抗体纯化常见问题回答

用

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鉴于亲和层析技术的发展,抗原抗体之间的特异性相

互作用，使得抗体的纯化相对来说比较简单,一步亲和层析

即可达到90%以上的纯度, 这为科研和实验室使用的抗体

纯化提供很好的解决方案。然而要得到高质量高纯度的抗

体，需要我们从样品处理，纯化介质的选择以及纯化方法

上悉心考虑，这里我们就这些大家常见的问题来讨论。

1，对于血清、腹水或细胞悬浮物来源的抗体样品，

有哪些样品处理的方法？

在纯化前，合适的样品处理不仅可以帮助我们得到高

纯度高质量的抗体,还有助于保护亲和层析柱，延长使用寿

命。对于血清、腹水或细胞悬浮物来源的样品经常含有脂

蛋白，酚红，小分子污染物等等。

腹水中经常含有高浓度的脂蛋白，这些脂蛋白和脂

类物质会堵塞层析柱，最好能在纯化之前去除。方法一是

在二价离子存在的情况下，硫酸右旋葡糖酐能够沉淀脂蛋

白，沉淀可以通过离心除去；方法二PVP能产生一个pH值

依赖的沉淀效应，PVP在pH＝7.0时能够沉淀b-脂蛋白和球

蛋白。很多时候，可以考虑进样前用亲和结合缓冲液稀释

腹水，不仅保证样品的结合pH，还有利于降低黏度。

酚红是一种在实验室细胞培养中的pH指示剂，虽然

并不直接的影响纯化，但是酚红可能结合到某些纯化介质

上，应该尽可能早的被除去，可以使用脱盐柱除去酚红。

对于一些低分子污染物可以使用分级沉淀法去除，如

硫酸铵沉淀，羊脂酸沉淀的方法。

最后利用脱盐柱来更换缓冲液并除盐，把样品换到

合适的缓冲液中（PH和盐浓度），并除去没有用处的小分

子。更多详细的方法可以参考《抗体纯化手册》。

2，实验室需要纯化小鼠的IgG1，我是选择ProteinG

还是ProteinA？

首先我们要根据不同的种属亚型参考“相对结合强

度”表（图1）来获取选择哪种配基的指导，针对小鼠的

IgG1， ProteinA结合相对弱，可以选择ProteinG配基的介

质。但由于Protein G结合力较强，因此有时需要pH低于2.0

才能有效洗脱，容易导致某些对酸敏感的抗体聚集沉淀。

此时可以考虑结合力相对较弱的protein A填料，结合缓冲

液中需要加入0.5~3M 的氯化钠以增加结合能力，目标抗体

在pH4.5左右就可以被温和的洗脱。

若实验室有AKTA系统，那么Hitrap ProteinG HP是高分

辨率方便快捷的首选。

若没有AKTA系统，MabTrap抗体纯化试剂盒可以给你

带来最大的快捷和便利，试剂盒含有一个Hitrap ProteinG

HP1ml的预装柱，结合，洗脱和中和的缓冲液，一个具有

接头的注射器、以及经过优化的纯化操作规程。

Ab Spin Trap是预装了100ulProteinGHP填料的离心

柱，和标准的小离心机一起使用，仅用20分钟就可以完成

一次小规模的抗体纯化。

ProteinG HP MultiTrap96孔板适用于高通量的筛选。

3，面对ProteinA如此多的配基形式，它们有何区别

和应用？

蛋白A (Protein A) 来源于金黄色葡萄球菌的一个株

系，它含有5个可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合的结

构域，可以特异性的和样品中的抗体分子结合，而使其他

杂蛋白流穿，具有极高的选择性，通常一步亲和层析就可

达到超过95%的纯度。

ProteinA sepharoseCL-4B，是将从金黄色葡萄球菌表

达纯化出蛋白A通过CNBr的方法偶联在sepharose CL-4B的

介质上，可以纯化体液或细胞培养液中的免疫球蛋白。

nproteinA sepharose4FF，nprteinA即为天然 (Native Protein

A)，表示其在生产过程中没有引入任何动物来源的组分。

rproteinA sepharose4FF，重组的蛋白A (rProtein A)，

经基因工程改造后含有一个C末端半胱氨酸，可以单一位

点定向偶联于琼脂糖骨架上，有效降低空间位阻，增加了

与IgG 的结合能力。同时配基在发酵和纯化过程中没有引

用人源的IgG，避免了人源IgG的污染风险。

rmpProteinA，多位点附着的技术，保证更低的配体

的脱落。一步高度纯化单抗和多抗。

2005年我们推出了新一代的MabSelect ，是第一个使

用高流速琼脂糖凝胶 ( High ?ow Agarose) 作为骨架的新型

蛋白A层析介质，专为大规模抗体纯化而设计。相比传统

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Fast Flow 填料，高流速琼脂糖具有高流速高载量，更低的配体脱落，易于清洗与除菌消毒，寿命更长、更经济，适合快速高效的进行抗体生产和放大，已经成为治疗用单抗纯化和放大的标准介质。

4，为什么洗脱之后没有看到正确的条带？

首先我们先看样品是否结合了？先查不同的种属亚型参考“相对结合强度”表（图1），看有没有亲和性，柱子选得对不对。然后检查结合缓冲液和样品的pH 是否7.3附近。必要时将原始样品和流穿跑还原和非还原SDS-PAGE 进行分析，有条件可以做Western Blot ，或检测Elisa 是结合上去没有洗脱?

检查洗脱缓冲液pH 对否？建议依次用pH3.0, pH 2.5, pH 2.0洗脱，跑电泳或ELisa 等检测洗脱产物

洗脱峰是否立即中和？蛋白长期在酸性条件下易水解，中和后也容易产生沉淀

跑电泳的loading buffer 是否新鲜配置？（常遇到还原loading buffer 中DTT 失效，导致电泳条带位置不对）

5， ProteinA 和ProteinG 填料如何清洗再生？

对于Sepharose 基架的ProteinA 和ProteinG 填料的清洗方法可以参考（预装柱同样适用此清洗方法）：

对于沉淀或变性的蛋白：

用6M 盐酸胍清洗2个柱体积，立即用5个柱体积的PH7-8结合缓冲液来清洗，反向冲洗，每次清洗时间不超过10min 。

对于去除疏水性的物质：

70%乙醇浸泡12小时左右，然后立即用5个柱体积的PH7-8结合缓冲液来清洗，反向冲洗。

对于新一代的Mabselect SuRe 的介质，通过改造对碱敏感的Asp 氨基酸突变为耐碱的氨基酸得到新的四聚体配基SuRe 配基，将此新配基偶联到高流速琼脂糖基质上，成为耐碱的新型高流速Mabselect SuRe 蛋白A 层析介质，可以耐受0.1~0.5N 的氢氧化钠在位清洗/消毒大大降低了抗体产品被内毒素污染和批间交叉污染的风险，清洗效果更好，有利于延长介质使用寿命，同时也大大降低了CIP/SIP 的成本。

6，抗体药物纯化过程中，如何降低聚集体含量？

在上游细胞培养，控制最佳的收获时机(TOH)，避免培养过程中抗体聚集；

相比其他蛋白A 填料，Mab select SuRe 可以用更温和的洗脱条件，即提高洗脱pH 0.5-1个单位；

亲和低pH 洗脱液中加入保护剂 (Arg 等)；亲和低pH 洗脱后，快速中和；适当降低亲和层析进样量；

样品处理和纯化过程中，尽量保持较低的温度 (4-8C)使用Superdex200, 离子交换层析, 疏水层析, Capto adhere 等层析技术去除聚集体。（详细的方法请参考《抗体纯化手册》）

7，含FCS 培养表达的human IgG 的纯化中，如何避免牛IgG 干扰？

选用专为纯化human IgG 而开发的新型Igselect 填料, 可以特异的识别结合human 的IgG ，而不结合其它种属来

源的IgG 。

也可以考虑先用传统的Protein A 或G 纯化，再使用疏水层析HIC 来去除牛IgG 。

使用IgG 含量较低的血清，也有助于后期的分离纯化。

8，我需要纯化抗体的Fab 片段，有什么办法吗？

KappaSelect 是专为纯化 Fab （kappa ）片断而设计的亲和 介质，能有效地捕获 Fab ，获得高纯度和高产量的 Fab 。 KappaSelect 是通用电气医疗集团客户定制设计填料项目之一，其以高度刚性的琼脂糖基质为基础，能在大规模生产中承受高流速和低反压。它是一种亲和填料，配体能与 Kappa 轻链的恒定区结合（也就是说，缺乏 Kappa 轻链恒定区的片断不会与之结合）。因此，KappaSelect 能够结合其它包含 Kappa 轻链恒定区的目标分子，如 IgA 和 IgM 。配体通过长的亲水空间臂与基质相连，使之易于结合目标分子（图2）。另外Protein G 在某些情况下可以和Fab 有结合作用，因此可以用于Fab, F(ab')2的纯化。

注意：kappaselect 只能结合human 抗体的k 轻链

。

通用电气 (中国) 医疗集团

单克隆抗体制备的基本原理

单克隆抗体制备的基本原理 一、单克隆抗体的概念 抗体（antibody）是机体在抗原刺激下产生的能与该抗原特异性结合的免疫球蛋白。常规的抗体制备是通过动物免疫并采集抗血清的方法产生的，因而抗血清通常含有针对其他无关抗原的抗体和血清中其他蛋白质成分。一般的抗原分子大多含有多个不同的抗原决定簇，所以常规抗体也是针对多个不同抗原决定簇抗体的混合物。即使是针对同一抗原决定簇的常规血清抗体，仍是由不同B细胞克隆产生的异质的抗体组成。因而，常规血清抗体又称多克隆抗体（polyclonal antibody），简称多抗。由于常规抗体的多克隆性质，加之不同批次的抗体制剂质量差异很大，使它在免疫化学试验等使用中带来许多麻烦。因此，制备针对预定抗原的特异性均质的且能保证无限量供应的抗体是免疫化学家长期梦寐以求的目标。随着杂交瘤技术的诞生，这一目标得以实现。 1975年，Kohler和Milstein建立了淋巴细胞杂交瘤技术，他们把用预定抗原免疫的小鼠脾细胞与能在体外培养中无限制生长的骨髓瘤 细胞融合，形成B细胞杂交瘤。这种杂交瘤细胞具有双亲细胞的特征，既像骨髓瘤细胞一样在体外培养中能无限地快速增殖且永生不死，又能像脾淋巴细胞那样合成和分泌特异性抗体。通过克隆化可得到来自单个杂交瘤细胞的单克隆系，即杂交瘤细胞系，它所产生的抗体是针

对同一抗原决定簇的高度同质的抗体，即所谓单克隆抗体（monoclonal antibody，McAb），简称单抗。 与多抗相比，单抗纯度高，专一性强、重复性好、且能持续地无限量供应。单抗技术的问世，不仅带来了免疫学领域里的一次**，而且它在生物医学科学的各个领域获得极广泛的应用，促进了众多学科的发展。 德国科学家柯勒（Georges Ko1er）和英国科学家米尔斯坦（Cesar Milstein）两人由此杰出贡献而荣获1984年度诺贝尔生理学和医学奖。 二、杂交瘤技术 （一）杂交瘤技术的诞生 淋巴细胞杂交瘤技术的诞生是几十年来免疫学在理论和技术两方面 发展的必然结果，抗体生成的克隆选择学说、抗体基因的研究、抗体结构与生物合成以及其多样性产生机制的揭示等，为杂交瘤技术提供了必要理论基础，同时，骨髓瘤细胞的体外培养、细胞融合与杂交细胞的筛选等提供了技术贮备。1975年8月7日，Kohler和Milstein 在英国《自然》杂志上发表了题为“分泌具有预定特异性抗体的融合细胞的持续培养”（Continuous cultures of fused cells secreting antibody of

客户常见问题及话术解答(股票)

客户常见问题及话术解答 １我的股票现在被套着，就放到那里吧，等解套再说吧 答：针对此类客户要分析出股民目前的心态，他说这句话，是真的这样想，还是找的一种借口，可引导到“你是不是害怕跟着我们赚不到钱”，你的股票套了多长时间了？大盘都涨了两倍，那你的股票呢？既然这样，那你觉得你的股票解套的机会又能有多大!万一它又跌了怎么办？我能理解你的心情，你无非是不忍心割肉是吧！XX老师说了，股票套牢不要紧，关键是心态不要套牢了，坐等解套不是办法，解套有几种方法。好的股票有解套的机会可以留住，在这过程当中最好还能做一些高抛低吸，推平成本；一种方法是不断低位补仓摊平成本，一到成本价以上尽早出来，但这种风险很大；一种是不好的股票，须坚决的止损，把资金盘活换基本面优质，成本性好的股票，早日把损失转回来。并且，目前的市场，你等着解套根本就是一种不明智的选择，现在的大盘正在高位震荡，个股分化极其严重。不好的股票会一路跌下去。现在的大盘如果是在2000点以下，你完全可以放到那里等解套。可是，现在在2800点以上，所以这个时候只能来做短线，才能赚钱。其实，先生/女士，你肯定不是在等解套了，您是担心跟着我们赚不到钱，是吧？（参加跟着我们做可以赚钱的话术） ２.我只做长线投资，不想做短线也不想换股票了。 答：如果能宣导好的股票做长线确实能更省心去赚钱！但风险也是最大的！为什么这样说呢？因为中国股市历史遗留下来的问题，真正值得长期投资的股票很少，就算让你知道了的时候，他的股价也大多给主力炒高了，而且中国的上市公司作假的实在太多了，今天还好好的，明天可能会传出报表作假，有坏账啊，公司高层携款私逃等等问题出来。如果你选的是这样的股票，损失就会很严重。所以在中国股市还没有完全规的前提下，根本没办法做长线！虽然有人说长线是金，短线是银！但那也是针对一个完善的，成熟的股市而言的！就算不小心给你碰到一个好的股票，但他长线的波动也会非常大。并且，目前的盘势是在高位震荡，个股分化极其严重，根本不适合做长线的操作，做长线只能来来回回的坐电梯。现在的盘势，只适合做短线，做波段（解下来讲老师的绩效） ３.要跟家里人或者朋友商量商量再说 答：你这样做我都能理解！是对家里人最起码的尊重！可是，我始终认为，使自己在股市里的资金增值，才是对家里人最好的尊重。你家里人知不知道你在做股票啊？你家人做不做股票呢？你做股票一直在亏钱，你家人也没有给你好的建议，说明他们在股市根本没办法帮你，在股市里面，帮你赚钱的只有我们专业的老师和机构，一些专业的、权威的、有指导性的意见！还有，万一你家人不同意你怎么办？一边是亏损了这么长时间好不容易认识了鸿运老师，找到赚钱翻身的希望，一边家人又反对，那岂不是左右为难！既然咱们知道跟着我们老师肯定能赚钱，我建议咱们到不如先跟着老师合作上，等赚到钱之后，咱们再把这件事情跟家人说明白。那时候你家人不仅能理解你，还会夸你做的好！（讲故事给他，故事中的主角，一定要和客户相像，主要激昂这个客户当初也是瞒着家里人跟老师来做的，后来得到了很好的结果），其实，先生/女士呀，你是不是担心跟着我们赚不到钱，没办法和家里人交代，对不对？（参见我们做能赚钱的话术） ４. 现在大盘涨了这么多，应该回调了，所以现在不打算做股票了，等过一段时间再说 答：也许你说的对，大盘可能要回调了，但也只是可能而已，他也可能继续上涨！因为行情永远都是在绝望中诞生，在犹豫中延伸，在大家都不敢相信的时候，机会反而是最大的。在每一个相应的高点，咱们都会有相应的害怕和怀疑，但往往因而错过了不少机会，吃了不少亏了，难道咱们还要继续犯这样的错误吗？先生/女士啊，你做了这么多的股票，大盘你看对了几次？(举前期大盘涨，他们看准的例子，叫他回忆)。而且，大盘只有一个基础，关键是看你能不能把握住个股。大盘涨了两倍，而你又赚了多少？再说，大盘回调了反而是好事啊！对于买股票来说回调才是最好的卖点。况且跟着我们做股票根本不用担心大盘的的涨与跌，我们老师说了，这时候咱们正确的做法应该是大盘放两边，个股摆中间，要重个股轻大盘，我们选出来的个股都是独立于大盘能够不断上涨的，你现在如果在回调的时候跟上老师的操

-家长咨询几个常见问题的回答

家长咨询中常见问题的回答 作为睿智教育咨询师，家长最信任的为最好。但是有一个核心是，希望我们的咨询师养成一个习惯。这15个问题，你是否都在回答每个问题的同时，都一一准备好了有力的证据和道具，边说的时候，边拿出我们的证据和道具说明这个是按照我们说的进行的，这个是最关键并有效的的，是互动加双重保险的作用，会让家长更看到我们更真实反馈。 ■ 1 师资的资历 我们的老师由两部分组成，我们有自己的专职老师，有自己的个性化研究院和教师培训中心。还有部分是目前在各个学校任教的一线兼职老师，不管是我们的兼职老师还是专职老师，我们都有严格的任用程序，都要经过严格的考核和试讲，所以在专业方面是不用担心的。而且我们会根据孩子的学科特点和性格特征等因素给孩子匹配一个最适合他的老师。只有适合孩子的老师才是最好的老师。另外我们还有专业的陪读老师和答疑老师，他们都是持证上岗，具有教师资格证，并且经过严格培训和筛选，都是合格的老师。 ■2教学质量 我们对每一个孩子都是全力以赴，认真踏实对待的。我们为每个孩子量身定做一套学习解决方案，匹配专业的教师队伍，精品小班教学，激发孩子的学习兴趣，改善学习习惯和学习方法，为在质量上给予确保我们会召开课前研讨会，学生和家长经过长期与我们的任课老师老师、学管师就辅导的情况展开讨论，然后家长和学生也会对老师的教学有一个直观的了解，我们会在得到家长认可的事情下才给孩子上课。我们还有上课后的教学反馈表，定期召开家长交流会。 ■3 你们师生匹配真能那么科学吗？年轻老师与“名师”有差距？ （1）我校最关键的环节，也就是教师的匹配环节，我们是有充分的科学依据的，否则很难保证教学质量的。 （2）我们给每一个孩子都做了个性化的测试，从中了解孩子各方面的情况，老师也是根据孩子的个性化报告分析进行匹配的。再者我们也知道家长您的担心，我们的老师选拔是很严格的。 （3）我们在给孩子匹配老师的时候，是完完全全根据孩子的个性特点来的，他的性格适合什么样的老师，他的学习方法适合什么样的老师，他的心理特点是怎么样的，这些都是我们在给孩子选配老师的时候重点考虑的因素。可能您会比较偏爱名师，可是名师对您孩子来说不一定是最好的老师，只有最适合您孩子的老师才是最好的！其次，选配老师是一个关键的关节，我们是需要严格把关的，中间如果不是迫不得已的情况是不会换老师的，我们需要对孩子负责，所以希望家长也尊重对孩子的教育。

顾客在购物过程中常见的问题和回答100条

顾客在购物过程中常见的问题及回答100条 本内容主要针对商品价格、款式、面料、颜色、质量、售后、是否合身等一些顾客比较担心和顾虑的问题考虑。 一、关于价格方面的问题及应对答案： 1、太贵了，能不能便宜点？ ----真不好意思确实不能了，我们品牌的衣服不但质量能够保证，而且款式大方，售后服务也特别好，肯定是有物有所值的，您买回去以后也可以放心穿了。 2、其他商场都能还价，你们商场怎么不行？ ----因为我们商场实行统一的明码标价，价格合理而且是透明的，这也是对顾客负责，希望能得到您的理解。 3、我不要你们的赠品，给我打个折吧？ ----您真的是为难我了，但非常抱歉，真的不能给您打折，因为这是公司的规定，再说这个赠品也很实用啊，也代表我们公司的一份心意，其实最重要的是产品适合您。 4、有没有便宜一点的衣服？ ----有啊，您这边请，这几款衣服正在做促销，现在买最划算了，你有喜欢的话可以试穿一下。 5、这件衣服都开线了（或者有其他问题），再给我便宜点吧？（如果就剩一件） ---- 1）这没什么大问题，稍等一下我马上再为您换一件。 2）开线的地方不是很明显，我马上给您处理。 3）（如果顾客仍然要求）请您稍等，我去找主管经理申请一下。 6、你们为什么比其他牌子便宜？ ----我们是新品牌，要想拥有自己的市场，除了过硬的质量，也需要低廉的价位做宣传来吸引更多的人了解和接受，也希望您多多支持我们呦。 7、你们的东西就是贵？ ----也不全是啊，每个品牌都有高、中、低档之分，正好您看到的都是我们这里最贵的，这也说明您的眼光厉害啊，这边也有一些价格相对低廉的，您可以了解一下。 8、为什么篮球鞋比休闲鞋贵？ ----因为篮球鞋加入大量的高科技含量，要考虑到弹跳性和舒适程度，您看篮球鞋是不是比一般的休闲鞋都厚重啊，而且它的寿命也比一般的休闲鞋要长。 9、现在不打折，那我等到打折的时候再来？ ----我也比较赞同您的想法，但我们一般都是到了季末或者是码数不全的时候才打折，如果您到那个时候来说不定就没有合适您的型号了，您虽然获得了相应的打折也该过季子，也不划算啊！我建议您办一张会员卡，这样就可以享受正价货品的折扣优惠了。 10、这块面料是腈纶的，为什么还这么贵，羊毛的才多少钱？（指毛料的衣物） ----虽然是腈纶面料，但是现在利用高科技工艺已经改进，您可以感觉一下手感，它具有羊毛的保暖性和舒适度，而且也避免了羊毛的一些缺点。 11、羽绒服的含量只有70%，还这么贵？ ----是这样的，标准羽绒服的含量是70%，这样的保暖性是最好的，加30%的羽毛是为了起到定型的效果，这样了为使羽绒服比较蓬松，厚薄更加均匀。

课程顾问常见问题及解答教学内容

课程顾问常见问题及 解答

关于前台咨询常见问题的回答 在实际的销售过程中，学员及学生家长会提出各种各样的问题，所有的销售人员须了解怎样回答这些问题，回答质量的好坏直接决定学员和家长对学校的印象。 一.课程顾问守则 1、个性须喜欢小孩子 如果个性不喜欢小孩子，则不适合当课程顾问。家长喜欢自己的小孩受别人喜欢。2、两人结伴来 班务一定要配合好,拉开一个 3、问小朋友要有艺术 小朋友,这边很好玩!对不对? 你喜欢到这边来玩! 对不对? 4、如果来访者问的问题很专业 须提防是否是同业派来的间谍.回答问题须避重就轻。 二.学校(含学校课程、兴趣班及同业比较) 1、小新星英语是一个什么样的机构？ 小新星英语于1987 年成立于湖南长沙,采用连锁特许经营的方式办学,迄今为止已在全国27省建立了500多个分支机构,是一家专门从事少儿英语培训的教育机构. 2、你们采用什么授课方式？与其它英语学校的区别？你们的特色和优势？ 我们采用的是“情景表演式”的教学模式,我们知道孩子都喜欢听故事,所以我们利用孩子的这一特点,采用童话作为我们的主要教学内容。充分利用儿童“好玩,好奇,好胜,好表扬”的心理特征,以游戏为我们的主要教学手段,让孩子在很轻松的氛围中掌握老师教授的内容,最后让孩子会听会说会表演,培养孩子学习英语的浓厚兴趣和自信心。 3、小新星英语教学与剑桥少儿英语有何区别 剑桥英语优点： 1）剑桥带有半官方背景，由团中央、教育部考试中心协助推出（实质上属社会力量办学）。 2）剑桥品牌使人产生丰富的联想。 3）剑桥少儿英语等级考试满足了家长望子成龙的心理。 4）剑桥少儿英语教材有多种版本，其中有两种版本的教材编写得科学、系统、严谨。 剑桥英语缺陷： 1）以应试教学为目的，决定其教学方法比较枯燥、单调。星期一至星期五在学校考，双休日来到业余学校又是考，无疑使学生精神负担加重，容易丧失学习兴趣。 2）剑桥考试是一种内部等级，对考生作用不大。 小新星特色： 1、2004年和北京大学外语学院合作后，在师资培训、教材编写以及在北大举行各类英语 竞赛、英语文化夏令营、少儿暑期口语强化训练（全外教）等方面得到北大的全力支持，品牌及美誉度得到进一步提升。 2、小新星英语是以听说能力和学习能力的培训为目的的教学，使学生按规律、懂规律、 用规律；学习过程以英语教学游戏为主，生动活泼，学生兴趣盎然，因而学习效率高，进步明显。 3、从2000年开始，小新星英语学校组织高级班的学生参加国家公共英语等级考试 （PETS），自今已有1000多人次通过了一至四级的考试。（PETS是国内面对全体公

抗体的制备方法与原理

抗体的制备方法与原理－单克隆抗体的制备 1975年Kohler和Milstein发现将小鼠骨髓瘤细胞与和绵羊红细胞免疫的小鼠脾细胞进行融合，形成的杂交瘤细胞既可产生抗体，又可无性繁殖，从而创立了单克隆抗体杂交瘤技术。这一技术上的突破使血清学的研究进入了一个高度精确的新纪元。 免疫细胞化学的技术关键之一是制备特异性强、亲合力大、滴度高的特异性抗体，由于每种抗原都有几个抗原决定簇，用它免疫动物将产生对各个决定簇的抗体，即多克隆抗体。单克隆抗体则是由一个产生抗体的细胞与一个骨髓瘤细胞融合而形成的杂交廇细胞经无性繁殖而来的细胞群所产生的，所以它的免疫球蛋白属同一类型，质地纯一，而且它是针对某一抗原决定簇的，因此特异性强，亲合性也一致。单克隆抗体（McAb）的特性和常规血清抗体的特性比较见2-3。 表2—3 单克隆抗体（McAb）和常规免疫血清抗体的特性比较 单克隆抗体的制备方法如下。 （一）动物的选择与免疫 1．动物的选择纯种BALB/C小鼠，较温顺，离窝的活动范围小，体弱，食量及排污较小，一般环境洁净的实验室均能饲养成活。目前开展杂交瘤技术的实验室多选用纯种BALA/C小鼠。

2．免疫方案选择合适的免疫方案对于细胞融合杂交的成功，获得高质量的McAb 至关重要。一般在融合前两个月左右根据确立免疫方案开始初次免疫，免疫方案应根据抗原的特性不同而定。 （1）可溶性抗原免疫原性较弱，一般要加佐剂，半抗原应先制备免疫原，再加佐剂。常用佐剂：福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂。 初次免疫抗原1～50μg加福氏完全佐剂皮下多点注射或脾内注射（一般0.8～ 1ml,0.2ml/点） ↓3周后 第二次免疫剂量同上，加福氏不完全佐剂皮下或ip（腹腔内注射）（ip剂量不宜超过0.5ml） ↓3周后 第三次免疫剂量同一，不加佐剂，ip（5～7天后采血测其效价） ↓2～3周 加强免疫，剂量50～500μg为宜，ip或iv（静脉内注射） ↓3天后 取脾融合 目前，用于可溶性抗原（特别是一些弱抗原）的免疫方案也不断有所更新，如：①将可溶性抗原颗粒化或固相化，一方面增强了抗原的免疫原性，另一方面可降低抗原的使用量。 ②改变抗原注入的途径，基础免疫可直接采用脾内注射。③使用细胞因子作为佐剂，提高机体的免疫应答水平，增强免疫细胞对抗原的反应性。 （2）颗粒抗原免疫性强，不加佐剂就可获得很好的免疫效果。以细胞性抗原为例，免疫时要求抗原量为1～2×107个细胞。

2019中考体检常见问题解答

中考体检常见问题问与答（Q&A） 1. Q：中考招生体检都有哪些项目？ A：（1）眼科：左右眼裸眼视力和矫正度数；色觉检查：彩*案及彩色数码检查，单色识别能力检查（色觉异常者查此项）。 （2）耳鼻喉科：左右耳听力（多少米），嗅觉以及耳鼻喉检查。 （3）口腔科：唇腭，口吃，牙齿缺失。 （4）外科：身高，体重，皮肤，面部，颈部，脊柱，四肢，关节。 （5）内科：血压，发育情况，心脏血管，呼吸系统，神经系统，腹部器官（肝、肾、脾） （6）胸部* 2. Q：中考体检需不需要验血？ A：正如上文说提到的，中考体检由眼科检查、耳鼻喉科检查、口腔科检查、外科检查、内科检查、胸部*六部分组成，所以中考体检是不包含验血的！害怕验血的孩子不用紧张了哦。 3. Q：中考体检的时间和地点？ A：考生要按照学校的安排在规定时间到所在区县中小学卫生保健所进行体检。所以各区的情况是不尽相同的。 4. Q：我戴眼镜，眼科检查会有什么影响吗？ A：眼科检查包括左右眼裸眼视力和矫正度数，因此请不要戴隐形眼镜，以免影响视力检查。 5. Q：发现体检结果有疑问怎么办？ A：考生在拿到体格检查结果后，要详细阅读全部内容，如果对体检结果有疑问，认为与自己身体的实际情况不符，应尽快向本区县中小学卫生保健所提出复检要求。 6. Q：我配戴助听器或义眼，检查时需要做什么？ A：配戴助听器或义眼的同学们一定要和体检医生讲明情况，以免影响检查结果及报考建议。 7. Q：还有哪些注意事项呢？ A：体检时要服从工作人员的安排，遵守纪律，保持体检场所整洁、安静。 体检过程中，考生如有问题，可通过带队老师反映，协调解决，不要影响体检医生的工作。

窗口常见咨询问题解答

窗口常见咨询问题解答 一、公共卫生场所 1.办理《卫生许可证》需要什么材料？ 答：办理《卫生许可证》可上广东省办事网上办事大厅-顺德分厅查看办事指南，下载申请表，每份申请表上都有需要提交的材料清单。 2.《卫生许可证》需要每年年审吗？ 答：《卫生许可证》有效期为4年，不需要年审，但需要在有效期届满前30天办理延续换证手续。 3.卫生检测报告和集中式空调通风系统卫生检测报告在哪里可以办理？ 答：根据《公共场所卫生管理条例实施细则》的要求，公共场所经营者应当按照卫生标准、规范的要求对公共场所的空气、微小气候、水质、采光、照明、噪声、顾客用品用具等进行卫生检测，检测每年不得少于一次，集中式空调通风系统检测两年一次。检测结果不符合卫生标准、规范要求的应当及时整改。公共场所经营者不具备检测能力的，可以委托检测。广东省内具有资质的检测机构名单可上顺德区卫生监督所网站查询，顺德区有资质提供检测的机构是佛山市顺德区疾病预防控制中心，地址在大良广东省佛山市顺德区新基三路43号，电话：(0757)22285829。 4.餐饮业的健康证能否用在公共场所上？ 答：目前餐饮业的健康证只能用于餐饮业，公共场所的只能用公共场所的健康证，如体检单位出具了餐饮业健康证，可回体检单位更改过来。 5.空调风管布局图如何出？ 答：使用集中式空调的标明新风口、排风口、排风管道和排风管道；使用分体式空调或柜式空调的标明空调位置和管道、标明排风口、排风管道、排气扇位置，自然通风的要标明门窗位置；特别注意厕所的排气管道要独立，不能与新风管道或空调管道相连接，排风口和新风口不能设在同一位置。使用分体式空调，不存在暗房能通过门窗进行自然换气的可用文字说明代替空调风管布局图。 6.做汗蒸的需要办理卫生许可证吗？

单克隆抗体制备的技术原理

单克隆抗体制备的技术原理 单克隆抗体是由一个杂交瘤细胞及其后代所产生的抗体，具有单一、特异与纯化的特性。该抗体在医学临床诊断及治疗上具有极其重要的作用。因此它的问世在现代免疫学上具有划时代的意义。 大家知道，当外源性物质在人体或动物血液中出现时，机体中有一些淋巴细胞便会做出反应，产生一些特殊的免疫球蛋白，叫做抗体。而那些外源性物质则称为抗原。抗体与抗原能发生特异结合，从而清除异物，达到保护肌体的作用。抗原不同，它所诱发的抗体也不一样。如细菌或病毒表面存在着几种抗原，因此它们就会对应地诱发出几种不同的抗体。过去人们为了获得抗体，就根据上述原理，反复注射某种抗原到动物（如兔、羊、马等）体内，然后从其血清中分离出所需的抗体。长期以来，用这种经典方法得到的抗体，往往存在着两个严重的缺点：第一，这些抗体不是均质的，而是一种抗体的混合物，特异性差，效价低；第二，抗体的产生是有限量的，因为分泌抗体的成熟淋巴细胞寿命很短，一般只能存活几天，无法大量生产。 为了克服上述缺点，许多免疫学家曾进行了长期的研究与探索，这一难题终于在1975年被国外两名免疫学家考勒和米尔斯坦解决了。他们利用自己创立的杂交瘤技术，使产生抗体的淋巴细胞能在体外长期存活，并源源不断地分泌抗体。这就是有高特异性和非常均质的单克隆抗体。 单克隆抗体的技术原理并不十分复杂。它是把能产生单一抗体的淋巴细胞与有增殖能力的骨髓瘤细胞进行融合，形成杂交瘤细胞，又称杂交瘤。由于这些杂种细胞继承了双亲细胞的遗传物质，因此它们不仅能表现出淋巴细胞分泌单一抗体的能力，而且还能表现出骨髓瘤细胞在体外大量繁殖的本领。就这样，取长补短，使杂交瘤变成了一座制造单克隆抗体的理想“工厂”。 目前制备单克隆抗体的具体方法，主要有以下三步（图2－9）。 第一步：将抗原注射到小鼠体内进行免疫，取出受免脾细胞，与小鼠骨髓瘤细胞融合。 第二步：用选择培养基，选出杂交瘤细胞，逐一克隆或扩增，从中挑出能产生抗体的杂交瘤细胞。 第三步：将杂交瘤细胞接种在培养瓶中扩大培养或注射到动物的体液中作为腹水癌生长，然后再分离纯化单克隆抗体。

顾客常见问题分析解答技巧

顾客常见问题解答 产品与服务篇 、：什么是主动健康？ ?健康：健康是人的一种状态、一种品质，也是一种能力。 ?主动健康就是主动获得持续的健康能力、拥有健康完美的生活品质和良好的社会适应能 力。 、：主动健康的创新理念？ 即：主动发现、科学评估、积极调整、促进健康。 ?主动发现：即主动参与，享用科技成果，揭示自身内在的健康风险； ?科学评估：即依据内在的健康风险和外在的健康风险状态，采用科学的评估理论和方法 综合评估个体健康能力和状态； ?积极调整：即按照以科学评估为基础提供的健康指导方案，主动干预，积极实施； ?促进健康：即通过主动干预和科学调整，拥有健康完美的生活品质和良好的社会适应能 力（拥有主动健康）。 、：主动健康服务包括什么？ ?主动健康服务包括健康遗传体质评估分析和健康生活方式评估分析两大部分，健康遗传 体质评估分析帮您科学评估影响健康的内在因素——基因，揭示基因对您未来健康趋势的影响；健康生活方式评估分析帮您科学评估影响健康的外在因素——生活方式、饮食和环境因素等，评估生活方式、饮食和环境因素等是否有利于您的持续健康，并根据评估结果为您量身定做个性化的健康指导方案。 、：如何实施主动健康？ ?——关心自己，了解自己，积极参与主动健康服务，坚持正确的健康道路。 ?主动健康服务是应用生命科学领域的成果，运用一套先进技术即国际前沿生物基因检测 技术，揭示健康遗传体质的内因；采用一类科学方法即科学的流行病学调查方法，分析健康遗传体质的外因；依此对您个人提出适合你的预防和保健措施，帮助找到健康方法，积极干预不正确的生活方式，主动调整，提高持续的健康的能力。 、：实施主动健康的战略意义？ ?(一)、主动健康是遵循国家中长期科技发展规划纲要的精神，落实“疾病防治重心前 移”，实现“共同健康，和谐家庭，平安社会，富强国家”的举措。 ?(二)、主动健康倡导并创新了零级预防的理念和方法，完善和补充了三级预防体系；是 缓解医疗卫生资源短缺状况、大幅度降低医疗卫生支出、构建和谐社会的健康模式。?(三)、主动健康是满足多层次的健康需求、强化公众主动维护健康的意识、促使人们形 成主动健康的新型健康理念。 ?(四)、主动健康是促进健康理念、健康产品、健康服务模式、健康产业业态的创新，有 利于带动社会各种资源积极参与，催生全新的健康产业的动力。 、：主动健康的服务价值？ ?长寿本来是众生平等的“天赋人权”。科学家指出，每个人的自然寿命应该超过岁，只要 我们沿着基因指示的正确健康路线图前进，就可以享受健康长寿的人生。但是，因为各种致病因子的干扰、不良生活习惯的影响，我们常常偏离这条正确路线，从而无法到达

肺功能体检常见问题

肺功能体检常见问题 天气逐渐变凉，这让很多患肺部疾病的人有些担忧，这时医生会建议他们去做下体检，最重要的就是做肺功能检查，关于肺功能检查有哪些需要注意的呢？下面由专家来跟我们解答下吧。 1、何谓肺功能检查? 简单地说，肺功能检查是通过专门的医疗设备来检测人体呼吸时呼吸道产生的气流速度和气流量，从而了解呼吸功能是否正常的检查技术。 2、为什么要做肺功能检查? 肺功能检查主要用于以下目的： （1）早期检出肺、呼吸道病变。 （2）鉴别呼吸困难的原因，判断气道阻塞的部位。 （3）评估肺部疾病的病情严重程度。 （4）评估外科手术耐受力及术后发生并发症的可能性。 （5）健康体检、劳动强度和耐受力的评估。 （6）危重病人的监护等。 3、肺功能检查有什么特点? （1）肺功能检查是一种物理检查方法，对身体无任何损伤，无痛苦和不适。 （2）肺功能检查具有敏感度高、重复检测方便和病人易于接受等优点。 （3）与X线胸片、CT等检查相比，肺功能检查更侧重于了解肺部的功能性变化，呼吸系统疾病的重要检查手段。 4、哪些疾病需要做肺功能检查? 凡是可能对肺通气功能产生影响的疾病，都应当进行肺功能检查。而对哮喘、慢性阻塞性肺病（肺气肿）、气道异物吸入、支气管炎、肺炎、胸膜炎等呼吸系统常见病的诊断与鉴别诊断更具有重要价值。 5、呼吸系统疾病在肺功能检查中的表现有哪些? （1）阻塞性病变：指由于各种因素造成呼吸道狭窄而出现气流受阻的改变，其中以哮喘最为明显。 （2）限制性病变：指肺部呼吸运动受到限制而出现肺通气量减少的改变，如肺气肿、胸膜炎及液气胸等，均有不同程度的肺通气量减少。 （3）混合性病变：指阻塞性和限制性病变二者兼而有之，如慢性阻塞性肺病及哮喘晚期、尘肺、小儿支气管肺炎等。

中考体检常见的七个问题解答

中考体检常见的七个问题解答 中考体检常见的七个问题解答 1.体检工作什么时候进行? 一般三月至四月。 2.考生在体检前应做哪些准备工作? (1)体检当天不要吃早饭，可饮少量水，前一天晚饭宜进清淡食物，以免影响肝功能检验结果。下午体检的考生，早晨9∶00以后开始禁食。 (2)体检前应避免做剧烈运动，以免影响血压测量等体检结果。 3.考生在体检中应注意哪些事项? (1)考生要按照学校的安排在规定时间到所在区中小学卫生保健所进行体检。 (2)体检时要服从工作人员的安排，遵守纪律，保持体检场所整洁、安静。 (3)体检过程中，考生应如实回答体检医生有关病史的询问，配合检查。 (4)体检时要检查裸眼视力，因此请不要戴隐形眼镜，以免影响视力检查。 (5)配戴助听器或义眼者应向体检医生讲明，以免影响检查结果及报考建议。 (6)体检过程中，考生如有问题，可通过带队老师反映，协调解决，不要影响体检医生的工作。 (7)体检项目全部检查完成再离开体检场所，以免遗漏检查项目而影响体检结果。

4.考生如错过统一组织的体检时间怎么办? 考生如错过统一组织的体检时间，应及时向班主任或校医提出补检要求，由校医或班主任及时与本区保健所联系，约定在本区保健 所的补检时间。如遇特殊情况无法在本区保健所补检的考生，需提 前到本区保健所领取体检表(体检表照片处加盖保健所公章)，在规 定时间携带体检表及本人学生证到规定体检中心补检。 5.“既往病史”栏考生应填写哪些内容? 既往病史指过去曾患过某种严重疾病如结核病、精神病等，或有较严重的先天性疾病如先天性心脏病等，或做过较大手术如先天性 心脏病手术或肝、胆、胰、脾、肾等主要脏器手术。既往病史可能 影响考生选报某些专业和工种(如皮肤过敏症不宜选报化工、制药类 专业，先心病手术后不宜选报高空、井下、高温、野外等重体力专 业及工种)，但可选报其他大部分专业和工种。 考生应如实填写这些疾病或手术史，医生在体检时会根据考生填写的病史内容进一步详细询问。根据考生身体条件指导选择适合的 专业和工种，避开不宜从事的专业和工种;如果隐瞒病史，即使已被 录取，也有可能在入学复查时因不符合体检标准被招生学校取消入 学资格。因此，考生应将这一条理解为保护自己利益。 6.怎样看体检结论? 经过体检，根据考生的身体状况可做出三种体检结论： (1)合格：表明考生的身体状况符合普高及中等职业类学校(中专、技校、职高)各专业和工种的要求，考生可随意选择报考，不受任何 限制(报考军校、警校须另参考军校、警校体检标准)。 (2)合格，专业受限：表明考生的身体状况具有《普通中等专业 学校招生体检标准》“二、有下列疾病或生理缺陷者，不能录取的 专业”中所列条款或“五、报考师范专业的补充规定”或“六、其 他补充规定”中所列条款或《技工学校招生体检标准及执行细则》“二、执行细则”中所列条款，考生不宜选报此条内所列的专业或 工种。

家长咨询常见问题汇总

家长咨询常见问题汇总 问题1：我的孩子原来就学过英语，如何报名，报那个级别？ 问题解答：报名现场报名并进行测试分班，这也是我们要求家长带学员前来报名的原因。现场将会进行笔试与口试，根据实际水平进行分班。测试将由清华少儿英语培训项目推广中心的教师当场进行。以更加精确的方式进行测试，给您一个准确的答案。 问题2：是否有外教授课？ 问题解答：日常上课均为中教，外教作为市场活动或是各级各类比赛的助教。 问题3：我的孩子还很小。我想等他大一些再学习英语，怕太小了学不会？ 问题解答：1）年龄越小的孩子心理障碍越小。孩子不会和大人一样有“语言自尊”，不会抗拒外语，他们会认为英语、汉语都是母语，接收语言信息没有障碍。 2) 孩子小的时候口腔肌肉弹性好，母语发音尚未定形。从小接触数种语言，有充分机会使用这些语言，他们的发音器官自然会配合这些语言发音系统调整形状，发出这些语言需要的各种声音。 3)学龄前的宝宝学语言会比其他年龄的人来得容易。从小学习英语可以给脑细胞丰富的刺激。人的大脑中有几亿个细胞，连结成庞杂的网络，而这些脑神经细胞在三岁时发展达最高峰，如果在三岁前没有给予大量刺激，部分脑神经细胞会因为无用而萎缩。在三岁前给孩子各种丰富的刺激，可以激发脑细胞成长，虽然不见得立竿见影，但却在为日后学习发展储备能量。因此，所以，只要孩子对英语有兴趣，越早接触越能够自然正确地发音与使用。 问题4：我的孩子5岁，参加幼儿英语学习一个多月了。老师教的内容不少,为什么我的孩子会说的只有“dog”、“cat”这些最简单的单词呢？ 问题解答：孩子是活泼可爱的，他们希望展示自己最棒的一面，得到别人的赞扬。最拿手的莫过于这些能配动作、又有发出声音的有趣的单词。在他们初次展示时，一定得到了很大的肯定。重复多次后，他们没有意识到大人们的反应在悄悄改变，但大人们其实早就开始嘀咕：“孩子干嘛天天跟我说这个？难道就没学点别的？”其实，你可以在与老师进行沟通后给孩子加以引导，比如：指着桌子（新学的）问：“What is this?”他一定会说：”table”.待他明白您的期望时，他会依据您的期望来作出反应，逐渐明白您的意思。而且，可以肯定的是：在不久的将来，孩子们就会争先恐后的为您表演最长的数来宝和最难的歌曲的。 问题5：我的孩子学习英语两个月了，可还是不会说英语。为什么？ 问题解答：语言的学习是有过程的。从信息的输入到信息的输出需要时间。在这两个月里您的孩子已经吸收了大量的信息，他的大脑正在对它们进行处理，在接下来的一段时间里，他能根据听到的音（英语）来识别图片或者实物。这就是信息输出的初期表现。然后，您的孩子就会进入到“说”的阶段。同时，家长不要操之过急。强迫孩子说英文单词、唱英文歌曲等都会降低孩子学习英语的兴趣。 问题6：我不会英语，我该怎样辅导我的孩子呢？ 问题解答：事实证明，您的担心大可不必。有很多孩子在这样的情况下还是在英文学习上取得了巨大成功。其实，您完全可以让孩子来教您英文：让孩子担任英语教师的角色，您来当学生。孩子教一句，您就跟着念一句，并且跟着他一道做活动。这样，孩子会觉得很

抗体的制备方法与原理

抗体的制备方法与原理 一、抗血清的制备 有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。 （一）用于免疫的动物 作免疫用的动物有哺乳类和禽类，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、山羊和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量，如一般制备抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供足够数量的血清，用于免疫的动物应适龄，健壮，无感染性疾患，最好为///雄性，此外还需十分注意动物的饲养，以消除动物的个体差异以及在免疫过程中死亡的影响。若用兔，最好用纯种新西兰兔，一组三只，兔的体重以2～3kg为宜。 （二）免疫途径 免疫途径有多种多样，如静脉、腹腔、肌肉、皮、皮下、淋巴结注射等，一般常用皮下或背部多点皮注射，每点注射0.1ml左右。途径的选择决定于抗原的生物学特性和理化特性，如激素、酶、毒素等生物学活性抗原，一般不宜采用静脉注射。 （三）佐剂 由于不同个体对同一抗原的反应性不同，而且不同抗原产生免疫反应的能力也有强有弱，因此常常在注射抗原的同时，加入能增强抗原的抗原性物质，以刺激机体产生较强的免疫反应，这种物质称为免疫佐剂。 佐剂除了延长抗原在体的存留时间，增加抗原刺激作用外，更主要的是，它能刺激网状皮系统，使参与免疫反应的免疫活性细胞增多，促进T细胞与B细胞的相互作用，从而增强机体对抗原的细胞免疫和抗体的产生。 常用的佐剂是福氏佐剂（Freund adjuvant）,其成分通常是羊毛脂1份、石腊油5份，羊毛脂与石腊油的比例，视需要可调整为1：2～9（V/V），这是不完全福氏佐剂，在每毫升不完全佐剂加入1～20mg 卡介苗就成为完全佐剂。 配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。免疫前取等容积完全或不完全佐剂与免疫原溶液混合，用振荡器混匀成乳状，也可以在免疫前取需要量佐剂置乳钵中研磨，均匀后再边磨边滴加入等容积抗原液（其中加卡介苗3～4mg/ml或不加），加完后再继续研磨成乳剂，滴于冰水上5～10min完全不扩散为止。为避免损失抗原，亦可用一注射器装抗原液，另

蛋白质提取、纯化、鉴定的方法(二)

蛋白质提取、纯化、鉴定的方法（二） 一、层析技术 1.离子交换层析的亲和洗脱这种技术结合了离子交换与亲和层析。如在某一pH时，目的蛋白质带正(负)电荷，用阳(阴)离子交换剂吸附，这一过程去除了很大一部分不吸附的杂蛋自。然后用该目的蛋白质的配体来洗脱，该配体特异性地结合目的蛋白质并使之洗脱，但不洗脱其他吸附的蛋白质，达到纯化的目的。注意，该配体需带有一定量的阴(阳)电荷，有效降低目的蛋白质与阳(阴)离子交换剂之间的电荷相互作用。 2.固相金属亲和层析重组蛋白质可在C-或N-端引入组氨酸标签，一般为6个组氨酸残基(His-tag)。这些组氨酸残基与过渡金属(transitionalmetals)Ni2+或Co2+形成配位键。用固相化的Ni2+或Co2+(如商品化的树脂，Ni-NTA)可吸附带有His-tag的重组蛋白质，用含有咪唑(imidazole)的缓冲液可洗脱重组蛋白质。注意，有些含有较多组氨酸的蛋白质也可与吸附剂结台，但较弱，因此可用低浓度的咪唑洗脱；在层析过程中不能引入金属螯合剂如EDTA；避免使用还原剂如DTT或DTE，但可用低浓度的巯基乙醇。 该技术也用于提取磷酸化的蛋白质。将螫合剂交联到树脂，螯合三价铁或三价镓，该亲和吸附剂可吸附混合物中的磷酸化的蛋白质。洗去不吸附的非磷酸化蛋白质后，用磷酸缓冲液即可将磷酸化蛋白质从该亲和吸附剂上洗脱。要注意的是酸性蛋白质也可被不同程度地吸附。 3.凝胶过滤该技术过去也被称为分子筛。构成凝胶的小珠(bead)中有大小不一的孔，分子量大的分子能进入较大的孔而不能进入小的孔，分子量小的则不仅能进入较大的孔也能进入小的孔，因此在层析过程中，小分子经过的路程较长而大分子经过的路程较短，如此就可分离分子量不同的蛋白质。然而，分子量相近的蛋白质非常多，因此，用这种技术得到的蛋白质是分子量相近的混合蛋白质。然而这种技术在某些研究中很有用，如丙酮酸激酶M2(PKM2)由四个相同的亚基组成，PKM2在细胞中以三种形式存在——单体、二聚体、四聚体，这三种形式的功能不同，若要鉴定细胞中PKM2的各种形式的量，先用凝胶过滤技术分离细胞裂解液中的PKM2的三种形式，之后用Western blot对每一种形式的PKM2做相对定量。 4.反相层析该技术是指用疏水固相的一种层析技术。“反相”是相对“正相”而言，正相是指亲水的固相如硅胶表面带有硅羟基(silanol group)，硅羟基可与被分离的化台物相互作用，被分离的化合物的亲水性越强，则滞留在正相

股票客户常见问题及话术解答知识分享

客户常见问题及话术解答 １.我的股票现在被套着，就放到那里吧，等解套再说吧 答：针对此类客户要分析出股民目前的心态，他说这句话，是真的这样想，还是找的一种借口，可引导到“你是不是害怕跟着我们赚不到钱”，你的股票套了多长时间了？大盘都涨了两倍，那你的股票呢？既然这样，那你觉得你的股票解套的机会又能有多大!万一它又跌了怎么办？我能理解你的心情，你无非是不忍心割肉是吧！XX老师说了，股票套牢不要紧，关键是心态不要套牢了，坐等解套不是办法，解套有几种方法。好的股票有解套的机会可以留住，在这过程当中最好还能做一些高抛低吸，推平成本；一种方法是不断低位补仓摊平成本，一到成本价以上尽早出来，但这种风险很大；一种是不好的股票，须坚决的止损，把资金盘活换基本面优质，成本性好的股票，早日把损失转回来。并且，目前的市场，你等着解套根本就是一种不明智的选择，现在的大盘正在高位震荡，个股分化极其严重。不好的股票会一路跌下去。现在的大盘如果是在2000点以下，你完全可以放到那里等解套。可是，现在在2800点以上，所以这个时候只能来做短线，才能赚钱。其实，先生/女士，你肯定不是在等解套了，您是担心跟着我们赚不到钱，是吧？（参加跟着我们做可以赚钱的话术） ２.我只做长线投资，不想做短线也不想换股票了。 答：如果能宣导好的股票做长线确实能更省心去赚钱！但风险也是最大的！为什么这样说呢？因为中国股市历史遗留下来的问题，真正值得长期投资的股票很少，就算让你知道了的时候，他的股价也大多给主力炒高了，而且中国的上市公司作假的实在太多了，今天还好好的，明天可能会传出报表作假，有坏账啊，公司高层携款私逃等等问题出来。如果你选的是这样的股票，损失就会很严重。所以在中国股市还没有完全规范的前提下，根本没办法做长线！虽然有人说长线是金，短线是银！但那也是针对一个完善的，成熟的股市而言的！就算不小心给你碰到一个好的股票，但他长线的波动也会非常大。并且，目前的盘势是在高位震荡，个股分化极其严重，根本不适合做长线的操作，做长线只能来来回回的坐电梯。现在的盘势，只适合做短线，做波段（解下来讲老师的绩效） ３.要跟家里人或者朋友商量商量再说 答：你这样做我都能理解！是对家里人最起码的尊重！可是，我始终认为，使自己在股市里的资金增值，才是对家里人最好的尊重。你家里人知不知道你在做股票啊？你家人做不做股票呢？你做股票一直在亏钱，你家人也没有给你好的建议，说明他们在股市根本没办法帮你，在股市里面，帮你赚钱的只有我们专业的老师和机构，一些专业的、权威的、有指导性的意见！还有，万一你家人不同意你怎么办？好不容易找到赚钱翻身的希望，一边家人又反对，那岂不是左右为难！既然咱们知道跟着我们老师肯定能赚钱，我建议咱们到不如先跟着老师合作上，等赚到钱之

护士资格证注册常见问题解答

护士资格证注册常见问题解答 护士执业资格考试是为贯彻国家人事部、卫生部《关于加强卫生专业技术职务评聘工作的通知》等相关文件的精神，于2001年开始正式实施的。下面是yjbys小编为大家带来的护士资格证注册常见问题解答的知识，欢迎阅读。 护士资格证注册常见问题解答 1.注册申请表在哪领取? 可以自己打印出来，如果工作了，医院会发给你的。 2.没有工作，考试通过了，怎么注册? 要先找到医院才能注册拿到证书，如果找不到工作可以让家里人看看能不能找到熟人的医院帮忙注册。 3.诊所可以注册吗? 可以，但是必须是正规诊所。 4.在诊所注册和在大医院注册有区别吗? 是没有区别的，都是卫生局统一发放的。 5.打印出成绩下一步怎么办? 准备好材料，交给可以帮助注册的医院就可以了。 6.合格证和执业证区别? 合格证是学校发的，执业证是卫生局发的。 7.什么是报到证? 去学校拿毕业证的时候学校发的。 8.成绩单和合格证明 提示下，成绩单是带照片的。 9.可不可以不体检? 如果有熟人的话可以帮你弄张体检表。 10.实习手册原件的问题 之前注册是需要实习手册原件的，大家拿到报到证，报到证上会写着在哪里的人力资源部存档案，大家拿到报到证去人力资源部把档案存进去，然后告诉工作人员把实习手册借出来，到时候用过记得还回去记得一定要在报到证的有效期限去存档案。 11.关于照片 大家记得照片多准备几张准备八张就可以了，省的到时候不够用还麻烦。注册用的照片

是你自己上交给卫生局，照片需要你自己照的，准备八张小两寸的白底的照片。 12.中专毕业，我考过了，打算还读大专，不知道护士证该怎么办? 先把证注册再说。 13.早注册和晚注册的区别 没什么区别，护士执业证书注册申请，应当自通过护士执业资格考试之日起3年内提出;逾期提出申请的，除本办法第七条规定的材料外，还应当提交在省、自治区、直辖市政府卫生行政部门规定的教学、综合医院接受3个月临床护理培训并考核合格的证明。 14.学校发的是专业技术资格证书，卫生局发的是护士执业资格证(都是注册之后才发的)。 15.变更注册麻烦吗? 还好，只要把材料交给变更的医院，其他事就不用你操心了。 16.关于体检是什么时候才开始体检的?体检要检查哪几项?大概哪几项?有没有心电图?护资体检要规定在哪种级别的医院吗? 随时都可以，你只要到医院跟人家说护士资格证体检人家就知道了。二甲以上医院、心电图、B超、抽血到时候你去医院会有人告诉你的。 17.合格证和成绩单不一样吗?是不是都是一天打印? 不一样的，成绩单可以到中国卫生人才网打印，合格证明是统一发放的。 18.我是今年中专毕业，护士证通过了，也考上了本科，护士证是要今年注册还是本科毕业后注册呢? 今年注册。 19.我今年护资过的，但是明年才能拿到毕业证怎么办? 那就明年注册。 20.我中专的今年考证过了，但是我想读全日制大专那我的护士证要怎么办? 学历和注册没关系的，目前你把护士资格证注册好了就可以了 21.我是今年考的，但是我九月份要去读书，没有工作单位，怎么注册呀这个? 可以找关系，找医院或者正规诊所帮你。 22.体检表和那些表格要去哪里拿? 到网站上可以打印出来。 23.今年考的资格证的应届本科生，明年能报考护师吗? 护师报名条件： 1.取得相应专业中专学历，受聘担任护士职务满5年; 2.取得相应专业专科学历，受聘担任护士职务满3年; 3.取得相应专业本科学历或硕士学位，从事本专业技术工作满1年。 24.实习手册必须要用原件吗? 看当地卫生局规定。 25.关于未成年能不能注册这件事有人说可以也有人说不可以? 大家还是问问各自的班主任或者当地卫生局比较好。 26.我想说的是像我们这些今年刚考过还没拿到证的护士们医院会要我们吗? 你把成绩单打印出来找工作会容易找一点。 27.注册申请了，多久能下来? 这个看你们当地卫生局下发的时间，一般是在第二年的2-4月份。 28.临床实习证明上面有我写错了又用笔叉了的，想问一下注册的时候能行吗? 没问题的。 30.请问拿去注册的时间有规定吗，是分上半年下半年，还是随时都能注册? 有的，每个地方的注册时间都不一样，留意当地卫生局。