质激素、生长素、甲状腺素 它们对血糖的调节主要是通过对糖代谢各主要途径的影响来实现的。 在激素发挥调节血糖浓度的作用中，最重要的是胰岛素和胰高血糖素。肾上腺素在应激时发挥作用，而肾上腺皮质激素、生长激素、甲状腺素等都可影响血糖水平，但在生理性调节中仅居次要地位。 胰岛素 使肌肉和脂肪组织细胞膜对葡萄糖的通透性增加，利于血糖进入这些组织进行代谢。 诱导葡萄糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶的合成，加速细胞内葡萄糖的分解利用。 通过使细胞内cAMP含量减少，激活糖原合成酶和丙酮酸脱氢酶系，抑制磷酸化酶和糖异生关键酶等，使糖原合成增加，糖的氧化利用、糖转变为脂肪的反应增加，血糖去路增快；使糖原分解和糖异生减少或受抑制，使血糖来源减少，最终使血糖浓度降低。 胰高血糖素 主要通过提高靶细胞内cAMP含量达到调节血糖浓度的目的。细胞内的cAMP 可激活依赖cAMP的蛋白激酶，后者通过酶蛋白的共价修饰改变细胞内酶的活性，即激活糖原分解和糖异生的关键酶，抑制糖原合成和糖氧化的关键酶，使血糖升高。 肾上腺素
GPX、APX、CAT、SOD、AsA、GSH、MDA、Proline、可溶性蛋白、可溶性还原糖、可溶性总糖测定方法
一、抗氧化酶活性测定（APX、GPX、SOD、CAT、Pro）参考《在同一提取系统 中同时测定5种抗氧化酶活性》 1、注意事项：在本提取系统中同时测定抗坏血酸专一性过氧化物酶（APX）、愈 创木酚过氧化物酶（GPX）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、可溶性蛋白共5个指标；所有操作过程必须在冰浴中完成，降低保护酶活性的损失；称量药品时可稍稍过量。 2、提取液及反应准备液配置：以下溶液1-7d内可用，4℃保存。 1mol/L HCl（100ml）：8.333ml浓HCl定容至100ml。 750mM（750mmol/L） H 2O 2 （100ml）：7.570mL 30%H 2 O 2 定容至100ml。 500mM H 2O 2 （100ml）：5.0464mL 30%H 2 O 2 定容至100ml。 10mM H 2O 2 （100ml）：2mL 500mM H 2 O 2 定容至100ml。 （1）配置500ml提取液所需试剂药品如下： 蒸馏水溶解后（终体积为450ml左右），0.1mM的HCl和NaOH调节pH至7.0，然后定容至500ml。 （2）500ml A液配置所需试剂药品如下： 蒸馏水溶解后（终体积为450ml左右），0.1mM的HCl和NaOH调节pH至7.8，然后定容至500ml。 （3）500ml B液配置所需试剂药品如下：
蒸馏水溶解后（终体积为450ml左右），0.1mM的HCl和NaOH调节pH至7.0，然后定容至500ml。 3、GPX反应液配置（100ml）：现用现配，24h内有效。 反应液：111ul愈创木酚用5ml乙醇溶解后加入1ml 500mM H 2O 2 ，用B液定 容至100ml。 4、APX反应液配置（100ml）：现用现配，24h内有效。 反应液：1ml 10mM H 2O 2 用B液定容至100ml； 30mM AsA：0.52836gAsA用B液定容至100ml。 5、SOD反应液配置（100ml）：现用现配，24h内有效。 反应液：0.0082gNBT和0.1995g蛋氨酸（甲硫氨酸）用A液定容至100ml。 0.1mM 核黄素溶液：0.00376gVB2用A液定容至100ml。 6、CAT反应液配置（100ml）： 直接使用B液即可。 7、可溶性蛋白反应液： G-250考马斯亮蓝：100mg考马斯亮蓝溶于50ml90%（V/V）乙醇，加入85% （质量浓度）H 3PO 4 100ml，再用蒸馏水定容至1000ml，常温下保存1个月。 8、样品提取 用长镊子取小麦整株地上部位迅速固定成长2-3cm的棒状并放入液氮中，直至取样过程结束后带回实验室-80℃下贮藏。 提取时，从液氮中取出样品，待液氮挥发干净后迅速称量然后放入预冷的研钵中磨碎后加入5ml提取液进一步充分研磨至匀浆，转移至10ml具塞刻度试管中，并分2次冲洗，3000r/min离心15min后上清液定容至10ml，取2ml离心管（每个重复2个）加入2ml上清液后12000r/min、4℃离心20min，4℃保存（2天内有效）。
植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定
植物体内可溶性糖和可溶性蛋白含量的测定 摘要：目的通过标准曲线的绘制，测定白菜、芹菜、菠菜中可溶性蛋白和可溶性糖的含量，了解可溶性糖和可溶性蛋白的测定方法。方法分别用蒽酮法和考马斯亮蓝染色法来测定植物体内可溶性糖和可溶性蛋白的含量。结论 关键词：白菜；芹菜；菠菜；可溶性蛋白含量；可溶性糖含量；蒽酮法；考马斯亮蓝染色法 1 引言 植物体内的可溶性糖和可溶性蛋白含量是重要的生理生化指标。 在作物的碳素营养中，作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 可溶性蛋白是植物体内氮素存在的主要形式，其含量的多少与植物的代谢和衰老有密切的关系，同时它与植物体维持渗透压抗脱水也有很大关系。 白菜是十字花科芸薹属叶用蔬菜，味道鲜美可口，营养丰富，素有“菜中之王”的美称，为广大群众所喜爱。芹菜属伞形科植物，富含蛋白质、碳水化合物、胡萝卜素、B族维生素、钙、磷、铁、钠等，同时，具有有平肝清热，祛风利湿，清肠利便、润肺止咳、降低血压、健脑镇静的功效。菠菜藜科一年生草本植物，菠菜含有丰富的维他命A、维他命C及矿物质，它对各种贫血症和糖尿病、肺结核、高血压、风火赤眼等诸多疾病可起辅助治疗作用。 2 材料与方法 2.1 植物体内可溶性糖含量的测定 2.1.1材料 新鲜的白菜、芹菜、菠菜叶片（剪碎后各取0.5—1.0g） 2.1.2试剂 葡萄糖标准溶液（200ug/ml)、蒽酮试剂 2.1.3仪器设备 分光光度计；分析天平；恒温水浴；试管；三角瓶；移液管；剪刀；玻璃棒；滤纸；研钵 2.1.4测定方法 样品中可溶性糖的提取：称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 ～1.0 g （或干样粉5～100 mg ），放入大试管中，加入15 ml 蒸馏水，在沸水浴中煮沸20 min，取出冷却，过滤入100 ml 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 标准曲线制作：取6 支大试管，从0～5分别编号，按下表加入各试剂。 试剂管号 0 1 2 3 4 5 200ug/ml葡萄糖标准溶液（ml）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水（ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 蒽酮试剂（ml） 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 葡萄糖量（ug）0 20 40 60 80 100
总糖含量的测定
实验二总糖含量的测定 一、目的： 1.掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。 2.学习植物可溶性糖的一种提取方法。 二、原理： 糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糖醛后，与蒽酮 (C 14H 10 O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在620 nm处有最大吸 收，在150 μg/ml范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。 这一方法有很高的灵敏度，糖含量在30 μg左右就能进行测定，所以可做为微量测糖之用。一般样品少的情况下，采用这一方法比较合适。 三、仪器、试剂和材料 1.仪器：电热恒温水浴锅，分光光度计，电子天平，容量瓶，刻度吸管等 2.试剂： (1)葡萄糖标准液：l00 μg/ml (2)浓硫酸 (3)蒽酮试剂：0.2 g蒽酮溶于100 ml浓 H 2SO 4 中。当日配制使用。 3.材料：淀粉 四、操作步骤 1.葡萄糖标准曲线的制作 取7支试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液： 管号 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖标准液（ml）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2 葡萄糖含量（μg）0 10 20 30 40 60 80 在每支试管中立即加入蒽酮试剂4.0m1，迅速浸于冰水浴中冷却，各管加完后一起浸于沸水浴中，管口加盖，以防蒸发。自水浴重新煮沸起，准确煮沸l0 min 取出，用冰浴冷却至室温，在620 nm波长下以第一管为空白，迅速测其余各管 吸光值。以标准葡萄糖含量（μg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，作出标准曲线。
2.植物样品中总糖的提取： 精确称取0.5g，置于50 ml三角瓶中，加水15 m1，盐酸10ml，沸水浴20min，定容至100ml，得提取液。取10ml滤液定容至100ml 3.测定 吸取1 ml已稀释的提取液于试管中，加入4.O ml蒽酮试剂，平行三份；空 平均值在标白管以等量蒸馏水取代提取液。以下操作同标准曲线制作。根据A 620 准曲线上查出葡萄糖的含量（μg）。 五、结果处理 C ×V总× D 样品含糖量（%）= ─────────────×100 W ×V测×106 其中：C——在标准曲线上查出的糖含量（μg）， V总——提取液总体积（ml）， V测——测定时取用体积（ml）， D——稀释倍数， W——样品重量（g）， 106——样品重量单位由g换算成μg的倍数 六、注意事项： 该法的特点是几乎可测定所有的碳水化合物，不但可测定戊糖与已糖，且可测所有寡糖类和多糖类，包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值，但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。 七、思考题： 1.在从山芋粉中提取总糖时，加入盐酸的目的是什么？ 2.简述蒽酮比色法测定植物组织中总糖含量的原理。