6 分子生物学组

分子生物组检测系统/方法分析性能验证评估报告检验科分子生物组检测依据CNAS-CL02：《医学实验室质量和能力认可准则》（ISO 15189：2007）对医学实验室检测系统性能评价的相关要求，对ABI 7000 Real Time PCR System 荧光定量仪进行性能评价，主要从以下几个方面进行：正确度、精密度、临床可报告范围、线性范围等。具体实施方案如下：

1 目的：

对ABI 7000 Real Time PCR System 荧光定量仪的性能进行评价，结果与生产厂家给出的性能指标进行比较，来验证生产厂家给出的性能指标是否能满足检验科的要求。若无厂家性能指标则与卫生部室间质评计划表提供的标准比较，判断仪器的性能是否符合要求。

2 原理：

2.1 正确度评价

评价仪器测量结果与真值的一致程度。本组参加室间质评的项目一律用卫生部临检中心的室间质评回报结果作为评价标准。

2.2 精密度评价

采用EP15-A《用户对精密度和准确性能的核实实验-批准指南》的性能要求，通过检测每个项目2个不同浓度的混合血清和质控物值，计算项目重复精密度和中间精密度，并与厂家声明的重复精密度和中间精密度进行比较，核实是否与厂家声明的一致。

2.3 临床可报告范围评价

荧光定量PCR法HBV DNA检测试剂盒说明书中显示本检测系统临床可报告范围为1.00E3～1.00E8copies/ml。因试剂盒阳性参控品最高载量为1.00E8copies/ml，大于1.00E7copies/ml 浓度已属临床高载量患者，符合抗病毒治疗指标，不必要对更高的载量进行精确检测，小于1.00E3copies/ml已为临床疗效监测效果较好的指标，大量研究表明，此群患者对抗病毒治疗不敏感，因此对疗效监测意义不大。

2.4 线性范围评价

因为每次实验都做标准曲线，并要求其R值在0.98以上。因此，本项目不需要进行线性验证。

3 检测方法：

检测方法为实时荧光定量PCR法。

4 方案：

4.1正确度评价方案（卫生部室间质评样品）

采用卫生部临检中心2011年第一次和第二次室间质评与2012年第一次和第二次室间质评

回报结果作为评价标准。

判定标准：绝对偏倚≤±0.4

4.2精密度评价方案

根据NCCLS EP15-A文件，重复精密度测定方案：取2个浓度患者的混合血清重复测定20次。中间精密度测定方案：采用1个浓度的质控物，每批次分析1次，测定30天。每天应进行正常的室内质量控制，在控后方可进行检测。所检测所有数据超出3SD的数据不能超过2个，否则应分析失控原因纠正后重新进行试验，统计数据，计算重复精密度和中间精密度，与允许范围或厂家声明的重复精密度及中间精密度比较，判断验证是否通过。

判定标准：

●重复精密度：厂家声明值低值CV≤10.0%，高值CV≤10.0%；

●中间精密度：厂家声明值低值CV≤10.0%，高值CV≤10.0%；

●将重复CV(%)、中间CV(%)与厂商声称精密度值比较，若试验的精密度小于等于厂商声称精

密度值，则验证通过。

●如果试验的精密度大于厂商声称精密度值，需要进一步计算该项的验证值，如果重复CV(%)、

中间 CV(%)小于验证值，说明差异无统计学意义，同样核实了与允许范围的一致性，验证通过。如二者数值很接近，为可靠起见，可以添加2个批次测量，将所得数据与以前数据合并再计算，可能得到更可靠的结果。

●如重复CV(%)、中间 CV(%)大于验证值，精密度验证未通过，应与厂家联系并取得帮助。

4.3临床可报告范围评价方案

荧光定量PCR法HBV DNA检测试剂盒说明书中显示本检测系统临床可报告范围为1.00E3～1.00E8copies/ml。因试剂盒阳性参控品最高载量为1.00E8copies/ml，大于1.00E7copies/ml 浓度已属临床高载量患者，符合抗病毒治疗指标，不必要对更高的载量进行精确检测，小于1.00E3copies/ml已为临床疗效监测效果较好的指标，大量研究表明，此群患者对抗病毒治疗不敏感，因此对疗效监测意义不大。

4.4 线性范围评价

因为每次实验都做标准曲线，并要求其R值在0.98以上。因此，本组项目不需要进行线性验证。

5 器材

ABI 7000 Real Time PCR System 荧光定量仪，详见附表一。

6 结果：验证结果符合相关规定，详见附表一。

7 结论：

ABI 7000 Real Time PCR System 荧光定量仪定量项目在正确度、精密度、临床可报告范围、线性范围等方面符合要求。

报告人：赵友云

2012年11月28日

湖北省中医院分子生物组检测性能验证评估报告附表一检测系统/方法的分析性能验证评估表

(完整版)分子生物学试题及答案(整理版)

分子生物学试题及答案 一、名词解释 1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。 2．标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。 3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ） 4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 5．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。 6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7．模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。 9．弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。 10．魔斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应，停止全部基因的表达。产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称他们是超级调控子或称为魔斑。 11．上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA序列，-10区的TATA、-35区的TGACA 及增强子，弱化子等。 12．DNA探针：是带有标记的一段已知序列DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。13．SD序列：是核糖体与mRNA结合序列，对翻译起到调控作用。 14．单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。 15．考斯质粒：是经过人工构建的一种外源DNA载体，保留噬菌体两端的COS区，与质粒连接构成。16．蓝-白斑筛选：含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。 17．顺式作用元件：在DNA中一段特殊的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。18．Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是从DNA聚合酶I全酶中去除了5’→3’外切酶活性 19．锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。 二、填空 1． DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。 2． RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（IF-2）和（IF-3）。 4．蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。5．启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。 6．分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（DNA重组技术）三部分。7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（ T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（hnRNA在转变为mRNA的过程中经过剪接，）、 （mRNA的5′末端被加上一个m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴）。 9．蛋白质多亚基形式的优点是（亚基对DNA的利用来说是一种经济的方法）、（可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响）、（活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭）。 10．蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11．半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP—CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP—CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（ S2）开始，无G时转录从（ S1）开

分子生物学技术在中草药研究中的应用

第28卷第5期 唐山师范学院学报 2006年9月 Vol. 28 No.5 Journal of Tangshan Teachers College Sep. 2006 ────────── 基金项目：唐山师范学院院内资助项目（02C070403） 收稿日期：2006-03-07 作者简介：陈桂平（1972-），女，河北泊头人，唐山师范学院生命科学系讲师，硕士，研究方向为植物分子遗传学。- 1 - 分子生物学技术在中草药研究中的应用 陈桂平1，客绍英1，项慧新2 （1.唐山师范学院 生命科学系，河北 唐山 063000；2.唐山学院 宣传部，河北 唐山 063000） 摘 要：对近几年来利用分子生物学技术在中草药方面的研究进行了综述，并对其前景进行了展望。 关键词：分子生物学技术；中草药；PCR 技术 中图分类号：Q75 文献标识码：B 文章编号：1009-9115（2006）05-0001-03 中草药是中华民族的瑰宝，在数千年与疾病作抗争的过程中，中草药为中华民族的繁衍做出了重大的贡献。随着分子生物学技术的不断进步，其在中草药应用方面越来越广泛，以往对中草药的研究只局限在对其有效成分进行鉴定，但是对它的作用机制还不甚清楚。如何更好地利用分子生物学技术鉴定中草药的有效成分，如何鉴定中草药之间的区别，如何分离相关的基因，以及了解它的作用机制是目前研究的热点问题；而且中草药正在面临着向现代化，规模化方向发展，许多有价值的中草药正在进行大规模基因测序，迫切需要从基因水平上对其进行研究。 1 分子生物学技术在中草药鉴定方面的应用 随着分子生物学技术的不断进步，PCR （Polymerase Chain Reaction ）技术和由PCR 技术衍生出来的RAPD 技术以及新近发展起来的DNA 测序技术在中草药鉴定方面具有广阔的应用前景。 1.1 聚合酶链式反应（PCR ）技术及其衍生技术在中草药鉴定方面的应用 中草药鉴定一直以来源、性状、显微及理化等方面检测，这对于植物药、矿物药和大多数整体入药保持其分类学特征的动物药，确实是可靠的。但是对于一些植物特殊部位的入药药材，如局部组织和器官却形状各异，这都给鉴别中草药的真伪带来巨大的困难，并因此造成假药充斥药材市场，如蒸土豆晒干后代替天麻，西洋参代替人参，土蒲公英代替蒲公英，其仿真度极高，有时用理化手段也难以鉴别真伪，严重干扰和阻碍我国中草药的发展，所以必须采用有效，准确无误的检测手段来解决这个令人棘手的造假问题。 随着现代生物技术的发展，中草药鉴别的手段主要有色谱、蛋白质谱、同工酶谱等。特别是近几年来，PCR 技术[1]及由PCR 技术衍生出来的RAPD 技术的出现，给中草药研究注入了新的血液。这些技术的出现具有方便、准确、迅速、简洁的特点，其结果为证明中草药的真伪提供了可靠的依据，解决了药材市场的造假问题。目前，应用于中草药质量 研究的DNA 分析技术主要有RAPD 技术，AFLP 技术和测序技术。杨美华[2]等用RAPD 方法对正品和伪品大黄进行指纹图谱的研究，为正品和伪品大黄的基原鉴定提供分子依据。王年鹤[3]等用RAPD 技术可准确鉴定正品柴胡及其近似种共5种柴胡属植物。曹晖等[4]采用任意引物聚合酶链式反应AP-PCR 和RAPD 方法扩增地胆草、白花地胆草和假地胆草及其商品药材苦地胆草的基因组DNA ，获得了可靠的DNA 指纹，根据DNA 带型差异可鉴别苦地胆及其混淆品。 同时RAPD 技术也有一些缺陷，任意引物识别的位置是随机的，扩增片断的长度也有限，便使RAPD 的技术准确性降低。新近发展起来的扩增片段长度多态性（amplified fragment length polymorphism, AFLP ）技术因其DNA 用量少、灵敏度高、准确性高、不需要预先知道基因组信息等特点在中草药鉴别领域应用将更广泛[5]。 1.2 DNA 序列分析鉴别中草药 近几年来，具有准确性高、重复性好等优点的DNA 测序技术在中草药分析中脱颖而出。特别是rRNAITS 内部转录间隔区（internal transcribed spacers ）序列鉴别中草药是对中草药鉴定的一种较为有效的方法。例如对大黄种子中提取的DNA 中rRNA 基因内转录间隔区进行PCR 扩增，并对PCR 扩增产物进行碱基序列测定，结果经琼脂糖凝胶电泳证实大黄种子中rRNA 基因内转录间隔区的完整碱基序列，rRNA 基因内转录间隔区的碱基序列可作为从分子水平鉴定大黄的一种有效途径[6]。石斛为贵重中草药，目前市场上常以金石斛，石仙桃属的植物冒充，这些植物的茎经过加工药材以后，外形相似，形态鉴别也比较困难。周开亚等采用rDNA ITS 序列分析的方法对中药黄草石斛进行的鉴定，获得了较好的效果[7]。因此植物性中药材rRNA 基因内转录间隔区的扩增和测序方法，在鉴别中草药方面具有很大的发展前景。尽管国内对中草药绝大多数基因组序列还不清楚，但是仍有分析的可能，并且一次提取只需要微量种籽和药材标本，引物一旦确定可对多种标本进行rRNA 基因内转录间隔

现代分子生物学专题讲座论文

现代分子生物学专题讲座小论文 miRNA与肿瘤相关研究进展 摘要：miRNA是近年来发现的一种小分子RNA，长度为19-23nt。在肿瘤中，miRNA通常以瘤基因或抑瘤基因的角色参与肿瘤的发生发展，并与肿瘤的发生及发展密切相关。本文摘要了近年来miRNA与肿瘤相关的各方面进展，包括MiRNA 参与肿瘤发生发展的调控机制（包括转录因子-miRNA调控的多样性、MiRNA-靶基因调控的多样性、MiRNA加工成熟过程的调控及竞争性内源RNA对miRNA的调控）、miRNA与肿瘤诊断、miRNA 与肿瘤细胞的耐药性、miRNA与肿瘤细胞周期及miRNA抑制肿瘤转移。 关键词：肿瘤、miRNA miRNA是近年来发现的一种小分子RNA，长度为19~23nt。最早发现的miRNA 是秀丽杆菌线虫体内的lin-4，但miRNA术语的提出首见于2001 年《科学》杂志的3篇文章。miRNA在物种间具有高度的保守性、时序性和组织特异性[1]。目前已发现人类miRNA 达800 多种，并证实部分miRNA异常表达与特定的肿瘤具有相关性在肿瘤中，miRNA通常以瘤基因或抑瘤基因的角色参与肿瘤的发生发展，并与肿瘤的发生及发展密切相关。通过了解miRNA与肿瘤的密切关系，有助于未来对肿瘤的防治、治疗和诊断，并最终使肿瘤不再是一种绝症，而成为一种常规疾病，可防、可控、可治疗。由于对于这种关系研究的并不透彻，该领域未来研究方向将主要集中在新miRNA靶标分子的识别、miRNA参与疾病发生分子机制的研究及作为某些疾病诊断、预后和治疗的特异性miRNA分子的筛选及鉴定等方面。 一、MiRNA 参与肿瘤发生发展的调控机制[2] 1、转录因子-miRNA 调控的多样性 miRNA的转录过程是顺式作用元件和反式作用因子交互作用的结果。在miRNA编码基因(gDNA)转录成miRNA初级转录产物(primary miRNA，pri-miRNA)的调控过程中，转录因子发挥了关键作用，其表达或活化程度直接影响miRNA初级转录产物的表达。一个基因的表达通常受到多个转录因子的调控，一个转录因子也可能同时对多个靶基因进行转录调控，MiRNA的转录调控过程也遵循类似的调控规律。这种转录因子-miRNA调控的多样性，增加了miRNA表达调控的复杂性，与肿瘤的发病直接相关。 2、MiRNA-靶基因调控的多样性 MiRNA能够识别特定目标mRNA的3'-U TR，通过降低靶mRNA的稳定性或转录后抑制翻译过程而负性调控靶基因的表达。在

分子生物学试题及答案 (3)

分子生物学试题（一） 一.填空题(,每题1分,共20分) 一.填空题(每题选一个最佳答案,每题1分,共20分) 1. DNA的物理图谱是DNA分子的（）片段的排列顺序。 2. 核酶按底物可划分为（）、（）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（）、（）和（）。 4．蛋白质的跨膜需要（）的引导，蛋白伴侣的作用是（）。5．真核生物启动子中的元件通常可以分为两种：（）和（）。6．分子生物学的研究内容主要包含（）、（）、（）三部分。 7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（）、（）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（）、（）。 9．蛋白质多亚基形式的优点是（）、（）、（）。 10.蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11.半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP-CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP-CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（S2 ）开始，无G时转录从（S1 ）开始。 12．DNA重组技术也称为（基因克隆）或（分子克隆）。最终目的是（把一个生物体中的遗传信息DNA转入另一个生物体）。典型的DNA重组实验通常包含以下几个步骤： ①提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一DNA分子上（克隆载体），形一个新的重组DNA分子。 ②将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。 ③对那些吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定。 ④对含有重组DNA的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。 13、质粒的复制类型有两种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为（严紧型质粒），不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制称为（松弛型质粒）。 14．PCR的反应体系要具有以下条件： a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的 DNA引物（约20个碱基左右）。 b、具有热稳定性的酶如：TagDNA聚合酶。 c、dNTP d、作为模板的目的DNA序列 15．PCR的基本反应过程包括：（变性）、（退火）、（延伸）三个阶段。 16、转基因动物的基本过程通常包括： ①将克隆的外源基因导入到一个受精卵或胚胎干细胞的细胞核中； ②接种后的受精卵或胚胎干细胞移植到雌性的子宫； ③完成胚胎发育，生长为后代并带有外源基因；

分子生物学常见名词解释完全版

分子生物学常见名词解释完全版(中英文对照) A Abundance (mRNA 丰度)：指每个细胞中mRNA 分子的数目。 Abundant mRNA(高丰度mRNA)：由少量不同种类mRNA组成，每一种在细胞中出现大量 拷贝。 Acceptor splicing site (受体剪切位点)：内含子右末端和相邻外显子左末端的边界。Acentric fragment(无着丝粒片段)：(由打断产生的)染色体无着丝粒片段缺少中心粒，从而 在细胞分化中被丢失。 Active site(活性位点)：蛋白质上一个底物结合的有限区域。 Allele(等位基因)：在染色体上占据给定位点基因的不同形式。 Allelic exclusion(等位基因排斥)：形容在特殊淋巴细胞中只有一个等位基因来表达编码的 免疫球蛋白质。 Allosteric control(别构调控)：指蛋白质一个位点上的反应能够影响另一个位点活性的能力。Alu-equivalent family(Alu 相当序列基因)：哺乳动物基因组上一组序列，它们与人类Alu 家族相关。 Alu family (Alu家族)：人类基因组中一系列分散的相关序列，每个约300bp长。每个成员 其两端有Alu 切割位点(名字的由来)。 α-Amanitin(鹅膏覃碱)：是来自毒蘑菇Amanita phalloides 二环八肽，能抑制真核RNA聚 合酶，特别是聚合酶II 转录。 Amber codon (琥珀密码子)：核苷酸三联体UAG，引起蛋白质合成终止的三个密码子之一。Amber mutation (琥珀突变)：指代表蛋白质中氨基酸密码子占据的位点上突变成琥珀密码 子的任何DNA 改变。 Amber suppressors (琥珀抑制子)：编码tRNA的基因突变使其反密码子被改变，从而能识 别UAG 密码子和之前的密码子。 Aminoacyl-tRNA (氨酰-tRNA)：是携带氨基酸的转运RNA，共价连接位在氨基酸的NH2 基团和tRNA 终止碱基的3￠或者2￠－OH 基团上。 Aminoacyl-tRNA synthetases (氨酰-tRNA 合成酶)：催化氨基酸与tRNA 3￠或者2￠－OH基团共价连接的酶。 Amphipathic structure(两亲结构)：具有两个表面，一个亲水，一个疏水。脂类是两亲结构，一个蛋白质结构域能够形成两亲螺旋，拥有一个带电的表面和中性表面。 Amplification (扩增)：指产生一个染色体序列额外拷贝，以染色体内或者染色体外DNA形 式簇存在。 Anchorage dependence (贴壁依赖)：指正常的真核细胞需要吸附表面才能在培养基上生长。Aneuploid (非整倍体)：组成与通常的多倍体结构不同，染色体或者染色体片段或成倍丢失。Annealing (退火)：两条互补单链配对形成双螺旋结构。 Anterograde (顺式转运)：蛋白质质从内质网沿着高尔基体向质膜转运。 Antibody (抗体)：由B 淋巴细胞产生的蛋白质(免疫球蛋白质)，它能识别特殊的外源“抗 2 原”，从而引起免疫应答。 Anticoding strand (反编码链)：DNA 双链中作为膜板指导与之互补的RNA 合成的链。Antigen (抗原)：进入基体后能引起抗体(免疫球蛋白质)合成的分子。 Antiparallel (反式平行)：DNA双螺旋以相反的方向组织，因此一条链的5￠端与另一条链的3￠端相连。

分子生物学试题_完整版(Felisa)

05级分子生物学真题 一、选择题 1、激活子的两个功能域，一个是转录激活结构域，另一个是（DNA结合域） 2、转录因子包括通用转录因子和（基因特异转录因子） 3、G-protein激活needs(GTP)as energy. 4、Promoters and(enhancers)are cis-acting elements. 5、噬菌体通过（位点专一重组）整合到宿主中 6、在细菌中，色氨酸操纵子的前导区转录后，（翻译）就开始 7、mRNA的剪切跟(II)类内含子相似 8、UCE是（I）类启动子的识别序列 9、TATA box binding protein在下列哪个启动子里面存在（三类都有） 10、（5S rRNA)是基因内部启动子转录的 11、人体全基因组大小(3200000000bp) 12、与分枝位点周围序列碱基配对的剪接体（U2snRNP） 13、tRNA基因是RNA聚合酶（III）启动的 14、在细菌中，色氨酸操纵子的前导区转录后，（翻译）就开始 15、乳糖操纵子与阻遏蛋白结合的物质是（异构乳糖）。 16、核mRNA的内含子剪接和（II类内含子剪接）的过程相似 17、基因在转录时的特点（启动子上无核小体） 18、RNA干涉又叫（转录后的基因沉默，PTGS） 19、内含子主要存在于（真核生物） 20、snRNA在下列哪种反应中起催化酶的作用（mRNA的剪接） 二、判断题 1、原核生物有三种RNA聚合酶。 2、抗终止转录蛋白的机制是使RNA聚合酶忽略终止子。 3、RNA聚合酶II结合到启动子上时，其亚基的羧基末端域（CTD）是磷酸化的。 4、Operon is a group of contiguous,coordinately controlled genes. 5、RNA聚合酶全酶这个概念只应用于原核生物。 6、聚腺苷酸尾是在mRNA剪接作用前发生的。 7、σ在转录起始复合复合物中使得open到closed状态（closed转变成open） 8、剪接复合体作用的机制：组装、作用、去组装，是一个循环 三、简答题 1、原核生物转录终止的两种方式。 2、组蛋白乙酰化对基因转录的影响。 3、G蛋白在翻译中的作用有哪些？ 4、什么是转座？转座子有哪些类型？ 5、简述增强子的作用机制。 04级分子生物学期末题目 一、选择题（20题） 1、tRNA的5端剪切所需的酶(RNase P） 2、人体全基因组大小(3，200，000，000bp) 3、（5S rRNA)是基因内部启动子转录的 4、线虫反式剪接所占比例(10%-20%) 5、与分枝位点周围序列碱基配对的剪接体（U2snRNP）

分子生物学名解——自己整理

分生考点 Copyright by 孙倩1.顺式作用元件（cis-acting elements）: 存在于基因内外，与基因表达调控相关、能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的特定的DNA序列称为顺式作用元件。 2.启动子(promoter)：真核基因的启动子指的是RNA聚合酶识别、结合的基因转录调控区中启动基因转录的一段特异DNA序列，包含一组转录调控功能组件，其中每一个功能组件的DNA序列约7~20 bp。 3.典型的启动子核心序列（core sequences）是在转录起始位点上游25~35 bp处，有一保守的TATA序列，被称为TATA盒（TATA box），真核细胞的TATA盒多为TATAAAA序列。TA TA盒与原核细胞的启动子一样，对RNA聚合酶II的转录起始位点起定位作用。 4. 有一些编码蛋白质基因不含TA TA盒或起始子，多在起始位点上游约100bp内含有20~50个核苷酸的CG序列，被称做CpG岛（CpG island）。此种基因可有多个转录起始点，可产生含不同5’末端的mRNA。这些基因大多为低转录基因，编码中间代谢酶的管家基因。 5.启动子上游元件（promoter-proximal elements, 或upstream promoter elements）是一些位于TATA盒上游的DNA序列，与调节蛋白结合，调节通用转录因子与TATA盒的结合、RNA聚合酶与启动子的结合，以及转录起始复合物的形成，从而决定基因的转录效率与专一性。常见的序列是CAA T盒和GC盒。 6.一些真核细胞基因含有另一种启动子元件，称为起始子(initiator,Inr)，决定启动子的强度。 7.增强子（enhancer）：是能够结合特异基因调节蛋白，促进邻近或远隔特定基因表达的DNA 序列。在酵母中，被称为上游活化序列（upstream activator sequences, UASs）。增强子的作用通常与其所处的位置和方向无关。 8.沉默子(silencer)是指某些真核基因转录调控区中抑制或阻遏基因转录的一段（数百bp）DNA序列。沉默序列促进局部DNA的染色质形成致密结构，从而阻止转录激活因子结合DNA，是基因转录的负性调节因素。 9.能够帮助RNA聚合酶转录RNA的蛋白质统称转录因子（transcription factors，TF）。以反式作用方式调节基因转录的转录因子称为反式作用因子（trans-acting factor），以顺式作用方式调节基因转录的转录因子称为顺式作用蛋白（cis-acting protein）。 10.基本转录因子(general transcription factors)是RNA聚合酶结合启动子所必需的一组蛋白因子，决定三种RNA(mRNA、tRNA及rRNA)转录的类别。 11.特异转录因子(special transcription factors)为个别基因转录所必需，决定该基因的时空特异性表达。 12.常染色质（euchromatin）结构松弛，分散分布在核内的染色质，对DNase I敏感，DNA 可降解为约200 bp 或其倍数的片断；基因表达处于活性状态，故亦称为活性染色质。使用DNase I处理活性染色质时，常会出现一些高敏感位点(hypersensitive sites)，通常位于转录基因的5’和3’侧翼转录调控区的蛋白结合位点附近的裸露DNA上。 13.异染色质（heterochromatin）结构高度致密，处于凝聚状态的染色质，对DNase I不敏感。基因表达处于阻遏状态。 14.染色质重塑（chromatin remodeling）通过改变基因的启动子和调节序列区域的染色质结构来调节基因的表达，称为染色质重塑,也称为核小体重塑(nucleosome remodeling)。主要包括：CpG岛甲基化和组蛋白共价修饰。 15.核小体重塑（nucleosome remodeling）：ATP依赖性核小体重塑复合体参与的核小体的移位、替换和去组装改变等。核小体重塑过程: 基因活化蛋白结合；ATP依赖性酶蛋白复合体结合转录活性区；A TP依赖性酶水解A TP，提供能量；移去或替换核小体。 16.组蛋白修饰包括组蛋白的乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化和多聚ADP-核糖基化。这些

分子生物学试题及答案版

广石化分子生物学试题及答案 一、名词解释 1. cDNA与cccDNA cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形 D N A 。 2. 标准折叠单位：蛋白质二级结构单元a -螺旋与B -折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。 3. CAP 环腺苷酸(cAMP 受体蛋白CRP(cAMP receptor protein ) ，cAMP 与CRP 结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP(cAMP activated protein ) 4. 回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 5. micRNA互补干扰RNA或称反义RNA与mRN序列互补，可抑制mRNA勺翻译。 6. 核酶：具有催化活性的RNA在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7. 模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8. 信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白 质的跨膜。

斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应，停止全部基因的表达。产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸（ppGpp）和鸟苷五磷酸（pppGpp 。 PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称他们是超级调控子或称为魔斑。 11. 上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA序列，-10 区的T AT A、- 3 5 区的T GACA 及增强子，弱化子等。 12. DNA探针：是带有标记的一段已知序列DNA用以检测未知序列、筛选目 的基因等方面广泛应用。 1 3. SD 序列：是核糖体与mRNA 结合序列，对翻译起到调控作用。 1 4 . 单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。 15. 考斯质粒：是经过人工构建的一种外源DNA载体，保留噬菌体两端的COS 区，与质粒连接构成。 16. 蓝-白斑筛选：含LacZ基因（编码B半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal （5-溴4氯-3-吲哚-B -D-半乳糖苷）产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。称之为 蓝- 白斑筛选。 17. 顺式作用元件：在DNA中一段特殊的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。 18. Klenow酶:DNA聚合酶I大片段，只是从DNA聚合酶I全酶中去除了5'- 3 ' 外切酶活性

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分子生物学 第一章绪论 分子生物学研究内容有哪些方面？ 1、结构分子生物学； 2、基因表达的调节与控制； 3、DNA重组技术及其应用； 4、结构基因组学、功能基因组学、生物信息学、系统生物学 第二章DNA and Chromosome 1、DNA的变性：在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 2、DNA复性：变性DNA在适当条件下，分开的两条单链分子按照碱基互补原则重新恢复天然的双螺旋构象的现象。 3、Tm(熔链温度)：DNA加热变性时，紫外吸收达到最大值的一半时的温度，即DNA分子内50%的双链结构被解开成单链分子时的温度） 4、退火：热变性的DNA经缓慢冷却后即可复性，称为退火 5、假基因：基因组中存在的一段与正常基因非常相似但不能表达的DNA序列。以Ψ来表示。 6、C值矛盾或C值悖论:C值的大小与生物的复杂度和进化的地位并不一致，称为C值矛盾或C值悖论(C-Value Paradox)。 7、转座：可移动因子介导的遗传物质的重排现象。 8、转座子：染色体、质粒或噬菌体上可以转移位置的遗传成分 9、DNA二级结构的特点：1）DNA分子是由两条相互平行的脱氧核苷酸长链盘绕而成；2）DNA分子中的脱氧核苷酸和磷酸交替连接，排在外侧，构成基本骨架，碱基排列在外侧；3）DNA分子表面有大沟和小沟；4）两条链间存在碱基互补，通过氢键连系，且A=T、G ≡ C（碱基互补原则）；5）螺旋的螺距为3.4nm，直径为2nm，相邻两个碱基对之间的垂直距离为0.34nm，每圈螺旋包含10个碱基对；6）碱基平面与螺旋纵轴接近垂直，糖环平面接近平行 10、真核生物基因组结构：编码蛋白质或RNA的编码序列和非编码序列，包括编码区两侧的调控序列和编码序列间的间隔序列。 特点：1）真核基因组结构庞大哺乳类生物大于2X109bp；2）单顺反子（单顺反子：一个基因单独转录，一个基因一条mRNA，翻译成一条多肽链；）3）基因不连续性断裂基因（interrupted gene）、内含子(intron)、外显子(exon)；4）非编码区较多，多于编码序列(9:1) 5）含有大量重复序列 11、Histon(组蛋白)特点：极端保守性、无组织特异性、氨基酸分布的不对称性、可修饰作用、富含Lys的H5 12、核小体组成：由组蛋白和200bp DNA组成 13、转座的机制：转座时发生的插入作用有一个普遍的特征，那就是受体分子中有一段很短的被称为靶序列的DNA会被复制，使插入的转座子位于两个重复的靶序列之间。 复制型转座：整个转座子被复制，所移动和转位的仅为原转座子的拷贝。 非复制型转座：原始转座子作为一个可移动的实体直接被移位。 第三章DNA Replication and repair 1、半保留复制：DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)按碱

分子生物学历年真题

分子生物学历年真题 2013年 一、名词解释（共10小题，每题4分，共40分） 1. Ribozyme 2. Missense Mutation 3. Insulator 4. RNA trans-splicing 5. Nucleotide excision repair 6. Transposon 7. Dam methylase 8. Spliceosome 9. Core promotor 10. SNP 二、简答题（共5小题，每题10分，共50分） 1. 真核生物mRNA的5’帽子结构有何生物学功能？其缺失会造成什么后果？ 2. 某一基因开放阅读框中的一个碱基突变会对该基因编码产物产生什么影响？ 3. 请简述真核生物的mRNA和原核生物的mRNA有何不同。 4. 请简述Ⅰ型内含子剪切的过程. 5. 请简述Western blot 的原理和步骤。 三、论述题（共3小题，每题20分，共60分） 1. 研究基因功能通常是降低或升高基因表达水平，请简要说出三种相关研究方法及原理。 2. mRNA和蛋白质的降解是一个有序的过程，其中microRNA和泛素起了非常重要的作用，请简述microRNA的概念、产生过程、作用机制，或者泛素的概念和蛋白质泛素化的过程。 3. 某实验需将1kb的cDNA片段插入某氨苄青霉素抗性的表达载体，在片段两边各有一个EcoRI位点，靠近5’端300bp的地方有一EcoRV位点，载体多克隆位点从5’依次为BamHI、HindIIII、EcoRI、EcoRV、XhoI位点，实验设计步骤如下： （1）用EcoRI处理载体，然后用碱性磷酸酶处理。 （2）用EcoRI处理片段，然后与步骤（1）中的载体混合，加入DNA连接酶，在适当的条件下使cDNA片段与载体连接。 （3）连接产物转化到大肠杆菌，并在含有氨苄青霉素的LB平板上生长，除此之外，还设了以下对照： 对照1：在含有抗生素的平板上涂布未被转化的大肠杆菌感受态细胞。 对照2：用未被酶切处理的载体转化大肠杆菌感受态细胞，并在含有抗生素的平板上生长。对照3：用EcoRI处理的载体，不用碱性磷酸酶处理，不加cDNA片段，然后加连接酶做连接反应，并转化大肠杆菌感受态细胞，并在含有抗生素的平板上生长。 对照4：除了用碱性磷酸酶处理外，其他同对照3. 某学生做了三次试验，结果如表：

(完整word版)医学分子生物学

医学分子生物学 名词解释： 结构基因(structural genes)： 可被转录形成 mRNA，并转译成多肽链，构成各种结构蛋白质，催化各种生化反应的酶和激素等。 ORF 开放阅读框架（ open reading frame，ORF ）： 是指DNA链上，由蛋白质合成的起始密码开始，到终止密码为止的一个连续编码。 C值(C-value)： 一种生物体单倍体基因组DNA的总量，用以衡量基因组的大小。 C值矛盾/ C值悖论： C值和生物结构或组成的复杂性不一致的现象。 基因组（genome）： 是指生物体全套遗传信息，包括所有基因和基因间的区域 重叠基因 是指同一段DNA片段能够参与编码两种甚至两种以上的蛋白质分子。 SNP单核苷酸多态性（singl e nucleotid e polymorphism） 是由基因组DNA上的单个碱基的变异引起的DNA序列多态性。是人群中个体差异最具代表性的DNA多态性，相当一部分还直接或间接与个体的表型差异、对疾病的易感性或抵抗能力、对药物的反应性等相关。SNP被认为是一种能稳定遗传的早期突变 蛋白质组(proteomics): 指应用各种技术手段来研究蛋白质组的一门新兴科学，其目的是从整体的角度分析细胞内动态变化的蛋白质组成成份、表达水平与修饰状态，了解蛋白质之间的相互作用与联系，揭示蛋白质功能与细胞生命活动规律. 质谱技术mass spectrometry,MS 样品分子离子化后，根据不同离子间质核比（m/z）的差异来分离并确定分子量 开放阅读框=ORF 基因工程

又称为重组DNA技术，是指将外源基因通过体外重组后导入受体细胞，并使其能在受体细胞内复制和表达的技术。 限制性核酸内切酶(restriction endonuclease, RE) 是一类能识别和切割双链DNA特定核苷酸序列的核酸水解酶。 逆转录酶 依赖RNA的DNA聚合酶，它以RNA为模板、4种dNTP为底物，催化合成DNA，其功能主要有：1)逆转录作用；2)核酸酶H的水解作用；3)依赖DNA的DNA聚合酶作用。 粘性末端 被限制酶切割后突出的部分就是粘性末端（来自360问答） 载体vector 指能携带外源DNA片段导入宿主细胞进行扩增或表达的工具。载体的本质为DNA。多克隆位点 载体上具有多个限制酶的单一切点（即在载体的其他部位无这些酶的相同切点）称为多克隆位点 报告基因（reporter gene）： 是指处于待测基因下游并通过转录和表达水平来反映上游待测基因功能的基因，又称报道基因。 转化 以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程称为转化（transformation） 感受态细胞 细胞膜结构改变、通透性增加并具有摄取外源DNA能力的细胞称谓感受态细胞(competent cell)。 碱裂解法 在NaOH提供的高pH（12.0～12.6）条件下，用强阳离子去垢剂SDS破坏细胞壁，裂解细胞，与NaOH共同使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性，释放出质粒DNA。 核酸变性 变性（denaturation）:在某些理化因素的作用下，维系DNA分子二级结构的氢键和碱基堆积力受到破坏，DNA由双螺旋变成单链过程。 核酸复性

分子生物学试题和答案(精)

一、名词解释 1. cDNA 与 cccDNA :cDNA 是由 mRNA 通过反转录酶合成的双链 DNA ; cccDNA 是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形 DNA 。 2.标准折叠单位:蛋白质二级结构单元α-螺旋与β-折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块, 此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型,乃至他们的组合型来予以描述,因此又将其称为标准折叠单位。 3. CAP :环腺苷酸(cAMP 受体蛋白 CRP (cAMP receptor protein , cAMP 与 CRP 结合后所形成的复合物称激活蛋白 CAP (cAMP activated protein 4.回文序列:DNA 片段上的一段所具有的反向互补序列,常是限制性酶切位点。 5. micRNA :互补干扰 RNA 或称反义 RNA ,与 mRNA 序列互补,可抑制 mRNA 的翻译。 6.核酶:具有催化活性的 RNA ,在 RNA 的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7.模体:蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8.信号肽:在蛋白质合成过程中 N 端有 15~36个氨基酸残基的肽段,引导蛋白质的跨膜。 9.弱化子:在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。 10.魔斑:当细菌生长过程中,遇到氨基酸全面缺乏时,细菌将会产生一个应急反应,停止全部基因的表达。产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸 (ppGpp和鸟苷五磷酸(pppGpp 。 PpGpp 与 pppGpp 的作用不只是一个或几个操纵子,而是影响一大批,所以称他们是超级调控子或称为魔斑。

6 分子生物学组

分子生物组检测系统/方法分析性能验证评估报告检验科分子生物组检测依据CNAS-CL02：《医学实验室质量和能力认可准则》（ISO 15189：2007）对医学实验室检测系统性能评价的相关要求，对ABI 7000 Real Time PCR System 荧光定量仪进行性能评价，主要从以下几个方面进行：正确度、精密度、临床可报告范围、线性范围等。具体实施方案如下： 1 目的： 对ABI 7000 Real Time PCR System 荧光定量仪的性能进行评价，结果与生产厂家给出的性能指标进行比较，来验证生产厂家给出的性能指标是否能满足检验科的要求。若无厂家性能指标则与卫生部室间质评计划表提供的标准比较，判断仪器的性能是否符合要求。 2 原理： 2.1 正确度评价 评价仪器测量结果与真值的一致程度。本组参加室间质评的项目一律用卫生部临检中心的室间质评回报结果作为评价标准。 2.2 精密度评价 采用EP15-A《用户对精密度和准确性能的核实实验-批准指南》的性能要求，通过检测每个项目2个不同浓度的混合血清和质控物值，计算项目重复精密度和中间精密度，并与厂家声明的重复精密度和中间精密度进行比较，核实是否与厂家声明的一致。 2.3 临床可报告范围评价 荧光定量PCR法HBV DNA检测试剂盒说明书中显示本检测系统临床可报告范围为1.00E3～1.00E8copies/ml。因试剂盒阳性参控品最高载量为1.00E8copies/ml，大于1.00E7copies/ml 浓度已属临床高载量患者，符合抗病毒治疗指标，不必要对更高的载量进行精确检测，小于1.00E3copies/ml已为临床疗效监测效果较好的指标，大量研究表明，此群患者对抗病毒治疗不敏感，因此对疗效监测意义不大。 2.4 线性范围评价 因为每次实验都做标准曲线，并要求其R值在0.98以上。因此，本项目不需要进行线性验证。 3 检测方法： 检测方法为实时荧光定量PCR法。 4 方案： 4.1正确度评价方案（卫生部室间质评样品） 采用卫生部临检中心2011年第一次和第二次室间质评与2012年第一次和第二次室间质评

现代分子生物学(第4版)__课后答案

第一章 1简述孟德尔、摩尔根和沃森等人对分子生物学发展的主要贡献 答：孟德尔的对分子生物学的发展的主要贡献在于他通过豌豆实验，发现了遗传规律、分离规律及自由组合规律；摩尔根的主要贡献在于发现染色体的遗传机制，创立染色体遗传理论，成为现代实验生物学奠基人；沃森和克里克在1953年提出DAN反向双平行双螺旋模型。 2写出DNA RNA的英文全称 答：脱氧核糖核酸（DNA, Deoxyribonucleic acid），核糖核酸（RNA,Ribonucleic acid） 3试述“有其父必有其子”的生物学本质 答：其生物学本质是基因遗传。子代的性质由遗传所得的基因决定，而基因由于遗传的作用，其基因的一半来自于父方，一般来自于母方。 4早期主要有哪些实验证实DNA是遗传物质？写出这些实验的主要步骤 答：一，肺炎双球菌感染实验，1，R型菌落粗糙，菌体无多糖荚膜，无毒，注入小鼠体内后，小鼠不死亡。2，S型菌落光滑，菌体有多糖荚膜，有毒，注入到小鼠体内可以使小鼠患病死亡。3，用加热的方法杀死S型细菌后注入到小鼠体内，小鼠不死亡；二，噬菌体侵染细菌的实验：1，噬菌体侵染细菌的实验过程：吸附→侵入→复制→组装→释放。2，DNA 中P的含量多，蛋白质中P的含量少；蛋白质中有S而DNA中没有S，所以用放射性同位素35S标记一部分噬菌体的蛋白质，用放射性同位素32P标记另一部分噬菌体的DNA。用35P 标记蛋白质的噬菌体侵染后，细菌体内无放射性，即表明噬菌体的蛋白质没有进入细菌内部；而用32P标记DNA的噬菌体侵染细菌后，细菌体内有放射性，即表明噬菌体的DNA进入了细菌体内。三，烟草TMV的重建实验：1957年，Fraenkel-Conrat等人，将两个不同的TMV 株系（S株系和HR株系）的蛋白质和RNA分别提取出来，然后相互对换，将S株系的蛋白质和HR株系的RNA，或反过来将HR株系的蛋白质和S株系的RNA放在一起，重建形成两种杂种病毒，去感染烟草叶片。 5请定义DNA重组技术和基因工程技术 答：DNA重组技术：目的是将不同的DNA片段（如某个基因或基因的一部分）按照人们的设计定向连接起来，然后在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达，产生影响受体细胞的新的遗传性状。基因工程技术：是除了包含DNA重组技术外还包括其他可能是生物细胞基因结构得到改造的体系，基因工程是指技术重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。 6写出分子生物学的主要研究内容。 答：1，DNA重组技术；2，基因表达调控研究；3，生物大分子的结构功能研究，结构分子生物学；4，基因组、功能基因组与生物信息学研究。 7.分子生物学的定义 答:广义的分子生物学：蛋白质及核酸等生物大分子结构和功能的研究都属于分子生物学的范畴，即从分子水平阐明生命现象和生物学规律狭义的分子生物学：偏重于核酸（基因）的分子生物学，主要研究基因或DNA的复制、转录、表达和调控等过程，当然也涉及与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究