第三章 培养基
第三章培养基Chapter 3 Culture Media
Beginning of Microbiology
?Almost exactly 300 years ago Anton van Leeuwenhoek described the first bacteria seen through the microscope, thus providing the technical basis for studying the morphology of micro-organisms
?Almost exactly 300 years ago Anton van Leeuwenhoek described the first bacteria seen through the microscope, thus providing the technical basis for studying the morphology of micro-organisms
伟大的科赫总结的“科赫三原则”: 细菌要恒定的与该病的病理症状有关；
能在病人中找到并分离，培养，纯化；放到健康的动物上也能引出相同的症状和病理特点。Agar - Agar Frau Hesse’s
contribution
Agar – Agar
?Solid medium is made by adding Agar
?Agar is obtained from Sea weeds (New Zealand agar is more)
?Agar contain long chain polysaccharides, Inorganic salts and protein like substance
?Melts at 980c and sets at 420c
?Used as solidifying agent for culture media in Petri plates, slants, and deeps
?Generally not degradated by bacteria
?Liquefies at 98°C
?Solidifies ~42°C
?Agar is melted by boiling
?Liquid medium can be converted into solid by the
addition of Agar (1%-2%) or
semisolid medium (0.6%)
?Used as solidifying agent for culture media in Petri plates, slants, and deeps
?Generally not degradated by bacteria
?Liquefies at 98°C
?Solidifies ~42°C
?Agar is melted by boiling
?Liquid medium can be converted into solid by the
addition of Agar (1%-2%) or
semisolid medium (0.6%)
?Plate: provide large surface for isolation and observation of colonies
?Using a sterile loop or a sterile swab streak your sample on the petri plate
?Important let your sterilized loop cool before you pick up your sample
Media and Culture
?Media: Nutrients (agar, pH indicators, proteins and carbohydrates) used to grow organisms outside of their natural habitats
?Culture: The propagation of microorganisms using various media
Culture media
? A cultural medium is the substance in which a specific micro-organism lives and grows. It must contain the essential nutrients needed for the microbe to grow.
?培养基是指维持微生物生长繁殖和产物形成的营养物质。
?工业发酵培养基是指提供微生物生长繁殖和生物合成各种代谢产物所需要的，按一定比例配制的多种营养物质的混合物。
?Culture medium: Nutrients prepared for microbial growth
?Sterile: No living microbes
?Inoculum: Introduction of microbes into medium
?Culture: Microbes growing in/on culture medium
? A good medium is very important to the success of an industrial fermentation.
The medium supplies nutrients for growth, energy, building of cell substance, and
biosynthesis of fermentation products.
3.1 培养基的类型
Classification of Culture media
?按纯度分类：
--合成培养基chemically defined media:
compound identity and concentration of all components are known. More expensive, Synthetic media
--天然培养基chemically undefined media:
ingredients include one or more chemically complex substances such as protein hydrolysates and extracts. Cheaper, Crude media
Synthetic Media
?Defined media are media composed of pure ingredients in carefully measured concentrations dissolved in double distilled water i.e., the exact chemical composition of the medium is known. Typically, they contain a simple sugar as the carbon and energy source, an inorganic nitrogen source, various mineral salts and if necessary growth factors (purified amino acids, vitamins, purines and pyrimidines.
?The choice of defined or undefined medium is dependent upon its application.
--- Chemically defined media are useful in biochemical or metabolic studies of organisms.
-- General laboratory growth media and industrial media are often chemically undefined media. Such as 花生饼(peanut meal)、蛋白胨(peptone)等。一般不需外加微量元素(trace elements)、维生素等。
?按状态分类：
-Solid media：suitable to culture and preserve species and spores; cultivating fungi.
-Liquid media: 80%-90%water, industrial fermentation media.
-Semi-solid media: liquid medium + agar
主要用于鉴定细菌、观察细菌运动特征等。
Classification of Culture media
Based on the consistency:
Liquid-- Peptone water, Nutrient broth
Semisolid-- Nutrient agar
Solid -- Blood agar, Serum agar
?按用途分类
斜面培养基、种子培养基和发酵培养基
1.斜面培养基(slant media)
?供微生物细胞生长繁殖或保藏菌种用的固体培养基。细菌、酵母等斜面培养基，霉菌、放线菌生产孢子的孢子培养基。
?作用：供给细胞生长繁殖所需的各类营养物质。富含有机氮源。
?斜面培养基宜加少量无机盐，必要的生长因子
?孢子培养基(spore media) : 供菌种繁殖孢子的一种常用固体培养基。
?要求：使菌体迅速生长，产生较多的优质孢子，不易引起菌种发生变异。
?基本配制要求：⑴not rich in nutrition, especially organic nitrogen source.
⑵optimal mineral salt concentration
⑶optimal pH and humidity
生产上常用斜面培养基：
?由葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏和食盐等配制的琼脂斜面培养基。
?麸皮(bran)、大米(rice)、小米(millet)孢子培养基；
?大米和小米常用作霉菌孢子培养基，因它们含氮少、疏松、表面积大，是较好的孢子培养基。水分控制在21％－25％。
2、种子培养基inoculum media
?种子扩大培养的目的是短时间内获得数量多、质量高的大量菌种，以满足发酵生产需要
?要求：营养比较丰富和完全，氮源和维生素的含量要高些。
?一般种子培养基中各种营养物质浓度不需太高
?可添加易被吸收利用的碳源和氮源，如葡萄糖、酵母粉(yeast)、蛋白胨
?通常不要求积累产物
?一般种子培养基常包括有机氮源和无机氮源
?最后一级的种子培养基的成分最好接近发酵培养基。
3、发酵培养基production media
?供菌体生长、繁殖和合成产物之用。
?要求：既要使种子接种后能迅速生长，达到一定的菌丝浓度，又要使长好的菌体迅速合成所需产物。
?配制：其组成除有菌体生长所必需的元素和化合物外，还需有合成产物所需的特定元素、前体和促进剂等。
3.2 发酵培养基的成分及来源
Composition of media and their sources
?微生物需从外界吸收营养物质，经过一系列生物化学反应，获得能量并形成新的细胞物质，同时排出废物。
?微生物种类繁多，营养物质需求和利用不同。
?从细胞物质成分分析可知，水占80%左右。
?20%干物质中，炭素约占50%、氮素约占5%-13%、矿物质约占3%-10%。
?配制培养基时需有足够的碳源、氮源、水和无机盐。还可添加生长因子。
Basic requirements of culture media
?Nutrients
- Energy source
- Carbon source
- Nitrogen source
?Mineral salts – Sulphate, phosphates, chlorides & carbonates of K, Mg & Ca.
? A suitable pH – 7.2 – 7.4
Accessory growth factors
- Tryptophan for Salmonella typhi
3.2.1 碳源carbon sources
?Carbon source is one of main composition of medium.
?The functions are: providing carbons and energy; the components for synthesis of products.
?These can include simple sugars, complex carbohydrates, alcohols, amino and other organic acids, and short-chain lipids.
常用的碳源有糖类、油脂、有机酸和低碳醇。蛋白质、氨基酸也可用作碳源。
3.2.1.1 糖类sugars
?Sugars used mainly: glucose, molasses (糖蜜), dextrin (糊精).
?Glucose: most microbes can utilize it.
速效碳源、
high concentration→speed respiration up→DO no enough→intermediates (中间产物）accumulation → inhibiting growth and synthesis
?molasses (糖蜜)
?Beet(甜菜) and cane molasses are by-products of the sugar industry.
?containing 50% -75% fermentable sugars, mainly sucrose. Also containing nitrogenous compounds, vitamins and minerals.
?Cheaper
Starch and dextrin (糊精)
?Starch:
----widely used in fermentation industry
--- starch → hydrolyze using microbial amylase (淀粉酶) →dextrin →glucose
-Most common used starches: corn, wheat, potato starches. Also using corn flour.
--advantages: 缓效碳源、cheaper than glucose
3.2.1.2 油和脂肪oils and fats
?Oil and fats are also used as carbon sources because some microbes contain lipase (脂肪酶)
?Fat →glycerol(甘油) and fatty acids →
oxidize → CO2+ water, releasing much energy
?Providing enough O2 is important.
?常用的油：豆油、菜子油、猪油、鱼油、棉子油等。
3.2.1.3 有机酸organic acids
?Some microbes can use organic acids as carbon sources, such as lactic acid, citric acid, acetic acid.
?pH of cultural medium will increase.
CH3COONa + O2→ 2CO2 + H2O + NaOH
3.2.1.4 烃和醇类hydrocarbon and ethanol
?石油及裂解产物如正烷烃也可用作carbon sources.
?自然界中能同化乙醇的微生物和能同化糖质的微生物一样普遍。
3.2.2 氮源nitrogen sources
?氮源主要用于构成菌体细胞物质（氨基酸、蛋白质、核酸等）和合成含氮代谢物。
?常用的氮源可分为：有机、无机氮源两类。
?有机氮源organic nitrogen sources
常用的: 花生饼、棉子饼、玉米浆、玉米蛋白粉、蛋白胨、酵母粉、鱼粉、蚕蛹粉、尿素、废菌丝体和酒糟等。
organic nitrogen sources →microbial proteinase →amino acids →metabolized by microbes.
?organic nitrogen sources contain rich proteins, peptides, amino acids, vitamins and growth factors.
?在含有机氮源的培养基中，微生物常表现出生长旺盛、菌丝或细胞浓度增长迅速的特点。
?有些微生物对氨基酸有特殊的需求。如缬氨酸可提高红霉素的发酵单位。
玉米浆Cornsteep Liquor
?Cornsteep liquor is the water extract by-product resulting from the steeping (浸泡) of corn during the commercial production of corn starch and other corn products.
?玉米浆是一种优良的氮源，因为它含有丰富的氨基酸（丙氨酸、赖氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸等）、还原糖、磷微量元素和生长素。
?Of the 50% solids of cornsteep liquor, nearly half is lactic acid. The rest includes amino acids, glucose and other reducing sugars, salts, vitamins, and precursors (前体)such as those for the penicillin molecule.
?The high lactic acid content of cornsteep liquor results from the growth of lactic acid bacteria during its manufacture.
?This variation in composition, at times, can lead to poor reproducibility of an industrial fermentation.
尿素urea
?Urea is also a commonly used nitrogen source.
?Its feature:
---single component, no has nutritional feature of complex nitrogen sources;
---cheaper, often used in production of penicillin and glutamic acid (谷氨酸).
?yeast extract (酵母抽提物)
?Peptones (蛋白胨)
?有机氮源除了作为菌体生长繁殖的营养外，有的还是产物的前体。
?缬氨酸、半胱氨酸和α-是合成青霉素和头孢菌素的主要前体；甘氨酸可作为L-丝氨酸的前体等。
无机氮源inorganic nitrogen source
?常用的：氨水(ammonia)、铵盐(ammonium)和硝酸盐(nitrate)
?Microbes can utilize it faster. 速效氮源
?After it is utilized, the pH of medium will be changed.
(NH4)2SO4→2NH3 + H2SO4
NaNO3 + 4H2→ NH3 + 2H2O +NaOH
?生理酸性物质：NH4 →酸性物，硫酸铵
?生理碱性物质：NO3 →碱性物，硝酸钠
?正确使用生理酸碱性物质
?Except using as a nitrogen source, ammonia is often used to adjust pH of media.
Stirring is necessary.
?无机氮源的影响：硫酸铵>硝酸铵>硝酸钠>尿素
3.2.3 无机盐及微量元素
mineral salts and trace elements
?Mineral salts and trace elements are needed when microbial cells grow and reproduce.
?Most common mineral salts and trace elements:
磷(phosphorus)、镁(magnesium)、硫(sulphur)、钾(potassium)、钠(sodium)、铁(iron)、氯(chlorine)、锰(manganese)、锌(zinc)、钴(cobalt)、钙(calcium)等。
?作为微生物细胞生理活性物质组成或生理活性作用的调节物。
?When their concentration is low, they show a stimulation function for cell grow and product synthesis. When their concentration is high, they will inhibit the cell growth.
?Their optimal concentrations depend on the species and strains of microorganisms. 无机盐成分一般所用的浓度范围(见书上表)
?These elements are added into cultural media in the form of their salts.
?Except synthetic media, cobalt钴, copper, iron, manganese锰, zinc, molybdenum钼are not added into crude media.
?Phosphorus element is one component of nucleic acids and proteins; one component of ATP, energy transfer.
?Phosphorus can stimulate microbial growth and metabolism. But it will inhibit product synthesis when its concentration is high.
?许多次级代谢过程对磷酸盐浓度的承受限度比生长繁殖过程低，故必须严格控制。
?Magnesium does not involve the cell constitution. But Mg is the activator for many important enzymes.如己糖磷酸化酶、柠檬酸脱氢酶等
?镁离子可提高抗生素产生菌的抗生素耐受能力，如链霉素、卡那霉素等产生菌。
?常以硫酸镁的形式加入培养基。
?硫存在于细胞的蛋白质中，是含硫氨基酸的组分和某些辅酶的活性基，如辅酶 A (coenzyme A), 谷胱甘肽等。
?硫是某些产物如青霉素、头孢菌素等分子的组成部分，在培养基中加入Na2SO4等含硫化合物作硫源。
?铁(iron)是细胞色素、细胞色素氧化酶和过氧化氢酶的成分，因此铁是菌体有氧氧化
必不可少的元素。
?In iron-made fermentor, generally iron ion concentration can be30 μg/ml. So iron-containing compounds are not necessary for industrial media.
?Chlorine does not have nutritional functions for most microorganisms, but it is necessary for cell growth of halophile (嗜盐菌).
?一些产生含氯代谢物如金霉素和灰黄霉素等的发酵中，除天然含有外，通常还需加入0.1%氯化钾。
?在啤酒生产中，20－60mg/ml 的氯对酶和酵母有一定的促进作用。
?Sodium, potassium, calcium are not components of cell constitution, they are still necessary composition for cultural media.
?钠、钾离子与维持细胞的渗透压有关。钾离子是许多酶的激活剂，能促进糖代谢。?钙是某些酶(如蛋白酶)的激活剂，还参与细胞膜通透性的调节。
?培养基中钙盐过多时，会形成磷酸钙沉淀。
?锌、铜、钴、锰等是某些酶的辅基或激活剂。钴既是一些酶的激活剂，又是V B12的组成元素，发酵中加入一定量的钴盐，能使V B12的产量提高数倍；锰对于羧化作用是必需的，糖代谢中许多酶的活性都与锰有关。
?一般只有在合成培养基中才加入这些元素。
? 3.2.4 Water
?Main composition of media
?Functions:
?---join directly some metabolisms
?---solvents
?---providing a physiological environments for cell growth and synthesis of products.
?Effect of water quality on fermentation：水源质量的主要考虑参数包括pH值、溶解氧、可溶性固体、污染程度以及矿物质组成和含量。
? 3.2.5 生长因子、前体、产物促进剂
?(1) 生长因子growth factors
?Definition: small amount of organic compounds necessary for microbial growth.
?Features: no synthesis by itself.
?Examples：amino acids, purines, vitamins
?Sources: normally organic nitrogen source. Cornsteep liquor.
?(2) 前体precursors
?前体是指某些化合物加入到发酵培养基中，能直接被微生物在生物合成过程中结合到产物分子中去，而其自身的结构并没有多大变化，但是产物的产量却因加入前体而有较大的提高。
?
青霉素：分子量356 苯乙酸:分子量136
发酵过程中所用的一些前体物质(见书上表)
用法：
?前体一般都有毒性，浓度过大对菌体的生长不利。苯乙酸，一般基础料中仅仅添加
0.07%
?前体相对价格较高，添加过多，容易引起挥发和氧化。
?前体使用时普遍采用流加的方法，流加也有利于提高前提的转化率。
(3) 产物促进剂
?产物促进剂product stimulator
Definition: substances are neither nutrients nor precursors, and increase product yield after adding them.
?Examples: Tween (0.1%) → amylase(淀粉酶),
→ cellulase(纤维素酶)
大豆酒精提取物→ cellulase
?Mechanisms: not very clear
?Possible reasons:
---enzyme inducers 诱导剂
---improvement of cell permeability 渗透性
---protection on enzyme activity
3.3 培养基的设计及优化
media design and its optimization
?Importance of media design
?Current situations of media design:
many factors → empirical 经验+ scientific
? 3.3.1 培养基成分选择的原则
(1) 菌体的同化能力：
large molecules + enzymes → small molecules
Selection of carbon sources: glucose, starches
不同糖化工艺所得糖液质量的比较(见书表)
?Selection of nitrogen sources:
---If the microbe produces proteolytic enzymes, a variety of crude nitrogen sources such as soybean meal can be used.
--If the microbe lack of proteases, the organic nitrogen source should be hydrolyzed.
豆饼粉＋water + hydrochloric acid 盐酸, pH1.0 100℃→ amino acids.
?(2) 代谢物的阻遏和诱导
---葡萄糖效应
--- combination of organic and inorganic nitrogen/carbon sources
---enzyme agent production:
For many induced enzymes, starch and dextrin are common carbon source.
碳源对生长和产酶的影响(见书表)
?age of microorganisms affect the utilization of nitrogen sources.
?生长早期容易利用铵盐和氨基氮；生长中期则由于细胞的代谢酶系已经形成，利用蛋白质能力增强。
?Inducement and inhibition of nitrogen source for some products.
?蛋白酶的生产受培养基中蛋白质或多肽的诱导；而受铵盐、硝酸盐、氨基酸的阻遏。
(3)合适的C、N比
?The ratio of C、N have greatly effects on microbial growth and product synthesis ?氮源过多，菌体生长过于旺盛，pH偏高，不利于代谢产物的积累；
?氮源不足，菌体繁殖量少，影响产量
?碳源过多，容易形成较低的pH；
?若碳源不足则容易引起菌体的衰老和自溶
?Many factors influence the optimal ratio
?一般工业发酵培养基的C、N比为100: (0.2~2.0)
(4) pH的要求
?An important environment factor
?Fluctuation (波动) of cultural pH
?Optimal media formulation is the key factor to avoid fluctuation of cultural pH
?除考虑营养需求，也要考虑其代谢后对培养体系pH缓冲的贡献，使pH处于较适宜的状态。
3.3.2 培养基的优化media optimization
?The best media formulation is decided by tests.
? A general procedure of media optimization:
(1) 根据前人的经验和培养基成分选择的原则，
初步确定可能的培养基成分；
(2) decision of best media with single factor test
(3) optimization of each component concentration by some test design.
摇瓶优化配方：菌种筛选，反应器研究的基础
pH控制摇床：反应器水平上的摇瓶研究
发酵罐：
反应器水平,可以得出最终优化的基础配方
The criterion for a best industrial medium
? 1.培养基能够满足产物的最经济合成
? 2. By-product concentration as low as possible
? 3. The raw materials are cheaper, easy to transport and store. The supply is steady. ? 4. 能满足总体工艺的要求，如不影响通气、提取、纯化及废物处理。
Media Preparation
Microbiological Media
?The type of growth medium that you use is a function of the organisms that you want to culture. Use a reference book (there are many) to determine the type of medium that is best suited for your organism of interest.
?Common media include Luria Broth(LB), Nutrient Agar, Potato-Dextrose Agar (PDA), Bold’s Basal Medium(BBM)….
Luria Broth
Liquid Medium
10 g Bacto-Tryptone
5 g Bacto-yeast extract
5 g NaCl
Distilled H2O to 1 l volume
Adjust pH to 7.0
Sterilize for 45 minutes using autoclave or pressure cooker
Plate Medium
10 g Bacto-Tryptone
5 g Bacto-yeast extract
5 g NaCl
Distilled H2O to 1 l volume
20 g agar
Adjust pH to 7.0
Sterilize for 45 minutes using autoclave or pressure cooker
Things to remember:
?The volume of media (liquid or plate) should be roughly ? the volume of the container in which it is placed for sterilization realizing that the liquid
expands under increased heat and pressure during the sterilization process.
?Estimate plate quantities (how many you need to make) as a function of 15-20 ml per plate.
?Assemble all of your chemicals in your work area before you begin.
?Accurately weigh each of the dry ingredients in your culture media.
Add each dry culture medium ingredient to the culture flask
Add distilled (or deionized) water to make the correct volume. Heat AND stir (agar will burn if it is not stirred) until all of the ingredients go into solution. When the media boils, it is ready for sterilization.
Media Sterilization
There are two reliable methods used to sterilize microbial culture media:
1.autoclave
2.pressure cooker
When using an autoclave, use the “wet” setting for sterilizing liquids (flasks, bottles,
culture tubes, etc), and use the “dry” setting when sterilizing empty containers, stoppers, etc.
All liquid media should be sterilized for a minimum for 45 minutes at high
temperature and pressure. Autoclaves will cycle automatically, but if you use a
pressure cooker, set a timer.
Remember not to tighten the cap or seal on any container; it will explode under high
pressure and temperature!
Sterilize for 45 minutes using the wet cycle (autoclave) or at maximum pressure in a
pressure cooker. Remember to cover the top of the flask or jar with aluminum foil to prevent contamination when as the media cools.
When using a pressure cooker, don’t over fill the cooker, and remember to weight your containers so they don’t fall over!
Sterilize at high temperature and pressure for 45 minutes before turning off the heat. Remember to allow enough time for the pot to heat up!
Line your sterile petri plates along the edge of the table. Transfer hot media to a small sterile container and pour 15-20 ml of the plate media into each petri plate.
The petri plate lid should be open slightly, but not completely open as this increases contamination.
Plate Pouring Tips
Line empty plates along the edge of the work bench.
Open the petri dish lid at about a 30-45° angle to allow the hot liquid to cover the bottom of the dish. The thermal current created by the hot media prevents bacteria and fungal spores from landing in your clean dish.
As the plates are poured, move the filled plates to the back of the table until the plates cool and congeal.
Once the plates have cooled and the media is firm, store the plates media side-up (bottom) with the lid securely taped or the plates restacked in the manufacturer’s plastic sleeve.
To increase the shelf-life of the plates, store in a cool, dry environment until they are used (refrigerator).
Sterilization of culture media
?Media are sterilized in the autoclave at 1210c for 45’ under 15lbs of Pressure
?Heat-labile substances like serum & sugar solutions must be sterilized by free-steam or filtration
Discarded culture plates are to be sterilized by autoclaving prior to washingStorage of culture media
Storage of culture media
?Prepared media in individual screw capped bottles can be stored for weeks at room temp
?Poured plates deteriorate quickly and often contaminated, hence cold storage is necessary
?For smaller labs refrigerators & for larger labs cold room(4-5o c)
?Deep freeze refrigerators for preservation of sera, antibiotics & amino acids (-10 °C to – 40°C)
微生物发酵培养基的优化方法
工业发酵进展
微生物发酵培养基的优化方法 对于微生物的生长及发酵，其培养基成份非常复杂，特别是有关微生物发酵的培养基，各营养物质和生长因子之间的配比，以及它们之间的相互作用是非常微妙的。面对特定的微生物，人们希望找到一种最适合其生长及发酵的培养基，在原来的基础上提高发酵产物的产量，以期达到生产最大发酵产物的目的。发酵培养基的优化在微生物产业化生产中举足轻重，是从实验室到工业生产的必要环节。能否设计出一个好的发酵培养基，是一个发酵产品工业化成功中非常重要的一步。以工业微生物为例，选育或构建一株优良菌株仅仅是一个开始，要使优良菌株的潜力充分发挥出来，还必须优化其发酵过程，以获得较高的产物浓度（便于下游处理），较高的底物转化率（降低原料成本）和较高的生产强度（缩短发酵周期）。设计发酵培养基时还应时刻把工 实验室最常用的优化方法是单次单因子法，这种方法是在假设因素间不存在交互作用的前提下，通过一次改变一个因素的水平而其他因素保持恒定水平，然后逐个因素进行考察的优化方法。但是由于考察的因素间经常存在交互作用，使得该方法并非总能获得最佳的优化条件。另外，当考察的因素较多时，需要太多的实验次数和较长的实验周期[3]。所以现在的培养基优化实验中一般不采用或不单独采用这种方法，而采用多因子试验。 2.多因子试验 多因子试验需要解决的两个问题: (1)哪些因子对响应具有最大(或最小)的效应，哪些因子间具有交互作用。 (2)感兴趣区域的因子组合情况，并对独立变量进行优化。
3.正交实验设计 正交实验设计是安排多因子的一种常用方法，通过合理的实验设计，可用少量的具有代表性的试验来代替全面试验，较快地取得实验结果。正交实验的实质就是选择适当的正交表，合理安排实验的分析实验结果的一种实验方法。具体可以分为下面四步： （1）根据问题的要求和客观的条件确定因子和水平，列出因子水平表； （2）根据因子和水平数选用合适的正交表，设计正交表头，并安排实验； （3）根据正交表给出的实验方案，进行实验； （4）对实验结果进行分析，选出较优的“试验”条件以及对结果有显著影响的因子。 正交试验设计注重如何科学合理地安排试验，可同时考虑几种因素，寻找最佳因 次 报道。CastroPML报道用此法设计20种培养基，做24次试验，把gamma干扰素的产量提高了45%。 6.部分因子设计法 部分因子设计法与P1ackett-Burman设计法一样是一种两水平的实验优化方法，能够用比全因子实验次数少得多的实验，从大量影响因子中筛选出重要的因子。根据实验数据拟合出一次多项式，并以此利用最陡爬坡法确定最大响应区域，以便利用响应面法进一步优化。部分因子设计法与Plaekett-Burman设计法相比实验次数稍多，如6因子的26-2部分因子设法需要进行20次实验，而Plackett-Burman设计法只需要7次实验。 7.响应面分析法
实验室常用培养基的配制方法
实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin (100 mg/ml) IPTG (24 mg/ml) X-Gal (20 mg/ml) LB培养基■组份浓度 100 mg/ml Ampicillin ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量5 g Ampicillin置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 24 mg/ml IPTG ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1.2 g IPTG置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml灭菌水，充分混合溶解后，定容至50 ml。 3. 用0.22 μm滤器过滤除菌。 4. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃保存。 ■组份浓度 20 mg/ml X-Gal ■配制量 50 ml ■配制方法 1. 称量1 g X-Gal置于50 ml离心管中。 2. 加入40 ml DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后， 定容至50 ml。 3. 小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。 ■组份浓度 1%（W/V）Tryptone，0.5%（W/V）Yeast Extract， 1%（W/V）NaCl ■配制量 1 L ■配制方法 1. 称量下列试剂，置于1 L烧杯中。 Tryptone 10 g Yeast Extract 5 g NaCl 10 g 2. 加入约800 ml的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5 N NaOH（约0.2 ml），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1 L。 5. 高温高压灭菌后，4℃保存。
食用菌母种制作-实验一
实验一食用菌母种制作 一、目的要求： 1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理； 2、掌握母种培养基的制备方法； 3、了解无菌操作基本原理，掌握母种的无菌接种培养方法。 4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤； 5、熟练分离出栽培用菌种。 二、主要仪器设备及药品材料： 灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管（18x180mm）、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。 三、实验步骤与方法: ①培养基的制作 1 PDA培养基配方 马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升. 2. 母种培养基的配制 (1)熬制。马铃薯洗净，挖芽去皮。称取200克，切成玉米大小颗粒或薄 片。量筒量取1000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。四层纱布过滤于量杯中。滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。补足水量至1000毫升。
(2)分装试管。将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。培养基高度为试管长 度的1/5左右，注意避免培养基沾于试管口外。分装完成后，盖紧硅胶塞。 （3）捆把。7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。贴上标签，准备灭菌。 （4）灭菌。注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。 （5）摆斜面，培养基长度约为试管长度的1/2。斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管产生过多的冷凝水。 ①菌种分离与培养 （1）种菇选择。选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子实体，要求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子实体。子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿备用。 （2）母种分离（组织分离法）。在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒，在超净工作台将子实体撕开，用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上硅胶塞。将分离的试管放在室避光培养7-8天，检查菌丝生长情况。 四、实验结果 每人制作平菇母种一支。记录母种菌丝的生长情况。 五、作业 1.食用菌菌种分离有哪些方法？实际生产中最常用的方法是哪一种？该方法有何优点？
lb培养基配方与tb培养基配方
lb培养基配方与tb培养基配方 LB培养基和TB培养基这两种培养基名字有点像，它们之间的区别在哪呢?首先是用途上，LB经常用来预培养菌种，而TB培养基则用于慢病毒载体等多种实验中，另外，两者的配方也是大有不同的。一起了解一下吧。 TB培养基的配方 去离子水加至900 ml 胰蛋白胨12 g 酵母提取物24 g 甘油4 ml 摇动容器使溶质完全溶解，在15 psi (1.05 kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20 min 。当溶液冷却至60°C或60°C以下时加入100 ml无菌的0.17 nol/L KH2PO4，0.17 nol/L K2HPO4(该溶液的配置方法是：用90 ml 去离子水溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K 2HPO4，完全溶解后，用去离子水定容至100 ml，在15 psi (1.05 kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20 min 。) LB培养基的配方 10g NaCl 10g 蛋白胨5g酵母粉加去离子水至1L 调PH 7.0-7.2 分装灭菌即可用之 配方区别： TB培养基，Terrific肉汤(Terrific Broth，TB) 去离子水加至900 ml 胰蛋白胨12 g， 酵母提取物24 g， 甘油4 ml 摇动容器使溶质完全溶解，在15 psi (1.05 kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20 min 。当溶液冷却至60°C或60°C以下时加入100 ml无菌的0.17 nol/L KH2PO4，0.17 nol/L K2HPO4(该溶液的配置方法是：用90 ml 去离子水溶解2.31 g KH2PO4和12.54 g K 2HPO4，完全溶解后，用去离子水定容至100 ml，在15 psi (1.05 kg/cm2)高压下蒸汽灭菌20 min 。) LB培养基的配方如下： 胰蛋白胨(Tryptone) 10g/L 酵母提取物(Yeast extract) 5g/L
设计学概论
设计学的三个分支：设计理论、设计批评、设计史。 中国设计史和外国设计史都包括：工业设计史、环境设计史、平面设计史、手工业设计史、装饰设计史、染织服装设计史。 1977年，英国成立了设计史协会，这标志着设计史正式从装饰艺术史或应用美术中独立出来而成为一门新的学科。 美术史上19世纪的两位巨人——森珀和里格尔 德国建筑家、理论家森珀是将达尔文进化论运用于美术史研究的第一人。出版了极富思辨性的三本巨著《工艺美术与建筑的风格》。 奥地利美术史家里格尔出版了认为是有关装饰艺术历史的最重要的——《风格的问题》。 在西方一般以荷加斯的著作《美的分析》为最早的设计理论专著。 西方美术史之父瓦萨里在全面讨论设计这一概念是说到：设计师三项艺术（建筑，绘画，雕塑）的父亲。 对当代西方设计思潮的一般看法：符号学理论、结构主义、解构方法、混沌理论、绿色设计、信息设计。 符号学理论：根据符号学的理论，而人的意识过程就是一个符号化的过程，思维无非是对符号的一种组合，装换，再生的操作过程。 从设计对象划分：规划，实施，应用。 结构主义：结构主义理论是一种社会学方法，其目的在于给人们提供理解人类思维活动的手段。 设计的艺术手法主要有：借用、解构、装饰、参照和创造。 艺术如何推动设计：（1）,艺术家参与设计研究，投入设计实践可以推动设计进步。 （2)设计师关注艺术，投入艺术研究，也可以推动设计进步。 (3)设计师与艺术家的合作则更有可能推动设计进步。 设计总是受着生产技术发展的影响。 设计是创造高附加值的方法。 设计与消费：消费是设计的消费，设计为消费服务，消费是一切设计的动力与归宿，设计创造消费。 原始社会（原始时代的设计）:陶器、原始社会的精神文化——图腾。 夏、商、西周（青铜时代的设计) 春秋战国（革新时代的设计） 秦汉（封建制上升时期设计的高速发展）：（1）漆器、（2）青铜、（3）丝绸之路、（4)文字 三国、两晋、南北朝、隋唐（设计的多元和融合） 宋、辽、金、元时期（设计走向成熟，走向市场) 清朝时期（中国古代，设计的集大成，技艺极致与设计的衰退） 民国（步履艰难的近代设计) 中国设计发展的规律：（1）社会的发展推动设计文化的发展（2）生活需要是设计发展的第一动力（3）设计与文化互相渗透，互相影响（4)设计与审美观念的同步发展 平面设计传播的三个领域：从图到文字再到平面设计（1）由印刷产生的二维的静态产物（2）由视频产生的三维动态产物（3）由网络产生的虚拟形态产物 图的概念：图是表现视觉形象的一种艺术形式，通过线条，色彩等视觉元素和它们之间的组合关系来传达特定的信息和意念。图也是世界都能通用的视觉语言。 陶瓷器、青铜器的图形和图案具有的共同特征：（1）题材丰富（2）装饰手法多样（3）装饰
MS培养基配方及培养基简介
MS培养基成分(1962)（单位：mg/L) 无机盐含量有机物含量 PH值NH4NO4 1650 肌醇 100 5.8 KNO3 1900 烟酸 0.5 CaCl2·2H2O 440 盐酸吡哆醇 0.5 MgSO4·7H2O 370 甘氨酸 2 KH2PO4 170 盐酸硫胺素 0.1 KI 0.83 蔗糖 30g/L H3BO3 6.2 琼脂 4~8g/L MnSO4·4H2O 22.3 ZnSO4·7H2O 8.6 Na2MoO4·2H2O 0.25 CuSO4·5H2O 0.025 CoCl2·6H2O 0.025 FeSO4·7H2O 27.8 Na2·EDTA·2H2O 37.3
一个完善的培养基配方中，应该包括一下几个部分，分别为：无机营养成分、有机营养成分、植物激素，琼脂，其他成分。 大量元素：氮，磷，钾，硫，钙，镁等。（1）无机营养成分： 微量元素：硼，锰，锌，钼，铜，铁，钴等。（国际植物生理学会建议，植物所需要的元素浓度大于0.5mmol/L的为大量元素，而小于0.5mmol/L的则为微量元素） （a）维生素类：如：硫胺素（维生素B1）, 吡哆醇（维生素B6),烟酸（维生素B3） 抗坏血酸（维生素C) (b) 氨基酸类：如甘氨酸，丙氨酸，谷氨酸等 （2)有机营养成分：(c) 复杂的天然混合物：如：椰乳（CM）， 水解络蛋白（CH）,麦芽浸出物（ME), 番茄汁等 （d)作为碳源的糖：常用的碳源为蔗糖， 葡萄糖和果糖也是较好的碳源。 （e) 肌醇：肌醇在糖类的相互转化中起作 用，是细胞壁的构建材料。肌醇参与碳水化合物，磷脂代谢及离子平衡等生理活动，具有帮助活性物质发挥作用的效果，能促进愈伤组织生长，对胚状体和芽的形成也有良好的促进作用。肌醇一般用量为：50~100mg/L，在培养基中加入少量肌醇就能促进维生素B1效应的发挥。但肌醇常可由磷酸葡萄糖转变二次，并进 一步转化为果胶物质，因此，在快速繁殖中有时也可省去不用。
工业设计史 第三章第3节 18世纪的设计风格
第三章第三节 18世纪的设计风格 18世纪的设计风格是非常矛盾的。工业革命后，新的材料、技术和新的生产方式不断出现，传统的设计已不能满足新时代的要求，人们以各自的方式探索新的设计道路。在这一过程中，混乱是难免的。 由于传统的风格和形式在长期的实践中已定型、成熟，当人们改用全然不同的材料进行商品生产时，还不熟悉新的可能性，起初总是要借鉴甚至模仿习见的传统形式。这就在旧形式和风格与新的材料和技术之间产生了矛盾。这种矛盾从18世纪下半叶一直延续到19世纪末。 图3-1 新古典主义绘画 由于受到建筑风格的影响，复古思潮统治着18世纪下半叶的设计活动，这期间比较流行的是新古典和浪漫主义。它们的出现，主要是新兴的资产阶级有政治上的需要，他们之所以要利用历史式样，是企图从古代文化中寻求思想上的共鸣，用借来的语言导演出世界历史的新场面。 新古典是指资本主义初期最先出现在文化上的一种思潮，在建筑和设计史上指18世纪60年代开始在欧美盛行的古典形式。18世纪前的欧洲，巴洛克式风格和洛可可式风格盛行一时，其繁琐的装饰与贵金属的镶嵌逐渐引起了人们的厌恶。在探求新的设计风格的过程中，希腊、罗马的古典建筑成了当时的创作源泉。1750年，罗马庞贝遗址被发掘，在欧洲引起了研究古典艺术的热潮，人们认识到古典艺术质量远远超过巴洛克式风格和洛可可式风格，促成了新古典的产生与流行。 新古典追求古典风格和简洁、典雅、节制的品质以及“高贵的纯朴和壮穆的宏伟”。在建筑上追求建筑物体形的单纯、独立和完整，细节的朴实，形式的符合结构逻辑，并且减少纯装饰性的构件，显示了人们对于理性的向往。新古典在各国的发展虽然有共同之处，但多少也有些差异，大体上在法国是以罗马式样为主，而在英国、德国则是希腊式样较多。新古典风格也体现于当时的产品上，其特点是放弃了洛可可式过分矫饰的曲线和华丽的装饰，追求合理的结构和简洁的形式，构件和细部装饰喜用古典建筑式的部件。图3-2所示是一种法国座钟，即采用了古典柱式，整体形态简洁利落。
实验室常用培养基大全
表皮葡萄球菌 产气肠杆菌 鼠伤寒沙门氏菌 单核增生李斯特氏菌 大肠埃希氏菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.wendangku.net/doc/20353049.html, 金黄色葡萄球菌 酿酒酵母菌 脑心浸出液肉汤(BHI) 品红亚硫酸钠液体培养基 MFC肉汤 CFU培养基基础 4-甲基伞形酮葡糖苷酸(MUG)培养基蛋白胨 胰蛋白胨 胰酪蛋白胨 酵母浸粉 大豆蛋白胨 酸水解酪蛋白 明胶蛋白胨 马铃薯浸粉 琼脂粉 琼脂粉 动物组织胃蛋白酶消化物 肉胃酶消化物 牛肉浸粉 牛肝浸粉 牛肝浸粉 牛心浸粉 多价蛋白胨(多聚蛋白胨) 月示蛋白胨 玉米浸出粉 一次性培养皿 表面接触碟 一次性培养皿（密理博浮游菌采样）表面接触碟/表面接触皿 https://www.wendangku.net/doc/20353049.html, 金属玻璃培养皿（可重复使用） 金属玻璃表面接触碟
嗜热脂肪肝菌芽孢菌片（ATCC7953 枯草杆菌黑色变种芽孢菌片（ATCC9372）121度高压灭菌化学指示卡 132℃压力蒸汽灭菌指示卡 葡萄糖 氯化钠 L-半胱氨酸盐酸盐 氧化酶试剂 三磷酸腺苷二钠盐（ATP） 费尔休林（无吡啶） SDS-PAGE凝胶配制试剂盒 SDS-PAGE电泳液 SDS-PAGE上样缓冲液5倍 考马斯亮蓝R-250染色套装 铜绿假单胞菌 金黄色葡萄球菌 表皮葡萄球菌 大肠埃希氏菌 大肠埃希氏菌 产气肠杆菌 乙型副伤寒沙门氏菌 枯草芽孢杆菌 白色念珠菌 表面接触碟/表面接触皿 https://www.wendangku.net/doc/20353049.html, 黑曲霉 生孢梭菌 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 无菌大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉? 大豆酪蛋白肉汤培养基(胰酪胨大豆肉汤) 大豆酪蛋白消化液培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 大豆酪蛋白琼脂培养基 无菌大豆酪蛋白琼脂培养基 卵磷脂-吐温80营养琼脂培养基基础 胰化大豆坚固绿琼脂(TSFA) 营养肉汤(NB) 营养琼脂(NA) 0.5%葡萄糖肉汤培养基 pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 三糖铁琼脂培养基(TSI) 三糖铁琼脂培养基 R2A琼脂
工业设计史复习没空格
工业设计与工艺美术史 主讲人：胡修瑞 目录 第一章设计的萌芽阶段 第二章手工艺设计阶段 第三章18世纪的设计与商业 第四章机械化与设计 第五章设计改革 第六章工业、技术与设计 第七章艺术变革与现代设计 第八章20世纪20——30年代的流行风格 第1章设计的萌芽阶段 设计是人类的创造性活动，包含于一切人造物品的形成过程之中。 从人类有意识地制造和使用原始的工具和装饰品开始，人类的设计文明便开始萌发了。 设计的萌芽是从旧石器时代一直延续到新石器时代，其特征是用石、木、骨等自然材料来加工制作成各种工具。 1.1 设计概念的产生 1.2 生存设计 1.1 设计概念的产生 设计概念的产生过程中，劳动起着决定性的作用。 由于人类能从事有意识、有目的的劳动，因而产生了石器生产的目的性，这种生产的目的性，正是设计最重要的一个特征。 1.1.1旧石器时代 1.1.2新石器时代 1.1.3早期设计基本特点 1.1.1旧石器时代 人类早期使用的石器一般是打制成形，较为粗糙，通常称打制石器时代为“旧石器时代”。 为了适应使用要求，有一定的标准化制造，每种石器类型都适于其特定的工作，人类的设计文明萌发了。 1.1.2新石器时代 人类在劳动中进一步改进了石器的制作，把经过选择的石头打制成石斧、石刀、石锛、石铲、石凿等各种工具，并加以磨光，使其工整锋利，还要钻孔用以装柄或穿绳，以提高实用价值。这种磨制石器的时代，称之为“新石器时代”。 1.1.3萌芽阶段设计的基本特点 ①卓越的美感和制作者对于形的控制能力； ②工具本身在使用中被证明是有效的； ③石材选料上十分注意硬度、形状、纹理的选择； ④制作上，多应用对称法则。 ⑤实用与美观结合，赋予物品物质和精神功能双重作用； ⑥自觉的美的追求则是精神生产的、意识形态的产物。 1.2 生存设计 萌芽阶段设计的发展 1.基本需求：一旦最基本的需求得到了满足，其他的需求也就会不断出现。 2.需求变化：原有的需求也会以一种比先前的方式更先进的形式来得到满足。 3.舒适生活欲望的产生：随着温饱的解决和危险的消失，更为舒适的生活欲望就会油然而生，人们发现自己是有感情的，他们的需求需要有一种感情上的内涵。这样，人类设计的功能发生变化，由保障生存发展到了使生活更有意义。
第三章 发酵培养基
第三章发酵培养基 培养基：广义上讲培养基是指一切可供微生物细胞生长繁殖所需的一组营养物质和原料。同时培养基也为微生物培养提供除营养外的其它所必须的条件。 作用：促进产物的形成、满足菌体的生长 发酵培养基的要求: ①培养基能够满足产物最经济的合成； ②发酵后所形成的副产物尽可能的少； ③培养基的原料应因地制宜，价格低廉，且性能稳定，资源丰富，便于采购运输，适合大规模储藏，能保证生产上的供应； ④所选用的培养基应能满足总体工艺的要求，如不应该影响通气、提取、纯化及废物处理等。 培养基的类型及功能 一、按组成物质的纯度 合成培养基: 所用的原料其化学成分明确、稳定 ◆适合于研究菌种基本代谢和过程的物质变化等科研工作； ◆培养基营养单一，价格较高，不适合用于大规模工业生产。 天然培养基: 采用天然原料，其成分不那么“纯” ◆发酵培养基普遍使用天然培养基； ◆原料来源丰富(大多为农副产品)、价格低廉、适合于工业化生产； ◆由于其成分复杂，不易重复，如果对原料质量等方面不加控制会影响生产稳定性。 二、按状态 固体培养基:适合于菌种和孢子的培养和保存，也广泛应用于有子实体的真菌类，如香菇、白木耳等的生产。 半固体培养基:琼脂用量为0.5%～0.8% ，主要用于微生物的鉴定。 液体培养基:发酵工业大规模使用的培养基。 三、按用途（从发酵生产应用考虑） 孢子（斜面）培养基:菌体迅速生长，产较多优质孢子，不易引起菌种变异。要求：营养不太丰富、无机盐浓度适量、合适pH和湿度。常用：麸皮培养基、小米、大米、玉米碎屑、琼脂斜面培养基。 种子培养基：孢子发芽、生长和大量繁殖菌丝体。要求：营养丰富完全、最后一级接近发酵培养基。 发酵培养基：供菌体生长、繁殖和合成产物。 发酵培养基的成分及来源 碳源 1、作用 提供微生物菌种的生长繁殖所需的能源和合成菌体所必需的碳成分；提供合成目的产物所必须的碳成分。 2、来源 糖类、油脂、有机酸、正烷烃
产品语意设计-教学大纲
《产品语意设计》教学大纲 课程代码：020*******课程名称：产品语意设计 学分：2 总学时：32 讲课学时：16 实践学时：16 适用对象：工业设计专业 先修课程：设计素描、设计色彩、画法几何及阴影透视、构成基础、机械制图、工业设计史、产品设计材料与加工工艺、产品效果图技法与分析、计算机辅助工业设计、设计心理学、产品模型制作、产品形态设计、设计原理等 一、课程的性质与任务 本课程是工业设计专业学生的一门专业基础课。本课程主要通过在产品设计实践为重点的基础上提升研究的高度，使产品设计与研究相结合，使学生具有将社会、生活、文化应用于产品开发的创新能力，以适应社会发展对工业设计的新的要求。产品语意学侧重于从符号学、传播学、认知心理学的角度研究产品形态的使用环境中的象征意义，使学生通过学习了解并掌握新的设计思考的角度和敏锐的观察力，使学生从感性认识提升到理性认识，并且引导以产品语意学在设计中广泛扩展思路，帮助学生提高设计的创新能力。激发学生的学习欲望和探究精神，在学习过程中，学生既有独立思考，又有合作讨论，有意识、有目的地培养学生自主学习的良好习惯以及协作共进的团队精神。 本课程教学目的为拓宽学生的文化视野，启发学生的创造性思维，掌握创意思维的方法，学会多角度、创新性的思考、解决设计问题。 二、课程教学的基本要求 （一）知识目标 1.掌握产品语意的概念、层次及价值； 2.重点掌握功能性语意、象征性语意、趣味性语意及关怀性语意的理解； 3.熟悉产品语意表达的思维、方法及特征； 4.掌握产品语意设计的应用流程、要点； 5．熟悉信息时代产品语意的发展趋势，以及产品语意设计及表达的思路； 6．熟悉产品语意设计在设计实践中的运用于体现。 （二）能力目标 养成设计师应具备的基本素质：勤于思考的习惯，善于发现问题；勤于记录的习惯，善于捕捉灵感；养成打破常规，创新性思考问题的思维方式及表达。拓宽学生视野，改善知识结构，培养学生的创新能力，使学生能实践操作与本理论专业的知识有机地结合起来。培养良好的观察能力、审美能力、创新能力、造型能力。 三、课程教学内容 第一章产品的语言
各种培养基的配方
各种培养基的配方（全） 培养基编号培养基名称培养基组份 SICC0009 醋酸菌培养基(Ⅰ) 豆芽汁20%，葡萄糖1%，碳酸钙2%，乙醇2%，琼脂2%。乙醇：杀菌后加入。 SICC0010 醋酸菌培养基(Ⅱ) 酵母膏0.5%，葡萄糖1%，碳酸钙2%，乙醇2%，琼脂2%。乙醇：杀菌后加入。 SICC0011 乳酸菌培养基(Ⅰ) 蛋白胨1%，牛肉膏1%，酵母膏0.5%，葡萄糖1%，番茄汁20%，土温-80 0.05%，PH 5.4( 0.4M醋酸钠缓冲液或醋酸调节)，琼脂 2 %。 SICC0012 乳酸菌培养基(Ⅱ) 牛肉膏0.5%，酵母膏0.5%，蛋白胨1%，葡萄糖1%，乳糖0.5%，氯化钠0.5%，琼脂2%。 SICC0013 乳酸菌培养基(Ⅲ) 100 Bx麦芽汁中加入酵母膏0.5%,无菌碳酸钙 0.6%,琼脂1.5～2.0%。 SICC0014 脱脂牛奶培养基12%脱脂奶粉溶液于0.6㎏/cm2灭菌20分钟后,将灭过菌的脱脂牛奶置于30℃保温箱中培养3天,经检查确实无菌即可使用。 培养基编号培养基名称培养基组份SICC0001 60 Bx麦芽汁琼脂暂时无数据SICC0002 100 Bx麦芽汁琼脂暂时无数据SICC0003 120 Bx麦芽汁琼脂暂时无数据SICC0004 100 Bx米曲汁琼脂暂时无数据SICC0005 120 Bx米曲汁琼脂暂时无数据 SICC0006 丁二醇培养基牛肉膏1%，葡萄糖1%，氯化钠0.5%，蛋白胨1%，PH7，琼脂1.5～2.0%。 SICC0007 异Vc钠培养基 葡萄糖1%,磷酸氢二钾0.6%,磷酸二氢钾0.3%,硫酸镁0.02%,玉米浆0.3%,氯化钠0.05%,蛋白胨0.5%, PH 6.7－7.0, 琼脂2%。 SICC0008 己酸菌培养基 醋酸钠0.5%,磷酸氢二钾0.04%,硫酸镁0.02%,硫酸铵0.05%,酵母膏0.5%,乙醇2%,碳 酸钙1%,琼脂2%。乙醇：杀菌后加入。
工业设计史 第三章第1节 市场的扩展及其对设计的需要
第三章第一节 市场的扩展及其对设计的需要 18世纪下半叶，英国的工业革命使纺织、金属和陶瓷工业中出现了新的组织和生产方式，与此同时，中产阶级崛起，并产生了对新商品的要求。早在17世纪末，就已存在着一种普遍的富足感，即使英国社会中最下层的人们也能负担得起一些小的奢侈品，如花边、缎带、纽扣等，用于窗帘、餐巾、桌布等织物的消费显著增加。当时10%～15%的家庭开支是用来购买纺织品，这是衡量家庭生活水准的一项标志。这种普遍富足感的形成原因是显而易见的，同样的工资可以购买更多的商品，随着海外贸易的增长，各种进口商品充足。尽管形成工业革命的若干技术上的进步在当时也为欧洲大陆上的科学精英所知，但由于英国享有政治稳定、中央政府、自由企业和实用哲学等背景，并且拥有丰富的自然资源，所有这些使得英国能首先获得由工业革命所带来的商业上的利益。由于英国先于其他国家面临工业革命所产生的社会和艺术上的后果，使英国的工业设计首先发展起来。随着国内市场对商品需求的不断增长，英国从一个农业国家转变成了一个工业化的国家，农村人口大量流向城市中的工厂。由于制造业不再依靠水力以及以家庭为单位的手工作坊，生产开始在工厂内进行。随着伦敦成了商业中心，银行家、商人以及与商业有关的其他一些人士大量在首都定居。 在文化方面，是法国在18世纪上半叶依然左右着人们的审美情趣，许多商品为洛可可式风格所支配。到18世纪末，意大利成了设计师们寻求灵感的所在，新古典（Neo-classicism）成了时代的风尚。18世纪各种流行的风格此起彼伏，从巴洛克、洛可可、中国风、哥特式直到新古典，表明了日益扩展中的市场对于新奇的不断追求。18世纪的审美趣味由于竞相提高自己身份的思想而广为传播，贵族所喜好的任何东西都很快为中产阶级模仿，那些新兴的暴发户如商人、银行家更是如此。他们渴望用消费“情趣高雅”的商品来表现他们新近聚敛起来的财富，显示其社会地位和艺术趣味。社会低层的人们也亦步亦趋。制造商们充分认识到了这一新的、巨大的市场，在向社会其余阶层推出其产品之前，他们小心翼翼地力图使自己的产品满足贵族的要求，并与时尚相吻合。这表明了在批量生产开始之时，制造商和设计师已意识到了产品风格的意义。这种发展是很关键的，因为把文化引入到工业是工业设计的开端，它标志着简单工作的手工艺人逐渐从经济中消失。 18世纪时市场开发和广告宣传作为竞争的手段开始兴起，社会中各阶层相互渗透融合，一个日益增长的“大众市场”逐渐形成，这些都使得统一设计的产品能为社会所接受。
培养基的主要成分及其作用
培养基的主要成分及其作用 培养基是用人工方法配制而成，适合微生物生长繁殖需要的混合营养基质。适宜的培养基不仅用于细菌的分离、纯化、传代及菌种保存等，还可用于研究细菌的生理、生化特性。因此，掌握培养基的制备技术及其原理，是进行细菌学检验的重要环节和必不可少的手段。 细菌的生长繁殖除需要一定的营养物质，如含氮化合物、糖类、盐类、类脂质及水外，有的还需加入特殊营养物质，如维生素的辅助生长因子或某些其他特殊因子；有的则需加入指示剂或抑制剂，以利于细菌的分离和鉴定。 1．营养物质营养物质提供细菌生长繁殖所需的能量、合成菌体的原料以及激活细菌酶的活性和调节渗透压等作用。细菌需要的营养物质主要有氮源、碳源、无机盐及生长因子。 (1)蛋白胨：是由动物或植物蛋白质经酶或酸碱分解而产生的中间产物，是培养基中最常用的成分之一，主要供给细菌氮源，合成菌体蛋白质、酶类等，另外还具有缓冲作用。由于蛋白质的来源和消化程度不同，因而制得的蛋白胨质量相差很大。按照生产原料的性质，蛋白胨可分为植物胨和动物胨两类。蛋白胨经喷雾干燥成粉末，吸水性较强，保存时应干燥密封，防止潮解结块。 (2)肉浸液：系用新鲜牛肉(去掉脂肪、肌膜及肌腱等)浸泡煮沸制成的肉汤。肉浸液中包括含氮和非含氮两类浸出物，还有一些生长因子。作为细菌生长所需要的氨源和碳源，由丁加热后大部分蛋白质凝固，仅留少部分氨基酸和其他含氮物质，不能满足细菌生长需要，故在制作培养基时，一般需加1％～2％蛋白胨和0.5％的NaCl。 (3)牛肉膏：又称牛肉浸膏，是肉浸液加热浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。其中不耐热的物质如糖类已被破坏，故其营养价值不及肉浸液，但因无糖，可作为肠道细菌鉴别培养基的基础成分。 (4)糖(醇)类：含有细菌所需的碳源。制备培养基所应用的糖(醇)类很多，常用的糖类有单糖(如葡萄糖、阿拉伯糖等)、双糖(如乳糖、蔗糖等)、多糖(如菊糖、淀粉等)：醇类有甘露醇、卫矛醇及侧金盏花醇等。在培养基中加入糖(醇)类物质，除提供细菌作为碳源和能源外，主要利用细菌对糖(醇)类利用能力的差异鉴别细菌。 (5)血液：血液除能增加培养基中蛋白质、多种氨基酸、糖类及无机盐等营养成分外，尚能提供辅酶、血红素等特殊生长因子。此外，还可以观察细菌的溶血现象。 (6)鸡蛋与动物血清：此二者虽非基本成分，但对某些营养要求高的细菌则是必需成分，如培养结核分枝杆菌的鸡蛋培养基和培养白喉棒状杆菌的吕氏血清斜面等。
第三章 工业发酵培养基
第三章工业发酵培养基 一、填空题 1．工业培养基按用途分可分为 、 和 三种类型。 2. 培养中速效碳是指，速效氮是指。 3.工业发酵培养基的成分有碳源、氮源、水以及，， 。 4. 碳源物对微生物的功能是 __和_ __，微生物可用的碳 源物质主要有___ _、___ _、__ _、__ _、__ __等。 5. 微生物利用的氮源物质主要有_ _、_ _、_ __、_ __、__ _等。 6. 生长因子主要包括 、 和 。 7. 在微生物研究和生长实践中，选用和设计培养基的最基本要求是 __ _、_ _、_ _、_ _和 _ _。 2、名词解释 1.前体 2.促进剂 3.碳氮比 4.孢子培养基 5.玉米浆 6.发酵培养基 三、判断题 1. 培养基灭菌前加豆油，主要是预防泡沫的产生和提供氮源。 2. 青霉素发酵培养基中添加苯乙酸目的是促进产量的增加。 3. 前体是构成细胞结构的小分子物质。 4. 营养成分碳源是细胞组成成分和各种产物的构成元素，不能作为生物 能量代谢的必需元素。 5. 柠檬酸可调节培养基的ｐＨ，但不能作为碳源被菌利用。 6. 在味精生产时培养基中添加青霉素是为了抑制杂菌。 7. 在固体培养基中，琼脂的浓度一般为0.5—1.0%． 8. 培养基中加入一定量的NaCl，其作用是调节渗透压。 四、选择题 ⒈大肠杆菌液体培养时，它首先利用的碳源是（ ）。
A 淀粉 B 乳糖 C 葡萄糖 D 玉米粉 ⒉ 适合细菌生长的C/N比一般为（ ） A 5：1 B 25：1 C 40：1 D 80：1 ⒊实验室常用的培养细菌的培养基是（ ） A 牛肉膏蛋白胨培养基 B 马铃薯培养基 C 高氏一号培养基 D 麦芽汁培养基 ⒋下列物质属于生长因子的是（ ） A．葡萄糖 B．蛋白胨 C．NaCl D．生物素 ⒌食品工业微生物发酵一般要求培养基原料( ) A.价格高质量好 B.营养好价格高 C. 价廉易得 D.纯度高 6 无机氮是速效氮，因为其（） A．微生物对其吸收快 B．是无机物 C. 纯度高 D.价廉易得 7 下列哪些是生理碱性物质（） A．硝酸钠 B．氯化钠 C．氢氧化钠 D．氯化铵 8 平板划线分离法需要下面所有的物品，除了( )之外。 A 接种环 B 琼脂培养基平板 C 细菌的培养物 D 电泳仪 五、问答题 1. 选择和配制发酵培养基应遵循哪些基本原则？ ①必须提供合成微生物细胞和发酵产物的基本成份； ②所用的单位营养物质能产生最大量的微生物体或发酵产物； ③能形成最大浓度的微生物体或产物； ④能形成最大产物生成率，从而缩短发酵周期； ⑤尽量减少副产物的形成，便于产物的他离纯化； ⑥对生产中除发酵以外的其他方面如通气、搅拌、精制、废弃物的处理等所带来的困难最少；
常用培养基的配方修订稿
常用培养基的配方 WEIHUA system office room 【WEIHUA 16H-WEIHUA WEIHUA8Q8-
伊红美蓝培养基 原理 一般用来鉴定大肠杆菌。 伊红为酸性染料，美蓝为碱性染料。 当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色，再与美蓝结合形成紫黑色菌落，并带有绿色金属光泽。 在碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色，伊红和美蓝不能结合，故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。 常用的伊红美蓝乳糖培养基，可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌，因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸，菌体带H+，故菌落被染成深紫色，从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽。 用伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌 步骤如下： ①制作伊红美蓝培养基，趁热注入培养皿中，凝成平板，待用。 ②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水，按1：10稀释。 ③取毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。 ④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18～24小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落，菌落中心呈暗蓝黑色，发金属光泽。 ⑤将菌落接种于斜面培养基上（由营养琼脂培养基制成）。
蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 20~30g 蒸馏水 1000ml 2%伊红水溶液 20ml %美蓝水溶液 13ml 储备培养基的制备 先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为~。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。 制法 将蛋白胨、磷酸盐和琼脂溶解于蒸馏水中，校正PH，分装于烧瓶内，121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃，加入伊红和美蓝溶液，摇匀，倾注平板。 麦康凯培养基 原理 1.全称麦康凯琼脂或是麦康凯
细菌培养基
细菌培养基 培养基的制备 一、目的与要求 （一）学习制备培养基的基本技术。 （二）制备牛肉膏蛋白琼脂培养基。 二、原理 牛肉膏蛋白培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌培养基，这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营养物质，可供作繁殖之用，制作固体培养基时须加 2%琼脂，培养细菌时，应用稀酸或稀碱将PH 调至中性或微碱性。牛肉膏蛋白培养基的配方：牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，NaCl0.5%，pH7.4～7.6。 三、材料与仪器 （一）试剂牛肉膏，蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。 (二)其他试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，漏斗，乳胶管，弹簧夹，纱布，棉花，牛皮纸，线绳，pH 试纸，电炉，台称。 四、操作步骤 （一）称量根据用量按比例依次称取成分，牛肉膏常用玻棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶化后倒入烧杯，蛋白胨易吸湿，称量时要迅速。 （二）溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，加热，逐一加入各成分，使其溶解，琼脂在溶液煮沸后加入，融化过程需不断搅拌。加热时应注意火力，勿使培养基烧焦或溢出。溶好后，补足所需水分。 （三）调PH 用1mol/L NaOH 或1mol/L HCl 把PH 调至所需范围。 （四）过滤趁热用滤纸或多层纱布过滤，以利于某些实验结果的观察，如无特殊要求时可省去此步骤。 （五）分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三解瓶内；分装时注意，勿使培养基沾染在容器口上，以免沾染棉塞引起污染。 1．液体分装分装高度以试管高度的1/4 左右为宜，分装三角瓶的量则根据需要而定，一般以不超过三角瓶容积的1/2 为宜。 2．固体分装分装试管，其装量不超过管高的1/5，灭菌后制成斜面，斜面长度不超过管长的1/2。分装三解瓶，以不超过容积的1/2 为宜。 3．半固体分装装置以试管高度的1/3 为宜，灭菌后垂直待凝。 （六）加棉塞分装完毕后，在试管口或三解瓶口塞上棉塞（或泡沫塑料塞及试管帽等，以阻止外界微生物进入培养基而造成污染，并保证有良好的通气性能。 （七）包扎棉塞头上包一层牛皮纸，扎紧，即可进行灭菌。 （八）保存灭菌后的培养基放入37℃养箱中培养24 小时，以检验灭菌的效果，无污染方可使用。
培养基的配制
实验五微生物培养基的配制和灭菌 培养基是将微生物生长繁殖所需要的各种营养物质，用人工方法配制而成的各种营养基质。培养基为微生物的生长提供营养物质和生存空间。它具有微生物正常生活所需的各种养料和适宜的环境条件；（1）适当组分和比例的营养物质；（2）适宜的pH值；（3）合适的渗透压；（4）保持无菌状态。所以培养基是培养微生物所必需的最主要材料。培养基的配制是微生物学工作者的主要技术操作之一。 培养基的种类： 根据培养基的组成成分，可将培养基分为三类： 合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 半合成培养基：由一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。 天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成的。 从培养基的物理状态来分： 液体培养基：不加凝固剂的液态状培养基。 固体培养基：在液体培养基中加入2％左右的凝固剂的固体状培养基或固体状农副产品培养基。 半固体培养基：在液体培养基中加入0.2％-0.5％凝固剂而成的半固体状培养基。 微生物最常用的凝固剂为琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。它不是一种营养物质，只能被极少数种类的细菌分解利用。琼脂是从海藻中（主要是石花菜）提取而制成的。是一种多糖类化合物，主要成分是复杂的多糖硫酸酯钙盐，琼脂是一种可逆性胶体，在常规浓度下加热到96C以上即成溶胶状态，融化的琼脂，当温度下降到42℃以下，又凝固为固体。 一、目的要求 l. 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 2. 了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 3. 熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。
二、实验材料 1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O等。 2. 高压蒸汽灭菌器、恒温干热灭菌箱、细菌过滤器、紫外线杀菌灯。 3. 其它：天平、牛角匙、电炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、漏斗、漏斗架、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带棉塞的无菌试管、无棉塞的空试管、培养血、吸管、各种包装纸防水纸、绳索、棉花、标签等。 三、实验程序 （一）、培养基配制 l. 培养基配制的一般方法和步骤 （1）称量：按照培养基配方，正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 （2）溶化：在搪瓷杯中加入所需水量（根据实验需要加入蒸馏水或自来水），用玻棒搅匀，加热溶解。 （3）调pH值（调pH也可以在加琼脂后再调），用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照。 表6-1 琼脂和明胶的特性比较 （4）加琼脂溶化，在琼脂溶化过程中，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦，待完全溶化后，补足所失水分，一般数量少，时间短不必补水。 （5）分装：在漏斗架上分装。根据不同的需要进行分装，一般制斜面的装置为管高的1／5 特别注意不要使培养基粘污在管（瓶）口上以免浸湿棉塞，引起污染。
vi设计教学大纲
《VI设计》课程教学大纲 课程代码：060211 课程类别：专业必修课 总学时数：36 学分： 一、课程教学目标和基本要求 （一）教学目标: 通过本课程的学习，使学生理解和增强对VI设计的认识，增强从概念思维到表现的能力，培养个性设计素质，掌握主要的设计流程及实际当中的运用操作能力。 （二）基本要求: 通过本课程的学习使学生全面了解与基本掌握企业形象设计（CIS）中的作用和相互关系的理论系统、策划顺序、设计方法，通过典型作业训练和辅导，使学生具备较好的商标标志设计能力和合作完成企业形象策划、设计能力。 二、教学学时分配
三、教学内容 第一章 VI基础认识 （一）教学目标： 了解标志的相关基础知识和国内外标志设计的发展趋势。（二）重点： 初步认识VI设计的概况。 （三）难点： 掌握VI设计理论的基础知识。 （四）教学内容： 的历史，现状与发展 的含义及构成特点 、BI、VI之间的关系 设计的基本程序 实训项目一： 阅读和收集大量优秀标志设计作品。 第二章VI基本要素设计 （一）教学目标： 掌握标志的造型手法、功能及构图形式。 （二）重点： 了解标志设计的要素和主题。 （三）难点：
运用软件制作LOGO设计。 （四）教学内容： 1.命名 2.标志的设计 3.标准字体设计 4.实践标志设计 实训项目二： 设定一个题目，让学生对其进行简单的标志设计。 第三章 VI应用要素设计 （一）教学目标： 掌握标志的造型手法、功能及构图形式。 （二）重点： 学习标志中色彩及标准字的基本运用。 （三）难点： 运用软件结合企业理念制作LOGO。 （四）教学内容： 1.企业标准字与标准色练习 2.标志设计的实践 实训项目三： 利用多种表现形式练习标志设计。 第四章 VI应用识别系统设计 （一）教学目标： 通过掌握企业视觉要素的基本系统和应用系统的内容最后完成