人参叶生长发育过程中几种氧化还原酶活力比较_杨菲
人参叶生长发育过程中几种氧化还原酶活力比较
杨菲，赵雨，王思明，刘美辰，陈雨
（长春中医药大学中医药与生物工程研发中心，吉林长春130117）
摘要：目的：对五年生人参叶生长发育过程中苹果酸脱氢酶（Malate Dehydrogenase MDH ），乳酸脱氢酶（Lactate de-hydrogenase LDH ），乙醇脱氢酶（Alcohol dehydrogenase ADH ），葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（Glucose －6－phosphate Dehydro-genase G6PDH ），α－磷酸甘油脱氢酶（α－Glycerophosphate dehydrogenase α－GPD ）5种氧化还原酶的活力进行比较，了
解人参叶生长情况。方法：分别于展叶期、开花期、绿果期、红果期、枯萎期采取人参叶样品。采用中性缓冲液提取粗酶
液，
应用分光光度法测定MDH 、LDH 、ADH 、G6PDH 、α－GPD 的活力。结果：在人参叶生长发育过程中，MDH 、ADH 和LDH 活力在展叶期明显高于其他时期；LDH 、G6PDH 在展叶期和结果期末期活力最高；α－GPD 在结果期出现活力峰值。
结论：通过测量MDH 、LDH 、ADH 、G6PDH 、α－GPD 的活力变化可判断人参生长情况。
关键词：人参；氧化还原酶中图分类号：R284．1文献标识码：A 文章编号：1000－1719（2012）07－1369－04
Comparison of Activity of Several Oxidation Reduction Enzyme in
Ginseng Leaves During Growth and Development YANG Fei ，ZHAO Yu ，WANG Si-ming ，LIU Mei-chen ，CHEN Yu
（Center for New Medicine Research of Changchun University of Traditional Chinese Medicine ，Changchun 130117，Jilin ，China ）
Abstract ：Objective ：To compare the activities of Malate Dehydrogenase （MDH ），Lactate Dehydrogenase （LDH ），Alcohol De-hydrogenase （ADH ）and Glucose －6－phosphate Dehydrogenase （G6PDH ）and α－Glycerophosphate dehydrogenase （α－GPD ）in
Ginseng leaves during growth and development ，
in order to understand the growth of Ginseng leaves．Methods ：Take ginseng leaf samples in the spreading stage ，the flowering stage ，the green fruit stage ，the red fruit stage and the withering stage．Adopt neutral buffer solution to extract the enzyme solution of Ginseng leaves．Use spectrophotometry to test the activities of MDH ，
LDH ，ADH ，G6PDH and α－GPD．Results ：In the growth and development process of Ginseng leaf ，the activities of MDH ，ADH and LDH in
the spreading stage obviously higher than other stages．LDH and G6PDH have the highest activity in the spreading stage and the end of the fruit setting stage ，there was a peak of the activity of α－GPD in fruit setting stage．Conclusion ：Measuring the activity changes of MDH ，LDH ，ADH ，G6PDH and α－GPD could judge ginseng growth situation．
Key words ：Radix Ginseng ；oxidation reduction enzyme
收稿日期：2012－01－22
基金项目：国家自然科学基金资助项目（30873371）；国家科技支撑计划
资助项目（2007BAI38B02）
作者简介：杨菲（1985－），女，吉林梅河口人，硕士研究生，研究方向：中
药有效成分与应用开发研究。
通讯作者：赵雨，男，教授，
E －mail ：cnzhaoyu@yahoo．com．cn 。人参（Panax ginseng C．A．Meyer ）是五加科多年生
草本植物，
主要生长在东北三省地区，是我国名贵中药材之一。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生
津安神的功效
［1，2］
。人参叶片主要含有三萜类和皂苷成分，并有与人参很相似的药理作用。
氧化还原酶是一类催化物质进行氧化还原反应的
酶，属于六大酶类中的第一大酶类，物质经氧化还原酶催化，
最终通过氧化磷酸化生成腺苷三磷酸（ATP ），是异养生物体取得能量的主要途径。氧化还原酶在植物中广泛存在，并在植物的生长发育过程中起着十分重要的作用。
人参一年中的生长共分为六个物候期：出苗期、展
叶期、开花期、绿果期、红果期、和枯萎期。连续考察人
参生长发育过程中各种氧化还原酶的活力变化，可以作为人参长势优劣的评价指标，对人参生长发育有更
进一步的了解。1材料与试剂1.1
实验材料
实验所用的新鲜人参植株采自吉林农业大学人参种植园。在五年生人参生长发育阶段每隔采样一次，即自2010年5月24日起至2010年9月20日止。其
中5月24日—6月13日为展叶期，
6月13日—6月28日为开花期，6月28日—8月9日为结果期，8月9日—9月13日为果熟期，9月13日—9月20日为枯萎期。1.2
仪器与试剂
1.2.1仪器DT100电子天平（常熟市双杰测试仪器厂）；TA1203N 电子天平（上海精密科学仪器有限公司）；UV －2550紫外分光光度计（日本岛津公司）；电热恒温水浴锅（北京市永光明医疗仪器厂）；TDL －5型台式大容量离心机（上海安亭科学仪器厂）；Mini 高
速离心机（Eppendorf公司）；DS21型高速组织捣碎机（上海标本模型厂）；LL3000型冷冻干燥机（德国Heto 公司）。
1.2.2试剂NADH、NAD+、NADP（美国Genview 公司）；草酰乙酸（Johnson Matthey公司）；丙酮酸、双甘肽（北京鼎国生物技术有限责任公司）；葡萄糖－6－磷酸（上海晶纯试剂有限公司）；MgCl
2
（北京化工厂）；α－磷酸甘油钠（美国Sigma公司），其他试剂均为国产分析纯。
2实验方法
2.1取样
到采参日期，在上午8：00—9：00，随机取样约10株，立即带回实验室，用水洗净，用滤纸吸干表面水分，称重。
2.2样品的制备
随机取人参植株3支，将叶片分别取下称重，以1?4的料液比加入一定体积预冷的pH7.40.05mol/L 磷酸盐缓冲液，匀浆，置4?下浸提20min，过滤，于12000r/min离心10min，吸取上清液，即得测定用粗酶液。
2.3苹果酸脱氢酶活力测定［3－4］
用0.2mol/L（pH7.5）磷酸盐缓冲液2.9mL，在340nm处将吸光度值调节至零；比色杯中依次加入0.006mol/L草酰乙酸溶液0.1mL，0.00375mol/L NADH溶液0.2mL，加缓冲液至2.9mL，摇匀后向比色杯中加入酶液0.1mL，混匀后，立即计时，每隔0.5min 测A340nm，连续测定2min，计算A340nm/min减少值。以1min内A340nm下降1.0为1g鲜参中苹果酸脱氢酶的一个酶活力单位（U）。
2.4乳酸脱氢酶活力测定［5］
配制0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.5）。NADH 溶液：称3.5mg纯NADH置试管中，加0.1mol/L pH7.5磷酸缓冲液1mL摇匀，现用现配。丙酮酸溶液：称2.5mg丙酮酸钠，加0.1mol/L pH7.5磷酸缓冲液29mL，使其完全溶解，现用现配试剂。将NADH溶液、丙酮酸溶液置25?水浴中预热。用0.1mol/L pH 7.5磷酸缓冲液3mL在340nm处将光吸收调节至零；比色杯中依次加入丙酮酸钠溶液2.9mL，NADH溶液0.1mL，加盖摇匀后，向比色杯中加入酶液0.1mL，立即计时，摇匀后，每隔0.5min测A340nm，连续测定2min，计算A340nm/min减少值。以1min内A340nm 下降0.01为1g鲜参中乳酸脱氢酶的一个酶活力单位（U）。
2.5乙醇脱氢酶活力测定［6］
取1.0mol/L的Tris－HCl（pH8.0）15mL，0.01 mol/L NAD+3mL，82mL蒸馏水配制成100mL反应液。比色杯中加入蒸馏水3mL，置于紫外分光光度计中，在340nm处将光吸收调节至零；比色杯中依次加入反应溶液2.85mL，酶液0.1mL，加入0.03mL95%乙醇，立即计时，加盖摇匀，每隔0.5min测A340nm，连续测定2min，计算A340nm/min减少值。以1min内A340nm下降0.001为1g鲜参中乙醇脱氢酶的一个酶活力单位（U）。2.6葡萄糖－6－磷酸脱氢酶活力测定［7］
向试管中依次加入0.05mol/L双甘肽缓冲液（pH 8.0）0.5mL，0.02mol/L MgCl2溶液1.0mL，0.0006 mol/L NADP溶液0.5mL，酶液0.5mL，将试管置于38?水浴中，反应10min后取出，将此反应液转入比色杯中，再加入0.005mol/L G－6－P溶液1.0mL，立即计时，加盖摇匀，在340nm处每隔0.5min测A340nm，连续测定2min。以1min内A340nm下降0.01为1g 鲜参中葡萄糖－6－磷酸脱氢酶的一个酶活力单位（U）。
2.7α－磷酸甘油脱氢酶活力测定［8］
配制含有α－磷酸甘油钠1.02g，NAD+30mg的0.025mol/L pH10.0甘氨酸－NaOH缓冲液60mL，即为反应液。取反应液3mL，于25?保温3min，加入酶液0.3mL，在340nm处测定吸收度A的变化。以1min 内A340nm下降0.01为1g鲜参中α－磷酸甘油脱氢酶的一个酶活力单位（U）。
3结果
3.1苹果酸脱氢酶活力
由表1和图1可知，人参叶片中苹果酸脱氢酶活力在展叶期活力明显较其他时期高，是后期的3 4倍，峰值为192.08U·g－1（FW）。从开花期至最后的枯萎期，苹果酸脱氢酶活力整体处于一个较低水平。3.2乳酸脱氢酶活力
如表1和图2所示，人参叶片中乳酸脱氢酶活力在生长季的不同时期均出现活力高峰，且展叶期、开花期和结果期活力高于其他时期。
表1人参叶片不同发育时期的鲜重及5种酶活力值
［（U·g－1（FW），n=3，珋x?s）］
日期MDH LDH ADH G6PDHα－GPD
5月29日173.28?6.6934.76?0.1123.77?12.2527.10?3.46191.44?15.10 6月3日172.52?14.4437.59?1.65131.90?3.1624.09?1.9259.50?12.37 6月8日192.08?2.4524.06?0.79330.42?35.3830.08?2.5153.71?7.52 6月13日77.98?2.7338.41?4.6790.97?21.928.62?0.7459.17?12.89 6月21日46.68?2.5120.35?0.4881.76?3.67 4.55?1.7930.89?13.83 6月28日29.91?0.479.98?1.9099.81?17.68 2.53?0.2731.73?20.50 7月5日66.68?3.3733.73?1.15150.75?22.4812.89?0.9190.07?27.21 7月12日68.85?3.2026.03?1.30188.97?18.8012.81?2.9968.85?24.60 7月19日63.41?2.3714.90?1.3368.83?2.159.37?0.32261.91?7.08 7月26日19.86?5.1314.17?2.1160.68?11.20 1.04?0.9541.81?18.26 8月2日44.67?11.9622.02?2.9080.31?2.887.47?1.1024.70?21.34 8月9日25.99?0.0021.46?0.0066.87?0.00 1.94?0.007.66?0.00 8月16日39.03?2.2617.43?1.7774.02?7.56 6.77?0.5618.68?18.96 8月23日36.78?4.1225.28?3.2096.47?4.4910.91?1.0435.50?24.29 8月30日84.48?16.3030.34?0.9784.01?5.3420.47?1.880.00?0.00 9月6日71.34?2.0629.25?2.15141.76?4.4334.66?0.220.00?0.00 9月13日28.52?3.2925.28?0.8770.91?11.87 1.88?0.0054.23?17.82 9月20日75.82?0.0041.52?0.00116.78?0.00 1.51?0.0031.14?0.00
3.3
乙醇脱氢酶活力
如表1和图3所示，人参叶中乙醇脱氢酶在展叶
期出现是整个生长季的活力最高峰，达（330.42?
35.38）U ·g －1
（FW ），结果期又出现一个活力小高峰，
。
图1
苹果酸脱氢酶活力
图2
乳酸脱氢酶活力
图3乙醇脱氢酶活力
3.4
葡萄糖－6－磷酸脱氢酶活力
如表1和图4所示，人参叶片中葡萄糖－6－磷酸
脱氢酶在展叶期活力较高，是开花期到结果期的3－5
倍，而在果熟期，葡萄糖－6－磷酸脱氢酶活力迅速升高达到整个生长季的活力最高值（34.66?0.22）U ·g －1（FW ）
。
图4葡萄糖－6磷酸脱氢酶活力
3.5
α－磷酸甘油脱氢酶活力如表1和图5所示，人参叶片中α－磷酸甘油脱氢酶活力整体呈缓慢下降的趋势，但在结果期出现最
高值（261.91?7.08）U ·g －1
（FW ），是整体水平的5倍之高
。
图5
α－磷酸甘油脱氢酶脱氢酶活力
4讨论
4.1
苹果酸脱氢酶
苹果酸脱氢酶是在草酰乙酸盐和苹果酸盐之间转化中起催化作用的酶，它普遍存在于动物、植物、细菌等各种生物体中。而叶绿体中的苹果酸脱氢酶主要在
光合作用中起固定二氧化碳的作用
［9－10］
。在人参展叶期叶片中的苹果酸脱氢酶主要用于固定二氧化碳，为
展叶提供能量，所以在展叶期的活力较人参生长后期
活力高很多。而展叶期过后人参的主要能量都用于开花结果，叶片不再生长，故叶片中的苹果酸脱氢酶活力活力变化不大。4.2乳酸脱氢酶
乳酸脱氢酶是催化乳酸和丙酮酸相互转换的酶，
在代谢过程中起关键作用［4］
。在人参展叶期，乳酸脱氢酶活力较高，为叶片的伸展提供能量。在开花期、结果期和果熟期，乳酸脱氢酶为人参花和果实的形成提供能量，供其生长所用，故其活力升高。4.3乙醇脱氢酶
乙醇脱氢酶在植物无氧呼吸过程十分重要，它在
糖酵解过程中分解乙醇，从而起到供能作用［11］
。乙醇脱氢酶在展叶期迅速升高，为人参叶片的展开提供能量。展叶期以后乙醇脱氢酶为人参叶片提供保护，减少乙醇对其的侵害。
4.4葡萄糖－6－磷酸脱氢酶
葡萄糖－6－磷酸脱氢酶是磷酸酸戊糖途径的关键酶，它可以为脂肪酸合成、氮还原和谷胱甘肽等生物分子合成提供还原能力NADPH ，也为核酸合成提供戊
糖，参加非生物逆境胁迫应答反应［12］
。人参展叶时，葡萄糖－6－磷酸脱氢酶为脂肪酸合成和氮还原提供NADPH ，从而提高脂肪酸合成效率，为叶片提供大量能量。果熟期葡萄糖－6－磷酸脱氢酶为果实的成熟提供能量，活力迅速上升。通过测定葡萄糖－6－磷酸脱氢酶的活力，
可监测人参中的供能情况。4.5α－磷酸甘油脱氢酶
α－磷酸甘油脱氢酶是甘油代谢和磷脂合成途径中起重要作用的酶；同时，其活性又与细胞对环境渗透
压的耐受性有关
［13］
。人参生长的整个时期，α－磷酸
甘油脱氢酶活力变化较平稳，在7月19日活力突然升高至261.91U·g－1（FW），是由于当日气温高光照强，致使人参叶片水分蒸发，细胞处于高渗环境。α－磷酸甘油脱氢酶活力反应了人参生长环境的渗透压高低，可以通过测量其活力，改善高渗或低渗环境，以保持人参细胞内外渗透压平衡，提高人参质量。
实验通过测定人参生长发育过程中5种脱氢酶活力，进一步了解了人参的生长环境，如渍水环境、渗透压情况、人参叶片的代谢供能情况等，为人参叶片的质量评价、培育、优选提供科学依据。
参考文献
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收稿日期：2012－01－25
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（4）：377－384．
纯化小蓟中总黄酮用大孔吸附树脂的研究
赵琳1，赵焕君1，刘长江2，解世全1
（1.辽宁中医药大学药学院，辽宁大连116600；2.福民大药房连锁有限公司，辽宁沈阳110000）
摘要：目的：为纯化小蓟提取液中总黄酮类化合物，选择适宜的大孔吸附树脂。方法：选用可见分光光度法检测吸光度，以最大吸附率和解吸率为指标。结果：通过实验考察，大孔吸附树脂HPD100解吸率与吸附率均高于其他树脂。结论：选择大孔吸附树脂HPD100用于小蓟中总黄酮化合物的纯化，方法可行，能够适应工业生产。
关键词：小蓟；总黄酮；大孔吸附树脂；吸附；解吸
中图分类号：R284文献标识码：A文章编号：1000－1719（2012）07－1372－02
Selection and Purification of Total Flavones from Thistle with Macroporous Resin
ZHAO Lin1，ZHAO Huan-jun1，LIU Chang-jiang2
（1.College of Pharmacy of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian116600，Liaoning，China；
2.Fumin Large Pharmacy Chain Ltd，Shenyang110000，Liaoning，China）
Abstract：Objective：In order to sublime the total flavones from thistle extract，we chose the appropriate macroporous resin．Methods：Absorbance was detected with uv－vis，taking the maximum adsorption rate and desorption rate as index．Results：With the experimental study，we found the adsorption rate and desorption rate of HPD100of Macroporous resin were all higher than oth-er resins．Conclusion：Take the HPD100of Macroporous resin to sublime the total flavones from thistle extract，the method is feasi-ble and can be adapted to the industrial production．
Key words：thistle；total flavones；macroporous resin；adsorption；desorption
小蓟（Cephalanoplos segctum）为菊科植物刺儿菜Cirsium Setosum（Willd．）MB．的干燥地上部分。应用于心脑血管系统疾病的治疗，黄酮类化合物为有效部位。小蓟总黄酮在提取过程中，杂质也被提出，增大了出膏率和服用量，也给制剂过程带来一定困难。采用大孔吸附树脂纯化的方式对总黄酮提取物进行纯化处理，降低出膏率和服用量，方便患者服用。
本实验选择多种大孔吸附树脂进，对静态吸附率、解吸率进行考察，选择合适的树脂用于对小蓟中总黄酮进行纯化。
几种抗氧化酶的作用
一.超氧化物歧化酶(SOD): 超氧化物歧化酶，是一种新型酶制剂，是生物体重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体，如动物，植物，微生物等。SOD具有特殊的生理活性，是生物体清除自由基的首要物质。SOD在生物体的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞。由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要！ 超氧化物歧化酶(SOD)按其所含金属辅基不同可分为三种，第一种是含铜（Cu）锌（Zn）金属辅基的称（Cu.Zn—SOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中；第二种是含锰（Mn）金属辅基的称（Mn—SOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞；第三种是含铁（Fe）金属辅基的称（Fe—SOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。 SOD是一种含有金属元素的活性蛋白酶。超氧化物岐化酶（SOD）能催化如下的反应：O2-+H+→H2O2+O2，O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。SOD是机体天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有害的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有害的活性氧，但体的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶（POD）会立即将其分解为完全无害的水。
这样，三种酶便组成了一个完整的防氧化链条。 目前，人们认为自由基（也称游离基）与绝大部分疾病以及人体的衰老有关。所谓的自由基就是当机体进行代时，能夺去氧的一个电子，这样这个氧原子就变成自由基。自由基很不稳定，它要在身体组织细胞的分子中再夺取电子来使自己配对，当细胞分子推出新一个电子后，它也变成自由基，又要去抢夺细胞膜或细胞核分子中的电子，这样又称会产生新的自由基。如，超氧化物阴离子自由基、羟自由基、氢自由基和甲基自由基，等等。在细胞由于自由基非常活泼，化学反应性极强，参与一系列的连锁反应，能引起细胞生物膜上的脂质过氧化，破坏了膜的结构和功能。它能引起蛋白质变性和交联，使体的许多酶及激素失去生物活性，机体的免疫能力、神经反射能力、运动能力等系统活力降低，同时还能破坏核酸结构和导致整个机体代失常等，最终使机体发生病变。因此，自由基作为人体垃圾，能够促使某些疾病的发生和机体的衰老。虽然自由基会对机体产生诸多危害，但是在一般的条件下人体细胞也存在着清除自由基、抑制自由基反应的体系，它们有的属于抗氧化酶类，有的属于抗氧化剂。像SOD就是一种主要的抗氧化酶，能清除超氧化物自由基，在防御氧的毒性、抑制老年疾病以及预防衰老等方面起着重要作用。 SOD能专一地清除体有害的自由基，以解除自由基氧化体的某些组成成分而造成的机体损害。如氧中毒、急性炎症、水肿、自身免疫性疾病、辐射病等疾病都与活性氧的毒性有关。实验证明，SOD能够清除自由基，因此可消除上述疾病的病因。此解毒反应过程是两步：
抗氧化酶活性等测定方法
叶绿体得提取 一、试剂配置 １、PＢS提取液:每L水依次加入MES(１9５.2×0。05=９、7６g)、山梨糖醇(0。33×182。2＝60。1２6g)、ＮaCｌ(０、０10×58.5=0、５85g)、MgCｌ(０.002×95=0、19g)、EDＴA(292、２5×０.0０２=０、５84５g)、KH2PO４(２00×0.0005=０、１g);使用时加入ASＡ—Nａ(１98。1×0、00２=0、３962g); 2、悬浮液:将ＰBS提取液中得MES换为238。３×0.05＝１１、９15g得HEＰＥS(238、3×０。05=11。915ｇ); ３、8０%Pｅrｃoｌ:8０ml原液+２0ml水;40％Perｃol:４0ｍl原液＋60ml水; 实际配制: PBS提取液2000ｍl(3个处理*2个品种＊３个重复＊20ml＊３次=1０80mｌ), 悬浮液100ml(３个处理＊2个品种＊3个重复*1mｌ＊3次＝5４ml); 8０％Percol ２０0ml;40%Percｏl 200ml。(3个处理*2个品种*3个重复*3mｌ＊3次=162ｍl) 二、提取步骤 1、10g鲜样加20ｍl提取ＰＢS(50mM MES PH６、1,含0、３3M山梨糖醇,10mM NaＣl,2mMＭgCｌ２,２ｍM EＤTA,０.5 mMKH2PＯ４,2mM ASA—Ｎa,ASＡ—Na使用前现配现加) 2、快速研磨,使叶片碎成绿豆粒大小,４层纱布过滤,去除残渣(注意过滤时不可用力挤压,以免叶绿体膜破碎) 3、滤液20００g ３ｍin,小心倒出上清液,将离心管放入离心机后,使离心机得加速很快上升到预定值(水平转头,加速度调到9),约经30s后很快使其下降停止,整个离心持续大约2—3ｍｉｎ左右完成; 4、沉淀用１ml提取液漂洗表面悬浮物; 5、用1ml悬浮液(５０mM HＥPＥS pＨ7。6,含０、３３mM山梨糖醇,１０mM NaＣl,2mM MgＣl2,2mM EDTA,0。5mMKH2PＯ４,2mM ASA－Ｎａ,ASＡ-Na使用前现配现加)将沉淀悬浮,在分散叶绿体时宜用毛笔轻轻刷,或者用手握住离心管在冰块之间搅动,使叶绿体由于震动分散开来,不要用棉球吸滤,以防被膜压破。叶绿体悬浮时要浓点,含叶绿素２ｍg、ml-1以上,这样有利于保持活性。 6、２000g 1min; 7、沉淀再用悬浮液悬浮;(悬浮液同5,可以不做) 8、用Ｐｅrcol试剂进行梯度离心(将3ml含有80％Peｒcｏl(原液按100％算)铺在１0mｌ离心管下层,再把３ｍl 40％Perｃol铺在离心管中层,然后将1mｌ叶绿体悬浮液轻轻铺在离心管上层)１500ｇ2-3mｉn(用
人参的毒副作用
人参的毒副作用 人参的滋补、强壮作用几乎路人皆知，但人参的毒性及副作用却往往被人们忽视，随着人们生活水平的提高，服用人参或人参制剂进补的人越来越多，一些人盲目大量使用人参，往往造成一系列不良后果。 一般来所，人参的急性毒性比较低，研究证实：小鼠经口摄入每千克体重5克的人参粉末，才可以引起半数死亡。而人们通常服用人参制剂是每次3-9克，一般不至于引起急性中毒，但也有部分人对人参比较敏感，在服用较大剂量的人参或人参制剂后，可能出现急性中毒症状，表现为全身玫瑰疹、发热、头痛、眩晕、视物模糊、烦躁不安、胸闷气促，严重者可见抽搐、惊厥，或出血死亡。出血是人参中毒的典型症状，可表现为牙龈出血、鼻出血、胃肠出血，甚至脑出血。值得注意的是，新生儿和婴幼儿往往对人参特别敏感，一次口服0.5克，可能引起急性中毒。有报道某地习俗让新生儿口服人参，以促进孩子的生长发育，结果有3例口服红参0.5-1.5克半小时至数小时后出现烦躁不安、哭闹拒乳、抽搐惊厥、心率减慢，其中1例抢救无效而死亡。 人参作为一种滋补性药物，可以增强机体非特异性抵抗力，对人体许多重要的生理活动都有双向调节作用，但使用必须适量，过量服用则往往适得其反。如小剂量人参提取物可增强心肌收缩力，增强心排血量，并能扩张外周血管，改
善血液循环。但大剂量人参则可导致心肌麻痹和控制血管运动的神经中枢麻痹，出现循环衰竭。人参皂甙是人参的主要成分，它与皮质类固醇的结构相似，可刺激下丘脑-垂体-肾上腺皮质系统。长期大剂量服用人参或人参制剂，可出现类似皮质醇中毒的症状，被称之为“人参滥用综合征”，主要表现为高血压、神经过敏、易激动、失眠、皮疹、晨泻等，严重者可出现精神错乱。此外，大剂量服用人参还可出现抑郁、食欲减退、水肿、低血压、闭经、腹胀等复杂多样的副作用。 服用人参出现的另一个不良后果是儿童性早熟。一些儿童因服人参或人参的滋补品后，女孩子月经初潮提前，男孩子提前长出胡子，阴茎增大，甚至男性乳房发育等，这些是因为人参具有促性腺激素样作用，可使儿童的性腺提前发育，分泌性激素，结果出现性早熟，这对儿童的生理和心理健康均有不良影响，值得家长及儿童保健专家们注意。 清代名医徐大椿在《用药如用兵论》中指出：“虽甘草、人参，误用致害，皆毒药之类也。”综上所述亦可知道，人参有其一定的适应症，并非人人皆宜、多多益善，而是要在医师指导下，合理、适量。一旦出现人参急性中毒或“人参滥用综合征”等表现，应立即停用并马上去医院治疗。新生儿及婴幼儿不宜使用人参（除非病情需要），以免引起急性中毒。
硫氧还蛋白氧化还原酶(thioredoxin reductase, TrxR)试剂盒说明书
货号：MS1110 规格：100管/96样 硫氧还蛋白氧化还原酶 （thioredoxin reductase,TrxR）试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： TrxR是一种NADPH依赖的包含FAD结构域的二聚体硒酶，属于吡啶核苷酸-二硫化物氧化还原酶家族成员，与硫氧还蛋白以及 NADPH 共同构成了硫氧还蛋白系统。TrxR与GR活性类似，催化GSSG还原生成GSH，是谷胱甘肽氧化还原循环关键酶之一。 测定原理： TrxR催化NADPH还原DTNB生成TNB和NADP+，TNB在412nm有特征吸收峰，通过测定412nm波长处TNB的增加速率，即可计算TrxR活性。 自备仪器和用品： 低温离心机、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。 试剂组成和配制： 试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 2mL 蒸馏水溶解。 试剂三：粉剂×1 管，4℃保存。临用前加入 2mL 蒸馏水溶解。 粗酶液提取： 1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 组织，加 入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。 2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）； 然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。 3. 血清等液体：直接测定。 TrxR 测定操作： 1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到412nm，用蒸馏水调零。 2. 试剂一在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）预热30min。 3. 空白管：取微量玻璃比色皿或96孔板，加入20μL试剂二，20μL试剂三，160μL试剂一， 迅速混匀后于412nm 测定10s和310s吸光度，记为A1和A2。△A空白管=A2-A1。 4. 测定管：取微量玻璃比色皿或96孔板，加入20μL试剂二，20μL试剂三，140μL试剂一， 20μL上清液，迅速混匀后于412nm测定10s和310s吸光度，记为A3和A4。△A 测定管=A4-A3。注意：空白管只需测定一次。 TrxR 活性计算公式： (1). 按蛋白浓度计算 活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化1nmol DTNB还原为1个酶活单位。 TrxR（nmol/min/mg prot）=（△A测定管-△A空白管）÷ε÷d×V反总÷(Cpr×V样)÷T = 147×（△A 测定管-△A 空白管）÷Cpr 第1页，共2页
抗氧化酶SODPODCAT活性测定方法
抗氧化酶 S O D P O D C A T活性测 定方法 集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法 酶液制备：取0.2g（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入1.6ml 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液 （pH7.8）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。 一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法） 1、试剂的配制 （1）0.05mol/L磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)： A母液：0.2mol/L磷酸氢二钠溶液: 取Na 2HPO 4 ·12H 2 O（分子量 358.14）71.7g； B母液：0.2mol/L磷酸二氢钠溶液：取NaH 2PO 4 ·2H 2 O（分子量 156.01）31.2g。 分别用蒸馏水定容到1000ml。 0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取A母液(Na 2HPO 4 ) 228.75ml，B母液(NaH 2PO 4 ) 21.25ml，用蒸馏水定容至1000ml。 参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。 （2）130mM甲硫氨酸溶液：取1.9399g Met用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至100ml。 （3）100μM EDTA-Na 2溶液：取0.03721gEDTA-Na 2 用磷酸缓冲液定 容至1000ml。 （4）20μM核黄素溶液：取0.0753g核黄素用蒸馏水液定容至1000ml，避光保存。 （5）750uM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取0.06133g NBT用PBS定容至100ml，避光保存。 2、酶活性测定 （1）取10ml试管（要求透明度好）
西洋参和黄芪泡水喝的功效和作用
西洋参和黄芪泡水喝的功效和作用 西洋参和黄芪泡水喝的功效和作用： 一、增强中枢神经系统功能 西洋参中的皂甙可以有效增强中枢神经，达到静心凝神、消除疲劳、增强记忆力等作用，可适用于失眠、烦躁、记忆力衰退及老年痴呆等症状。 二、保护心血管系统 常服西洋参可以抗心律失常、抗心肌缺血、抗心肌氧化、强化心肌收缩能力，冠心病患者症状表现为气阴两虚、心慌气短可长期服用西洋参，疗效显著。西洋参的功效还在于可以调节血压，可有效降低暂时性和持久性血压，有助于高血压、心律失常、冠心病、急性心肌梗塞、脑血栓等疾病的恢复。 三、提高免疫力 西洋参作为补气保健首选药材，可以促进血清蛋白合成、骨髓蛋白合成、器官蛋白合成等，提高机体免疫力，抑制癌细胞生长，有效抵抗癌症。 四、促进血液活力 长服西洋参可以降低血液凝固性、抑制血小板凝聚、抗动脉粥样硬化并促进红血球生长,增加血色素。 五、治疗糖尿病 西洋参可以降低血糖、调节胰岛素分泌、促进糖代谢和脂肪
代谢，对治疗糖尿病有一定辅助作用。 西洋参的副作用 西洋参虽然具有很好的滋补作用，但并非人人都适合服用，如果药不对症，很可能会起到反作用。西洋参属于凉药，宜补气养阴，但如果身体有热症，诸如口干烦躁、手心发热、脸色发红、身体经常疲乏无力，使用西洋参类补品可以达到调养的目的。反之，若咳嗽有痰、口水多或者有水肿等症状，就要避免服用西洋参类补品，以免病情加重;“非虚勿补”，如果身体并无不适，不宜经常服用西洋参;西洋参不利于湿症，服用时还要考虑季节性。春天和夏天气候偏干，比较适合服用西洋参，不宜服用人参或红参，而秋冬季节则更适宜服用人参。 黄芪的副作用 最常见的副作用就是迅速出现“上火”症状，如面红、心烦、睡眠差或失眠、咽痛、血压升高或头晕等，甚至使病情加重或逆转病势。临床上，一般人经常单独使用黄芪进补或一次性大量进补，那是没病找病或加重疾病的危险行为。使用黄芪进补，一般要由少逐渐增加，边服边观察有无上火的表现或身上原有疾病有无加重或是否出现闷、痛的感觉，一旦有则应停用或配药才能用;如果乏力、多汗或气喘等症状减轻，精神和体力改善而又无上述副作用，可增加用量。更安全的办法则是先用党参，有效而无副作用后再加用或改用黄芪，使用黄芪时采用逐步加量的办法，以身体能耐受而无副作用为度。最安全的办法是配方使用。
谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GR)活性测定试剂盒说明书
货号：QS1111 规格：50管/48样 谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase, GR）活性测定试剂盒说明书 紫外分光光度法 注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一（通常昆虫中GR被TrxR取代）。GR催化NADPH还原GSSG生成GSH，有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外GR还参与抗坏血酸－谷胱甘肽循环途径。 测定原理： GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH，同时NADPH脱氢生成NADP+；NADPH在340 nm有特征吸收峰，相反NADP+在该波长无吸收峰；通过测定340 nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率，从而计算GR活性。 自备实验用品及仪器： 紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水 试剂组成和配置： 试剂一：液体×1瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入5.0 mL蒸馏水，混匀。 试剂三：液体×1支，4℃保存。 粗酶液提取： 1.组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加 入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。 2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。 3.血清等液体：直接测定。 操作步骤： 1. 分光光度计预热30 min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。 2. 试剂一置于25℃（普通物质）或者37℃（哺乳动物）中预热30min。 3. 空白管：取1mL石英比色皿，加入850μL试剂一，100μL试剂二，50μL试剂三，充分混匀，于340nm 处测定10 s和190 s吸光度，记为A空1和A空2，△A空白管= A空1﹣A空2。 4. 测定管：取1mL石英比色皿，加入750μL试剂一，100μL试剂二，100μL上清液，50μL 试剂三，充分混匀，于340nm测定10 s和190 s吸光度，记为A测1和A测2，△A测定管= A 测1﹣A测2。 注意：空白管只需要测定一次。 计算公式： 第1页，共2页
抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性测定方法
抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法 一、超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法） 1、试剂的配制 （1）L磷酸缓冲液(PBS，： A母液：L磷酸氢二钠溶液: 取Na2HPO4·12H2O（分子量）71.7g； B母液：L磷酸二氢钠溶液：取NaH2PO4·2H2O（分子量）31.2g。 分别用蒸馏水定容到1000ml。 L PBS（）的配制：分别取A母液(Na2HPO4) ，B母液(NaH2PO4) ，用蒸馏水定容至1000ml。参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。 （2）甲硫氨酸溶液：取 Met用磷酸缓冲液（）定容至1000ml。 （3）30μM EDTA-Na2溶液：取用磷酸缓冲液定容至100ml。 （4）60μM核黄素溶液：取核黄素用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存。 （5）氮蓝四唑(NBT)溶液：取 NBT用PBS定容至100ml，避光保存。 酶液制备：取（可视情况调整）样品（新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中，加入 50mmol/L预冷的磷酸缓冲液（）在冰浴上研磨成匀浆，转入离心管中在4℃、12000g下离心20min，上清液即为酶液。 2、酶活性测定 （1）反应混合液配制(以60个样为准)：分别取Met溶液162ml，EDTA-Na2溶液，磷酸缓冲液，NBT溶液6ml，核黄素溶液6ml,混合后摇匀； （2）分别取3ml反应混合液和30μl酶液于试管中 （3）将试管置于光照培养箱中在4000 lux光照下反应20min； 同时做两支对照管，其中1支试管取3ml反应混合液加入30μl PBS（不加酶液）照光后测定作为最大光还原管，另1支只加缓冲液置于暗中测定时用于调零。 （4）以不照光的对照管（只有缓冲液并置于暗处）调零后，避光测OD560(出现颜色即可测定)。 （5）酶活性计算：SOD活性单位以抑制NBT光化还原50％所需酶量（测的样品值要在
人血白蛋白对人体有没有什么副作用
人血白蛋白对人体有没有什么副作用 到医院主动要求注射白蛋白的健康人群越来越多，不少有钱人还把这当做一种时髦进补的方法，认为输入白蛋白越多越好，可提高免疫力、增强体质、延缓衰老等，其实这是一种错误的认识。 滥用危及健康 白蛋白是用人血经科学加工提取的一种生物制剂，主要用于出血性疾病引起的失血性休克或大面积烧伤的治疗，有时亦作为癌症病人晚期的支持治疗。 白蛋白是健康人血浆中含量最多的蛋白质，健康的人输入白蛋白，并不能起到营养的作用。 据了解，白蛋白在肝细胞内合成，合成后进入血液循环而分布到周身血液及体液中。当肝功能正常时，哪怕有一时性的低蛋白血症，只要合理补充足量蛋白质食物，即可使低蛋白血症得到纠正，根本不用输注白蛋白。对于血浆白蛋白水平正常的人来说，如果输注白蛋白，不但对人体无益，反而会使白蛋白的合成受到抑制，导致分解加速。 虽说白蛋白副作用较少，但应用不当，仍可造成不良后果，若输入过多、过快，极易引起血容量骤然增加，从而加重了心、肺负担。故心、肺、肾等病患者使用时更应当谨慎。 由于是血液制品，虽然经过处理，但是其中的一些物质可能会使接受者产生过敏反应。
营养药不能乱“补” 在现实生活中，经常会见到一些人把白蛋白、氨基酸、高浓缩葡萄糖等营养药当成营养品，希望以此来滋补身体。其实，和白蛋白一样，氨基酸虽为人体所必需，但也容易从食品中获取，平时吃进的蛋类、鱼、肉、豆类等都含有丰富的蛋白质。而输注氨基酸同样也有隐患，有时可致过敏反应，因此应特别慎重。 除了把上述几种营养药当成营养品使用外，还有人把人参、维生素等药品当成营养品使用。有人因盲目服用人参而出现头晕、眼花、烦躁不安、鼻出血；有的人因吃多了鱼肝油丸，引起维生素A和维生素D中毒而出现恶心、呕吐；有的人在大量服用维生素C后中毒，引起腹泻、尿路结石……总之，营养药与营养品仅一字之差，但却区别多多。因此，切不可把营养药当成营养品，必须在医生指导下使用，不要盲目要求输注。
抗氧化酶的作用
重要的抗氧化酶和抗氧化剂的作用 超氧化物歧化酶（SOD）是美国的McCord和Fridovich在1969年发现的一种清除超氧阴离子自由基的酶。SOD是一种广泛存在于生物体内的金属酶，按金属辅基的成分不同主要分成三类,第一类含铜和锌，称为CuZn-SOD，是最常见的一种，呈蓝绿色，主要存在于真核细胞的细胞浆内。第二类含锰，称为Mn-SOD，呈粉红色，主要存在于原核细胞体、真核细胞的细胞浆和线粒体内。第三类含铁，称为Fe-SOD，呈黄褐色，主要存在于原核细胞中。另外，在牛肝中还发现一种CoZn-SOD[8]。 正常生理状态下，机体产生的自由基和清除自由基的速率处于动态平衡状态。但当机体内自由基产生增多，就会对机体的蛋白质、脂质和DNA造成损伤，导致机体疾病的发生。SOD是生物体内对抗氧自由基的一种最重要的抗氧化酶，是专门清除超氧阴离子自由基的。它的作用是将氧自由基歧化，发生2O2- +2H+ SOD H2O2 + O2的反应。由于H2O2 在SOD活性部位生成，会对SOD本身产生杀伤。催化产生的H2O2 如果不被及时清除，它会与O2-反应生成毒性更大的羟基自由基。衰老自由基学说认为，代谢产生的自由基对机体造成的损害可引起衰老，SOD可有效的清除自由基，在一定程度上延缓衰老。此外，SOD还具有增强机体免疫力，提高机体对自由基引发的疾病的抵抗力，消除运动性疲劳等生理功能[3]。 过氧化氢酶（CAT）是一种末端氧化酶，广泛存在于动植物和微生物体内，酶分子结构中含有铁卟啉环，1个分子酶蛋白中含有四个铁原子[9]。CAT的生物学功能是催化过氧化氢分解为水和氧，2 H2O2 CAT 2H2O + O2 。过氧化氢酶（CAT），广泛存在于动植物和微生物体内的一种末端氧化酶。它的生物功能是催化细胞内的过氧化氢分解，起抗氧化作用，即2H2O2 2H2O+O2，它可防止过氧化氢含量过高对机体组织造成损伤，对细胞起到保护作用。 本研究结果显示，力竭运动后，大鼠的心组织、肝组织和肺组织中CAT活性均表现出升高，这可能是由于运动应激造成大鼠组织过氧化物质增多，使得组织CAT活性对应升高。同时，结果显示，联合补充谷氨酰胺和番茄红素对力竭运动大鼠肝组织和肺组织的抗氧化能力提高的效果最为明显，而单纯补充番茄红素对心脏
JT叔叔给了一个补身体的顺序
JT叔叔给了一个补身体的顺序 2017-09-03 浅析OL 来源阅2955 转66 1如果一个人还内夹瘀血，你用补阳系统的药，有时反而把人烧得瘀血结得更死硬，生出更多的毛病来。当然，在瘀血之前，还有「先治厥阴病」这件事，上热下寒的厥阴病体质不先搞好，通常连瘀血都是打不动的，更何况后几步的补阳法，一补就先爆掉。 而补阳，痰饮体质的人，通常也不能一开始就以大剂附子作主轴，有时反而把湿痰烧成顽痰老痰。治痰的药，有另外一路用药轻淡的渗利通阳之法。 单纯的痰饮体质、单纯的水毒体质，用药都很好取方；但，夹「湿」有时会很讨厌，有些时候消痰药可以顺便去湿，但有些时候不行；那个湿气，还需要用另外用风药去带，才排得出去，但一用风药，血虚的副作用就等在前头，还没有进展到减肥，还又要先回头来补血，如果你是医者，原地这样兜著圈圈，老见不著减肥的成效，病人也没耐心在那裡「日进一尺、夜退九寸」地陪你蜗牛爬杆儿了。 如果是要用六气六经的系统来调体质的话，一定是先把厥阴修补到能够少阴，再把少阴修复到能够太阴，然后太阴修复到能够少阳。 所以，总的来讲，也不只是减肥啦，一般调理体质，大约也是照著这样的顺序，比较不会「卡关」： 1.左右脑解离的人直接退case不要医；//大意是执着于做一个正能量的人，忽略内心的渴望。 1.先治厥阴；//在伤寒论的厥阴方里找。JT比喻乌梅丸是修一个破漏的话，麻黄升麻汤是修一整个大洞。但是血虚的人吃不得麻黄，要先补血再吃，参见：麻黄九禁。麻黄把血里的水分推出体外，如果你这个人身体阳盛，湿气少，偏血虚，吃了就会血不够水分，直接脱水，临时解决应该是用电解质水补水，用白虎汤清血热，过后补血补肾，炙甘草汤、肾气汤、益多散。我看一篇医学论文给几十个病人每天吃20~30克麻黄方剂，连续吃一个月治愈耳鸣，于是效仿。起初吃10克，无妨，论文指出要逐渐增加到30克，结果我吃过一次麻黄20克就倒霉了，从此一直没有修复过来，吃了会有头晕头疼失眠颅内压增高到无法躺下眼干鼻干口干舌干双肾痛等等，但是没有医生可以开出解决麻黄过量的方剂，我自己试验摸索出来，已经是两三个月之后，元气大伤，免疫力虚弱引发了一连串的问题，三五年复原不到。（其实中医西医的论文里面，大量都是造假，国外还有期刊把中国一百多篇医学论文退回，指出经过验证全部是造假。以后要注意分辨。） 2.再治瘀血；//这类方剂，JT叔叔推荐的是大黄蛰虫丸。我用过生三七泽泻粉（比例：4:1）配去风湿的竹节香附，吃过之后非常棒，全身的毛病都好像完全消失，那时我血是够的。血虚的人，吃这些活血化瘀的药，会马上头晕。古人建议先吃活血化瘀药，再吃琼玉膏养血，活血的药材都耗血，行气的药材都耗气。还有一些治理淤血结在子宫的，比如温经汤、桃仁煎。书上说，女生淤血在子宫，还有用一些加热的方法把淤血烧成干血在子宫，她就会口干手干。 3.补阳之前要先去痰饮；//比如，你吃一碗人参汤，人参跑到脾土，土生金，脾要传递给肺，但是人参汤剂量太大，传递不动，于是人参就在脾干烧，把脉道好好的水气都烧成了痰。梨子可以去掉人参导致的痰。从此你再吃任何补阳药，脉内是痰，再吃只能加剧痰。 4.水毒体质的治疗可与补阳同步进行；但：4.5-1.肾水不足的人、先补足肾水再补阳免得乾烧；//意思是先补肾阴，再补肾阳。4.5-2.夹湿卡关的人要兼去湿；//黄豆芽每天半斤煮水喝
谷胱甘肽还原酶(GR)活性测定试剂盒说明书
货号：MS1111 规格：100管/96样谷胱甘肽还原酶（GR）活性测定试剂盒说明书 微量法 注意：正式测定之前选择 2-3个预期差异大的样本做预测定。 测定意义： GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一（通常昆虫中GR被TrxR取代）。GR催化NADPH还原GSSG生成GSH，有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外GR还参与抗坏血酸－谷胱甘肽循环途径。 测定原理： GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH，同时NADPH脱氢生成NADP+；NADPH在340nm有特征吸收峰，相反NADP+在该波长无吸收峰；通过测定340nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率，从而计算GR活性。 自备仪器和用品： 低温离心机、水浴锅、移液器、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、和蒸馏水 试剂组成和配置： 试剂一：液体×1 瓶，4℃保存。 试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。临用前加入 2mL 蒸馏水，混匀。 试剂三：液体×1 支，4℃保存。 粗酶液提取： 1. 组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加 入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。 2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500 万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）； 然后8000g，4℃，离心15min，取上清置于冰上待测。 3. 血清等液体：直接测定。 操作步骤： 1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到340nm，蒸馏水调零。 2. 试剂一置于25℃（普通物质）或者37℃（哺乳动物）中预热30min。 3. 空白管：取微量石英比色皿或96孔板，加入170μL试剂一，20μL试剂二，10μL试剂三， 于340nm 测定10s和190s吸光度，记为A空1和A空2，△A空白管= A空1﹣A空2。 4. 测定管：取微量石英比色皿或96孔板，加入150μL试剂一，20μL试剂二，20μL上清液， 10μL试剂三，于340nm测定10s和190s吸光度，记为A测1和A测2，△A测定管=A测1﹣A测2。注意：空白管只需要测定一次。 计算公式： a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下 (1). 按蛋白浓度计算 第1页，共3页
党参等功效作用
党参 性味归经性平，味甘、微酸。归脾、肺经。功能主治补中益气，健脾益肺。用于脾肺虚弱，气短心悸，食少便溏，虚喘咳嗽，内热消渴。常用的补气药，功能补脾益肺，效近人参而为较弱，适用于各种气虚不足者，常与黄芪、白术、山药等配伍应用；如血虚萎黄及慢性出血疾患引起的气血两亏的病症，配补血药如熟地、当归等。实证、热证禁服；正虚邪实证，不宜单独应用。适应人群体质虚弱，气血不足，面色萎黄，以及病后产后体虚者宜食；脾胃气虚，神疲倦怠，四肢乏力，食少便溏，慢性腹泻，肺气不足，咳嗽气促，气虚体弱，易于感冒；气虚血亏者宜食；慢性肾炎蛋白尿者宜食；慢性贫血，萎黄病，白血病，血小板减少性紫癜以及佝偻病患者宜食。上述病证，古方用人参者现代常以该品取代。用法用量一日15~30克。煎汤，煎膏滋，入粥、饭、菜肴。不宜与藜芦同用 陈皮 是芸香科植物橘及其栽培变种的干燥成熟果皮，具有理气开胃、燥湿化痰、治脾胃病的功效，下面我们就介绍一下陈皮的功效和作用。 1、陈皮有助于消化，因为陈皮含有类柠檬苦素，这种类柠檬苦素味平和，易溶解于水，此外，陈皮含有挥发油、橙皮甙、维生素B、C等成分，它所含的挥发油对胃肠道有温和刺激作用，可促进消化液的分泌，排除肠管内积气，增加食欲。 2、陈皮的苦味可以与其他味道相互协调，因此可以用于烹制菜肴改善味道，不但辟去鱼肉的膻腥味，且使菜肴特别可口;在凉果、
食品方面，新会陈皮梅、陈皮鸭、陈皮酒，其色、香、味都具特色。此外，制作绿豆沙、红豆粥等甜品，若加入一点陈皮，味道分外芳香。 3、陈皮也是一味常用中药，味辛苦、性温，具有通气的健脾、燥湿化痰、解腻留香、降逆止呕的功效。中医的“陈皮半夏汤”、“二陈汤”是主要靠陈皮治病的，以陈皮为主要成分配制的中成药，如川贝陈皮、蛇胆陈皮、甘草陈皮、陈皮膏、陈皮末等，是化痰下气、消滞健胃的良药。适合胃部胀满、消化不良、食欲不振、咳嗽多痰等症状的人食用。 半夏 半夏的功效：燥湿化痰;降逆止呕;消痞散结。主治：咳喘痰多;呕吐反胃;胸脘痞满头痛眩晕;夜卧不安;瘿瘤痰核;痈疽肿毒半夏的作用：1. 用于痰多咳嗽：半夏性燥而功能化痰，其所化之痰，以脾不化湿，聚而成痰者为主，为治湿痰的要药，适用于痰湿壅滞、咳嗽气逆等症，常与陈皮、茯苓等配伍;治痰多咳嗽，又常与贝母配伍应用。因其性温，故又可用治寒痰，宜与白芥子、生姜等同用;因其化痰力佳，故亦可治热痰与风痰，治热痰可与瓜蒌、黄芩等配伍;致风痰，宜与天南星等同用。2. 用于胸脘痞闷，胸痹，结胸等症：半夏功能辛散温通、化痰、燥湿，故可用于痰内阻、胸脘痞闷病症，可配陈皮、茯苓等同用;如寒热互结，有可配黄芩、黄连、干姜等同用，可收辛开苦降、散结除痞的功效(如半夏泻心汤)。此外，又常用于胸痹疼痛，配瓜蒌、薤白等同用;治结胸症可与瓜蒌、黄连等同用。3. 用于瘿瘤瘰历、疮疡肿痛、梅核气等症：半夏又能化痰散
酶活性检测
④分光光度法利用底物和产物光吸收性质的不同，可直接测定反应混合物中底物的减少量或产物的增加量。几乎所有的氧化还原酶都使用该法测定。如还原型辅酶Ⅰ(NADH2)和辅酶Ⅱ(NADPH2)在340nm有吸收，而NAD和NADP在该波长下无吸收，脱氢酶类可用该法测定。该法测定迅速简便，自动扫描分光光度计的使用对酶活力的快速准确的测定提供的极大的方便。 酶在食品加工中的作用就像一把双刃剑，我们要趋利避害。酶的积极作用我们要加强，在食品加工过程中添加酶制剂，使其作用充分发挥;消极作用我们要尽量避免，可以通过加热等方法将酶灭活，消除其不利影响。 为了将酶更好地应用于食品加工，研究酶的性质是十分必要的。而紫外-可见分光光度法是研究酶性质的重要方法之一。下面我们来介绍用-可见分光光度计测定酶活的具体方法。 紫外-可见分光光度法测定酶活： 1. β一半乳糖苷酶 β一半乳糖苷酶，又称乳糖酶(Lactase)。能水解乳糖来降低乳制品的乳糖含量，从而提高乳制品的可消化性，用于低乳糖牛奶和非结晶型浓缩牛奶的生产及奶酪风味的改变，同时还可用于生产低聚半乳糖。 【酶活测定】以ONPG为底物测定β-半乳糖苷酶活力。 【酶活定义】以ONPG为底物，37℃保温酶解，每分钟释放lμmol/L邻硝基酚的酶量，定义为1个酶活力单位。 2. 超氧化物歧化酶 超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase，简称SOD)是一种十分重要的生物体防止氧化损伤的酶类，是生物体内超氧阴离子清除剂，保护细胞免受损伤。SOD广泛存在于各类生物体内，所有好氧微生物细胞中都含有SOD。自1969年Mccord等人首次发现了SOD 生物活性后，医学界对其医疗作用做了许多研究，证明它具有抗衰老、抗肿瘤、抗辐射、抗缺血、提高人体免疫力等作用，被专家称为21世纪最有前途的药用酶。欧美国家已开始将其应用于医疗、食品、保健、化妆品等领域。 【酶活测定】在25℃4.5ml 50mmol/L pH8.3的K2HPO4- KH2PO4缓冲液中加入待测SOD样液，再加入10ul 50mmol/L的连苯三酚，迅速摇匀，倒人光径lcm 的比色杯，在325nm波长下每隔30s测一次A值。同时测定Sigma公司的SOD标准品，对所测样品SOD 活性进行校正。 【酶活定义】在lml反应液中，每分钟抑制连苯三酚自氧化速率达50%时的酶量为一个酶活单位，即325nm 0.035OD/min为一个酶活单位。 3. 多酚氧化酶 多酚氧化酶(PPO)是一类由核基因编码在细胞质中合成的含铜质体的金属酶，其作用机理在于铜的氧化-还原作用。大麦中的多酚物质经过PPO的催化氧化后，具有单宁性质，易和蛋白质起交联作用而沉淀出来，进而影响啤酒的色泽、泡沫、风味和非生物稳定性。大
几种抗氧化酶的作用
一?超氧化物歧化酶(SOD): 超氧化物歧化酶，是一种新型酶制剂，是生物体重要的抗氧化酶, 广泛分布于各种生物体，如动物，植物，微生物等。SOD具有特殊的生理活性，是生物体清除自由基的首要物质。SOD在生物体的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损塞，并及时修复受损细胞。由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量形成；因此，生物抗氧化机制中SOD 的地位越来越重要！ 超氧化物歧化酶(SOD)按其所含金属辅基不同可分为三种，第一种是含铜(Cu)锌(Zn)金属辅基的称(Cu.Zn—SOD),最为常见的一种酶，呈绿色， 主要存在于机体细胞浆中；第二种是含猛(Mn) 金属辅基的称(Mn—SOD),呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞；第三种是含铁(Fe)金属辅基的称(Fe-SOD),呈黄褐色, 存在于原核细胞中。 SOD是一种含有金属元素的活性蛋白酶。超氧化物岐化酶(SOD)能催化如下的反应：O2-+H+fH26+6,。2淋为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。它是活性氧的一种,具有极强的氧化能力，是生物氧毒塞的重要因素之一°SOD 是机体天然存在的超氧自由基清除因子，它通过上述反应可以把有蚩的超氧自由基转化为过氧化氢。尽管过氧化氢仍是对机体有蚩的活性氧，但体的过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)会 立即将其分解???专 为完全无蚩的水。这样，三种酶便组成了一个完整的防氧化链条。 目前，人们认为自由基（也称游离基）与绝大部分疾病以及人体的衰老有关。所谓的自由基就是当机体进行代时，能夺去氧的一个电子，这样这
二十一世纪神奇的救命汤
二十一世纪神奇的救命汤 五行蔬菜汤 人人都能自己动手做，癌症是可以战胜的！，不药而愈，宁把食物当药吃，莫把药当食物吃！大自然完美组合，数万人从死亡中生还的见证。为了您与亲友的健康，你一定要详细看完此书，请向所有人推荐，举手之劳，却可救人一命！ 五行蔬菜汤源于日本，发明者是日本预防医化学研究所所长立石和博士，1934年6月16日出生于日本岐阜县，一生致力于研究人体细胞的秘密。其父兄均死于癌症，自己也患上了胃癌，切除了胃部和十二直肠后，癌细胞仍转移到肺部。立石和博士认识到防化疗不能从根本上解决问题，通过实践从一千多种天然事物和草药中研究发现了菠菜汤、糙米茶，治愈了自己的癌症。在日本、新家坡、台湾和香港等发达国家和地区，已经有成千上万死亡边缘生存的病人在立是和博士的指导下重返健康人生。癌症是可以战胜的！立石和和众多的癌症病人共同见证了五行菠菜汤的神奇。立石和博士于1994年出版了《元祖菠菜汤保健法》一书，引起了各界的强烈反响，为人类的健康事业作出了巨大贡献。 天然的健康奇迹 你听说过对百病都有效的蔬菜吗？没有！人的命运各有不同，运气在好的也无法永保健康。蔬菜汤发明者立石和先生是原食疗法会会长兼著名细胞学博士。其哥哥和父亲因癌症而死，自己也得了胃癌，虽
然把胃和十二直肠都切除了，但癌细胞仍转移到了肺部，倍受煎熬。在这样的情况下，他放弃了传统的医疗方法，边与病魔苦斗，边埋头研究天然药草1500种。在研究实验中牺牲了许多精力，基于人体之体育保健，防止老化以及不给生病机会的三个条件之下，他苦心花了三十年的研究，从无副作用的药草中成功的找到了秘药，“蔬菜汤”和“糙米茶”，经饮用后奇迹般的克服了癌细胞，还出版了相关的专著—《蔬菜汤健康法》。 这秘药对人不分年龄，均能提供健康的脑和活性化、青春化的身体。依目前的医学观点看，实在无法想象这秘药会有下例实际的效果。 1 对癌症的治疗和预防； 2 使磨损过的关节骨骼恢复正常； 3 使人体的全部骨骼能恢复再生和强健； 4 防止老化现象、恢复青春、细胞重现活力； 5 能治愈难治的白内障； 6 也能治白血病、肝病、高血压、心脏病，特别是脑肿瘤和其他肿瘤及头部疾病都能被治疗。 象这样的功效实在不胜枚举，。另外，有因障碍而引起情绪失控、语言障碍、失眠症、头痛、视力障碍、脑神经障碍着，服用后也能很快得到康复。 蔬菜汤主要治疗现代医学上所不能治愈的各种癌症和各种慢性病都显现出了巨大的惊人效果。从现代医学来说，癌症对患者而言就以为着死亡。的确，医院能救治的病人渐增，但癌症依然是现代人死亡的
人参花的副作用
人参花的副作用 人参花的副作用有哪些？人参花的滋补、强壮作用几乎路人皆知，但人参花的副作用却往往被人们忽视，随着人们生活水平的提高，服用人参花或人参进补的人越来越多，一些人盲目大量使用人参花，往往造成一系列不良后果。下面为您介绍人参花的副作用。。。。。。 人参花含有二十种皂甙活性物质、十七种氨基酸、十一种微量元素、三种抗癌活性硒及粗蛋白等，是很难得的药材和滋补品。它的皂甙含量可达百分之60，居人参各部之首。人参花是高级营养品，许多知名的化妆品都采用它的成分。人参花气息芬香，味甘微苦。具有健胃提神、清凉去署、生津止渴、滋补强身、去热散风、明目开心及美容之功效。 人参花的作用众所皆知，但也是有一定的副作用。比如吃多了会使人变得欣快、烦躁、激动，严重者会导致人格解体和混乱感。人参的滋补、强壮作用几乎路人皆知，但人参的毒性及副作用却往往被人们忽视，随着人们生活水平的提高，服用人参花或人参进补的人越来越多，一些人盲目大量使用人参花，往往造成一系列不良后果。 人参花的副作用: 若久服或用量过大，会造成像兴奋状态、如意感、咽喉刺激感、失眠、神经衰弱、高血压、欣快感等中枢神经系统兴奋和激动症状。有些人则表现为性情抑郁、食欲减退、低血压，有的还出现皮疹、水肿及清晨腹泻。 1. 若咳嗽有痰、口水多或有水肿等状态时，就应避免服用西洋参，否则就会加重病情。 2. 服用人参花出现的另一个不良后果是儿童性早熟。一些儿童因服人参花后，结果出现性早熟，这对儿童的生理和心理健康均有不良影响。 3.新生儿服用人参花会出现烦躁不安、哭闹拒乳、抽搐惊厥、心率减慢的症状。
食用人参花，取利去弊，关键在于人的正确掌握。只要熟晓药物的性味功用及主治范围，从中医辨证论治的原则出发，因人、因证制宜，就可以减少或避免其毒性，充分地发挥其良好功效。反之，若咳嗽有痰、口水多或有水肿等状态时，就应避免服用人参花，否则就会加重病情。人参花是健康的排毒茶，不过却不是所有人都适合服用的。 人参花是很难得的药材和滋补品。它的皂甙含量可达百分之60，居人参各部之首。人参花是高级营养品，许多知名的化妆品都采用它的成分。人参花气息芬香，味甘微苦。具有健胃提神、清凉去署、生津止渴、滋补强身、去热散风、明目开心及美容之功效。 人参花与人参有着众多实用及医疗效果。选择人参参时应首先辨别是国产的还是进口的。我国前市场上的人参有两类，一是美国和加拿大进口的，一类是引种的，其功效和价格也相去甚远。药房销售的人参大部分均为引种的，价格一般为几块钱一克不等；进口的人参一克在十几到二十几块不等，在国内仅有像福临门、同仁堂等少数大型品牌能够买到，价格以同仁堂最贵，福临门较为实惠。 人参花功效与作用 1. 延缓衰老，消除疲劳，改善失眠;改善记忆力和性功能，消除腰、头、肩的酸软和疼痛，预防辐射; 2．提高免疫力，预防感冒、肺炎、肾炎、肝炎等传染性疾病; 3.预防动脉硬化、冠心病、中风、高血压、低血压及其引起头疼、耳鸣; 4. 改善更年期综合症、调经、安神、解除烦躁; 5. 预防糖尿病、低血压及其引起的头昏、眼花; 6. 消退面部红斑，恢复青春亮丽。 人参花服用量 每天可服2-3克，每次泡3-5朵。早、中、晚均可服用。