中型狼尾草种质资源遗传多样性的ISSR分析_张怀山
西北植物学报，２０１４，３４（２）：０２５６－０２６４
Ａｃｔａ Ｂｏｔ．Ｂｏｒｅａｌ．－
Ｏｃｃｉｄｅｎｔ．Ｓｉｎ
． 文章编号：１０００－４０２５（２０１４）０２－０２５６－０９ ｄｏｉ：１０．７６０６／ｊ
．ｉｓｓｎ．１０００－４０２５．２０１４．０２．０２５６收稿日期：２０１３－１１－１６；修改稿收到日期：２０１４－０１－
０２基金项目：国家自然科学基金（３１２０１８４１）；甘肃省农业科技创新项目（ＧＮＣＸ－２０１３－
５８）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金（１６１０３２２０１４０１５，１６１０３２２０１３０１１）；兰州市科技计划项目（２０１１－１－１６７）作者简介：张怀山（１９６９－），男，博士，助理研究员，主要从事草类植物种质资源与育种研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇ
ｌｚ２００７＠１６３．ｃｏｍ中型狼尾草种质资源遗传多样性的ＩＳＳＲ分析
张怀山１，夏曾润２，栗孟飞３，王春梅１，杨世柱１
（１中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，农业部兰州黄土高原生态环境重点野外科学观测试验站，兰州７３００５０；２兰州大学草地农业科技学院，草地农业生态系统国家重点实验室，兰州７３００２０；３甘肃农业大学生命科学技术学院，干旱生境作物学重点实验室，兰州７３００７０
）摘 要：运用ＩＳＳＲ标记对采自云南的２５份野生种质和４份驯化新品系中型狼尾草材料进行遗传多样性分析。结果显示：（１）５０条ＩＳＳＲ引物中共筛选出１０条能扩增出清晰条带且多态性明显的引物，２９份材料ＤＮＡ共获得７２个扩增位点，其中多态性位点６２个，多态性比率为８７．４％，平均每条引物扩增位点为７．２个；平均观察等位基因数（Ｎａ）、有效等位基因数（Ｎｅ）、Ｓｈａｎｎｏｎ多样性信息指数（Ｉ）和Ｎｅｉ’ｓ基因多样性指数（Ｈ）分别为１．８６１ １、１．７４２ ８、０．５６１ ０和０．３９５ ９；种质材料间的遗传相似性系数变幅为０．２３６～０．９０３，表现出丰富的遗传多样性。（２）利用ＵＰ－ＧＭＡ聚类分析，以遗传相似系数０．５１为界，２９份材料划分为４大类，但Ｍａｎｔｅｌ检测表明２９份种质材料的遗传聚类和地理距离之间不存在显著的正相关关系（ｒ＝０．４３７ ０，Ｐ＝０．２０４ ６）。研究结果首次从分子水平揭示了中型狼尾草的遗传多样性和变异水平，为合理地引种、驯化、保护和利用中型狼尾草野生资源提供了重要的参考依据和数据支持。
关键词：中型狼尾草；ＩＳＳＲ标记；
种质资源；遗传多样性中图分类号：Ｑ３４６＋
．５；Ｑ７８９
文献标志码：Ａ
Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｍｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍＧｅｒｍｐｌａｓｍ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｕｓｉｎｇ
ＩＳＳＲ ＭａｒｋｅｒｓＺＨＡＮＧ Ｈｕａｉｓｈａｎ１，ＸＩＡ Ｚｅｎｇｒｕｎ２，ＬＩ Ｍｅｎｇ
ｆｅｉ ３，ＷＡＮＧ Ｃｈｕｎｍｅｉ １，ＹＡＮＧ Ｓｈｉｚｈｕ１
（１Ｌａｎｚｈｏｕ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｕｓｂａｎｄｒｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＣＡＡＳ，Ｔｈｅ Ｌａｎｚｈｏｕ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ＦｉｅｌｄＳｔａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｎｉｓｔｒｙ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ ｆｏｒ Ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍ ｉｎ Ｌｏｅｓｓ Ｐｌａｔｅａｕ Ａｒｅａｓ，Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００５０，Ｃｈｉｎａ；２Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｐａｓｔｏｒａｌ Ａｇ－ｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｇｒａｓｓｌａｎｄ Ａｇｒｏ－ｅｃｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｌａｎｚｈｏｕ ７３００２０，Ｃｈｉ－ｎａ；３Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｇａｎｓｕ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇａｎｓｕ Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ａｒｉｄｌａｎｄ ＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅ，Ｌａｎｚｈｏｕ
７３００７０，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｏｆ ｔｈｅ ２９ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｍｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍｆｒｏｍ Ｇａｎ－ｓｕ ａｎｄ Ｙｕｎｎａｎ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ
ＩＳＳＲ ｍａｋｅｒｓ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ：（１）１０ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ｆｒｏｍ５０ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｈｉｃｈ ｈａｄ ｃｌｅａｒ，ｓｔａｂｌｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｂａｎｄｓ．Ａ ｔｏｔａｌ ｏｆ ７２ｌｏｃｉ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ６２ｐｏｌｙ－ｍｏｒｐｈｉｃ ｌｏｃｉ．Ｏｎ ａｖｅｒａｇｅ，ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｓｉｔｅ ｏｆ ｅａｃｈ ｐｒｉｍｅｒ ｗａｓ ７．２ａｎｄ ｔｈｅ ｐｅｒｃｅｎｔａｇｅ ｏｆ ｐｏｌｙｍｏｒｐ
ｈｉｃ ｌｏｃｉ（ＰＰＬ）ｗａｓ ８７．４％．Ｔｈｅ ｍｅａｎ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ａｌｌｅｌｅｓ（Ｎａ），ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ
ａｌｌｅｌｅｓ（Ｎｅ），Ｓｈａｎｎｏｎｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ（Ｉ）ａｎｄ Ｎｅｉ’ｓ ｇ
ｅｎｅｔｉｃ ｉｎｄｅｘ（Ｈ）ｗｅｒｅ １．８６１ １，１．７４２ ８，０．５６１ ０ａｎｄ ０．３９５ ９，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ－ｌｙ．Ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ
ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ（ＧＳ）ｒａｎｇｅｄ ｆｒｏｍ ０．２３６ｔｏ ０．９０３，ｗｈｉｃｈ ｓｈｏｗｓ ｒｉｃｈ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｍｏｎｇ
ｔｈｅ ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｏｆ Ｐ．ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｍｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍ．（２）Ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗｉｔｈ ＵＰＧＭＡ ｍｅｔｈｏｄ
ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ２９ｔｅｓｔｅｄ ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｉｎｔｏ ４ｇｒｏｕｐｓ ａｔ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌ ＧＳ０．５１，ｂｕｔ ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｃｏｒ－ｒｅｌａｔｉｏｎ（ｒ＝０．４３７ ０，Ｐ＝０．２０４ ６）ｂｅｔｗｅｅｎ ｇｅｎｅｔｉｃ ａｎｄ ｇｅｏｇｒａｐｈｉｃ ｄｉｓｔａｎｃｅ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｇｅｒｍｐｌａｓｍｓ ｓｔｕｄ－ｉｅｄ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｏｆ ｔｈｉｓ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｗｅｒｅ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｔｉｍｅ ｔｏ ｒｅｖｅａｌ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ ｖａｒｉａｔｉｏｎ ｏｆ Ｐ．ｌｏｎｇｉｓｓｉ－ｍｕｍｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍａｔ ｔｈｅ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｌｅｖｅｌ，ｗｈｉｃｈ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ ａｎｄ ｄａｔａ ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｔｒｏｄｕｃ－ｔｉｏｎ，ｄｏｍｅｓｔｉｃａｔｉｏｎ，ｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｘｐｌｏｉｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｗｉｌｄ Ｐ．ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｍｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｒｅ－ｓｏｕｒｃｅｓ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｍｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍ；ＩＳＳＲ ｍａｒｋｅｒｓ；ｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ；ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
中型狼尾草（Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｍｖａｒ．ｉｎ－ｔｅｒｍｅｄｉｕｍ）是陈守良等在１９８４年发现并命名的长序狼尾草新变种［１］，为禾本科（Ｇｒａｍｉｎｅａｅ）狼尾草属（Ｐｅｎｎｉｓｅｔｕｍ）多年生疏丛型草本植物，中国云南、四川、贵州、湖南、甘肃等地均有分布。中型狼尾草茎秆较粗壮，根系发达，具有适应性广、再生能力强、容易栽培、产草量高、少有病害等优良特性［２］，营养成分相对较高，是一种重要的饲草资源，其抗旱、耐湿性较强，并具有适度的耐盐碱性，也是一种良好的水土保持、防风固沙植物，具有较高的生态价值。
遗传多样性不仅表现在表型性状上的差别，更重要的是表现在蛋白质、染色体和ＤＮＡ水平上的差异。分子标记的发展为从ＤＮＡ水平检测种质资源的遗传多样性提供了有利的工具。ＩＳＳＲ（ｉｎｔｅｒ－ｓｉｍｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｒｅｐｅａｔｓ）是由加拿大蒙特利尔大学的Ｚｉｅｔｋｉｅｗｉｃｚ等［３］于１９９４年提出的一种建立在ＰＣＲ反应基础上的新型微卫星类分子标记技术。该技术具有无需预知基因组背景信息、ＤＮＡ样品用量少、信息量大、结果记录方便、实验成本低、操作简单、重复性好等优点，可以揭示出比ＡＦＬＰ、ＲＡＰＤ、ＳＳＲ更丰富的多态性，而且不受季节、环境等外在因素的影响［４－５］。ＩＳＳＲ目前已被广泛运用于植物种质资源鉴定、基因定位、遗传作图、进化、系统发育、物种分类及分子标记育种等研究中，是植物遗传多样性分析中的主要技术手段之一［６－１０］。
中型狼尾草属于典型的异花授粉植物，分布甚广，在其演化过程中无疑存在着种间杂交或平行进化等复杂现象，揭示其演化途径和不同地域野生种间的明确亲缘关系是一项繁复而持久的探究工作。国内目前对中型狼尾草的研究主要侧重于形态分类［１１］、引种驯化［１２］、生产性能［１３］、生理生态特性［１４－１５］等方面，而从分子水平对中型狼尾草遗传多样性的研究还未见报道。基于此，本研究利用ＩＳＳＲ分子标记手段对从采自云南的２５份野生种质和４份驯化新品系的中型狼尾草材料进行种间遗传多样性分析，旨在探索ＩＳＳＲ分子标记法在中型狼尾草
品种鉴定与分类、系统发育等研究中的可行性，同时也为中型狼尾草种质资源的开发利用及新品种培育提供理论依据。
１ 材料和方法
１．１ 供试材料
２９份中型狼尾草材料均采自云南、甘肃两省各地。其中，１～４号材料是人工驯化品系，原材料来自云南昆明，２００８年引种栽培于甘肃兰州大洼山牧草试验基地，２０１１年收种；５～２９号材料于２００９～２０１０年采自云南各地的野生种质，具体来源见表１。１．２ ＤＮＡ提取及定量
每份材料随机取１０～１５个单株的新鲜幼嫩叶片，等量混合，采用改良ＳＤＳ（ｓｏｄｉｕｍ ｄｏｄｅｃｙｌ ｓｕｌ－ｆａｔｅ，十二烷基硫酸钠）法［１６］提取植物总ＤＮＡ。用１．０％的琼脂糖凝胶电泳检测ＤＮＡ质量，经紫外可见分光光度计（ＴＵ－１９０１）测定其浓度和相对纯度后，最终用ＴＥ稀释至１０ｎｇ／μＬ，－２０℃保存备用。１．３ ＩＳＳＲ引物的筛选
本试验根据加拿大哥伦比亚大学（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆ Ｂｒｉｔｉｓｈ Ｃｏｌｕｍｂｉａ，ＵＢＣ）核酸蛋白服务工作室公布的１００对ＩＳＳＲ引物（ＵＢＣ８０１－ＵＢＣ９００）序列设计，挑选５０条交由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。最终筛选出１０条扩增条带较多、结果稳定、背景清晰的引物用于中型狼尾草ＩＳＳＲ－ＰＣＲ反应（表２）。
１．４ ＩＳＳＲ－ＰＣＲ反应体系的建立与优化
将筛选引物分别在野生大麦（Ｈｏｒｄｅｕｍ ｖｕｌ－ｇａｒｅ）［１７］、早熟禾（Ｐｏａ ｐｒａｔｅｎｓｉｓ）［１８］、沙鞭（Ｐｓａｍ－ｍｏｃｈｌｏａ ｖｉｌｌｏｓａ）［１９］和小花棘豆（Ｏｘｙｔｒｏｐｉｓ ｇｌａ－ｂｒａ）［２０］的ＩＳＳＲ反应体系和反应程序下进行扩增，通过预试验，建立了一套中型狼尾草ＩＳＳＲ分析的优化反应体系及反应程序。２０μＬ反应体系包括：９．７４μＬ ｄｄＨ２Ｏ，２．０μＬ １０×ＰＣＲ Ｂｕｆｆｅｒ，０．２ｍｍｏｌ／Ｌ ｄＮＴＰ，０．５μｍｏｌ／Ｌ ＩＳＳＲ引物，５ＵＴａｑＤＮＡ聚合酶，４０ｎｇ ＤＮＡ模板。反应程序为：９ ４
７
５
２
２期 张怀山，等：中型狼尾草种质资源遗传多样性的ＩＳＳＲ分析
表１ 试验材料及来源
Ｔａｂｌｅ １ Ｄｅｔａｉｌｅｄ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｍａｔｅｒｉａｌｓ
编号Ｎｏ．采集地点Ｌｏｃａｔｉｏｎ海拔Ａｌｔｉｔｕｄｅ／ｍ经纬度Ｌｏｎｇｉｔｕｄｅ ａｎｄ ｌａｔｉｔｕｄｅ１甘肃兰州大洼山Ｄａｗａｓｈａｎ，Ｌａｎｚｈｏｕ，Ｇａｎｓｕ １ ７５０ ３６°０１′Ｎ，１０３°４５′Ｅ２甘肃兰州大洼山Ｄａｗａｓｈａｎ，Ｌａｎｚｈｏｕ，Ｇａｎｓｕ １ ７５０ ３６°０１′Ｎ，１０３°４５′Ｅ３甘肃兰州大洼山Ｄａｗａｓｈａｎ，Ｌａｎｚｈｏｕ，Ｇａｎｓｕ １ ７５０ ３６°０１′Ｎ，１０３°４５′Ｅ４甘肃兰州大洼山Ｄａｗａｓｈａｎ，Ｌａｎｚｈｏｕ，Ｇａｎｓｕ １ ７５０ ３６°０１′Ｎ，１０３°４５′Ｅ５云南昆明官渡区福保村Ｆｕｂａｏ，Ｇｕａｎｄｕ，Ｋｕｎｍｉｎｇ １ ８９２ ２４°５５′Ｎ，１０２°４１′Ｅ６云南昆明西山区采莲河Ｃａｉｌｉａｎ，Ｘｉｓｈａｎ，Ｋｕｎｍｉｎｇ １ ８９１ ２５°００′Ｎ，１０２°４０′Ｅ７云南昆明呈贡区中和村Ｚｈｏｎｇｈｅ，Ｃｈｅｎｇｇｏｎｇ，Ｋｕｎｍｉｎｇ １ ８９３ ２４°４９′Ｎ，１０２°４６′Ｅ８云南昆明呈贡区罗家村Ｌｕｏｊｉａ，Ｃｈｅｎｇｇｏｎｇ，Ｋｕｎｍｉｎｇ １ ８９０ ２４°４９′Ｎ，１０２°４６′Ｅ９云南昆明晋宁县杨家河Ｙａｎｇｊｉａ，Ｊｉｎｎｉｎｇ，Ｋｕｎｍｉｎｇ １ ８９２ ２４°４５′Ｎ，１０２°４３′Ｅ１０云南昆明西山区河尾村Ｈｅｗｅｉ，Ｘｉｓｈａｎ，Ｋｕｎｍｉｎｇ １ ８８７ ２４°５９′Ｎ，１０２°３９′Ｅ１１云南昆明官渡区新河村Ｘｉｎｈｅ，Ｇｕａｎｄｕ，Ｋｕｎｍｉｎｇ １ ８８９ ２４°５９′Ｎ，１０２°３９′Ｅ１２云南昆明呈贡区滇池边Ｄｉａｎｃｈｉ，Ｃｈｅｎｇｇｏｎｇ，Ｋｕｎｍｉｎｇ １ ８９０ ２４°５１′Ｎ，１０２°４４′Ｅ１３云南嵩明县腰站村Ｙａｏｚｈａｎ，Ｃｈｏｎｇｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ ２ ００３ ２４°１４′Ｎ，１０２°０６′Ｅ１４云南嵩明县苔才村Ｔａｉｃａｉ，Ｃｈｏｎｇｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ ２ ０７５ ２４°２０′Ｎ，１０２°４６′Ｅ１５云南嵩明县青龙潭Ｑｉｎｇｌｏｎｇｔａｎ，Ｃｈｏｎｇｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ １ ９９８ ２４°１７′Ｎ，１０２°５２′Ｅ１６云南宜良县凤鸣村Ｆｅｎｇｍｉｎｇ，Ｙｉｌｉａｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ １ ７８３ ２４°５７′Ｎ，１０３°０２′Ｅ１７云南禄劝县施宽村Ｓｈｉｋｕａｎ，Ｌｕｑｕａｎ，Ｙｕｎｎａｎ ２ ２５０ ２５°５８′Ｎ，１０２°４７′Ｅ１８云南安宁县八街镇Ｂａｊｉｅ，Ａｎｎｉｎｇ，Ｋｕｎｍｉｎｇ１ ９４６ ２４°３９′Ｎ，１０２°２１′Ｅ１９云南武定县高桥镇Ｇａｏｑｉａｏ，Ｗｕｄｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ １ ９８６ ２５°３６′Ｎ，１０２°１１′Ｅ２０云南澄江县小窑村Ｘｉａｏｙａｏ，Ｃｈｅｎｇｊｉａｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ １ ７３５ ２４°３８′Ｎ，１０２°５３′Ｅ２１云南澄江县廖官营Ｌｉａｏｇｕａｎｙｉｎｇ，Ｃｈｅｎｇｊｉａｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ １ ７５５ ２４°４０′Ｎ，１０２°５４′Ｅ２２云南姚安县栋川镇Ｄｏｎｇｃｈｕａｎ，Ｙａｏａｎ，Ｙｕｎｎａｎ １ ８８１ ２５°３０′Ｎ，１０１°１４′Ｅ２３云南禄劝县撒营盘Ｓａｙｉｎｇｐａｎ，Ｌｕｑｕａｎ，Ｙｕｎｎａｎ ２ ２７５ ２５°５９′Ｎ，１０２°３１′Ｅ２４云南宜良县清水沟Ｑｉｎｇｓｈｕｉ，Ｙｉｌｉａｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ １ ５８４ ２４°５４′Ｎ，１０３°０７′Ｅ２５云南嵩明县水海村Ｓｈｕｉｈａｉ，Ｃｈｏｎｇｍｉｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ １ ８９６ ２５°３７′Ｎ，１０３°１９′Ｅ２６云南祥云县王家山Ｗａｎｇｊｉａｓｈａｎ，Ｘｉａｎｇｙｕｎ，Ｙｕｎｎａｎ １ ９９７ ２５°２８′Ｎ，１００°３３′Ｅ２７云南祥云县红土坡Ｈｏｎｇｔｕｐｏ，Ｘｉａｎｇｙｕｎ，Ｙｕｎｎａｎ ２ ０１４ ２５°２８′Ｎ，１００°３２′Ｅ２８云南马龙县中小屯Ｚｈｏｎｇｘｉａｏｔｕｎ，Ｍａｌｏｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ ２ ００４ ２５°３１′Ｎ，１０３°３０′Ｅ２９云南马龙县通泉镇Ｔｏｎｇｑｕａｎ，Ｍａｌｏｎｇ，Ｙｕｎｎａｎ ２ ０４６ ２５°２５′Ｎ，１０３°３４′Ｅ
℃预变性３ｍｉｎ，９４℃变性１ｍｉｎ，５０℃退火１ｍｉｎ，７２℃延伸１．５ｍｉｎ，共３４个循环；７２℃延伸１０ｍｉｎ，４℃保存。
扩增产物在含有０．５μｇ／ｍＬ ＥＢ（ｅｔｈｉｄｉｕｍ ｂｒｏ－ｍｉｄｅ，溴化乙锭）的１．５％变性聚丙烯酰胺凝胶６６Ｗ恒功率电泳约７５ｍｉｎ，电泳结束后于紫外凝胶成像系统（Ｔａｎｏｎ ２５００）拍照并分析。
１．５ 数据统计及分析
ＩＳＳＲ通常被认为是显性标记，视每条多态性为一个等位基因。凝胶上相同迁移率位置上有ＤＮＡ条带的记为１，没有ＤＮＡ条带或模糊不清的记为０，将结果输入Ｅｘｃｅｌ表格，得到ＩＳＳＲ表型数据矩阵。采用ＰＯＰＧＥＮＥ ３２（Ｖｅｒｓｉｏｎ １．３２）软件计算ＩＳＳＲ－ＰＣＲ扩增产物的多态位点数、多态位点比率（ＰＰＬ）、Ｓｈａｎｎｏｎ多样性信息指数（Ｉ）、Ｎｅｉ’ｓ基因多样性指数（Ｈ）、观察等位基因数（Ｎａ）及有效等位
基因数（Ｎｅ）。利用ＮＴＳＹＳ－ＰＣ（Ｖｅｒｓｉｏｎ ２．１０ｅ）软件的Ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ程序－Ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ｄａｔａ对原始数据矩阵进行Ｎｅｉ遗传相似性系数（ｇｅｎｅｔｉｃ ｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ，ＧＳ）计算，应用Ｃｌｕｓｔｅｒｉｎｇ中ＳＮＡＮ程序的非加权成组配对算术平均法（ＵＰＧＭＡ）对中型狼尾草材料进行遗传相似性聚类分析，最后在Ｇｒａｐｈｉｃ中的Ｔｒｅｅ ｐｌｏｔ程序下建立树状图［２１］。运用ＴＦＰＧＡ（Ｖｅｒｓｉｏｎ １．３）软件［２２］对种质地理距离与遗传聚类之间的相关性进行Ｍａｎｔｌｅ检验。
２ 结果与分析
２．１ ＩＳＳＲ扩增产物及多态性分析
按照最优反应体系及程序最终筛选出的重现性好、特异性高、多态性明显的１０条ＩＳＳＲ引物，用于２９份中型狼尾草材料ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增（图１）。表２显示，１０条引物共扩增出７２个位点，其中多态
８
５
２西 北 植 物 学 报 ３４卷
性位点６２个，平均多态性比率（ＰＰＬ）达８７．４％；每条引物扩增位点４～１５个不等，平均７．２个，其中多态性位点３～１２个不等，平均６．２个；多态性比率最高的达１００％，最低的为７５％，引物ＵＢＣ８９９扩增位点最多，为１５个，ＵＢＣ８５５和ＵＢＣ８９５位点最少。这说明供试中型狼尾草种质资源间存在较高的遗传变异，且ＩＳＳＲ标记能有效地从分子水平上揭示材料间的多态性。
２．２ 遗传多样性分析
观察等位基因数（Ｎａ）、有效等位基因数（Ｎｅ）、Ｓｈａｎｎｏｎ多样性信息指数（Ｉ）及Ｎｅｉ’ｓ基因多样性
指数（Ｈ）都是衡量遗传多样性水平的常用指标。将２９份中型狼尾草材料的ＩＳＳＲ扩增谱带通过ＰＯＰ－
ＧＥＮＥ ３２软件分析，结果（表３）表明中型狼尾草的平均Ｎａ、Ｎｅ、Ｉ和Ｈ值分别为１．８６１ １、１．７４２
８、０．５６１ ０和０．３９５
９
。图１ 引物ＵＢＣ８９９扩增的中型狼尾草ＩＳＳＲ图谱
１～２９为中型狼尾草材料，编号同表１；Ｍ．ＭａｒｋｅｒⅢ
Ｆｉｇ．１ ＩＳＳＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔ ｏｆ Ｐ．ｌｏｎｇ
ｉｓｓｉｍｕｍｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍｗｉｔｈ ｐｒｉｍｅｒ ＵＢＣ８９９１～２９．Ａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ ｏｆ Ｐ．ｌｏｎｇ
ｉｓｓｉｍｕｍｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍ，ｎｕｍｂｅｒｓ ｗｅｒｅ ｓｈｏｗｅｄ ｉｎ Ｔａｂｌｅ １；Ｍ．ＭａｋｅｒⅢ表２ 引物序列及位点多态性
Ｔａｂｌｅ ２ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｌｏｃｉ ｐｏｌｙｍｏｒｐ
ｈｉｓｍ ｏｆ １０ｐｒｉｍｅｒｓ引物
Ｐｒｉｍｅｒ序列
Ｓｅｑ
ｕｅｎｃｅ（５′－３′）退火温度
Ａｎｎｅａｌｉｎｇ
ｔｅｍｐ
ｅｒａｔｕｒｅ／℃位点数
Ｎｏ．ｏｆ
ｌｏｃｉ多态位点数
Ｎｏ．ｏｆ
ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉ
ｃ ｌｏｃｉ多态位点比率
Ｐｒｏｐ
ｏｒｔｉｏｎ ｏｆｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ｌｏｃｉ／％
ＵＢＣ８２６（ＡＣ）８Ｃ５０ ９ ７ ７７．８ＵＢＣ８２９（ＴＧ）８Ｃ ５０ ６ ６ １００．０ＵＢＣ８４６（ＣＡ）８ＲＴ ５１ ８ ７ ８７．５ＵＢＣ８４７（ＣＡ）８ＲＣ ５３ ６ ６ １００．０ＵＢＣ８５５（ＡＣ）８ＹＴ ５１ ４ ３ ７５．０ＵＢＣ８５６（ＡＣ）８ＹＡ ５１ ７ ６ ８５．７ＵＢＣ８６６（ＣＴＣ）６５５ ５ ４ ８０．０ＵＢＣ８７９（ＣＴＴＣＡ）３
５０ ８ ７ ８７．５ＵＢＣ８９５ＡＧＡＧＴＴＧＧＴＡＧＣＴＣＴＴＧＡＴＣ ５３ ４ ４ １００ＵＢＣ８９９ＣＡＴＧＧＴＧＧＴＧＧＴＣＡＴＴＧＴＴＣＣＡ
５６
１５ １２ ８０．０平均Ａｖｅｒａｇｅ ７．２ ６．２ ８７．４
总计Ｔｏｔａｌ
７２
６２
Ｎ
ｏｔｅ：Ｒ＝（Ａ，Ｇ）；Ｙ＝（Ｃ，Ｔ）．表３ ２９份中型狼尾草材料遗传多样性指数
Ｔａｂｌｅ ３ Ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
ｉｎｄｅｘｅｓ ｏｆ ２９ Ｐ．ｌｏｎｇｉｓｓｉｍｕｍｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍａｃｃｅｓｓｉｏｎｓ项目
Ｉｔｅｍ样本
Ｓａｍｐ
ｌｅ ｓｉｚｅ观测等位基因数
Ｏｂｓｅｒｖｅｄ ａｌｌｅｌｅｎｕｍｂｅｒ（Ｎａ）
有效等位基因数
Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ
ｎｕｍｂｅｒｏｆ
ａｌｌｅｌｅｓ（Ｎｅ）Ｓｈａｎｎｏｎ多样性信息指数
Ｓｈａｎｎｏｎ’ｓ
ｉｎｄｅｘ（Ｉ）
Ｎｅｉ基因多样性指数
Ｎｅｉ’ｓ
ｉｎｄｅｘ（Ｈ）平均Ｍｅａｎ ２９
１．８６１ １ １．７４２ ８ ０．５６１ ０ ０．３９５ ９标准差Ｓｔ．Ｄｅｖ
０．３４８ ３
０．３２７ ８
０．２３１ ３
０．１６５
６９
５２２期 张怀山，等：中型狼尾草种质资源遗传多样性的ＩＳＳＲ分析
图２ 基于ＩＳＳＲ标记的２９份中型狼尾草种质资源聚类图
Ｆｉｇ．２ Ｄｅｎｄｒｏｇｒａｍ ｏｆ ｃｌｕｓｔｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂａｓｅｄ ｏｎ ＩＳＳＲ ｏｆ ２９ Ｐ．ｌｏｎｇ
ｉｓｓｉｍｕｍｖａｒ．ｉｎｔｅｒｍｅｄｉｕｍｇｅｒｍｐｌａｓｍ ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ２．３ 遗传相似性系数分析
Ｎｅｉ遗传相似性系数（ＧＳ）是用来比较群体或个体间相似程度的度量参数，平均相似系数越高，说明
相似程度越大，遗传背景一致性越强［２３］
。２９份中型
狼尾草材料之间的Ｎｅｉ遗传相似性系数变化范围为０．２３６～０．９０３（表４）。其中，亲缘关系最近的是来源于云南昆明市官渡区新河村的１１号材料和安宁县八街镇的１８号材料，ＧＳ值为０．９０３；遗传相似性系数最低的是来源于云南昆明市禄劝县施宽村的１７号材料与来源于云南曲靖市马龙县中小屯的２８
号材料，ＧＳ值为０．２３６，亲缘关系最远。２９份中型狼尾草种质材料中，大多数来自相同或相近地理位置的材料间Ｎｅｉ遗传相似性系数较大，亲缘关系较近；但由于采样地理分布较广，生境相差较大，有一小部分材料之间ＧＳ值较小，从而使得供试材料间整体存在较大的遗传差异。２．４ 聚类分析
利用ＵＰＧＭＡ法对２９份中型狼尾草材料进行聚类分析，建立聚类分支树状图（图２）。供试材料以遗传相似系数０．５１为分类界限，聚为４大类：第Ⅰ类有９份材料，按地理来源划分为２个亚类，来自云南崇明县的２５号、１５号、１４号、１３号材料与来自武定县的１９号材料为第１亚类，来自云南马龙县的２８号、２９号材料与来自宜良县的２４号材料及来自澄江县的２０号材料为地２亚类；第Ⅱ类有１４份材料，
大部分都来自云南昆明市城郊附近，又分为２个亚类，第１亚类包括来自昆明市官渡区的５号、１１号及来自禄劝县的１７号共３份材料，第２亚类有１１份材料，
分别是来自昆明市晋宁县的９号材料、西山区的６号、１０号材料、呈贡区的８号、７号和１２号材料以及来自安宁县的１８号材料、澄江县的２１号材料、宜良县的１６号材料、姚安县的２２号材料和禄劝县的２３号材料；第Ⅲ类只包含１份来自甘肃兰州的２号材料；
第Ⅳ类有５份材料，也是划分为２个亚类，来自甘肃兰州的４号、３号和１号材料为第１亚类，来自云南祥云县的２７号和２６号材料为第２亚类。经Ｍａｎｔｌｅ检验，
中型狼尾草种质的地理距离和遗传聚类之间并不存在显著的相关性（ｒ＝０．４３７ ０，Ｐ＝０．２０４
６）。３ 讨 论
鉴定、分析材料的遗传多样性是研究物种起源进化、
发现新的基因资源、改良现有育种材料的基础性工作。分子标记是从ＤＮＡ水平上揭示品种及种群间差异性和相关性的有效工具之一，运用它可以确定样本材料之间的遗传多样性和亲缘关系，通过聚类分析可以划分出杂种优势群，提高杂交优势的应用效率，对种质资源保护和品种改良具有重要意义。
中型狼尾草作为一种兼具饲草、生态型的优良
草种而受到禾草学家的高度重视。张怀山等［１１］
研
究表明，
采自云南祥云的中型狼尾草种子在昆明地０
６２西 北 植 物 学 报 ３４卷
２期 张怀山，等：中型狼尾草种质资源遗传多样性的ＩＳＳＲ分析
２
６
１
区栽培种植，第一年干草量为７ ４２５ｋｇ／ｈｍ２，第二年干草量达１．０７×１０４ ｋｇ／ｈｍ２，并且每年可刈割２～３茬；在甘肃兰州地区引种结果，在施用水肥条件下，当年干草量就达１．９５×１０４ ｋｇ／ｈｍ２。拔节孕穗期粗蛋白含量１８．３６％，赖氨酸含量１．１６％。对中型狼尾草进行引种驯化和遗传改良极有希望培育出对畜牧业发展和生态建设发挥突出作用的禾草新品种。然而，狼尾草属牧草分子方面的研究起步较晚，目前主要集中在ＲＡＰＤ分子标记。解新明等［２４］采用ＲＡＰＤ标记对狼尾草属８个品种遗传多样性的研究发现，品种间已有一定的遗传分化，具有较高的遗传变异。钟小仙等［２５］对８３份狼尾草属牧草资源进行ＲＡＰＤ遗传多态性聚类分析表明，筛选出的１０条随机引物共扩增出７１个位点，其中６６个多态性位点，将８３份材料聚为５大类。朱钧［２６］对狼尾草属优质牧草的ＲＡＰＤ分析研究表明，８条引物共扩增出８２条谱带，多态性位点百分率在５７．１％～８５．７％之间。乔良普［２７］运用ＲＡＰＤ和ＩＳＳＲ分子标记对４５份狼尾草属牧草遗传多态性、亲缘关系的研究显示，８条ＲＡＰＤ引物共检测到７０个位点，其中多态位点占８８．６％，Ｎｅｉ’ｓ基因多样度为０．３０８ ０，Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数为０．５３３ ４；９条ＩＳＳＲ引物共检测到８３个位点，其中多态位点占９２．８％，Ｎｅｉ’ｓ基因多样度为０．２８３ ２，Ｓｈａｎｎｏｎ信息指数为０．４２８ ０。ＲＡＰＤ标记和ＩＳＳＲ标记聚类图谱大体趋势相同，但不完全一致。
本研究通过ＩＳＳＲ标记对４份兰州地区栽培中型狼尾草材料及２５份云南地区野生中型狼尾草材料进行遗传多样性分析表明，１０条ＩＳＳＲ引物共扩增出７２个位点，平均多态性位点比率为８７．４％；２９份材料的平均Ｓｈａｎｎｏｎ多样性信息指数和Ｎｅｉ’ｓ遗传多样性指数分别为０．５６１ ０和０．３９５ ９，遗传相似性系数变幅为０．２３６～０．９０３，这表明中型狼尾草在长期的适应和进化过程中形成了广泛的遗传变异，不同种质材料间存在着丰富的多态性。中型狼尾草具有较高的遗传多样性，可能是由其自身的生物学特性决定的。中型狼尾草是多年生草本植物，风媒传粉，而且它产生的花粉量极大，花粉粒小而干燥、重量极轻，利于远距离传播，使个体之间基因流动频繁，为基因重组提供了广阔的空间和机会。此外，一般来说植物的多样性中心可能是该物种的起源中心［２８］，因此，中国西南地区（云南）可能是中型狼尾草的部分起源中心或是第四纪冰期避难所。中型狼尾草在云南省从南至北都有分布，而云南地形地貌
复杂，南北之间在气温、土壤、水肥、植被等生态因子上差异较大，也可能导致不同地区种质由于适应环境的需要产生不同的表型和基因型，从而扩大了中型狼尾草的遗传多样性水平。本研究结果表明采用ＩＳＳＲ分子标记进行中型狼尾草种质资源遗传多样性的分析是可行的，并且具有较高的多态性检测水平，这些多态性对了解中型狼尾草的遗传背景、为中型狼尾草牧草资源的开发利用、新品种培育和生产提供了理论依据。
ＵＰＧＭＡ聚类分析显示，以遗传相似系数（ＧＳ）约０．５１为界，将２９份材料划分为４大类，来自于相同或相近地理生态型的多数资源可以聚于同一类或亚类，呈现出一定的地域性分布规律，这可能是长期自然选择使个体中发生的不定向变异演变为群体遗传结构的定向变异从而导致同一地区的大部分中型狼尾草种质基因型趋于相似的结果。但是，来自兰州大洼山的栽培种质与来自云南祥云县的野生种质归为一类，而同样栽培于大洼山的２号材料却独聚一类，形成“大杂居、小聚居”的现象，表现出较大的地域分布差异性，即各种质材料间遗传分化程度较大，并且没有依据地理位置的渐变而呈现出遗传距离上的渐变规律，与前人相关野生资源的分析结论不尽一致［２９］。２号材料单独聚为一类，说明其遗传上具有一定的特殊性，可能是由于材料在引种驯化过程中有个别基因发生了适应当地环境的基因突变，引种地兰州地处黄土高原西端，气候干燥，蒸发量远大于降水量，风沙活动频繁，土壤碱化贫瘠，水土流失严重，相对于原产地雨量充沛、土壤肥沃的优越生境，这种不利的环境使得种质发生了较大变异，产生了比较独特的基因型。Ｃｏｚｚｏｌｉｎｏ等［３０］研究表明，高山或河道的物理隔离对生物居群间的遗传分化有一定的影响。然而，本研究中，基于种质地理距离和遗传聚类的Ｍａｎｔｅｌ检测表明，中型狼尾草种质的遗传分化与Ｗｒｉｇｈｔ［３１］提出的地理距离分化模式不太相符，即地理分布与遗传多样性分布没有直接的相关性，这与Ｈａｒｍｒｉｃｋ等［３２］的研究结果相一致。同样地，实验中遗传相似系数最大、亲缘关系最近的来源于云南昆明市官渡区的１１号材料和安宁县的１８号材料虽然聚为一类，但却分属于两个不同的亚类，而地理距离最近、均来自于宜良县的１６号和２４号材料更是聚于两个不同的大类，进一步表明中型狼尾草的遗传聚类与地理来源无严格的一致性关系。由此可以看出，中型狼尾草种质的遗传分化受距离的影响不大，云南地区野生中型狼尾草资源遗
２
６
２西 北 植 物 学 报 ３４卷
传变异的形成并非主要是由地理距离产生的遗传漂变所致，可能跟其生殖方式和基因的突变等有关。中型狼尾草属于异花传粉植物，花粉串粉导致天然杂交，
使得相同生态型的种质产生特异的基因型；另一方面，环境饰变作用引起地区间偶然的基因交流导致某些基因在不同地区的入渗，造成不同地理环境中种质材料性状的交叉，使得野生中型狼尾草的遗传距离与地理来源的关系复杂化。Ｓａｎｔｈｏｓｈ
等［３３］
在腰果（Ａｎａｃａｒｄｉｕｍ ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｅ）
种质资源遗传多样性的研究中认为不同地区之间的相互引种可能导致种质的聚类结果与种质地理来源没有直接联
系。同样，易杨杰等［３４］在狗牙根（Ｃｙ
ｎｏｄｏｎ ｄａｃ－ｔｙ
ｌｏｎ）种质遗传多样性的ＳＲＡＰ研究中发现一些地理来源及遗传背景不一的品种聚在一起，这可能与江河冲刷、人类活动等将其转入异地进行无性扩繁有关。
物种的遗传多样性是大自然最珍贵的自然资源，是人类赖以生存的基础。遗传多样性可以用来
描述种群遗传变异和维持变异的机制，其丰富程度决定了物种对环境的适应能力与进化潜力。通过遗传聚类了解中型狼尾草遗传变异在地理上的分布格局对于制定科学的保护策略并促进其开发利用具有极为重要的作用。云南野生中型狼尾草存在较为丰富的遗传变异与分化。虽然多数资源在聚类上呈现一定程度的地域分布规律，但是中型狼尾草的遗传关系和地理距离之间并不存在显著的正相关关系。因此，在实际开发应用研究过程中，应该重点对中型狼尾草种质资源实施异地保护，并在迁地栽培后加快对中型狼尾草的繁育技术、
引种驯化研究，保持并扩大中型狼尾草资源的多态性丰富程度。此外，对中型狼尾草野生资源的原生境保护工作也不能松懈，
在广泛深入评价的基础上进一步建立中型狼尾草地方种质资源库，与此同时需要加强当地农户的科普教育，
防止人类活动造成的基因混杂，以保护其独特的基因资源，
为中型狼尾草的生物分子进化、地理分异和物种形成等研究奠定必要的材料基础。
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６２西 北 植 物 学 报 ３４卷
植物种植、养护及管理的全过程
花卉的种植、养护与管理 摘要：该论文记录了我的养花实践以及通过这次实践所学到的一些东西。经历过这次养花，我发现养花不是一件简单的事情，从播种到移栽，然后浇水、施肥、修剪、支架以及病虫害防治无一不是一件细致的事，其中有一个步骤稍有一点的差错都将导致前功尽弃。而且养花并不是只做到了上述的要求就够了，还要注意光照，温度等等问题。除此之外，不同的花卉有不同的习性，自然就有不同的养护及管理方法。 关键词：养花实践、花卉的养护、花卉的管理 实践是检验真理的唯一标准。今年我在学习养花理论的同时也经历了养花实践。下面将详细介绍我的养花经历以及我所学到的理论知识。 一、养花实践 由于学养花的时候是在学校，所以花苗的培育这一理论的实践是老师和我们一同经历的。在一个星期二的傍晚，我们全班同学进行了一次课外实践——培育花苗。要培育出优良健壮的花苗，种子品质很关键，选择品种正确、品质优良、种粒充实饱满的种子进行育苗。老师为我们选择了硫华菊和鸡冠花的种子进行育苗。我们选择了一块疏松肥活、排水良好的播种土地。在播种之前，大家先把种子和一些肥料一起拌匀，然后均匀洒在已经疏松好的播种土上。之后在种子上盖上一层薄薄的土，最后浇上充足的水分并且在播种土的上方盖上一层薄膜。过了差不多两个星期之后，我们把已经育好的花苗移栽到了老
师发给我们的盆里。我先把土和老师给大家的肥料拌匀，然后把选好的鸡冠花花苗栽种，在浇上了充足的水分，移栽就完成了。上盆后，我遵照老师的说法把它放在避风阴湿的地方暂不浇水。天气干燥的时候，随时喷湿保苗，在12-24小时后，再浇透水。这样不仅能防止根须腐烂萎缩，而且能够促发新根。置阴一周后再放在有阳光照射的地方，隔两三天的浇一次水，偶尔给花施一些肥料。并且病虫害的防治。现在我的花已经养成功了，而且这两天它开了一朵花。虽然养这花花了很多心血，但是我很高兴，因为通过理论和实践，我已经学有所成了。 二、花卉的养护 任何花卉的生长和发育都与周围的环境条件有不可分割的联系，因此，要养好花卉，必须了解和掌握各类花卉生长发育所需环境条件，以便在栽培过程中人为调整环境因素，为其创造最适宜的环境条件，使之健康茁壮成长，花繁枝茂，影响花卉生长发育的环境条件主要包括温度、光照、水分、土壤、空气和肥料。 在上述环境条件中，不管哪个因素发生变化都会影响花卉的生长和发育，各环境条件之间存在着相互联系，相互制约的关系，因此分析花卉植物生长发育状况或制定花卉栽培措施时，必须综合考虑各个环境条件对花卉的影响，才能达到科学养花的目的。 1、花卉与温度 温度是花卉生长发育的重要条件，各种花卉的生长发育和休眠都要求一定的温度；不同种类花卉因原产地的气候不同，对温度的要求
五个要点：可以确保香泡种植过程中的成活率
五个要点：可以确保香泡种植过程中的成活率 针对香泡移植的方法：对于胸径在10厘米以下的树苗，只需按常规要求挖掘土球移栽，通常土球直径约为移栽树主干的5一6倍，而对胸径10厘米以上的大树苗，则应先进行截根和促根处理。具体做法是：在主干相对的两侧，距树干直径2一2.5倍处挖土开槽，用锯子或利斧截断粗大侧根，截面必须平齐。较小的侧根可以用修枝剪剪断，再覆盖细土，使其当年于断口附近长出细根，第二年在未断根两侧重复作业，第三年的春季才可以起苗。 1.促进幼苗营养生长，使其早日成株。第二、三年春天换盆时施饼肥、蹄片、骨粉做基肥，同时进行一次整形修剪，将主干剪留15厘米，下面留3至5个腋芽，促其萌发壮枝，扩大树冠。当新稍长至5至8厘米时摘心，去顶芽和侧芽，以育成一定的树形，并促进其提前进入结果期。 2.香泡喜酸性土壤，PH值应保持在5.3为宜；土壤以排水良好而较肥的壤上、沙壤、黏壤均可，盆土的配比为腐殖土60％，河沙30％，泥炭土或炉灰渣10％。可每十天半月追施1次稀薄的肥水。水大易烂根，应采取试墒浇水的办法，盆土表层不干不浇，一次浇透，全年如此。 3.香泡最适宜的湿度是70％至90％。为此在干燥季节应每天向叶面喷水1至2次，也可向地面洒水增加空气湿度。香泡的适生温度是15至30℃，高温季节要移至凉爽通风而又遮阴的地方，气温低于5℃时须防寒。香泡要求在海拔800米到1200米在沙壤土栽培,要求比较湿润的环境。宜在温暖湿润气候，雨水充足地区生长。 4.香泡一般多用插条扦插，选粗壮而色浓绿。有光泽的一年生枝条，以中段为最好，可结合夏至前后修剪枝条时进行。选好后切成长12～15厘米，剪去叶片，只留叶柄，插入土中约一半，然后培土，将穗顶埋入土中1．5厘米，再用手轻轻压实。亦可切成18～20厘米长，扦插于素砂土中，入土约15厘米，压上、浇水。扦插后，注意中耕除草、施肥等管理工作，培育2～3年，便可移栽。 5.香泡树容易出现黄叶病和叶片脱落现象，发生黄叶病可浇灌1％的硫酸亚铁溶液。如烂根要立即翻盆，把植株从盆中脱出冲洗根部，去掉烂根，消毒后栽于消过毒的素沙土中进行养护，使其逐渐恢复生机。
种植流程
播种过程： （一）播种前的准备工作 1、种子处理 （1）精选种子：农民购到种子后，要对种子进行挑选，清除霉变、破碎、混杂及有病虫害的种子。 （2）晒种：选择晴天上午九时到下午四时进行晒种，（注意：不要在铁器和水泥地上晒种，以免烫坏种子），连续晒2-3天，可提高出苗率。 （3）浸种：微肥浸种可补偿土壤养分，经济有效。 （4）种子包衣或药剂拌种：防治地下害虫和苗期病虫害。 2、播种机具的选择与调试 （1）机具选择：根据地块大小选择型号不同的播种机具。 （2）机具调试：播种前根据种植密度确定行距、株（穴）距。机具调整好后要先进行试播，检查播种深度和播种均匀性，检查行距、株（穴）距、覆土、镇压是否符合农艺要求。 3、肥料准备 大力推广测土配方施肥，提高肥料利用率。 （二）播种时需要注意的事项 1、播种时间 农作物在播种过程中要在合适的时间段内播种。根据气象条件，结合农作物要求的温度指标分析，确定农作物适宜播种的时间。 2、播种量
确定合理的播种量可以获得适宜的基本苗数。 3、播种方式 播种方式主要指根据种植作物的生长特性和土地肥沃程度决定播种密度。一般情况下高产田行距较小，种的比较稠；中产田行距较大，种的比较稀。 4、播种深度 墒情较好的粘土地，应适当浅播，以4-5厘米为宜；疏松的沙质壤土，适当深播，以6-7厘米为宜；若土壤含水量过高，不宜深播。播后及时镇压保墒，以利出苗。 5、足墒播种 充足的土壤墒情是保证种植作物苗全、苗齐的基本条件。在适播种期内，要趁墒抢种。 （三）播种环节易出现的问题及解方案 播种环节经常出现的问题主要有以下两点： 1、没有按照科学有效的方法播种，或者不知道怎样科学的播种，这个时候需要公司对播种环节进行科学指导，特别是种子（种苗）的处理、播种量、播种时机等方面的要求要详实、全面。 2、播种后出苗不全 种植作物播种后要及时检查出苗情况，一旦发生缺苗，应及时补全。主要方法包括：一是补种。选择与缺苗地块相同的品种，先在适宜的温度条件下浸种、催芽，以利于出苗和生长。二是移栽。对于来不及补种和补种后仍有缺苗的地块，可在同一地块选择壮苗进行移
种植教案知识讲解
葱的种植 教学目标 1、学会葱的种植方法。 2、让学生热爱劳动的品德，要每天参与劳动，体会劳动原艰辛。 3、种植时还要明白一亩园十亩田的道理。 教学重、难点： 1、教学重点：学会种葱的一般方法，知道不能太深、也不例外能太浅。 2、教学难点：葱的撒种种法。 教学准备： 教具准备：葱的种子、塑料种植盆、小铲子、水壶、水、泥土。课件 学生准备：根据上次的不同分工从老师那里领到种子或用具。 教学安排：在教室里上10分钟，实践操作30分钟。 课时安排:3课时（包括观察2课时） 教学过程： 一、各小组结合，讨论种植方法 1事前分好的小组结合在一起，讨论分到的东西的种植方法 2结合课前的采访及搜集的资料说一说。 二、各小组派代表，说出种植的方法及步骤 1小组派代表，汇报交流 2其他同学可以补充、指正 3教师也作小结。农艺师告诉我们各种作物的种植办法。用课件播放农艺师的嘱托。 三、各组选出操作代表，去亲自种植。 1由于泥土较湿润，面积不大，亲自动手的可选代表操作，也可轮番操作。 2注意事项：注意使用工具的安全。 四、看完农艺师指导的视频后，各小组去种植。 1学校在种植方面的老师进行指导。 2不能参与种植的同学一旁观看，可提出意见和建议。 五、在教师指导下，浇水或洒水。 1葱浇透 2撒种子后用喷壶洒水（均匀细） 3点种子的先在坑里浇足水，点上种，回填土，不益过深的。 六、回教室休息。（洗手） 教学反思：
种豆牙、发豆芽 教学目标1、以种豆芽的过程为例，练习动手操作，记录培育过程。 2、了解观察记录的格式，种豆芽并完成观察记录。 情感目标：在整个操作过程中培养学生热爱生活的情感和主动观察生活的习惯。 教学重点、教学难点种豆芽，并在种豆芽的过程中持之以恒地观察、记录。 教具准备：黄豆芽、杯子、水壶、课件。 学生准备：根据上次的不同分工从老师那里领到种子或用具。 教学安排：在教室里上10分钟，实践操作30分钟。 课时安排：3课时（包括观察2课时） 教学过程 一、准备阶段 1、要准备的材料：每个小组准备一个透明的塑料杯和二十粒黄豆。 2、组织“种豆芽”的活动（配合多媒体讲解）。 （1）老师简单介绍种豆芽的方法：用足量的水将黄豆浸泡一天，然后把水沥干。用剪刀在杯子的底部打几个小洞，用来沥掉多余的水分。从第二天开始，每天给黄豆浇两次水，不要随意翻动黄豆。 （2）学生按组尝试着种豆芽。 二、观察阶段 1、安排学生定时给黄豆加水，并仔细观察黄豆的变化，直到黄豆长成豆芽。 2、将自己两次看到的看黄豆的变化及时记录下来，完成观察记录。 3、观察总结； （1）、同学们,这些天,我们做了一个有趣的实验——种豆芽,在同学们的精心照料下,豆子已经变成了可爱的豆芽,多么神奇呀! （2）、大家回忆一下,为了成功地制作豆芽,我们都作了哪些事呢? (准备杯子子、豆子、给豆子浇水、观察并记录豆子的变化……) （3）、大家在观察的时候,主要是抓住了豆子的哪些变化特点进行观察? (外形变化、生长情况 (4)、经过一个星期的辛勤劳动，同学们一定有许多的话想说吧。学生畅谈自己种豆芽的感想或启发，并将自己的感想记录下来。 教学反思：
遗传多样性与起源研究
西北农林科技大学 2009级硕博连读研究生学位论文开题报告 黄牛、水牛和牦牛Y染色体分子遗传多样性与起源研究Y-chromosome Molecular Genetic Diversity and Origins in Cattle, Buffalo and Yak 学院：动物科技学院 学科、专业：动物遗传育种与繁殖 研究方向：动物遗传学 研究生：XX 指导教师：雷初朝教授
黄牛、水牛和牦牛Y染色体分子遗传多样性与起源研究 一、选题的目的与意义 黄牛、水牛和牦牛是我国3个重要的牛种，具有对周围环境的高度适应性、耐粗放管理、抗病力强、繁殖力高、肉质好等特点。这些地方牛种本身就是一座天然的基因库，正是进行杂种优势利用和进一步培育高产品种的良好原始材料。在当今世界畜禽品种资源日趋匮乏，品种逐步单一化的情况下，对我国这些牛种遗传资源的保护将对今后的育种工作产生很大的影响，起到难以估量的作用[1]。 中国黄牛的起源进化与遗传多样性一直是国内外动物遗传学家感兴趣的课题之一。一般认为，中国黄牛是多元起源的，并主要受普通牛和瘤牛的影响，但究竟起源于哪几个牛种，观点不一[2, 3]。在黄牛遗传多样性方面，自二十世纪八十年代以来，众多研究者分析了中国地方黄牛的核型，发现不同黄牛品种的Y 染色体形态具有明显的多态性，普通牛为中着丝粒或亚中着丝粒，瘤牛为近端着丝粒[4-6]。常振华等发现中国黄牛Y染色体主要属于Y2（普通牛）和Y3（瘤牛）单倍群[7]，但事实上黄牛的每种Y染色体单倍群下都可细分为多种单倍型，而中国黄牛由哪些Y染色体单倍型组成，有无优势单倍型以及单倍型的品种分布有无地理特点，与国外黄牛品种有何不同，这些问题都亟待阐明，以期为黄牛品种资源保护和杂交育种工作提供参考依据。 中国也拥有丰富的水牛资源。水牛的驯化时间，地点尚无定论，国内一些学者在形态学和考古学方面进行了一些研究，给中国水牛的驯化历史提供了一些参考[8, 9]，但仅靠形态学和考古学的研究是远远不够的，还需要分子遗传学的更多证据。目前国内外对水牛的起源研究主要是在线粒体DNA的母系起源方面，认为水牛有两个母系起源（A支系和B支系）[10-12]，近年来，也有中国学者对水牛的常染色体微卫星多态性进行了研究，其结果都表明中国水牛的遗传多样度丰富，倾向于支持中国水牛的本土起源假说[13, 14]。对Y染色体遗传多样性的研究，将提供更多的分子遗传学信息，会有助于评估水牛的遗传资源状况，也有助于阐明中国水牛的驯化历史。 牦牛主要分布于我国的青藏高原，俗称“万能种”，通常皆为兼用，如乳、肉、毛、皮、役力，是经济价值极高的珍贵畜种[1]。家牦牛是在青藏高原驯化的，藏族自古以来生息于西藏，是驯化牦牛之主，因此牦牛的驯化始终与藏族文化的发展休戚相关，是当地人民不可分离的生产和生活资料[15]。从牦牛生活的特定气候地带的适应性和生态地理、生理特征的表现看，牦牛是地球之巅特有的高寒环境中生存的一个宝贵的特化种，牦牛的驯化与繁衍有着与其他牛种极其不同的种类特点，牦牛对高寒山区的气候和贫瘠的草地所具有的特殊的适应性也是世界
育苗种植流程
香樟 香樟一般用种子繁殖。应随采随播，每公斤种子7，200-8000粒，发芽率70-80%，每亩播种量10-15公斤。1．时间。每年十至十二月，将已成熟的种子采下，然后混沙贮藏，三月初即可催芽播种。2．整地。在冬初进行第一次耕耙，播种前进行第二次耕耙，并施足基肥，基肥一般用腐熟厩肥，每亩1500~2000公斤或碳胺50公斤，磷肥50公斤、菜饼150公斤，然后筑成高床，一般床高35~50厘米，床宽1.2米。3．催芽。三月初樟树播前需催芽，可用50℃的温水浸种，当温水冷却后再换50℃水重复浸种3~4次，可使种子提早发芽10~15天。4．播种。条播行距20厘米左右，每亩播种量10~15公斤，播后覆土盖稻草或地膜，保持苗床表土湿润，以利种子发芽。5．抚育管理。幼苗出土后应及时揭去稻草或地膜，待幼苗长出数片真叶就可以开始间苗，苗高10厘米左右可进行定苗。樟树每亩留苗2万株左右。7月份以后，要加强肥水管理，经常松土除草。秋末停止追肥、灌溉。追肥一般2~3次，前二次可用尿素7~10斤，最后一次可用尿素10公斤、磷肥7.5公斤。樟树1年生苗可达50厘米以上，地径达0.7厘米以上。6．移栽时间在3月中下旬至4月上中旬较为适宜，移植密度每亩1500株左右。随起随移，移栽后离地10厘米左右截杆，当芽长到10厘米左右可定主杆，剪去多余枝芽，留一个比较粗壮的枝。冬季床面施厩肥2000公斤。这样3年生苗木胸径可达3厘米以上。第三年初春将小苗进行第三次移栽，株行距为50-60厘米，移栽时要带足土，并修剪少量弱枝。在管理上要注意防虫防病、施肥、摘除侧芽。寒流到来前，用稻草捆缚防冻。当株高达2米时，可用大锹初定土坨大小，并切断部分根须，促进侧根生长，以便出售时有较高的成活率。 银杏 银杏一般购买种苗繁殖。银杏树移栽注意要领：选银杏树苗要求苗木健壮，根系发达，木质部发白，根皮略成红色，与木质部紧密相贴。若根系变黑，即使树干呈绿色也可能早已死亡，银杏树作为行道树应多选用实生苗或雄株，树干较直，树形一致，分枝点在3米左右的苗木。二银杏树栽植早春萌芽前栽植易成活，种植土要选用土层深厚肥沃，有机质含量在1%至3%，透气透水性能好的土壤。坑底放入腐熟的有机肥后再加入20厘米厚的熟土，使其充分混合，以免烧根。如果天气干旱，把栽植坑灌满水，水渗干后再栽植。银杏通常带土球栽植。银杏深埋后不易发根，因此宜浅栽，通常以原苗木的根际线与地面相平或高出1厘米至2厘米为佳。三银杏树水肥管理载后5天至7天浇水。银杏成活后，无须经常灌水，一般在土壤化冻后发芽前浇第一遍水。5月份，如天气干旱，可浇第二遍水，以利于银杏的生长发育。雨季，可视天气情况浇水。银杏耐旱怕涝，阴雨天时要注意排涝。因为银杏的根部呼吸量大，要防止根系因土壤中水分过多缺少氧气造成根系腐烂死亡。施肥在春秋两季，在树冠外围，用环状施肥法或打洞的方法，施一次腐熟的有机肥，施后浇水。银杏有假活、假死现象。有些银杏即使根系死了，叶子还能展开，甚至第二、第三年还能发芽，但叶子很小。待树体内养分耗尽，它才不发叶了，这是银杏的假活现象。有些银杏栽植后，第一年不发芽，甚至第二年还不发芽，但树皮依然鲜绿，到了第三年才开始发芽展叶，这是银杏的假死现象。所以有人说：种植银杏树，三年活不算活，三年死不算死。四银杏树修剪中耕及病虫害防治银杏无需特殊修剪，移栽前可进行定干修剪，同时将过密枝、病虫枝、伤残枝及枯死枝剪除。在其生长过程中，因生长缓慢，一般不修剪。在养护过程中需及时中耕锄草，减少杂草，有利于树木生长，同时改善土壤的通气条件，促进根系生长，萌发新根。银杏的病虫害很少，夏季高温干旱的年份，当年生苗或新移栽的苗，茎基部易灼伤而使病菌侵入，雨后易发生腐烂病。夏季可设遮阴棚或用波尔多液防治。害虫主要是蛴螬。银杏栽培简单，管理粗放，是优良的绿化树种。银杏树移栽后的管理很重要，但移栽时土壤的孔隙度以及根系大小与枝叶保留量的比例，也能影响银杏移栽成活 杜英 杜英播种、扦插繁殖均可。采种母树应选择树龄15年以上、生长健壮和无病虫害的植株。秋季果实成熟时采收，堆放至果肉软化、充分成熟后，置清水中浸泡，搓洗净外果肉，现出种核，捞出阴干后随即播种，或湿沙低温层积至翌年春播。种子切忌暴晒，也不宜长期脱水干藏。进行湿沙层积催芽的，可分批选出已萌动种
什么是遗传多样性
什么是遗传多样性、物种多样性、生态系统多样性？ 遗传多样性是指存在于生物个体内、单个物种内以及物种之间的基因多样性。一个物种的遗传组成决定着它的特点，这包括它对特定环境的适应性，以及它被人类的可利用性等特点。任何一个特定的个体和物种都保持着大量的遗传类型，就此意义而言，它们可以被看作单独的基因库。基因多样性，包括分子、细胞和个体三个水平上的遗传变异度，因而成为生命进化和物种分化的基础。一个物种的遗传变异愈丰富，它对生存环境的适应能力便愈强；而一个物种的适应能力愈强，则它的进化潜力也愈大。 物种多样性是指动植物及微生物种类的丰富性，它是人类生存和发展的基础。物种资源为人类提供了必要的生活物质，特别是在医学方面，许多野外生物种属的医药价值对人类健康具有重大意义。随着医学科学的发展，许多目前人类未知的物种其医药价值也将不断被发现。 生态系统多样性是指生态系统类型的多种多样。地球上的生态类型极其繁多，但是所有生态系统都保持着各自的生态过程，这包括生命所必需的化学元素的循环和生态系统组成部分之间能量流动的维持。不论是对一个小的生态系统而言或是从全球范围来看，这些生态过程对于所有生物的生存、进化和持续发展都是至关重要的。维持生态系统多样性对于维持物种和基因多样性也是必不可少的。 简言之： 物种多样性，是从宏观方面来说的，指的是生物表现的性状多样性。 遗传多样性，是从微观方面来说的，指的是生物遗传物质DNA序列的多样性，也称为基因多样性。遗传多样性，决定了物种多样性。 例子：老虎、狮子、大象，属于不同的物种，反映了物种的多样性（性状有巨大差异）。决定这一切的，是它们细胞内的遗传物质的多样性，即DNA序列的多样性，它们的遗传物质是各自不同的。
遗传多样性的原因
产生遗传后代多样性的因素 2013012590高上涵经35 广义的遗传多样性是指地球上生物所携带的各种遗传信息的总和。这些遗传信息储存在生物个体的基因之中，是指种内或种间表现在分子、细胞、个体3个水平的遗传变异度，在分子水平上，遗传多样性主要体现在基因的多样性；在细胞水平上，主要体现在细胞形态和功能的多样性；在个体水平上，主要体现在个体表现型的多样性。狭义上则主要是指种内不同群体或个体间的遗传多态性程度。遗传后代多样性是多层次多水平的。 产生遗传后代多样性的因素很多，从宏观角度来看，生物进化影响着遗传多样性；从微观角度来看，遗传物质的多样性、变异性和繁殖的复杂性也是产生遗传后代多样性的因素。 （一）从进化的角度来看，在生物的长期演化过程中，具有适合生存环境的性状的个体更容易存货，决定这些性状的基因也更容易留存下来，由于外界环境的多变，一个物种所包含的基因越丰富，它对环境的适应能力越强。环境的多变是产生遗传多样性的原因。 （二）从遗传后代多样性的物质基础来看，基因、蛋白质、染色体具有多样性。大多数生物的遗传物质是DNA，DNA由四种脱氧核糖核苷酸按照一定的排列顺序组成，每一种排列顺序都代表着一种遗传信息，因此DNA可以储存大量的遗传信息，具有多样性，不同个体具有不同的遗传物质。基因表达的产物一般是蛋白质，而蛋白质由氨基酸构成，氨基酸的排列顺序、肽链的折叠方式、蛋白质的空间结构都导致了蛋白质的多样性。遗传物质的多样性、表达产物的多样性是遗传后代多样性的物质基础。 （三）基因与性状的关系来看，基因具有选择性表达的性质，相同基因的表达并不完全相同，同一个体不同细胞内的基因表达情况不同，不同个体的基因表达情况差异更大，即使是同卵双胞胎，基因的表达也会有很大的差异。基因表达的多样性是产生遗传后代多样性的因素。基因存在不完全显性：一个杂合体的表型介于两个产生它的纯合体的表型的过渡状态，还存在共显性：一个性状的体现由不止一个显性等位基因的表达，一个性状由多个基因共同控制。此外染色体数目的差异也会导致性状的不同（如唐氏综合征），基因和性状的关系的复杂性也是遗传多样性的因素。 （五）从遗传物质的突变来看，遗传物质在某种因素的刺激下能够发生变化基因突变、基因重组、染色体变异。遗传物质的突变主要有两种类型，即染色体数目和结构的变化以及基因位点内部核苷酸的变化，此外，基因重组也可以导致生物产生遗传变异。遗传物质的突变的概率较高，也是遗传多样性的根本原因。 （六）从繁殖方式来看，多数生物是有性繁殖，个体通过减数分裂产生配子，配子结合产生合子，个体从父母双方各继承一半的遗传信息。在产生配子的过程中，同源染色体分离，非同源染色体自由组合，姐妹染色单体的交叉互换等导致了配子的多样性。另外，配子是随机结合的，又增加了合子的多样性。 遗传物质的多样性、多变性，基因和性状关系的复杂性、环境的多变性等都是遗传后代多样性的因素。
中国主要东方蜜蜂种群的遗传多样性分析
中国主要东方蜜蜂种群的遗传多样性分析 任勤1，曹联飞2，赵红霞3,，王瑞生1，程尚1，罗文华1,曹兰1，姬聪慧*1 （1.重庆市畜牧科学院，重庆 402460；2.浙江省农业科学院，浙江杭州 310021；3. 广东 省生物资源应用研究所，广东广州 510260） 摘要：对中国具代表性的东方蜜蜂遗传资源中7个种群的线粒体DNA tRNA leu～ CO Ⅱ基因进行扩增和测序,并进行遗传多样性比较及亲缘关系分析。结果表明，共发现43个单倍型，其中10个单倍型在GenBank数据库对比确认属于新发现单倍型；7个群体中，阿坝中蜂、滇南中蜂和海南中蜂遗传多样性水平较高，长白山中蜂遗传多样性水平较低，其他群体遗传多样性居中；不同种群间遗传距离变化较大，其中海南中蜂与滇南中蜂、阿坝中蜂间的遗传距离最大，长白山中蜂与云贵中蜂、北方中蜂、华南中蜂间的遗传距离最小；聚类分析显示7个种群可聚为4个类群。 关键词：东方蜜蜂；遗传多样性；线粒体DNA 中图分类号：文献标志码：A Analysis of genetic diversity of Apis cerana populations in China REN Qin1, CAO Lianfei2,ZHAO Hongxia3,WANG Ruisheng1,CHENG Shang1,LUO Wenhua1,CAO Lan1, JI Conghui*1 （1.Chong Qing Academy of Animal Science，Chongqing 402460，China；2.Zhejiang Academy of Agricultural Sciences，Zhejiang 310021，China; 3.Guangdong Institute of Applied Biological Resources, Guangdong 510260, China） Abstract:The mitochondrial DNA tRNA leu～CO II genes in 7 populations of Apis cerana Fabricius in China were amplified and sequenced, and their genetic diversity and phylogenetic relationships were analyzed. The results showed that a total of 43 haplotypes were identified, of which 10 haplotypes were identified new haplotypes in the GenBank database, Among 7 populations, Aba bee, Hainan bee and Yunnan bee have higher level of genetic diversity, Changbai Mountain bee has lower level of genetic diversity, other populationswere intermediate; The genetic distances between different populations varied greatly, of which Hainan bee andhave maximum genetic distance with Yunnan bee and Aba bee, The genetic distances between Changbai mountain bee and Yunnan bee, Middle China bee, Northern bee and Southern bee were small.; Cluster analysis showed that the 7 populations could be clustered into 4 taxa. Key words:Apis cerana Fabricius; genetic diversity; mitochondrial DNA 收稿日期： 基金项目:国家蜂产业技术体系基金项目（CARS-45SYZ15）;重庆市畜牧科学院基金项目(16421). 作者简介：任勤(1979-), 男, 宁夏固原人，助理研究员, 硕士研究生，主要从事蜜蜂方面的研究。 通信作者：姬聪慧(1980-)，女，河南平顶山人，助理研究员，硕士研究生。
遗传多样性产生的原因
遗传多样性产生的原因 遗传多样性产生的原因 (一)从进化的角度来看，在生物的长期演化过程中，具有适合生存环境的性状的个体更容易存货，决定这些性状的基因也更容易留存下来，由于外界环境的多变，一个物种所包含的基因越丰富，它对环境的适应能力越强。环境的多变是产生遗传多样性的原因。 (二)从遗传后代多样性的物质基础来看，基因、蛋白质、染色体具有多样性。大多数生物的遗传物质是dna，dna由四种脱氧核糖核苷酸按照一定的排列顺序组成，每一种排列顺序都代表着一种遗传信息，因此dna可以储存大量的遗传信息，具有多样性，不同个体具有不同的遗传物质。基因表达的产物一般是蛋白质，而蛋白质由氨基酸构成，氨基酸的排列顺序、肽链的折叠方式、蛋白质的空间结构都导致了蛋白质的多样性。遗传物质的多样性、表达产物的多样性是遗传后代多样性的物质基础。 (三)基因与性状的关系来看，基因具有选择性表达的性质，相同基因的表达并不完全相同，同一个体不同细胞内的基因表达情况不同，不同个体的基因表达情况差异更大，即使是同卵双胞胎，基因的表达也会有很大的差异。基因表达的多样性是产生遗传后代多样性的因素。基因存在不完全显性：一个杂合体的表型介于两个产生它的纯合体的表型的过渡状态，还存在共显性：一
个性状的体现由不止一个显性等位基因的表达，一个性状由多个基因共同控制。此外染色体数目的差异也会导致性状的不同(如唐氏综合征)，基因和性状的关系的复杂性也是遗传多样性的因素。 (四)从遗传物质的突变来看，遗传物质在某种因素的刺激下能够发生变化基因突变、基因重组、染色体变异。遗传物质的突变主要有两种类型，即染色体数目和结构的变化以及基因位点内部核苷酸的变化，此外，基因重组也可以导致生物产生遗传变异。遗传物质的突变的概率较高，也是遗传多样性的根本原因。 (五)从繁殖方式来看，多数生物是有性繁殖，个体通过减数分裂产生配子，配子结合产生合子，个体从父母双方各继承一半的遗传信息。在产生配子的过程中，同源染色体分离，非同源染色体自由组合，姐妹染色单体的交叉互换等导致了配子的多样性。另外，配子是随机结合的，又增加了合子的多样性。 遗传多样性的研究意义 对遗传多样性的研究具有重要的理论和实际意义。 首先，物种或居群的遗传多样性大小是长期进化的产物，是其生存适应和发展进化的前提。一个居群或物种遗传多样性越高或遗传变异越丰富，对环境变化的适应能力就越强越;容易扩展其分布范围和开拓新的环境。即使对无性繁殖占优势的种也不例外。理论推导和大量实验证据表明，生物居群中遗传变异的大小与其进化速率成正比。因此对遗传多样性的研究可以揭示物种或居群的进化历史(起源的时间、地点、方式)，也能为进一步分析其进化潜力和未来的命运提供重要的资料，尤其有助于物种稀有或濒危原因及过程的探讨。
ntsys-pc遗传多样性分析软件使用说明
NTSYS-PC使用说明 1 数据的录入方法： 1.1 利用Ntedit直接录入数据 0、1二元数据中的数据缺失记为2。其中列标可以写为样品编号，在No.rows 栏中写入0、1数据总数，No.cols 栏中写入样品总数。文件另存为*.nts格式。 1.2 从excel表中直接读入数据 Excel表中输入数据格式如下图。A1必须为1，B1为0、1数据总数，C1为样品总数。 打开Ntedit程序，选择从Excel表输入，结果见上图。文件另存为*.Nts格式 1.3 Ntsys-pc可以直接运行*.phy格式的文件（由phylip和phytool产生） 1.4 DNA序列数据Ntsys-PC也可以分析，但好像用的人较少。建议大家使用phylip或者其他的软件。DNA序列数据在Excel 中输入格式如下：
1.5 其他数据的Excel输入如下： 2 聚类分析 Ntsys-pc2.02界面如下： 以下以图中数据为例介绍聚类过程： 2.1 首先用similarity程序组中的SimQual计算形似系数矩阵。Coefficient通常选用SM 或DICE，结果输出到另一文件
2.2 以上步的结果作为input file利用Clustering程序组中的SHAN或者Njoin进行计算，聚类分法选用UPGMA，ties选用FIND，Maximum no. tied trees至少大于样品数。 Njoin程序组界面如下，rooting method可以选用Outgroup，但需输入外元。 2.3 将SHAN或NJoin方法得到的tree file文件输入到Graphics程序组中的tree plot程序中计算
植物种植设计的基本流程
植物景观配置设计在景观设计中既是一门艺术又是一门实践性极强的技术。 相对于其他行业设计，植物景观配置，无论是从艺术的角度还是从技术的角度来看，都是一个发展上比较滞后的领域：从艺术角度来说，它缺乏完整系统的设计理论指导；从技术角度来说，它缺乏明确的设计标准和结果评判标准。再加上植物景观配置特有的生态问题和时空变化等特性。它们无疑都将增加植物景观配置设计工作的难度，同时也会增加植物景观配置设计工作的随意性和不确定性。 植物景观配置设计中存在一些基本的设计流程乃至设计程序，它们可以用来减少植物景观配置设计工作的随意性和不确定性，增加设计结果的可判定性。同时还可一定程度地增加设计工作的系统性，有序性；提高工作效率，提高系统质量保障能力。 植物景观配置的最终结果是要解决下面几个问题： 1、选什么样的植物？ 2、选多大植物？ 3、选多少的植物？ 4、如何搭配并布置到地面上？ 5、构成什么样的植物景观？ 1-4 涉及到以植物个体为元素来选择与布局的问题；5则涉及以植物配置后的群体为元素来选择与布局的问题。 植物景观配置操作的基本流程就是如何有序地有规范地解决上述问题的步骤过程。从结果来说，是按照上面1-5的顺序进行；但从设计的实施过程来说，确是倒着来，先解决第5个问题，然后解决1-4个问题！因此，在实际工作中，植物景观配置在设计阶段的基本流程大致包括以下三个环节： 1、植物景观类型的选择与布局， 2、各植物景观类型中植物个体的选择与布局， 3、系统地检查审评，即质量保证过程。 需要说明的是：这个三个步骤的顺序并非一成不变的，在设计过程中，三个环节会互有穿插，有时还互为前提。 一、植物景观类型选择与布局 简单说，植物景观类型就是植物群体配置在一起显现出来的外在表象类型。比如说：密林，线状的行道林，孤立的大树，灌木丛林，绿篱，地被，草坪，花镜等等。 植物景观类型的选择与布局设计就是把诸如密林，线状的行道林，孤立树，灌木丛林，绿篱，地被，草坪等等植物景观类型而不是植物个体作为设计元素进行空间配置，设计师需要从整体上考虑什么地方该布置什么样的植物景观类型。 植物景观类型的选择与布局首先是源于整体景观结构的布局，即通常上所说的结构性景观布局。结构性景观布局主要确定设计区域的总体景观框架。它主要基于顾客的总体景观意向需要和整体美学原则的需要来构筑景观框架。结构性景观布局在某种程度上等同于景观框架区划。
遗传多样性空间格局分析软件spagedi简介
SPAGeDi1.3 a program for S patial P attern A nalysis of Ge netic Di versity by Olivier J. H ARDY and Xavier V EKEMANS with the contribution of Reed A. C ARTWRIGHT Copyright (c) 2002-2009 Olivier Hardy and Xavier Vekemans User’s manual Address for correspondence: Service Eco-éthologie Evolutive, CP160/12 Université Libre de Bruxelles 50 Av. F. Roosevelt B-1050 Brussels, Belgium e-mail: ohardy@ulb.ac.be Last update: 22 March 2009
Contents 1. Note about SPAGeDi 1.3 and installation 2. What is SPAGeDi ? 2.1. Purpose 2.2. How to use SPAGeDi – short overview 2.3. Data treated by SPAGeDi 2.4. Three ways to specify populations 2.5. Statistics computed 3. Creating a data file 3.1. Structure of the data file 3.2. How to code genotypes? 3.3. Example of data file 3.4. Note about distance intervals 3.5. Note about spatial groups 3.6. Note about microsatellite allele sizes 3.7. Using a matrix to define pairwise spatial distances 3.8. Defining genetic distances between alleles 3.9. Defining reference allele frequencies for relatedness coefficients 3.10. Present data size limitations 4. Running the program 4.1. Launching the program 4.2. Specifying the data / results files 4.3. Selecting the appropriate options 4.4. Information displayed during computations 5. Interpreting the results file 5.1. Basic information 5.2. Allele frequency analysis 5.3. Type of analyses 5.4. Distance intervals 5.5. Computed statistics 5.6. Permutation tests 5.7. Matrices of pairwise coefficients/distances 6. Technical notes 6.1. Statistics for individual level analyses 6.2. Statistics for population level analyses 6.3. Inference of gene dispersal distances 6.4. Estimating the actual variance of pairwise coefficients for marker based heritability and Q ST estimates 6.5. Testing phylogeographic patterns 7. References 8. Bug reports
种植手术一期流程
种植手术一期流程 客人决定种植后 1拍ct片由医生决定种植部位，种植体型号，定种植方案。巡回及配台护士要清楚种植部位，种植系统，种植体型号。2准备种植器械根据相应的系统选着相应的种植工具盒，种植机，手术包，手术衣，一次性口腔盘，碘伏，漱口水，药物，盐水，刀片，缝针缝线，种植手机，盐水管，针头，麻药，浸泡缸，酒精，无菌的镊子桶，纱布备用，根据客人情况准备内提或者外提的工具盒,骨粉骨膜，咬骨钳。相应种植系统的愈合基台或者覆盖螺丝。手术包（口镜，探针，镊子，金属注射器，手术刀，分离器，挖匙，组织镊，止血钳，持针器，直剪，眼科剪，消毒碗，骨粉碗，尺子，洞巾，布巾钳，手术吸唾管，拉钩） 3引领客人到手术室做术前准备 ①引领客人到手术室到椅位坐下，签署知情同意（可在诊间或咨询室签署，与客户讲解清楚可能会出现的状况及手术的一个大致流程，使其放松），遵医嘱给止痛药及消炎药让其服下，漱口（用氯己定漱口液含漱一分钟，含漱三次），进行口外消毒（拆一次性口腔盘，到碘伏到棉球上进行口外消毒，顺时针由内及外，消到外侧的棉花不可再触及内侧。
嘱咐客人脸部痒不可用手触碰，用无菌纱布帮客人擦拭）。盖洞巾。 ②帮助医生洗手，穿手术衣。 ③配台护士按顺序排列手术包器械，配台护士用无菌镊子夹浸泡在酒精里的麻药及针头，巡回护士打开手术工具盒递给配台护士，巡回护士拆手术刀片，缝针缝线，调节灯光，种植手机，盐水管，巡回护士与配台护士组装种植器械。配台护士试种植机是否运作，盐水管是否通畅，负压吸引是否正常。巡回护士做好客户登记。 4正式手术 1)手术流程环切/翻瓣—定位—开孔—扩孔—成型—攻 丝—植入—缝合。 2)手术工具盒球钻：定位，修整骨尖不平整的地方。先锋 钻：导向形成通道。平行杆：测量深度及种植方向。扩孔钻：预备种植窝，逐级扩孔。颈部成型钻：模仿种植体上端形状对皮质骨进行塑形。攻丝钻：一类骨全程攻丝，二类骨2/3攻丝，三类骨1/3攻丝或者不用，四类骨不需要攻丝。种植携带器（机用，手动两种）：使种植体放入种植窝内。扳手：配合手用螺丝及手用携带器进行加力。 延长杆：延长钻针的长度。螺丝：用来拧紧愈合基台，转移杆等。 3)种植过程中配台护士配合医生进行吸唾保持术野清晰，递
遗传多样性
生物多样性学习单一 学习任务一、生物多样性 1、生物的多样性是指来源于各种各样生态系统的形形色色的活的生物体，包含、、三个层次。 2、遗传多样性是指内___ _______的多样性。检测遗传多样性的方法有和 ________________________二种。 3、物种多样性是指地球上_________________等生物物种的________。包括某一特定区域内物种__________和物种__________。物种多样性是衡量一定区域中生物______________的指标。 物种多样性常用测量方法是对某分布区域种群密度调查。其中动物种群估算的方法常用__________法，植物群落的多样性的计算方法是。 4、生态系统多样性是指。其中生境是指。 5、生物多样性的价值体现在以下、、、等方面。 A、食用性 B、药用性 C、工业生产原料 D、观赏性 E、涵养水源、保持水土 F、净化环境、维持生态稳定 G、改良种、养殖品种的品质 H、控制病虫害 I、科学研究中的模式生物 J、仿生学的模仿对象 检测3、下列关于遗传多样性的叙述，正确的是（） A、物种间基因和基因型的多样性 B、生物的脱氧核苷酸的排列顺序 C、整个生物群落中的基因和基因型的多样性 D、物种内基因和基因型的多样性 检测4、下列生物之间的差异不属于遗传多样性的是（） A、五彩斑斓的金鱼 B、红花、黄花、紫花的郁金香 C、早稻、晚稻和中稻 D、无籽番茄、正常的番茄 检测5．遗传多样性在生物中普遍存在，下列关于遗传多样性的意义，正确的是 ( ) ①遗传多样性能有效地增大种群基因库；②遗传多样性有利于物种适应环境而长期生存；③产生新物种；④为物种提供进化的材料 A．①②④ B．②③④ C．①②③ D．①②③④ 检测6．我国苔藓植物、蕨类植物和种子植物共有3万多种，居世界第三位。我国还是世界上裸子植物物种最多的国家。我国脊椎动物种类约占世界脊椎动物总数的14％，我国还是世界上鸟类种类最多的国家之一。这段话与下列哪项相符( ) A．特有种和古老物种多 B．物种多样性 C．遗传多样性 D．生态系统多样性 检测7．地球上的物种很多，而且同一物种的生物虽然很相像，但也存在一定的差异，下列各组生物不属于同一物种的是 ( ) A．华南虎和东北虎 B．早稻和糯稻 C．长江蟹和辽河蟹D．驴和马
综合实践活动种植方案复习过程
大桥乡学校综合实践活动种植实施方案 “播下种子，收获希望” 一、主题背景 1、从理论上分析： 著名教育家苏霍姆林斯基曾说过：“不要让学校的大门把儿童的意识跟周围世界隔离开来”。《课程标准》也指出，要“充分利用学校、家庭和社会等教育资源，开展综合性学习活动，拓宽学生的学习空间”。为此，教师必须树立开放的教学观，让学生走出课堂，参与实践活动，把“死”的文献资料与现实社会中“活”的资源结合起来，使课堂教学实现由平面、单向向立体、多向的转变，开阔学生的视野，开放学生的思维，为学生提供展示才华的新天地，所以建设一个让学生进行有效的校园实践基地是非常必要的。 2、从学校的资源来分析： 在新课程实施的大背景下，开展实践活动必须有一定的物质依托，否则是难以持久的，学校认真分析了本地和本校的特点，充分利用已有的资源，积极开发潜在的资源。 （1）、我校为一所农村学校，本校多数教师都有过种植经历或从小受这种环境的熏陶，都掌握一定的种植知识，这就为此项活动的开展，提供了很好的前提条件。 （2）、大部分孩子的父母对种植都有丰富的经验，所以我们无需走多远，就可以找到很多的“农业专家”来为我们指导。北京师范大学石中英教授对本土知识及农村生活曾作过极富感情的描述：“老人是财富，经历是财富，乡村妈妈充满了智慧，我们要用‘朝圣般’的心情回忆乡村生活，乡村是人类文化的精华，爷爷奶奶就像图书
馆。”这番话语充满了诗意、充满了智慧，也为我们开发课程资源提供了很好的借鉴。 （3）、对于农村的孩子来讲，对于生他养他的这片黄土地是最熟悉不过的了，因此他们也对它有着深厚的感情，他们愿意去体验这从种到收的快乐，对此也有浓厚的兴趣。 因此，我们根据综合活动课本身具有的综合性和实践性原则，结合农村特点，我校确定围绕种植方面做文章，在学校开辟了“种植园”。这样的种植活动可以说是操作性强，切合孩子的年龄特点，取材方便，既能给孩子们提供丰富多彩的课余生活，又能让他们亲近生命的成长过程！ 二、活动目标： 1、认知与技能： 通过本次活动，使学生能说出一些蔬菜、农作物的名称、生长特点等，懂得种植需要“整地——施肥——播种——管理”等环节，初步掌握一些种植方法，学会栽种一种植物. 2、过程与方法： 在教师的指导下，让学生自主经历综合实践活动的各个过程； 使学生获得一些亲身探索的体验，培养学生提出问题、分析问题、并通过各种途径，运用各种方法（如观察、调查、采访、向父母请教等）收集植物种植过程中的相关资料，从而解决问题； 培养学生的观察能力、调查分析能力、收集相关信息（包括上网），并对收集到的信息进行简单加工处理和应用的能力。 通过小组活动，使学生学会分享共同的劳动成果，学会相互合作。 3、情感态度与价值观： 激发学生的好奇心和求知欲，初步养成从事探究活动的正确态度，并在活动中体验探究带来的乐趣、成功的快乐；