病理组织切片的制作
病理组织切片的制作
卢文丽吴中华方肇勤
（2007/01/04）
一、器材（按一小组，约4-6人）
眼科镊：直无勾10cm 、弯无勾10cm各5把；
组织镊；12.5cm 2把；
眼科剪：直尖10cm 4把；
解剖剪：cr/14，4把；
普通双面刀片：10片/盒×1盒；
染色架：5个；
染色缸：1000ml，14-15个；
切片盒：50片/盒×3盒或100片/盒×2盒；
37度、60度恒温箱：各1个；
磨砂载玻片：50片/盒×3盒；
盖玻片：100片/盒×2盒；
广口瓶：30ml或60ml×20个；
滴管及配套吸头：4个；
玻璃漏斗：φ90 3个；玻璃搅棒：2支
普通粗孔大张滤纸：20张；
φ90mm玻璃培养皿：4个；
中号普通毛笔：2支；
烧杯：500ml 、1000ml 各1个；
量筒：100ml、500 ml、1000 ml各1个；
组织切片机及配套刀片：4台；
摊片用水浴锅：2台；
生物切片石蜡：5盒，熔点：56-58℃；
电子天平：1台；
酒精灯：150ml，4台；
脱水篮：1-2个；
打火机、标签纸、铅笔各一，卷筒纸、乳胶手套、口罩、医用纱布足量。
二．试剂
苦味酸（2.4.6-三硝基苯酚）：30g/瓶×1瓶；
37%~40%福尔马林液：500ml/瓶×1瓶；
冰醋酸：AR，500ml/瓶×1瓶；
无水乙醇：AR，500ml/瓶×10瓶；
二甲苯：AR，500ml/瓶×10瓶；
hematoxylin苏木色素（苏木精）：10g/瓶×1瓶；
酸性品红（曙红丫水溶）：25g/瓶×1瓶；
碘酸钠：AR，500g/瓶×1瓶；柠檬酸：AR，500g/瓶×1瓶; 水合氯醛：AR，250g/瓶×1瓶;铵矾（ALNH4(SO4)2·12H2O）或钾矾（ALK(SO4)2·12H2O）：500g/瓶×1瓶
蛋白甘油（甘油/鸡蛋清=1/1）：50ml
中性树胶：100g/瓶×2瓶。若中性树胶过于粘稠，可与二甲苯按7/3的比例稀释。
蒸馏水：5000ml
三．实验步骤
（一）固定液、染色液的配置
（1）Bouin氏液
苦味酸饱和水溶液75ml
37%~40%福尔马林液25ml
冰醋酸5ml
苦味酸饱和溶液的浓度为100ml水中加1g苦味酸。
（2）Mayer苏木精液
苏木精1g
蒸馏水1000 ml
铵矾或钾矾50 g
碘酸钠0.2g
柠檬酸1g
水合氯醛50 g
将苏木精溶于蒸馏水内（需要时可微热），加入研细的明矾，摇震助溶（需要时再加温），明矾溶解后，依次加入碘酸钠、柠檬酸、水合氯醛等试剂。配制后即可供使用。
（3）曙红
曙红0.5~1g
蒸馏水100ml
混匀后过滤
（二）组织取材
取舌、胸腺、脾、胃、肝、十二指肠等6种脏器。
（三）固定与修块
上午：取组织块入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。
下午：修块，用双面刀片将组织块修剪成3~5mm3大小。
若中午取材，则晚上修快。具体修块方法如下表1：
（四）脱水与透明
在以下过程，要求经常晃动组织块，以保证组织块可以充分地与乙醇或二甲苯接触，在每一步骤之后，要充分滤干组织块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但要防止组织块干燥。全过程约需要4.5h（270min）。
1．75%乙醇50min
2．85%乙醇50min
3．95%乙醇（I）30min
4．95%乙醇（II）30min
5．100%乙醇（I）30min
6．100%乙醇（II）30min
7 1/2 二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20min
8．二甲苯（I）20min
9．二甲苯（II）10min（可依据透明效果而定）
透明效果的判断：如组织块颜色加深透明，二甲苯溶液颜色透明，即表明脱水效果很好；如脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。使用过的酒精或二甲苯倒入烧杯里以便回收。
（五）浸蜡、包埋与修蜡块
1．浸蜡：可在脱水与透明进行时，将60℃恒温箱打开，使大烧杯内的石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，可将脱水篮整个或包裹在纱布内的组织块转入充分溶解的石蜡里，于60℃恒温箱放置120分钟。
2．包埋：包埋有多种器具，比较简洁廉价的方法是采用纸盒。可在浸蜡的同时将纸盒做好，包埋时将60℃的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺序排列好，使切面朝下。我们建议，不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件一致，且以便读片和比较。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90℃左右热水上，包埋时蜡盒底部要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。组织包埋方法可参见表2。
3．修蜡块：待纸盒内蜡凝固后(若需要使蜡块迅速凝固，可将包埋好的蜡块置于4℃冰水混和物中)。将蜡块取出，用刀片将其修成梯形，通常蜡块大小视组织多少而定，为保证切片顺利，组织块与蜡块边缘之间的距离不得小于2mm。修剪下来的残蜡应回收，以便再用。
（六）切片
在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹匀，呈半干状为佳。
切片厚约4~8μm，通常厚约6μm，细胞小而密的组织如胸腺，可以切4~5μm，而细胞疏的组织，如下丘脑可切10μm。将切片在55℃左右水浴中展开，展开程度以带黄颜色的组织完全摊平为准。
用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，斜放在木架上，立即放入37℃烘箱中过夜，一般时间越长效果越好，以切片紧贴于载玻片上呈半透明状为佳。每个组织块捞片2张。
过夜后，将载玻片置于玻片架上，进行下面的实验。
（七）脱蜡、染色与脱水
取出玻片架后，应将玻片架倾斜，以使载玻片上的试剂流尽，然后用筒纸将玻片架和载玻片下缘的试剂吸干，以免影响其他试剂的浓度。全过程约需要50min。
1．脱蜡到水
（1）二甲苯（I）15分钟
（2）二甲苯（II） 15分钟
（3）100%乙醇2分钟
（4）95%乙醇（I）1分钟
（5）95%乙醇（II）1分钟
（6）蒸馏水浸洗1分钟
2．染色
（7）苏木精30秒钟
（8）自来水冲洗1分钟，但应注意不能用水直接冲在玻片上，以免冲走切片。（显微镜下观察效果）
（9）伊红（着色即可）10秒钟
（10）蒸馏水浸洗1分钟
3．脱水
（10）95%乙醇（I）1分钟
（11）95%乙醇（II）1分钟
（12）100%乙醇2分钟
（13）二甲苯（I）2分钟
（14）二甲苯（II）3~5分钟
（八）封片
将载玻片从玻片架上取下，滴加1~2滴中性树胶，用眼科镊夹住盖玻片的一角，轻轻盖上盖玻片，让中性树胶沿着盖玻片充分展开，之后倾斜载玻片，用筒纸将多余的中性树胶吸干，同时注意避免有气泡的产生，平放载玻片，室温下长期保存。
参考文献：
1.杜卓民主编.实用组织学技术[M].第2版,北京:人民卫生出版社,1998
2.[英]C. F. A卡林著,孔庆雷译[M].组织病理学和组织化学技术手册.北京:科学出版社,1982
附：
中医学综合实验病理组织切片制作时刻表
（1）组织取材、固定：第1天上午或中午
（2）组织修块、固定：第1天下午或晚上
（3）组织脱水、透明、浸蜡、包埋、切片：第2天全天
脱水、透明8:00-12:30 4.5h
浸蜡12:30－14:30 2h
包埋14:30-15:30 1h
修块16:00-17:00 1h
切片17:30-21:30 4h
烘片21:30至第3日早晨
（4）切片染色、封片：第3日
染色1个流程需要50min，染色完后即封片。
整个过程需要3天的时间。
组织病理切片以及HE染色
组织病理切片以及HE染色 （一）实验原理：苏木素-伊红染色（hematoxylin-eosin staining ，HE染色）能较好地显示组织结构和细胞形态，可 用于观察、描述正常和病变组织的形态学，而且HE切片可较长时间保存，被称为常规染色方法。 （二）实验步骤： 一、制作切片 1、取材、固定：取小鼠肾脏组织适当大小，并且放入盛有固定液的小瓶中保存。 2、组织的脱水、透明、浸蜡与包埋 组织固定后还需经过脱水、透明、浸蜡等过程才能制成蜡块，进行石蜡切片。脱水是指用某些溶媒置换组织内水分的过程。组织脱水后，必须经过一种既能与酒精相混合又能溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用，使石蜡浸入组织块。在此过程中，因组织块中的水分被溶剂所取代，组织块变得透亮，因此称之为透明。组织染色后也要进行透明。最常用的透明剂为二甲苯，处理时间为30min左右。 组织经透明后在溶化的石蜡内浸渍的过程称浸蜡。用其他浸
透剂（如火棉胶、碳蜡和明胶等）渗入组织内部的过程 称为浸透或透入。为使石蜡充分渗入组织块中，常需经过3小时的浸渍，期间需更换3次石蜡。一般用于浸蜡的石蜡熔点为52- 56Co 组织块经过浸蜡或浸透，用包埋剂（石蜡、火棉胶、碳蜡和树脂等）包起的过程称包埋，包埋后便制成含组织的块。这种包埋块可使组织达到一定的硬度和韧度，有利于切成薄片。石蜡包埋是病理日常工作中最常用的包埋方法。用于包埋的石蜡熔点一般为60C左右。但在有些情况下，如某些酶染色时，则需采用低温石蜡包埋，以保存组织内酶的活性。 3、切片、制片 石蜡切片常用的切片机有轮转式切片机和平推式切片 机，以前者为多用。切片厚度一般为3-5卩m切片时先将组 织片平摊于一块玻璃上，迅速滴加30%的酒精水溶液使组织片完全展开，再移入40C恒温热水器中。也可直接将组织切片移入40C的恒温热水器中，待组织片完全展开后将其贴附于载玻片上，经56-60C烤片30-60min后即可进行染色。 二、HE染色 1. 二甲苯脱蜡2X 10 min ;
病理科常规切片(HE切片)质量PDCA管理循环案例示范剖析
病理科常规切片（HE切片）质量PDCA管理循环案例示范病理切片质量的好坏关系到病理诊断质量和水平的高低，正确的病理诊断往往取决于准确的显微镜下观察，因此病理切片质量的好坏将直接影响诊断结果的准确性，甚至会带来错误的结果。一张好的病理切片与标本的固定、取材、脱水、包埋、切片、染色等环节有密切的关系。过去，我科一直严抓病理切片质量，每月都随机抽查30例常规切片进行质量评价，总体来说切片质量较高，基本达到诊断的要求。但是每月的切片质量检查或多或少总发现存在一些缺陷，如切片刀痕、裂隙、气泡、胶液外溢等。 目的：通过检查常规切片质量，发现存在影响切片质量的问题，查找原因，提高切片质量。 数据收集：参照《临床技术操作规范病理学分册》中的常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准（见表1），对今年1-7月常规病理切片进行质量分级评定（每月随机抽查30例常规切片，见表2），总的优级率87.1%，优良率97.6%，总体达标。 表1 常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准 优质标准满分（分）质量缺陷减分 组织切面完整，内镜咬检、穿刺标本切面数10 组织稍不完整：减1～3分；不完整： 减4～10分；未达到规定面数：减5 分 切片薄(3～5μm)，厚薄均匀10 切片厚(细胞重叠)，影响诊断：减6～ 10分；厚薄不均匀：减3～5分
切片无刀痕、裂隙、颤痕10 有刀痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊断： 减2分；有刀痕、裂隙、颤痕，影响 诊断：减5分 切片平坦，无皱褶、折叠10 有皱褶或折叠，尚不影响诊断：各减2 分；有皱褶折或折叠，影响诊断：各减 5分 切片无污染10 有污染：减10分 无气泡（切片与载玻片间 /盖片与切片、载玻片间）， 盖片周围无胶液外溢 10 有气泡：减3分；胶液外溢：减3分 透明度好10 透明度差：减1～3分；组织结构模糊： 减5～7分 细胞核与细胞浆染色对比清晰10 细胞核着色灰淡或过蓝：减5分红(细 胞浆)与蓝(细胞核)对比不清晰：减5 分 切片无松散，裱贴位置适当10 切片松散：减5分；切片裱贴位置不 当：减5分 切片整洁，标签端正粘牢，编号清晰10 切片不整洁：减3分；标签粘贴不牢： 减3分；编号不清晰：减4分 合计100 注：切片质量分级标准：①甲级片：≥90分（优）；②乙级片：75～89分（良）；③丙级片：60～74分（基本合格）；④丁级片：≤59分（不合格）
组织切片制作步骤
徒手切片法： 徒手切片法是指手持刀片将新鲜的或固定的实验材料切成薄片的制作方法。徒手切片法是指不需要专门的仪器设备，试样也不需要特殊的化学试剂处理，而直接将新鲜的或固定的材料(一般为木质化程度较低的植物)切成薄片的方法。 基本信息： 徒手切片前，应先准备好一个盛有清水的培养皿。在切片时，用左手的拇指与食指、中指夹住实验材料，大拇指应低于食指2～3mm，以免被刀片割破。材料要伸出食指外约2～3mm，左手拿材料要松紧适度，右手平稳地拿住刀片并与材料成垂直。然后，在材料的切面上均匀地滴上清水，以保持材料湿润。将刀口向内对着材料，并使刀片与材料切口基本上保持平行，再用右手的臂力（不要用手的腕力）向自身方向拉切。此时，左手的食指一侧应抵住刀片的下面，使刀片始终平整。连续地切下数片后，将刀片放在培养皿的水中稍一晃动，切片即漂浮于水中。当切到一定数量后，可在培养皿内挑选透明的薄片用低倍镜观察检查。好的切片应该是薄且比较透明、组织结构完整，否则要重新进行切片。 对经检查符合要求的切片，如果只作临时观察，可封藏在水中进行观察。若要更清楚地显示其组织和细胞结构，可选择一些切片进一步通过固定、染色、脱水、透明及封藏等步骤，做成永久玻片标本。 徒手切片技巧 如果不想切斜，要注意两点，一个是左手拿的露出来那截要短，
尽量只能连续切2刀的样子(一般是可以切4，5刀的），一个是切口一定要水平，同时右手的刀片也要水平，拉刀的时候保持在一个平面上（拉快点容易做到）。这是根和茎的切法，不过每次的量会有所减少。对于叶，有三种切法，一个是直接切；一个是卷成管状，当茎来切；还有就是用三层刀片夹起来。其中，第一种适合于裸子植物那种针叶，方法要领和上面说的差不多；第二种适合于比较软的叶片，要领是要卷的细，中间的洞不要太大（大了容易斜）；第三种适用于比较坚韧，硬的叶片，绝对要放在载玻片之类的地方，要用划的，凌空切会很不顺，容易切不断。还有一种特殊的方法是切成小块的先，再夹到萝卜里面（事先挖个洞或切条槽），再一起切，这个适用于全部，根茎叶，软的硬的均可（就是那种针叶不太好用它，我都切不好）。所以克服柔软就是要注意，想办法使它变厚变硬（对叶：卷，夹，或者垫玻璃；对根茎，夹，或者用左手捏紧一点，捏上面一点，使它不会晃）。至于弯曲，我觉得不用太在意，要么舍弃掉这一段，要么用手压紧，关键只是上面要平。还有，如果切含有楞或者有叶脉的部分，一定要从这些地方开始切，先切硬的部分（朝向刀口）。平时切两到三层差不多，一层的细胞会破损，有空洞；这样也比较适合染色。 徒手切片的优缺点 徒手切片是用手持双面刀片或剃刀，将新鲜材料或预先固定好的材料（切前水洗）切成薄片，不经染色或经简单染色后，用水封片作临时装片观察。徒手切片法的优点是不需要复杂的设备，方法简便，制片迅速，而且能观察到植物组织的自然色泽和活体结构，常用于研
病理组织切片的制作过程
病理组织切片的制作过程 1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下： (1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。 (2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm 即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。 (3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。 (4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。 (5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。 (6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。 (7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。 2．固定 (1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。 (2)注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入内部，或需要对整个脏器或整个动物体进行固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入血管，经血管分支到达整个组织和全身，从而得到充分的固定。 (3)蒸汽固定法：比较小而厚的标本，可采用锇酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片，则应在血片未干燥前采用锇酸或甲醛蒸汽接触固定。 最常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。
病理学切片诊断依据
组织切片 拿到切片后，首先就是肉眼观察，这一步很重要，往往可以作出比较明确的诊断，例如主动脉粥样硬化、淋巴结转移性癌、支气管鳞状上皮化生、胃消化性溃疡、急性蜂窝织炎性阑尾炎，即使不能作出诊断，也可以确定组织来源。镜下观察前，一定要调整好瞳间距、光亮度等，作好一切准备工作，然后从低倍镜开始，一步一步深入。往往可以在10倍镜时完全作出诊断，而40倍镜仅是作为补充诊断。 诊断依据需要写出能够判断为改种病症的相关变化，不要求全部写出，但应当尽量全面。所有癌的诊断中都必须有对于肿瘤细胞异型性的详细描述。 高血压所引起的原发性颗粒性固缩肾与慢性肾小球肾炎所引起的继发性颗粒性固缩肾，无论是在大体标本还是组织学观察都无法区分，故观察到相关变化可以诊断为两者中的任何一者。 NO.04肝脂肪变性 诊断依据： 1.部分肝细胞胞质内出现大小不等的圆形空泡； 2.某些空泡较大，将细胞核挤压变扁且位于细胞边缘，酷似脂肪细胞； 3.细胞核的结构仍属正常。 NO.09肾贫血性梗死 诊断依据： 1.梗死区的肾小球、肾小管轮廓隐约可辨，梗死区中心肾小球的细胞核均已溶解消失； 2.近梗死区边缘尚可见浓染、缩小的细胞核(核固缩)； 3.梗死部分呈楔形； 4.梗死区与非梗死区交界处，有大量白细胞浸润及充血现象。 NO.12肉芽组织 诊断依据： 1.镜下可见大量新生毛细血管，内皮细胞较大，细胞核着色较淡，管腔大小不一，常含有红细胞，血管多向表面呈垂直方向走行； 2.新生毛细血管周围有较多的成纤维细胞，呈星形或梭形，细胞核为椭圆形、淡染； 3.尚可见一些巨噬细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和浆细胞浸润； 4.表面覆盖少量的纤维素，其中混有少量中性粒细胞。 NO.13支气管鳞状上皮化生 诊断依据： 1.部分支气管粘膜被覆的假复层纤毛柱状上皮为复层鳞状上皮所取代，靠近基底膜有柱状多角形细胞，靠近腔面有鳞状上皮； 2.支气管壁有慢性炎性细胞浸润。 NO.14急性肺淤血水肿 诊断依据： 1.肺泡间隔的毛细血管以及肺间质内的小静脉均扩张和充盈血液； 2.部分肺泡腔内有均匀红染的水肿液及少量巨噬细胞；
石蜡切片的制作过程(精)
石蜡切片的制作 目的要求:了解生物制片的基本原理和方法;了解石蜡切片制作的基本过程;学会制作石蜡切片。 一、生物制片的基本原理 (一生物制片的目的与发展概况 生物制片是研究生物有机体微观结构的基础方法,其目的是提供在显微镜下以适度的样品,有效地对其进行形态和功能观察研究。 (二生物制片的方法 当我们研究生物体的组织或细胞时,除了某些生物体可用相差显微镜或偏光显微镜等方法达到观察目的外,其余大部分生物体,因为组织较厚,光线不易透过内部等关系而达不到观察的要求,为了达到此目的,就必须将生物体的组织切成薄切片或不切片,经过一系列处理,使光线易于透过,即可进行观察。因此,根据标本的制作方法分为切片法和非切片法两种。这些方法,各有优缺点,应该适当的配合使用,才能获得比较理想的结果。 1.切片法 (1切片法的种类 切片法就是利用锐利的刀具,将器官组织或幼小个体分割成许多极薄的薄片,而制成切片标本的一种方法。切片法在切成薄片以前必须设法使组织内渗透某种支持物质。使组织保持一定的硬度,然后利用切片机进行切片。根据所用支持物质的不同切片法又可分为石蜡切片法、火棉胶切片法、冰冻切片法、炭蜡切片法等类型。现分述如下: ⅰ.石蜡切片法
石蜡切片法即用石蜡作为支持剂进行切片的方法。石蜡切片法是一般组织学、病理学等常规制片方法,因此用得最多,它有很多优点:比较省时间,容易操作,可切成极薄的切片(4um 以下,能制作连续切片,组织块可包埋在石蜡中永久保存。缺点是只能用于较小的组织块,较大的组织块不易切好,容易破碎,组织在脱水透明过程中产生收缩并易变脆。制片时间太长。 ⅱ.火棉胶切片法 火棉胶切片法是以火棉胶为支持剂进行切片的方法。此法的优点是包埋过程中不用二甲苯及石蜡,不经高温,可避免组织收缩及变脆,适于精细材料(如脑的切片,也引火棉胶有韧性切片不知有折卷或破裂,适宜于大块组织及多空洞的组织(脑、眼球,硬度较高的组织(骨、肌腱。缺点:手续麻烦、费时间,切片不能切薄,起码在10um以上,不能作连续切片,因此,在生物制片技术上已经不经常采用。 ⅲ.冰冻切片法 冰冻切片法是利用液体二氧化碳或其它药剂(如氯乙烷在变成气体时吸收大量的热使组织迅速结成冰块而后再进行切片的方法。目前国内外用半导体致冷调节器来代替二氧化碳的冰冻,冷冻速度更快更为方便。 冰冻切片法的优点是较前两种方法简便,组织不经脱水、透明、包埋等手续即可切片,因而可节省很多时间,十分钟左右即能制成切片。常用于临床病理手术诊断,银材料不经溶媒处理就可直接进行切片,材料不受试剂的激烈刺激及温度影响,所以组织没有显著的收缩,细胞形态不致有大的改变,也引冰冻切片不需有机溶剂处理,所以能保存脂肪、类脂等成分,所以冰冻切片法常用于组织化学,尤其是神经组织,临床病理学等方面的研究。 新鲜的组织或已经固定的组织,经短时间处理后即可进行切片。用任何固定及处理的材料均适合冰冻切片,但一般的经验用福尔马林固定的材料最适合冰冻切片,而用酒精、甘油保存的材料必须充分水洗后才易于冰冻,否则不易切成完整的切片
病理组织切片制作
实验四病理组织切片制作 一、实验目的 组织切片技术是病理学中不可缺少的一个组成部分。通过实验，能够使学生了解和掌握病理组织切片的基本方法之一，即石蜡包埋的组织切片法。 二、实验原理 根据病变及检查的要求，合理采集病料，经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋后进行切片，在进行染色得到结果。固定是用化学药品把组织原来的结构保存下来，以便观察。脱水是除去组织中的水分，以利于透明和浸蜡。组织的透明是便于透蜡包埋。包埋的是使石蜡透入组织内部，把软组织变为适当硬度的包埋块，以便切成薄片。最后使用切片机，将包埋块中组织切成薄片。 三、主要仪器及试材 已固定好病料，石蜡，手术刀，手术剪，镊子，脱水框，染色缸，梯度脱水酒精和透明剂一套，烘箱，切片机，毛笔，玻片，蛋白甘油，染色架，酒精灯，三角架，大烧杯，温度计，火柴，切片刀，记号笔或铅笔。 四、实验方法与步骤。 （一）固定 采取的病理材料必须立即放入10％福尔马林固定液中。 （二）脱水 组织经固定后，尚含有多量水分，而水与透明剂苯、石蜡根本不相融合。必须先把组织中的水分除去。但脱水剂必须是与水在任何比率下均能混合的液体，脱水剂常兼有硬化组织的作用。最常用的脱水剂为酒精、丙酮等。 1．酒精沸点78．4℃，为最常用的脱水剂。脱水能力强，并能使组织硬化，能较好地与二甲苯透明剂相混合。最终结果表明，只要脱水环节处理好，都会得到好的切片。脱水的程序为70％一80％一95％一100％。各级酒精2—4小时，视材料的大小、厚薄而定。100％酒精有硬化组织的作用，时间不宜太长，一般不超过3小时。脑组织、脂肪组织或疏松结缔组织，脱水时间要适当延长。 2．丙酮沸点为56℃。脱水作用比乙醇强，但对组织块的收缩较大，主要用于快速脱水或固定兼脱水。脱水时间l一3小时左右。 （三）透明 透明对组织有脱酒精及透明两种作用。当组织中全部为透明剂占有时， 光线可以透过，组织可呈现不同程度的透明状态，此种现象称为透明，具有这种作用的试剂称为透明剂。常用的透明剂有： 1．二甲苯是最常用的良好透明剂，不影响各种染色。二甲苯易溶于酒精，能溶解石蜡，也是封固剂，不吸收水，透明能力强，易使组织收缩、变脆，故组织块在二甲苯中不宜久留，特别对小动物组织材料必须严格控制好(各种器官的透明差异很大)，通常为半小时到1小时左右。 当二甲苯透明时必须持组织放在专用二甲苯皿器中，这样可减少透明时间，有利于组织透明彻底，在换组织块透明时候，所用的镊子等器具必须干燥，不得将水滴混入二甲苯中，因水滴易被组织吸收而影响透明程度，潮湿天气更应引起注意。2．冬青油（水杨酸甲酯）为无色油样液体，易溶于醇、醚及冰醋酸，难溶于水。透明速度较慢，数小时或数天。一般经无水乙醇脱水后再入冬青油。 （四）浸蜡（透蜡） 组织经脱水透明后要用石蜡等支持剂透入内部，并除去组织中的透明剂，把软组织变为适当硬度的蜡块，以便切成切片。
病理科常规切片(HE切片)质量PDCA管理循环案例示范教学资料
病理科常规切片(H E 切片)质量P D C A管理循环案例示范
病理科常规切片（HE切片）质量PDCA管理循环案例示 范 病理切片质量的好坏关系到病理诊断质量和水平的高低，正确的病理诊断往往取决于准确的显微镜下观察，因此病理切片质量的好坏将直接影响诊断结果的准确性，甚至会带来错误的结果。一张好的病理切片与标本的固定、取材、脱水、包埋、切片、染色等环节有密切的关系。过去，我科一直严抓病理切片质量，每月都随机抽查30例常规切片进行质量评价，总体来说切片质量较高，基本达到诊断的要求。但是每月的切片质量检查或多或少总发现存在一些缺陷，如切片刀痕、裂隙、气泡、胶液外溢等。 目的：通过检查常规切片质量，发现存在影响切片质量的问题，查找原因，提高切片质量。 数据收集：参照《临床技术操作规范病理学分册》中的常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准（见表1），对今年1-7月常规病理切片进行质量分级评定（每月随机抽查30例常规切片，见表2），总的优级率87.1%，优良率97.6%，总体达标。 表1 常规石蜡包埋-HE染色切片质量的基本标准 优质标准满分 （分） 质量缺陷减分 组织切面完整，内镜咬检、穿刺标本切面数10 组织稍不完整：减1～3分；不完 整：减4～10分；未达到规定面数： 减5分 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢2
切片薄(3～5μm)，厚薄均匀10 切片厚(细胞重叠)，影响诊断：减 6～10分；厚薄不均匀：减3～5分 切片无刀痕、裂隙、颤痕10 有刀痕、裂隙、颤痕，尚不影响诊 断：减2分；有刀痕、裂隙、颤痕， 影响诊断：减5分 切片平坦，无皱褶、折叠10 有皱褶或折叠，尚不影响诊断：各减 2分；有皱褶折或折叠，影响诊断： 各减5分 切片无污染10 有污染：减10分 无气泡（切片与载玻片 间/盖片与切片、载玻片 间），盖片周围无胶液 外溢 10 有气泡：减3分；胶液外溢：减3分 透明度好10 透明度差：减1～3分；组织结构模 糊：减5～7分 细胞核与细胞浆染色对比清晰10 细胞核着色灰淡或过蓝：减5分红(细 胞浆)与蓝(细胞核)对比不清晰：减5 分 切片无松散，裱贴位置适当10 切片松散：减5分；切片裱贴位置不 当：减5分 切片整洁，标签端正粘牢，编号清晰10 切片不整洁：减3分；标签粘贴不 牢：减3分；编号不清晰：减4分 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢3
6树脂切片制作过程
树脂切片制作过程 一、实验仪器及试剂 1.器具 电子天平、70℃恒温箱、玻璃制刀机、半/超薄切片机、显微镜、包埋模、制刀用的玻璃条、镊子、刀片。 2.试剂 (1)固定剂：FAA (2)脱水剂：20%、40%、60%、80%、90%、95%、100%的乙醇；丙酮(3)树脂：Spurr树脂(4)染色剂：1%碱性品红二、实验步骤 1.取材和固定： 取样时所用的器具必须干净，刀、剪等必须锋利，在操作时尽量避免拉、锯、压等动作对组织细胞造成的机械损伤。一般样品块的大小约为1立方毫米，取材完成后立即放入固定液中，真空泵抽气两到三次，每次1-2min（注意不要让固定液沸出，如抽完后液体较少，可再补加固定液）。 2.脱水： 用50%、60%、70%、85%、95%、100%的乙醇分别浸渍固定的材料，每种浓度处理10～15min。 3.置换 (1)在管瓶中加入2ml无水乙醇和1ml丙酮，处理材料10min。 (2)向管瓶中追加1ml丙酮，处理材料10min。 (3)向管瓶中再追加2ml丙酮，处理材料10min。 (4)倾倒出管瓶中的无水乙醇和丙酮混合液，加入纯丙酮3次，每次10min。4.浸透 (1)在管瓶中加入1ml丙酮，向内滴入1滴Spurr树脂，1～2h。 (2)向管瓶中追加1至数滴Spurr树脂，使Spurr树脂的浓度逐渐提高，每滴加一次Spurr树脂，放置1～2h，共滴加0.3ml左右的树脂，使树脂浓度达到25%左右。 (3)用吸管吸去管瓶中0.5～0.8ml的丙酮和Spurr树脂的混合液，然后加入纯Spurr树脂0.5ml，使树脂浓度达到50%～60%左右，2～3h。 (4)用吸管吸去管瓶中的丙酮和Spurr树脂的混合液，加入0.5～0.8ml的Spurr树脂，2～3h。 (5)更换新配制的Spurr树脂1ml，过夜。(6)重复换树脂3次，每次12h。5.包埋与聚合 (1)先将恒温箱调至温度至70℃，包埋模事前烘干置干燥器中存放。 (2)在湿度小的房间里进行包埋操作。在包埋模的中放上已浸透的材料(用牙签不损伤样品地桃)，用滴管吸取新配制的Spurr树脂，并注满每个穴孔，用牙签拨样品，使样品按一定方位(有利修块、切片和观察)排列。做好记载(各穴孔中放的是什么样品)。 (3)聚合：将包埋样品的包埋模放入70℃恒温箱中聚合，8h后取出置干燥器中存放。多余的树脂可放在胶囊中或放在包埋模的穴孔中同样品一同聚合。 6.修块 用锉刀或铁砂皮磨样品块，使样品稍稍暴露，使待切部位呈方形或长方形，最后用刀片将样品块的磨面切平7.玻璃刀的制作 用玻璃制刀机先将玻璃条制成边长为25mm的正方块，然后再将每正方块制作成2把璃制刀。8.切片、贴片 (1)固定样品块和玻璃刀将样品块和玻璃刀固定在半薄切片机上，玻璃刀的避样品角约为5度，切片机装样品部位平放时，玻璃刀刀口与样品块处于同一高度。调节玻璃刀前后位置，使刀口接近样品块。 (2)荒切开动切片机，调节进刀距离和速度，让玻璃刀荒切样品块，使样品块的切面逐渐平整光滑起来。 (3)切片当样品块的切面平整光滑后便可正式切片。作为光镜观察用的半薄切片厚度一般控制在1-2μm左右。
病理组织切片的制作
病理组织切片的制作 卢文丽吴中华方肇勤 （2007/01/04） 一、器材（按一小组，约4-6人） 眼科镊：直无勾10cm 、弯无勾10cm各5把； 组织镊；12.5cm 2把； 眼科剪：直尖10cm 4把； 解剖剪：cr/14，4把； 普通双面刀片：10片/盒×1盒； 染色架：5个； 染色缸：1000ml，14-15个； 切片盒：50片/盒×3盒或100片/盒×2盒； 37度、60度恒温箱：各1个； 磨砂载玻片：50片/盒×3盒； 盖玻片：100片/盒×2盒； 广口瓶：30ml或60ml×20个； 滴管及配套吸头：4个； 玻璃漏斗：φ90 3个；玻璃搅棒：2支 普通粗孔大张滤纸：20张； φ90mm玻璃培养皿：4个； 中号普通毛笔：2支； 烧杯：500ml 、1000ml 各1个； 量筒：100ml、500 ml、1000 ml各1个； 组织切片机及配套刀片：4台； 摊片用水浴锅：2台； 生物切片石蜡：5盒，熔点：56-58℃； 电子天平：1台； 酒精灯：150ml，4台； 脱水篮：1-2个； 打火机、标签纸、铅笔各一，卷筒纸、乳胶手套、口罩、医用纱布足量。 二．试剂 苦味酸（2.4.6-三硝基苯酚）：30g/瓶×1瓶； 37%~40%福尔马林液：500ml/瓶×1瓶； 冰醋酸：AR，500ml/瓶×1瓶； 无水乙醇：AR，500ml/瓶×10瓶； 二甲苯：AR，500ml/瓶×10瓶； hematoxylin苏木色素（苏木精）：10g/瓶×1瓶； 酸性品红（曙红丫水溶）：25g/瓶×1瓶； 碘酸钠：AR，500g/瓶×1瓶；柠檬酸：AR，500g/瓶×1瓶; 水合氯醛：AR，250g/瓶×1瓶;铵矾（ALNH4(SO4)2·12H2O）或钾矾（ALK(SO4)2·12H2O）：500g/瓶×1瓶 蛋白甘油（甘油/鸡蛋清=1/1）：50ml 中性树胶：100g/瓶×2瓶。若中性树胶过于粘稠，可与二甲苯按7/3的比例稀释。 蒸馏水：5000ml
组织病理切片的制作过程
组织病理切片的制作过程 1．取材组织取材的法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下： (1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。 (2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。 (3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。 (4)规取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规化取材。 (5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。 (6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。
(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。 2．固定 (1)小块组织固定法：这是最常用的法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。 (2)注射、灌注固定法：某些组织块由于体积过大或固定液极难渗入部，或需要对整个脏器或整个动物体进行固定。这时宜采用注射固定或灌注固定法。将固定液注入血管，经血管分支到达整个组织和全身，从而得到充分的固定。 (3)蒸汽固定法：比较小而厚的标本，可采用锇酸或甲醛蒸汽固定法。如血液涂片，则应在血片未干燥前采用锇酸或甲醛蒸汽接触固定。 最常用的固定液有10%甲醛固定液和95%乙醇固定液。 3．脱水透明标本经过固定和冲洗后，组织中含有较多的水分，必须将组织块的水分置换出来，这一过程叫做脱水。无论是用蜡切片，还是用火棉胶切片，都必须除去组织中所含水分，因含水组织与蜡、火棉胶等包埋材料不相容，常用的脱水剂为一系列不同浓度的乙醇。 脱水的步骤是：80%、90%、95%、100%各种浓度乙醇2小时，此过程可用脱水机自控完成。 丙酮也是一种脱水能力很强的脱水剂，但因其脱水能力很强，对组织有剧烈收缩作用，在制作科研、教学切片时一般不用该试剂。因乙醇、丙酮等不溶于蜡，还要经过一个能溶于蜡的溶剂替代过程称为透明。常用的透明剂有二甲苯、三氯甲烷、水酸甲酯等。 4．浸蜡、包埋
电镜切片样品制作步骤知识讲解
A 悬浮培养的细胞、细菌、血细胞、精子等； 细胞使用PBS或无血清培养基离心漂洗1~2次以去除血清，离心转速依据不同离心机、不同样品自定，总时间控制在5min内；细胞团根据预设浓度在适量2.5%戊二醛吹悬，滴加在预先置入青霉素小瓶中的托盘，4℃静置沉降2~3天，在托盘周围加入PBS，以防止样品干燥。 B贴壁培养的细胞： 在培养皿中预先加入盖玻片，使细胞贴附于盖玻片上；PBS或无需请培养基漂洗后，放置在培养板室温固定1h，4℃3 h，注意放置干燥，自行转入青霉素小瓶中，加满PBS送检。SEM标本处理必须使用玻璃容器，需明确所用盖玻片尺寸可以放入青霉素瓶。 C组织取材 样品观察表面可达8~10mm2,高度小于5mm左右； 样品表面在固定前必须清洁：使用生理盐水或PBS冲洗掉表面的灰尘以及不需要观察的蛋白、粘液等。能够明确标识标本的观察面。消化道、呼吸道、血管、生殖器官、泌尿等官腔内表面，尤其要注意先清洗再固定。 如需要观察脏器内结构，应依照不同的实验目的，决定目的脏器是否需要灌注清洗； 固定2.5%戊二醛浸没标本，室温1h，4℃固定3h以上，换PBS送检。 附：2.5%戊二醛的配制 Step 1: 0.2M磷酸缓冲液的配制： --------------------- 磷酸二氢钠（NaH2PO4.H2O） 2.6克 磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)29克 双蒸馏水加至500毫升 pH调至7.4 Step 2: 戊二醛固定液的配制： --------------------- 25% 戊二醛1ml 双蒸馏水4ml 0.2mol/L磷酸缓冲液5ml 戊二醛最终浓度 2.5% pH值7.3-7.4
病理切片的制作过程
1.7.1 修整组织 将手术切取的乳腺肿瘤切成一个平整面，各组织块不宜太大，以便固定剂穿透和组织脱水等操作，通常以10 mm×10 mm×3mm或5mm×5mm×3mm为宜。找到不同的部位切取2块，以备后用。 1.7.2 组织洗涤 组织经修整后，组织中的福尔马林等必须冲洗干净，尤其是含有重金属的物质存在。因为残留在组织中的福尔马林，有的不利于染色，有的产生沉淀或结晶影响观察，所以组织修整后应冲洗12h左右。 1.7.3 组织脱水 组织经洗涤后，组织中含有大量水分，由于水与石蜡不能互溶，所以必须将组织中的水分除去。 80%乙醇溶液：2h 95%乙醇溶液:1h 95%乙醇溶液:1h 100%乙醇溶液:30min 100%乙醇溶液:30min 1.7.4 组织透明 由于乙醇与石蜡不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蜡，所以脱水后还要经过二甲苯以过渡。当组织中全部被二甲苯占有时，光线可以透过，组织呈现出不同程度的透明状态。 二甲苯Ⅰ：30min 二甲苯Ⅱ：10min 1.7.5 组织浸蜡 浸蜡的目的是除去组织中的透明剂（如二甲苯等），使石蜡渗透到组织内部达到饱和程度以便组织包埋。浸蜡时间根据组织的透蜡时间较长，需3h左右。浸蜡应在恒温箱内进行，并保持箱内温度在55℃左右，注意温度不要过高，以免组织发脆。 石蜡Ⅰ：1h
石蜡Ⅱ：1h。 石蜡Ⅲ：1h 1.7.6 组织包埋 将经过透蜡的组织连同熔化的石蜡，一起倒入容器内，然后立即投入冷水中，使其立刻凝固成蜡块的过程。包埋时，将纸盒放在温箱旁边，用镊子夹取组织平放于纸盒底部，，再用温镊子轻轻拨动组织，从温箱中取出盛放纯石蜡的蜡杯，沿壁倒入包埋用的纸盒中，速度要慢。待石蜡凝固（约30min）后放入冰箱保鲜层内以备后用。包埋时应根据组织材料、切片厚度、气候条件等因素，选择不同熔点的石蜡，新的石蜡一般要熬顿几次，以免石蜡固定后有气泡，影响切片。用于包埋的石蜡的熔点在50~60℃之间。 1.7.7 组织切片 （1）从冰箱里拿出蜡块，进行修快 （2）将已固定和修好的石蜡块台木装在切片机的夹物台上。 （3）将切片刀固定在刀夹上，刀口向上。 （4）摇动推动螺旋，使石蜡块与刀口贴近，但不可超过刀口。 （5）调整石蜡块与刀口之间的角度与位置，刀片与石蜡切片约成15度左右。 （6）调整厚度调节器到所需的切片厚度，先调约为25um，待切平后改为5um。 （7）一切调整好后方可以开始切片。此时右手摇动转轮，让蜡块切成蜡带，左手持毛笔将蜡带提起，摇转速度不可太急，通常以40-60r/min。 （8）切成的蜡带到10-20cm长时，右手用另一支毛笔轻轻地将蜡带挑起，以免卷曲，并牵引成带，平放在蜡带盒上，靠刀面的一面较光滑，朝下，较皱的一面朝上。 （9）感觉效果较好的蜡片一小段，用单面刀片切取，再放入约43℃的水浴锅中展片，观察切片是否良好。 （10）切片工作结束后，应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着的石蜡，把切片机擦拭干净妥为保存。 1.7.8 贴片
电镜切片样品制作步骤
扫描电镜样品的准备 A悬浮培养的细胞、细菌、血细胞、精子等； 细胞使用PBS或无血清培养基离心漂洗1~2次以去除血清，离心转速依据不同离心机、不同样品自定，总时间控制在5min内；细胞团根据预设浓度在适量 2.5%戊二醛吹悬，滴加在预先置入青霉素小瓶中的托盘，4℃静置沉降2~3天，在托盘周围加入PBS，以防止样品干燥。 B贴壁培养的细胞： 在培养皿中预先加入盖玻片，使细胞贴附于盖玻片上；PBS或无需请培养基漂洗后，放置在培养板室温固定1h，4℃3 h，注意放置干燥，自行转入青霉素小瓶中，加满PBS送检。 SEM标本处理必须使用玻璃容器，需明确所用盖玻片尺寸可以放入青霉素瓶。 C组织取材 样品观察表面可达8~10mm2,高度小于5mm左右； 样品表面在固定前必须清洁： 使用生理盐水或PBS冲洗掉表面的灰尘以及不需要观察的蛋白、粘液等。能够明确标识标本的观察面。消化道、呼吸道、血管、生殖器官、泌尿等官腔内表面，尤其要注意先清洗再固定。 如需要观察脏器内结构，应依照不同的实验目的，决定目的脏器是否需要灌注清洗；固定 2.5%戊二醛浸没标本，室温1h，4℃固定3h以上，换PBS送检。 附： 2.5%戊二醛的配制
Step 1: 0.2M磷酸缓冲液的配制：--------------------- 磷酸二氢钠（NaH2PO 4.H2O） 2.6xx 磷酸氢二钠(Na2HPO 4.12H2O)29xx 双蒸馏水加至500毫升pH调至 7.4 Step 2: 戊二醛固定液的配制： --------------------- 25%戊二醛1ml 双蒸馏水4ml 0.2mol/L磷酸缓冲液5ml 戊二醛最终浓度 2.5% pH值 7.3-
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色
大鼠肝脏组织病理切片的制作和HE染色 步骤如下： （一）固定与修块 取组织块放入Bouin氏液中，组织块的直径应小于7mm。6小时左右后用双面 刀片将组织块修剪成3-5mm3大小。 （二）脱水与透明 1. 75%乙醇50分钟 2. 85%乙醇50分钟 3. 95%乙醇(I) 30分钟 4. 95%乙醇(II) 30分钟 5. 100%乙醇(I) 30分钟 6. 100%乙醇(II) 30分钟 7 1/2二甲苯（乙醇与二甲苯等体积）20分钟 &二甲苯（I）20分钟 9 .二甲苯（II）10分钟（可依据透明效果而定） 若脱水不好，二甲苯溶液颜色会变混浊。在每一步骤之后，要充分滤干组织块，一般用筒纸吸干组织块上的液体，以免影响其他液体的浓度，但也要防止组织块干燥。全过程约需要5h。（三）浸蜡、包埋与修蜡块 1.浸蜡：将60C恒温箱打开，使石蜡充分溶解，待脱水与透明结束后，将组织块转入石蜡里，放置于60 C恒温箱120分钟。 2 .包埋：将60 C的石蜡倒入纸盒内，然后用小镊子将各组织块按一定的顺序排列好，使切面朝下。不同组别的同一组织包埋于一个蜡块中，以保证切片和染色条件相同。为防止倒入纸盒内的石蜡底部立刻凝固，可将纸盒置于一玻璃板 上（或大培养皿内），然后将玻璃板置于80-90 C左右热水上，包埋时蜡盒底部要放平，做蜡块的蜡要反复冻融较好。 3 .修蜡块：待纸盒内蜡凝固后，用刀片将其修成梯形，组织块与蜡块边缘之间的距离不得小于2mm。 （四）切片 在载玻片上擦少量甘油蛋白。可滴半滴甘油蛋白于载玻片上，用手指充分抹 匀，呈半干状为佳。切片厚约4-8卩m，将切片在55C左右水浴中展开，展开程度 以带黄颜色的组织完全摊平为准。用涂有甘油蛋白的载玻片从水浴中捞取切片，放入37C烘箱中过夜。每个组织块捞片2张。过夜后，将载玻片置于玻片架上， 进行下面的实验。 （五）脱蜡、染色与脱水 倾斜玻片架，将玻片架和载玻片下缘的试剂用筒纸吸干，减轻对其他试剂浓 度的影响。全过程约需要60分钟。 1.脱蜡 （1）二甲苯（I）15分钟 （2）二甲苯（II）15分钟 （3）100%乙醇2分钟 （4）95%乙醇（I）1分钟 （5）95%乙醇（II）1分钟 （6）蒸馏水浸洗1分钟 2 .染色
组织病理切片制作流程(完整版)
组织病理切片的制作流程 1．取材 组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下： (1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。 (2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为2.0cm×2.0cm×0.3cm，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～0.2cm即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～0.5cm，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。 (3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。 (4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。 (5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。 (6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。 (7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。 2．固定 (1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为2.0cm×2.0cm×0.3cm。
病理切片考试标本描述
切片考试标本描述 1.肝细胞水变性：肝小叶结构可辩，肝索紊乱，肝窦变窄。细胞肿大，胞浆疏松化，严重气球样变。胞浆稀少，透亮，细胞核多位于中央区，增大，淡染。 2.病毒性肝炎（慢性）：肝小叶结构可辩，肝索紊乱，肝窦变窄， 3.大部分肝细胞水变性：细胞肿大，胞浆淡染疏松化，严重气球样变，某些区域可见点状坏死和桥接坏死，纤维组织和胆管增生，伴淋巴细胞浸润 4.肝细胞脂肪变性：肝小叶结构可辩，肝索排列紊乱，肝窦变窄，大部分肝细胞肿大，胞浆内出现许多大小不一的脂滴空泡，空泡大的把细胞核挤到一边 5.肝萎缩：肝小叶结构仍可辨认，肝索排列紊乱、变窄，肝细胞体积缩小，中央静脉和肝窦扩张淤血（萎缩原因），汇管区可见纤维组织增生，部分胆管数目增多。 6.肝脓肿：低倍镜，肝细胞间散在局限的类圆形的脓肿灶，高倍镜，脓肿灶可见有多量脓细胞、中性粒细胞、及细胞碎片，可见小胆管增生及纤维组织增生。 7.肝硬化：正常肝组织破坏，增生的结缔组织包绕大小不等的略呈圆形的肝细胞团（假小叶）假小叶内中央静脉可缺如、偏位，多个，有时见到汇管区；肝细胞、毛细胆管淤血增生的结缔组织中有小胆管增生和淋巴细胞浸润。 8.肝细胞性肝癌：正常肝脏结构已被肿瘤组织浸润、破坏。细胞
呈巢状排列；多数癌细胞体积大，呈多角形，胞浆丰富，核大深染，可见病理核分裂像。残存肝组织被肿瘤压迫，部分区域有假小叶形成或见肝细胞水变性、脂肪变等病毒性肝炎的病变。 9.肉芽组织：主要由大量的新生毛细血管和纤维母细胞以及炎症细胞构成；新生毛细血管管腔不规则，有的仅呈条索状而无管腔；内皮细胞肥大，核椭圆形，可突出管腔；纤维母细胞梭形，胞浆较丰富，核多椭圆 10宫颈慢性炎性息肉：鳞状上皮（部分切片为柱状上皮）披覆；上皮所包绕的为增生组织，包括纤维组织、血管以及腺体。部分血管管壁增厚扩张充血；（注意与肉芽组织鉴别）伴炎性细胞浸润，淋巴细胞和浆细胞为主 11.肺气肿：肺泡不均匀扩张，肺泡间隔断裂，扩张的肺泡融合成较大的囊腔；部分肺泡间隔见血管充血，淋巴细胞浸润，肺泡腔可见水肿液 12.肺淤血水肿：大多数肺泡壁毛细血管及小静脉扩张充血，大部分肺泡腔内充满淡红色、比较均匀的水肿液。一些肺泡腔内有少量心衰细胞，胞浆内含有灰黑色颗粒。 13.小叶性肺炎：多个大小不等的实变病灶散在肺组织中，细支气管腔内见大量的中性粒细胞及脱落的上皮细胞，管壁小血管扩张充血肺泡壁小静脉和毛细血管充血，肺泡腔有中性粒细胞渗出；可见代偿性肺气肿 14.肺大叶性肺炎：肺组织全部实化，肺泡的轮廓隐约可见肺泡
组织切片制作步骤
如何做出一张合格的组织切片？ 一般要先取材→固定→透明→包埋→切片，最后进行染色组化等操作。本文着重叙述取材以后如何进行包埋和切片。 包埋可分为OCT包埋（冰冻切片）与石蜡包埋。 .冰冻切片对于组织的抗原性保留比较好，但是形态保留比较差，一般用来做原位杂交ISH，免疫荧光IF。冰冻切片较厚一般厚度8~15μm。冰冻包埋步骤较为简洁，固定之后，直接用镊子将样品放置到样品托上，挤压OCT完全包裹组织，放入冷冻机待OCT凝固即可。凝固后就可以直接切片。如果不能及时切片，用锡箔纸包装好，放入-80℃存放。 .石蜡切片，一般用来做HE染色或者免疫组织化学IHC。厚度更薄，一般为4um，工艺较为复杂并且制作样本的好坏取决于不同组织的种类和组成，更加依赖制作者的经验，需要在实验过程中不断优化才能得到最佳的实验条件。 下面是石蜡包埋和切片的具体步骤： 一、实验材料
动物组织，4%多聚甲醛（PFA），PBS，ddH2O，二甲苯，梯度乙醇，石蜡，石蜡包埋机。 二、实验步骤 1、取材：针对各组织部位规范化取新鲜组织，并用刀片单向切割成约3-4mm大小组织块，不要超过5mm。 2、固定：将切好的组织块放入4%多聚甲醛（PFA）中固定，以组织块与4%多聚甲醛体积比1：7为宜。PFA最好现用现配，一般在4度固定24~48h即可，固定时间因组织而异。冰冻切片可以直接用丙酮固定。其他固定液比如缓冲福尔马林PBS配的福尔马林含有K+和Na+，PH=7.4。 固定的原理是采用蛋白质凝固剂，使细胞内的物质尽量接近其生活状态时的形态结构、位置和除水以外的物质的过程。固定的目的是为了防止组织细胞自溶与腐败，防止细胞内的酶对蛋白质的分解作用，使细胞内的各种成分如蛋白质、脂肪、碳水化合物、酶类转变为不溶性物质，以保持原有的结构和生活时相仿。 关于固定液的选择可以参考这篇文章[1]。 3、洗去PFA：固定完毕后，流水冲洗3次，每次5分钟。 4、脱水透明：此步骤应根据不同组织设置合适时间，基本流程如下