1酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别4学时

实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别

预习内容:

1、光学显微镜的使用（参见周德庆,微生物学实验教程第3 版,23-27 页）

2、酵母菌的美蓝染色观察（参见周德庆,微生物学实验教程第3 版,91-95 页）

预习思考题:

1、随着物镜放大倍数的增加,视野的亮度就是增强还就是减弱？应如何调节？视野范围就是如何变化的？

2、制作水浸片时如何避免产生气泡？

3、影响活菌数目的因素有哪些？染液浓度、染色时间及染色时的pH 等因素对死活细胞数目比例有什么影响？

4、如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。

5、标本片上的某一物象,第一次瞧到后如何再次找到它?

一、实验目的与要求

1、了解普通光学显微镜的构造及原理,正确掌握使用显微镜的方法;

2、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式;

3、学习区分酵母菌死活细胞的实验方法;

4、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。

二、实验原理

1、酵母菌

酵母菌就是不运动的单细胞真核微生物,其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍,不必染色即可用显微镜观察其形态。但由于细胞个体大,采用涂片的方法制片有可能损伤细胞,一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。

大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖,有的分裂繁殖;有性繁殖就是通过接合

产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片与水一碘液水浸片来观察酵母的形态与出芽生殖方式,并对酵母细胞进行死活染色鉴别。

美蓝就是一种无毒性的染料

，

它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形

态,也可用来鉴别酵母菌的死细胞与活细胞。

图1：酵母菌美蓝浸片观察3min(10 X40)图2:酵母菌美蓝浸片观察30min(10 X40)

三、实验设备及材料

1、菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisia? 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensi培养2天左右的豆芽汁液体培养物(需稀释)。

2、溶液或试剂：0、1%与0、05%吕氏碱性美蓝溶液(或0、01%美蓝水溶液), 革兰氏染色用碘液等。

3?器材:显微镜，擦镜纸，吸水纸,盖玻片、酒精灯、接种环、镊子、胶头滴管、小烧杯、洗瓶等等。

四、实验步骤与内容

1. 美蓝浸片的观察

(1) 在载玻片中央加一滴0、1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，并用接种环将其混合均匀，酒精灯上灼烧清洗接种环。

注:染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。

(2) 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上，用吸水纸吸取多余的液体。

2、美蓝染液

注:盖玻片不宜平着放，以免产生气泡。

(3) 将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态与出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞，绘图。

(4) 染色约0、5h后再次观察并绘图,注意死细胞数量就是否增加。

⑸用0、05%吕氏碱性美蓝染色液重复上述操作。

(6)清洗载玻片，整理实验台。

2. 水-碘液浸片的观察(选做)

在载玻片中央滴一滴革兰氏染色用碘液(卢戈氏碘液),然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水-碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。

五、实验结果

绘图说明您所观察到的酵母菌的形态特征、出芽情况及死活细胞数量变化。

图1：酵母菌0、1%美蓝浸片观察3min(10 X10)图2:酵母菌0、1%美蓝浸片观察3min(10 X40)

图3:酵母菌0、1%美蓝浸片观察30min(10 X40)图4:酵母菌0、05%美蓝浸片观察3min(10 X10)

图5:酵母菌0、05%美蓝浸片观察3min(10 X10)图6:酵母菌0、05%美蓝浸片观察30min(10 X40)

注意：显微镜的放大倍数=目镜放大倍数x物镜放大倍数。

物镜倍数(低倍镜10倍,高倍镜40倍，油镜100倍)

六、思考题

1、吕氏碱性美蓝染液浓度与作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。

美蓝浓度越大，作用时间越长则视野中死菌比例越大。

原因:要点一:渗透压增大一细胞失水；要点二:还原力有限，浓度高或时间较长都会对细胞结构造成破坏。

2、在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？

要点:(1)细胞大小及形态；(2)液泡;(3)出芽生殖;(4)鞭毛;(5)细胞核及细胞器

实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别练习题

一、名词解释

1、假菌丝:酵母生长旺盛时，出芽形成的芽细胞尚未脱离母细胞又长出了新芽，

容易形成成串的细胞。如果各细胞之间连接处面积小于细胞直径，形成的这种藕节状的细胞串称为假菌丝。

二、填空题

1、高倍镜头的数值孔径通常为_____ ，放大倍数为 ___ 。

2、油镜头的数值孔径通常为_____ ，放大倍数为___ 。

3、低倍镜头的数值孔径通常就是_______ ，放大倍数为__________ 。

4、使用显微镜低倍镜观察时，聚光器应该 _______ ，使用显微镜高倍镜观察时，聚

光器应该适当________ 。

等九部分组成。

8 简单染色的操作程序就是________________________________________________

9、酵母菌通过0、1%美兰染色1~2分钟后，活细胞呈 _ 色，死细胞呈__ 色；

10、在其它条件相同的情况下，物镜放大倍数越大，焦距___ ，其工作距离___ ,

所需光量_____ 。

11、用日光灯作光源时，通常用—反光镜，用自然光作光源时,通常用反光镜。

12、显微镜的倍数越大，焦深越__ ，调焦应该越___ 。

三、选择题

1、对光学显微镜观察效果影响最大的就是:()

A目镜B物镜C聚光器D总放大倍数

2、目镜头上的"K"字母表示:(C )

A、广视野目镜

B、惠更斯目镜

C、补偿目镜；

3、目镜头上的"P"字母表示:(A )

A、平场目镜

B、广视野目镜

C、平场补偿目镜

4、物镜头上的"PL"字母表示:(A )

A、正低相差物镜

B、正高相差物镜

C、负高相差物镜。

5、物镜头上的"UVL" 字母表示:( C )

A、无荧光物镜

B、照相物镜

C、相差物镜。

6、镜头上标有”对C"字母的镜头就是:(A )

A、相差调整望远镜

B、摄影目镜

C、相差目镜

7、物镜头上的"APO" 字母代表( B )

A、消色差物镜

B、复消色差物镜

C、半消色差物镜

8、物镜头上的"Ach" 字母表示( A )

A、平场物镜

B、超平场物镜

C、消色差物镜

9?物镜头上的“ NH字母表示:(C )

A、正相差物镜

B、负相差物镜

C、负高相差物镜

10?物镜头上的“ 0.17表示:(A )

A、要求的盖玻片厚度

B、要求的载玻片厚度

C、镜头浸油的深度

11. 镜头上标有“ NK字母的镜头就是(A )

A、照相目镜

B、荧光目镜

C、相差目镜

12. 目镜头上的“ PK字母表示(C )

A、平场目镜

B、补偿目镜

C、平场补偿目镜

13. 物镜头上的"Splan" 字母表示( A )

A、超平场物镜

B、平场物镜

C、消色差物镜

14. 物镜头上的"SplanApo" 表示( A )

A、超平场复消色差物镜

B、超平场半消色差物镜

C、超平场物镜

15. 物镜头上的"Planapo"表示(C)

A、超平场物镜

B、平场物镜

C、平场复消色差物镜

16. 物镜头上的"Plan"字母表示(A )

A、平场物镜

B、消色差物镜

C、超平场物镜

17. 目镜头上的"W" 字母表示( C )

A、广视野高眼点补偿目镜

B、高眼点目镜

C、广视野目镜

18. 目镜头上的"SWK" 字母表示( A )

A、超广视野目镜

B、高眼点补偿目镜

C、平场补偿目镜

19. 目镜头上的"WHK" 字母表示( B )

A、超广视野目镜

B、广视野高眼点目镜

C、平场补偿目镜

20、物镜头上的”错、L"字母表示（B ）

A、消色差物镜

B、半消色差物镜

C、复消色差物镜

四、判断就是非题

1、显微镜的放大倍数越高，其视野越大。（）

2、浸油的油镜头可用软的卫生纸擦净。（）

3、为了节省时间，可直接在染色涂片上滴加香柏油后，直接用油镜观察。（）

4、使用油镜的正确操作步骤就是：低倍镜观察—高倍镜观察—转出高倍镜头，滴加

香柏油后用油镜观察。（）

5、在擦拭显微镜镜头时，应向一个方向擦拭。（）

6 显微镜镜头的放大倍数越大，它的数值孔径值越大，其镜口角也越大。（）

7、用油镜镜检时应将聚光器升至最高。（）

8、使用咼倍镜时，可将聚光器升至最咼。（）

9、显微镜的放大倍数愈高，其视野面积愈大。（）

10、光学显微镜的分辨率与介质折射率有关，由于香柏油的介质折射率（约1、5）

高于空气（1、0）。因此使用油镜的观察效果好于高倍镜，目前科学家正在寻找折射率比香柏油更高的介质以改进光学显微镜的观察效果。（）

五?问答题

1、吕氏碱性美蓝染液浓度与作用时间的不同对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。

美蓝浓度越大，作用时间越长则视野中死菌比例越大。

原因:要点一：渗透压增大—细胞失水；要点二：还原力有限，浓度高或时间较长都会对细胞

结构造成破坏。

2、显微镜下观察酵母菌的个体形态特征与细菌个体形态特征有何不同

要点：⑴细胞大小及形态；（2）液泡;（3）出芽生殖;（4）鞭毛;（5）细胞核及细胞器

3、标本片上的某一物象，第一次瞧到后如何再次找到它？

4、简述酵母菌死亡率测定的原理。

答:死亡率测定的原理：活的微生物，由于不停的新陈代谢，使细胞内氧化还原值低，且还原能力强。当某种无毒的染料进入活细胞后，可以被还原脱色；当染料进

入死细胞后，这些细胞因无还原能力或还原能力差而被着色。在中性与弱酸性条件下,活的细胞原生质不能被染色剂着色，若着色则表示细胞已经死亡，故可以此来区分活菌与死菌。

方法:取0、05%美蓝液一滴，置载玻片中央，然后取酵母液少许加入美蓝液中

混匀，染色2~3分钟，加盖片,于高倍镜下进行观察，并计数已变蓝的细胞（可计5~6个视野的细胞总数）

死亡率*死豐需吩

计算公

死、活細胞总最

式：

酵母菌形态观察

微生物实验报告 酵母菌的形态观察 一、目的要求： 1、掌握普通光学显微镜的使用方法和注意事项 2、观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别 3、学习鉴别死活酵母细胞的实验方法 二、器材和器皿： 1、酵母菌 2、生理盐水、美蓝染色液、 3、显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种针、擦镜纸 三、实验原理 酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。 四、操作步骤： （一）显微镜的主要构造： 普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。（二）显微镜的使用方法 1．低倍镜的使用方法 （1）取镜和放置： 显微镜平时存放在柜或箱中，用时从柜中取出，右手紧握镜臂，左一手托住镜座,将显微镜放在自己左肩前方的实验台上，镜座后端距桌边1－2寸为宜，便于坐着操作。 （2）调节光源 （3）低倍镜观察 先将标本玻片置于载物台上，并将标本部位处于物镜的正下方，以左手按逆时针方向转动粗调节器，使镜台缓慢地上升至物镜距标本片约5毫米处，应注在上升镜台时，切勿在目镜上观察。一定要从右侧看着镜台上升，以免上升过多，造成镜头或标本片的损坏。 然后，两眼同时睁开，左眼看目镜，同时反时针方向慢慢旋转粗调节轮，当在视野内出现物象后，改用细调节轮，上下微微转动，直至视野内获得清晰的物象。然后认真观察标本各部位，确定并将需进一步要观察的部位移视野中央，准备用高倍镜观察。

1酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别4学时

实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别 预习内容: 1、光学显微镜的使用（参见周德庆,微生物学实验教程第3 版,23-27 页） 2、酵母菌的美蓝染色观察（参见周德庆,微生物学实验教程第3 版,91-95 页） 预习思考题: 1、随着物镜放大倍数的增加,视野的亮度就是增强还就是减弱？应如何调节？视野范围就是如何变化的？ 2、制作水浸片时如何避免产生气泡？ 3、影响活菌数目的因素有哪些？染液浓度、染色时间及染色时的pH 等因素对死活细胞数目比例有什么影响？ 4、如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。 5、标本片上的某一物象,第一次瞧到后如何再次找到它? 一、实验目的与要求 1、了解普通光学显微镜的构造及原理,正确掌握使用显微镜的方法; 2、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式; 3、学习区分酵母菌死活细胞的实验方法; 4、掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 二、实验原理 1、酵母菌 酵母菌就是不运动的单细胞真核微生物,其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍,不必染色即可用显微镜观察其形态。但由于细胞个体大,采用涂片的方法制片有可能损伤细胞,一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。 大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖,有的分裂繁殖;有性繁殖就是通过接合 产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片与水一碘液水浸片来观察酵母的形态与出芽生殖方式,并对酵母细胞进行死活染色鉴别。

美蓝就是一种无毒性的染料 ， 它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形 态,也可用来鉴别酵母菌的死细胞与活细胞。 图1：酵母菌美蓝浸片观察3min(10 X40)图2:酵母菌美蓝浸片观察30min(10 X40) 三、实验设备及材料 1、菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisia? 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensi培养2天左右的豆芽汁液体培养物(需稀释)。 2、溶液或试剂：0、1%与0、05%吕氏碱性美蓝溶液(或0、01%美蓝水溶液), 革兰氏染色用碘液等。 3?器材:显微镜，擦镜纸，吸水纸,盖玻片、酒精灯、接种环、镊子、胶头滴管、小烧杯、洗瓶等等。 四、实验步骤与内容 1. 美蓝浸片的观察 (1) 在载玻片中央加一滴0、1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，并用接种环将其混合均匀，酒精灯上灼烧清洗接种环。 注:染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。 (2) 用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上，用吸水纸吸取多余的液体。 2、美蓝染液

死活细胞的鉴定方法

活细胞的鉴定在生物学和医学上具有很重要的意义。细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况，需要经常测定细胞的存活率；在肿瘤细胞的研究中，为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力，也需要测定肿瘤细胞的存活率。在临床医学中死活细胞的鉴定也有很大的应用，例如为了检测某一男子的生育能力，测定精子细胞的存活力是比较常用的办法。 死活细胞的鉴定方法有很多种，常用的有染色法和仪器分析法。染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。但是通过直接的形态观察来鉴别细胞死活，实验结果很容易受操作者的主观因素的影响，存在一定的误差，所以，在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测。 不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理，但无论采用何种办法，都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。 常用的方法包括染色法和仪器分析法。 1 染色法 染色法分化学染色法和荧光染色法，根据染色机理的不同，染料或使死细胞着色，或使活细胞着色。死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括： 死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。台盼蓝，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。甲基蓝有类似的染色机理。植物细胞的质壁分离也可鉴定死活。 死活细胞在代谢上的差异：是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色；而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。 荧光素双醋酸酯（FDA）是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体的生活力鉴定染料，其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异：FDA本身

实验三 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别

实验三酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别实验三酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 实验时间：2019-9-19 星期三 一、目的要求 ⑴. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式, 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法 ⑵. 掌握酵母菌一般形态特征及其与细菌的区别 二、基本原理 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至几十倍，大 多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 本实验是通过美蓝染液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色，用美蓝对酵母的活细胞 进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的 氧化型变为无色的还原型，因此具有还原能力的酵母活细胞是无色的而死细胞或代谢作用 微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞或活细胞进行鉴别，并可 计算其成活率。 三、实验器材 ⑴. 菌种：酿酒酵母培养约2d 的麦芽汁斜面培养物 ⑵溶液或试剂：0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染色液, 革兰染色用碘液 ⑶仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片接种环、洒精灯等 四、操作步骤 美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检水-碘浸片观察 1. 美蓝浸片的观察 ⑴在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液, 然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中, 混合均匀。 ⑵用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。 ⑶将制片放置约3分钟后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。

细胞死活鉴定

姓名陈傲蕾系年级13级生科组别同组者 科目细胞生物学实验题目细胞培养与细胞死活鉴定学号 【实验目的】 1、回顾细胞培养的有关知识； 2、学习小鼠脾细胞的分离技术及简单的细胞培养技术 3、掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用； 4、了解细胞原代培养的基本方法及操作过程； 5、学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法； 6、学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数； 7、学习实验过程的详细描述及实验记录。 【实验原理】 细胞培养指的是在无菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体内的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并且维持其结构和功能的一种培养技术。动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。从供体获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法称为细胞的原代培养。当培养的动物细胞生长增殖达到一定密度，形成致密的单层细胞时，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，从一个容器中以1：2或其他比例转移到另一个容器中扩大培养的方法，称为细胞的传代培养。传代培养的累计次数就是细胞的培养代数。 高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的。但如果把活细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则要方便和简单得多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类揭开生、老、病、死的规律，探索优生、抗衰老和防治各种疾病的途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，使其向有利于人类健康长寿的方向发展。因此动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。 细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。 活细胞和死亡细胞在生理技能和性质上主要存在一下差异：①细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，其通透性增加。基于此，发展出了以台盼蓝、伊红、苯胺黑、赤藓红、甲基蓝以及荧光染料碘化丙啶或溴化乙啶等为染料鉴别细胞生死状态的方法，上述染料能使死亡细胞着色，而活细胞不被着色。此外，应用植物质壁分离的性质也可鉴定植物细胞的生死状态。活细胞的原生质具有选择透过性，死细胞因其原生质的选择透过性已遭破坏，故与高渗透压溶液接触时不产生质壁分离。②代谢上的差异：活细胞中新陈代谢作用强，细胞内的酶具有较强的活性和还原能力。基于此，发展处了以荧光素二乙酸酯（FDA）、荧光素二丙酸酯、荧光素二丁酸酯或荧光素二苯甲酰酯等酯化的荧光素鉴别细胞生死状态的方法，上述酯化的荧光素亲脂性提高，容易被细胞吸收进入，活细胞内的酯酶具有较强的活性，可将酯化的荧光素分解而释放出能发荧光的荧光素，该物质不能自由透过活的细胞膜，积累在细胞内，荧光显微镜下显示有明亮的绿色或黄绿色荧光；而死亡细胞内的酯酶因失去活性，不能分解酯化的荧光素，荧

酵母菌的形态观察

【实验题目】 酵母菌的形态观察 【实验目的】 1.掌握酵母菌一般形态与细菌的区别 2.观察酵母菌的出芽生殖，区分酵母菌的死细胞和活细胞 3.学习酵母菌子囊孢子的观察方法 【实验器材】 1.菌种： 酿酒酵母2d麦芽汁斜面培养物 2.溶液和试剂： A) 0.1%吕氏碱性美蓝溶液、质量分数为95%的乙醇溶液、5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水 溶液、蒸馏水 B）香柏油、二甲苯 3.仪器及其它用品： 普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）等 【实验原理】 1、单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大部分采取出芽方式进行无性繁殖，也可以通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖。 2、由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般采用美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。 3、采用美蓝染液水浸法可以对酵母菌的活细胞和死细胞进行鉴别。美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色，由于新陈代谢，活细胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型转变为无色的还原型，而死细胞或衰老细胞胞内还原性弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色，因此，用美兰染色后，活细胞呈无色，死细胞呈蓝色。 【实验内容及步骤】 1、酵母菌制片与简单染色--美蓝染液水浸片法 1)滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作用接种环由酿酒酵母麦芽汁斜面培养物挑取少许菌体置于染液中，混合均匀。 2)用镊子取一盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。 3)将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死细胞和活细胞。 4)染色30min后，再次观察，注意死活细胞的比例是否发生变化。 2、酵母菌子囊孢子的观察 1)涂片。先在洁净载玻片上滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作挑取适量酵母菌菌体于蒸馏水中，混合均匀。 2)干燥固定。将载玻片在酒精灯上方来回移动，注意不要让载玻片距离火焰过近，以免烫死酵母菌细胞，可用手背反复试温度。 3)染色。孔雀绿染色 1-2min；水洗后用95%的乙醇溶液脱色30s；水洗后用番红染液复染1min；水洗后干燥。 4)镜检。将制好的装片放在显微镜下镜检，由低倍镜到高倍镜，最后用油镜观察。

死活细胞的鉴别word版

（一）、死活细胞的鉴别 生活细胞近似无色透明，用普通光镜无法观察其形态，需用相差显微 镜来观察。 染色排除法：组织培养中检查死活细胞最常用的是“染色排除法”这类方 法简单但不甚严格，它只能判断细胞的代谢死亡，不反映细胞能否增殖。由于未 经过固定、专门染色，所以看不到死活细胞的形态差别。 所用染料的分类： 一般的生物染料不能穿过活细胞膜只有细胞被固定或细胞膜被破坏，染 料才能进入细胞膜。 第一类：死细胞着色，使死细胞着色的大部分是酸性染料。它们不容易 穿透活细胞的质膜，进入胞内，但却能渗透死亡的细胞，使之着色。如①台盼兰（Trypan blue）：0.5-1%的台盼兰，pH7.0-7.2，每毫升细胞悬液加 0.1ml 染液，2 分钟后镜检，活细胞没有染上，死细胞全部被染成蓝色。②苯胺兰(Aniline’ black)： 0.05%的苯胺黑以 1：10 的量与细胞悬液混匀，1-2 分钟后，死细胞被染成黑色。 ③伊红 Y：细胞悬液与细胞悬液混喝，2 分钟后死细胞被染成桃红色。等。 第二类：活细胞着色，多为碱性染料，如中性红、健那绿、亚甲蓝、甲苯 胺蓝等。它们是一些无毒或毒性很小的染料，由于电性吸引而堆积在细胞中某一 特定的结构上从而显色，即它们解离后带正电，其中有的染料可与胞内某些结构 专一性的结合。 ①1%结晶紫染色生理 1%结晶紫盐水与细胞悬液 1：2 混合，立即镜检，或细胞被染成 蓝紫色，而死细胞不着色。属于活细胞染料。活细胞染料无毒，无物理、化学变 化，基本上不影响细胞的生命活动。 ②用呀啶橙染色可以鉴别出细胞固定前的死活状态。 丫啶橙是一种与 DNA 和 RNA 都能结合的荧光染料，在兰光或紫外光激发 下，DNA 可激发出 530nm 的荧光发射峰，RNA 可激发出 640nm 的荧光发射峰， 它与双链 DNA 的结合方式是潜入双链之间，而与单链 DNA 和 RNA 则由静电吸 引堆积在磷酸根上。在蓝光的激发下，细胞核发亮绿色荧光，核仁和胞质 RNA Page 9发桔红色荧光。因此，原来的活细胞经固定、染色后细胞核呈亮绿色，核仁和散 布在细胞质中的 RNA 呈桔红色，胞质其余部分为淡红褐色。死亡的细胞，因物 质发生变形，其核呈暗绿色，胞质整个呈暗绿色。但丫啶橙的阳离子也可以结合 在蛋白质、多糖和膜上而发荧光，但由于经过细胞固定抑制了这种结合，从而主 要显示出的是 DNA 和 RNA 两种核酸。 本次实验即选用活细胞染料健那绿来显示线粒体。 （二）细胞核和染色体的染色 Giemsa 染色：姬姆萨是常用的染料，可观察核、染色体。 醋酸地依红染色：可显示有丝分裂染色体的微细结构，如次缢痕、染色质 丝的螺旋化等。该染料同时具有固定和染色的作用，因此也可用来坐快速检查有 丝分裂指数。（细胞涂片，0.075 mol 的 KCI 低渗 5-10 分钟，使细胞膨胀，染色 体分裂；甲醇固定 10 分钟，空气干燥，滴加 2%醋酸地衣红，染 10-20 分钟后即 可观察。 （三）细胞器的特殊染色

07 动物细胞培养及死活细胞鉴别

山东大学实验报告2018年5月21日 ________________________________________ _________________________ 姓名：丁志康系年级：2016级组别：周一下午 科目：细胞生物学实验题目：动物细胞培养及死活细胞鉴别学号：201600140055 一、目的要求 1.学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。 2.了解并掌握进行动物细胞原代培养的实验方法。 3.了解动物细胞培养的原理及注意事项。 4.学习细胞生死状态鉴别的方法。 5.了解细胞生死状态鉴别的原理。 6.熟悉和掌握各种鉴别细胞生死状态方法的判定特征。 7.掌握细胞计数方法，计算细胞存活率 二、实验原理 1、细胞培养 细胞培养技术指的是在无菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体内的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并且维持其结构和功能的一种培养技术，也叫细胞克隆技术。 细胞培养技术可以由一个细胞经过一段时间的培养得到大批的简单的单细胞或极少分化的多细胞，通过细胞培养可以得到大量的细胞或细胞代谢产物。细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。 细胞培养具有其他生物技术无可比拟的优点：培养条件易改变和控制，便于单因子分析；便于人们直接对细胞内结构，细胞生长及发育等过程的观察。在生物学的各个领域已被广泛应用。 但细胞培养也存在一定的局限性：细胞的培养是在脱离了机体的外界环境之中，与体内环境存在一定的差别，因此细胞培养过程中观察到的现象有时难以正确反映机体内的状况。 2、细胞死活鉴定 细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。 活细胞和死亡细胞在生理机能和性质上主要存在以下差异： ①细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允 许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，其通透性增加。基于此，发展出了以台 盼蓝、伊红、苯胺黑、赤藓红、甲基蓝以及荧光染料碘化丙啶（PI）或溴化乙啶（EB）等 为染料鉴别细胞生死状态的方法，上述染料能使死亡细胞着色，而活细胞不被着色。 此外，应用植物质壁分离的性质也可鉴定植物细胞的生死状态。活细胞的原生质具有选择 透过性，死细胞因其原生质的选择透过性已遭破坏，故与高渗透压溶液接触时不产生质壁 分离。

细胞死活鉴定

【实验目的】 1、回顾细胞培养的有关知识； 2、学习小鼠脾细胞的分离技术及简单的细胞培养技术 3、掌握无菌操作的具体过程及无菌操作台的使用； 4、了解细胞原代培养的基本方法及操作过程； 5、学习掌握染色法鉴别细胞的生死状态的原理及方法； 6、学习使用血球计数板对细胞总数及活细胞数进行计数； 7、学习实验过程的详细描述及实验记录。 【实验原理】 细胞培养指的是在无菌条件下，把动、植物细胞从组织中取出，在体外模拟体的生理环境，使离体的细胞在体外生长和繁殖，并且维持其结构和功能的一种培养技术。动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。从供体获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法称为细胞的原代培养。当培养的动物细胞生长增殖达到一定密度，形成致密的单层细胞时，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，从一个容器中以1：2或其他比例转移到另一个容器中扩大培养的方法，称为细胞的传代培养。传代培养的累计次数就是细胞的培养代数。 高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体的功能活动是十分困难的。但如果把活细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则要方便和简单得多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类揭开生、老、病、死的规律，探索优生、抗衰老和防治各种疾病的途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，使其向有利于人类健康长寿的方向发展。因此动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重

要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。 细胞生死状态的鉴别方法主要是化学染色法和荧光染色法。 活细胞和死亡细胞在生理技能和性质上主要存在一下差异：①细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性地通过；而细胞死后，细胞膜受损，其通透性增加。基于此，发展出了以台盼蓝、伊红、苯胺黑、赤藓红、甲基蓝以及荧光染料碘化丙啶或溴化乙啶等为染料鉴别细胞生死状态的方法，上述染料能使死亡细胞着色，而活细胞不被着色。此外，应用植物质壁分离的性质也可鉴定植物细胞的生死状态。活细胞的原生质具有选择透过性，死细胞因其原生质的选择透过性已遭破坏，故与高渗透压溶液接触时不产生质壁分离。②代上的差异：活细胞中新代作用强，细胞的酶具有较强的活性和还原能力。基于此，发展处了以荧光素二乙酸酯（FDA）、荧光素二丙酸酯、荧光素二丁酸酯或荧光素二苯甲酰酯等酯化的荧光素鉴别细胞生死状态的方法，上述酯化的荧光素亲脂性提高，容易被细胞吸收进入，活细胞的酯酶具有较强的活性，可将酯化的荧光素分解而释放出能发荧光的荧光素，该物质不能自由透过活的细胞膜，积累在细胞，荧光显微镜下显示有明亮的绿色或黄绿色荧光；而死亡细胞的酯酶因失去活性，不能分解酯化的荧光素，荧光显微镜下显示不发光。另外，可用亚甲基蓝为染料鉴定酵母细胞的生死状态。亚甲基蓝是一无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。活细胞因具有较强的还原能力，能使亚甲蓝从蓝色的氧化型变成无色的还原型，故活的酵母细胞在用亚甲基蓝染色后显示无色；死亡酵母细胞或代缓慢的衰老酵母细胞，因无还原能力或还原能力极弱，使亚甲蓝仍处于氧化态，故呈现蓝色或淡蓝色。 1.细胞原代培养 原代细胞培养是指直接从动物体获取的细胞、组织和器官，经体外培养后，直到第

酵母菌的形态观察

姓名班级13级生命基地班学号同组者： 科目微生物学实验题目酵母菌的形态观察组别3 【实验题目】 酵母菌的形态观察 【实验目的】 1.掌握酵母菌一般形态与细菌的区别 2.观察酵母菌的出芽生殖，区分酵母菌的死细胞和活细胞 3.学习酵母菌子囊孢子的观察方法 【实验器材】 1.菌种： 酿酒酵母2d麦芽汁斜面培养物 2.溶液和试剂： A) 0.1%吕氏碱性美蓝溶液、质量分数为95%的乙醇溶液、5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水 溶液、蒸馏水 B）香柏油、二甲苯 3.仪器及其它用品： 普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）等 【实验原理】 1、单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大部分采取出芽方式进行无性繁殖，也可以通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖。 2、由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般采用美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。 3、采用美蓝染液水浸法可以对酵母菌的活细胞和死细胞进行鉴别。美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色，由于新陈代谢，活细胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型转变为无色的还原型，而死细胞或衰老细胞胞内还原性弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色，因此，用美兰染色后，活细胞呈无色，死细胞呈蓝色。 【实验内容及步骤】 1、酵母菌制片与简单染色--美蓝染液水浸片法 1)滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作用接种环由酿酒酵母麦芽汁斜面培养物挑取少许菌体置于染液中，混合均匀。 2)用镊子取一盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。 3)将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死细胞和活细胞。 4)染色30min后，再次观察，注意死活细胞的比例是否发生变化。 2、酵母菌子囊孢子的观察 1)涂片。先在洁净载玻片上滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作挑取适量酵母菌菌体于

死活细胞鉴定及细胞活力测定

死活细胞测定及细胞活力测定 【实验原理】 （一）染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。实验是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异来进行的。死活细胞在生理机能和性质上的差异主要体现在： （1）死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。 （2）死活细胞在代谢上的差异：由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原 能力，而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱。 常见的细胞染料有：中性红（细胞器的专有染料）、台盼蓝、甲基蓝、美蓝、荧光素双醋酸 酯（FDA等。 ①中性红染色：常用染料之一，是细胞器的专有染料。利用细胞膜的通透性差异，用来染 原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。中性红无毒，常做活体染色的染料。 ②台盼蓝染色：当细胞损伤或死亡时，台盼蓝可穿透变性的细胞膜，与解体的DNA 结合， 使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。严格来说，台盼蓝染色检测的是细胞膜的完整性，通常认为细胞膜丧失完整性，即可认为细胞已经死亡。通过显微镜很容易就能识别出死亡的被台盼蓝染色的细胞，并可使用细胞计数器进行计数。 ③美蓝染色法：美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对活细 胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞. ④甲基蓝染色法：甲基蓝染色与台盼蓝类似的染色机理。 （二）植物细胞质壁分离法及活体染色测定细胞死活 （1 ）质壁分离法：成长的植物细胞一般具有中央液泡，在中央液泡和细胞壁之间为细胞质的薄层及其内外膜——液泡膜和质膜。液泡中的胞液具有一定的溶质势（或称渗透势），而活的原生质特别是液泡膜和质膜则具有半透性。所以，当细胞与外界溶液接触时，便与外液构成渗透系统，并可能发生水分的移动。若外液的水势低于胞液的溶质势，则水分外渗的结果可使原生质随着液泡一起收缩而脱离细胞壁，发生质壁分离，质壁分离的细胞与水或水势较高的溶液接触时，可重新吸水而是质壁分离复原。 （2 ）活体染色法：活体染色是利用某种对植物无害的染料稀溶液对活细胞进行染色技术。

死活细胞的鉴定方法[1]

死活细胞的鉴定方法 活细胞的鉴定在生物学和医学上具有很重要的意义.细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况，需要经常测定细胞的存活率；在肿瘤细胞的研究中，为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力，也需要测定肿瘤细胞的存活率。在临床医学中死活细胞的鉴定也有很大的应用，例如为了检测某一男子的生育能力,测定精子细胞的存活力是比较常用的办法. 死活细胞的鉴定方法有很多种,常用的有染色法和仪器分析法。染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作。但是通过直接的形态观察来鉴别细胞死活，实验结果很容易受操作者的主观因素的影响，存在一定的误差，所以，在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测. 不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理，但无论采用何种办法，都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。 常用的方法包括染色法和仪器分析法。 1 染色法

染色法分化学染色法和荧光染色法，根据染色机理的不同，染料或使死细胞着色，或使活细胞着色。死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括: 死活细胞细胞膜通透性的差异:活细胞的细胞膜是一种选择性膜,对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损,通透性增加。常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质.台盼蓝，又称锥蓝，是一种阴离子型染料，不能透过完整的细胞膜。所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色，而活细胞不被着色。甲基蓝有类似的染色机理。植物细胞的质壁分离也可鉴定死活....感谢聆听... 死活细胞在代谢上的差异:是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。美蓝是一种无毒染料，氧化型为蓝色,还原型为无色.由于活细胞中新陈代谢的作用,使细胞内具有较强的还原能力,能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型，因此美蓝染色后活的酵母细胞无色;而死细胞或代谢缓慢的老细胞,则因它们的无还原能力或还原能力极弱，使美蓝处于氧化态，从而被染成蓝色或淡蓝色。...感谢聆听... 荧光素双醋酸酯(FDA）是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体的生活力鉴定染料，其染色

新版酵母菌形态观察实验报告单课件.doc

酵母菌形态观察实验报告单 班级日期姓名 实验目的 认识酵母菌的形态结构，掌握其观察方法。 实验内容 1．酵母菌菌落特征的观察 2．酵母菌细胞形态及芽殖方式 3．液泡的活体染色观察 4．肝糖粒染色观察 5．脂肪粒染色观察 实验原理 酵母菌是单细胞真菌，通常呈圆形、椭圆形或卵圆形，其菌落较大而厚， 湿润，较光滑，颜色多为乳白、灰黄、淡黄、灰褐色，少见粉红或红色，偶见黑色。酵母菌个体比细菌大几倍到十几倍， 在高倍镜下即能观察清楚。细胞内常有明显的细胞核及其内含物。无性繁殖以芽殖为主，在细胞的一端初生小突起如芽，逐渐增大，芽缢裂而与母细胞分离，形成独立的菌体。发生的芽如不立即脱离母细胞并继续出芽，则多数芽细胞集聚成芽簇。在陈旧培养中，芽簇细胞伸长成丝状，称假菌丝。 酵母菌的有性生殖形成子囊袍子，其过程由两个菌休细胞结合后，其中配合的细胞核分裂，形成2个、4个或8个子囊孢子。 实验器材 酿酒酵母培养物 显微镜、载玻片、盖玻片、接种针 0.1％美蓝液、中性红染色液、碘液 实验步骤 1．菌落特征的观察 取少量酿酒酵母划线接种在土豆平板培养基上，28—30℃养3—5d。用肉眼观察菌落特征，项目包括菌落表面湿润或干燥、有无光泽、隆起形状、边缘形状、大小、颜色等。 2．酵母菌细胞形态及芽殖方式 在洁净载玻片上滴加一滴无菌水或0.1%美蓝液一滴，用接种环取酵母菌菌台少许与无菌水或美蓝液混匀，盖上盖玻片，即成为水浸片。用高倍镜观察酵母细胞形态及出芽情况。 染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡 而影响观察。盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察 3．液泡的活体染色观察 在洁净的载玻片上滴加一滴中性红染色液，用接种环取少量酿洒酵母与染液混匀，染色4—5min后，盖上盖玻片在显微镜下观察。中性红是液泡的活体

酵母菌分类

酵母菌分类 根据荷兰Lodder&Kreger-vanRij所着“TheYeasts,ATaxonomyStudy” 分类主要依据是 1.形态 2.对硝酸盐或碳源的利用 3.对糖的发酵性 形态与大小：因酵母种类不同而不同，同一种也会因培养条件或发育时期不同而有异，一般直径约在5μm，显微镜40X及100X接物镜下皆可观察到。 cerevisiae型：球形与卵形(如啤酒酵母Saccharomycescereviisiae) ellipsoideus型：椭圆形(如葡萄酒酵母Saccharomycesellipsoideus) pastorianus型：香肠形 apiculatus型：柠檬形 trigonopsis型：三角形 增殖法：主要为营养增殖(即出芽生殖(budding))，偶而发生有性生殖时则行子囊胞子来增殖。 母细胞(mothercell)：原来的细胞 子细胞daughtercell)：增殖後的细胞 多极出芽(multilateralbudding)：同一个细胞上数个地方可以出芽者 两极出芽(bipolarbudding)：只有细胞两端才会出芽者(如Kloeckera spp.) 伪菌丝(pseudomycelium)：出芽後的细胞一直连成很长，呈菌丝状者(如Candida spp.) 真菌丝(truemycelium)：有些酵母会形成如同霉菌具有隔膜(septum)的真菌丝(如Endomycopsis spp.,Trichosporum spp.) 分裂酵母(fissionyeast)：非出芽，而是在细胞中央形成隔膜再分裂成两个细胞者(如Schizosaccharomyces spp.) 出芽分裂(budfission)：出芽後基部不缩小，在子细胞与母细胞之间直接分裂的酵母谓之(如Saccharomycodes spp.) 子囊孢子(ascospore)：在不利的环境下，在酵母的生活史中某一部分会形成子囊孢子 有孢子酵母(sporogenousyeasts)：能产生子囊孢子的酵母称之 无孢子酵母(asporogenousyeasts)：不形成子囊孢子之酵母 一倍体营养细胞(haploid)： 由二个一倍体细胞接合後再形成子囊胞子者(如Schizosaccharomyces) 出芽时分裂的二个核融合後在母细胞内形成子囊孢子者(如Debaryomyces) 母细胞与出芽细胞间融合後的核，移到另一个出芽细胞内形成子囊孢子者(如Nadsonia) 二倍体营养细胞(diploid)：环境不合适时，停止出芽生殖，直接减数分裂产生子囊胞子(如Saccharomycodes(孢子能在子囊内直接接合成两倍体)或Saccharomyces(发芽後的胞子间才接合成两倍体)) 子囊(ascus)内的孢子数，普通为2or4，多者可8or16，偶而会有奇数，其形状有：

微生实验报告 2012.10.31 实验四 酵母菌的形态观察及细胞死活的鉴别,微生物细胞大小的测定

微生实验报告 姓名：王晶晖 专业年级：2011级生物技术 学号：040312011032 实验四酵母菌的形态观察及细胞死活的鉴别，微生物细胞大小的测定 一、实验目的 1．观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 2．了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法 . 3．了解血球计数板的构造和使用方法,学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、实验原理 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间物像重叠)用于测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长10μm，每格长（0.01mm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的

酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定

实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定 一、实验目的 1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。 2.学习鉴别死活细胞的实验方法。 二、实验原理 酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。 三、试剂与器材 1.材料酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。 2.试剂0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。 3.器材显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。 四、实验内容 1.美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检 2.水-碘浸片观察 五、关键步骤及注意事项 1.染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。 2.用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。 六、思考题 1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。 2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌? 实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定 一、实验目的 1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。 2.学习鉴别死活细胞的实验方法。 二、实验原理 酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微

差别染色鉴定死活细胞

差别染色鉴定死活细胞 【摘要】在生物体外培养的细胞经过一段时间培养，可通过染色鉴别细胞的死活，从而确定细胞培养的死亡率或存活率。 【关键字】死活细胞染色鉴别计数 【背景介绍】 细胞染色法是常用的细胞死活鉴定方法，简便，易于操作实验是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异来进行的。主要体现在：1）死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过，而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加。2）死活细胞在代谢上的差异：由于活细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，而死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们的无还原能力或还原能力极弱。 活细胞必需通过控制物质进出细胞膜来保持内部生理环境的稳定性。细胞死后，细胞膜通透性发生改变，原先不能进入细胞的物质也能够进入细胞。常见的细胞燃料有：中性红、台盼蓝、甲基蓝、美蓝、荧光素双醋酸酯等。台盘蓝染料正常情况下被活细胞阻拦在细胞膜外，只有细胞膜受损或者细胞死亡后，才能进入细胞，从而与解体的DNA结合，使其着色，因此，活细胞一般不能被台盘蓝染色，而死细胞会被染成蓝色。通过显微镜很容易就能识别出死亡冻得被染色的细胞，并可用细胞计数板进行计数。伊红和苏木精是最常用的细胞染色剂（参见脂肪细胞染色实验）。伊红在很多生物技术中都有应用。伊红有自发荧光特性。悬液中细胞的精确计数，往往采用血细胞计数器。

【实验仪器及试剂】 血细胞计数板、显微镜、盖玻片、试管、吸管 细胞悬液、台盼蓝、伊红、Nacl溶液 【实验步骤】 1、将培养箱中的培养皿取出； 2、先用肉眼，然后用显微镜观察培养的细胞。记录细胞悬液的 颜色是浅紫色；同时和其它组的培养皿进行对比，观察培养 液的颜色是否正常，同时分析原因； 3、敲打培养皿，使得贴壁细胞释放出来，旋摇培养皿，使细胞 充分悬浮； 4、取0.5ml细胞悬液，分别加入一滴台盘蓝，或1.5ml 伊红。 轻轻充分混合后，室温下染色二分钟。 5、在计数器上盖上盖玻片。 6、将细胞悬液滴在计数器两边V字形槽内。细胞悬液依毛细作 用扩散到计数区。 7、在镜下计数。取中间和四个角上的中等方格，计数每个方格 内死活细胞的数量。 【注意事项】 1、当遇到位于大格线上的细胞，一般只计数大方格的上方和右方 线上的细胞。 2、轻轻敲打培养皿的侧壁，不要用力过大，以免破坏培养皿； 3、染色过程要混合均匀，以免影响染色效果； 4、在细胞计数板上滴上细胞液时，量要适当，而且位置要适当，

死活细胞的鉴定方法

活细胞的鉴定在生物学与医学上具有很重要的意义。细胞培养过程中要随时记录细胞的生长情况,需要经常测定细胞的存活率;在肿瘤细胞的研究中,为了检验各种药物对肿瘤细胞的杀伤力,也需要测定肿瘤细胞的存活率。在临床医学中死活细胞的鉴定也有很大的应用,例如为了检测某一男子的生育能力,测定精子细胞的存活力就是比较常用的办法。 死活细胞的鉴定方法有很多种,常用的有染色法与仪器分析法。染色法就是常用的细胞死活鉴定方法,简便,易于操作。但就是通过直接的形态观察来鉴别细胞死活,实验结果很容易受操作者的主观因素的影响,存在一定的误差,所以,在实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测。 不同的死活细胞鉴定方法有各自不同具体的反应机理,但无论采用何种办法,都就是利用了死活细胞在生理机能与性质上的差异。 常用的方法包括染色法与仪器分析法。 1 染色法 染色法分化学染色法与荧光染色法,根据染色机理的不同,染料或使死细胞着色,或使活细胞着色。死活细胞在生理机能与性质上的差异主要包括: 死活细胞细胞膜通透性的差异:活细胞的细胞膜就是一种选择性膜,对细胞起保护与屏障作用,只允许物质选择性的通过;而细胞死亡之后,细胞膜受损,通透性增加。常用的以台盼蓝鉴别细胞死活的方法就就是利用了这一性质。台盼蓝,又称锥蓝,就是一种阴离子型染料,不能透过完整的细胞膜。所以经台盼蓝染色后只能使死细胞着色,而活细胞不被着色。甲基蓝有类似的染色机理。植物细胞的质壁分离也可鉴定死活。 死活细胞在代谢上的差异:就是采用美蓝染料鉴定酵母细胞死活的依据。美蓝就是一种无毒染料,氧化型为蓝色,还原型为无色。由于活细胞中新陈代谢的作用,使细胞内具有较强的还原能力,能使美蓝从蓝色的氧化性变为无色的还原型,因此美蓝染色后活的酵母细胞无色;而死细胞或代谢缓慢的老细胞,则因它们的无还原能力或还原能力极弱,使美蓝处于氧化态,从而被染成蓝色或淡蓝色。 荧光素双醋酸酯(FDA)就是一种常用的培养动植物细胞以及植物细胞原生质体的生活力鉴定染料,其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异:FDA