RNAlaterRNA冻存

产品简介：

※ 在离体状态下组织及细胞中的RNA很不稳定，极易降解。从新鲜组织或细胞中提取RNA时，样品若不能马上处理，则通常需要置于液氮保存，极不方便。RNAlater是一种无毒的可直接使用的样品储存液，可使

RNase失活，从而保持新鲜组织样品里的RNA免受降解。置于该溶液中

的新鲜组织或细胞可在没有液氮或超低温冰箱的条件下保存较长时间

而不影响RNA的完整性，从而有效地解决了样品保存及运输的问题。

※产品描述 RNAlater是一种液态的，无毒的组织保存试剂。它能迅速稳定组织，保护非冷冻细胞RNA于原位。获得组织块后，迅速浸泡在

RNAlater中保存，而不会引起RNA的降解，这样可以不必马上处理样

本或将样本冷冻在液氮之中以备以后处理。

※RNAlater应保存在室温下，保质期12个月。如放置在4℃条件下则会引起沉淀，此时需加热到37℃才可澄清。

※ RNAlater可广泛应用于多种脊椎动物样本。包括脑、心、肾、脾、肝、睾丸、骨骼肌、脂肪、肺和胸腺。

※室温可以7天，无RNA降解；目前尚无证据证明样本存于4℃， 3个月内会出现RNA降解

※RNAlater不适合大肠杆菌、组织培养细胞、全血细胞等等；这些细胞的RNA 保存建议使用本公司全血RNAStore（Cat：RNA101）※ RNAlater不影响样品的后续处理，可以配合各种常见的 RNA抽提试剂盒使用，例如TRIzol、RNAzol、各种RNA提取试剂盒、酚抽法以及

利用Oligo（dT）原理的mRNA抽提试剂 RNAlater的使用方法

1. RNAlater 只能用于新鲜组织，在浸入RNAlater之前不能冷冻组织。简单切碎组织样本，任何一边的最大厚度不能大于0.5cm, 然后将组织碎块放入到5倍体积的RNAlater中保存。

动物组织 RNAlater不会溶解或破坏组织样本的结构。如果需要的话，仍可将已经平衡在RNAlater溶液中的组织取出并分割成更小的块再重新放入到RNAlater中。小器官如鼠肝、肾和脾可以完整地保存在RNAlater中。

植物组织 许多植物组织可以简单浸泡在5倍体积的RNAlater中保存。具有自然屏障防止扩散的植物如蜡表皮的叶组织可能需要先破坏其屏障，以允许RNAlater进入组织

组织培养细胞沉淀细胞，用PBS洗一次，再用少量的PBS悬浮细胞，然后加5~10倍体积的RNAlater保存。

白细胞如果将白细胞从红细胞和血清中分离出来，并按组织培养细胞一样处理后，白细胞便能有效地保存在RNAlater中。不要将全血、血浆或血清中的RNA保存在RNAlater中，因为它们蛋白含量过高，与RNAlater混合后易形成不溶的沉淀(全血的RNA保存请定购本公司的全血RNAStore )。

细菌 细菌培养液离心除上清后，再用少量的PBS悬浮细胞，然后加5~10倍体积的RNAlater保存。

2. RNAlater中样品的保存

保存于-80℃ 建议用于批量保存。将样本在4℃条件下孵育过夜，然后从RNAlater溶液中取出样本保存于-80℃。对于组织培养细胞，不必移去RNAlater，只需简单冻存整个溶液。实验证明，细胞在-80℃条件下冻存于RNAlater溶液中并未出现溶解。样本可随后在室温下解冻及再冻存，其RNA 的质和量都不会受到影响。

保存于-20℃ 建议用于批量保存。将样本在4℃条件下孵育过夜，然后转移到-20℃。样本在-20℃条件下不会冻结，但在存贮缓冲液中会有结晶形成，

这并不影响随后的RNA提取。样本可随后在室温下解冻及再冻存，其RNA的质和量都不会受到影响。

保存于4℃ 目前尚无证据证明样本存于4℃ 3个月内会出现RNA降解。 如果没有冰箱 将样本放在尽可能冷的环境中。如果周围温度超过25℃，应尽可能使RNAlater中的样本冰浴数小时。

3. RNAlater 中样本的RNA提取

组织 用消毒镊子将组织从存贮溶液RNAlater中取出，浸泡在RNA提取

溶液中。一旦将组织放入RNA提取溶液中，匀浆一定要迅速进行。

细胞 从存贮在RNAlater中的细胞中提取RNA有两种操作方法可供选择：去除RNAlater或者从细胞与RNAlater的混合物中直接提取RNA。

RNAlater

_______组织RNA样品保存液 试剂盒内容

规格

Cat：RN10850ml

Cat: RN109100ml

贮存条件：

室温，有效期2年。

细胞传代培养的原理及操作步骤,细胞冻存,细胞复苏

细胞传代培养的原理及操作步骤 （一）原理：细胞在培养瓶长成致密单层后，已基本上饱和，为使细胞能继续生长，同时也将细胞数量扩大，须进行传代再培养。传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以，而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。 （二）细胞传代培养具体操作 1、细胞：贴壁细胞株 2、操作步骤 1）将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。 2)加入0.5-1ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。 3)瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10ml培养液终止消化。 观察消化也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1-3分钟。 4)用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，实践培养液塞好橡皮塞，置37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。 细胞冻存 1. 实验前准备：细胞室及工作台紫外线照射15min；培养液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒温水 浴箱37℃预热备用；收集对数生长期细胞，在冻存前一天最好换液 2．用吸管吸出培养瓶中的细胞培养液，PBS清洗2遍吸出冲洗液，加入适量胰蛋白酶消化。 3. 适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。吸管吸取培养液吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的 细胞悬液。 4. 用吸管将培养液加入冻存管中，离心(1000r/min，10分钟)。 5. 去上清液，加入与细胞悬液等量的冻存液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀 6. 冷存管置于4℃10分钟----20℃30分钟----80℃16～18小时(或隔夜)---液氮槽vaporphase长期储 存。-20℃不可超过1h，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 7．记录每一个冷冻管的位置以确保在以后应用时能够找到每一个冷冻管。 细胞复苏 1.室内紫外消毒；培养基、PBS于37℃恒温水浴预热备用。 2.自液氮罐中取出冷冻管，立即放入37℃水槽中快速解冻，离心。 3.去上清，加入培养基，吹打，然后移入培养瓶中，用培养基清洗冻存管，清洗液也移入培养瓶中。 4.于培养瓶中加入适量培养基，放入CO2培养箱中培养 5.记录复苏日期；次日换液。

超低温冰箱说明书

超低温冰箱介绍与注意事项 一,超低温冰箱产品示意图: 拉手 温控器 门锁 隔板 蜂鸣器 报警灯 电源锁 定位支垫 R232通讯接口 电源线进口 空气开关 间距架孔 底盘侧盖板 底盘前盖板 气压平衡孔

二,说明 1、冰箱应放置在阴凉通风的位置，箱体距离墙及其它物品不得少于30厘米；附件中有两 个后间距支架，请按照示意图安装上，以防箱体靠墙太近； 2、如果箱体因为大小的问题进不去您的房间，可以将门锁或拉手卸下，以减少箱体的宽 度； 3、冰箱前底部有两个定位支垫，防止箱体随意移动，冰箱到位后将螺丝下拧与地支撑； 4、到位后，静置24小时，让压缩机油充分回流后再开机； 5、请给超低温冰箱专配一个过流、漏电保护开关，且不能与其它设备共用同一个电源插 座； 6、检查电源是否符合220V+5%的要求，插上电源，准备运行； 7、推上箱体后面电源箱空气开关，机器接通电源，此时机器并不能启动； 8、冰箱右下侧前面板有一个锁控电源开关，从附件找到钥匙，打开电源；（垂直方向“0” 为关，水平方向“1”为开）；防止有人随意开启或停止您的设备，请拔下钥匙，保管好； 9、锁控电源开关打开后，电子温控仪的PV值开始闪烁，风扇运转；报警灯（红色）亮起， 蜂鸣器鸣叫，按下报警灯即可停止蜂鸣，此时报警灯仍处于工作状态，再按下报警灯即可恢复蜂鸣。当实际温度在设定温度±10℃的范围内，报警解除，即红灯熄灭，蜂鸣停止；当实际温度超出设定温度±10℃的范围时，报警启动。 10、当温度低于-10℃时，温控仪的PV值停止闪烁。 11、风扇运转30～40秒后，第一级压缩机启动； 12、第一级压缩机启动后10分钟左右，第二级启动，冰箱开始制冷； 13、达到设定温度后进入伺服待机状态。 三,使用注意事项 1、请给超低温冰箱专配一个过流、漏电保护开关，且不能与其它设备共用同一个电源插 座； 2、冰箱应放置在一个通风的位置，运行环境温度不应超过30℃。如果不能保证环境温度， 当环境温度超过30℃时，请把冰箱温度设定在-75℃左右； 3、当您从冰箱里取放物品时，请戴上防冻手套，以免冻伤； 4、请勿用玻璃（及其它不耐低温材质）容器盛放需要冷冻的物品，以防容器涨裂；

超低温冰箱标准操作规程 (1)

技术股份有限公司文件 规范超低温冰箱的操作与维护程序，正确使用设备，保证检测工作的顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。 适用范围 本操作与维护规程适用于海尔ＤＷ－86Ｌ388Ａ超低温冰箱的使用操作。 职责 操作人员：负责按照本规程操作仪器设备，对仪器进行日常维护，并作使用记录。 保管人员：负责监管仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。 科室负责人：负责对仪器设备的综合管理。 内容 1 工作环境 温度：10℃－28℃，最理想的温度18℃－25℃，最高不超过32℃。 湿度：低于80％ＲＨ，如果最大温度在32℃，湿度应该低于57％ＲＨ。 避免大量灰尘、避免机械摇摆或震动。 保存箱四周应该留出至少30ｃｍｄｅ间隙，便于通风散热；通风良好，避免阳光直射。 2 首次使用调试 保存箱安装后必须静止至少24小时以上才能通电；在空箱情况下，将电源线连接到合适的专用插座； 打开保存箱右侧电控箱上的充电电池开关（从保存箱右侧可以看到），不打开该开关，测试时会有电池电量低报警；若安装了辅助冷却系统则先关闭其开关；若听到报警声则按下蜂鸣取消键来停止鸣叫。 设定所需要的保存箱温度：空箱不放入物品，通电开机，分阶段使保存箱先降温至－60℃，正常开停8小时后再调到－80℃，观察保存箱有正常开停24小时以上。证明保存箱性能正常。 确认保存箱性能正常后，可以向保存箱内存放物品。原则上应将保存箱温度设置在高于存放物品的温度3℃左右（即如果物品温度为－60℃，则将保存箱温度设定在－57℃），存放物品不超过1/3箱体容量。保证保存箱停机，并有正常开停8个小时以上。 3 日常使用注意事项 冰箱应由专人负责，每天检查运行情况并记录（每隔2－4小时记录检查一次），遇到机器故障或

细胞的冻存和复苏

背景知识： 细胞培养的传代及日常维持过程中，在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费，而且细胞一旦离开活体开始原代培养，它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分必要。 细胞冻存及复苏的基本原则是慢冻快融，实验证明这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜(DMSO)作保护剂，这两种物质能提高细胞膜对水的通透性，加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外，减少细胞内冰晶的形成，从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。复苏细胞应采用快速融化的方法，这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化，避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。 细胞冻存 操作步骤： 1. 配制含6-10%DMSO的10%小牛血清的冻存培养液，冰上预冷； 2. 取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来，悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管； 3. 离心500rpm，5min； 4. 去除胰蛋白酶及旧的培养液，由慢至快，滴入配制好的冻存培养液，用吸管轻柔吹打使细胞均匀（在冰上进行）；一般一个小方瓶冻一支或者一个10cm培养皿冻2支。 5. 将细胞分装入冻存管中，每管1ml（若冻存多于1支，则每支要均匀分装）； 6. 在冻存管上标明细胞的名称，冻存时间及操作者； 7. 冻存：放入装有异丙醇的程序降温盒中，-70℃冰箱中放3天左右，取出冻存管，移入液氮容器内。 注意事项： 1．从增殖期到形成致密的单层细胞以前的培养细胞都可以用于冻存，但最好为对数生长期细胞。在冻存前一天最好换一次培养液； 2．将冻存管放入液氮容器或从中取出时，要做好防护工作，以免冻伤；

Thermo 902超低温冰箱的使用制度

Thermo 902超低温冰箱的使用制度 一、操作流程 1、温度设置： 按“Mode”键使“Temperature”指示灯亮，通过“↑”“↓”键设置冰箱的温度，按“Enter”键确认，再按“Mode”键使“Run”指示灯亮。 2、高温报警温度和低温报警设置： 按“Mode”键使“High Temperature/Low Temperature”指示灯亮，再通过“↑”“↓”键设置冰箱的高温报警温度或低温报警温度，按“Enter”键确认，再按“Mode”键使“Run”指示灯亮。（建议： 高温报警温度一般高于冰箱设置温度10℃，低温报警温度一般低于冰箱设置温度10℃）。 二、注意事项： 1、冰箱参数已经设定好，不要随意调动任何参数！ 2、保持冰箱的放置场所空气洁净，环境温度在20℃～25℃； 3、及时清除冰箱门内侧和密封胶条处凝结的冰； 4、样品必须用耐低温的容器装好，才可放入冰箱。 5、不要移动他人的样品。 6、冰箱内为-80℃超低温环境，取放样品时，应戴上手套防止冻伤！ 7、如遇停电时，依次关闭电池开关、电源开关、外部电源。来电后，反向依次

打开所有开关！ 8、每隔三个月，清洗冰箱的空气过滤膜； 1 / 4 9、每隔一年，清理冰箱内放置的标本样品。 10、打开冰箱后，取物迅速，打开时间不能过久。 11、关闭冰箱时，须确保冰箱门关紧。关箱时，达到-80度，方可离开。 12、冰箱内不准存放腐蚀性物品。 13、搬动冰箱时，倾斜度不得超过30度。 14、及时取走自己的物品，注意用电安全，保持实验室清洁，不浪费。仪器不正 常时，及时上报，不得自行处理 三、报警处理方法 1、“Hot condenser”报警 原因： 环境温度过高或空气流通不畅 处理方法： 降低环境温度或改善空气流通状况。 2、“Low battery”报警 原因： 发生过不正常断电或电池开关未打开

C340 –86°C超低温冰箱和超低温冰箱价格

C340 –86°C 超低温冰箱和超低温冰箱价格 C340 –86°C 超低温 冰箱 标题：C340 –86°C 超低温冰箱 New Brunswick Premium 系列超低温冰箱 New Brunswick Premium 系列超低温冰箱经20多年的技术发展和应用实践，证明其高效的制冷效果和稳定的工作表现。 和New Brunswick Innova®系列超低温冰箱一样，Premium 系列超低温冰箱质量可靠、功能先进，可长时间保证样品安全。两者主要的区别是，Premium 系列采用传统聚氨酯绝热材料， 箱体厚度为130 mm ，保证–86°C 的超低温效果构造 绝热材料：聚氨酯泡沫，厚度130mm 外 壳：18标准厚度的钢板，厚度1.2mm 。粉末涂层，防刮擦，防锈蚀 内腔：优质抛光304L 不锈钢 加热真空释放孔:防止负压产生 空气过滤器：空气过滤器：前置式，便于拆装 接入端口：两个直通端口，直径20mm 脚轮：耐用可锁定的脚轮 温度控制系统 温度范围：可编... 厂家：上海政泓 市场价格： 优惠价格：百度搜索联系 U570 –86°C 超低温 冰箱 标题：U570 –86°C 超低温冰箱 New Brunswick Premium 系列超低温冰箱 New Brunswick Premium 系列超低温冰箱经20多年的技术发展和应用实践，证明其高效的制冷效果和稳定的工作表现。 和New Brunswick Innova®系列超低温冰箱一样，Premium 系列超低温冰箱质量可靠、功能先进，可长时间保证样品安全。两者主要的区别是，Premium 系列采用传统聚氨酯绝热材料， 箱体厚度为130 mm ，保证–86°C 的超低温效果 构造 绝热材料：聚氨酯泡沫，厚度130mm 外壳：18标准厚度的钢板，厚度1.2mm 。粉末涂层，防刮擦，防锈蚀 内腔：优质抛光304L 不锈钢 加热真空释放孔:防止负压产生 空气过厂家：上海政泓 市场价格： 优惠价格：百度搜索联系

细胞冻存方法

细胞冻存方法 一、概述 目前，细胞冻存最常用的技术是液氮冷冻保存法，主要采用加适量保护剂的缓慢冷冻法冻存细胞。细胞在不加任何保护剂的情况下直接冷冻，细胞内外的水分会很快形成冰晶，从而引起一系列不良反应。如细胞脱水使局部电解质浓度增高，pH值改变，部分蛋白质由于上述原因而变性，引起细胞内部空间结构紊乱，溶酶体膜由此遭到损伤而释放出溶酶体酶，使细胞内结构成分造成破坏，线粒体肿胀，功能丢失，并造成能量代谢障碍。胞膜上的类脂蛋白复合体也易破坏引起细胞膜通透性的改变，使细胞内容物丢失。如果细胞内冰晶形成较多，随冷冻温度的降低，冰晶体积膨胀造成细胞核DNA空间构型发生不可逆的损伤，而致细胞死亡。因此，细胞冷冻技术的关键是尽可能地减少细胞内水分，减少细胞内冰晶的形成。采用甘油或二甲基亚砜作保护剂，这两种物质分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可以使冰点下降，提高细胞膜对水的通透性，且对细胞无明显毒性。慢速冷冻方法又可使细胞内的水分渗出细胞外，减少胞内形成冰结晶的机会，从而减少冰晶对细胞的损伤。 二、主要冷冻设备和材料 常用的细胞冷冻贮存器为液氮贮存器，规格有35L3和50L3两种。使用时要注意以下几点：（1）一般两周需充液氮一次，至少一个月充氮一次。液氮温度达-196℃，使用时注意勿让液氮溅到皮肤上，以免引起冻伤。 （2）液氮容器为双层结构，中间为真空层，瓶口有双层焊接处，应防止焊接部裂开。（3）在装入液氮时，要注意缓慢小心，并用厚纸卷筒或特制漏斗作引导，使液氮直达瓶底，如有专用液氮灌注装置则更好。若为初次使用，加液氮时更要缓慢，以免温度骤降而使容器损坏。 细胞冻存时常备的材料有：0.25%胰蛋白酶，含10%～20%的血清培养液，DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油(121°C蒸气高压消毒)，2mL安瓿（或专用细胞冻存管）、吸管、离心管、喷灯、纱布袋（或冻存管架）等。 三、细胞冻存方法 主要操作步骤为： （1）选择处于对数生长期的细胞，在冻存前一天最好换液。将多个培养瓶中的细胞培养液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。适时去掉胰蛋白酶，加入少量新培养液。用吸管吸取培养液反复吹打瓶壁上的细胞，使其成为均匀分散的细胞悬液。悬浮生产细胞则不要消化处理。然后将细胞收集于离心管中离心(1000r/min，10分钟)。 （2）去上清液，加入含20%小牛血清的完全培养基，于4℃预冷15分钟后，逐滴加入已无菌的DMSO或甘油，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，细胞浓度为3×106～1×107/mL之间。（3）将上述细胞分装于安瓿或专用冷冻塑料管中，安瓿装1～1.5mL在火焰喷灯上封口，封口处要完全封闭，圆滑无勾。冷冻管要将盖子盖紧，并标记好细胞名称和冻存日期，同时作好登记（日期、细胞种类及代次、冻存支数）。 （4）将装好细胞的安瓿或冻存管装入沙布袋内；置于液氮容器颈口处存放过夜，次日转入液氮中。采用控制降温速度的方法也可采用下列步骤：先将安瓿置入4℃冰箱中2～3小时，再移至冰箱冷冻室内3～4小时（此步可省略），再吊入液氮容器颈气态部分存放2小时，最后沉入液氮中。 细胞冻存在液氮中可以长期保存，但为妥善起见，冻存半年后，最好取出一只安瓿细胞复苏培养，观察生长情况，然后再继续冻存。

细胞培养基础知识详解-细胞的复苏、传代和冻存

细胞培养基础知识详解 细胞的复苏、传代和冻存实验操作指导 整理：江耀伦李美娣 1 细胞复苏 细胞复苏的原则－快速融化：必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。 1.1实验前准备 （1）将水浴锅预热至37℃ （2）用75％酒精擦拭紫外线照射30min的生物安全柜内部台面。 （3）在生物安全柜中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等等。 1.2 细胞复苏培养 （1）根据细胞冻存记录取出需要复苏的细胞。 （2）迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。 （3）约1-2 min后冻存管内液体完全溶解，取出放入离心机中以1000 rpm/min速度离心3~5 min。 （4）用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入生物安全柜内。吸弃上清液，向离心管内加入1 mL培养液，吹打制成细胞悬液。 （5）将细胞悬液分装入培养瓶或者培养皿内，将培养瓶/培养皿放入37℃，5％ CO2的培养箱内过夜后换液继续培养，换液的时间由细胞情况而定。 1.3 初学者易犯错误 （1）水浴锅未预热或者未预热到37℃。 （2）水浴锅内冻存管太多，导致传热不佳，使融化时间延长。 （3）离心前忘记平衡，导致离心机损坏和细胞丢失。 （4）一次复苏细胞过多，忘记更换吸头和吸管，导致细胞交叉污染。 1.4 细胞传代 1.4.1 传代前准备 （1）预热培养用液：把已经配制好的装有培养液、PBS液和胰蛋白酶的瓶

子放入37℃水浴锅内预热。 （2）用75％酒精擦拭经过紫外线照射的生物安全柜内台面和双手。 （3）正确摆放使用的器械：保证足够的操作空间，不仅便于操作而且可减少污染。 1.4.2 细胞传代 （1）取出预热好的培养用液：取出已经预热好的培养用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入生物安全柜内。 （2）从培养箱内取出细胞：注意培养瓶取出细胞时要旋紧瓶盖，用酒精棉球擦拭显微镜的台面，再在镜下观察细胞。 （3）将培养瓶放入生物安全柜后打开瓶口，同时用酒精棉擦拭瓶口消毒。 （4）加入消化液：小心吸出旧培养液，用PBS清洗（冲洗），加入适量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以盖住细胞最好，最佳消化温度是37℃。 （5）显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察消化细胞，若胞质回缩，细胞之间不再连接成片，表明此时细胞消化适度。 （6）弃去胰蛋白酶液，加入新鲜的培养液终止反应。小心吹打成细胞悬液。 （7）将细胞悬液吸入10 mL离心管中。平衡后将离心管放入离心机中，以1000 rpm/min离心5 min。 （8）弃去上清液，加入适当体积的培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液。 （9）将细胞悬液吸出分装至2-3个培养瓶中，加入适量培养基旋紧瓶盖。 （10）显微镜下观察细胞：倒置显微镜下观察细胞量，必要时计数。注意密度过小会影响传代细胞的生长，传代细胞的密度应该不低于5×105/mL。最后要做好标记。 （11）继续培养：用酒精棉球擦拭培养瓶，适当旋松瓶盖，放入CO2培养箱中继续培养，传代细胞2-4 h后开始贴附在瓶壁上。 1.4.3 注意事项 （1）严格的无菌操作 （2）适度消化：消化的时间受消化液的种类、配制时间、加入培养瓶中的量等诸多因素的影响，消化过程中应该注意培养细胞形态的变化，一旦胞质回缩，

Thermo 902超低温冰箱使用说明

Thermo 902超低温冰箱使用说明 操作步骤： 1．温度设置： 按“Mode”键使“Temperature”指示灯亮，通过“↑”“↓”键设置冰箱的温度，按“Enter”键确认，再按“Mode”键使“Run”指示灯亮。 2．高温报警温度和低温报警设置： 按“Mode”键使“High Temperature/Low Temperature”指示灯亮，再通过“↑”“↓”键设置冰箱的高温报警温度或低温报警温度，按“Enter”键确认，再按“Mode”键使“Run”指示灯亮。（建议： 高温报警温度一般高于冰箱设置温度10℃，低温报警温度一般低于冰箱设置温度10℃）。 注意事项： 1．冰箱参数已经设定好，不要随意调动任何参数！ 2．保持冰箱的放置场所空气洁净，环境温度在20℃～25℃； 3．及时清除冰箱门内侧和密封胶条处凝结的冰； 4．样品必须用耐低温的容器装好，才可放入冰箱。 5．不要移动他人的样品。 6．冰箱内为-80℃超低温环境，取放样品时，应戴上手套防止冻伤！ 7．如遇停电时，依次关闭电池开关、电源开关、外部电源。来电后，反向依次打开所有开关！ 8．每隔三个月，清洗冰箱的空气过滤膜； 9．每隔一年，清理冰箱内放置的标本样品。

10．打开冰箱后，取物迅速，打开时间不能过久。 11．关闭冰箱时，须确保冰箱门关紧。关箱时，达到-80度，方可离开。 12．冰箱内不准存放腐蚀性物品。 13．搬动冰箱时，倾斜度不得超过45度。 14．及时取走自己的物品，注意用电安全，保持实验室清洁，不浪费。仪器不正常时，及时上报，不 得自行处理。一、报警处理方法 1、“Hot condenser”报警 原因： 环境温度过高或空气流通不畅 处理方法： 降低环境温度或改善空气流通状况。 2、“Low battery”报警 原因： 发生过不正常断电或电池开关未打开 处理方法： 打开冰箱下侧门，将“Battery”开关拨至“Off”位置，接着关闭冰箱的电源开关；重新开启电源后，再将“Battery”开关拨至“On”位置，关闭冰箱的下侧门。 3、“Door open”报警 原因： 冰箱门未关闭

细胞冻存的方法与步骤

细胞冻存的方法与步骤文件编码（GHTU-UITID-GGBKT-POIU-WUUI-8968）

细胞冻存、解冻方法与细胞计数 江苏大学附属医院风湿科李晶??????〖〗 一、细胞冷冻保存 1.材料： 生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(SigmaD-2650)、无菌塑料冷冻保存管(Nalgene 5000-0020)、0.4％（w/v）trypanblue(GibcoBRL15250-061)、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KRYO10SeriesII) 2、冷冻保存方法： （1）传统方法:冷存管置于4℃10分钟--->-20℃30分钟--->-80℃16～18小时(或隔夜)--->液氮槽vaporphase长期储存。 -20℃不可超过1小时，以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 （2）程序降温：利用已设定程序的等速降温机以-1～-3℃/分钟之速度由室温降至（-80℃以下）-120℃，再放在液氮槽vaporphase长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。 3、步骤： （1）冷冻前24-48小时更换半量或全量培养基，使细胞处于指数生长期。 （2）配制冷冻保存溶液(使用前配制)：另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚砜（DMSO）至20%浓度，即制成双倍的冻存液，置于室温下待用。 （3）离心收集培养之细胞，用加血清的培养基重悬起细胞，取少量细胞悬浮液(约0.1ml)计数细胞浓度及冻前存活率。 （4）取与细胞悬液等量的冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管，制成细胞冻存悬液（DMSO最后浓度为5～10％），使细胞浓度为1～5×106cells/ml，混合均匀，分装于已标示完全之冷冻保存管中，1～2ml/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测。严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。

超低温冰箱标准操作规程

本文件建立DW-86L388A型超低温冰箱标准操作规程，以保证DW-86L388A型超低温冰箱正确使用。 2 范围 适用于DW-86L388A型超低温冰箱的操作。 3 职责 3.1 质控部负责人负责本规程的制定和监督实施。 3.2 质保部负责本文件的审核和监督实施。 3.3 质控部人员严格依照本规程检测。 4 依据及参考 4.1 《DW-86L388A型超低温冰箱使用说明书》。 5 内容 5.1 工作环境 5.1.1 温度：10℃－28℃，最理想的温度18℃－25℃，最高不超过32℃。湿度：低于80％ＲＨ，如果最大温度在32℃，湿度应该低于57％ＲＨ。避免大量灰尘、避免机械摇摆或震动。 5.1.2 保存箱四周应该留出至少30cm的间隙，便于通风散热；通风良好，避免阳光直射。 5.2 首次使用调试 5.2.1 保存箱安装后必须静止至少24小时以上才能通电；在空箱情况下，将电源线连接到合适的专用插座； 5.2.2 打开保存箱右侧电控箱上的电源开关，再打开电池开关。不打开该开关，测试时会有电池电量低报警；若安装了辅助冷却系统则先关闭其开关；若听到报警声则按下蜂鸣取消键来停止鸣叫。 5.2.3 设定所需要的保存箱温度：空箱不放入物品，通电开机，分阶段使保存箱先降温至－60℃，正常开停8小时后再调到－80℃，观察保存箱有正常开停24小时以上。证明保存箱性能正常。 5.2.4 确认保存箱性能正常后，可以向保存箱内存放物品。原则上应将保存箱温度设置在高于存放物品的温度3℃左右（即如果物品温度为－60℃，则将保存箱温度设定在－57℃），存放物品不超过1/3箱体容量。保证保存箱停机，并有正常开停8个小时以上。

细胞复苏、传代、冻存过程

一、细胞培养（复苏、换液、传代、冻存）（已正） 进行细胞培养前，将所用物品放入超净台中，打开紫外开关，照射20-30分钟。紫外结束后，打开鼓风，使超净台自净5-10分钟左右后开始操作。 1.细胞培养液的配制： 配制50ml培养液(45ml基础培养液+5ml的胎牛血清+500ul的青霉素/链霉素)（如果基础培养基中自带青/链霉素就无需添加） 2.细胞复苏： 将细胞冻存管从液氮或者-80℃取出后迅速置于37℃水浴箱中水浴，不停地晃动使其迅速溶解，大约1min。将溶解好的细胞冻存管喷上75%的乙醇消毒后拿到超净台中，用1ml的无菌大枪头将其混匀后转移至无菌的15ml离心管中，这时向其中缓慢滴加配好的培养液2ml，混匀，1000rpm, 3分钟。然后弃掉上清，加入1ml配制好的培基使沉淀的细胞重悬。在T25的培养瓶中加入4ml配好的培养基，然后用1ml无菌的大枪头将重悬好的细胞转移至T25瓶内，使用十字混匀的方法将瓶内的细胞铺匀，从超净台中将T25取出，拿到倒置显微镜下观察细胞是否铺匀，如铺匀了喷上75%的乙醇，放入37℃ 5%CO2的孵箱内。（将细胞冻存管从液氮或者-80℃取出后迅速置于37℃水浴箱中水浴，不停地晃动使其迅速溶解。1000rpm, 离心3分钟。弃掉上清，然后加入1ml配置好的培养基使沉淀的细胞重悬。此时将其转移到T25瓶内，再加入4ml配好的培养基，使用十字混匀的方法将瓶内的细胞铺匀，从超净台中将T25取出，拿到倒置显微镜下观察细胞是否铺匀，如铺匀了喷上75%的乙醇，放入37℃ 5%CO2的孵箱内。） 3.细胞换液： 复苏的细胞在37℃ 5%CO2的孵箱内孵育4-6个小时后就应该给细胞换液，去除未贴壁的死细胞（贴壁生长的细胞）。贴壁生长的细胞具体过程如下：将原培养基弃去，然后用高压无菌的PBS冲洗1-2次，每次3-5ml，最后一次洗完后倒掉瓶内残余的PBS，小心的用1ml无菌的大枪头加入5ml新鲜培养基，喷上75%的乙醇，放入37℃ 5%CO2的孵箱内。悬浮生长的细胞具体过程如下:将培养瓶内的培养液混匀，用1ml无菌的大枪头将培养液小心的转移至15ml 无菌的离心管中，1000rpm,3分钟去上清，加入1ml配制好的培基使沉淀的细胞重悬。在T25的培养瓶中加入4ml配好的培养基，然后用1ml无菌的大枪头将重悬好的细胞转移至T25瓶内，使用十字混匀的方法将瓶内的细胞铺匀，从超净台中将T25取出，拿到倒置显微镜下观察细胞是否铺匀，如铺匀了喷上75%的乙醇，放入37℃ 5%CO2的孵箱内。 4.细胞传代： 当细胞生长到80%-90%时，其的生长状态和细胞形态都比较好时，即只要判断细胞处于生长对数期，这时就可以进行细胞传代了。贴壁生长的细胞具体过程如下：将原培养基弃去，然后用高压无菌的PBS冲洗1-2次，每次3-5ml，最后一次洗完后倒掉瓶内残余的PBS，小心的用1ml无菌的大枪头加入1ml 0.25%胰酶消化，放入孵箱，1-2分钟后取出，在倒置显微镜下观察细胞形态变化，如果观察到细胞开始由长梭形变成圆球形时，喷上75%的乙醇，拿到超净台里，加入2ml培养基终止消化，用1ml无菌的大枪头或无菌的塑料吸管反复吹打，尽

(完整word版)超低温冰箱标准操作规程

1 本文件建立DW-86L388A型超低温冰箱标准操作规程，以保证DW-86L388A型超低温冰箱正确使用。 2 范围 适用于DW-86L388A 3 职责 3.1 质控部负责人负责本规程的制定和监督实施。 3.2 3.3 4 4.1 5 32℃。湿度：低于80％ＲＨ，如 60℃，正 57℃），存放物品不超过1/3箱体容量。保证保存箱停机，并有正常开停8个小时以上。 5.3 日常使用注意事项 5.3.1 冰箱应由专人负责，每天检查运行情况并记录（每隔2－4小时记录检查一次），遇到机器故障或停机时冰箱内温度会上升，如果短时内不能修复，取出所存放物品，转移到符合储存物品温度要求的地方存储；将物品放入冰箱前，确认物品锁要求的温度和冰箱的温度范围相符合；冰箱的实际显示温度与设 置温度有一定的差异。 5.3.2 严禁一次性放入过多的相对太热的物品，会造成压缩机长时间不停机，温度不下降很容易烧毁 压缩机，物品要分批放入，分阶梯温度降温。 5.3.3 冰箱对设定值有记忆功能，当断电再来点后，设备将继续按照上次断电前的设定参数运行。 5.4 温度调整及设定

5.4.1 要进行设定值得调整操作，首先必须进行解锁。先按△或▽，温度设定值闪烁，按△或▽，输入数字“06”，然后一直按下“功能选择”键5秒，“锁定”灯灭，进入解锁状态，可进行一下各项设定，按“功能选择”键可循环选择箱体内温度设定、高温报警设定、低温报警设定，相应指示灯亮。 5.4.2 ＂温度设定＂时，设定温度显示区闪烁显示温度设定值。此时按“△或▽”键可改变温度设定值。调定后10秒内不操作自动进入锁定状态，温度显示闪烁停止，表示数值已输入电脑，否则设定无效。 温度设定范围为：－10到－86℃。 5.4.3 在“高温报警”设定时，设定温度显示区闪烁显示温度设定值，此时按移位及调节键可调整报警设定值。调定后不操作10秒后自动进入锁定状态，温度显示闪烁停止，表示数值已输入电脑，否则设定无效。设定高温报警时设置温度不得高于最高限制温度，不得低于设定温度＋5℃。 5.4.4 在“低温报警”设定时，设定温度显示区闪烁显示温度设定值。此时按“△或▽”键可调整报 警设定值。调定后不操作10 5.4.5 密码纸设定：当低温柜初次使用时，解锁密码为“06 鸣取消”键5秒钟，显示屏显示06，然后通过按“△或▽”键，、 01、02--09、10（15分钟，设备再冷却下来可能会花 5秒钟， 8”六 1分钟发出 间断报警声。 5.5.4 电压超标报警：电压低或高于正常，报警指示灯闪烁，延迟1分钟发出间断报警音。 5.5.5 冷凝器脏：当冷凝器过滤网堵塞时，或环境温度过高引起冷凝器温度过高时，报警指示灯闪烁， 发出间断报警音。 5.5.6 环境温度过高：环境温度高于32℃，报警指示灯闪烁，当环境温度超过38℃是，发出间断报警 音。 5.5.7 传感器异常：当箱内主传感器出现故障时，报警指示灯闪烁，交替显示Ｅ2和保存室温度，发出间断报警音；当冷凝器传感器出现故障时，报警指示灯闪烁，交替显示Ｅ1和保存室温度，发出间断报警音，当环境温度传感器出现故障时，报警指示灯闪烁，交替显示Ｅ0和保存室温度，发出间断报警音；当热交换器传感器出现故障，报警指示灯闪烁，交替显示Ｅ3和保存室温度，发出间断报警音。

超低温冰箱标准操作规程

超低温冰箱标准操作规 程 集团企业公司编码：（LL3698-KKI1269-TM2483-LUI12689-ITT289-

1 本文件建立DW-86L388A型超低温冰箱标准操作规程，以保证DW-86L388A型超低温冰箱正确使用。 2范围 适用于DW-86L388A型超低温冰箱的操作。 3职责 3.1质控部负责人负责本规程的制定和监督实施。 3.2质保部负责本文件的审核和监督实施。 3.3质控部人员严格依照本规程检测。 4依据及参考 4.1《DW-86L388A型超低温冰箱使用说明书》。 5内容 5.1工作环境 5.1.1温度：10℃－28℃，最理想的温度18℃－25℃，最高不超过32℃。湿度：低于80％ＲＨ，如果最大温度在32℃，湿度应该低于57％ＲＨ。避免大量灰尘、避免机械摇摆或震动。? 5.1.2保存箱四周应该留出至少30cm的间隙，便于通风散热；通风良好，避免阳光直射。? 5.2首次使用调试? 5.2.1保存箱安装后必须静止至少24小时以上才能通电；在空箱情况下，将电源线连接到合适的专用插座；? 5.2.2打开保存箱右侧电控箱上的电源开关，再打开电池开关。不打开该开关，测试时会有电池电量低报警；若安装了辅助冷却系统则先关闭其开关；若听到报警声则按下蜂鸣取消键来停止鸣叫。? 5.2.3设定所需要的保存箱温度：空箱不放入物品，通电开机，分阶段使保存箱先降温至－60℃，正常开停8小时后再调到－80℃，观察保存箱有正常开停24小时以上。证明保存箱性能正常。? 5.2.4确认保存箱性能正常后，可以向保存箱内存放物品。原则上应将保存箱温度设置在高于存放物品的温度3℃左右（即如果物品温度为－60℃，则将保存箱温度设定在－57℃），存放物品不超过1/3箱体容量。保证保存箱停机，并有正常开停8个小时以上。 5.3日常使用注意事项

细胞冻存的方法与步骤

细胞冻存、解冻方法与细胞计数 江苏大学附属医院风湿科李晶〖返回主页〗 一、细胞冷冻保存 1、材料： 生长良好之培养细胞、新鲜培养基、DMSO(Sｉｇma D-2６５0）、无菌塑料冷冻保存管(Naｌgene 5０0０—00２0)、0、４％（w／ｖ)tryｐan blue(GibcoBＲL1５250-061）、血球计数盘与盖玻片、等速降温机(KＲYＯ10Sｅri ｅsIＩ) 2、冷冻保存方法： （１)传统方法：冷存管置于4℃１0分钟－--＞-20℃3０分钟--－>-80℃１6~18小时（或隔夜)——->液氮槽ｖaｐorphａsｅ长期储存. -20℃不可超过１小时,以防止胞内冰晶过大，造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入—80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。 (２）程序降温:利用已设定程序得等速降温机以—１～-3℃／分钟之速度由室温降至（－8０℃以下）-12０℃，再放在液氮槽vａｐｏrphａｓｅ长期储存。适用于悬浮型细胞与hybｒidoｍａ之保存。 ３、步骤： （1）冷冻前2４－4８小时更换半量或全量培养基,使细胞处于指数生长期。 （2)配制冷冻保存溶液（使用前配制）：另取一离心管，加入培养基、血清，逐滴加入二甲基亚砜（DMＳO）至20％浓度,即制成双倍得冻存液，置于室温下待用。 (3）离心收集培养之细胞，用加血清得培养基重悬起细胞,取少量细胞悬浮液(约０、1ml)计数细胞浓度及冻前存活率。 （4）取与细胞悬液等量得冻存液，缓慢逐滴加入细胞悬液，并晃动试管,制成细胞冻存悬液（DMSO最后浓度为5～10％），使细胞浓度为1～5×１0６cｅlls/ｍl，混合均匀,分装于已标示完全之冷冻保存管中，1~2mｌ/vial，并取少量细胞悬浮液作污染检测.严密封口后，注明细胞名称、代数、日期。然后进行冻存。 4、注意事项: （１）欲冷冻保存之细胞应在生长良好（lｏgphase）且存活率高之状态，约为80~90%致密度。冷冻前检测细胞就是否仍保有其特有性质,例如hｙbrｉdoｍa应在冷冻保存前一至二日测试就是否有抗体之产生。

超低温冰箱说明书

超低温冰箱介绍与注意事 项 , 超低温冰箱产品示意 图 门锁 底盘侧盖板拉手 隔板 气压平衡 孔 底盘前盖 板 报警灯 定位支垫电源锁 间距架孔 R232 通讯接口 电源线进 口 空气开关

二,说明 1、冰箱应放置在阴凉通风的位置，箱体距离墙及其它物品不得少于30厘米；附件中有两 个后间距支架，请按照示意图安装上，以防箱体靠墙太近； 2、如果箱体因为大小的问题进不去您的房间，可以将门锁或拉手卸下，以减少箱体的宽 度； 3、冰箱前底部有两个定位支垫，防止箱体随意移动，冰箱到位后将螺丝下拧与地支撑； 4、到位后，静置24 小时，让压缩机油充分回流后再开机； 5、请给超低温冰箱专配一个过流、漏电保护开关，且不能与其它设备共用同一个电源插 座； 6、检查电源是否符合220V+5%的要求，插上电源，准备运行； 7、推上箱体后面电源箱空气开关，机器接通电源，此时机器并不能启动； 8、冰箱右下侧前面板有一个锁控电源开关，从附件找到钥匙，打开电源；（垂直方向“ 0” 为关，水平方向“ 1”为开）；防止有人随意开启或停止您的设备，请拔下钥匙，保管好； 9、锁控电源开关打开后，电子温控仪的PV值开始闪烁，风扇运转；报警灯（红色）亮 起，蜂鸣器鸣叫，按下报警灯即可停止蜂鸣，此时报警灯仍处于工作状态，再按下报警灯即可恢复蜂鸣。当实际温度在设定温度±10℃的范围内，报警解除，即红灯熄灭，蜂鸣停止；当实际温度超出设定温度±10℃的范围时，报警启动。 10、当温度低于-10 ℃时，温控仪的PV值停止闪烁。 11、风扇运转30 ～40 秒后，第一级压缩机启动； 12、第一级压缩机启动后10 分钟左右，第二级启动，冰箱开始制冷； 13、达到设定温度后进入伺服待机状态。 三,使用注意事项 1、请给超低温冰箱专配一个过流、漏电保护开关，且不能与其它设备共用同一个电源插 座； 2、冰箱应放置在一个通风的位置，运行环境温度不应超过30℃。如果不能保证环境温度， 当环境温度超过30℃时，请把冰箱温度设定在-75 ℃左右； 3、当您从冰箱里取放物品时，请戴上防冻手套，以免冻伤； 4、请勿用玻璃（及其它不耐低温材质）容器盛放需要冷冻的物品，以防容器涨裂；

超低温冰箱标准操作规程完整版

超低温冰箱标准操作规 程 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】

技术股份有限公司文件 规范超低温冰箱的操作与维护程序，正确使用设备，保证检测工作的顺利进行、操作人员人身安全和设备安全。 适用范围 本操作与维护规程适用于海尔ＤＷ－86Ｌ388Ａ超低温冰箱的使用操作。 职责 操作人员：负责按照本规程操作仪器设备，对仪器进行日常维护，并作使用记录。 保管人员：负责监管仪器操作是否符合规程，并对仪器进行定期维护、保养。 科室负责人：负责对仪器设备的综合管理。 内容 1 工作环境 温度：10℃－28℃，最理想的温度18℃－25℃，最高不超过32℃。 湿度：低于80％ＲＨ，如果最大温度在32℃，湿度应该低于57％ＲＨ。 避免大量灰尘、避免机械摇摆或震动。 保存箱四周应该留出至少30ｃｍｄｅ间隙，便于通风散热；通风良好，避免阳光直射。 2 首次使用调试 保存箱安装后必须静止至少24小时以上才能通电；在空箱情况下，将电源线连接到合适的专用插座； 打开保存箱右侧电控箱上的充电电池开关（从保存箱右侧可以看到），不打开该开关，测试时会有电池电量低报警；若安装了辅助冷却系统则先关闭其开关；若听到报警声则按下蜂鸣取消键来停止鸣叫。 设定所需要的保存箱温度：空箱不放入物品，通电开机，分阶段使保存箱先降温至－60℃，正常开停8小时后再调到－80℃，观察保存箱有正常开停24小时以上。证明保存箱性能正常。 确认保存箱性能正常后，可以向保存箱内存放物品。原则上应将保存箱温度设置在高于存放物品的温度3℃左右（即如果物品温度为－60℃，则将保存箱温度设定在－57℃），存放物品不超过1/3箱体容量。保证保存箱停机，并有正常开停8个小时以上。

细胞复苏传代冻存过程

一、细胞培养(复苏、换液、传代、冻存)(已正) 进行细胞培养前,将所用物品放入超净台中,打开紫外开关,照射20-3０分钟。紫外结束后,打开鼓风,使超净台自净5-10分钟左右后开始操作。 １、细胞培养液的配制: 配制50mｌ培养液(45mｌ基础培养液＋5ml的胎牛血清+５０0ｕｌ的青霉素/链霉素)(如果基础培养基中自带青/链霉素就无需添加) 2、细胞复苏: 将细胞冻存管从液氮或者-80℃取出后迅速置于37℃水浴箱中水浴,不停地晃动使其迅速溶解,大约1mｉｎ。将溶解好的细胞冻存管喷上75%的乙醇消毒后拿到超净台中,用1ml的无菌大枪头将其混匀后转移至无菌的15mｌ离心管中,这时向其中缓慢滴加配好的培养液2ml,混匀,１０00rpm, 3分钟。然后弃掉上清,加入1ml配制好的培基使沉淀的细胞重悬。在T２５的培养瓶中加入4mｌ配好的培养基,然后用１ml无菌的大枪头将重悬好的细胞转移至T２5瓶内,使用十字混匀的方法将瓶内的细胞铺匀,从超净台中将Ｔ２５取出,拿到倒置显微镜下观察细胞就是否铺匀,如铺匀了喷上7５%的乙醇,放入３7℃ 5%CO2的孵箱内。(将细胞冻存管从液氮或者－8０℃取出后迅速置于3７℃水浴箱中水浴,不停地晃动使其迅速溶解。1000rpm, 离心３分钟。弃掉上清,然后加入１mｌ配置好的培养基使沉淀的细胞重悬。此时将其转移到T25瓶内,再加入４ml配好的培养基,使用十字混匀的方法将瓶内的细胞铺匀,从超净台中将T ２5取出,拿到倒置显微镜下观察细胞就是否铺匀,如铺匀了喷上75%的乙醇,放入3７℃5%CO2的孵箱内。) 3、细胞换液: 复苏的细胞在３7℃ 5％CO2的孵箱内孵育4-６个小时后就应该给细胞换液,去除未贴壁的死细胞(贴壁生长的细胞)。贴壁生长的细胞具体过程如下:将原培养基弃去,然后用高压无菌的PBＳ冲洗1-2次,每次3－5ml,最后一次洗完后倒掉瓶内残余的PBS,小心的用1ml无菌的大枪头加入５mｌ新鲜培养基,喷上75%的乙醇,放入3７℃5%CＯ２的孵箱内。悬浮生长的细胞具体过程如下:将培养瓶内的培养液混匀,用1ｍｌ无菌的大枪头将培养液小心的转移至１5ml无菌的离心管中,1000rpｍ,3分钟去上清,加入1ｍｌ配制好的培基使沉淀的细胞重悬。在T2５的培养瓶中加入4ｍｌ配好的培养基,然后用1ml无菌的大枪头将重悬好的细胞转移至T25瓶 内,使用十字混匀的方法将瓶内的细胞铺匀,从超净台中将T25取出,拿到倒置显微镜下观察细胞就是否铺匀,如铺匀了喷上75%的乙醇,放入37℃ 5%CO2的孵箱内。 4、细胞传代: 当细胞生长到８0%-90％时,其的生长状态与细胞形态都比较好时,即只要判断细胞处于生长对数期,这时就可以进行细胞传代了。贴壁生长的细胞具体过程如下:将原培养基弃去,然后用高压无菌的PBＳ冲洗１-２次,每次3-５ｍl,最后一次洗完后倒掉瓶内残余的PＢS,小心的用1ml无菌的大枪头加入1ml 0.25%胰酶消化,放入孵箱,1-2分钟后取出,在倒置显微镜下观察细胞形态变化,如果观察到细胞开始由长梭形变成圆球形时,喷上75％的乙醇,拿到超

超低温使用手册

SANYO 超低温冰箱简要操作手册 一.安全操作的注意事项： 以下项目和条款的说明将使您正确和安全的使用这套设备。如果您按照注意事项进行操作，可能会保证您和他人免受意外的伤害。 操作的注意事项有以下的不同形式 警告 切勿在室外使用此设备。如果被雨水淋到可能会发生漏电的危险 必须是专业的工程师来进行设备的安装操作。非专业的操作人员可能会因为不规范的操作而引发触电或者火灾。 安装设备的地点一定要是结实稳固的。如果安装地点不够结实稳固，就可能发生仪器的倾倒而导致危险 不要把设备安装在潮湿的地点和可能喷溅到水的地方。如果破坏了设备的绝缘性，就可能造成漏电或者触电。 不要把设备安装在有易燃，易挥发危险品的地方。否则可能会引起火灾。 不要把设备安装在有酸性或有腐蚀性气体的地点。否则可能引起漏电和触电。使用专门的电源。 电源连接插销一定要插好。接触不好电源连接会导致产热甚至明火。 使用的电源一定要有地线。以防止触电。如果发接电源没有地线，必须要专门

的工程师安装好地线。 不要把设备安装在气体管道、供水水管，电话线以及避雷针的附近。在意外的情况下有导致触电的危险。 不要在没有或者不能密封好的情况下在设备中贮藏易燃或者易挥发的物品。否则有可能引起泄漏或者起火。 不要在没有或者不能密封好的情况下在设备中贮藏腐蚀性的物品。否则可能损害到内部的附件或者电子器件。 不要把任何金属的物品如针，金属丝等插在任何通风或者换气循环的通气口处。否则这样会引起触电或者损害连接的部件。 当处理有毒、有害或者放射性物品时，要保证使用此设备在安全的条件下。否则可能对使用者或者环境造成危害。 进行任何维护或者维修的时候，必须切断电源。否则有可能引起触电或伤害。警告 在使用药品或粉末物品的时候确保不会被呼吸进入体内。这对使用者的身体有害。 不要把水直接溅到设备上面。这样可能会导致触电或者短路。 不要自己拆卸、修理或者修正设备。任何诸如此类的操作如果由非专业的人来做，会有可能造成起火或者设备的损害 设备发生故障的时候要切断电源。如果继续不正常的操作，可能造成电源短路或者起火。 当设备部经常使用时确保儿童不能接近设备以及设备的门闭合严谨。 安排专门的人员负责仪器。搬运时要避免发生危险。 当使用CO2 气体时，要确保通风良好。CO2 在空气中的浓度有可能因为升高而对操作者身体有害。 准备一张安全表格，当你需要进行维修或者安全检查时。 选择一个水平坚实的地点进行安装。这样做可以防止设备的倾倒。避免在安装过程中因为地面有水或其他原因而使得设备倾倒而造成损害。 选择相匹配的电源给设备供电。如果使用非匹配电源有可能造成起火或电。 不要束缚，摆弄，或者脚踩电源线，并不要损害或者切断电源线。不要使用线路松散的电源。否则可能造成起火或者漏电。 当拔下电源插销的时候要抓紧插销。不要拉电源线，以免发生起火或者短路。 不要触碰任何带电的地方。例如电源插销或者用湿手触碰开关。这都可能造成触电。